WO2005070936A1

WO2005070936A1 - Derives de camptothecine 20-esterifies, preparation, compositions pharmaceutiques et utilisation

Info

Publication number: WO2005070936A1
Application number: PCT/CN2004/000030
Authority: WO
Inventors: Xiandao Pan; Xiaoguang Chen; Jing Yang; Yan Li; Chenggen Zhu; Xin Zhao
Original assignee: Institute Of Mataria Medica, Chinese Academy Of Medical Sciences
Priority date: 2004-01-09
Filing date: 2004-01-09
Publication date: 2005-08-04

Description

20-位酯化的喜树碱衍生物及其制法和其药物组合物与用途

发明领域

本发明涉及新的如通式 ( I )所示的 20-位酯化的喜树碱衍生物，其制备方法，含有它们的药物组合物，及其作为药物，尤其是作为抗肿瘤药物的用途。

背景技术

喜树碱（Camptothecin, CPT)是 1966 年从拱桐科旱莲植物喜树 {Camptotheca

中分离得到的一种生物碱。结构如下所示：

喜树碱的分子中含有四个六元环和一个五元环， E环是一个 a-羟基内酯且有一个手性中心（20S构型）。喜树碱分子中也存在一个分子内氢键，使得 E环羰基的活性很高，在亲核试剂的进攻下，很容易开环。天然喜树碱难溶于水，脂溶性也很差。为了增加喜树碱的水溶性, 70 年代的临床试验曾使用喜树碱钠盐的评价其抗肿瘤活性，不足的是它的钠盐形式对人体产生严重的毒性，且抗癌活性低，因此中断了 II期临床。鉴于喜树碱的严重毒性（骨髓抑制，出血性膀胱炎及腹泻）限制了它在癌症治疗中的应用。

构效 ^系研究显示:对抗肿瘤活性来说，喜树碱的羟基内酯环 E是最关键的结构特征，试验证明在裸鼠中，关闭内酯形式的喜树碱活性远远优于开环形式的喜树碱钠盐，因此喜树碱内酯环在体内的稳定性是影响抗肿瘤活性的重要因素。我们认为喜树碱的严重毒性 (小鼠最大耐受剂量 MTD 12 mg/kg)主要是因为当药物进入人体内后喜树碱的开环形式与 HSA紧密结合，使喜树碱在体内的平衡从关闭内酯形式向开环形式位移，喜树碱很快开环 (半衰期小于半小时）。研究还发现，喜树碱的 A， B环上的取代基特别是 7， 10—双取代可干扰开环形式与 HSA 的结合，增加内酯环在体内的稳定性。另外文献报道喜树碱的 20—羟基烷基酯和芳氧乙酸酯前药能够降低毒性，增加内酯的稳定性，从而改进喜树碱的抗肿瘤活性。

八十年代发现拓朴异构酶 I, 实验证明喜树碱对许多实体瘤有抗癌活性，它主要作用于 DNA拓扑异构酶 Τορο I，一种在许多癌细胞中高表达的酶）。这再一次引起肿瘤学家对喜树碱的兴趣。喜树碱是最经典的 Τορο I 的特异性抑 lj剂。 1989年，研究发现喜树碱半合成衍生物对裸鼠异种移植肿瘤拥有非凡的抗肿瘤活性。研究表明， CPT通过与 Topo I-DNA二元可裂角军复合物（cleavable complex)可逆结合，形成 CPT-DNA-Topo I三元复合物，从而稳定了可裂解复合物，形成"路障"，致使复制叉 (replication fork)不能进行下去，从而导致肿瘤细胞死亡。然而喜树碱在人体中的抗肿瘤活性却很低，这是因为喜树碱在体内存在着关闭的内酯形式和开环的羧酸盐形式之间的平衡，而开环形式取决于 pH值和动物禾中类。特别是人血清白蛋白（HSA)优先与喜树碱的开环形式结合，形成稳、定的复合物，使平衡向开环形式位移，使得体内具有抗肿瘤活性的内酯含量太低。

目前 Topo I成为设计新型抗癌药物的最热门靶点之一。美国国立癌症研究所 (NCI)药物机制分析电脑网络系统已将 Topo I抑制剂列为重点研究的六大类抗肿瘤药物之一。除美国和日本外，法国，德国，意大利和韩国也在进行喜树碱衍生物的研究工作。

目前国外的两个喜树碱水溶性衍生物伊利替康（Irinotecan)和拓扑替康 (Topotecan)与母体化合物喜树碱相比疗效确切，抗瘤谱广，已在临床上广泛应用。另有多个衍生物如 9一硝基喜树碱， DX— 8951f ， GG-211, Bay38-3441, BN80915和 CKD- 602正在进行 ΙΙ/ΙΠ临床研究。而国内仅有喜树碱， 10-羟基喜树碱，伊利替康和拓扑替康上市。由于喜树碱和 10-羟基喜树碱是未经修饰的天然产物，毒性较大，抗肿瘤活性低，限制了它们在临床的应用；再者病人长期使用这些药物易产生耐药性，迫切需要寻找高效低毒的抗肿瘤药物。

本发明化合物除对癌细胞具有细胞毒活性外，对耐药癌细胞也有细胞毒活性；对正常细胞毒'性小，而对肿瘤细胞毒性大。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种新的 20- 位酯化的喜树碱衍生物；

本发明的另一目的在于提供一种新的 20-位酯化的喜树碱衍生物的制备方法；

本发明一方面涉及药物组合物，其包括作为活性成份的 20-位酯化的喜树碱衍生物及制药领域中常用的载体。

本发明的另一目的在于提供一种新的 20-位酯化的喜树碱衍生物及其组合物作为抗肿瘤药物的应用。定义

术语 "CPT" 喜树碱的缩写，喜树碱也称为 (S)-4-乙基 -4-羟基吡喃并 -[3',4'： 6,7]吲哚嗪并 [1,2-b]喹啉 -3,14(4i ,12i7)-二酮.

该化合物能成从各种渠道获得，例如， Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo. 喜树碱的化学结构式和编号系统^ ί下： '

9 7

该化合物的 20位有一个羟基，其可以被酯化制成本发明的化合 4勿。术语 "垸基"指一价的，饱和的含有指定碳数目的脂肪族碳氢取代基。例如， "C1-6垸烃"或 " 1-6个碳原子的烷烃"或 "Alk l-6"指含有 1到 6个碳原子的任一烷烃取代基， "C 1-20烷烃"是指含有 1到 20个碳原子的任一烷烃取代基。垸烃可以是直链或支链的。低级烷烃是指含有 1到 6个碳原子的烷烃。代表性的 4氏级垸烃取代基的例子包括甲基，乙基，正丙基，正丁基，正戊基，正己基，异丙基，异丁基，异戊基，仲丁基，叔丁基，叔戊基和类似物。高级垸基指含有 7个或更多碳原子的垸基，包括正庚基，正辛基，正壬基，正十二垸基，正十四烷基，正十六垸基，正十八烷基，和类似物，和其支链的异构体。这些取代基可以任意的取代，只要其取代的位置不干扰本发明化合物制备，也不降低本发明化合物的效果。这些烷基可以被 1到 5个取代基任意取代，取代基独立的选自卤素， ί氐级烷氧基，羟基，氰基，硝基，氨基，卤代的低级垸基，卤代的低级烷氧基，羧基，低级烷氧基酰基，低级烷酰氧基，和低级酰胺基。术语 "烷氧基"指如式 RO—的一价的取代基，其中 R同上所定义。低级垸氧基是指含有 1到 6个碳原子的烷氧基，高级烷氧基是指含有 7个或更多个碳原子的烷氧基。代表性的低级烷氧取代基包括甲氧基，乙氧基，正丙氧基，正丁氧基，正戊氧基，正己氧基，异丙氧基，异丁氧基，异戊氧基，戊氧基，仲丁氧基，叔丁氧基，叔戊氧基和类似物。高级烷氧取代基包括含有上述所定义的高级烷基的取代基。取代基可以任意的取代，只要其取代的位置不干扰本发明化合物制备，也不降低本发明化合物的效果。这些垸基可以被 1到 5个取代基任意取代，取代基独立的选自卤素，低级烷氧基，羟基，氰基，硝基，氨基，卤代的低级烷基，代的低级烷氧基，羧基，低级烷氧基酰基，低级烷酰氧基，和低级酰胺基。

术语 "羧基"是一价的具有 C(0)OH.结构的取代基。

术语 "低级烷氧酰基"是一价的具有 C(0)OAlk结构的取代基，其中 Alk是低级烷基。

术语 "低级烷酰氧基"是一价的具有 OC(0)Alk结构的取代基，其中 Alk是低级烷基。

术语 "低级垸酰胺基"是一价的具有 NHC(0)Alk 结构的取代基，其中 Alk是低级烷基。

"卤素"取代基是一价的卤素取代基，选自，氯原子，溴原子，碘原子，和氟原子。 "卤代" 的化合物是被至少一个卤原子取代的化合物。

"苯基"是从苯环上除去一个氢原子获得的取代基。苯基是被 1 到 5个取代基任意取代，取代基独立的选自卤素，低级烷基，低级烷氧基，羟基，氰基，硝基，氨基，卤代的低级烷基，卤代的低级烷氧基，酰基，羧基，低级垸基酰氧基，苯甲氧基，低级烷氧酰基，和低级酰胺基。

其他的化学术语是可以从标准文献和字典中教导的标准意思，这是本领域的普通技术人员可以理解的。

术语" nM"是纳摩尔的缩写。

术语 "ip"是腹腔内注射的缩写。

术语 "po" 是口服的缩写。第一方面，本发明涉及通式（I ) 所示的化合物

(I)

其中：

其中 R是：

取代或非取代的呋喃基^四氢呋喃基，取代基的个数可以是 1-3 个，取代基选自卤素，硝基，氨基，低级嫁基，低级烷氧基，氰基，羟基、和醛基；取代或非取代的噻吩基，取代基的数目可以是 1到 3个，取代基任意的选自素，硝基，氨基，低级烷基，低级垸氧基，氰基，羟基，叠氮基和醛基；取代或非取代的吡咯基，取代基的数目可以是 1到 4个，取代基任意的选自素，硝基，氨基，低级烷基，低级垸氧基，氰基，羟基，叠氮基和醛基；取代或非取代的 1， 4—苯二烷基，取代基的数目可以是 1 到 5 个，取代基任意的选自卤素，硝基，氨基，低级垸基，低级烷氧基，氰基，羟基，叠氮基，三氟甲基和酸基；取代或非取代的喹啉基，取代基的数目可以是 1到 3个，取代基任意的选自素，硝基，氨基，低级垸基，低级烷氧基，氰基，羟基，叠氮基和醛基；取代或非取代的色酮基，取代基的数目可以是 1到 5个，取代基任意的选自卤素，硝基，氨基，低级垸基，低级垸氧基，氰基，羟基，叠氮基和醛基；取代或非取代的吡啶基和哌啶基，取代基的数目可以是 1到 5个，取代基任意的选自卤素，硝基，氨基，低级烷基，低级垸氧基，氰基，羟基，叠氮基，苯基和醛基；

Ri是：氢，卤素，低级烷基，低级垸氧基，卤代低级烷基，羟基， RCOO, 氰基，硝基，醛基，氨基，羧基，卤代低级烷氧基，羟基羧基， C(0)H，低级烷羰氧基，低级三烷基硅烷基，低级烷氧羰氨基，低级烷氧羰氧甲基,取代的烯基， 1-羟基 -2-硝基乙基，氨基羧基，单或二烷基羧基，烷基羧氧基甲基，垸羰氧甲基，苯甲氧甲基，苯甲羰氧甲基，或低级垸氧甲基，或单或双烷氧甲基， (4-甲基小哌嗪基）甲基；

R₂是：氢，卤素，低级浣基，低级垸氧基，羟基， RCOO，氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级垸基，卤代低级烷氧基，羧基，低级垸氧羰基，低级烷氧羰氨基， CH₂NR₇R₈ (R₇ 和 R₈分别是氢， CL₆的烷基，任意取代的苯基，羟基取代的低级烷基，氨基取代的低级垸基，单或双取代氨基低级烷基，或 R₇ 和和 -N-共同形成环氨基）， C(0)H, CH₂R₉ (其中， R₉为低级垸氧基，氰基，氨基低级烷氧基，单或双烷氨基低级烷氧基，低级烷硫基，氨基低级烷硫基，单或双低级垸氨基低级垸硫基）， NR₁₀Rn (Rio. Rn分别是氢，低级烷基，任意取代的苯基，羟基低级烷基，氨基低级烷基，或和 R₁₂和 -N-共同形成环氨基，）；

R₃是：氢，卤素，低级烷基，低级垸氧基，轻基， RCOO，氰基，醛基，硝基，氨基，氨基取代低级烷基，卤代低级烷基，卤代低级垸氧基，羧基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰氨基，氨基低级垸基，羟基低级烷基；

和 R₃—起形成选自 CH， CH₂， 0， S， ΝΉ，或 NR₁₂ (其中 R₁₂是的烷基）三元或四元的链，

是：氢，卤素，低级垸基，低级烷氧基，羟基， RCOO，氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级烷基，卤代低级垸氧基，羧基，低级烷氧羰基，低级烷基羰氧基，或低级嫁基羰氨基；

和一起形成选自 CH， CH₂， O, S, NH, 或 R₁₂ (其中 R₁₂是 _₆的烷基）三元或四元的链，

R₅ 是氢，卤素，硝基；

Re 是 Ci-io焼基， C_2-io稀基， C_2-l0炔基，苯基。本发明优选的式（I) 的化合物是从到是氢，是乙基， R 是芳杂环取代基。

本发明优选的式（I) 的化合物是从到是氢，是乙基， R 是如下杂环取代基-

本发明优选的化合物包括，但不限定于，其中是（4-甲基 -1-哌嗪基）甲基 R₂和 R₅是氢， R₃和一起形成亚甲二氧基， R6是乙基

本发明优选的化合物包括，但不限定于，和是乙基，和一起形成乙撑氧 -氮，其中 R₁₃ 是 d.₆ 的烷基，和 R₅是氢，

本发明优选的化合物包括，但不限定于， R₅是氢， R6 是乙基， , R₂, R₃ 和 R4 是如下的取代基

式（I) 的化合物，其中， R₂, R4和是氢；是乙基，羟基，是（3-氯-正丙基）二甲基硅基，叔丁基二甲基硅基，乙酰氧甲基，氰基，甲酰乙烯基，乙氧酰基乙烯基，氰基乙烯基， 2， 2-氰基乙烯基，（2-氰基 -2-乙氧酰基）乙烯基，乙氧酰基乙基，甲基，乙基，或正丙基；是羟基，乙酰氧基，氨基，硝基，氰基，氯，溴，氟，低级烷基，高级烷基，低级烷氧基，氨基甲酰基，甲酰基。在这些化合物中，是乙基并且是氨基甲酰基氧基是更优选的。胺基甲酰氧基取代基是优选的，包括 1-哌嗪酰氧基， 4- (正丙基氨酷甲基）哌嗪基酰氧基，或 4- ( 1-哌啶基） -1-哌啶基酰氧基。式（I)的化合物，其中， , R4和是氢； ¾ 是乙基， R₂是硝基，氨基，，氰基，卤素，羟基，低级烷基胺基，二低级烷基胺基，低级烷基，低级烷氧基， 1-哌啶基， 1-吗啉基，氨基甲基， ί氏级烷基氨基甲基，环烷胺甲基，二低级烷氨基甲基，环胺基甲基，乙酰氧基，乙酰氨基，低级烷氧基甲基，羟基低级烷基氨基甲基，氰基甲基和 R3 是羟基，乙酰氧基，氰基，硝基，氨基，卤素，甲酰基，低级烷氧基，氨基甲酰氧基。式（I)的化合物，其中，和是氢；是乙基，是硝基，氨基，甲基，氯，氰基，乙酰氧基或乙酰氨基。概括而言，本发明能看作 CPT或 CPT的类似物的 20S的酯。 CPT 在 20位的羟基是 S构型的。根据本发明的制备方法这个羟基能被立体选择性的形成 20S的酯，并具有较好的收率。形成的酯是唯一的在链上具有电负性的实体，相信其可以用来稳定喜树碱分子的 E环。本发明的新化合物在小鼠身上具有抗肿瘤活性并具有良好的耐受性。它们可以用于治疗各种类型的肿瘤并能制成用于口服，局部给药，和注射给药的药物制剂。当然，不限于化合物起效的特定作用机制或理论解释， 20S 的酯通过稳定 CPT分子的 E环来增强其作用。酯可以通过空间位阻达到这种目的，并通过阻止酶到达 E环来破环分子内氢键，通过酯链中吸电子基团的存在，例如，氧原子，增强 E环末端 CPT分子和酶的氢键或范德华力抑制的结合并由此抑制酶破环 E环的活性。本发明的 CPT酯能和无机酸制备药效学上可接受的盐，可用的无机酸包括但不限定于，盐酸，氢溴酸，磺酸，磷酸和硝酸。本发明的 CPT酯也能和有机酸制备药效学上可接受的盐，可用的有机酸包括但不限定于，醋酸，酒石酸，延胡索酸，琥珀酸，柠檬酸，甲磺酸，甲苯磺酸，硬脂酸。其他的酸可用于制备本发明化合物的中间体和本发明化合物的药效学上可接受的盐。

本发明公幵的化合物第一次用于抗五种人类肿瘤，结果在表 1和表 2中列出。这些酯表现出比 CPT更好的细胞毒性。另外还实验了六种酯抗鼠肿瘤的抗肿瘤活性，酯 4， 7和 9在体内表现出良好的抗肿瘤活性和较低的细胞毒性（表 3-7)。最后，在裸鼠上评价了酯 4， 7和 9 获得了最好的效果。（表 8-11 )

本发明的制备方法

本发明的另一方面还涉及本发明化合物的制备方法，本发明制备方法的化学反应式如下-

本发明的化合物通过 CPT或 CPT的类似物和通式 R-C(0)X的化合物反应，其中 R如本申请所定义， X是溴，氯，羟基。优选的 X是羟基。可以从相应的芳香杂环羧酸制备羧酸卤化物。羧酸^化物可以通过相应的芳香杂环羧酸和卤化试剂反应制备（例如 S0C1₂， PC1₃, P0C1₃, PC1₅, PBr₃等等）。其中，羧酸氯是优选的。只要芳香杂环羧酸或其衍生物被制备，可以和 CPT或 CPT类似物反应形成 CPT的 20(S)- 酯，比如，本发明的化合物。

在适宜本发明的 20-(S)立体异构体的化合物形成的条件下 ROOH 和大约等摩尔的 CPT或 CPT的类似物反应缩合。

缩合反应在合适的缩合剂、催化剂存在的条件下发生。优选的缩合试剂是碳酰亚胺化合物包括二异丙基碳酰亚胺， 1,3二环己基碳二亚胺（DCC：)、二吡啶碳酸酯（2-DPC)、 1-(3-二甲胺丙基 >3-乙基碳酰亚胺盐酸盐 (EDCI)、 1,3-二异丙基碳酰亚胺（DIPC)、 4一吡咯烷基吡啶。更优选的缩合剂是 1-(3-二甲胺丙基) -3-乙基碳酰亚胺盐酸盐 (EDCI)。优选的催化剂是三级胺。优选的三级胺选自 4一二甲氨基吡啶 (DMAP)， 4-吡咯垸基吡啶。更优选的三级胺选自 4一二甲氨基吡啶

反应在适宜的溶剂下进行，优选的溶剂是无水的，非质子性的溶剂。此步骤中可用的溶剂例子包括卤代烷烃，二氯甲烷或三氯甲垸和 DMF。更优选的是二氯甲烷。反应的温度在 0°C— 60°C之间，优选的温度是从大约 20°C到大约 40°C的范围，优选是大约 20°C到 25°C。反应完成所需要的时间通常不超过 20小时，优选是大约 10小时。

步骤 1 中本发明的化合物是通过喜树碱或喜树碱类似物和相应的羧酸或酰卤而制备的。喜树碱类似物是一个在喜树碱的 7， 9， 10， 11 位有各种取代基的化合物， CPT类似物可以被本领域共知的取代基取代，或可以依据这里公开的文献制备。教导如何制备这些类似物或这些类似物从何处获得的代表性文献在下面公开的刊物（其在这里引入作为参考）。

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(20S)-喜树碱（CPT);

(20S)-9-硝基 CPT；

(20S)-7-乙基- 10- [4-(l-哌嗪基)小哌嗪基] 酰氧基 -CPT (伊里替康);

(20S)-7-氯-正丙基二甲基硅烷基 CPT ;

(20S)-10-羟基 -7-氯-正丙基二甲基硅烷基 CPT; '

(20S)-10-乙酰氧基 -7-氯-正丙基二甲基硅烷基 CPT;

(20S)-7-叔丁基二甲基硅烷基 CPT;

(20S)- 10-羟基 -7-叔丁基二甲基硅烷基 CPT;

(20S)- 10-乙酰氧基 -7-叔丁基二甲基硅烷基 CPT;

(20S)-9-羟基 CPT;

(20S)-9-胺基 CPT;

(20S)-10-胺基 CPT;

(20S)-9-胺基 -10-羟基 CPT;

(208)-9-胺基-10,11-亚甲二氧基 CPT;

(20S)-9-甲基胺基 CPT;

(20S)- 9-甲基 CPT;

(20S)-9-二甲基胺基甲基 CPT;

(20S)-9-氯 CPT;

(20S)-9-氟 CPT;

(20S)-9-哌嗪基 CPT;

(20S)-9-二甲基胺基甲基- 10-羟基 CPT (拓扑替康)；

(20S)-9-吗啉基甲基 CPT;

(20S)-10-羟基 CPT;

(20S)-9，10-二氯 CPT;

(20S)-10-溴 CPT;

(20S)-10-氯 CPT;

(20S)-10-甲基 CPT;

(20S)-10-氟 CPT; (20S)-10-硝基 CPT;

(20S)-10,11-亚甲二氧基 CPT;

(20S)-10-甲酰基 CPT;

(20S)-10-壬酰氧基 CPT;

(20S)-10- ^一垸酰氧基 CPT;

(20S)- 10-十五烷酰氧基 CPT;

(20S)-10-十六烷酰氧基 CPT;

(20S)-10-十九烷酰氧基 CPT;

(20S)-9-硝基 -10,11-亚甲二氧基 CPT;

(20S)-9-(4-甲基哌嗪甲基 )-10-羟基 CPT;

(20S)-9-[4-( 1 -哌嗉基) - 1 -哌嗪基甲基] - 10-羟基 CPT;

208)-9-甲基-10,11-亚甲二氧基 CPT;

(208)-9-氯-10,11-亚甲二氧基 CPT;

(20S)- 9-氰基 -10, 11-亚甲二氧基 CPT;

(20S)-9-乙酰氧基 -10，11-亚甲二氧基 CPT;

(208)-9-&。61^胺基-10,11-亚甲二氧基 CPT;

(20S)-9-胺基甲基 -10-羟基 CPT;

(20S)-9-乙氧基甲基 -10-羟基 CPT;

(20S)- 9-甲基胺基甲基 -10-羟基 CPT;

(20S)-9-n-丙基胺基甲基 -10-羟基 CPT;

(20S)-9-di甲基胺基甲基 -10-羟基 CPT;

(20S)-9-环戊基胺基甲基 -10-羟基 CPT;

(20S)-9-(2-羟基乙基)胺基甲基- 10-羟基 CPT;

(20S)- 9- (三甲基氨基)甲基 -10-羟基 CPT, 甲磺酸盐;

(20S)-9-吗啉基甲基 -10-羟基 CPT;

(20S)-9-氰基甲基 -10-羟基 CPT;

(20S)-CPT-7-醛；

(20S)-10-甲氧基 CPT-7-醛；

(20S)-7-乙酰氧基甲基 CPT;

(20S)-7-乙酰氧基甲基 -10-甲基 CPT; (20S)- 7-氰基 -10-甲氧基 CPT;

(20S)-7-氰基 CPT;

(20S)-7-甲酰乙基 CPT;

20S)-7-乙氧基酰基乙基 CPT;

(20S)-7-氰基乙基 CPT;

(20S)-7-(2,2-二氰基乙基） CPT;

(20S)-7-(2-氰基 -2-乙氧基酰基)乙基 CPT;

(20S)-7-乙氧基酰基乙基 CPT;

(20S)-7-乙基 CPT;

(20S)- 7-n-丙基 CPT;

(20S)- 7-乙酰氧基甲基 CPT;

(20S)-7-n-丙基酰氧基甲基 CPT;

(20S)-7-乙氧基酰基 CPT;

(20S)-7-乙基- 10-羟基 CPT;

(20S)-7-乙基 -10-乙酰氧基 CPT;

(20S)-7-甲基 -10-胺基酰氧基 CPT;

(20S)-7-n-丙基 -10-哌嗪基酰氧基 CPT;

(20S)-7-乙基 -10-(2-二甲基胺基)乙基 CFT; 和

CPT的（20S)-7-乙基 -10-酰氧基衍生物，例如

(20S)-7-乙基- 10-[4(1-哌嗪基) -哌嗪基酰氧基 CPT;

(20S)-7-乙基 -10-(1-哌嗪基)酰氧基 CPT;

(20S)-7-乙基 -10-(4- i-丙基胺基酰基甲基哌嗪基)酰氧基 CPT;

(²0S)-7-乙基 -10- [4(1-吡咯烷基）哌嗪基]酰氧基 CPT;

(20S)-7-乙基 -10-[(4- (二甲基胺基 )-1-哌嗪基)酰氧基 CPT;

(20S)-7-乙基 -10-[4- (二 -n-丙基胺基)小哌嗪基]酰氧基 CPT;

(20S)-7-乙基 -10-[(4- (二 -n-丁胺基 )-1-哌嗪基)酰氧基 CPT;

(20S)-7-乙基 -10-[4-(l-pyrrolidino)小哌嗪基]]酰氧基 CFT;

(20S)-7-乙基 -10-[4-(1-哌嗪基 )-1-哌嗪基]酰氧基 CPT;

(20S)-7-乙基 -10-[N-甲基 -N-2- (二甲基胺基)乙基胺基]酰氧基 CPT和在第一步中，适宜的芳香杂环羧酸包括：

5-硝基 -2-呋喃甲酸；

5-溴 -2-呋喃甲酸；

2-噻吩羧酸；

2-苯基 -4-喹啉羧酸；

色酮 -2-羧酸；

1,4-苯并二氧 -2-羧酸

色酮 -2-羧酸

2-吡嗪羧酸

烟碱酸

吡咯 -2-羧酸本发明的组合物

本发明因此还涉及含有作为活性成份的本发明化合物和常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明药物组合物含有 0. 1-95重量 %的本发明化合物。

本发明化合物的药物组合物可根据本领域公知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将本发明化合物本发明化合物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和 /或辅剂结合，制成可作为人药或兽药使用的适当的施用形式或剂量形式。

本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。

本发明化合物或含有它的药物组合物的给药途径可为注射给药。注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射和穴位注射等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。如液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂等。

本发明化合物可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

例如为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

例如为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、 Gelu_Cire、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。

例如为了将给药单元制成胶囊，将有效成分本发明化合物与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。

例如，将本发明化合物制成注射用制剂，如溶液剂、混悬剂溶液剂、乳剂、冻干粉针剂，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和 /或多种药效学上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。如稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、 1， 3- 丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、 pH调节剂等。这些辅料是本领域常用的

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。

本发明的治疗方法

本发明化合物药物组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年齢、体重、性格及个体反应，给药途径、给药次数等，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。一般来讲，本发明中药学成分的使用剂量是本领域技术人员公知的。可以根据本发明化合物组合物中最后的制剂中所含有的实际药物数量，加以适当的调整，以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的预防或治疗目的。本发明化合物的每天的合适剂量范围从 1— 1000 mg/m²，尤其是 10— 100 mg/m²。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药这受限于给药医生的临床经验以及包括运用化疗、放疗手段的给药方案。

附图说明图 1 喜树碱衍生物 9体内裸鼠抗肿瘤活性结果， 820是代表喜树碱衍生物 9。具体实施方式下面的实施例用来进一步说明本发明，但是这并不意味着对本发明的任何限制。

EDCI :1-(3-二甲胺丙基: )-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐

DMAP: 4-二甲胺基吡啶 DCC: 1,3二环己基碳二亚胺

实施例 1. 5-硝基 -2-呋喃甲酸的 20S-喜树碱酯（酯 1 )

喜树碱 (10mg， 0.028mmol), 5-硝基 -2-呋喃甲酸 (9.0mg， 0.057mmol)₅ EDCI (25mg ， 0.13mmol), DMAP( 2mg， 0.019mmol)和二氯甲垸 (3mL) 的反应混合物在室温条件下搅拌 10小时，然后氯仿 (20 mL)加入溶液稀释。

有机层分别用水 (20mL), 饱和碳酸氢钠溶液 (10mL)和饱和食盐水 (20 mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩除去溶剂。残留物用硅胶柱层析分离 (洗脱剂：氯仿 -甲醇 98:2) 得到 12.0mg 20-O-5-硝基 -2-呋喃甲酸喜树碱酯，产率： 85.0 %, mp 228-230。C。

^!H NMR (CDC1₃, 300 MHz): δ 8.45 (s， IH, Ar-H), 8.25 (d, IH, Ar-H), 7.97 (d, IH, Ar-H), 7.87 (t, IH, Ar-H), 7.69 (t, IH, Ar-H), 7.44-7.37 (m, 2H, Ar-H), 5.73 (d, IH, H17), 5.48 (d, IH, H17), 5.32 (s， 2H, H5), 2.35 (m, 2H, 18-CH₂)， 1.06 (t, 3H， 19-CH₃). 实施例 2. 5-溴 -2-呋喃甲酸的 20S-喜树碱酯（酯 2)

喜树碱 (10mg， 0.028mmol), 5-溴 -2-呋喃甲酸 (10.0mg， 0.052mmol), EDCI (25mg ， 0.13mmol), DMAP( 2mg, 0.019mmol)和二氯甲烷 (3mL) 的反应混合物在室温条件下搅拌 36小时，然后氯仿 (20 mL)加入溶液稀释。

有机层分别用水 (20mL), 饱和碳酸氢钠溶液 (10mL)和饱和食盐水 (20 mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩除去溶剂。残留物用硅胶柱层析分离 (洗脱剂：氯仿 -甲醇 97:3)得到 3.0 mg 20-O-5-溴 -2-呋喃甲酸喜树碱酯，产率： 20.0 %, mp 203-206°C.

Ή NMR (CDC1₃, 300 MHz): δ 8.41 (s， IH, Ar-H), 8.22 (d, IH, Ar-H), 8.00 (d, 1H， Ar-H), 7.85 (t, IH, Ar-H), 7.69 (t, IH, Ar-H), 7.28(, 2H, Ar-H), 6.52 (d, IH, Ar-H), 5.73 (d， IH, HI 7), 5.48 (d， IH, HI 7), 5.34 (s, 2H, H5), 2.34 (m, 2H, 18-CH₂), 1.05 (t, 3H, 19-CH₃)。

实施例 3. 5-硝基 -2-呋喃甲酸的 20S-7-乙基喜树碱酯（酯 3)

7-乙基喜树碱 (10mg， 0.028mmol) , 5-硝基 -2-呋喃甲酸 (8.0mg， 0.052mmol), EDCI (25mg ， 0.13mmol), DMAP( 2mg, 0.019mmol)和二氯甲烷 (3mL)的反应混合物在室温条件下搅拌 36 小时，然后氯仿 (20 mL)加入溶液稀释。

有机层分别用水 (20mL), 饱和碳酸氢钠溶液 (10mL)和饱和食盐水 (20 mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩除去溶剂。残留物用硅胶柱层析分离 (洗脱剂：氯仿 -甲醇 97:3)得到 11.2 mg 20-O-5-硝基 -2-呋喃甲酸 -7-乙基喜树碱酯，产率： 81.8 %, mp 297-299°(dec).

'Η NMR (CDC1₃, 300 MHz): δ 8.15 (t， 2H， Ar-H), 7.80 (t, 1H, Ar-H), 7.68 (t, 1H, Ar-H), 7.41 (q， 2H, Ar-H), 7.25 (s, 1H, Ar-H), 5.73 (d, 1H, HI 7), 5.49 (d, 1H, H17), 5.27 (s， 2H, H5)， 3.22 (q, 2H, 7-CH₂), 2.35 (m， 2H, I8-CH2), 1.40 (t, 3H, 7-CH3), 1.07 (t, 3H， 19-C¾)。实施例 4. 5-硝基 -2-呋喃甲酸的 20S-9-硝基喜树碱酯（酯 4)

9-硝基喜树碱 (lOOOmg, 2.7mmol), 5-硝基 -2-呋喃甲酸 (1300mg， 6.3mmol), EDCI (1400mg , 7.3mmol), DMAP( 200mg, 1.9mmol)和二氯甲垸 (50mL)的反应混合物在室温条件下搅拌 10 小时，然后氯仿 (100 mL) 加入溶液稀释。

有机层分别用水 (70mL),饱和碳酸氢钠溶液 (50mL)和饱和食盐水 (50 mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩除去溶剂。残留物用 CHCl₃-EtOAc重结晶获得 1100 mg 20-O-5-硝基 -2-呋喃甲酸—9-硝基喜树碱酯，产率： 92 %, mp 200-203°C.

^!H NMR (CDCI3, 300 MHz): δ 9.29 (s， 1H， Ar-H), 8.50 (s, 1H， Ar-H), 8.47 (s, 1H, Ar-H), 7.96 (q， 1H, Ar-H), 7.43 (m, 3H, Ar-H), 5.73 (d, 1H, H17)， 5.49 (d， 1H, HI 7), 5.39 (s， 2H, H5), 2.35 (m, 2H, 18-C¾), 1.07 (t, 3H, 19-CH₃)。实施例 5. 5-硝基 -2-呋喃甲酸的 20S-10-乙氧羰甲氧基喜树碱酯 (酯 5)

10-乙氧羰甲氧基喜树碱 (10mg， 0.022mmol)， 5-硝基 -2-呋喃甲酸 (5.0mg, 0.031mmol), EDCI (25mg ， 0.13mmol), DMAP( 2mg, 0.019mmol) 和二氯甲烷 (3mL)的反应混合物在室温条件下搅拌 5小时，然后氯仿 (20 mL)加入溶液稀释。

有机层分别用水 (20mL), 饱和碳酸氢钠溶液 (15mL)和饱和食盐水 (15mL) 洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓縮除去溶剂。残留物用硅胶柱层析分离 (洗脱剂：氯仿 -甲醇 97:3)得到 7 mg 5- 硝基 -2-呋喃甲酸的 20S-10-乙氧羰甲氧基喜树碱酯，收率： 65.4 %, mp 249-252°C.

^}H NMR (CDC1₃, 300 MHz): δ 8.28 (s, IH, Ar-H), 8.12 (d, IH, Ar-H), 7.56 (d, IH, Ar-H), 7.42 (s, IH, Ar-H), 7.38 (s, IH, Ar-H), 7.27 (s, IH, Ar-H), 7.12 (d, IH, Ar-H), 5.73 (d, IH, H17), 5.46 (d, IH, H17), 5.27 (d, 2H， H5), 4.79 (s, 2H, OCH₂CO), 4.31 (q, 2H, OCH₂), 2.35 (dm, 2H， 18-CH₂), 1.30 (t, 3H, CH₃), 1.07 (t, 3H, 19-CH₃)。实施例 6. 5-硝基 -2-呋喃甲酸的 20S-9-硝基 -10-乙氧羰甲氧基喜树碱酯 (酯 6)

1. 9-硝基 -10-乙氧羰甲氧基喜树碱的合成

在 50ml的圆底烧瓶中加入 5ml的浓硫酸，用冰盐浴冷却到一 2°C，加入 50mg ( O.llmmol) 的 10-乙氧羰甲氧基喜树碱，搅拌至全溶。控制温度在 0°C以下，滴加 1ml的发烟硝酸，滴完后反应 0.5小时，倒入水中。水相中和到 pH值为 4，再用氯仿萃取，氯仿层用水 (15ml)，饱和碳酸氢钠溶液 (15ml)，和饱和盐酸水洗涤 (15mL) 洗漆，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩除去溶剂。残留物用硅胶柱层析分离 (洗脱剂：氯仿 -甲醇 99:1)得到 10mg 9-硝基 -10-乙氧羰甲氧基喜树碱酯，收率: 35%。

2. 5-硝基 -2-呋喃甲酸的 20S-9-硝基 -10-乙氧羰甲氧基喜树碱酯的合成

9-硝基 -10-乙氧羰甲氧基喜树碱 (10mg， 0.020mmol), 5-硝基 -2-呋喃甲酸 (6.0mg， 0.040mmol), EDCI (25mg ， 0.13mmol), DMAP( 2mg， 0.019mmol)和二氯甲烷 (3mL)的反应混合物在室温条件下搅拌 5小时，然后氯仿 (20 mL)加入溶液稀释。有机层分别用水 (20mL), 饱和碳酸氢钠溶液 (15mL)和饱和食盐水 (15mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩除去溶剂。残留物用硅胶柱层析分离 (洗脱剂：氯仿 -甲醇 99: 1)得到 4mg 5- 硝基 -2-呋喃甲酸的 20S-9-硝基 -10-乙氧羰甲氧基喜树碱酯，收 ^:31.5%, mpl87-189°C (dec).

^!H NMR (CDC1₃, 300 MHz): δ 8.31 (s， IH, Ar-H), 8.28 (d, IH, Ar-H), 7.53 (d, IH, Ar-H), 7.41 (d, IH, Ar-H), 7.38 (d, IH, Ar-H), 7.21 (s, IH, Ar-H), 5.73 (d, 1H， HI 7)， 5.47 (d, IH, HI 7), 5.43 (s, 2H, H5), 4.93 (s, 2H, OCH2CO), 4.28 (q， 2H, OCH₂), 2.35 (dm, 2H, 18-CH₂)， 1.29 (t, 3H, CH₃), 1.08 (t, 3H,19-CH₃)。

实施例 7. 5-硝基 -2-呋喃甲酸的 20S-伊里替康酯 (酯 7)

伊里替康盐酸盐 (lOOmg, 0.147mmol), 5-硝基 -2-呋喃甲酸 (70.0mg， 0.442mmol), EDCI (112mg ， 0.59mmol), DMAP(17mg, 0.16mmol)和二氯甲烷 (10mL)的反应混合物在室温条件下搅拌 10小时，然后氯仿 (50 mL) 加入溶液稀释。

有机层分别用水 (25mL)，饱和碳酸氢钠溶液 (25mL)和饱和食盐水 (25mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩除去溶剂。残留物用硅胶柱层析分离 (洗脱剂：氯仿 -甲醇 98:2)得到 95mg 5- 硝基 -2-呋喃甲酸的伊里替康酯，收率： 89.6 %, mp l78-180°C.

^!H NMR (CDCI3, 300 MHz): δ 8.12 (d, IH, Ar-H), 7.82 (d, IH, Ar-H), 7.56 (d, 1H， Ar-H), 7.54 (m, 2H, Ar-H), 7.19 (s， IH, Ar-H), 5.76 (d, IH, HI 7), 5.46 (d, IH, HI 7), 5.24 (s, 2H, H5), 4.34, (q, 2H, CONCH), 3.17 (q, 2H, 7-CH₂), 3.10-2.50 (m, 7H, piperidyl), 2.32 (dm, 2H, 18-C¾), 1.96 (s, 2H, piperidyl), 1.63 (m, 5H, piperidyl), 1.46 (m, 2H, piperidyl), 1.37 (t, 3H, 7-CH3), 1.06 (t, 3H, 19-CH₃)。实施例 8. 5-硝基 -2-呋喃甲酸的 20S-7-乙酰氧甲基喜树碱酯 (酯 8)

7-乙酰氧甲基喜树碱（10mg， 0.024mmol) , 5-硝基 -2-呋喃甲酸 (6.0mg, 0.036mmol), EDCI (25mg ， 0.13mmol), DMAP(2mg, 0.019謹 ol) 和二氯甲烷 (lOmL)的反应混合物在室温条件下搅拌 5小时，然后氯仿 (20 mL)加入溶液稀释。有机层分别用水 (20mL：)，饱和碳酸氢钠溶液 (15mL)和饱和食盐水 (15mL) 洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓縮除去溶剂。残留物用硅胶柱层析分离 (洗脱剂：氯仿 -甲醇 99:1)得到 12mg 5- 硝基 -2-呋喃甲酸的 20S-7-乙酰氧甲基喜树碱酯，收率： 89.6 %, mp 258-260°C.

^]H NMR (CDCI3, 300 MHz): δ 8.18 (d, 1H， Ar-H), 8.12 (d, IH, Ar-H), 7.83 (t, IH, Ar-H), 7.71 (t， IH, Ar-H), 7.40 (q, 2H， Ar-H), 7.25 (d, IH, Ar-H), 5.78 (d, IH, H17)， 5.71 (s, 2H, CH₂-7), 5.48 (d, IH, HI 7), 5.47 (d, 2H, H5), 2.40 (m, 2H, 18-CH₂), 2.17 (s, 3H, CH₃CO), 1.07 (t, 3H, 19- CH₃)。实施例 9. 5-硝基 -2-呋喃甲酸的 20s-9-二甲基氨基甲基 -10-羟基喜树碱酯（拓扑替康）（酯 9)

拓扑替康 (200mg, 0.44mmol), 5-硝基 -2-呋喃甲酸 (240mg， 1.5mmol), DCC (400mg ， 1.9mmol)， DMAP(20mg, 0.2mmol)和二氯甲垸 (30mL) 的反应混合物在室温条件下搅拌 12小时，然后溶液中加入 5滴水。滤除残余物，滤液用二氯甲烷稀释。

有机层分别用水 (30mL), 饱和碳酸氢钠溶液 (30mL)和饱和食盐水 (30mL) 洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩除去溶剂。残留物用硅胶柱层析分离 (洗脱剂：氯仿 -甲醇 99:1) 得到 124mg 5- 硝基 -2-呋喃甲酸的拓扑替康，收率 50.2%, mp >280°C.

^]H NMR (CDC1₃, 300 MHz): δ 8.35 (s， IH, Ar-H), 7.97 (d, IH, J=9.3Hz, Ar-H), 7.40 (m， 3H, Ar-H), 7.16 (s, IH, Ar-H), 5.72 (d, 1H， J=17.1Hz, HI 7), 5.47 (d, IH, J=17.1Hz, HI 7), 5.26 (s, 2H, H5)， 4.13 (s, 2H， 9-CH₂N), 2.47 (s, 6H, NCH₃), 2.40 (m, 2H, HI 8), 1.07 (t, 3H₅ J=7.5Hz_;

实施例 10. 5-硝基 -2-呋喃甲酸的 20S-10-乙氧基 -7-乙基喜树碱酯 (酯 10)

10-乙氧基 -7-乙基喜树碱 (14mg， 0.032mmol), 5-硝基 -2-呋喃甲酸 (lO.Omg , 0.064mmol)， EDCI (24mg ， 0.12mmol)， DMAP(2mg , 0.019mmol)和二氯甲烷 (3mL)的反应混合物在室温条件下搅拌 12小时，然后氯仿 (20 mL) 加入溶液稀释。

有机层分别用水 (20mL), 饱和碳酸氢钠溶液 (15mL)和饱和食盐水 (15mL) 洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓縮除去溶剂。残留物用硅胶柱层析分离 (洗脱剂：氯仿 -甲醇 99:1)得到 14mg 5- 硝基 -2-呋喃甲酸的 20S-10-乙氧基 -7-乙基喜树碱酯，收率： 75.3 %, mp 108-110°(dec).

^JH NMR (CDC1₃, 300 MHz): δ 8.04 (d, IH, Ar-H), 7.50-7.20 (m, 4H, Ar-H), 7.17 (s， IH, Ar-H), 5.78 (d, 1H， HI 7), 5.48 (d, IH, H17), 5.23 (s, 2H, H5), 4.22 (q, 2H， OCH₂), 3.12 (q, 2H, 7-CH₂), 2.30 (m, 2H, 18-CH₂)_; 1.52 (t, 3H, CH₃), 1.39 (t, 3H, CH₃), 1.07 (t, 3H, 19-C¾)。实施例 11. 2-噻吩甲酸的 20S-喜树碱酯

喜树碱 (10 mg， 0.028 mmol), 2-噻吩甲酸 (8.0 mg ,0.062 mmol), EDC I ( 25mg ,0.13 mmol), DMAP (2 mg,0.019 mmol)和二氯甲垸 (3 mL)的反应混和物在室温条件下搅拌 10小时，用 20 mL氯仿稀释。

有机层分别用水 (20mL), 饱和碳酸氢钠溶液 (10 mL)和饱和食盐水 (20 mL) 洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离 (：洗脱剂：氯仿 -甲醇 98:2)得到 11.0 mg 20-O-2- 噻吩甲酸喜树碱酯，产率： 84.6 %, mp 220-223°C.

lU NMR (CDCI3, 300 MHz): δ 8.40 (d, 1H， Ar-H), 8.19 (d, IH, Ar-H), 7.94 (d, 1H， Ar-H), 7.92(s, IH, Ar-H), 7.83 (t, IH, Ar-H), 7.68 (m, 2H， Ar-H), 7.35 (s， 1H， Ar-H), 7.15 (t， 1H， Ar-H), 5.78 (d, 1H， HI 7), 5.49 (d, IH, HI 7), 5.29 (s, 2H, H5),2.32 (m， 2H, 18-CH₂), 1.07 (t, 3H, 19-CH₃)。实施例 12. 2-苯基 -4-喹啉羧酸的 20S-喜树碱酯

喜树碱 (10 mg, 0.028 mmol), 2-苯基喹啉羧酸 (11 mg ,0.043 mmol), EDCI ( 25mg ,0.13 mmol), DMAP (2 mg,0.019 mmol)和二氯甲烷 (3 mL) 的反应混和物在室温条件下搅拌 10小时，用 20 mL氯仿稀释。

有机层分别用水 (20mL), 饱和碳酸氢钠溶液 (10 mL)和饱和食盐水 (20 mL) 洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离 (洗脱剂：氯仿 -甲醇 98:2)得到 2 mg 2-苯基 -4-喹啉羧酸的 20S-喜树碱酯，产率： 12.0 %, mp 146-148°C.

^!H NMR (CDC1₃, 300 MHz): δ 8.83-7.30 (m, 15H, Ar-H), 6.29 (m, 1H， Ar-H), 5.81 (d, IH, HI 7), 5.56 (d, IH, H17), 5.33 (s, 2H, H5), 2.32 (m, 2H， 18-CH₂), 1.07 (t, 3H, 19-CH₃)。实施例 13 1，4-苯并二氧 -2-羧酸的 20S-喜树碱酯

喜树碱（10 mg, 0.028 mmol), 1，4-苯并二氧 -2-羧酸 (8 mg ,0.044 mmol), EDCI ( 25mg ,0.13 mmol), DMAP (2 mg,0.019 mmol)和二氯甲烷 (3 mL)的反应混和物在室温条件下搅拌 10小时，用 20 mL氯仿稀释。

有机层分别用水 (20mL), 饱和碳酸氢钠溶液 (10 mL)和饱和食盐水 (20 mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离 (洗脱剂：氯仿 -甲醇 98:2)得到 4 mg 1,4-苯并二氧 -2-羧酸的 20S-喜树碱酯，产率： 27.3 %, mp 234-236°C.

¾ NMR (CDC1₃, 300 MHz): δ 8.41 (s, 1H， Ar-H), 8.27 (d, IH, Ar-H), 7.94 (d, IH, Ar-H), 7.86(t, IH, Ar-H), 7.69 (t, IH, Ar-H), 7.08(s, 2H Ar-H), 6.85 (m, 3H, Ar-H), 5.65 (d, IH, HI 7), 5.41 (d, IH, HI 7), 5.27 (s, 2H, H5), 4.47 (s, IH, CHCO), 2.94 (d， 2H， OCH₂), 2.19 (m, 2H， 18-CH₂)， 0.93 (t, 3H, 19-CH₃) o

实施例 14. 色酮 -2-羧酸的 20S-喜树碱酯

喜树碱 (10 mg， 0.028 mmol),色酮 -2-羧酸 (8 mg ,0.044 mmol), EDCI ( 25mg ,0.13 mmol), DMAP (2 mg，0.019 mmol)和二氯甲烷 (3 mL)的反应混和物在室温条件下搅拌 10小时，用 20 mL氯仿稀释。

有机层分别用水 (20mL), 饱和碳酸氢钠溶液 (10 mL)和饱和食盐水 (20 mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩除去溶剂。残留物用硅胶柱层析分离 (洗脱剂：氯仿 -甲醇 98:2)得到 10mg色酮 -2-羧酸的 20S-喜树碱酯，产率： 33.6%, mp 180-182°(dec).

^!H NMR (CDCI3, 300 MHz): δ 8.41 (s, IH, Ar-H), 8.22 (t， 2H, Ar-H), 7.95 (d, 1H， Ar-H), 7.52(m, 2H, Ar-H), 7.68 (t, IH, Ar-H), 7.65 (d, 1H， Ar-H), 7.47 (t, 1H， Ar-H), 7.29 (s， IH, Ar-H), 5.75 (d, IH, H17), 5.50 (d, IH, H17)， 5.31 (s， 2H, H5)， 2.40 (m， 2H, 18-CH₂), 1.08 (t, 3H, 19-CH₃)。

药理实验

实验例 1 体外 MTT试验

药品及试剂： DMSO 分析纯； RPMI1640为 GIBCO产品；小牛血清为北京军区兽医防治中心产品。

仪器： BIORAD550型酶标仪。

MTT法测定：收集生长良好的肿瘤细胞，用含 10%小牛血清的 RPMI1640培养基配制成 lxlO—⁴/mL细胞悬液，于 96孔培养板内接种，每空 ΙΟΟμ (含 1000个肿瘤细胞），置 37°C， 5%C0₂温箱内培养 24 小时后加药，实验设空白对照及溶剂对照，受试样品设 4个浓度，每浓度 3个平行孔，置 37° (：， 5%C0₂温箱内培养 4天。弃去培养液，每孔加入 MTT溶液 (0.4mg/mL, RPMI1640配制） 100μΙ^， 37°C孵育 4小时。弃去上清液，每孔加入 MTT溶液 150μ 溶解颗粒，轻度振荡后，用 550型酶标仪在检测波长 540nm，参考波长 450nm下测定 OD值。

KB:人口腔癌细胞； KB/VCR: 耐药 KB ; A549: 人肺腺癌细胞； HCT-8: 人结肠癌细胞; HELF: 人正常细胞； Bel7402人肝癌细胞。结果计算：以药物的不同浓度及对细胞的抑制率作图可得到剂量反应曲线，从中求出半数抑制浓度 (IC₅o)。表 1. 喜树碱酯衍生物的体外抗肿瘤活性

ICsoCmol-L'¹)

KB KB/VCR HCT-8 A549 HELF

-7

3.27x10 6.07x10" <1.0 l0' <1.0χ10' 1.32x10-

11 1.05x10 >1.0xl0^_: 6.96x10" 3.33x10- 1.84xl。-^: 13 2.28x10 8.42x10"' 5.41x10- <1.0xl0 4.77x10"' 14 -7

4.40x 10 3.66x10 1.20x10' <1.0xl0 7.63x10"'

CPT 4.78x10 5.10x10 >1.0xl0' >1.0xl0' >1.0xl0"' 表 2. 喜树碱酯衍生物的体外抗肿瘤活性

IC₅₀ /μηιοΐ L"¹

化合物

KB KB/VCR HELF A549 HCT-8 Bel7402

CPT 0.44 0.65 1.32 0.087 0.18 0.29 伊里替康 >1.0 >1.0 ― >1.0 >1.0 >1.0

1 0.33 6.07 - - <0.1 1.32

4 0.10 1.0 - 0.98 0.50 -

7 0.41 1.35 - - 0.57 1.75

8 0.0004 0.28 - - 0.0004 0.045

10 0.063 0.43 - - 0.0008 0.19

实验例 2 体内抗肿瘤活性试验本发明 CPT酯的抗肿瘤实验在 ICR小鼠身上进行。体重 18-22g 的雌性小鼠，腋窝皮下接种 0.2 mL含有 lxlO⁶个肿瘤细胞的 PBS悬浮液。接种 24小时后随机分组。包括对照组，拓扑替O康 C ON 组， CPT酯组。于接种后 24小时小鼠进行治疗，腹腔内给药 1次，每天o卜 v给药一次，共 o o o

两天。当对照组的肿瘤重量达到 1.0-1.4g时，计算肿瘤抑制率。

B: 开始； E: 结束； BW:体重； TW: 肿瘤重量； TV: 肿瘤体积 IR: 抑制率； TV: 肿瘤体积， N:动物数量； D: 剂量； MTD: 最大耐受剂量。表 3. CPT酯在体内抗鼠 H₂₂肺癌的抗肿瘤活性 (ip：)。

化合物 BW (g) TW IR D

P

B E B E (g) % (mg/kg) 对照 6 6 16.8 27.6 2.43

柘扑替康 7 7 16.7 22.3 0.72 70.1 5mgx2

4 6 6 16.7 21.3 0.91 62.5 50mgx2 4 6 6 17.3 19.9 0.47 80.6 100mgx2 表 4. CPT酯在体内抗鼠 H22肺癌的抗肿瘤活性 (ip)。

化合物 N BW (g) TW IR D

P

B E B E (g) % (mg/kg) 对照 9 9 17.7 25.1 1.47 8 6 6 19.2 24.5 0.79 46.4 0.0023 50mgx4

8 6 6 18.0 24.2 0.81 44.7 0.0037 100mgx4

10 6 6 19.5 26.8 0.96 34.5 0.019 50mgx4

10 6 6 18.5 24.9 0.85 42.2 0.0016 100mgx4

表 5. CPT酯在体内抗鼠 H₂₂肺癌的抗肿瘤活性 (ip)。

化合物 N BW (g) TW IR D

P

B E B E (g) % (mg/kg) 对照 6 6 19.8 25.8 1.18

拓扑替康 6 5 18.3 18.6 0.22 81.7 3.25E-05 lOmgxl

1 6 5 18.8 19.6 0.39 66.8 2.28E-04 200mgxl

9 6 6 19.0 22.2 0.47 60.4 2.3 E-04 lOmgxl

9 6 6 19.0 19.8 0.33 72.4 2.44E-05 20mgxl

7 6 6 20.7 22.5 0.39 67.0 9.13E-05 100mgx3 表 6.酯 4在体内抗鼠 Lewis肺癌的抗肿瘤活性 (po)。

化合物 N BW (g) TW IR D

P

B E B E (g) % (mg/kg) 对照 7 7 18.9 21.6 1.44

柘扑替康 7 5 19.3 16.1 0.15 89.9 1.90E-06 5mgx2

4 7 7 18.5 19.8 1.00 30.6 2.26E-02 50mgx2

4 7 7 19.2 18.3 0.43 70.1 1.52E-05 100mgx3

表 7. CPT酯在鼠体内的毒性（ip， po)。

化合物 MTD (ip, mg/kg) MTD (po, mg/kg) 拓扑替康 15 10

4 2000 2000

7 - 800

9 - >60

表 8. 酯 4, 7 和 9在裸鼠体内抗人 HT-29肿瘤克隆的抗肿瘤活性 (po)。化合物剂量 N BW (g) TW IR P TV IR mg/kg B E B E g) % (mm³) % 对照 NS 8 8 18.5 20.8 1.39 182136 拓扑替康 10 X2 6 3 17.8 17.0 0.29 79.2 <0.001 246.53 86.5

9 30 X 7 6 6 18.8 22.8 0.49 64.6 <0.05 740.85 59.3

9 60 X 7 6 6 17.8 19.0 0.43 69.4 <0.001 370.36 79.7 4 50X7 6 6 18.2 23.7 1.37 1.5 >0.05 1429.59 21.5

4 100X7 6 6 19.7 23.8 1.04 25.3 >0.05 991.37 45.6

7 5X7 6 6 19.4 23.8 0.79 43.2 <0.05 1042.85 42.7

7 10X7 6 6 18.7 22.3 0.84 40.1 >0.05 748.58 58.9

表 9. 酯 9在裸鼠体内抗人 Ls-174-t肿瘤克隆的抗肿瘤活性（ip)。

化合物剂量 N BW ( g) TV RTV T/C(%) P mg/kg x士 SD x±SD

B E B E B E

对照 NS 10 10 20 18 127±58 1362±425 12.4±8.7

拓扑替康 5 6 6 20 16 95±30 303±128 3.4±0.8 27.4 <0.05

CPT-11 50 6 6 19 15 69±11 112±124 1.6±1.8 12.9 <0.05

9 11.5 6 6 21 18 79 ±33 299 ±79 4·1±1.2 33.1 <0.05

9 18.6 6 6 21 16 104±37 278±158 2·8±1.3 22.5 <0.05

9 30 6 5 19 14 78±45 156±112 2.1±0.9 16.9 <0.05

表 10. 酯 7在裸鼠体内抗人 Ls-174-t肿瘤克隆的抗肿瘤活性（ip)

化合物剂量 N BW (g) TV RTV T/C(%) P mg/kg x±SD x士 SD

B E B E B E

对照 NS 10 10 20 18 127 ±58 1362 ±425 12·4±8.7

拓扑替康 5 6 6 20 16 95±30 303 ±128 3.4±0·8 27.4 <0.05

CPT-11 50 6 6 19 15 69±11 112±124 1.6±1·8 12.9 <0.05

7 23.1 6 6 20 17 85±24 318±60 3.9±0.9 31.5 <0.05

7 37.2 6 4 20 15 94 ±37 350±186 4.0±2.4 32.3 <0.05

7 60 6 2 20 14 66 ±22 148±105 2·1±1.1 16.9 <0.05

表 11.酯 9在裸鼠体内抗人 HT-29肿瘤克隆的抗肿瘤活性（ip)

化合物剂量 N BW (g) TW IR P TV IR

mg/kg B E B E (g) % (mm3) % 对照 NS 7 7 16.4 18.4 1.52 1639.36

拓扑替 5X2 6 4 17.8 17.0 0.40 73.5 <0.001 395.04 75.9

9 7.5X7 6 6 17.2 20.7 0.75 51.0 <0.01 711.42 56.6

9 15X7 6 6 16.5 18.3 0.32 78.8 <0.0001 257.69 S4.3

9 30X4 6 5 17.0 20.6 0.08 94.6 <0.0001 46.53 97.2

Claims

权利要求

1、如通式（I) 所示的化合物

(I)

其特征在于，

R是：

取代或非取代的呋喃基或四氢呋喃基，取代基的个数可以是 1-3 个，取代基选自卤素，硝基，氨基，低级烷基，低级烷氧基，氰基，羟基、和醛基；取代或非取代的噻吩基，取代基的数目可以是 1到 3个，取代基任意的选自卤素，硝基，氨基，低级烷基，低级垸氧基，氰基，羟基，叠氮基和醛基；取代或非取代的吡咯基，取代基的数目可以是 1到 4个，取代基任意的选自卤素，硝基，氨基，低级垸基，低级烷氧基，氰基，羟基，叠氮基和醛基；取代或非取代的 1， 4一苯二烷基，取代基的数目可以是 1 到 5 个，取代基任意的选自卤素，硝基，氨基，低级垸基，低级烷氧基，氰基，羟基，叠氮基，三氟甲基和醛基；取代或非取代的喹啉基，取代基的数目可以是 1到 3个，取代基任意的选自卤素，硝基，氨基，低级垸基，低级烷氧基，氰基，羟基，叠氮基和醛基；取代或非取代的色酮基，取代基的数目可以是 1到 5个，取代基任意的选自卤素，硝基，氨基，低级烷基，低级垸氧基，氰基，羟基，叠氮基和醛基；取代或非取代的吡啶基和哌啶基，取代基的数目可以是 1到 5个，取代基任意的选自素，硝基，氨基，低级烷基，低级烷氧基，氰基，羟基，叠氮基，苯基和醛基；是：氢，卤素，低级垸基，低级烷氧基，卤代低级烷基，羟基， RCOO, 氰基，硝基，醛基，氨基，羧基，卤代低级烷氧基，羟基羧基， C(0)H，低级烷羰氧基，低级三烷基硅烷基，低级烷氧羰氨基，低级烷氧羰氧甲基,取代的烯基， 1-羟基 -2-硝基乙基，氨基羧基，单或二烷基羧基，烷基羧氧基甲基，垸羰氧甲基，苯甲氧甲基，苯甲羰氧甲基，或低级垸氧甲基，或单或双垸氧甲基， (4-甲基 -1-哌嗪基）甲基；

R₂是：氢，卤素，低级烷基，低级烷氧基，羟基， RCOO, 氰基，醛基，硝基，氨基，代低级烷基，代低级烷氧基，羧基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰氨基， CH₂N ₇R₈ (R₇和 R₈分别是氢， _₆的烷基，任意取代的苯基，羟基取代的低级烷基，氨基取代的低级烷基，单或双取代氨基低级烷基，或 R₇和R₈和-N-共同形成环氨基）， C(0)H， CH₂R₉ (其中， R₉为低级烷氧基，氰基，氨基低级烷氧基，单或双烷氨基低级垸氧基，低级焼硫基，氨基低级垸硫基，单或双低级垸氨基低级垸硫基）， NRJORH (Rio, Rii分别是氢，低级垸基，任意取代的苯基，羟基低级烷基，氨基低级烷基，或 Ru和 R₁₂和 -N-共同形成环氨基， )；

R₃是：氢，卤素，低级烷基，低级烷氧基，羟基， RCOO, 氰基，醛基，硝基，氨基，氨基取代低级烷基，卤代低级烷基，卤代低级烷氧基，羧基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰氨基，氨基低级垸基，羟基低级烷基；

R₂和 R₃—起形成选自 CH， C¾， 0， S, NH, 或 NR₁₂ (其中 R₁₂是 _₆的烷基）三元或四元的链，

是：氢，素，低级烷基，低级烷氧基，羟基， RCOO, 氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级烷基，代低级垸氧基，羧基，低级烷氧羰基，低级烷基羰氧基，或低级垸基羰氨基；

和 R4—起形成选自 CH， CH₂， 0， S， NH, 或 NR₁₂ (其中 R₁₂是的焼基）三元或四元的链，

R₅ 是氢，卤素，硝基；

R₆ 是 CWQ烷基， C₂.₁₍₎烯基， CWQ炔基，苯基。

2、根据权利要求 1所述的化合物，其特征在于，从到是氢，是乙基， R是芳杂环取代基。

3、根据权利要求 2所述的化合物，其特征在于，所述的芳杂环取代基，是

4、根据权利要求 1所述的化合物，其特征在于，该化合物包括以下通式（la) 所示的化合物

R如权利要求 1所定义。

5、根据权利要求 1所述的化合物，其特征在于，该化合物包括以下通式（lb) 所示的化合物

(lb)

R如权利要求 1所定义。

6、根据权利要求 1所述的化合物，其特征在于，其特征在于，该化合物包括以下通式（Ic) 所示的化合物

(Ic)

R如权利要求 1所定义。

7、根据权利要求 1所述的化合物，其特征在于，其中， R₂, R4和 R₅ 是氢； R6 是乙基，羟基， ¾ 是（3-氯-正丙基）二甲基硅基，叔丁基二甲基硅基，乙酰氧甲基，氰基，甲酰乙烯基，乙氧酰基乙烯基，氰基乙烯基， 2， 2-氰基乙烯基，（2-氰基 -2-乙氧酰基）乙烯基，乙氧酰基乙基，甲基，乙基，或正丙基；是羟基，乙酰氧基，氨基，硝基，氰基，氯，溴，氟，低级烷基，高级烷基，低级烷氧基，氨基甲酰基，甲酰基。在这些化合物中，是乙基并且 R₃ 是氨基甲酰基氧基是更优选的。胺基甲酰氧基取代基是优选的，包括 1-哌嗪酰氧基， 4- (正丙基氨酰甲基）哌嗪基酰氧基，或 4- ( 1-哌啶基） -1-哌啶基酰氧: ¾o

8、根据权利要求 1所述的化合物，其特征在于，其中， R4和是氢； R₆ 是乙基， R₂ 是硝基，氨基，氰基，素，羟基，低级烷基胺基，二低级烷基胺基，低级烷基，低级烷氧基， 1-哌啶基， 1-吗啉基，氨基甲基，低级烷基氨基甲基，环烷胺甲基，二低级烷氨基甲基，环胺基甲基，乙酰氧基，乙酰氨基，低级垸氧基甲基，羟基低级垸基氨基甲基，氰基甲基和 R3是羟基，乙酰氧基，氰基，硝基，氨基，卤素，甲酰基，低级垸氧基，氨基甲酰氧基。

9、根据权利要求 1所述的化合物，其特征在于，其中， Ri, R₃, R4和 R₅ 是氢；是乙基，是硝基，氨基，甲基，氯，氰基，乙酰氧基或乙酰氨基。

10、根据权利要求 1所述的化合物，其特征在于，该化合物还包括其药效学上可接受的盐、盐的水合物、酯或前体药物。

11、制备如权利要求 1-10的任一所述的化合物的方法，其特征在于，喜树碱或其类似物和相应的羧酸或酰卤缩合反应，制备相应的化合物。

12、根据权利要求 11的制备方法，其特征在于，所述的缩合反应所用的缩合试剂包括 1,3二环己基碳二亚胺（DCC)、二吡啶碳酸酯（2-DP C)、 1- (3-二甲胺丙基） -3-乙基碳酰亚胺盐酸盐（EDCI)、 1,3-二异丙基碳酰亚胺（DIPC)、 4一吡咯烷基吡啶。

13、根据权利要求 12的制备方法，其特征在于，所述的缩合反应所用的催化剂是三级胺。

14、根据权利要求 13的制备方法，其特征在于，所述的三级胺包括 4 一二甲氨基吡啶（DMAP)， 4-吡咯烷基吡啶

15、根据权利要求 11的制备方法，其特征在于，所述的缩合反应所用的有机溶剂是二氯甲烷。

16、一种药物组合物，其特征在于，含有有效剂量的如权利要求 1一 1 0所述的任一化合物，以及药效学上可接受的载体。

17、根据权利要求 9的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物可以是片剂、胶囊、丸剂、注射剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。

18、如权利要求 1-10任一化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

19、根据权利要求 18的应用，其特征在于，所述的肿瘤包括人口腔癌，耐药人口腔癌，人肺腺癌，人结肠癌，人肝癌细胞。