WO2005002616A1 - Pharmaceutical active ingredient to combat tumours containing loxoscelidae spider toxin - Google Patents

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Dirk Weickmann
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Abstract

The invention relates to a pharmaceutical active ingredient for treating tumours and to the production of said ingredient from the toxin of spiders of the Loxoscelidae family, genera Loxosceles Weickmanni 1 and Loxosceles Weickmanni 2.

Description

PHARMAZEUTISCHER WIRKSTOFF GEGEN TUMOREN ENTHALTEND LOXOSCELIDAE SPINNENGIFT PHARMACEUTICAL ACTIVE AGENT AGAINST TUMORS CONTAINING LOXOSCELIDAE SPIDER POISON
Für die zum Erhalt des Lebens dienende Aufnahme von Nahrungsmitteln ist jedes Lebewesen auf das Angebot aus dem erreichbaren Pflanzen- und Tierreich angewiesen. Doch hierbei ist nicht alles ohne Gefahr zum Verzehr geeignet. Viele Pflanzen und Tiere verwenden zum Schutz ihres eigenen Lebens und zum eigenen Nahrungserwerb, auf ihren speziellen Organismus und seine besonderen Bedürfnisse abgestimmte, sogenannte biogene, Gifte. Diese biogenen Gifte haben im Laufe langer Entwicklungszeiträume ihren Platz gefunden im Zusa rnenspiei der verschiedenen Arten von Leben.For the ingestion of food for the preservation of life, every living being is dependent on the offer from the accessible plant and animal kingdom. But not everything is safe to eat here. Many plants and animals use so-called biogenic poisons to protect their own life and for their own food, their specific organism and their special needs. In the course of long periods of development, these biogenic poisons have found their place in the coexistence of different types of life.
Deshalb erkennt auch heute noch jedes erwachsene Wildtier gefährliche Pflanzen und giftige Tiere seiner natürlichen Umgebung.That is why every adult wild animal still recognizes dangerous plants and poisonous animals in its natural environment.
Dabei können Pflanzen oder Tiere durch die Produktion von Giftstoffen primär giftig wirken oder erst durch die Aufnahme toxischer Substanzen aus der belebten oder unbelebten Umwelt sekundäre Toxizität erhalten.Plants or animals can have a primarily toxic effect through the production of toxins or can only acquire secondary toxicity by ingesting toxic substances from the living or inanimate environment.
Die Nutzung dieser biogenen Gifte begann in der Geschichte der Menschheit schon in der Urzeit als sie zur Erlegung von Beutetieren mit vergifteten Waffen diente. Zur gefahrlosen Anwendung dieser Gifte waren jedoch von Anfang an gewisse Grundkenntnisse über deren Behandlung und Wirksamkeit erforderlich. Die weiter durchgeführten Versuche, die Zusammensetzung des chemischen Aufbaus biogener Gifte zu entschlüsseln, führten später zur gezielten Suche bestimmter Wirkstoffe als eigentliche Verursacher beobachteter Wirkungen.The use of these biogenic poisons began in human history as long ago as they were used to kill prey with poisoned weapons. To use these poisons safely, however, certain basic knowledge of their treatment and effectiveness was required from the start. The further attempts to decode the composition of the chemical structure of biogenic poisons later led to the targeted search for certain active substances as the actual cause of the effects observed.
Insbesondere nach der von Paracelsus ( 1493 - 1541 ) erhobenen Forderung, die Wirkstoffe von Arzneipflanzen zu isolieren, die zur Entwicklung der latrochemie, also der Chemie hinsichtlich ihres ärztlichen Anwendungsbereichs, beitrug, dürften diese Bemühungen verstärkt haben. Vor allem die Kunst des Destillierens von Stoffen wurde in den Dienst der Forschung gestellt und lieferte eine Vielzahl ätherischer Öle und flüchtiger Stoffe. Aber für die Isolierung anderer Wirkstoffe oder gar für deren chemische Aufschlüsselung waren die damals bekannten Methoden unzureichend. Erst zu Beginn des 19. Jahrhunderts war die Entwicklung der technischen Fertigkeiten in der Chemie weit genug fortgeschritten, die Ära der Isolierung von reinen Wirkstoffen aus biologischem Material einzuleiten. Zunächst nutzte man, zur Abtrennung der gesuchten Wirkstoffe von den Begleitstoffen, die Unterschiede in der Löslichkeit der untersuchten Substanzen in verschiedenen Lösungsmitteln. Beobachtet wurden hierbei, zum Beispiel mit Fällungsmitten, die Unterschiede im Verteilungsverhaiten zwischen zwei nicht mischbaren flüssigen Phasen, in der Flüchtigkeit und in der chemischen Reaktivität,In particular, after the demand made by Paracelsus (1493 - 1541) to isolate the active substances from medicinal plants, which contributed to the development of latrochemistry, that is, chemistry with regard to its medical field of application, these efforts should have intensified. Above all, the art of distilling fabrics has been put to the service of research and has provided a variety of essential oils and volatiles. But the methods known at that time were insufficient for the isolation of other active substances or even for their chemical breakdown. It was not until the beginning of the 19th century that the development of technical skills in chemistry had advanced far enough to usher in the era of isolating pure active substances from biological material. First, the differences in the solubility of the investigated substances in different solvents were used to separate the active substances from the accompanying substances. The differences in the distribution behavior between two immiscible liquid phases, in the volatility and in the chemical reactivity were observed, for example with precipitation agents.
Einen gewaltigen Aufschwung in der Trenntechnik, dem Weg zur Ermittlung von Wirkstoffen zur Bekämpfung von Krankheiten, machte die Entwicklung chromatographischer Verfahren in der Mitte des 20. Jahrhunderts möglich. Ausgehend von der Verteilung zwischen einer mobilen und einer stationären flüssigen Phase, von der Adsorption, den Molekülsiebeffekten, dem Ionenaustausch, der Affinität ( insbesondere von Proteinen ) zu bestimmten chemischen Verbindungen ( z.B. Enzymsubstraten ) und der Beweglichkeit geladener Moleküle im elektrischen Feld, wurde eine Vielzahl neuer Trenntechniken entwickeltThe development of chromatographic processes in the middle of the 20th century made possible a huge boom in separation technology, the way to identify active substances for combating diseases. Based on the distribution between a mobile and a stationary liquid phase, on the adsorption, the molecular sieve effects, the ion exchange, the affinity (especially of proteins) for certain chemical compounds (e.g. enzyme substrates) and the mobility of charged molecules in the electric field, a large number became developed new separation techniques
Derzeit werden Tumore, als die gefährlichsten und gefürchtetsten Krankheiten unserer Zeit auf eine sehr radikale und wenig umweltschonende Weise bekämpft. Als einfache kennzeichnende Schlagworte können hier gelten: Stahl, Strahl und Chemotherapie.Tumors, the most dangerous and feared diseases of our time, are currently being combated in a very radical and less environmentally friendly way. The following can be used as simple, characteristic keywords: steel, radiation and chemotherapy.
Das bedeutet einmal, dass Tumore, falls einigermaßen erreichbar, im Prinzip mit dem Stahl eines Messers herausgeschnitten, durch eine breitgefächerte Bestrahlung verbrannt, oder über eine sogenannte Chemotherapie mit , auch gesunde Zellen angreifenden, aggressiven Zytostatika zerstört werden.On the one hand, this means that tumors, if reasonably attainable, are in principle cut out with the steel of a knife, burned by a wide range of radiation, or destroyed by so-called chemotherapy with aggressive cytostatics that also attack healthy cells.
Sowohl bei normalen Behandlungen mit dem Skalpell als auch mit ionisierenderBoth with normal treatments with the scalpel and with ionizing
Strahlung ist eine räumliche Begrenzung des Operationsgebiets nicht möglich. Es werden zwangsläufig auch gesunde Körperzellen vernichtet. Die unerwünschtenRadiation does not limit the area of operation. Healthy body cells are inevitably destroyed. The unwanted
Nebenwirkungen der Chemotherapie sind allgemein bekannt.Side effects of chemotherapy are well known.
Im Gegensatz hierzu wurde aber auch versucht eine Krebstherapie die ihren Namen verdient auf subtilere Weise zu ermöglichen. Zu diesem Zweck wurde auf den reichen Schatz der Natur zurückgegriffen. Es werden hierzu, unter anderen, viele aus giftigen Lebewesen isolierte, stark wirksame Stoffe in therapeutischen Dosen als Arzneistoffe genutztIn contrast, however, cancer therapy that deserves its name was also attempted in a more subtle way. For this purpose, the rich treasure of nature was used. For this purpose, among other things, many highly effective substances in therapeutic doses isolated from toxic organisms are used as medicinal substances
So ist aus der DE 199 61 141 A1 ein pharmazeutischer Wirkstoff bekannt, bei dem gefunden wurde, dass Bestandteile der Spinnengifte von Spinnen der Familie Sicaridae zur Behandlung von Tumorerkrankungen verwendet werden können. Es werden hierbei in der Hauptsache ein Peptidtoxin aus dem Gift dieser Spinnenart, eine weitere aus dem Gift gewonnene antagonistisch wirkende Substanz und / oder eine Kombination dieser Bestandteile medizinisch genutzt. Es kann dieser Wirkstoff zur Behandlung von Tumorerkrankungen sowie parallel bzw. unterstützend zu Tumoroperationen eingesetzt werden und Rest - Tumorgewebe zerstört werden. Bei der Therapie können genetisch veränderte Körperzellen ( Tumorzellen ) zerstört werden, da der betreffende Wirkstoff die veränderte Oberflächenstruktur solcher Zellen erkennt und komplikationsfrei abtötet.. Der Gesamtgiftgehalt dieser Spinnenart, sozusagen ein Cocktail verschiedener Substanzen, ist auf Grund seiner bereits in geringen Dosen letalen Wirkung, nicht pharmazeutisch einsetzbar.A pharmaceutical active ingredient is known from DE 199 61 141 A1, in which it has been found that components of the spider venom from spiders of the Sicaridae family can be used for the treatment of tumor diseases. Mainly, a peptide toxin from the poison of this type of spider, a further antagonistic substance obtained from the poison and / or a combination of these components are used medically. This active ingredient can be used for the treatment of tumor diseases and in parallel or in support of tumor operations and residual tumor tissue can be destroyed. In therapy, genetically modified body cells (tumor cells) can be destroyed, since the active ingredient in question recognizes the changed surface structure of such cells and kills them without complications. The total poison content of this type of spider, a cocktail of various substances, so to speak, is lethal due to its low doses, cannot be used pharmaceutically.
Dieser bekannte Wirkstoff wirkt jedoch in vivo in keiner Kombination bei Mamma - Ca, das heißt bei Tumoren im Bereich des Brustgewebes. Insbesondere ist keine Wirkung bei Mamma - Ca in Verbindung mit sogenannten P 53 - bzw. P26 - Defekten bekannt.However, this known active ingredient does not work in vivo in any combination with breast-Ca, that is to say with tumors in the area of the breast tissue. In particular, no effect on breast Ca in connection with so-called P 53 or P26 defects is known.
Es ist deshalb die Aufgabe des erfindungsgemäßen Wirkstoffes eine komplikationsfreie Abtötung von kanzerösen Körperzellen aus dem Bereich des Brustgewebes , insbesondere bei P53 - bzw. P26 - Defekten zu bewirken.It is therefore the task of the active ingredient according to the invention to cause complication-free killing of cancerous body cells from the area of the breast tissue, in particular in the case of P53 or P26 defects.
Diese Aufgabe wird von einem Wirkstoff gelöst der die Merkmale der nebengeordneten Ansprüche 1 bis 4 aufweist. Und nach dem verfahren gemäß Anspruch 17 hergestellt wird. Dies wird im wesentlichen erreicht durch einen pharmazeutischen Wirkstoff, enthaltend zumindest ein Peptidtoxin und / oder zumindest eine hierzu antagonistisch bzw. synergistisch wirkende Substanz in einer pharmazeutisch wirksamen Menge, wobei zumindest ein Peptidtoxin und / oder zumindest eine antagonistisc bzw. synergistisch wirkende Substanz aus dem Gift der Tiergattung Loxosceles stammenThis object is achieved by an active ingredient which has the features of the independent claims 1 to 4. And is produced according to the method of claim 17. This is essentially achieved by a pharmaceutical active ingredient containing at least one peptide toxin and / or at least one substance having an antagonistic or synergistic effect in a pharmaceutically effective amount, at least one peptide toxin and / or at least one antagonistic or synergistic substance from the poison the animal genus Loxosceles
Jedoch handelt es sich hierbei nicht um bekannte Arten, die schon einen allgemein bekannten Namen aufweisen , sondern um zwei Arten die vom Erfinder neu entdeckt wurden.However, these are not known species that already have a generally known name, but two species that were newly discovered by the inventor.
Die Wahl eines betreffenden Namens obliegt hierbei stets demjenigen der diese neue Art beschreibt.The choice of a name in question is always the responsibility of the person who describes this new type.
Da es sich eindeutig um Arten der Gattung Loxosceles handelt werden für die beiden neuen Arten die Namen Loxosceles Weickmanni 1 und Loxosceles Weickmanni 2 gewählt.Since these are clearly species of the genus Loxosceles, the names Loxosceles Weickmanni 1 and Loxosceles Weickmanni 2 are chosen for the two new species.
Dies hat den Vorteil, dass dadurch das von der Natur gegebene Zusammenspiei von Peptidtoxinen und dazu antagonistisch bzw. synergistisch wirkenden Substanzen eines einzigen Organismus ausgenutzt werden kann.This has the advantage that the combination of peptide toxins and the antagonistic or synergistic substances of a single organism given by nature can be used.
Ihr Auftreten wurde in Nordafrika, genauer in Marokko, Algerien, Lybien, Tunesien und Ägypten beobachtet .Durch das große Vorkommensgebiet gibt es viele verschiedene Giftzusammensetzungen entsprechend den verschiedenen örtlichen Gegebenheiten und Nahrungsangeboten.Their occurrence has been observed in North Africa, more precisely in Morocco, Algeria, Libya, Tunisia and Egypt. Due to the large occurrence area there are many different poison compositions according to the different local conditions and food offers.
Gemäß der vorliegenden Erfindung können das Peptidtoxin oder die hierzu antagonistisch bzw. synergistisch wirkende Substanz aber auch aus einem anderen Organismus stammen oder synthetisch oder gentechnisch hergestellt worden sein. Beispielsweise kann das Peptidtoxin das Schlangengift Captopril sein oder die antagonistisch wirkende Substanz kann eine Hyaiuronidase aus Kobragiften oder synergistisch wirkendes Loxosceles ( Weickmanni ) - Toxin sein.According to the present invention, however, the peptide toxin or the substance having an antagonistic or synergistic effect can also originate from another organism or have been produced synthetically or by genetic engineering. For example, the peptide toxin can be the snake venom captopril or the antagonistic substance can be a hyaiuronidase from cobra venom or a synergistic Loxosceles (Weickmanni) toxin.
Die antagonistisch bzw. synergistisch wirkende Substanz ist bevorzugt eine Phospholipase oder eine Hyaiuronidase oder eine Kombination beider Substanzen. Weiterhin ist bevorzugt, dass die antagonistisch bzw. synergistisch wirkende Substanz eine Mischung aus den, im Gift von Spinnen und anderen Arten, vorhandenen Phospholipasen und Hyaluronidasen und / oder Toxinen ist.The antagonistic or synergistic substance is preferably a phospholipase or a hyaiuronidase or a combination of both substances. It is further preferred that the antagonistic or synergistic substance is a mixture of the phospholipases and hyaluronidases and / or toxins present in the poison of spiders and other species.
Bevorzugt werden das Peptidtoxin und die hierzu antagonistisch und / oder synergistisch wirksame Substanz durch ein Fraktionierungsverfahren aus den Spinnen- giften erhalten, und es ist weiterhin bevorzugt, dass der pharmazeutische Wirkstoff ein Peptidtoxin und eine hierzu antagonistisch oder synergistisch wirkende Substanz enthält, die aus verschiedenen Fraktionen stammen. Dadurch kann der pharmazeutische Wirkstoff in seiner Wirkung vorteilhafterweise auf die zu behandelnde Tumorart und / oder Tumorgröße abgestimmt werden. Das Peptidtoxin und die hierzu antagonistisch und / oder synergistisch wirkende Substanz können durch an sich bekannte Fraktionierungsverfahren zur Auftrennungvon Proteinen aus dem Spinnengift - Rohgemisch ( Giftcocktail ) erhalten werden. Bevorzugt ist, dass das Peptidtoxin und die hierzu antagonistisch oder synergistisch wirkende Substanz durch Gelchromatographie, HPC, Affinitätschromatographie und / oder lonenaustauschchromatographie erhalte werden.The peptide toxin and the substance which is antagonistic and / or synergistically active are preferably obtained from the spider venom by a fractionation process, and it is further preferred that the pharmaceutical active substance contains a peptide toxin and a substance which has an antagonistic or synergistic effect and which consists of different fractions come. As a result, the effect of the pharmaceutical active ingredient can advantageously be tailored to the type and / or size of tumor to be treated. The peptide toxin and the substance having an antagonistic and / or synergistic effect on it can be obtained by known fractionation processes for separating proteins from the raw spider venom mixture (poison cocktail). It is preferred that the peptide toxin and the substance having an antagonistic or synergistic effect thereof are obtained by gel chromatography, HPC, affinity chromatography and / or ion exchange chromatography.
Bevorzugt ist außerdem, dass das Peptidtoxin in einer solchen Menge als pharmazeutischer Wirkstoff vorliegt, dass eine bezüglich Tumorzellen zerstörende Wirkung des Wirkstoffs erreicht wird.It is also preferred that the peptide toxin is present as an active pharmaceutical ingredient in such an amount that the active ingredient has a destructive effect on tumor cells.
Weiterhin werden die benötigten Mengenverhältnisse so gewählt, dass das Peptidtoxin keine oder nur eine geringe toxische Wirkung im zu behandelnden Patienten entfaltet. Selbstverständlich sind hierbei die Mengen der pharmazeutischen Wirkstoffe auch auf die Art des zu behandelnden Tumors und die physischen , gegebenenfalls auch psychischen, Gegebenheiten des jeweiligen Patienten abzustimmen. Die für eine solche Abstimmung benötigten Vorversuche sind vom Fachmann im Rahmen von Tierversuchen und / oder ethisch vertretbaren versuchen am Patienten aufgrund seines fachlichen Wissens und Könnens vorzunehmen.Furthermore, the required proportions are chosen so that the peptide toxin has no or only a slight toxic effect in the patient to be treated. Of course, the amounts of the active pharmaceutical ingredients must also be matched to the type of tumor to be treated and the physical, possibly also psychological, circumstances of the respective patient. The preliminary tests required for such coordination are to be carried out by the specialist in the context of animal experiments and / or ethically justifiable attempts on the patient on the basis of his specialist knowledge and ability.
Weiterhin bevorzugt ist ein pharmazeutischer Wirkstoff, bei dem die Menge an Peptidtoxin und hierzu antagonistisch oder synergistisch wirkender Substanz so ausgewählt ist, dass eine räumlich und zeitlich kontrollierte Ausbreitung sichergestellt ist. Der pharmazeutische Wirkstoff weist bevorzugt eine Menge an Peptidtoxin und antagonistisch oder synergistisch wirkender Substanz auf, die in Abhängigkeit von dem zu behandelnden Tumor gewählt wird.Also preferred is a pharmaceutical active ingredient in which the amount of peptide toxin and the substance having an antagonistic or synergistic effect is selected such that a spatially and temporally controlled spread is ensured. The pharmaceutical active ingredient preferably has an amount of peptide toxin and an antagonistic or synergistic substance, which is selected depending on the tumor to be treated.
Es ist weiter bevorzugt, dass der erfindungsgemäße pharmazeutische Wirkstoff übliche Träger - und Hilfsstoffe enthält, wie Antibiotika, Antimykotika, Antituberkulotika, Mittel gegen Parasiten, Zytostatika, Aminosäuren, die Wundheilung begünstigende Enzyme und / oder Mitosehemmstoffe. Bevorzugt sind hierbei Penicillin/Streptomycin, Polymyxin / Gentalmycin ( 5% ), Mitopodozid, Vinca rosea - Alkaloide, Bromelaina oder Bromelains.It is further preferred that the pharmaceutical active ingredient according to the invention contains conventional carriers and auxiliary substances, such as antibiotics, antifungals, antituberculotics, agents against parasites, cytostatics, amino acids, enzymes which promote wound healing and / or mitotic inhibitors. Preferred are penicillin / streptomycin, polymyxin / genetic mycin (5%), mitopodocide, vinca rosea alkaloids, bromelaina or bromelains.
In dem erfindungsgemäßen pharmazeutischen Wirkstoff werden das Peptidtoxin und die antagonistisch oder synergistisch wirkende Substanz in Kombination miteinander eingesetzt. Es ist aber auch möglich, die Einzelsubstanzen in pharmazeutischen Wirkstoffen zu benutzen und sich hierbei die speziellen Wirkungen der Substanzen für eine therapeutische Anwendung nutzbar zu machen.The peptide toxin and the antagonistic or synergistic substance are used in combination with one another in the pharmaceutical active ingredient according to the invention. However, it is also possible to use the individual substances in active pharmaceutical ingredients and to make the special effects of the substances available for therapeutic use.
Es ist auch möglich die beschriebenen Wirkstoffe chemisch -synthetisch oder durch gentechnologische Methoden in rekombinierter Form herzustellen. Wie bei chemischen Substanzen üblich, umfasst die vorliegende Erfindung auch Derivate und Salze der erfindungsgemäß bereitgestellten Substanzen. Beispielsweise kann das Peptidtoxin ein oder mehrere Additionen, Substitutionen und / oder Deletionen von Aminosäuren umfassen, wobei natürlich sichergestellt sein muss, dass die erfindungsgemäße medizinische Wirkung erhalten bleibt. Die Gewinnung des beschriebenen Wirkstoffs erfolgt durch in der chemischen Verfahrenstechnik übliche Methoden. Hierzu gehören insbesondere Fraktionierungsverfahren; es sind aber auch andere Verfahren einsetzbar, beispielsweise immunologische Verfahren, um die gewünschten Substanzen aus dem Gesamtgift - Cocktail herauszuholenIt is also possible to produce the described active ingredients chemically and synthetically or by recombinant means using genetic engineering methods. As is usual with chemical substances, the present invention also includes derivatives and salts of the substances provided according to the invention. For example, the peptide toxin can comprise one or more additions, substitutions and / or deletions of amino acids, it naturally having to be ensured that the medicinal effect according to the invention is retained. The active ingredient described is obtained by methods customary in chemical process engineering. This includes in particular fractionation processes; however, other methods can also be used, for example immunological methods, in order to get the desired substances out of the total poison cocktail
Ein bevorzugtes Verfahren zur Herstellung eines erfindungsgemäßen Wirkstoffes, enthaltend zumindest ein Peptidtoxin und / oder zumindest eine hierzu antagonistisch oder synergistisch wirkende Substanz, wobei zumindest ein Peptidtoxin und / oder zumindest eine antagonistisch oder synergistisch wirkende Substanz aus dem Gift von Tieren der oben unter a) bis f ) genannten Familien und Gattungen stammen, weist folgende Schritte auf: Gewinnen eines Gift - Rohgemischs durch an sich bekannte Verfahren sowie Fraktionierung der Mischung, um das Peptidtoxin und die hierzu antagonistisch oder synergistisch wirkende Substanz in möglichst voneinander getrennten Fraktionen zu erhalten; wahlweiseA preferred process for the preparation of an active ingredient according to the invention, comprising at least one peptide toxin and / or at least one substance having an antagonistic or synergistic effect, at least one peptide toxin and / or at least one antagonistic or synergistic substance from the poison of animals of the above under a) to f) mentioned families and genera, has the following steps: Obtaining a raw poison mixture by methods known per se and fractionating the mixture in order to obtain the peptide toxin and the substance having an antagonistic or synergistic effect in fractions which are as separate as possible from one another; optionally
Kombination verschiedener Fraktionen miteinander oder mit aus anderen Organismen stammenden Peptidtoxinen oder antagonistisch oder synergistisch wirkenden Substanzen, um einen pharmazeutisch wirksamen Wirkstoff zu erhalten. Die betreffenden Giftarten enthalten verschiedene Peptidtoxine und verschiedene hierzu antagonistisch oder synergistisch wirkende Substanzen und andere, ebenfalls medizinisch - therapeutisch relevante Wirkstoffe. Alle diese Substanzen können in einem bestimmten, vom Fachmann zu bestimmenden, Verhältnis in einem medizinischen Wirkstoff therapeutisch eingesetzt werden.Combination of different fractions with one another or with peptide toxins originating from other organisms or with antagonistic or synergistic substances in order to obtain a pharmaceutically active substance. The types of poison in question contain various peptide toxins and various substances that have an antagonistic or synergistic effect and other medicinally and therapeutically relevant active ingredients. All of these substances can be used therapeutically in a specific ratio, to be determined by the person skilled in the art, in a medical active substance.
Es wird darauf hingewiesen, dass das Fraktionierverfahren lediglich beispielhaft eine Möglichkeit zur Gewinnung der Peptidtoxine und der hierzu antagonistisch oder synergistisch wirkenden Substanzen aufzeigt. Weitere Ausgestaltungen sind möglich.It is pointed out that the fractionation process shows, by way of example only, a possibility of obtaining the peptide toxins and the substances having an antagonistic or synergistic effect. Further configurations are possible.
Dabei ist bevorzugt, dass das verwendete Gift - Rohgemisch aus weiblichen Tieren der genannten Gattung gewonnen wird. Dies ist vorteilhaft, da weibliche Exemplare der verwendeten Arten mehr Gift produzieren als männliche Exemplare. Es ist weiterhin bevorzugt, dass Gewinnung des Gift - Rohgemisches durch manuelles Melken erfolgt. Dies hat den Vorteil einer besonders schonenden Gewinnung.It is preferred that the raw poison mixture used is obtained from female animals of the type mentioned. This is advantageous because female specimens of the species used produce more poison than male specimens. It is further preferred that the raw poison mixture is obtained by manual milking. This has the advantage of particularly gentle extraction.
Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren ist überdies bevorzugt, dass das Gift - Rohgemisch vor der Fraktionierung homogenisiert wird, und es ist weiterhin bevorzugt, dass die Fraktionen vor der Weiterverarbeitung tiefgekühlt und weiter bevorzugt lyophilisiert werden.In the method according to the invention, it is also preferred that the raw poison mixture is homogenized before the fractionation, and it is further preferred that the fractions are deep-frozen before further processing and more preferably lyophilized.
Es gibt derzeit weltweit ca. 35000 Arten von Webspinnen und etwa 1500 Arten von Skorpionen Mit Ausnahme von etwa 300 Arten der Webspinnen sind dies alles aktiv giftige Tiere, die ihr Gift zum Beutefange benötigen. Da Spinnen nur eine sehr kleine Mundöffnung haben, entwickelten sie Enzyme und Gifte, die ihre Beutetiere außerhalb des Körpers verdauen, so dass die Spinnen verflüssigte Nahrung einsaugen. Etwa 50 Spinnenarten und ebenso viele Skorpionarten können durch ihre Gifte auch dem Menschen gefährlich werden. Trotzdem sind vor allem die Gifte dieser Arten nur oberflächlich oder gar nicht erforscht. Die Hauptbestandteile von Spinnen- Skorpiongiften sind:There are currently around 35,000 species of weaving spiders and around 1,500 species of scorpions worldwide. With the exception of around 300 species of weaving spiders, these are all actively poisonous animals that need their poison to catch prey. Because spiders are only a very small one Mouth, they developed enzymes and poisons that digest their prey outside the body, causing the spiders to suck in liquefied food. Around 50 species of spiders and just as many species of scorpions can also be dangerous to humans due to their toxins. Nevertheless, the poisons of these species have been researched only superficially or not at all. The main components of spider scorpion venom are:
Verdauungsenzyme Biogene Amine Organische Säuren Peptide PeptidtoxineDigestive enzymes Biogenic amines Organic acids Peptides Peptide toxins
Unter den Peptidtoxinen finden sich folgende Toxingruppen: Herzgifte Nervengifte Blutgifte Zellgifte gewebezerstörende GifteThe following toxin groups are found among the peptide toxins: Cardiac toxins Nerve toxins Blood toxins Cell toxins Tissue-destroying toxins
Ursprünglich findet durch den Gesamtgiftcocktail von allen aktiv giftigen Tieren durch das Zusammenwirken verschiedener Substanzen generell auch eine Vorverdauung und damit eine gezielte Ursprungszellenveränderung tierischer Zellen statt.Originally, the total poison cocktail of all actively poisonous animals, through the interaction of various substances, generally also results in a pre-digestion and thus a targeted change in the origin of animal cells.
Bei den in dieser Erfindung verwendeten Spinnen- , Skorpion-, Tausendfüssler- und Skolpenderarten finden sich im Giftcocktail Substanzen, die zytotoxisch, nekrotisch und / oder apoptotisch wirken ( verdauende Wirkung der Gifte ). Daneben finden sich auf die lysierend wirkenden Substanzen noch antagonistisch bzw. synergistisch wirkende Stoppsubstanzen.In the spider, scorpion, millipede and skolpender species used in this invention, substances are found in the poison cocktail that have a cytotoxic, necrotic and / or apoptotic effect (digestive effect of the poisons). In addition, there are antagonistic or synergistic stop substances on the lysing substances.
Da die Spinne noch verwertbare Nahrung ( ganze Proteinstrukturen und intakte Aminosäuren ) aufnehmen muss, hat sie im Laufe ihrer 350 Millionen Jahre dauernden Evolution ihren hochwirksamen Giftcocktail entwickelt. Bei diesem Giftcocktail wird durch das Zusammenspiel von Peptidtoxinen mit dagegen antagonistisch oder synergistisch wirkenden Substanzen die räumliche Ausbreitung des Peptidtoxins , von Zeit- und Konzentrationsfaktoren abhängig, durch spezifisch wirkende Enzyme kontrolliert begrenzt.Since the spider still has to take in usable food (whole protein structures and intact amino acids), it has developed its highly effective poison cocktail in the course of its 350 million year evolution. This poison cocktail is counteracted by the interplay of peptide toxins antagonistic or synergistic substances, the spatial spread of the peptide toxin, depending on time and concentration factors, is limited by specifically acting enzymes.
Überraschenderweise können jedoch Kombinationen von im Gift enthaltenen Peptidtoxinen und gegengerichteten ( hierzu antagonistisch bzw. synergistisch wirkenden ) Enzymen bzw. Peptidtoxinen in entsprechenden Konzentrationen und Mengenverhältnissen zur Behandlung von Tumorerkrankungen sowie parallel bzw. unterstützend zu Tumoroperationen eingesetzt werden und ( Rest - ) Tumorgewebe zerstört werden. Hierbei stammt zumindest ein Peptidtoxin oder zumindest eine hierzu antagonistisch oder synergistisch wirkende Substanz aus dem Gift von Tieren der genannten Gattung.Surprisingly, however, combinations of peptide toxins contained in the poison and counter-directed (to this end antagonistic or synergistic) enzymes or peptide toxins in appropriate concentrations and proportions can be used for the treatment of tumor diseases and in parallel or supportive to tumor surgery and (residual) tumor tissue can be destroyed. Here, at least one peptide toxin or at least one substance acting antagonistically or synergistically comes from the poison of animals of the species mentioned.
Beispielsweise kann erfindungsgemäß die Zerstörung von bei der Operation nicht erfasstem Tumorgewebe sowie die Verhinderung der Lokaltumor - Metastasenbildung im Organismus erreicht werden. Bei der Therapie können zum einen genetisch defekte Körperzellen ( Tumorzellen ) zerstört werden, da die Oberflächenproteinstruktur solcher Zellen verändert ist und die erfindungsgemäß eingesetzten Phospholipasen dies in ihrer Oberflächenstruktur veränderten Tumorzellen erkennen bzw. selektiv binden und lysieren können. Zum anderen kann Gewebe in gewünschten, örtlich abgegrenzten Bereichen - hier tumorzellprädestinierte Gewebebereiche - komplikationsfrei abgetötet werden. Die Funktionsweise basiert auf nativen, sich gegenseitig beeinflussenden Wirkweisen der Peptidtoxine und der im Giftcocktail vorhandenen hierzu antagonistisch bzw. synergistisch wirkenden Substanzen wie folgt:For example, according to the invention, the destruction of tumor tissue not recorded during the operation and the prevention of local tumor metastasis in the organism can be achieved. On the one hand, genetically defective body cells (tumor cells) can be destroyed in the therapy, since the surface protein structure of such cells is changed and the phospholipases used according to the invention can recognize or selectively bind and lyse tumor cells that have changed in their surface structure. On the other hand, tissue in desired, locally delimited areas - here tumor tissue-predestined tissue areas - can be killed without complications. The mode of operation is based on native, mutually influencing modes of action of the peptide toxins and the antagonistic or synergistic substances present in the poison cocktail as follows:
Phospholipasen Hyaluronidasen sind auch als sogenannte Durchdringungsenzyme beschrieben. Dabei verhält es sich so, dass die genannten Enzyme über verdauende Funktionen Gewebe für die Peptidtoxine durchlässiger machen.. Daneben können sie genetisch defekte Körperzellen ( Tumorzellen ) erkennen und diese selbst oder durch Infiltration von nekrotisch bzw. zytotoxisch wirkenden Peptiden, die an sie gekoppelt sind,, abtöten. In dieser Erfindung sind unter antagonistisch oder synergistisch wirkenden Substanzen beispielsweise Phospholipasen und Hyaluronidasen bzw. Peptidtoxinen aus Tieren der genannten Gattungen zu verstehen, wobei nicht ausgeschlossen ist, dass weitere antagonistisch bzw. synergistisch wirkende Substanzen in dem Spinnengift vorhanden sind, die erfindungsgemäß ebenfalls einsetzbar sind.Phospholipases hyaluronidases are also described as so-called penetrating enzymes. It is the case that the enzymes mentioned make tissue more permeable to the peptide toxins through digestive functions. In addition, they can recognize genetically defective body cells (tumor cells) and these themselves or by infiltration of necrotic or cytotoxic peptides that are coupled to them ,, kill. In this invention, antagonistic or synergistic substances include, for example, phospholipases and hyaluronidases or to understand peptide toxins from animals of the above-mentioned genera, although it is not excluded that other antagonistic or synergistic substances are present in the spider venom, which can also be used according to the invention.
Humane Phospholipasen, vor allem Typ A - Phospholipasen wären zwar in einer Eigenblutpräparation als Therapie von Vorläuferkrebszellen ( genetisch defekte, aber teilungsfähige Zellen ) ebenfalls denkbar. Allerdings ist der Immunstatus so schlecht , dass die Menge dieser Phospholipasen nicht äquivalent zur Menge der genetisch defekten Zellen ist ( Bisswanger H. ( 1994 ): Enzymkinetik. VCH Weinheim; Zollner H. ( 1993 ): Handbook of Enzym Inhibitors, Part A. 271 . 272 und 383 - 388, VCH Weinheim; Zollner H. ( 1993 ): Handbook of Enzyme Inhibitors, Part B, VCH Weinheim ).Human phospholipases, especially type A phospholipases, would also be conceivable in an autologous blood preparation as a therapy for precursor cancer cells (genetically defective but divisible cells). However, the immune status is so poor that the amount of these phospholipases is not equivalent to the amount of genetically defective cells (Bisswanger H. (1994): Enzymkinetik. VCH Weinheim; Zollner H. (1993): Handbook of Enzyme Inhibitors, Part A. 271 272 and 383-388, VCH Weinheim; Zollner H. (1993): Handbook of Enzyme Inhibitors, Part B, VCH Weinheim).
Die Peptidtoxine mit einem Molekulargewicht von 5 - 360 kDa besitzen eine gewebezerstörende Wirkung. Auf Grund ihres Molekulargewichts und ihrer räumlichen Struktur haben sie in Geweben nur eine Ausbreitungstendenz von etwa 100 Zellschichten pro Pikogramm. Substanz. Gegebenfalls können weitere im Spinnen-, Skorpion-, Tausendfüssler- und Skolopender - Rohgemisch enthaltene Substanzen die genannten Wirkungen unterstützen.The peptide toxins with a molecular weight of 5 - 360 kDa have a tissue-destroying effect. Due to their molecular weight and their spatial structure, they only have a tendency to spread in tissues of around 100 cell layers per picogram. Substance. If necessary, other substances contained in the raw mixture of spiders, scorpions, millipedes and scolopenders can support the effects mentioned.
Um ungewollte Zellzerstörungen zu verhindern, kann erfindungsgemäß in Abhängigkeit von Art und Größe des zu behandelnden Tumors ein Abgleich bezüglich absoluter und relativer Mengen der Bestandteile des Peptidtoxin / Enzymgemisches in vitro an lebenden menschlichen Zellen ( gesund und tumorös ) des zu therapierenden Gewebetyps erfolgen. Hierbei kommt der Beachtung der Ausbreitungstendenz die größte Bedeutung zu. Diese kann im Vergleich der Tumorgewebsfestigkeit zu dem , den Tumor umgebenden, Gewebe in Vorversuchen abgeklärt werden.In order to prevent unwanted cell destruction, according to the invention, depending on the type and size of the tumor to be treated, a comparison can be made with respect to absolute and relative amounts of the constituents of the peptide toxin / enzyme mixture in vitro on living human cells (healthy and tumorous) of the tissue type to be treated. Attention to the tendency to spread is of the greatest importance. This can be clarified in preliminary tests in comparison of the tumor tissue strength to the tissue surrounding the tumor.
Die Wirkweise von Gesamt- Tiergiftcocktails bzw. einzelner daraus säulenchromatographisch abgetrennter und über das Molekulargewicht charakterisierter Substanzen kann durch Austestung dieser in entsprechenden gesunden und tumorösen humanen Zeil- Linien erfolgen. Gemäß der vorliegenden Erfindung stammen die Peptidtoxine bevorzugt aus dem gleichen Organismus wie die hierzu antagonistisch oder synergistisch wirkenden Substanzen und / oder wahlweise enthaltenen weiteren Wirksubstanzen. Auf diese Weise kann das effektive, von der Natur entwickelte Zusammenspiel oder Gegenspiel dieser Substanzen ausgenutzt werden.The mode of action of whole animal poison cocktails or individual substances separated therefrom by column chromatography and characterized by the molecular weight can take place by testing them in corresponding healthy and tumorous human cell lines. According to the present invention, the peptide toxins preferably originate from the same organism as the substances which have an antagonistic or synergistic effect thereon and / or further active substances optionally present. In this way, the effective interaction or counterplay of these substances developed by nature can be exploited.
Die Herstellung der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Wirkstoffe kann so erfolgen , dass zunächst ein Gift - Rohgemisch durch an sich bekannte Verfahren gewonnen wird und eine Fraktionierung des Gift- Rohgemisches durch ebenfalls an sich bekannte Fraktionierungsverfahren zur Auftrennung von Proteinen vorgenommen wird.. Dies dient dem Zweck die Peptidtoxine und die hierzu antagonistisch oder synergistisch wirkenden Substanzen in möglichst voneinander getrennter Form beziehungsweise in getrennten Fraktionen zu erhalten. Anschließend können zur Herstellung eines pharmazeutischen Wirkstoffs verschiedene Fraktionen kombiniert werden oder einzelne Fraktionen können mit aus anderen Organismen stammenden Peptidtoxinen oder hierzu antagonistisch oder synergistisch wirkenden Substanzen kombiniert werden. Zur Herstellung eines pharmazeutischen Wirkstoffs können auch einzelne Fraktionen verwendet werden. Bevorzugt können als Peptidtoxine auch Schlangengifte, beispielsweise das Grubenottern - Schlangengift Captopril und als antagonistisch wirkende Substanzen Hyaluronidasen aus Schlangengiften, beispielsweise aus Kobragiften, eingesetzt werden. Dies kann kombiniert werden mit einer oder mehreren Fraktionen aus Substanzen die gewonnen wurden aus Spinnen - Tieren der Gattung Loxosceles.The pharmaceutical active substances according to the invention can be produced by first obtaining a crude poison mixture by methods known per se and by fractioning the crude poison mixture by likewise known fractionation methods for the separation of proteins. This serves the purpose of the peptide toxins and to obtain the antagonistic or synergistic substances for this purpose in as separate a form as possible or in separate fractions. Subsequently, different fractions can be combined to produce a pharmaceutical active ingredient, or individual fractions can be combined with peptide toxins originating from other organisms or substances having an antagonistic or synergistic effect. Individual fractions can also be used to produce an active pharmaceutical ingredient. Snake venoms, for example the pit viper snake venom captopril, and hyaluronidases from snake venoms, for example from cobra venoms, as antagonistic substances, can preferably also be used as peptide toxins. This can be combined with one or more fractions from substances obtained from spider animals of the genus Loxosceles.
Es ist erfindungsgemäß auch möglich, zur Herstellung pharmazeutischer Wirkstoffe, die Fraktionen auch zusätzlich mit weiteren geeigneten Wirkstoffen und / oder mit in der Pharmazie üblichen Träger- und Hilfsstoffen zu kombinieren.It is also possible according to the invention to combine the fractions with other suitable active ingredients and / or with carriers and auxiliaries customary in pharmacy for the production of pharmaceutical active ingredients.
Zur Herstellung der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Wirkstoffe können aus dem Giftcocktail, der über manuelles Melken der oben genannten Spinnenarten gewonnen werden kann, z.B. über säulenchromatographische Aufreinigung spezifische Giftkomponenten ( nekrotisch und zytotoxisch wirkende Peptidtoxine ) sowie natürliche hierzu antagonistisch wirkende Substanzen ( Stoppsubstanzen vom Phospholipase - und Hyaiuronidase Typ selektiert werden. Die Analytik zur Differenzierung der in den Fraktionen enthaltenen Komponenten kann über HPLC - MS - MS erfolgen. Dabei konnte nachgewiesen werden, dass es sich bei den hochmolekularen Substanzen auf Grund ihres MS - MS - analysierten Grundgerüsts um Enzyme vom Phospholipase - und Hyaiuronidase - Typ handelt. Neben diesen Enzymen konnten noch Polypeptide gefunden werden, die auf Grund ihrer Herkunft, ihrer Wirkungsweise und ihrer über die MS - MS - Analyse dargestellten, toxischen Gruppen vom NX~,NHX-,NOX- und SX - Typ, als Peptidtoxine zu klassifizieren sind.To produce the active pharmaceutical ingredients according to the invention, specific poison components (necrotic and cytotoxic peptide toxins) and natural substances that have an antagonistic effect (stop substances of the phospholipase and hyaiuronidase type) can be obtained from the poison cocktail, which can be obtained by manual milking of the abovementioned types of spiders, for example by column chromatographic purification be selected. The analysis for differentiating the components contained in the fractions can be carried out via HPLC-MS-MS. It was demonstrated that the high molecular weight substances are phospholipase and hyaiuronidase type enzymes due to their MS - MS analyzed framework. In addition to these enzymes, it was also possible to find polypeptides which, on the basis of their origin, their mode of action and their toxic groups of the NX ~, NHX, NOX and SX type, which are represented by the MS-MS analysis, can be classified as peptide toxins.
Die erfindungsgemäß für den pharmazeutischen Wirkstoff vewendeten Substanzen können auf natürlichem Weg von Spinnen - Tieren der Gattung Loxosceles gewonnen werden. Diese Gifte wurden ursprünglich zum Beutefang und zur Vorverdauung tierischen Proteins entwickelt. Diese natürliche Wirkweise kann durch eine funktionserhaltende, schonende Gewinnung des Giftgrundstoffes ( z.B. durch manuelles Melken ) erhalten werden.The substances used according to the invention for the pharmaceutical active ingredient can be obtained naturally from spider animals of the genus Loxosceles. These poisons were originally developed to catch prey and to pre-digest animal protein. This natural mode of action can be obtained by a function-preserving, gentle extraction of the toxic base (e.g. by manual milking).
Im Gegensatz zu herkömmlichen Melkweisen von Arthropoden mittels eines elektrischen Verfahrens ( Weickmann D. ( 1991 ): Haltung und Giftigkeit von Sicariidae. Arachnologischer Anzeiger 16, S. 12 - 13; Weickmann D., Burda R. ( 1994 ): Electrophoresis of scorpion venoms. Electrophoresis Forum 1994, Abstracts, Technische Universität München, Okt. 24 - 26) , bei dem den Tieren das Gift über einen elektrischen Impuls, der bei den Tieren die Kontraktion der Giftdrüsen auslöst, entzogen wird ( die Tiere sind hierbei bevorzugt unterkühlt ), wird gemäß der vorliegenden Erfindung der Giftcocktail über ein manuelles Verfahren, bei dem die Tiere über die Ausnutzung ihres natürlichen Abwehrverhaltens zur Abgabe ihres Giftes stimuliert werden, erhalten.In contrast to conventional milking methods of arthropods by means of an electrical process (Weickmann D. (1991): keeping and toxicity of Sicariidae. Arachnologische Anzeiger 16, pp. 12-13; Weickmann D., Burda R. (1994): Electrophoresis of scorpion venoms Electrophoresis Forum 1994, Abstracts, Technical University of Munich, Oct. 24-26), in which the poison is extracted from the animals via an electrical impulse that triggers the contraction of the poisonous glands in the animals (the animals are preferably undercooled), According to the present invention, the poison cocktail is obtained via a manual process in which the animals are stimulated to release their poison by using their natural defense behavior.
Gemäß einer Ausführungsform der Erfindung ist eine manuelle Melkweise der Spinnen vorgesehen. Dadurch werden echte, unverfälschte native Gifte erhalten, während im Gegensatz dazu, zum Beispiel bei der elektrischen Melkweise, durch Elektronenfluss umstrukturierte Substanzen bzw. Moleküle erhalten werden, die in ihrer Wirkweise geändert sein können, oder auch Substanzen in den Giften vorhanden sein können, die das Tier sonst nicht abgeben würde. Diese Substanzen können, müssen aber nicht zwingend, die Effizienz der im Giftcocktail enthaltenen medizinisch wirksamen Verbindung negativ beeinflussen. Standardmäßig kann eine Analyse und / oder Qualitätskontrolle des Rohgiftgemisches über elektrophoretische Verfahren erfolgen.According to one embodiment of the invention, manual spinning of the spiders is provided. As a result, genuine, unadulterated native poisons are obtained, whereas, in contrast, for example in the case of electric milking, substances or molecules restructured by electron flow are obtained, which may have changed their mode of action, or substances may also be present in the poisons that the animal would not otherwise give up. These substances can, but do not necessarily have to, affect the efficiency of those contained in the poison cocktail negatively affect medically effective compound. As standard, analysis and / or quality control of the raw poison mixture can be carried out using electrophoretic methods.
- Herstellung erfindungsgemäßer Wirkstoffe- Production of active ingredients according to the invention
Zur manuellen Melkung wurden subadulte Weibchen der unter a) bis j) genannten Familien und Gattungen mit den Fingern einer Hand in Rückenlage fixiert und durch Berühren mit der stumpfen Seite einer auf eine sterile Spritze aufgesetzten sterilen Kanüle an den Cheüzeren zur Abgabe des Giftes stimuliert.. Die Raumtemperatur betrug meist etwa 21 bis 27 Grad, die Luftfeuchtigkeit 50 % bis 70 %. Die Tageszeit spielte keine Rolle.For manual milking, subadult females of the families and genera mentioned under a) to j) were fixed on their back with the fingers of one hand and stimulated to give off the poison by touching the blunt side of a sterile cannula placed on a sterile syringe to the chewers. The room temperature was usually around 21 to 27 degrees, the humidity 50% to 70%. The time of day didn't matter.
Dabei war es bevorzugt, dass die Stimuiationszeit nicht länger als 90 Sekunden dauerte, da sonst das betreffende Tier einem unnötigen Stress ausgesetzt würde. Nach Erscheinen des Gifttropfens an den Giftklauen wurde dieser mit der Spritze über die Kanüle aufgezogen. Für jedes Tier wurde eine neue Spritze mit neuer Kanüle verwendet. Anschließend wurde die Kanüle mit der Kanüienschutzhüile wieder verschlossen. Die verschlossene Spritze samt aufgezogenem Gift wurde direkt anschließend in einen Exsikator verbracht. Dieser wurde dann für mindestens 12 Stunden in einer Tiefkühltruhe bei mindestens 14 Grad Celsius aufbewahrt. Die Skolopender und Skorpione wurden gemolken wie im Melanom - Patent ( Clit. Patente „ räum & zeit ) beschrieben. Bei der Spritze mit dem gefrorenen Gesamtgift wurde nach Entnahme aus der Tiefkühltruhe die Kanülenschutzhülle entfernt. Die Kanüle wurde in lösungsmittel, z.B. Proteinlösungsmittel ( Lösungsmittel für Protein - Säulenchromatographie: 0,25 M Tris/HCL, pH 6,5 bis 7,3, 1,92 M Glycin , in destilliertem, deionisiertem Wasser ) eingetaucht und 1 ml aufgezogen. Wegen Denaturierung wird kein SDS im Puffer verwendet .Dadurch wurde Gift in Lösung erhalten. Im Anschluss wurde die Kanüle entfernt. Die so aufbereiteten einzelnen Giftlösungen in Spritzen ( 5 Stück ) wurden durch Ausrücken ( Ausspritzen ) in einem sterilen, sauberen Teflonvial bei Raumtemperatur gesammelt. Das verschlossene Teflonvial wurde anschließend auf einem Vortex ohne Schaumbildung 30 Sekunden lang geschüttelt, wobei eine homogene Lösung erhalten wurde. Nach der Durchmischung wurde die gesamte Lösung über einen Plexiglastrichter (um Kontamination zu vermeiden )in eine stehende transparente Plexiglassäule , die einen Innendurchmesser von 1 ,5 cm, eine Wandstarke von 2mm und eine Höhe von 50 cm aufwies und unten konisch bis auf 1 ,5 mm zulaufend, offen war, gefüllt mit 20 mL Gel eingebracht. ( Einzelheiten: Aca 34,Matrx 3% Acryiamid 4% Agarose; Fraktionierungsbereich ( MW ): Proteine : 20 bis 350 kDa; Ausschlussgrenze: 750 kDa; Kügelchendurchmesser: 60 - 140 Mikrometer ). Die so eingebrachte Giftlösung durchlief das Gel und verdrängte dabei den im Gel befindlichen Puffer. Nach vollständigem Eindringen der Giftlösung in das gel wurden zusätzliche 165 mL Lösungsmittel ( 0,25M Tris/HCL, pH 6,5 bis 7,3, 1 ,92 M Glycin ) auf die Säule gebracht. Dieses zusätzliche Lösungsmittel verdrängt bei seinem Durchlauf durch das Gel die darin befindliche Giftlösung. Die ersten 15 ml, die unten aus der Säule liefen, waren Restpuffer und wurden verworfen. Nach diesen 15 ml wurden 40 Fraktionen zu je 4 ml aufgefangen. Die Trennung in jeweils 4 ml war bedingt durch die physikalischen und chemischen Eigenschaften der einzelnen Fraktionen, nachgewiesen durch Elektrophorese, bevorzugt SDS - PAGE. Als Auftragspuffer zum Peptidbindungs- und Proteinschutz wurde Rot Load 1 + 2 ( Carl Roth GmbH & Co KG , Karlsruhe: SDS-,Glycerol-, Bromphenolblau, Phosphatpuffer, Roi Load 1 mit Mercaptoethanol, Roti Load 2 ohne Mercaptoethanoi ) verwendet. Die einzelnen Fraktionen wurden in steril sauberen verschraubbaren 5 ml Teflonvials getrennt aufgefangen. Die Qualitätskontrolle der Einzelfraktionen erfolgte mittels Elektrophorese.It was preferred that the stimulation time did not last longer than 90 seconds, since otherwise the animal in question would be exposed to unnecessary stress. After the poison drop appeared on the poison claws, it was drawn up over the cannula with the syringe. A new syringe with a new cannula was used for each animal. The cannula was then closed again with the cannula protective cover. The sealed syringe and the drawn-up poison were then immediately placed in a desiccator. This was then kept in a freezer at at least 14 degrees Celsius for at least 12 hours. The scolopenders and scorpions were milked as described in the melanoma patent (Clit. Patents “raum & zeit). In the syringe with the frozen total poison, the cannula protective cover was removed after removal from the freezer. The cannula was immersed in solvent, for example protein solvent (solvent for protein column chromatography: 0.25 M Tris / HCl, pH 6.5 to 7.3, 1.92 M glycine, in distilled, deionized water) and drawn up in 1 ml. No SDS is used in the buffer due to denaturation, which resulted in poison in solution. The cannula was then removed. The individual poison solutions in syringes (5 pieces) prepared in this way were collected by disengaging (squirting) in a sterile, clean Teflon vial at room temperature. The sealed teflon vial was then shaken on a vortex without foaming for 30 seconds to obtain a homogeneous solution. After mixing, the entire solution was passed through a plexiglass funnel (to avoid contamination) into a standing transparent plexiglass column, which had an inside diameter of 1.5 cm, a wall thickness of 2 mm and a height of 50 cm, and was conical down to 1.5 mm tapered, open, filled with 20 mL gel. (Details: Aca 34, Matrx 3% Acryiamid 4% Agarose; Fractionation range (MW): Proteins: 20 to 350 kDa; Exclusion limit: 750 kDa; Bead diameter: 60 - 140 micrometers). The poison solution thus introduced ran through the gel and displaced the buffer contained in the gel. After the poison solution had completely penetrated the gel, an additional 165 ml of solvent (0.25M Tris / HCl, pH 6.5 to 7.3, 1, 92 M glycine) were applied to the column. This additional solvent displaces the poison solution contained in it as it passes through the gel. The first 15 ml that ran out of the bottom of the column was residual buffer and was discarded. After these 15 ml, 40 fractions of 4 ml each were collected. The separation into 4 ml was due to the physical and chemical properties of the individual fractions, demonstrated by electrophoresis, preferably SDS-PAGE. Rot Load 1 + 2 (Carl Roth GmbH & Co KG, Karlsruhe: SDS, glycerol, bromophenol blue, phosphate buffer, Roi Load 1 with mercaptoethanol, Roti Load 2 without mercaptoethanoi) was used as the application buffer for peptide binding and protein protection. The individual fractions were collected separately in sterile, screwable 5 ml Teflon vials. The quality control of the individual fractions was carried out by means of electrophoresis.
Um die Struktur der Substanzen aufzuklären, wurden die eizelnen Fraktionen über eine HPLC-MS-MS sowie über eine DAD-UV/- Spektrometrie ( DAD bzw.DADI: direct Analysis of Daughter Ions, direkte Analyse von Tochterionen ) untersucht. Bekannte Substanzen konnten in höherem Molekulargewichtsbereich ( ab 10.000 Da ) nicht dargestellt werden. Allerdings deuten die Grundgerüstbestimmungen auf die Zugehörigkeit der Substanzen zum Polypeptidtyp mit toxischen Komponenten ( = Polypeptidtoxinen ) und andererseits zum Phospholipase- und Hyaiuronidase - Typ hin.In order to elucidate the structure of the substances, the individual fractions were examined using HPLC-MS-MS and DAD-UV / - spectrometry (DAD or DADI: direct analysis of daughter ions, direct analysis of daughter ions). Known substances could not be shown in the higher molecular weight range (from 10,000 Da). However, the basic framework determinations indicate that the substances belong to the polypeptide type with toxic components (= polypeptide toxins) and, on the other hand, to the phospholipase and hyaiuronidase type.
Fraktionen mit gleicher Zusammensetzung können zusammen gesammelt werden. Für die weitere Verarbeitung und Lagerung wurden die einzelnen Fraktionen gefriergetrocknet bspw. Mit folgenden Parametern: Die zu lyophilisierende Fraktion wurde in einem offenen, mit perforierter Aluminiumfolie locker bedeckten, Teflonvial auf minus 22 Grad Celsius gekühlt. Zur sicheren Durchfrierung der Probe wurde eine Kühizeit von 11 Stunden eingehalten. Dann wurde ein Vakuum von 0,200 mbar angelegt. Nach Erreichen des Vakuums wurde die Fraktion auf pius 4 Grad Celsius erwärmt und mindestens 24 Stunden unter Aufrechterhaltung des Vakuums auf dieser Temperatur gehalten. Nach dem Gefriertrocknungsvorgang wurde das Teflonvial mit der lyophilisierten Fraktion luftdicht verschraubt. Die Lagerzeit beträgt bei Raumtemperatur ca. 6 Monate, bei plus 7 Grad Celsius ca. 1 Jahr und bei minus 14 Grad Celsius ca. 15 Jahre. Tumorzellen - zerstörende Wirkung der erfindungsgemäßen WirkstoffeFractions with the same composition can be collected together. The individual fractions were freeze-dried for further processing and storage, for example with the following parameters: The fraction to be lyophilized was cooled in an open teflon vial loosely covered with perforated aluminum foil to minus 22 degrees Celsius. A cooling time of 11 hours was observed to ensure freezing of the sample. Then a vacuum of 0.200 mbar was applied. After the vacuum was reached, the fraction was heated to 4 degrees Celsius and kept at this temperature for at least 24 hours while maintaining the vacuum. After the freeze-drying process, the teflon vial was screwed airtight with the lyophilized fraction. The storage time is approx. 6 months at room temperature, approx. 1 year at plus 7 degrees Celsius and approx. 15 years at minus 14 degrees Celsius. Tumor cells - destructive effect of the active substances according to the invention
Derzeit ist es nicht möglich, auf Grund der vielfältigen Arten der Pathogenese von Tumorerkrankungen eine umfassende Präventivtherapie anzubieten. So steht bei lokal diagnostizierten Tumoren ( primäre oder nachfolgende ) die operative Entfernung an erster Stelle. Ein sich hierbei zeigendes Problem ist die Metastasierung, wenn nicht vollständig entferntes Tumorgewebe beim Durchschneiden in Kontakt mit Luft kommt...Dieses Problem kann durch das Aufbringen erfindungsgemäßer pharmazeutischer Wirkstoffe auf die Schnittflächen bei einer operativen Tumorentfernung gelöst werden. Da die Operation in den allermeisten Fällen nicht die gewünschten Erfolge bringt, ist die Anwendung der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Wirkstoffe als eine, den Patienten schonende, Therapie anzusehen. In sogenannten zulässigen ärztlichen Heilversuchen bei austherapierten Patienten zeigten sich positive Ergebnisse. Zu Beginn der Versuchsreihen wurde der gemolkene frische, bzw. gelöste, Gesamtgiftcocktail und dessen Wirkung in Abhängigkeit von der Konzentration auf unterschiedliche Zeil - Linien ausgetestet. Dabei konnten keine befriedigenden Ergebnis erreicht werden, da das Gift immer die gesamten Zellkulturen abtötete, wobei die für das Abtöten benötigte Zeit mit zunehmender Konzentration des eingesetzten Gifts abnahm. Bei langwierigen und eingehenden Versuchen wurde überraschend ermittelt, dass bestimmte Toxine im erfindungsgemäßen Wirkstoff besondere lysierende Wirkungen aufweisen und zwar entsprechend ihren Molekulargewichten.It is currently not possible to offer comprehensive preventive therapy due to the diverse types of pathogenesis of tumor diseases. For locally diagnosed tumors (primary or subsequent), surgical removal comes first. A problem that arises here is metastasis if tumor tissue that has not been completely removed comes into contact with air when it is cut through ... This problem can be solved by applying pharmaceutical active substances according to the invention to the cut surfaces during surgical tumor removal. Since the operation does not bring the desired results in the vast majority of cases, the use of the active pharmaceutical ingredients according to the invention is to be regarded as a therapy which is gentle on the patient. Positive results were shown in so-called permissible medical attempts at healing in patients who had undergone therapy. At the beginning of the test series, the milked fresh or dissolved total poison cocktail and its effect depending on the concentration on different Zeil lines were tested. A satisfactory result could not be achieved, since the poison always killed the entire cell cultures, the time required for the killing decreasing with increasing concentration of the poison used. During lengthy and detailed trials, it was surprisingly found that certain toxins in the active ingredient according to the invention have special lysing effects, in accordance with their molecular weights.
Es handelt sich hierbei um die Molekulargewichte mit den Werten:These are the molecular weights with the values:
27 und 31 ( die betreffende Einheit ist jeweils gemessen in kDa, entsprechend Kilo -27 and 31 (the unit in question is measured in kDa, corresponding to kilo -
Dalton ) Dalton)

Claims

AnsprücheExpectations
Anspruch 1 : Pharmazeutischer Wirkstoff zur Behandlung von Tumorerkrankungen, insbesondere Mamma - Ca mit P53 - und / oder P26 Defekten, enthaltend in einer pharmazeutisch wirksamen Menge: a) zumindest ein Peptidtoxin, sowie b) zumindest eine hierzu antagonistisch wirkende Substanz bzw. synergistisch wirkende Substanz, wobei zumindest das Peptidtoxin und wahlweise die hierzu antagonistisch bzw. synergistisch wirkende Substanz und / oder die Durchdringungssubstanz aus dem Gift von Spinnen der Familie Loxoscelidae, Gattung Loxosceles Weickmanni 1 stammen, und wobei c) das Molekulargewicht des Peptidtoxins 27 kDa beträgtClaim 1: Pharmaceutical active ingredient for the treatment of tumor diseases, in particular breast Ca with P53 and / or P26 defects, containing in a pharmaceutically effective amount: a) at least one peptide toxin, and b) at least one substance having an antagonistic effect or substance having a synergistic effect , wherein at least the peptide toxin and optionally the antagonistic or synergistic substance and / or the penetrating substance come from the poison of spiders of the family Loxoscelidae, genus Loxosceles Weickmanni 1, and wherein c) the molecular weight of the peptide toxin is 27 kDa
Anspruch 2: Pharmazeutischer Wirkstoff zur Behandlung von Tumorerkrankungen, insbesondere Mamma - Ca mit P53 - und / oder P26 Defekten, enthaltend in einer pharmazeutisch wirksamen Menge: d) zumindest ein Peptidtoxin, sowie e) zumindest eine hierzu antagonistisch wirkende Substanz bzw. synergistisch wirkende Substanz, wobei zumindest das Peptidtoxin und wahlweise die hierzu antagonistisch bzw. synergistisch wirkende Substanz und / oder die Durchdringungssubstanz aus dem Gift von Spinnen der Familie Loxoscelidae, Gattung Loxosceles Weickmanni 2 stammen, und wobei f) das Molekulargewicht des Peptidtoxins 27 kDa beträgtClaim 2: Pharmaceutical active ingredient for the treatment of tumor diseases, in particular breast Ca with P53 and / or P26 defects, containing in a pharmaceutically effective amount: d) at least one peptide toxin, and e) at least one substance having an antagonistic effect or substance having a synergistic effect , wherein at least the peptide toxin and optionally the antagonistic or synergistic substance and / or the penetrating substance come from the poison of spiders of the family Loxoscelidae, genus Loxosceles Weickmanni 2, and wherein f) the molecular weight of the peptide toxin is 27 kDa
Anspruch 3: Pharmazeutischer Wirkstoff zur Behandlung von Tumorerkrankungen, insbesondere Mamma - Ca mit P53 - und / oder P26 Defekten, enthaltend in einer pharmazeutisch wirksamen Menge: g) zumindest ein Peptidtoxin, sowie h) zumindest eine hierzu antagonistisch wirkende Substanz bzw. synergistisch wirkende Substanz, wobei zumindest das Peptidtoxin und wahlweise die hierzu antagonistisch bzw. synergistisch wirkende Substanz und / oder die Durchdringungssubstanz aus dem Gift von Spinnen der Familie Loxoscelidae, Gattung Loxosceles Weickmanni 1 stammen, und wobei i) das Molekulargewicht des Peptidtoxins 31 kDa beträgtClaim 3: Pharmaceutical active ingredient for the treatment of tumor diseases, in particular breast Ca with P53 and / or P26 defects, Containing in a pharmaceutically effective amount: g) at least one peptide toxin, and h) at least one substance having an antagonistic effect or synergistic substance, at least the peptide toxin and optionally the antagonistic or synergistic substance and / or the penetrating substance from the poison from spiders of the family Loxoscelidae, genus Loxosceles Weickmanni 1, and where i) the molecular weight of the peptide toxin is 31 kDa
Anspruch 4: Pharmazeutischer Wirkstoff zur Behandlung von Tumorerkrankungen, insbesondere Mamma - Ca mit P53 - und / oder P26 Defekten, enthaltend in einer pharmazeutisch wirksamen Menge: j) zumindest ein Peptidtoxin, sowie k) zumindest eine hierzu antagonistisch wirkende Substanz bzw. synergistisch wirkende Substanz, wobei zumindest das Peptidtoxin und wahlweise die hierzu antagonistisch bzw. synergistisch wirkende Substanz und / oder die Durchdringungssubstanz aus dem Gift von Spinnen der Familie Loxoscelidae, Gattung Loxosceles Weickmanni 2 stammen, und wobei I) das Molekulargewicht des Peptidtoxins 31 kDa beträgtClaim 4: Pharmaceutical active ingredient for the treatment of tumor diseases, in particular breast Ca with P53 and / or P26 defects, containing in a pharmaceutically effective amount: j) at least one peptide toxin, and k) at least one substance having an antagonistic effect or substance having a synergistic effect , wherein at least the peptide toxin and optionally the antagonistic or synergistic substance and / or the penetrating substance come from the poison of spiders of the family Loxoscelidae, genus Loxosceles Weickmanni 2, and wherein I) the molecular weight of the peptide toxin is 31 kDa
Anspruch 5: Pharmazeutischer Wirkstoff nach einem der Ansprüche 1 bis 4 dadurch gekennzeichnet, dass eine oder mehrere weitere Substanzen aus dem Gift der jeweils anderen Familie Loxosceles Weickmanni 1 oder Loxosceles Weickmanni 2 enthalten sind. Anspruch 6: Pharmazeutischer Wirkstoff nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass die antagonistisch wirkende Substanz bzw. die synergistisch wirkende Substanz und / oder die Durchdringungssubstanz aus einem anderen Organismus stammen als aus Loxosceles Weickmanni 1 bzw. Loxosceles Weickmanni 2.Claim 5: Active pharmaceutical ingredient according to one of claims 1 to 4, characterized in that one or more further substances from the poison of the other family Loxosceles Weickmanni 1 or Loxosceles Weickmanni 2 are contained. Claim 6: active pharmaceutical ingredient according to one of claims 1 to 5, characterized in that the antagonistically active substance or the synergistically active substance and / or the penetrating substance originate from a different organism than from Loxosceles Weickmanni 1 or Loxosceles Weickmanni 2.
Anspruch 7: Pharmazeutischer Wirkstoff nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die antagonistisch wirkende Substanz bzw. die synergistisch wirkende Substanz und / oder die Durchdringungssubstanz eine Phospholipase oder eine Hyaiuronidase oder eine Kombination beider Substanzen ist.Claim 7: Pharmaceutical active substance according to one of the preceding claims, characterized in that the antagonistically active substance or the synergistically active substance and / or the penetrating substance is a phospholipase or a hyaiuronidase or a combination of both substances.
Anspruch 8: Pharmazeutischer Wirkstoff nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das Peptidtoxin und die hierzu antagonistisch wirkende Substanz, bzw. die synergistisch wirkende Substanz und / oder die Durchdringungssubstanz durch ein Fraktionierungsverfahren aus dem jeweiligen Gift erhalten wurde.Claim 8: Pharmaceutical active substance according to one of the preceding claims, characterized in that the peptide toxin and the substance having an antagonistic effect thereon, or the substance having a synergistic effect and / or the penetrating substance was obtained from the respective poison by a fractionation process.
Anspruch 9: Pharmazeutischer Wirkstoff nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das Peptidtoxin und die hierzu antagonistisch wirkende Substanz, bzw. die synergistisch wirkende Substanz und / oder die Durchdringungssubstanz durch Gelchromatographie, HPLC, Affinitäts - Chromatographie und / oder ionenaustauschchromatographie aus dem jeweiligen Gift erhalten wurde.Claim 9: active pharmaceutical ingredient according to one of the preceding claims, characterized in that the peptide toxin and the substance having an antagonistic effect thereon, or the substance having a synergistic action and / or the penetrating substance by gel chromatography, HPLC, affinity - Chromatography and / or ion exchange chromatography was obtained from the respective poison.
Anspruch 10: Pharmazeutischer Wirkstoff nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das Peptidtoxin und die antagonistisch wirkende Substanz, bzw. die synergistisch wirkende Substanz und / oder die Durchdringungssubstanz wie folgt erhalten wurde: Durch Verwendung einer Säule mit einem Innendurchmesser von 1 ,5 cm und einer Höhe von 50 cm, die unten konisch bis auf 1 ,5 mm zuläuft und die mit 20 ml eines Gleichchromatographiegels AcA 34, Matrix: 3% Acrylamid 4%Agarose, Fraktionierbereich 20 bis 350 kDa, Ausschlussgrenze 750 kDa, Kügelchendurchmesser 60 - 140 um gefüllt ist. Hierbei wurde das entsprechende Gift in 0,25M Tris/HCI,pH 6,5 bis 7,3, und 1 ,92M Glycin in destilliertem, deionisiertem Wasser im homogenen Zustand auf das Gel aufgebracht. Wenn die Giftlösung das Gel durchlaufen hat und 165 ml einer Lösung von 0,25 M Tris/HCI,pH 6,5 bis 7,3, und 1 ,92 M Glycin in destilliertem, deionisiertem Wasser aufgebracht wurden und die ersten 15 ml des Durchlaufs verworfen und in je 4 ml Fraktionen gesammelt wurden, befinden sich die Peptidtoxine in den Fraktionen 1 ,2,4,7,9 und 10 und die antagonistisch wirkenden Substanzen bzw. die synergistisch wirkenden Substanzen und / oder die Durchdringungssubstanzen in den Fraktionen 3,5,6,8,11 und 12..Claim 10: active pharmaceutical ingredient according to one of the preceding claims, characterized in that the peptide toxin and the antagonistically active substance, or the synergistically active substance and / or the penetrating substance was obtained as follows: By using a column with an inner diameter of 1.5 cm and a height of 50 cm, which tapers to 1.5 mm at the bottom and which is coated with 20 ml of a chromatographic gel AcA 34, matrix: 3% acrylamide 4% agarose, fractionation range 20 to 350 kDa, exclusion limit 750 kDa, bead diameter 60 - 140 µm is filled. The corresponding poison was applied to the gel in a homogeneous state in 0.25M Tris / HCl, pH 6.5 to 7.3, and 1.92M glycine in distilled, deionized water. When the poison solution has passed through the gel and 165 ml of a solution of 0.25 M Tris / HCl, pH 6.5 to 7.3, and 1.92 M glycine in distilled, deionized water have been applied and the first 15 ml of the run discarded and collected in 4 ml fractions, the peptide toxins are in fractions 1, 2, 4, 7, 9 and 10 and the antagonistic substances or the synergistic substances and / or the penetrating substances are in fractions 3.5 , 6,8,11 and 12 ..
Anspruch 11 : Pharmazeutischer Wirkstoff nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass er ein Peptidtoxin und eine hierzu antagonistisch wirkende Substanz, bzw. eine synergistisch wirkende Substanz enthält, die aus verschiedenen Fraktionen des jeweiligen Giftes stammen. Anspruch 12: Pharmazeutischer Wirkstoff nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Menge so ausgewählt ist, dass eine räumliche und / oder zeitlich kontrollierte Ausbreitung im Gewebe sichergestellt ist.Claim 11: Pharmaceutical active substance according to one of the preceding claims, characterized in that it contains a peptide toxin and a substance having an antagonistic effect thereon, or a substance having a synergistic effect, which originate from different fractions of the respective poison. Claim 12: active pharmaceutical ingredient according to one of the preceding claims, characterized in that the amount is selected so that a spatial and / or temporally controlled spread in the tissue is ensured.
Anspruch 13: Pharmazeutischer Wirkstoff nach einem der vorhergehende Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Menge an Peptidtoxin und antagonistisch wirkender Substanz bzw. synergistisch wirkender Substanz und / oder Durchdringungssubstanz in Abhängigkeit vom zu behandelnden Tumor gewählt ist.Claim 13: Pharmaceutical active substance according to one of the preceding claims, characterized in that the amount of peptide toxin and antagonistically active substance or synergistically active substance and / or penetrating substance is selected depending on the tumor to be treated.
Anspruch 14: Pharmazeutischer Wirkstoff nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass er übliche Träger- und Hilfsstoffe und / oder weitere Wirkstoffe enthält.Claim 14: Pharmaceutical active substance according to one of the preceding claims, characterized in that it contains conventional carriers and auxiliary substances and / or further active substances.
Anspruch 15: Pharmazeutischer Wirkstoff nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass er als übliche Träger- und Hilfsstoffe isotone Lösungen, Eiweißlösungen, Aminosäurelösungen und / oder keimtötende Lösungen, bevorzugt Ringerlösung, 0,9% - ige NaCI -Lösung, Human - Albuminlösung und /oder Glutaminlösung enthält, und dass er als weitere Wirkstoffe Antibiotika, Antimykotika, Antituberkulotika, Mittel gegen Parasiten, Aminosäuren, die Wundbehandlung begünstigende Enzyme, Mitosehemmstoffe und / oder Zytostatika enthält.Claim 15: Pharmaceutical active ingredient according to one of the preceding claims, characterized in that it is isotonic solutions, protein solutions, amino acid solutions and / or germicidal solutions, preferably Ringer's solution, 0.9% NaCl solution, human albumin solution, as usual carriers and auxiliaries and / or glutamine solution, and that it contains antibiotics, antifungals, antituberculotics, agents against parasites, amino acids, enzymes which promote wound treatment, mitotic inhibitors as further active ingredients and / or contains cytostatics.
Anspruch 16: Pharmazeutischer Wirkstoff nach einem der vorhergehende Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass ein Derivat des Peptidtoxins und / oder der antagonistisch wirkenden Substanz bzw. der synergistisch wirkenden Substanz und / oder der Durchgangssubstanz in dem Wirkstoff enthalten ist und / oder das Peptidtoxin und / oder die hierzu antagonistisch wirkende Substanz bzw. die synergistisch wirkende Substanz und / oder die Durchdringungssubstanz chemisch -synthetisch oder durch rekombinante biotechnologische Methoden hergestellt ist und sie in ihrer Wirkung dem im Gift der jeweiligen Tiere enthaltenen Toxine oder den hierzu antagonistisch bzw. synergistisch wirkenden Substanzen und / oder Durchdringungssubstanzen und Derivaten hiervon entsprechen.Claim 16: Pharmaceutical active substance according to one of the preceding claims, characterized in that a derivative of the peptide toxin and / or the antagonistically active substance or the synergistically active substance and / or the transit substance is contained in the active substance and / or the peptide toxin and / or the substance having an antagonistic effect or the substance having a synergistic effect and / or the penetrating substance is produced chemically-synthetically or by recombinant biotechnological methods and its effect is the toxins contained in the poison of the respective animals or the substances having an antagonistic or synergistic effect and / or penetrating substances and derivatives thereof.
Anspruch 17: Verfahren zur Herstellung eines pharmazeutischen Wirkstoffs, enthaltend in einer pharmazeutisch wirksamen Menge zumindest ein Peptidtoxin sowie zumindest eine hierzu antagonistisch wirkende , bzw. synergistisch wirkende Substanz und / oder zumindest eine Durchdringungssubstanz, wobei das Peptidtoxin aus dem Gift von Tieren stammt und wahlweise die hierzu antagonistisch wirkende Substanz bzw. die synergistisch wirkende Substanz und / oder die Durchdringungssubstanz aus dem Gift von Tieren stammt, mit den folgenden Schritten: Gewinnen eines Tiergift - Rohgemisches durch an sich bekannte Verfahren sowie Fraktionierung der Mischung, um das Peptidtoxin und wahlweise die hierzu antagonistisch bzw. synergistisch wirkende Substanz und / oder die Durchdringungssubstanz und wahlweise weitere Substanzen in möglichst voneinander getrennten Fraktionen zu erhalten; Kombination verschiedener Fraktionen des Peptidtoxins mit Fraktionen, die hierzu antagonistisch wirkende bzw. synergistisch wirkende Substanzen und / oder Durchdringungssubstanzen enthalten, oder mit aus anderen Organismen stammenden antagonistisch bzw. synergistisch wirkenden Substanzen und / oder Durchdringungssubstanzen, um einen pharmazeutisch wirksamen Wirkstoff zu erhalten.Claim 17: Process for the preparation of a pharmaceutical active ingredient, comprising in a pharmaceutically effective amount at least one peptide toxin and at least one substance which acts antagonistically or synergistically and / or at least one penetrating substance, the peptide toxin originating from the poison of animals and optionally the the antagonistic substance or the synergistic substance and / or the penetrating substance comes from the poison of animals, with the following steps: obtaining an animal poison raw mixture by methods known per se and fractionating the mixture to give the peptide toxin and optionally the antagonistic one or to obtain a synergistic substance and / or the penetrating substance and optionally further substances in fractions which are separated from one another as far as possible; Combination of different fractions of the peptide toxin with fractions which contain antagonistic or synergistic substances and / or penetrating substances for this purpose, or with antagonistic or synergistic substances and / or penetrating substances originating from other organisms, in order to obtain a pharmaceutically active substance.
Anspruch 18: Verfahren nach Anspruch 17, dadurch gekennzeichnet, dass das Gift - Rohgemisch aus Tieren gewonnen wird, die aus der Familie Loxoscelidae, Gattung Loxosceles Weickmanni 1 bzw. 2, stammen.Claim 18: Method according to claim 17, characterized in that the raw poison mixture is obtained from animals which come from the Loxoscelidae family, genus Loxosceles Weickmanni 1 or 2.
Anspruch 19: Verfahren nach Anspruch 18; dadurch gekennzeichnet, dass das Gift - Rohgemisch aus jeweils weiblichen Tieren gewonnen wird.Claim 19: Method according to claim 18; characterized in that the raw poison mixture is obtained from female animals.
Anspruch 20: Verfahren nach einem der Ansprüche 17 bis 19, dadurch gekennzeichnet, dass das Gift - Rohgemisch durch manuelles Melken gewonnen wird.Claim 20: Method according to one of claims 17 to 19, characterized in that the raw poison mixture is obtained by manual milking.
Anspruch 21 : Verfahren nach einem der Ansprüchen bis 20, dadurch gekennzeichnet, dass das Gift - Rohgemisch vor der Fraktionierung homogenisiert wird.Claim 21: Method according to one of claims to 20, characterized in that the raw poison mixture is homogenized before the fractionation.
Anspruch 22: Verfahren nach einem der Ansprüchen bis 21, dadurch gekennzeichnet, dass die Fraktion vor der Weiterverarbeitung zu einem pharmazeutisch wirksamen Wirkstoff tiefgekühlt und weiter bevorzugt lyophilisiert wird.Claim 22: Method according to one of claims to 21, characterized in that the fraction is frozen before further processing to a pharmaceutically active ingredient and more preferably lyophilized.
Anspruch 23: Verfahren nach einem der Ansprüche 20 bis 2.3 dadurch gekennzeichnet, dass der pharmazeutische Wirkstoff zur Behandlung von Tumorerkrankungen dient und / oder zur unterstützenden Behandlung bei Tumoroperationen verwendet wird. Claim 23: Method according to one of claims 20 to 2.3, characterized in that the pharmaceutical active ingredient is used to treat tumor diseases and / or is used for supportive treatment in tumor operations.
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