WO2005018634A1

WO2005018634A1 - Ether de monomethyle d'hematoporphyrine utilise pour le traitement de troubles oculaires

Info

Publication number: WO2005018634A1
Application number: PCT/CN2004/000970
Authority: WO
Inventors: Jining Tao; Qianbin Xiong; Wenhui Chen; Jun Li; Yong Su
Original assignee: Shanghai Fudan-Zhangjiang Bio-Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 2003-08-25
Filing date: 2004-08-20
Publication date: 2005-03-03
Also published as: CN1589791A; CN100534428C

Description

血卟啉单甲醚在治疗眼科疾病中的应用

技术领域

本发明涉及医药领域，更具体地涉及利用血卟啉单甲醚，通过对眼施加光动力治疗 (PDT)而治疗眼科疾病的应用。背景技术

视力丧失是与衰老和各种眼病相伴随的常见问题。衰老和其他病因往往引起角膜、虹膜、视网膜或脉络膜上有害的新血管形成的发生，造成视力下降乃至视力丧失。在很多已知的眼病，包括黄斑变性、眼组织胞浆菌病综合症、近视和炎症性疾病中，脉络膜新血管形成导致出血和纤维化，最终伴有视力丧失。

与年龄相关的黄斑变性 (AMD)是老年人视力下降的主要原因，其中 10%的 AMD 病人伴随脉络膜新血管形成，导致急剧的视力丧失。据统计， AMD造成老年人新失明中的 80%是由脉络膜新血管形成引起的。

目前对 AMD引起的脉络膜新血管形成，主要采用激光光凝（固）法治疗，该方法可以封闭新生血管，延缓视力丧失。但激光光凝的同时也破坏了新生血管周围的正常脉络膜组织以及内层的视网膜组织，导致视力下降，患者往往留有萎缩性性瘢痕和视觉盲点。激光光凝法的另一个问题是大部分病人因为新生血管弥散、边界不清而不适合用激光光凝法治疗，或疗效不佳，复发率高。

光动力疗法是给患者施以光活性化合物，光敏剂在新生血管部位富集，再以低强度激光照射，激发光敏剂使之产生光化学反应，选择性的封闭新生血管。这一方法选择性更强，激光强度低，对周围正常组织损伤小，有望成为治疗 AMD的有效手段。

用于光动力治疗的光敏剂有血卟啉衍生物（HPD)、苯并卟啉衍生物（BPD)、二氢卟吩 e6单天冬氨酸酰胺 (Npe6)、磺酸铝酞菁（CASPc)、中介四（间羟基苯基）-二氢卟吩（mTIIPC)、锡乙基初紫红素（SnEt2)、 5-氨基乙酰丙酸 (ALA)等，用于肿瘤、皮肤病的光动力治疗。然而，这些用于肿瘤、皮肤病的光动力治疗的光敏剂并不十分适合用于治疗眼科疾病。

美国专利 5798349 以及相应的中国专利 97192957 公开了绿卟啉（green porphyrins)在光动力治疗 AMD及其他脉络膜新血管形成上的应用，然而其治疗效果仍然不令人满意。绿卟啉类的药物，由于水溶性低，一般要求与亲脂性载体联用。一方面由于体内清除时间延长，增加了系统光毒性；另一方面与脂质体载体的联用，药物不能快速注射，无法在给药和治疗之间快速转换。

因此，本领域迫切需要开发新的治疗剂和治疗方法，以便有效治疗因有害血

一 1一

确认本管形成而导致的各种眼科疾病。发明内容

本发明的目的就是提供一种新的治疗剂和治疗方法，它们可有效治疗因有害血管形成而导致的各种眼科疾病。在本发明的第一方面，提供了一种血卟啉单甲醚的用途，它被用于制备治疗眼科疾病的药物。

在另一优选例中，所述眼科疾病是因有害的新生血管形成而导致的疾病。

在另一优选例中，所述的新生血管形成发生在角膜、虹膜、视网膜或脉络膜。更佳地，所述的新生血管形成发生在脉络膜上。

在另一优选例中，所述的眼科疾病选自下组：黄斑变性、眼组织胞浆菌病综合症、近视、或炎症性疾病。

在另一优选例中，所述的血卟啉单甲醚为如下结构式的化合物

式中， R1为 1-羟基-乙基、 1-甲氧基-乙基； R2为 1-羟基-乙基、 1 -甲氧基-乙基。

在另一优选例中，所述药物的给药剂量为 0. l-100mg/kg体重，按血卟啉单甲醚计算。

在另一优选例中，所述的治疗是光动力治疗。

在另一优选例中，所述光动力治疗条件是照射的光通量为 50- 200焦耳 /cm²，光照度为 50-800mW/ cm², 波长为 630 ± 20nm。

在本发明的第二方面，提供了血卟啉单甲醚的用途，它被用作光动力治疗眼科疾病的光敏剂。

在本发明的第三方面，提供了一种治疗眼部有害新生血管疾病的方法，包括以下步骤：给予需要治疗的患者有效治疗剂量的血卟啉单甲醚，使血卟啉单甲醚聚集在眼内的新生血管（neovasculature)区域，

用 630 ±20nm的激光照射该区域足够时间，使激光被血卟啉单甲醚吸收从而阻断该新生血管。本发明的有益效果：血卟啉单甲醚作为水溶性较好的药物，在给药方面更加便利，同时体内清除的时间短，系统光毒性小，快速清除还可以使大血管清除更快，有利于对新生血管进行选择性治疗。与其他的卟啉衍生物相比，血卟啉单甲醚在药效显著的同时，选择性更好，副作用更低。附图说明

图 1显示了血卟啉单甲醚的结构式。

图 2A和 2B显示了血卟啉单甲醚在鸡胚尿囊绒膜（CAM)模型上的效果。

图 3显示了鸡胚尿囊绒膜 (CAM)模型实验组、对照组一级血管、二级血管计数。图 4显示了脉络膜新生血管（CNV)模型荧光造影。

图 5显示了脉络膜新生血管（CNV)模型组织切片。

图 6A和 6B显示了血卟啉单甲醚在脉络膜新生血管（CNV)模型上的效果。其中图 6A为对照组组织切片，箭头所指为脉络膜新生血管。图 6B为实验组组织切片，箭头所指为脉络膜新生血管，血管内部已形成血栓。

附图 7A-E分别显示了血卟啉衍生物（HpD) 、 5-氨基酮戊酸（ALA) 、血卟啉二乙醚、血卟啉单丙醚、血卟啉单甲醚在 CAM模型上对正常血管的损伤。具体实施方式

本发明人经过深入而广泛的研究，筛选了大量化合物，意外发现化合物血卟啉单甲醚特别适合用于治疗眼科疾病。血卟啉单甲醚的最佳吸收波长 630nm，清除时间短，光敏感性 24小时可以消退，因此适合作为光动力疗法治疗眼科疾病的光敏剂。在此基础上完成了本发明。光活性化合物

适合于本发明的化合物是血卟啉单甲醚。许德余、陈文辉等在《中国激光医学杂志》（1993， 2： 3- 7)和申请号为 01131939的中国专利中公开了血卟啉单甲醚的理化性质、制备方法及其在治疗肿瘤中的应用；陈文辉、许德余等在《第二军医大学学报》（1990， 11： 118-122)发表了血卟琳单甲醚在荷瘤小鼠体内的分布：顾瑛、刘光凡等在《中国激光医学杂志》（2000， Vol9 , 1期）发表了血卟啉单甲醚在在动脉组织的吸收和分布特性、血管平滑肌对血啉甲醚的吸收特性，在《中国激光医学杂志》（2000, Vol9, 3期）发表了血卟啉单甲醚治疗鲜红斑痣的应用。在此全部公开作为参考。

具体地，适合于本发明的光活性化合物具有如下结构式：

其中 R1为 1-羟基-乙基、 1-甲氧基-乙基； R2为 1-羟基-乙基、 1-甲氧基-乙基。较佳地，当 R1为 1-羟基-乙基时， R2为 1-甲氧基-乙基，；当 R1为 1-甲氧基-乙基时， R2为 1-羟基-乙基。血卟啉单甲醚在 395-635nm范围有光吸收。

血卟啉单甲醚也可与其他的光活性化合物联合使用；但治疗的有效性依赖于光被光活性化合物吸收，因此，如果使用混合物，则以具有相似的最大吸收峰的化合物混合使用为佳。治疗机理

本发明涉及用光动力治疗眼科疾病。光动力学治疗方案导致有害的新血管形成 (特别是脉络膜的新血管形成）缩减，从而对相关的眼科疾病起到治疗作用，改善患者视力。

在本发明的方法中，给需要治疗的患者服用适合的光活性化合物，其量足以使患者眼内的光活性化合物达到有效浓度。服用后经过一段时间，使有效浓度的化合物聚集在眼内所需区域后，用被该光活性化合物吸收的光照射该区域。以血卟啉单甲醚作为光敏剂的光动力治疗，根据其吸收特性，可以 395- 635nm波长的光激发。光活性化合物被光激发，产生活性氧和自由基，引起病变区域细胞光化学损伤，封闭病变部位的新生血管，从而治疗因有害血管形成而导致的各种眼科疾病，最终改善患者的视力。给药和剂量光活性化合物可以各种途径给药，如口服、非肠道给药或直肠给药，或可将化合物直接放如入眼中。以非肠道给药为宜，如静脉内、肌肉内或皮下注射。以静脉注射为最好。

光活性化合物的剂量可以根据给药方式、制剂类型、是否偶联靶向配体而有很大的变化。一般认为，在光活性剂的制剂、给药方式和剂量水平之间有关联。通常，血卟啉单甲醚的典型剂量范围为 0. 1-lOOmg/kg, 较佳的剂量范围为 0. 5 - 50mg/kg，更佳的剂量范围为 1- 10mg/kg。本领域技术人员也可以通过实验确定合适的剂量。

在本发明中用于有效、选择性光动力学治疗的各种参数是相互关联的。因此，可以相对于其他参数（例如光动力学治疗中所使用的光通量、光照度、持续时间和剂量、给药与光照射之间的时间间隔等）而调整剂量。使用这些参数都应调整到能显著提高视力而不产生正常眼组织的明显损害为宜。本领域技术人员能够通过实验确定合适的参数。

换言之，当光活性化合物的剂量降低时，封闭脉络膜新生血管组织的光通量有增加的趋势；反之需要降低光通量，则需要增加光活性化合物的剂量或增加靶向性促进增加病变部位光活性化合物的富集程度。光治疗方法

光治疗参数有关的某些术语在不同的作者和出版物中有所不同。比如光通量，也称光剂量、光能量密度；光照度，也称功率强度、功率密度。这些术语是本领域的技术人员使用并理解的，在此加以说明。

在光活性化合物给药后，将眼的靶组织在被选择的药物吸收波长下进行照射。对于血卟啉单甲醚，所选的波长范围一般在 630 ±20nm左右，更佳地为在 630士 lOnm左右，该范围波长在机体组织内的穿透力比较好。

照射的结果导致光活性化合物处于激发状态，并与其他化合物相互作用，形成单线态氧（Singlet Oxygen)和其他自由基，引起血管上皮细胞结构破坏。单线态氧和其他自由基主要损伤细胞膜结构，包括细胞膜、线粒体膜、溶酶体膜和核膜。血管上皮细胞损伤引发后续的血小板凝聚、脱颗粒和血栓形成，造成血管的堵塞和封闭。

根据组织的类型、靶组织深度和其上流体或血液的量，照射的光通量可有很大变动。但较佳的为 50- 200焦耳 /cm²。

光照度一般变化于 50- 800raW/ cm²，以约 100- 600 mW/cm²为佳。然而，选择使用较高的光照度，可以缩短治疗时间而达到同样的效果。

光活性化合物给药后至光治疗之间的最适时间间隔也根据给药方式、给药形式和制剂类型而不同。光敏剂给药后的时间间隔从 1分钟到 2小时，较佳的为 5 - 30 分钟，更佳的为 10- 25分钟。可治疗的眼科疾病

本发明提供了一种光动力治疗眼科疾病的方法，包括给需要这种治疗的患者服用足以使受治疗患者眼中富集足够量光敏剂的光活性化合物制剂；允许足够的时间使有效量的光活性化合物富集于患者眼中；用适合光敏剂吸收的光照射眼睛。

因为在本发明的治疗方法中，利用血卟啉单甲醚，通过光动力疗法有效地减少或消除角膜、虹膜、视网膜或脉络膜±有害的新血管形成，因此本发明方法可用于治疗因有害血管形成而导致的各种眼科疾病。代表性眼科疾病包括 (但并不限于）：黄斑变性（与年龄相关的黄斑变性以及其他黄斑变性）、眼组织胞浆菌病综合症、近视和炎症性疾病。使用的模型

CAM模型：用来评价光动力疗法封闭血管的效果，见文献 Ribatt i D. et al.

New model for the study of angiogenesis and ant iangiogenesi s in the chick embryo chorioal lantoic membrane : the gelat ine sponge/CAM assay. J Vase Res. 1997 : 34 : 455- 463.；也用来评价评价光动力疗法损伤血管的副作用，见文献 Marie H. et al Photodynamic parameters in the chick chorioal lantoic membrane bioassay for photosensit izers admini stered intraperitoneal ly into the chick embryo ， Photochem. Photobiol . Sci， 2002， 1， 72卜 728。

小鼠 CNV模型：用于评价光动力疗法封闭脉络膜新生血管的体内效果。

大鼠 CNV模型：用于评价光动力疗法封闭脉络膜新生血管的体内效果。

家兔角膜新生血管模型：用于评价光动力疗法封闭角膜新生血管的体内效果。治疗的评价

光动力封闭和损伤血管的效果在 CAM模型上用新生血管数量和直径来体现，当实验分组较多，数据量大时，原始数据用统计学方法处理，釆用以下文献的评价标准： Marie H. et al Photodynamic parameters in the chick chorioallantoic membrane bioassay for photosensitizers administered intraperitoneally into the chick embryo ， Photochem. Photobiol. Sci， 2002, 1 ,721-728。

光动力治疗的效果在动物 CNV模型上可用组织学切片观察内皮细胞的损伤和脉络膜新生血管的封闭情况。典型的，新生血管的破坏表现为血管内皮细胞胞浆内出现空泡，细胞核皱缩异常，血管腔内可见血小板聚集和血凝块的形成。另一种方法是在治疗后特定的时间用血管造影技术观察新血管减少。

另一种方法是角膜 PDT评价。对角膜进行摄影，计算机数字图像扫描，釆用图像处理程序计算 PDT前后角膜新生血管的面积，面积减少体现 PDT封闭角膜新生血管的效果。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。实施例 1 : 血卟啉单甲醚和治疗剂的制备

A. 血卟啉单甲醚的制备

按 CN 01131939的中国专利申请中所述的方法，将 20克 3， 8-二（1-溴乙基) 次卟啉 IX氢溴酸盐与 3000毫升的甲醇 /水混合液搅拌反应 2小时，反应液以 l Omol/L的氢氧化钠调节 pH至 13，搅拌 4小时，再以冰乙酸调节反应液的 pH至 4-5，析出沉淀。布氏漏斗滤集析出的沉淀，水洗，干燥，得 19. 5克粗品。经硅胶柱层析分离纯化得 3. 9克血卟啉单甲醚（图 1)。

重复上述步骤，获得约 20克血卟啉单甲醚。

B.治疗剂的制备

称取 10克血卟啉单甲醚原料药，以适量 0. 2 mol/L氢氧化钠水溶液充分搅拌溶解，然后用 0. 2 _mol/L盐酸调节溶液 pH至 7-8，加入适量的甘露醇，再以注射用水定容至 400毫升；无菌过滤，分装成每瓶含 100毫克，置冷冻干燥机中冷冻干燥，加塞封口，贴标签。使用时以生理盐水复溶至所需浓度给药。实施例 2: CAM模型用于光动力治疗效果体内测定

CAM模型的建立釆用以下方法： 37 °C孵化箱，气室向上，每天转动 3〜4次，至孵蛋第 9天，消毒种蛋表面后在气室顶端打 1〜2讓小孔，在距胎头前 lcm、两条前卵黄静脉之间的卵壳投影部位标记 1. 0cm XL 5cm的长方形区域，磨切透卵壳，在卵壳膜上轻轻划破直径约 lram的小孔。滴加少许无菌纯净水分离小孔边缘的卵壳膜，将无菌的直径为 6mm的微孔滤膜载体放在 CAM的血管最少处。

然后在载体中央各加入 lOul浓度为 lmg/ml实施例 1制备的血卟啉单甲醚，对照组加入 lOul生理盐水。加药后 15分钟用金蒸汽激光进行照光，光斑直径 2000 μ ηι，功率密度 100 mW7cm²，照光时间 200 s，能量密度 20 J /cm²。加药后，用无菌透明胶封窗，标记后再放入 37. 8 °C的孵箱内孵育 3天。光处理 3天后，每蛋注入 1 : 1的甲醇、丙酮等量混合固定液 2. 5ml。室温下固定 20分钟，待 CAM上血管内的血液凝固后，揭去封窗的透明膜，剪除 CAM水平以上的蛋壳，以滤膜载体为中心把 CAM剪下，放入盛有少量水并铺有滤纸的平皿里展开，阴干，连同滤纸保存，如图 2A和 2B所示。

解剖显微镜下以相同放大倍数计数血管，以实验部位边缘（即微孔滤膜载体边缘） lmm范围内为一级血管，以实验部位边缘 5mm处为二级血管，凡属趋向性生长的血管，即以载体为中心发出，与滤膜半径的夹角小于 45度者均予计数；而穿行、绕行的血管则不算在内。一、二级血管分别观察计数。对照组一级、二级血管数分别为 34. 7和 45. 2，实验组分别为 21和 32. 5，实验组显著少于对照组。结果如图 3所示。实施例 3:不同光敏剂对正常血管的损伤作用

光敏剂

血卟啉衍生物（HpD ) (购自北京制药工业研究院），溶入 5 %葡萄糖溶液，终浓度为 20mg/mL。

5-氨基酮戊酸（ALA) (购自上海复旦张江生物医药股份有限公司）， 50mg/mL, 溶于水，调整 ΡΗ^ 6，试验前新配制，体内光动力反应中， 1%ALA药物剂量可转化为光敏物质原卟啉（见文献 B.W.Henderson, et fl/ Photosensization of murine tumor, vasculature,and skin by using 5 - aminol e vulinic acid-induced porphyrin,

P otochem. Photobiol. 62(1995)780-789 ) 。

血卟啉二乙醚、血卟啉单丙醚、血卟啉单甲醚（购自上海复旦张江生物医药股份有限公司），上述药物为冻干制剂，使用前溶于 0.9%生理盐水，分别配制成 20mg/mL的溶液备用。 CAM准备

种蛋消毒后转入恒温孵化箱中，温度 37Ό，湿度 60%下孵蛋至第三天，在气室顶端打 3mm直径小孔， 30uL光敏剂局部注入 CAM处（约 30mm²)，恒温孵化。 24h后，用 150uL磷酸盐缓冲液（PBS ) 清洗 CAM处 2次，进行激光照射。

PDT实施方案

630nm半导体激光仪，按照不同药物、剂以及不同的光动力参数分组，同时设给药不照光、照光不给药和空白对照组。

光剂量 5J/cm² 10J/cm²

开始照光时间 30min 90min 100mw/cm'

CAM损伤评价

激光照射后 1小时，通过 CCD照相机纪录，图像转入电脑放大，评价血管损伤的程度。试验结果

不同药物剂量及光剂量光动力对血管的最大损伤结果见附图 7A-E，分别表示光动力作用下，三个不同参数——光剂量、间隔时间、药物浓度对血管损伤的影响。采用逐步回归法统计学评价不同治疗参数下血管损伤情况及各参数对损伤的贡献如表 1所示。可见血卟啉单丙醚、血卟啉衍生物（HpD ) 对血管损伤最大，而血卟啉单甲醚对血管损伤最小；在血卟啉单甲醚光动力各参数中，光剂量对血管损伤的作用最显著。

实施例 4: CNV小鼠模型的建立.

CNV模型按以下方法建立：随机选取 20只成年雄性 C57BL-6J小鼠，体重均为 25g- 26g。腹腔内注射 0. 3%戊巴比妥钠 200 L麻醉小鼠， 2%托品卡胺和 10%新福林散瞳。经裂隙灯及角膜接触镜，将激光（波长 810nm、直径 75 μ m、照射时间 0. 1 s , 功率 140mW)导入小鼠眼里。在激光照射后 1周进行荧光素眼底血管造影 (fundus fluorescence angiography, FFA)，选取光凝点无荧光渗漏，光凝点呈乳白色（如图 4)的动物 9只，进行组织切片观察确证造膜情况或者进一步进行光动力治疗试验。

取上述动物 1只，用过量戊巴比妥钠处死，摘取眼球，分别在 2%戊二醛和 4% 多聚甲酸中固定，剖切眼球，通过解剖镜辨别激光点，将组织条块以 1%四氧化锇固定，乙醇梯度脱水，环氧乙烷置换，环氧树脂包埋，连续切片，甲苯胺蓝染色，光镜观察。 .

光镜下可见视网膜下形成巨大管腔的新生血管，色素上皮细胞也异常增殖（图 5)。表明成功建立了 CNV小鼠模型。实施例 5: 血卟啉单甲醚在 CNV小鼠模型上的效果

试验方法

按实施例 3制备的 CNV模型小鼠 4只，尾静脉注射剂量为 10mg/kg的血啉甲醚冻干制剂。注射后 15分钟用金蒸汽激光进行照光，光斑直径 2000 μ ηι，功率密度 100 mW/cm²，照光时间 200 s，能量密度 20 J /cm²。另取实施例 3制备的 CNV 模型小鼠 4只，尾静脉注射相同剂量的生理盐水，作为对照。结果判定

一周后，用过量戊巴比妥钠处死小鼠，摘取眼球，分别在 2%戊二醛和 4%多聚甲醛中固定，剖切眼球，通过解剖镜辨别激光点，将组织条块以 1%四氧化锇固定，乙醇梯度脱水，环氧乙垸置换，环氧树脂包埋，连续切片，甲苯胺蓝染色，光镜观察。结果：

对照组可见大量脉络膜新血管生成，色素上皮细胞开始包绕新生血管（如图

6A)。

实验组可见脉络膜毛细血管血栓形成,视网膜色素上皮层排列失去正常的连贯性,外节排列紊乱、空泡化，外颗粒层细胞固缩,视网膜内层尚正常 (如图 6B)。

实施例 6: 血卟啉单甲醚光动力治疗大鼠 CNV模型

大鼠 CNV模型的建立

雄性棕色挪威（BN) 大鼠，体重 180〜220g，实验前双眼前节和眼底检查均正常。腹腔注射 10%水合氯醛麻醉大鼠，用复方托品酰胺眼液扩瞳，放置角膜接触镜，釆用波长 647nm的氪激光围绕视乳头等距光凝 8个点。激光功率为 360mW，曝光时间 0.05s，光斑直径 50um。光凝时激光作用点产生浓白色光斑，同时产生气泡，表明 Bmch膜被击穿，有时可见视网膜内层或视网膜下少量出血。

光凝后每周行眼底检查、荧光素眼底血管造影（FFA) 和吲哚青绿血管造影 (ICGA) 检査。光凝后第 21天经荧光素眼底血管造影和组织病理学检查（取部分眼）确认 CNV形成。 FFA检查可见光凝斑有盘状荧光渗漏， ICGA检查证实荧光渗漏的光凝斑有 CNV充盈。

组织病理学检査如下：处死模型大鼠，摘除眼球， 2.5 %戊二醛固定，切取光凝部位的眼组织，经乙醇脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋后，连续切片， HE染色封片，光显微镜下观察。透射电镜标本经后固定、脱水、浸透和包埋、切片染色观察。病理检查可见在光凝区 8^1(：11'₈膜断裂，视网膜色素上皮层（RPE) 细胞向视网膜内层增殖。脉络膜有大量的新生血管长入。血卟啉单甲醚对大鼠 CNV的光动力治疗效果

取造摸成功的 CNV模型大鼠，分别尾静脉注射 5mg/kg、 10mg/kg, 20mg/kg 血卟啉单甲醚，用波长 630imi的半导体激光治疗仪对 CNV进行照射。同时设给药不照光、照光不给药和模型对照组。 PDT治疗前和治疗后 7天进行 FFA和 ICGA 检査。 PDT治疗 7天后处死动物，摘除眼球，进行组织病理学检查。

结果： PDT治疗 7天后， FFA和 ICGA检查显示血管造影图像有不同程度的变化。 CNV闭合在血管造影图像上的特征是光凝斑荧光渗漏消失。结果显示不同剂量的血卟啉单甲醚对大鼠的 CNV都有一定的闭合作用，剂量越高、光强度越高，对新生血管的闭合作用越强。给药到激光照射的间隔时间越长，闭合血管所需的药物剂量和光强度越高。然而，药物剂量、光强度超过一定限度会造成 CNV周围正常组织（脉络膜和视网膜的血管）的损伤。因此，根据 PDT对 CNV的闭合效果和对脉络膜和视网膜血管的损伤作用将治疗结果分为 3级： 0级，无血管闭合； 1级，仅闭合 CNV; 2级，闭合视网膜和脉络膜血管。在血管造影检查中 0级显示光凝斑仍有荧光渗漏； 1级显示光凝斑荧光渗漏消失，视网膜血管充盈； 2级显示视网膜血管充盈欠缺，视网膜内有染料聚集。 '

PDT参数的设置对 CNV治疗结果有不同的影响，这些参数包括血卟啉单甲醚给药剂量、给药到照光间隔时间、激光能量密度等。本试验对大鼠的 82个 CNV 模型在不同条件下进行了光动力治疗，结果见表 2。表 2.血卟啉单甲醚光动力治疗大鼠 CNV治疗效果

*治疗效果 0级：无血管闭合；

1级：选择性闭合 CNV和脉络膜血管;

2级：闭合脉络膜和视网膜血管。从表 2可以看出，当给药剂量为 10mg/kg、照光与给药时间间隔为 15分钟、能量密度为 150J7cm² (功率密度 600mW/cm²、照光时间 250秒）时血卟啉单甲醚光动力治疗大鼠 CNV的效果最好， 9个 CNV都得到了选择性闭合，而对 CNV周围的脉络膜血管和视网膜血管没有闭合作用。

组织学检查：在 PDT7天后，处死动物，摘除眼球，进行组织病理学检查。病理检查显示在注射剂量 10mg/kg后 15分钟进行照光，能量密度为 150J/cm² (功率密度 600mW/cm²、照光时间 250秒）的情况下，脉络膜的新生血管管腔闭合，管腔内充满细胞碎片。视网膜的毛细血管和大血管、脉络膜的大血管管腔开放且没有损伤。治疗效果为 2级的其他剂量组脉络膜和视网膜的血管均有不同程度的损伤。对照组可见大量新生血管。

本实施例表明血卟啉单甲醚可选择性地破坏脉络膜新生血管，从而治疗因此引发的眼部疾病，如年龄相关性黄斑变性。实施例 7: 血卟啉单甲醚光动力治疗兔角膜新生血管

兔角膜缝线法诱发角膜新生血管

选取体重 2〜3.5Kg的新西兰大白兔，冲洗结膜囊，地卡因（12.5mg/ml) 术前点眼 3次，开睑器开睑，采用三角针于上方角膜作缝线，缝线上端距角膜缘约 2.5mm, 缝线埋入角膜基质层的长度约 3mm。 3天后裂隙灯观察可见新生血管生长，至第 18天可见新生血管生长旺盛。 PDT

取诱发角膜新生血管成功的模型兔，于缝线手术后第 19天耳缘静脉注射血卟啉单甲醚 10mg/kg，注射后 20分钟用波长 514nm的氩离子激光器对角膜新生血管进行照射。激光功率密度为 650mW/cm²，能量密度分别为 50J/cm²、 75 J/cm²、 150 J/cm², 同时设只给药不照光、只照光不给药和模型对照组。疗效观察

在 PDT治疗前、治疗后 2天、 1周、 2周通过裂隙灯对角膜进行摄影，计算机数字图像扫描，采用 NIH Image图像处理程序计算 PDT前后角膜新生血管的面积。结果显示，激光能量密度为 50J/cm²和 75 J/cm²时，分别有 30%和 48 %的模型兔的角膜新生血管消退，但 3〜4天后，新生血管有复发。光密度为 150 J/cm²， 68 %的模型兔的新生血管消退，且 2周内无复发。只给药不照光、只照光不给药和模型对照组兔角膜新生血管面积没有变化。

组织病理学观察： PDT治疗 2天后，部分动物处死，摘除眼球， 4%多聚甲醛固定、石蜡包埋、切片、 HE染色，光显微镜下观察。光镜下显示角膜的新生血管内皮细胞层被破坏，角膜的上皮层、基质层及内皮层没有损伤，虹膜、腌状体及血管内皮没有损伤。对照组可见大量新生血管。

本实施例的结果表明血卟啉单甲醚可选择性地破坏角膜新生血管，从而治疗由此引发的眼部疾病。本发明的结果表明，血卟啉单甲醚可有效抑制有害血管如脉络膜新血管生成，从而可有效治疗因有害血管形成而导致的各种眼科疾病，如角膜、虹膜、视网膜或脉络膜上有害的新血管形成导致的眼病，特别是年龄相关性黄斑变性。在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1 . 血卟啉单甲醚的用途，其特征在于，用于制备治疗眼科疾病的药物。

2. 如权利要求 1所述的用途，其特征在于，所述眼科疾病是因有害的新生血管形成而导致的疾病。

3. 如权利要求 2所述的用途，其特征在于，所述的新生血管形成发生在角膜、虹膜、视网膜或脉络膜。

4. 如权利要求 3所述的用途，其特征在于，所述的新生血管形成发生在脉络膜上。

权

5. 如权利要求 1所述的用途，其特征在于，所述的眼科疾病选自下组：黄斑变性、眼组织胞浆菌病综合症、近视、或炎症性疾病。

6. 如权利要求 1所述的用途，其特征在于，所述的血卟啉单甲醚为如下结构式的化合物

求

式中， R1为 1-羟基-乙基、 1-甲氧基-乙基； R2为 1_羟基-乙基、 1-甲氧基-乙基。

7. 如权利要求 1所述的用途，其特征在于，所述药物的给药剂量为 0. 1- 100mg/kg体重，按血卟啉单甲醚计算。

8. 如权利要求 1所述的用途，其特征在于，所述的治疗是光动力治疗。

9. 如权利要求 8所述的用途，其特征在于，所述光动力治疗条件是照射的光通量为 50- 200焦耳 /cm²，光照度为 50- 800mW/ cm²，波长为 630 ± 20nm。

10. 血卟啉单甲醚的用途，其特征在于，用作光动力治疗眼科疾病的光敏剂。

11 . 一种治疗眼部有害新生血管疾病的方法，其特征在于，包括以下步骤- 给予需要治疗的患者有效治疗剂量的血卟啉单甲醚，使血卟啉单甲醚聚集在眼内的新生血管区域，

用 630 ± 20腿的激光照射该区域足够时间，使激光被血卟啉单甲醚吸收从而阻断该新生血管。