WO2005029081A1

WO2005029081A1 - 妊娠中毒症の重症度判定と予知方法、および妊娠中毒症における胎児・胎盤機能の評価方法

Info

Publication number: WO2005029081A1
Application number: PCT/JP2004/014455
Authority: WO
Inventors: Hiroshi Oda; Kosuke Seiki; Yasuhiko Shiina; Nobuyuki Sato; Satoru Takeda; Naomi Eguchi; Yoshihiro Urade
Original assignee: Maruha Corporation; Osaka Bioscience Institute
Priority date: 2003-09-24
Filing date: 2004-09-24
Publication date: 2005-03-31
Also published as: US20070020609A1; JP2005098805A; US7399596B2; JP3897117B2

Abstract

これまでの妊娠中毒症に対する種々の検査手段では検出することのできなかった妊娠中毒症発症前における異常を、正確にかつ被験者の負担が少なく検出することによって、妊娠中毒症の発症を予知する方法の提供、および妊娠中毒症における胎児・胎盤機能を評価する方法の提供。　被験者より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジンD合成酵素（L-PGDS）を測定することを特徴とする、妊娠中毒症の検出方法。

Description

妊娠中毒症の重症度判定と予知方法、および妊娠中毒症における胎児 ·胎盤機能の評価方法技術分野

本発明は、妊娠中毒症の重症度判定および予知方法、詳しくは妊娠中毒症の判定を簡便かつ客観的に行う方法、また、妊娠中毒症の臨床症状を呈していない妊婦の中毒症発症の危険性を予知する方法である。更には、妊娠中毒症における胎児 ·胎盤機能を評価する方法である。

背景技術

妊娠中毒症は、出血、産科的肺塞栓などとともに主要な妊産婦死亡原因のひとつであり、その管理法や高血圧のコントロールは産科医にとって今なお重要な課題のひとつである。しかしながら妊娠中毒症の病因、病態は依然不明のままであり、その定義、分類も世界的に統一されたものはない。わが国では、妊娠に高血圧、タンパク尿、浮腫の少なくともひとつもしくは 2つ以上の症状が見られ、かつこれらの症状が単なる妊娠偶発合併症でないものと定義されている。しかしあくまで主体は高血圧であり、浮腫のみのものは妊娠中毒症とはいわない。妊娠中毒症は、妊婦の約 10% (6〜14%)に見られる。

妊娠中毒症はその発症時期により早発型（32週未満に発症）、遅発型（32週以降に発症）に分類される。また重症度による分類では、高血圧 ·タンパク尿 ·浮腫の内ひとつ以上の症状が存在するが、それらの全てが軽症の範囲内のものを軽症型、これらの症状のひとつでも重症の範囲内にあるものを重症型という。早発型、重症型は母児の臓器障害が急速に悪化するため予後が悪く、厳重な管理が必要である。

妊娠中毒症の診断は、高血圧 ·タンパク尿 ·浮腫の症状を調べることにより行われる。即ち、収縮期血圧が 140 mmHg以上、拡張期血圧が 90 mmHg以上の場合、高血圧とする。また、 24時間尿でエスバッハ法またはこれに準ずる測定法により、

30 mg/dL以上のタンパクが検出された場合をタンパク尿とする。浮腫は、指圧により脛骨稜に陥没を認め、かっこの妊娠の最近の 1週間に 500 g以上の体重増加のあった場合とする。これら症状のひとつでも認められれば、妊娠中毒症と診断される（坂元正一他、編. 妊娠中毒症. プリンシプル産科婦人科学 2：メジカルビュー社. 1998 : 340-60. ) 。

また、一般に妊娠中毒症例では循環血液量が減少し、血液濃縮を伴うことから、血漿タンパク濃度を測定する場合もある。更に、重症妊娠中毒症では微小血栓ができやすく、凝固系亢進、二次線溶系亢進状態にあり、血小板や])-ダイマーといつた凝固-線溶系に関与する因子の測定も行われる。その他、脂質や肝機能検査なども必要に応じて行われる（坂元正一他、編. 妊娠中毒症. プリンシプル産科婦人科学 2：メジカルビユー社. 1998 : 340-60. ) 。

妊娠中毒症患者の管理、治療法は重症度に応じて変わってくる。しかしながら現在、重症度の判定は上述した複数の検査法を組み合わせて総合的に行われているため、簡便かつ客観的に重症度を判定する方法の確立が望まれている。また、妊娠中毒症は、初期に発見された場合は厳重な管理によりその影響をかなり抑えることができると考えられている。しかし、上述した何れの検查法においても初期の妊娠中毒症を検出することは難しく、現在のところ妊娠中毒症の発症を予知する指標は確立されていない。

また、妊娠中毒症が重症化してくると胎盤機能が低下し、胎児の栄養や酸素状態が悪化するため、その機能判定は胎児分娩時期を決める上で重要である。そこで、胎児 ·胎盤機能の的確な評価指標が望まれている。

ヒトリポカリン型プロスタグランジン])合成酵素（以下 L-PGDS) は、各種プロスタグランジン類の共通の前駆体である PG から PGD₂への異性化を触媒する酵素で、疎水性低分子の輸送機能をも併せ持つ多機能性タンパク質である（Urade Y. et al. , Prostaglandin D synthase : Structure and funct ion. Vi tam Horm

2000 ; 58 : 89-120. ) 。 L- PGDSは、進行した腎疾患患者の血中で高濃度に検出されることが報告されており（Hof fmann A. et al. , Molecular characterizat ion of β -trace prote in in human serum and urine : a potent ial diagnos t ic marker for renal d iseases. Glycobiology 1997 ; 7 : 499-506. ) 、更に、本発明者らは、腎疾患が進行する以前の早期腎疾患患者において体液中 L- PGDS濃度が増加することを明らかにしてきた（Hamano K. et al. , Blood sugar control reverses the increase in urinary excretion of prostaglandin D synthase in diabetic patients. Nephron 2002;92:77-85. ) 。また本発明者らは、 L-PGDS が動脈硬化プラークにおいて産生され、虚血性心疾患患者では体液中 L-PGDS濃度が増加することを明らかにしてきた（Eguchi Y. et al. , Expression of lipocal in-type prostaglandin D synthase ( j3 -trace) in human heart and its accumulation in the coronary circulation of angina patients. Proc Natl Acad Sci USA 1997;94:14689-94. ) 。このように、 L-PGDSと腎疾患あるいは血管病変との関係は明らかにされてきたが、 L- PGDSと妊娠中毒症の関係については、これまで全く検討されていなかった。

非特許文献 1 Hoffmann A. et al. , Glycobiology 1997;7:499-506 非特許文献 2 Hamano K. et al., Nephron 2002;92:77-85

非特許文献 3 Eguchi Y. et al., Proc Natl Acad Sci USA 1997 ;94:

14689-94 発明の開示

本発明の課題は、これまで種々の検査手段によって総合的に判断していた妊娠中毒症の重症度を、簡便にかつ客観的に判定する方法を提供することにある。更に、これまでの妊娠中毒症に対する種々の検查手段では検出することのできなかつた妊娠中毒症発症前における異常を、正確にかつ被験者の負担が少なく検出することによって、妊娠中毒症の発症を予知する方法を提供することにある。また、妊娠中毒症における胎児 ·胎盤機能を評価する方法を提供することにある。

本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、血液、尿等の体液中 L-PGDS濃度を測定し、その測定値を指標とすることにより妊娠中毒症の重症度判定を行えることを見い出し、更に、その測定値を指標とすることにより妊娠中毒症を早期に予知することができることを見い出し、本研究を完成させるに至つた。

即ち、本発明は、被験者より採取した体液試料中の L- PGDSを測定することを特徴とする、妊娠中毒症の重症度判定あるいは予知方法である。具体的には、本発明は以下の通りである。

[ 1 ] 被験者より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D 合成酵素を測定することを特徴とする、妊娠中毒症の検出方法、

[ 2 ] 被験者より採取した体液試料中のヒトリボカリン型プロスタグランジン]) 合成酵素を測定し、その測定値を正常妊婦および/または妊娠中毒症妊婦より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素の測定値に基づいて設定したカツトオフ値と比較することを特徴とする [ 1 ]の妊娠中毒症の検出方法、

[ 3 ] 被験者より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D 合成酵素を測定することを特徴とする、妊娠中毒症の重症度判定方法、

[ 4 ] 被験者より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D 合成酵素を測定し、その測定値を、様々な重症度の妊娠中毒症妊婦より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素の測定値から重症度に応じて設定したカツトオフ値と比較することを特徴とする、 [ 3 ]の妊娠中毒症の重症度判定方法、

[ 5 ] 被験者より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D 合成酵素を測定することを特徴とする、妊娠中毒症の予知方法、

[ 6 ] 高血圧、タンパク尿、浮腫の何れも呈していない被験者を対象にして、被験者より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素を測定することを特徴とする、 [ 5 ]の妊娠中毒症の予知方法、

[ 7 ] 被験者より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン]) 合成酵素を測定し、その測定値を、正常妊婦および Zまたは妊娠中毒症妊婦より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素の測定値から設定したカツトオフ値と比較することを特徴とする、 [ 5 ]または [ 6 ]の妊娠中毒症の予知方法、

[ 8 ] 妊娠中毒症患者より採取した体液試料中のヒトリボカリン型プロスタグランジン D合成酵素を測定することを特徴とする、 '胎児 ·胎盤機能の評価方法、

[ 9 ] 体液試料中のヒトリボカリン型プロスタグランジン D合成酵素の測定を、免疫学的測定法により行うことを特徴とする、 [ 1 ]または [ 2 ]の妊娠中毒症の検出方法、

[10] 体液試料中のヒトリボカリン型プロスタグランジン D合成酵素の測定を、免疫学的測定法により行うことを特徴とする、 [3]または [4]の妊娠中毒症の重症度判定方法、

[11] 体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素の測定を、免疫学的測定法により行うことを特徴とする、 [5]〜 [7]のいずれかの妊娠中毒症の予知方法、

[12] 体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素の測定を、免疫学的測定法により行うことを特徴とする、 [8]の胎児 ·胎盤機能の評価方法、 [13] 体液試料が血液である [1]〜[12]のいずれかの方法、

[14] 体液試料が尿である [ 1 ]〜 [ 12 ]のいずれかの方法、ならびに

[15] 抗ヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素抗体を含む、妊娠中毒症の検出キット。

以下、本発明を詳細に説明する。

本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願 2003- 332084号の明細書および/または図面に記載される内容を包含する。図面の簡単な説明

図 1は、妊娠 31週以前および妊娠 31週以降における正常妊婦および妊娠中毒症妊婦の血中 L- PGDS濃度を示した。何れの群においても、妊娠中毒症で有意に L - PGDS高値であった。

図 2は、妊娠 31週以前および妊娠 31週以降における正常妊婦および妊娠中毒症妊婦の尿中 L- PGDS排泄量を示した。尿検体は随時尿とし、測定値は尿中クレアチニンン 1 g当たりに換算した。何れの群においても、妊娠中毒症で有意に L- PGDS 高値であった。

図 3は、妊娠 26- 38週の妊娠中毒症妊婦を臨床症状などに基づいて軽症型あるいは重症型に分け、各群における血中 L- PGDS濃度を比較した結果を示す。重症型では軽症型に比べ有意に L- PGDS高値であった。

図 4は、妊娠 26- 38週の妊娠中毒症妊婦を臨床症状などに基づいて軽症型あるいは重症型に分け、各群における尿中 L-PGDS排泄量を比較した結果を示す。重症型では軽症型に比べ有意に L-PGDS高値であった。

図 5は、臨床症状などを基に軽症型あるいは重症型妊娠中毒症と判定された妊婦を対象に、妊娠中毒症発症前に採取した保存血清を用いて L-PGDS濃度を測定した結果を示す。重症型では軽症型に比べ有意に L-PGDS高値であった。

図 6は、臨床症状などを基に軽症型あるいは重症型妊娠中毒症と判定された妊婦を対象に、妊娠中毒症発症前に採取した保存尿を用いて L-PGDS排泄量を測定した結果を示す。尿検体は随時尿とし、測定値は尿中クレアチニン 1 g当たりに換算した。重症型では軽症型に比べ有意に L-PGDS高値であった。発明を実施するための最良の形態

本発明において、 L-PGDSを測定する試料は被験者から採取した体液であり、具体的には、血液（血清、血漿等）、尿（随時尿、蓄尿等）、羊水、頸管粘液、子宮内腔液、卵管内腔液等が挙げられる。この中でも、特に採取が容易な血液および尿が好ましい。この場合、被験者は妊婦でありその妊娠ステージ（妊娠後の経過週）は問わず、早期ステージの場合であって、まだ妊娠中毒症を発症していない妊婦については、本発明の方法によりその後の妊娠中毒症発症のリスクを判定することができ、既に妊娠中毒症の症状を呈している妊婦については、妊娠中毒症の重症度を判定することができる。上記試料中の L- PGDS濃度を測定する方法としては、 L-PGDS濃度を正確に反映する測定法であれば特に限定はされず、例えば免疫学的測定法、酵素活性測定法、キヤピラリー電気泳動法等が挙げられる。しかしながら、実際の臨床現場において、簡便に且つ多量の試料を同時に測定する必要性の観点から、 L-PGDSに特異的なモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を用いた酵素免疫測定法、放射免疫測定法、ラテックス凝集測定法、蛍光免疫測定法等の免疫学的測定法によるのが好適である。モノクローナル抗体としては、ハイプリドーマ株 1 B7 (FE腿 BP- 5709) 、 7F5 (FERM BP - 5711)、 6F5 (FERM

BP - 5710)、 9A6 (FE腿 BP - 5712)、 10A3 (FERM BP- 5713)等により産生されるものを好適に用いることができる。ハイプリドーマ株 1 B7は 1995年 9月 21日（原寄託日）に FERM BP- 5709として、 7F5は 1996年 6月 6日 (原寄託日) に FERM BP- 5711 として、 6F5は 1995年 9月 21日（原寄託日）に FE履 BP- 5710として、 9A6は 1996年 6月 6日（原寄託日）に FERM BP- 5712として、 10A3は 1996年 6月 6日（原寄託日）に FERM BP- 5713として、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託セン夕一（日本国茨城県つくば市東 1丁目 1番地 1中央第 6 ) に寄託されている。例えば、モノクローナル抗体を用いたサンドイッチ ELISA法として、既に本発明者らによって確立されている L-PGDS検出キット（W097/16461) を利用すれば良い。本発明においては、上記手段で測定された L-PGDS濃度測定値を指標として初期の妊娠中毒症を検出し、また、重症妊娠中毒症を早期に予知することができる。更には、上記手段で測定された L-PGDS濃度測定値を指標として妊娠中毒症における胎盤機能の低下を判定することができる。

本発明の方法により検出される妊娠中毒症は、純粋型妊娠中毒症あるいは混合型妊娠中毒症の何れにも限定されず、脳血管痙攣発作の合併する子癇も含まれる。また、肺水腫、脳出血、常位胎盤早期剥離および肝血管攣縮を引き起こす HELLP (hemolysis, elevated l iver enzymes, and low platelet count) 症候群を合併する妊娠中毒症も含まれる。

本発明の方法により、妊婦が妊娠中毒症に罹患しているかどうかを判定する場合、はじめにカットオフ値の設定を行う。例えば、正常妊婦、および Zまたは、あらかじめ高血圧、タンパク尿、浮腫のいずれかの症状を呈しており、臨床的に妊娠中毒症と診断された妊婦から採取した体液試料中の L-PGDSを測定する。そして、正常妊婦における L- PGDSの分布、あるいは妊娠中毒症の検出に対する感度 - 特異性などの診断精度に基づいて、適切な L-PGDSのカットオフ値を設定する。次いで、被験者である妊婦より採取した体液試料中の L-PGDSを測定し、測定値を力ットオフ値と比較することにより、 L- PGDS濃度がカットオフ値を超える場合、妊娠中毒症に罹患していると判定することができる。また、この際、重症度に対応させカツトオフ値を設定しておくことにより、測定値と各カツ卜オフ値を比較することにより妊娠中毒症の重症度を判定することができる。例えば、妊娠中毒症を高血圧、タンパク尿、浮腫といった臨床症状に基づいて重症と軽症に分け、各群における L- PGDSの分布や重症度判定に対する診断精度を検討し、適切なカツトオフ値を設定すればよい。上記カツ卜オフ値を設定するための被験体の数は限定されないが、好ましくは 5例以上、さらに好ましくは 10例以上である。

本発明の方法によれば、高血圧、タンパク尿、浮腫等の症状だけでは的確に判定できない、初期の妊娠中毒症の判定も可能である。

この場合のカツトオフ値は限定されないが、妊娠中毒症に罹患しているか否かの判定のためのカツトオフ値は、例えば血中濃度で妊娠 31週までの以前の妊婦では 50〜70 ^ g/dLの間、妊娠 32週以降の妊婦では 50〜60 2 /(^の間に設定することができる。また、尿中濃度では妊娠 31週までの以前の妊婦では 2. 7〜9mg/gクレアチニンの間、妊娠 32週以降の妊婦では 3. 5〜7. 5mg/gクレアチニンの間に設定することができる。また、妊娠中毒症が軽症か重症かを判定するカットオフ値も限定されないが、例えば、血中濃度で55〜70 /2 /(31^こ、尿中濃度で 4〜9 mg/gクレアチニンの間に設定することができる。妊娠中毒症に罹患しているか否かの判定に用いられるカツトオフ値を超え、妊娠中毒症が軽症か重症かを判定するカツトォフ値を超えない場合、被験体は軽症型妊娠中毒症に罹患していると判定され、妊娠中毒症が軽症か重症かを判定するカツトオフ値を超える場合、被験体は重症型妊娠中毒症に罹患していると判定される。

さらに、本発明の方法は、高血圧、タンパク尿、浮腫のいずれの症状も呈しておらず、臨床的に妊娠中毒症に罹患していないと考えられる妊婦が妊娠中毒症を発症するリスクを判定、すなわち妊娠中毒症を予知する方法も包含する。この場合、正常妊婦から採取した体液試料中の L-PGDSの濃度を測定し、次いで該正常妊婦のその後の経過を観察し、妊娠中毒症を発症せず正常のまま分娩に至った妊婦群と、妊娠期間中に妊娠中毒症を発症した妊婦群とに分け、前者の群の測定値と後者の群の測定値との間に予知のためのカツトオフ値を設定しておく。あるいは、妊娠中毒症の発症前に採取していた妊娠中毒症妊婦の体液試料や、正常のまま分娩に至った妊婦の同時期の体液試料が凍結等の手段により保存されていれば、そのような保存試料中の L- PGDS濃度を測定することによって、後ろ向き

(ret rospect ive) にカットオフ値を設定することもできる。さらに、この際妊娠中毒症を発症した時期別に妊婦群を分け、それぞれの群別に L- PGDS濃度を測定し、発症時期別にカットオフ値を設定することにより、妊娠中毒症を発症する時期をも予測することができる。例えば、妊娠 15〜25週の妊娠初期に妊娠中毒症を発症した群と妊娠 26週以降の妊娠後期に妊娠中毒症を発症した群とに分けそれぞれの体液試料中 L- PGDSの濃度を測定することにより、妊娠初期に妊娠中毒症を発症するリスク、妊娠後期に妊娠中毒症を発症するリスクを判定することが可能になる。さらに、妊娠中毒症が軽症であった妊婦群と重症であった妊婦群に分け、それぞれの体液試料中 L- PGDSの濃度を測定し、重症型妊娠中毒症を発症した妊婦の発症前の L- PGDSの濃度と軽症型妊娠中毒症を発症した妊婦の発症前の L-PGDSの濃度の間に力ットオフ値を設定することにより、重症型妊娠中毒症を発症するリスクを判定することができる。

次いで、高血圧、タンパク尿、浮腫のいずれの症状も呈していない妊婦より体液試料を採取し、 L- PGDSの濃度を測定し、前記予知のためのカットオフ値と比較することにより、妊娠中毒症を発症するリスクを判定する。例えば、測定値が力ットオフ値に比べ高ければ、将来的に妊娠中毒症を発症するリスクが高いと判定され、カットオフ値に比べ低ければ、将来的に妊娠中毒症を発症するリスクが低いと判定される。また、カットオフ値に比べ差がない場合は、判定保留となり必要ならば再検査を行えばよい。

この場合のカットオフ値は限定されないが、例えば、妊娠期間中に妊娠中毒症を発症するか否かを予知するためのカツトオフ値は、血中濃度では 55〜75 g/dL の間に、尿中濃度では 3. 0〜10mg/gクレアチニンに設定することができる。また、妊娠期間中に重症型妊娠中毒症を発症するか否かを予知するためのカツ卜オフ値は、血中濃度では 60〜75 g/dLの間に、尿中濃度では 5. 0〜10mg/gクレアチニンに設定することができる。

このように、妊娠中毒症を発症するリスクを判定し、リスクが高いと判定された場合に、妊婦に適切な措置を施すことにより、その後の妊娠中毒症を発症するリスク、あるいは妊娠中毒症が重症化するリスクを減じることが可能になる。上記カツトオフ値を設定するための被験体の数は限定されないが、好ましくは 5例以上、さらに好ましくは 10例以上である。

さらに、本発明は妊娠中毒症を発症している妊婦から採取した体液試料中の L -

PGDSを測定することを含む、胎児 ·胎盤機能の評価を行う方法を包含する。ここで、胎児 ·胎盤機能の評価とは胎盤が胎児に栄養や酸素を供給する機能が減じていないかどうかの評価、あるいは胎児に臓器障害等の障害が生じていないかを評価することをいう。体液試料中の L-PGDS濃度が低いとき、胎児 ·胎盤機能が良好であると評価され、高いときは胎児 ·胎盤機能が低下していると評価し得る。さらに、本発明は抗 L- PGDS抗体を含む、妊娠中毒症の検出試薬または検出キットを包含する。該試薬またはキットは、該キットが酵素免疫測定法に基づく場合は、抗体を固相化した担体を含んでいてもよく、抗体があらかじめ担体に結合していてもよい。また、該キットは適宜、ブロッキング溶液、反応溶液、反応停止液、試料を処理するための試薬、また各カットオフ値を記載した指示書もしくはカツトオフ値に L-PGDS濃度を合わせた標準試薬等を含んでいてもよい。

以下に本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明の範囲はこれら実施例に何ら限定されるものではない。

〔参考例〕体液中 L-PGDS濃度の測定方法

体液中 L- PGDS濃度は、以下の通りサンドイッチ EL I SA法により測定した。

まず、ヒト L- PGDSと結合可能な抗 -ヒト L- PGDSモノクローナル抗体（クローン： 7F5) を 50 mM炭酸緩衝液（pH 9. 6) で 4. 4 g/mLとなるように希釈し、 96ゥエルマイクロタイ夕一プレートに 300 x L/ゥエルずつ加えて、 4°Cでー晚インキュペートすることにより固相化した。このプレートをリン酸緩衝生理食塩水（pH

7. 4、以下 PBS) で 3回洗浄した後、 0. 2%カゼインを含む PBS (pH 7. 4、以下ブロッキング液）を 300 z L/ゥエルずつ加え、 30°Cで 90分間インキュベートすることによりブロッキングを行った。次いで、ブロッキング後のプレートを 0. 05%

Tween20を含む PBS (T-PBS) で 3回洗浄した後、抗原溶液（ブロッキング液で希釈した標準液あるいは体液検体）を 100 /_i L/ゥエルずつ加え、 30°Cで 90分間インキュべ一卜した。反応後、 T- PBSで 3回洗浄し、ブロッキング液で 0. 5 g/mLとなるよう希釈した西洋ヮサビペルォキシダーゼ標識化抗-ヒト L- PGDSモノクローナル抗体（クローン： 1B7) を 100 /ゥエルずつ加え、 30°Cで 90分間インキュベートした。反応後、 T- PBSで 3回洗浄し、発色液（ABTS so lut ion：ベーリンガーマンハイム社製）を 100 i L/ゥエルずつ加え、 30°Cで 30分間インキュベートした。反応後、停止液（1. 5%シユウ酸）を I OO L/ゥエルずつ加え、プレートミキサーで攪拌して反応を停止させ、市販のプレートリーダーで 405 nmにおける吸光度を測定した。

上記サンドイッチ ELISA法に用いたモノクローナル抗体（クローン： 1B7、 7F5) は、マウス腹腔内にプリスタン 1. 0 mLを注射し、その後 2週間目にそれぞれの抗体産生細胞 I X 10⁸個をマウス腹腔内に移植し、 2週間後に腹水を採取し、得られた腹水をプロティン Aァフィ二ティーカラムクロマトグラフィー操作にかけることにより調製した。尚、上記モノクローナル抗体を産生する細胞株はそれぞれのモノクローナル抗体名に一致し、それぞれの細胞株は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（日本国茨城県つくば巿東 1丁目 1番地 1中央第 6 ) に、 1B7については FERM BP- 5709 (原寄託日 1995年 9月 21日）、 7F5については FERM BP- 5711 (原寄託日 1996年 6月 6日）として寄託されている。

〔実施例 1〕

正常妊婦および妊娠中毒症妊婦の血中 L-PGDS濃度を測定した。被験者を妊娠ステージによって妊娠 31週以前および妊娠 32週以降に分け、それぞれのステージにおける正常妊婦および妊娠中毒症妊婦の血中 L-PGDS濃度を比較した。結果を図 1 に示す。妊娠 31週以前においては、正常（n=14、 46. 1 ± 2. 8 g/dL、平均値土標準誤差）に比し、妊娠中毒症（n=10、 72. 8±3. 8 x g/dL、平均値士標準誤差）で有意に L-PGDS高値であった（Pく 0. 0001) 。また、妊娠 32週以降においても、正常

(n=13、 48. 3 ± 3. 8 g/dL、平均値土標準誤差）に比し、妊娠中毒症（n=10、 65. 4±3. 1 g/dL、平均値士標準誤差）で有意に L-PGDS高値であった（Pく 0. 05) 。従って、何れの妊娠ステージにおいても、血中 L-PGDS濃度が高値である場合は妊娠中毒症を発症する可能性が高く、血中 L- PGDS測定が妊娠中毒症の検出に有用であるものと考えられた。

〔実施例 2〕

正常妊婦および妊娠中毒症妊婦の尿中 L-PGDS排泄量を測定した。被験者を妊娠ステージによって妊娠 31週以前および妊娠 32週以降に分け、それぞれのステージにおける正常妊婦および妊娠中毒症妊婦の随時尿を採取した。尿の濃さの違いを補正するために、尿中 L-PGDS排泄量は尿中クレアチニン 1 gあたりに換算した

(mg/gクレアチニン）。結果を図 2に示す。妊娠 31週以前においては、正常

(n=14、 2. 53± 0. 26 mg/gクレアチニン、平均値士標準誤差）に比し、妊娠中毒症（11=10、 9. 90士 2. 24 mg/gクレアチニン、平均値士標準誤差）で有意に L- PGDS 高値であった（P〈0. 0001) 。また、妊娠 32週以降においても、正常（n=14、 3. 38 ± 0. 58 mg/gクレアチニン、平均値土標準誤差）に比し、妊娠中毒症（n=10、 8. 03 ± 1. 11 mg/gクレアチニン、平均値士標準誤差）で有意に L-PGDS高値であつた（Pく 0. 005) 。従って、何れの妊娠ステージにおいても尿中 L-PGDS排泄量が高値である場合は妊娠中毒症を発症する可能性が高く、尿中 L-PGDS測定が妊娠中毒症の検出に有用であると考えられた。

〔実施例 3〕

妊娠 26- 38週の妊娠中毒症妊婦の血中 L-PGDS濃度を測定した。被験者を、高血圧、タンパク尿、浮腫、その他臨床症状などに基づいて軽症型妊娠中毒症と重症型妊娠中毒症に分け、血中 L-PGDS濃度を比較した。その結果、図 3に示したように、重症型の血中 L- PGDS濃度（n=12、 71. 9 ± 3. 6 / g/dL、平均値士標準誤差）は、軽症型（η=9、 52. 4±4. 8 g/dL、平均値士標準誤差）に比べ有意に高値であった

(P<0. 01) 。従って、妊娠中毒症患者において血中 L-PGDS濃度が高値である場合は中毒症が重症である可能性が高く、その測定は妊娠中毒症の重症度判定に有用であると考えられた。

〔実施例 4〕

妊娠 26-38週の妊娠中毒症妊婦の尿中 L-PGDS排泄量を測定した。被験者を、高血圧、タンパク尿、浮腫、その他臨床症状などに基づいて軽症型妊娠中毒症と重症型妊娠中毒症に分け、尿中 L- PGDS排泄量を比較した。尿検体は随時尿とし、尿中 L- PGDS排泄量は尿中クレアチニン 1 gあたりに換算した（mg/gクレアチニン）。その結果、図 4に示したように、重症型の尿中 L-PGDS排泄量（n=12、 9. 72± 3. 46 mg/gクレアチニン、平均値士標準誤差）は、軽症型（n=9、 3. 87± 1· 18 mg/gクレァチニン、平均値土標準誤差）に比べ有意に高値であった（Pく 0. 01) 。従って、妊娠中毒症患者において尿中 L- PGDS排泄量が高値である場合は中毒症が重症である可能性が高く、その測定は妊娠中毒症の重症度判定に有用であると考えられた。〔実施例 5〕

妊娠 15- 25週の妊娠中毒症を発症していない妊婦 24名を対象に血中 L- PGDS濃度を測定し、その後分娩までの間の妊娠中毒症発症の有無を追跡調査した。妊娠中毒症発症の有無は、高血圧、タンパク尿、浮腫、その他臨床症状などにより総合的に判断した。実施例 1で示した正常妊婦 ·妊娠 31週以前における血中 L- PGDS濃度の 95パーセンタイルの値である 61. 8 g/dLを暫定的なカツトオフ値とし、被験者をそれ以下の群とそれを越える群の 2群に分類した。その結果、表 1に示したように、血中 L- PGDS濃度 61. 8 / g/dL以下の群では 17名中 1名のみが妊娠中毒症を発症したのに対し（5. 9%) 、 61. 8 g/dL以上の群では 7名中 2名と高率で中毒症を発症した（28. 6« 。本結果より、妊娠中毒症を発症していない妊婦においても血中 L-PGDS濃度が高値である場合はその後の中毒症発症の可能性が高く、血中 L- PGDS濃度測定によって妊娠中毒症の発症を予知できるものと考えられた。

表 1

表 1. 血中 L- PGDS濃度とその後の妊娠中毒症の発症状況

〔実施例 6〕

妊娠 15-25週の妊娠中毒症を発症していない妊婦 35名を対象に尿中 L-PGDS排泄量を測定し、その後分娩までの間の妊娠中毒症発症の有無を追跡調査した。妊娠中毒症発症の有無は、高血圧、タンパク尿、浮腫、その他臨床症状などにより総合的に判断した。尿検体は随時尿とし、尿中 L-PGDS排泄量は尿中クレアチニン 1 gあたりに換算した（mg/gクレアチニン）。実施例 1で示した正常妊婦 ·妊娠 31週以前における尿中 L-PGDS排泄量の 95パーセンタイルの値である 4. 21 mg/gクレアチニンを暫定的なカツトオフ値とし、被験者をそれ以下の群とそれを越える群の

2群に分類した。その結果、表 2に示したように、尿中 L-PGDS排泄量 4. 21 mg/gクレアチニン以下の群では 26名中 2名のみが妊娠中毒症を発症したのに対し (7. 7¾) 、 4. 21 mg/gクレアチニン以上の群では 9名中 3名と高率で中毒症を発症した（33. 3%) 。本結果より、妊娠中毒症を発症していない妊婦においても尿中 L - PGDS排泄量が高値である場合はその後の中毒症発症の可能性が高く、尿中 L- PGDS排泄量測定によって妊娠中毒症の発症を予知できるものと考えられた。

表 2

表 2. 尿中 L-PGDS排泄量とその後の妊娠中毒症の発症状況

レアチニン

〔実施例 7〕

妊娠 26週以降に妊娠中毒症を発症した妊婦 17名について、妊娠 15- 25週の間に採取していた保存血清を用いて L-PGDS測定を行った。その結果、図 5に示したように、軽症型妊娠中毒症（n=9、 58. 9± 3. 2 ti g/dL、平均値土標準誤差）に比し、重症型妊娠中毒症（n=8、 69. 2 ± 2. 6 £ g/dL、平均値士標準誤差）では有意に L- PGDS高値となることが判明した（Pく 0. 05) 。従って、血中 L - PGDS高値患者では重症型妊娠中毒症を発症する可能性が高いと考えられ、血中 L-PGDS測定は重症型妊娠中毒症の予知に有用であると考えられた。

〔実施例 8〕

妊娠 26週以降に妊娠中毒症を発症した妊婦 17名について、妊娠 15-25週の間に採取していた保存尿（随時尿）を用いて L- PGDS測定を行った。その結果、図 6に示したように、軽症型妊娠中毒症（n=8、 4. 59±0. 75 mg/gクレアチニン、平均値士標準誤差）に比し、重症型妊娠中毒症（n=8、 8. 69±0. 96 mg/gクレアチニン、平均値士標準誤差）では有意に L-PGDS高値となることが判明した（Pく 0. 05) 。従つて、尿中 L- PGDS高値患者では重症型妊娠中毒症を発症する可能性が高いと考えられ、尿中 L- PGDS測定は重症型妊娠中毒症の予知に有用であると考えられた。産業上の利用可能性

本発明によれば、妊娠中毒症を被験者の負担が少なく簡便に検出できる方法が提供される。しかも、本発明の方法では、これまで種々の検査手段によって総合的に判断していた妊娠中毒症の重症度を、簡便にかつ客観的に判定することができる。更に、本発明の方法では、高血圧、タンパク尿、浮腫といった臨床症状を呈していない妊婦における妊娠中毒症の危険性をも予知することができる。従つて、本発明方法は、妊娠中毒症の重症度判定と予知に極めて有用である。

本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。

Claims

請求の範囲

1 . 被験者より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素を測定することを特徴とする、妊娠中毒症の検出方法。

2 . 被験者より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素を測定し、その測定値を正常妊婦および Zまたは妊娠中毒症妊婦より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン])合成酵素の測定値に基づいて設定したカツトオフ値と比較する.ことを特徴とする請求項 1に記載の妊娠中毒症の検出方法。

3 . 被験者より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素を測定することを特徴とする、妊娠中毒症の重症度判定方法。

4 . 被験者より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素を測定し、その測定値を、様々な重症度の妊娠中毒症妊婦より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素の測定値から重症度に応じて設定したカツトオフ値と比較することを特徴とする、請求項 3に記載の妊娠中毒症の重症度判定方法。

5 . 被験者より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素を測定することを特徴とする、妊娠中毒症の予知方法。

6 . 高血圧、タンパク尿、浮腫の何れも呈していない被験者を対象にして、被験者より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素を測定することを特徴とする、請求項 5に記載の妊娠中毒症の予知方法。

7 . 被験者より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素を測定し、その測定値を、正常妊婦およびまたは妊娠中毒症妊婦より採取した体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素の測定値から設定したカツ卜オフ値と比較することを特徴とする、請求項 5または 6に記載の妊娠中毒症の予知方法。

8 . 妊娠中毒症患者より採取した体液試料中のヒトリボカリン型プロスタグランジン！)合成酵素を測定することを特徴とする、胎児 ·胎盤機能の評価方法。

9 . 体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素の測定を、免疫学的測定法により行うことを特徴とする、請求項 1または 2に記載の妊娠中毒症の検出方法。

1 0 . 体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素の測定を、免疫学的測定法により行うことを特徴とする、請求項 3または 4に記載の妊娠中毒症の重症度判定方法。

1 1 . 体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素の測定を、免疫学的測定法により行うことを特徴とする、請求項 5〜7のいずれか 1項に記載の妊娠中毒症の予知方法。

1 2 . 体液試料中のヒトリポカリン型プロスタグランジン])合成酵素の測定を、免疫学的測定法により行うことを特徴とする、請求項 8記載の胎児 ·胎盤機能の評価方法。

1 3 . 体液試料が血液である請求項 1〜 1 2のいずれか 1項に記載の方法。

1 4 . 体液試料が尿である請求項 1〜 1 2のいずれか 1項に記載の方法。

1 5 . 抗ヒトリポカリン型プロスタグランジン D合成酵素抗体を含む、妊娠中毒症の検出キッ卜。