WO2005037850A3 - Procede de production, en phase solide, de polynucleotides - Google Patents

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Abstract

L'invention propose un procédé de synthèse en phase solide permettant la production de polynucléotides de plus de 1000 nucléotides. L'une des caractéristiques de ce procédé est l'utilisation d'un support solide réutilisable contenant l'oligonucléotide lié par covalence. Cet oligonucléotide subit une hybridation donnant un oligonucléotide pont dans lequel le pont est également hybridé donnant un premier oligonucléotide formant une partie du polynucléotide cible. Une fois que le polynucléotide cible est synthétisé, il peut être retiré du support solide dans des conditions de dénaturation, le support solide pouvant être réutilisé pour l'élaboration d'autres polynucléotides cibles. Le rendement du polynucléotide cible augmente lorsqu'on applique une force de cisaillement au support solide qui est lié à l'oligonucléotide mis en culture. On pense que la force de cisaillement tend, d'une part à provoquer une extension des extrémités de croissance de l'oligonucléotide en éloignement du contact avec un autre oligonucléotide lié au support solide, et d'autre part à rendre cette extrémité plus accessible au recuit avec l'oligonucléotide de la solution. Cette synthèse s'obtient facilement sur un disque en verre fritté poreux, les réactifs et les solutions de lavage étant pompées au travers du verre fritté.
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