COMPOSITION DETERGENTE A ACTIVITE ANTI-MICROBIENNE
La présente invention a pour objet une composition détergente ayant une action anti-microbienne, notamment contre des germes pathogènes. La présente invention a également pour objet la préparation de cette composition ainsi que ses utilisations. Les industriels fabriquent de nombreuses compositions détergentes, sous diverses formes et qui sont utilisées dans de nombreux domaines. Parmi ces compositions détergentes ou nettoyantes, certaines sont destinées , à un usage domestique, notamment pour le nettoyage de la maison.
Afin d'augmenter l'efficacité de ces compositions détergentes, il est devenu nécessaire d'incorporer dans ces compositions des agents chimiques anti-microbiens.
Parmi ces agents chimiques anti-microbiens mis en œuvre actuellement, on peut citer entre autres les alcools, les halogènes, les métaux lourds et leur dérivés, les tensio- actifs, les aldéhydes ou les composés phénoliques.
Or, ces agents chimiques anti-microbiens sont généralement très agressifs vis à vis de leur environnement, et notamment vis à vis de l'homme. En effet ces agents chimiques peuvent provoquer entre autres certaines maladies de peau chez leurs utilisateurs. De plus, ils ne présentent pas en général un spectre d'inhibition ciblé des agents pathogènes à inhiber ou à détruire. Au contraire, ils présentent un spectre antimicrobien très large et non spécifique. Afin de répondre aux exigences des industriels, il est devenu urgent de trouver une alternative à ces agents chimiques anti-microbiens.
Aussi le problème que se propose de résoudre l'invention est de fournir une composition détergente dont les propriétés anti-microbiennes sont ciblées tout en ayant une action chimique non dénaturante vis à vis des supports sur lesquels elle est appliquée ou vis à vis de leurs utilisateurs.
Dans ce but l'invention propose une composition comprenant au moins un tensio- actif et au moins un composé produit par des bactéries lactiques choisi parmi les espèces Lactobacillus sakei, Lactococcus lactis, Leuconostoc mesenteroides, Pediococcus acidilactici ou Carnobacterium divergens. L'invention propose également une composition comprenant au moins un tensio- actif et au moins une souche de bactéries lactiques choisi parmi les espèces Lactobacillus sakei, Lactococcus lactis, Leuconostoc mesenteroides, Pediococcus acidilactici ou Carnobacterium divergens.
L'invention propose encore un procédé de préparation de ces compositions selon l'invention.
L'invention a également pour objet l'utilisation de ces compositions pour préparer des compositions détergentes notamment des lingettes, des gels, des crèmes, des solutions, des mousses ou des savons.
Avantageusement, les compositions selon l'invention permettent d'exercer une action ciblée contre les germes indésirables de l'environnement humain ou animal (par exemple contre les germes pathogènes, contre les germes d'altération des denrées alimentaires, contre les germes d'altération des matériaux) En particulier, les compositions selon l'invention permettent de limiter voir de supprimer la prolifération des micro-organismes pathogènes gram+, notamment ceux appartenant au genre Listeria, Clostridium ou staphylocoques, ou des micro-organismes pathogènes gram", notamment ceux appartenant au genre Pseudomonas, Salmonella, ou des Entérobactéries (£. colî), ou des micro-organismes pathogènes appartenant aux levures comme par exemple Candida, ou ceux appartenant aux moisissures comme par exemple Aspergillus. Une telle propriété est un avantage considérable lorsque l'on sait que une des causes principales de Listériose alimentaire est la trans-contamination entre les produits stockés dans les réfrigérateurs.
Avantageusement l'action des compositions selon l'invention sera immédiate et rémanente (plusieurs jours), vis à vis des micro-organismes indésirables, sur des surfaces représentatives de la maison : soit par exemple sur des surfaces dures, comme le verre, la céramique, le plastique, les résines, soit sur des surfaces molles comme par exemple les textiles, les moquettes en fibre naturelles et/ou synthétiques.
Avantageusement les compositions selon l'invention peuvent être mises en œuvre dans des cuisines, des salles de bains ou des toilettes, ou sur toutes surfaces afin de préserver l'hygiène.
D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront clairement à la lecture de la description et des exemples donnés à titre purement illustratifs et non limitatifs qui vont suivre. L'invention concerne tout d'abord une composition comprenant au moins un tensio-actif et au moins un composé produit par des bactéries lactiques choisi parmi les espèces Lactobacillus sakei, Lactococcus lactis, Leuconostoc mesenteroides, Pediococcus acidilactici ou Carnobacterium divergens.
Le composé produit par les bactéries lactiques selon l'invention est du type acides organiques, alcools, métabolites de l'oxygène ou bactériocines.
Les composés produits par les bactéries lactiques sont par exemple des produits issus du catabolisme de ces bactéries et rejetés dans leur milieu environnant comme par exemple des alcools ou des acides organiques. A titre d'acides organiques on peut citer ceux qui acidifient leur milieu le rendant ainsi peu propice à la croissance d'autres flores, comme l'acide lactique, l'acide acétique ou l'acide formique.
Parmi les composés produits par les bactéries lactiques on peut encore citer les métabolites de l'oxygène qui sont des agents toxiques pour de nombreux microorganismes comme par exemple H2O2.
Enfin on peut également citer les bactériocines comme composés produits par les bactéries lactiques.
Les bactériocines sont des substances naturelles de nature protéique, produites par des micro-organismes et qui présentent une activité bactéricide ou bactériostatique à encontre d'autres micro-organismes appelés alors " cibles ". Ces activités antimicrobiennes peuvent se manifester contre des bactéries comme par exemples Salmonella, Listeria et Clostridium. Certaines bactériocines sont connues comme par exemple la colicine, la sakacine G, l'entérococcine, la pédiocine, la lactococcine, la nisine, la divercine, la mésentéricine. Les bactériocines interagissent avec les membranes des cellules cibles. Elles induisent notamment des pertes de petites molécules telles que des ions, des sucres, des cofacteurs enzymatiques essentiels à la vie cellulaire tel que l'ATP (Adénosine Tri- Phosphate), des acides aminés, qui ralentissent le développement du micro-organisme touché, voire conduisent à sa mort. La concentration en composé produit par les bactéries lactiques dans la composition selon l'invention peut être comprise entre 0,1 et 100 g/l dans le cas des acides organiques et entre 10 mg/L et 10 g/L dans le cas des bactériocines.
Les compositions selon l'invention décrites ci-dessus peuvent en outre comprendre des bactéries lactiques choisi parmi les espèces Lactobacillus sakei, Lactococcus lactis, Leuconostoc mesenteroides, Pediococcus acidilactici ou Carnobacterium divergens.
L'invention a également pour objet une composition comprenant au moins un tensio-actif et au moins une souche de bactéries lactiques choisi parmi les espèces Lactobacillus sakei, Lactococcus lactis, Leuconostoc mesenteroides, Pediococcus acidilactici ou Carnobacterium divergens.
Les souches de bactéries lactiques mises en œuvre selon l'invention ont été choisies pour répondre à différents critères : elles appartiennent à des espèces bactériennes classées comme « Généralement reconnue sans danger » (ou GRAS en anglais pour « Generally Recognized As Safe ») par l'administration américaine. De plus, elles sont productrices de composés à activité antimicrobienne du type acides organiques, alcools, métabolites de l'oxygène ou bactériocines.
Les souches de bactéries lactiques mises en œuvre selon l'invention possèdent également des capacités d'implantation différentes dans différents écosystèmes et notamment dans des conditions classiquement défavorables à la multiplication cellulaire (résistance à la privation nutritionnelle, au pH, au dessèchement, à la présence de composés chimiques néfastes à l'intégrité cellulaire (alcools, détergents ou tensio- actifs), températures différentes de la température optimale de croissance, vitesse de croissance proche de zéro).
De préférence, les souches de bactéries lactiques mises en œuvre selon l'invention sont :
- la souche Lactobacillus sakei qui a été déposée le 23 mai 2000 auprès de la Collection Nationale des Cultures de Microorganismes où elle est enregistrée sous le numéro de dépôt CNCM 1-2479 ; la souche Lactococcus lactis qui a été déposée le 16 mai 2003 auprès de la Collection Nationale des Cultures de Micro-organismes où elle est enregistrée sous le numéro de dépôt CNCM 1-3021
- la souche Leuconostoc mesenteroides qui a été déposée le 16 mai 2003 auprès de la Collection Nationale des Cultures de Micro-organismes où elle est enregistrée sous le numéro de dépôt CNCM I-3022
- la souche Lactobacillus sakei qui a été déposée le 16 mai 2003 auprès de la Collection Nationale des Cultures de Micro-organismes où elle est enregistrée sous le numéro de dépôt CNCM I-3023 - la souche Pediococcus acidilactici qui a été déposée le 16 mai 2003 auprès de la Collection Nationale des Cultures de Micro-organismes où elle est enregistrée sous le numéro de dépôt CNCM I-3024
- la souche Carnobacterium divergens qui a été déposée le 23 mai 2003 auprès de la Collection Nationale des Cultures de Micro-organismes où elle est enregistrée sous le numéro de dépôt CNCM I-3030.
De préférence, la composition selon l'invention comprend des bactéries lactiques choisies parmi les souches Lactobacillus sakei CNCM I-2479, Lactococcus lactis
CNCM 1-3021, Leuconostoc mesenteroides CNCM I-3022, Lactobacillus sakei CNCM I-
3023, Pediococcus acidilactici CNCM I-3024 ou Carnobacterium divergens CNCM I- 3030
Les bactéries lactiques selon l'invention peuvent également agir par déplétions nutritionnelles engendrées par leur croissance dans le milieu et qui rendent alors le développement d'autres micro-organismes difficile par manque de nutriments.
La concentration en bactéries lactiques dans la composition selon l'invention est d'au moins 103 cfu /ml de solution, de préférence d'au moins 105 cfu /ml de solution.
L'autre constituant essentiel de la composition selon l'invention est constitué par au moins un tensio-actif.
Par tensioactifs, on entend toutes substances qui abaissent la tension superficielle de l'eau ou du milieu dans lequel elles sont dissoutes. A ce titre, les tensio-actifs permettent de réduire par exemple la tension entre une phase huile et une phase aqueuse, améliorant ainsi l'enlèvement des salissures grasses par des milieux aqueux.
Les tensio-actifs utilisés selon l'invention peuvent être ioniques ou non ioniques, et peuvent être utilisés seuls ou en mélanges.
A titre de tensio-actifs anioniques, on peut citer de façon non limitative les alkylesters sulfonates, les alkylsulfonates ainsi que leurs dérivés alcoxylés (notamment éthoxylés (OE) et/ou propoxylés (OP)), les alkylamides sulfates ainsi que leurs dérivés alcoxylés (notamment (OE) et ou (OP)), les sels d'acides gras saturés ou insaturés et/ou leurs dérivés alcoxylés (notamment (OE) et/ou (OP)), les alkylbenzènesulfonates, les alkylsulfonates primaires ou secondaires, les alkylglycérol sulfonates, les acides polycarboxyliques sulfonés, les sulfonates de paraffine, les N-acyl N-alkyllaurates, les alkylphosphates, les iséthionates, les alkylsuccinamates, les alkylsulfosuccinates, les monoesters ou diesters de sulfosuccinates, les N-acyl sarcosinates, les sulfates d'alkylglycosides, les sophorolipides, tels que ceux notamment sous forme acide ou lactone et dérivés de l'acide 17-hydroxyoctadécénique.
A titre d'exemples de tensio-actifs cationiques, on peut citer de façon non limitative des tensio-actifs comme des sels d'alkylammonium modifiés benzyle ou non, des diesters de triéthanolamine quatemizé, des N-methylimidazoline tallow ester.
A titre d'exemples de tensio-actifs ioniques, on peut citer de façon non limitative des tensio-actifs amphotères et zwitterioniques comme :
• les alkyldiméthylbétaïnes, les alkylamidopropyldiméthylbétaïnes, les alkyltriméthylsulfobétaïnes, les produits de condensation d'acides gras et d'hydrolysats de protéines.
A titre de tensio-actifs non ioniques, on peut citer de façon non limitative les alkylphénols alcoxylés (notamment (OE) et/ou (OP)), les alcools aliphatiques, les produits résultant de la condensation de l'oxyde d'éthylène ou de l'oxyde de propylène avec le propylène glycol ou l'éthylène glycol, les produits résultant de la condensation de l'oxyde d'éthylène ou de l'oxyde de propylène avec l'éthylène diamine, les acides gras alcoxylés (notamment (OE) et/ou (OP)), les amides d'acides gras alcoxylés
(notamment (OE) et/ou (OP)), les aminés alcoxylés (notamment (OE) et/ou (OP)), les amidoamines alcoxylés (notamment (OE) et/ou (OP)), les oxydes d'aminés, les hydrocarbures terpéniques alcoxylés (notamment (OE) et/ou (OP)), les alkylpolyglycosides, les polymères ou oligomères amphiphiles, les alcools éthoxylés, les esters de sorbitan, les esters de sorbitan oxyéthylénés ou les dérivés des pyrrolidones.
Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, le tensioactif non ionique peut être associé à au moins un tensioactif anionique. Quant aux polymères ou oligomères amphiphiles non ioniques entrant dans la composition selon l'invention, ils sont plus particulièrement choisis, seuls ou en mélanges, parmi les polymères, oligomères ou copolymères au moins miscibles en partie dans la composition aqueuse.
Par polymères ou oligomères amphiphiles, on entend des polymères ou oligomères ayant une tension de surface en milieu aqueux.
Les polymères ou oligomères amphiphiles peuvent avoir une répartition statistique ou une répartition multibloc. Les polymères ou oligomères amphiphiles utilisés selon l'invention sont choisis parmi les polymères à blocs comprenant au moins un bloc hydrophile et au moins un bloc hydrophobe, le bloc hydrophile étant obtenu à partir d'au moins un monomère non ionique et/ou anionique.
A titre d'exemple de tels polymères ou oligomères amphiphiles, on peut citer notamment les polysaccharides ayant des groupements hydrophobes, notamment des groupements alkyle. A titre d'exemples on peut citer les guars.
A titre d'exemple de polymères ou oligomères amphiphiles on peut également citer les polymères triblocs polyhydroxystéarate - polyéthylène glycol polyhydroxystéarate (les produits de la gamme Arlacel® de ICI en sont un exemple), les polyacrylamides hydrophobes.
Pour ce qui a trait aux polymères amphiphiles non ioniques plus particulièrement alcoxylés (notamment (OE) et/ou (OP)), ces derniers sont plus particulièrement choisis parmi les polymères dont au moins une partie (au moins 50 % en poids) est miscible dans l'eau. A titre d'exemples de polymères de ce type, on peut citer entre autres les polymères triblocs polyéthylène glycol / polypropylène glycol / polyéthylène glycol.
Les tensio-actifs préférés selon l'invention sont les tensio-actifs non-ioniques et les tensio-actifs anioniques.
A titre de tensio-actifs préférés selon l'invention on peut citer les tensio-actifs anioniques sulfonates, les alkylpolyglucosides et les alcools éthoxylés.
La concentration en tensio-actifs dans les compositions selon l'invention est de préférence comprise entre 0,001 % et 10 %.
Les compositions selon l'invention peuvent également contenir d'autres composés généralement utilisés dans les compositions détergentes ou nettoyantes. Notamment ces compositions peuvent comprendre des agents compatibilisants encore appelés hydrotropes qui permettent à la composition détergente de ne pas changer d'état au cours du stockage, c'est à dire de ne pas provoquer une séparation de phase. Ils permettent de faire coexister des liquides polaires avec d'autres liquide apolaires. Typiquement, on utilise le xylène sulfonate de sodium. Ces compositions peuvent en outre comprendre des solvants, par exemple des dérivés du glycol.
De plus ces compositions peuvent comprendre des composés capables de piéger les ions, qui sont généralement appelés séquestrants. Ces séquestrants des ions
permettent de piéger les ions présents dans l'eau de ville, comme par exemple le calcium ou le magnésium. Ces séquestrants peuvent être de type acide carboxylique (acide citrique) ou aminocarboxyliques (EDTA), phosphonates ou polymèriques.
Les compositions préférées selon l'invention sont des compositions qui ne sont pas nocives pour l'environnement, ni pour l'utilisateur. A ce titre, des compositions à base aqueuse sont préférées.
La composition selon l'invention peut également se présenter sous forme d'une préparation combinée pour une utilisation simultanée ou séquentielle.
Il s'agit alors d'une composition comprenant au moins un tensio-actif et au moins un composé produit par des bactéries lactiques choisi parmi les espèces Lactobacillus sakei, Lactococcus lactis, Leuconostoc mesenteroides, Pediococcus acidilactici ou
Carnobacterium divergens en tant que préparation combinée pour une utilisation simultanée ou séquentielle.
Il s'agit également d'une composition comprenant au moins un tensio-actif et au moins une souche de bactérie lactique choisi parmi les espèces Lactobacillus sakei,
Lactococcus lactis, Leuconostoc mesenteroides, Pediococcus acidilactici ou
Carnobacterium divergens en tant que préparation combinée pour une utilisation simultanée ou séquentielle.
Dans ces cas particuliers de préparation combinée, les éléments essentiels de la composition selon l'invention sont présents dans des récipients différents et sont appliqués de manière simultanée ou de manière séquentielle, par exemple l'un après l'autre, sur les surfaces à traiter.
La présente invention a également pour objet un procédé de préparation de la composition selon l'invention caractérisé en ce que l'on met en contact au moins un tensio-actif avec au moins un composé issu de bactéries lactiques et/ ou des bactéries lactiques.
La mise en contact d'au moins un tensio-actif avec au moins un composé issu de bactéries lactiques et/ ou des bactéries lactiques peut se faire de manière classique et connue de l'homme du métier. II est par exemple possible d'introduire au moins un composé issu de bactéries lactiques et/ ou des bactéries lactiques sous forme de poudre sèche, lyophilisée, congelée ou de suspension dans une solution d'au moins un tensio-actif.
La présente invention a également pour objet l'utilisation de la composition selon l'invention pour préparer des compositions détergentes sous forme de lingettes, de gels, de crèmes, de solutions, de mousses ou de savons.
La présente invention a également pour autre objet l'utilisation de la composition selon l'invention sur des surfaces représentatives de la maison, notamment sur des surfaces dures, comme le verre, la céramique, le plastique, les résines, ou sur des
surfaces molles comme par exemple les textiles, les moquettes en fibre naturelles et/ou synthétiques.
Par l'expression surfaces représentatives de la maison, on entend toutes surfaces présente dans une maison ou sa périphérie sur laquelle est susceptible d'être appliquée une composition détergente quelle que soit sa forme.
L'invention a aussi pour autre objet une composition détergente comprenant la composition décrite ci-dessus.
Plus particulièrement cette composition détergente se présente sous la forme d'une Iingette, d'un gel, d'une crème, d'une solution, d'une mousse ou d'un savon. La figure 1 représente le suivi de la population de Listeria sur une lame de verre après nettoyage par une Iingette imprégnée de composition selon l'invention.
Des exemples concrets mais non limitatifs de l'invention vont maintenant être décrits.
EXEMPLES
Les souches suivantes de bactéries lactiques ont été utilisées : souche Lactobacillus sakei I - 2479 et I - 3023, - souche Lactococcus lactis 1-3021 , souche Leuconostoc mesenteroides I-3022, souche Pediococcus acidilactici I - 3024, souche Carnobacterium divergens I-3030
Les autres souches suivantes ont été utilisées :
Listeria innocua RD 8811
La composition de la solution détergente utilisée est indiquée ci-dessous (% en poids) : - 4,8% d'Antarox B79R de Rhodia : tensioactif non ionique ' (alcool gras ethoxylé propoxylé),
3% de Miranol JEM de Rhodia : tensioactif amphotère (mélange de C8 amphocarboxylates),
4% de copolymère statistique d'acide acrylique et de chlorure de diméthyldiallylammonium,
7% d'Isopropanol,
2% de citrate de sodium, qsp eau.
Exemple n°1 : Comportement des bactéries lactiques dans les solutions détergentes sous forme liquide:
Les souches de bactéries lactiques sont mises en suspension à 1 % en volume dans la solution détergente à tester. Préalablement, les bactéries lactiques ont été mises en culture une nuit dans le milieu de culture MRS, puis 30ml de bouillon sont centrifugés et concentrés 10 fois par reprise du culot dans 3ml de milieu. La suspension est stockée à température ambiante. Des prélèvements faits à différents moments permettent de réaliser les dénombrements. Le milieu gélose utilisé dépend de la souche recherchée, l'incubation est de 48h à 30°C.
Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 1 ci-dessous qui présente le suivi de la population de bactéries lactiques selon l'invention dans une composition détergente en fonction du temps.
Comparativement au comportement de la majorité des souches qui meurent très rapidement dans une solution détergente, les souches selon l'invention sont capables de survivre dans cette solution pendant au moins 20 jours. Notamment, on observe le maintien de la viabilité après une courte phase initiale de décroissance, à température ambiante, pour l'ensemble des souches testées.
Exemple n°2 : Activité anti-L/sfer/a des compositions de bactéries lactiques selon l'invention dans des solutions liquides
2.1 : La survie des souches de bactéries lactiques sur lame de verre à 4°C a été mesurée
Lames de verre de dimension 76 x 26 mm, dégraissées. Avant emploi ces lames sont rincées successivemenfl fois à l'éau de javel, 3 fois à l'eau distillée et 1 fois à Péthanol. Elles sont ensuite séchées sous une hotte à flux laminaire.
Sur les lames préparées, les souches sont déposées (goutte ou pulvérisation) sous forme d'un bouillon d'une nuit de la souche testée. Si l'essai porte sur la souche seule, 50μl sont déposés, si l'essai porte sur une association de souches, 25μl de chaque souche sont déposés. Les lames sont ensuite laissées à sécher sous la hotte à flux laminaire pendant une heure, puis stockées à +4°C après avoir été mises dans des boîtes de Pétri. Une lame est prélevée à différents temps pour réaliser les dénombrements.
Dénombrement des bactéries sur la surface de la lame : Les bactéries sont récupérées par écouvillonnage. L'écouvillon est mis dans un tube de tryptone sel, agité au vortex pendant 30 s et ensuite les dénombrements sont effectués à partir de la suspension dans le Tryptone sel. Le milieu gélose utilisé dépend de la souche recherchée. Dans le cas des associations, la flore lactique est recherchée sur MRS ou M17 ( fonction de la souche) incubation 48h à 30°C dans tous les cas.
Les résultats obtenus sont présentés sur le tableau 2 ci-dessous qui présente le suivi de la population de bactéries lactiques selon l'invention sur une lame de verre en fonction du temps.
Tableau 2
Les souches testées, Pediococcus acidilactici I-3024 et Lactobacillus sakei I - 2479 montrent leur capacité à survivre et à croître sur une lame de verre à 4°C pendant au minimum 5 jours.
2.2 : L'effet protecteur de la solution contenant Pedicocccus acidilactici CNCM I- 3024 a été mesurée suite à l'implantation ultérieure de Listeria.
L'activité anW-Listeria a été testée sur une surface dure (en verre) dans un réfrigérateur (+4°C).
Les lames de verre ont été préparées de la même manière qu'au point 2.1.
La surface de la lame de verre est nettoyée par pulvérisation d'une solution contenant des germes vivants de Pediococcus acidilactici I-3024 et est ensuite soumise à une contamination par une suspension de cellules de Listeria. La quantité de Listeria déposée sur la lame est de 7 105 cfu / lame.
Puis la population de Listeria résiduelle est dénombrée comme indiquée au point 2.1 sur milieu Oxford avec une incubation de 48 h à 30°C.
Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 3 ci-après qui présente le suivi de la population de Listeria sur une lame de verre sur laquelle sont appliquées les bactéries lactiques selon l'invention en fonction du temps.
Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 3 ci-dessous.
Tableau 3 :
On observe une diminution immédiate de la population de Listeria déposée sur la surface nettoyée. Cette diminution est plus importante sur la surface de verre préalablement nettoyée avec la solution contenant P. acidilactici I-3024 par rapport au témoin (Listeria seule). Sur la lame témoin il reste 7 10
5 Liste ri a/lame alors qu'avec la solution contenant Pediococcus acidilactici I-3024 il ne reste que 7 10
4
à 0 jour, c'est à dire immédiatement après application. Cet écart s'accentue dans le temps et au bout de 5 jours il reste 300 Listerialla e sur la lame témoin et 3 L/sfer/a/lame sur la lame préalablement nettoyée avec la solution contenant P. acidilactici I-3024.
2.3 : L'effet anti-L/sfeπa immédiat et rémanent de la solution contenant Pediococcus acidilactici I-3024 a été mesurée suite à l'implantation préalable de cellules de Listeria sur une surface de verre.
Les lames de verre ont été préparées comme décrit précédemment au point 2.1.
La surface de la lame de verre est contaminée volontairement avec une suspension de Listeria à raison de 7 105 cfu/lame. Une solution contenant des germes vivants de Pediococcus acidilactici I-3024 est pulvérisée sur cette surface. La quantité de Pediococcus acidilactici I-3024 pulvérisée sur la lame est de 1 107 cfu / lame.
Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 4 ci-après qui présente le suivi de la population de Listeria sur une lame de verre sur laquelle sont appliquées les bactéries lactiques selon l'invention en fonction du temps.
Tableau 4 :
Une diminution immédiate est observée dès la pulvérisation des bactéries selon l'invention réduisant la population de Listeria à 8 104 cfu/lame. De plus, la diminution du nombre de Listeria sur la lame ainsi pulvérisée est plus rapide que sur la lame non pulvérisée: Listeria non détectée sur la lame après 5 jours contre 300, sur le témoin.
Exemple 3 : Activité anti-L/sfer/a des compositions de bactéries lactiques selon l'invention dans des solutions détergentes sous forme solide (lingettes)
3.1 : Survie des souches de bactéries lactiques dans les lingettes imbibées de solution détergente à température ambiante
Des lingettes de polyester coton sont découpées en carrés de 4 cm2 (2 cm / 2 cm), puis placées dans des boîtes de Pétri.
Les bactéries lactiques selon l'invention sont mises en suspension soit dans un milieu de culture soit dans la solution détergente à tester. La souche de bactéries lactiques à tester est déposée sur chaque Iingette à raison de 100μl par Iingette. Après imprégnation des lingettes avec les différentes solutions, les lingettes sont disposées dans des boîtes, qui sont fermées avec du parafilm et conservées à température ambiante (20 - 25 °C).
. Dénombrements des souches contenues dans les lingettes: Pour réaliser les dénombrements, mettre 40 ml de tryptone sel dans un sac stomacher (sans filtre) puis y déposer une Iingette. Mettre le sac au stomacher pendant une minute à 230 rpm / minute. Le dénombrement est effectué sur la suspension obtenue. Le milieu gélose utilisé dépend de la souche recherchée. Dans le cas des associations, la flore lactique est recherchée sur MRS incubation 48h à 30°C dans tous les cas
Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 5 qui présente le suivi de la population d'une souche de bactéries lactiques selon l'invention sur une Iingette.
Tableau 5
La souche testée, Pediococcus acidilactici I-3024 a montré sa capacité à survivre sur une Iingette pendant au minimum 6 jours.
3.2 : Action des lingettes ensemencées en souche de bactéries lactiques sur lames de verre contaminées par Listeria
Une Iingette de coton polyester est imbibée d'une solution détergente contenant des germes vivants soit de Pediococcus acidilactici I-3024, soit de Lactobacillus sakei I - 2479.
Une surface de verre est contaminée volontairement avec une suspension de Listeria 4,7 10 5 cfu / lame. La Iingette est employée pour essuyer la surface de verre contaminée. Puis la population de Listeria résiduelle est dénombrée comme indiquée au point 3.1 sur milieu Oxford avec une incubation de 48 h à 30°C. La population résiduelle immédiatement après l'action mécanique de la Iingette est de 17 Listeria par lame avec Pediococcus acidilactici I-3024 et de 127 Listeria par lame avec Lactobacillus sakei I - 2479.
Les résultats obtenus sont présentés sur la figure 1.
24 heures après ce nettoyage la population résiduelle de Listeria est non détectable sur la lame essuyée avec la Iingette contenant la solution détergente en présence de Pediococcus acidilactici I-3024 ou en présence de Lactobacillus sakei I - 2479.
Lors du nettoyage de la surface contaminée avec la Iingette imprégnée de souches de bactérie lactiques, il y a transfert de la souche sur la surface en verre, ce qui provoque l'élimination des Listeria.
On dénombre 2 103 cellules de Pediococcus acidilactici I-3024 transférées sur la lame au cours de l'essuyage avec la Iingette.