WO2004083857A1

WO2004083857A1 - 生理活性検定法及び装置

Info

Publication number: WO2004083857A1
Application number: PCT/JP2004/003561
Authority: WO
Inventors: Hiroyuki Iyozumi; Kimihiko Kato; Takahiro Makino; Makiichi Takagaki; Kozo Nagayama; Hiroshi Tsuchiya; Hiroe Honzawa; Masami Sugie; Keiko Katoh; Koji Baba
Original assignee: Shizuoka Prefecture; Nippon Soda Co., Ltd.; Hamamatsu Photonics K.K.
Priority date: 2003-03-17
Filing date: 2004-03-17
Publication date: 2004-09-30
Also published as: JP4247350B2; JP2004279276A

Abstract

被検物質の、植物に対する生理活性の高さを評価する生理活性評価方法であって、複数の被検物質のそれぞれを、同種の植物の試料に接触させた後、それぞれ発光誘起物質を更に接触させて、生じる発光の発光強度を測定し、発光強度の大きさに従って前記被検物質の生理活性の高さを判定することを特徴とする評価方法。

Description

明細書

生理活性検定法及び装置

技術分野

【0 0 0 1】本発明は、生理活性検定法及び装置に関し、より詳しくは、被検物質の植物に対する生理活性の高さを評価する評価方法及び装置に関する。背景技術

【0 0 0 2】近年の合成技術の発達に伴って、様々な新規化学物質が合成されている。これらの化学物質が有する特性、特に生物体に対する活性を簡便に評価することは、得られた化学物質がどのような目的に適用できるのかを知る上で重要な意義を有している。，

【0 0 0 3】化学物質を植物に処理した際に植物に生じる生理特性の変化、例えば、病害に対する抵抗性の向上又は低下、生育の促進又は抑制、障害の発生等の変化を評価する方法としては、化学物質を植物に接触させ、植物体内に生じる特定遺伝子の発現、新規物質の生産、既知物質の増加又は減少等の変化を所定の測定手段により直接測定して得られた値を評価する方法が知られている。

【0 0 0 4】しかしながら、上記の方法には、以下に示すような幾つかの問題点があった。まず第 1に、植物に現れる変化の評価結果が観察者の主観によって左右される場合があるため、評価にばらつきが生じるおそれがあった。第 2に、植物体内の変化を確認する上記所定の測定手段としては、感染特異たんぱく質、ホルモン類、各種酵素群さらには活性酸素種の活性化などを、質量分析型の液体クロマトグラフや電子スピン共鳴装置などの高度な装置を用いて分析を行う方法が知られているが、これらの分析を行う際に要する多大な労力や経済的負担にも拘わらず、正確な評価を行うことは未だ困難であった。

【0 0 0 5】近年では、植物が病害に対して抵抗又は防御反応を行う際には、微弱な発光を生じることが見出されており、この微弱な発光を利用して化学物質の生理活性（病害抵抗性付与能力）を評価する方法も試みられている。具体的には、特開平 6— 3 1 5 3 2 0号公報に開示されているように、化学物質（農薬）を植物に吸収させ、この場合の病害に対する抵抗又は防御反応に起因して生じる微弱発光の量と、化学物質を植物に吸収させなかった場合に生じる微弱発光の量とを比較する評価方法が提案されている。この方法によれば、簡便に且つ測定間のばらつきの少ない評価を行うことが可能であり、植物の変化を直接測定する際の上述したような問題を生じることが少ない。

発明の開示

【0 0 0 6】しかしながら、上記従来の方法においては、植物が発する微弱発光の程度は、抵抗性を誘導する物質以外の物質（例えば、別の生理活性、細胞への害作用等を有する物質）によっても影響される場合があった。このため、上記方法では発光の強度と病害抵抗性との直接的な相関が得られず、純粋に植物の病害抵抗性のみを評価することが困難となる場合もあった。

【0 0 0 7】本明はこのような事情に鑑みてなされたものであり、被検物質の植物に対する生理活性の高さを簡便に評価でき、また別の生理活性による影響の少ない評価方法及び装置を提供することを目的とする。

【0 0 0 8】上記目的を達成するために、本発明は、被検物質の植物に対する生理活性の高さを評価する評価方法であって、複数の被検物質のそれぞれを、同種の植物の試料に接触させた後、それぞれ発光誘起物質を更に接触させて、生じる発光の強度を測定し、発光強度の大きさに従って被検物質の生理活性の高さを判定することを特徴とする。

【0 0 0 9】上記被検物質は、植物における病害抵抗性、生育の促進又は抑制、障害の発生等の所定の生理特性を変化させる性質を有する物質等である。また、発光誘起物質は、上記の所定の生理特性に対応する生理反応、例えば植物の病害抵抗性に対応する植物の抵抗又は防御反応等を生じさせる物質等である。本発明の評価方法においては、まず植物に被検物質を接触させてその生理特性を変化させ、次いで、発光誘起物質を接触させている。ここで、発光誘起物質を接触させる際には、被検物質の接触によって変化した生理特性に対応する生理反応のみが生じることになる。

【0 0 1 0】このため、被検物質の接触により生じる発光の強度は、評価対象とする生理特性にのみ基づくものとなる。つまり、発光の強度は、評価対象とする生理特性にのみ基づいて変化する。したがって、被検物質中に、評価対象とする生理特性は変化させないが、植物に発光を生じさせる作用を有しているような物質が含まれている場合であっても、本発明の評価方法によれば、そのような物質による発光の影響を受けずに、目的とする生理特性に基づく発光のみを観察できるようになる。

【0 0 1 1】このように植物が生理反応を生じる際に発光するメカニズムは必ずしも明らかではないが、以下に示すように考えられる。すなわち、植物において生じる生理反応の多くは生化学的な反応であり、この中には酸化反応が含まれる。特定の物質を処理する等して植物内で酸化反応が生じると、細胞中の様々な分子がかかる酸化反応により励起される。一旦励起された分子は基底状態に戻る際に発光を生じる場合が多いが、細胞内で励起された分子も同様に基底状態に戻る際に発光を生じているものと推察される。酸化反応が生じている植物においても、このようなメカニズムにより発光が生じていると考えられる。

【0 0 1 2】上述の評価方法においては、複数種類の被検物質が有している生理活性の高さを比較しているが、本発明の評価方法によれば、異なる濃度の被検物質を用いて同様の評価を行うことで、より高い生理活性を発揮し得る濃度を判定することもできる。この場合、濃度が異なる被検物質のそれぞれを、同種の植物の試料に接触させた後、それぞれ発光誘起物質を更に接触させ、生じる発光の発光強度を測定し、より大きい発光強度を示した濃度を、最も高い生理活性を発揮し得る濃度、すなわち至適処理濃度であると判定する。

【0 0 1 3】また、複数の被検物質の 1つとして生理活性を有しない基準物質を用い、これを用いた場合の発光強度を基準発光強度とし、これと比較することによって被検物質が生理活性を有するか否か（正負）を評価することもできる。この場合、被検物質を植物の試料に接触させた後、発光誘起物質を更に接触させて、生じる発光の強度を測定して比較発光強度とし、生理活性を有しない基準物質を植物の試料に接触させた後、発光誘起物質を更に接触させて、生じる発光の強度を測定して基準発光強度とし、基準発光強度よりも有意に大きい比較発光強度を示す被検物質を正の生理活性を有すると判定し、基準発光強度よりも有意に小さい比較発光強度を示す被検物質を負の生理活性を有すると判定する。基準物質としては、被検物質が溶液等の状態で用いられる場合はその溶媒が好ましく、水（特に蒸留水）がより好ましい。

【0 0 1 4】一方、被検物質が生理活性を有するか否か（正負）を評価する他の方法としては、被検物質を植物の試料に接触させた後、発光誘起物質を更に接触させて、生じる発光の強度を測定して比較発光強度とし、被検物質を植物の試料に接触させずに、発光誘起物質を試料に接触させて生じる発光の強度を測定して基準発光強度とし、基準発光強度よりも有意に大きい比較発光強度を示す被検物質を正の生理活性を有すると判定し、基準発光強度よりも有意に小さい比較発光強度を示す被検物質を負の生理活性を有すると判定する方法も挙げられる。

【0 0 1 5】また、本発明によれば、被検物質を植物の試料に接触させてから、発光誘起物質を更に接触させるまでに生じる発光のパターンに基づいて被検物質の植物に対する害作用の有無を判定することも可能となる。

【0 0 1 6】これらの生理活性の評価方法に用いられる植物の試料は、培地で培養された植物の細胞であると、同種の植物の試料を均質に調製しやすいため好ましい。

【0 0 1 7】本発明による生理活性評価装置は、本発明の生理活性評価方法を好適に実施するための装置であって、植物の試料を収容可能な複数の試験管を個々に保持して回転することにより、各試験管を試薬投入位置から光検出位置まで同時に回動させて搬送する搬送手段と、試薬投入位置にある各試験管に収容された植物の試料に、被検物質又は発光誘起物質を各試験管に対して同時に投入する一群の試薬投入手段と、光検出位置に搬送された各試験管内の植物の試料から生じる発光を同時に検出する一群の光検出手段とを備えることを特徴とする。

【0 0 1 8】上述の装置によれば、複数の植物の試料をそれぞれ試験管に収容し、これらを試薬投入位置から光検出位置まで同時に移動させることができる。従って、各試料について、被検物質の投入、発光誘起物質の投入及び発光の測定をそれぞれ同期させて行うことが可能である。これにより、ほぼ同一の条件で各試料における発光の強度を得ることができ、生理活性の高さをより正確に評価することが可能となる。

【0 0 1 9】上記の装置における搬送手段としては、試験管を保持する複数の保持部を有するターンテーブルが好ましい。また、試験管は同心円上に配置されていることがより好ましい。さらに、複数の試験管は等間隔で配置されていると更に好ましい。

図面の簡単な説明

【0 0 2 0】

図 1は、本発明の一実施形態に係る生理活性評価装置を示す上面図である。図 2は、生理活性評価装置 1の II一 II線に沿う模式断面図である。

図 3は、被検物質として I N A、 S A及ぴ蒸留水を用いた場合、及び、参考例における発光曲線を示すグラフである。

図 4は、植物の試料としてイネの細胞、被検物質としてプロべナゾールを用いた場合のそれぞれの濃度における発光曲線を示すグラフである。

図 5は、植物の試料としてイネの細胞、被検物質として A S Mを用いた場合のそれぞれの濃度における発光曲線を示すグラフである。

図 6は、植物の試料としてタバコの細胞、被検物質として T P Nを用いた場合のそれぞれの濃度における発光曲線を示すグラフである。

図 7は、植物の試料としてイネの細胞、被検物質として I N Aを用いた場合の比較発光曲線と基準発光曲線とを比較するグラフである。

図 8は、植物の試料としてイネの細胞、被検物質として A S Mを用いた場合の比較発光曲線と基準発光曲線とを比較するグラフである。

図 9は、植物の試料としてイネの細胞、被検物質としてプロべナゾールを用いた場合の比較発光曲線と基準宪光曲線とを比較するグラフである。

図 1 0は、植物の試料としてイネの細胞、被検物質としてバリダマイシン Aを用いた場合の比較発光曲線と基準発光曲線とを比較するグラフである。

図 1 1は、植物の試料としてイネの細胞、被検物質としてカルプロパミドを用レヽた場合の比較発光曲線と基準発光曲線とを比較するグラフである。

図 1 2は、植物の試料としてイネの細胞、被検物質として T P Nを用いた場合の比較発光曲線と基準発光曲線とを比較するグラフである。

図 1 3は、植物の試料としてイネの細胞、被検物質としてチオファネートメチルを用いた場合の比較発光曲線と基準発光曲線とを比較するグラフである。図 1 4は、植物の試料としてタバコの細胞、被検物質としてキヤブタンを用いた場合の比較発光曲線と基準発光曲線とを比較するグラフである。

図 1 5は、植物の試料としてタバコの細胞、被検物質として T P Nを用いた場合の比較発光曲線と基準発光曲線とを比較するグラフである。

図 1 6は、植物の試料としてタバコの細胞、被検物質として T P Nを用いた場合の発光曲線と基準発光曲線とを比較すると共に、被検物質添加から発光誘起物質添加までの発光パターンを示すグラフである。

図 1 7は、植物の試料としてタバコの細胞、被検物質として過酸化水素を用いた場合の発光曲線と基準発光曲線とを比較すると共に、被検物質添加から発光誘起物質添加までの発光パターンを示すグラフである。

発明を実施するための最良の形態

【0 0 2 1】以下、本発明の生理活 1"生評価方法の好適な実施形態である第 1〜第 5の方法について説明する。【0 0 2 2】第 1の方法では、複数の被検物質のそれぞれを、同種の植物の試料に接触させた後、それぞれ発光誘起物質を更に接触させて、生じる発光の発光強度を測定し、得られた発光強度の大きさに従ってそれぞれの被検物質の生理活性の高さを判定する。

【0 0 2 3】第 1の方法においては、まず、複数種類の被検物質のそれぞれを、同種の植物の試料に接触させる。用いる被検物質は特に制限されず、任意の化学物質を用いることができる。病害抵抗性を評価する場合には、植物の試料としては、培地で培養された植物の細胞を用いることが好ましく、例えば、イネ、タバコ等の細胞を例示できる。

【0 0 2 4】これらの植物の細胞は、例えば、ビタミン、糖及ぴホルモンを添加した M S培地中で培養することにより得ることができる。培養は、培地及び細胞の入った容器を室温（2 5 °C) 付近、喑所において、 1週間程度振とうさせる等して実施することができる。

【0 0 2 5】植物の試料と被検物質との接触は、上述のようにして培養された植物の細胞を小形の容器に移し、この容器中に被検物質を添加することにより行うことができる。両者の接触は、植物の細胞中に被検物質が吸収されるように行うことが好ましい。このためには、被検物質を希釈液に溶解又は分散させた混合液を、植物の細胞が培養されている培地中に添加することが好ましい。

【0 0 2 6】この場合、希釈液としては、植物の細胞が培養されているのと同じ培地を用いることが好ましい。これにより、細胞及び被検物質の培地中への均一な分散が可能となり、植物の試料と被検物質との接触頻度が増大し、植物の試料中に被検物質がより多く吸収されるようになる。

【0 0 2 7】各被検物質を接触させる植物の試料としては、それぞれ同種の試料を用いることが好ましい。例えば、植物の試料として植物の細胞を用いる場合には、同時に培養された同一の株から得られる細胞を用いることが好ましい。また、培養された細胞を移す小形の容器としては、例えばプラスチック製のペトリ皿を用いることができ、このぺトリ皿の材料は光励起の少ない物質であることが好ましい。

【0 0 2 8】こうして被検物質を植物の試料に接触させた後には、被検物質を植物の試料により確実に吸収させるため、所定の時間植物の試料を放置することが好ましい。放置時間は、用いる植物の試料及ぴ被検物質に応じて適宜変更することができる力概ね 4〜1 2時間である。

【0 0 2 9】次に、被検物質が接触されたそれぞれの植物の試料に、更に発光誘起物質を接触させる。発光誘起物質は、上述の被検物質の接触により植物に生じる生理特性の変化に対応する生理反応を生じさせる物質であり、例えば病害抵抗性の評価を行う場合、発光誘起物質としてはェリシターが好適である。

【0 0 3 0】エリシタ一は、植物の抵抗又は防御反応を誘導する物質である。かかるェリシターとしては、特定の病原菌に対する抵抗性遺伝子を有する植物にのみ抵抗反応を誘導する特異的ェリシターや、植物品種に関係なく抵抗反応を誘導する非特異的ェリシターが例示できる。これらのエリシタ一は、例えば、特定の病原菌に対する被検物質の病害抵抗性付与能力を評価する場合には特異的ェリシターを用いたり、被検物質の有する一般的な病害抵抗性付与能力を評価する場合には非特異的ェリシターを用いたりする等、測定対象の生理特性に応じて適宜選択する。

【0 0 3 1】特異的ェリシターとしては、フィトフトラ .インフエスタンス（P hythophtora infestans) の I N Fェリシチンが例示できる。また、非特異的エリシターとしては、ホーマ属菌（Phoma sp. ) G S 1 2— 2株、ぺニシリゥム ·シンプリシシマム（Penicilliura simplicissimum) G P 1 7— 2株等の培養ろ液成分が例示できる。これらのエリシタ一は、培地で培養することにより得ることができ、植物の試料に接触させる時に培地から分離して用いることができる。

【0 0 3 2】発光誘起物質の植物の試料への接触は、植物の試料中に発光誘起物質が吸収されるように行うことが好ましい。この場合、発光誘起物質を希釈液に溶解又は分散させた混合液を、被検物質が接触された植物の試料に添加することが好ましい。希釈液としては、上記の被検物質を接触させた場合と同様に、植物の細胞が培養されているのと同じ培地を用いることが好ましく、これにより植物の試料への発光誘起物質の吸収量が増大する。

【0 0 3 3】こうして植物の試料に発光誘起物質を接触させた後、後述するような生理活性評価装置等の、微弱な発光の測定が可能な装置を用い、植物の試料の生理反応に基づく発光の測定を行う。発光の測定は、発光誘起物質を接触させる前後に植物の試料から生じる発光を経時的に測定するようにして行う。この場合、測定は、少なくとも発光誘起物質を接触させる前から開始すればよいが、被検物質を接触させた直後から開始するようにしてもよい。このように被検物質を接触させた直後からの発光強度の経時変化を追跡することによって、その後、発光誘起物質を添加させる前後における発光強度の変化を正確に観測することが可能となる。

【0 0 3 4】また、上述したように被検物質を接触させた後、所定時間の放置を行う場合は、かかる放置時間中にも発光の測定を継続することがより好ましレ、。後述するように、この放置中に生じた発光のパターンを基に過去のデータと比較することによって、被検物質の植物に対する害作用の有無を判定することもできる。

【0 0 3 5】そして、それぞれの被検物質について上記の測定によって得られた発光強度の大きさに従って、生理活性の高さを判定する。発光強度の大小の比較は、それぞれの被検物質で得られた、時間に対する発光強度を示す曲線において、発光誘起物質接触後における発光強度の変化の値を時間で積分して得られるピーク面積を比較して行ってもよく、また発光強度のピークの極大値を比較して行ってもよい。 '

【0 0 3 6】得られた発光強度の値は、植物の試料に被検物質を接触させ、更に発光誘起物質を接触させて生じる発光を測定したものである。このため、得られた発光強度は、植物の所定の生理反応にのみ基づくものとなる。従って、より高い生理活性を有する被検物質に接触した植物の試料は、対応する生理反応をより活発に生じるようになるため、より強い発光を示すようになる。反対に、より低い生理活性を有する被検物質に接触した植物の試料は、より弱い発光を示すようになる。このようにして、得られた発光強度の大きさに従って、用いた被検物質のうちょり高い生理活性を有する物質を判定することが可能となる。

【0 0 3 7】以下、第 2〜第 5の方法について説明する。第 1の方法において適用した、好適な被検物質又は発光誘起物質、及びこれらの植物の試料への接触方法、並びに発光強度の測定方法等は、第 2〜第 5の方法においても同様に適用可能である。

【0 0 3 8】第 2の方法においては、濃度が異なる複数の被検物質のそれぞれを、同種の植物の試料に接触させた後、それぞれ発光誘起物質を更に接触させ、生じる発光の発光強度を測定し、複数の濃度の被検物質のうちで最も大きい発光強度を示した濃度を至適処理濃度であると判定する。

【0 0 3 9】具体的には、第 2の方法は、同一種類であってそれぞれ濃度の異なる被検物質を、それぞれ同種の植物の試料に接触させること以外は第 1の方法と同様にして実施する。濃度の異なる被検物質は、それぞれ被検物質を希釈する溶媒量を任意に変化させて調製することができる。そして、各濃度の被検物質を用いて得られた発光強度を比較して、その中で最も大きい発光強度を示した濃度を、その被検物質における至適処理濃度、すなわち最も高い生理活性を発揮し得る濃度であると判定する。

【0 0 4 0】第 3の方法においては、まず、生理活性を有しない物質（基準物質）を植物の試料に接触させて得られる発光の強度を測定して基準発光強度とする。またこれと並行して、各被検物質を用いて発光強度の測定を行い、基準発光強度よりも有意に大きい発光強度（比較発光強度）を示す被検物質を、正の生理活性を有すると判定する。一方、基準発光強度よりも有意に小さい発光強度（比較発光強度）を示す被検物質を、負の生理活性を有すると判定する。この有意性の判断には、公知の検定方法（t検定等）が適用できる。

【0 0 4 1】基準物質は、植物の試料に接触させても植物の生理特性をほとんど変化させない特性を有する物質である。基準物質としては、被検物質が溶媒や担体と混合して供試される場合にはその溶媒や担体が好ましく、なかでも蒸留水が好ましい。

【0 0 4 2】この基準物質を接触させた場合に得られる発光強度（基準発光強度）は、生理特性が向上又は低下が生じていない状態の植物に発光誘起物質が作用して生じる生理反応に基づくものである。換言すれば、この発光強度は、その植物自身が本来有する生理特性にのみ基づく発光強度であるということができる。

【0 0 4 3】被検物質が植物に対して正の生理活性を有している場合には、かかる被検物質を接触させた植物の生理特性が向上する。このため、これに更に発光誘起物質を接触させると、上記生理特性に対応する生理反応が通常よりも活発に行われるようになる。この場合、得られる発光の強度（比較発光強度）は、基準発光強度よりも大きいものとなる。

【0 0 4 4】一方、被検物質が負の生理活性を有している場合には、かかる被検物質を接触させた植物の生理特性が低下し、これにより比較発光強度は、基準発光強度よりも小さくなる。

【0 0 4 5】このように、第 3の方法によれば、各被検物質を用いた場合に得られる発光強度と基準発光強度とを比較することによって、その被検物質が植物の生理特性を向上させ得る物質であるか否かの判定が可能となる。

【0 0 4 6】第 4の方法においては、まず、被検物質を植物の試料に接触させずに、発光誘起物質を植物の試料に接触させて生じる発光の強度を測定して基準発光強度とする。そして、各被検物質を接触させて発光強度の測定を行い、基準発光強度よりも有意に大きい発光強度（比較発光強度）を示す被検物質を正の生理活性を有すると判定する。一方、基準発光強度よりも有意に小さい発光強度（比較発光強度）を示す被検物質を負の生理活性を有すると判定する。かかる方法は、例えば、被検物質が溶媒や担体等と混合されずに用いられる場合に好ましく適用できる。

【0 0 4 7】被検物質を接触させずに発光誘起物質を接触させて得られる基準発光強度は、上述した基準物質を接触させた場合と同様、生理特性が変化していない植物に発光誘起物質が作用して生じる生理反応に基づくものである。換言すれば、この発光の強度は、その植物自身が本来有する生理特性に基づく発光強度であるということができる。

【0 0 4 8】従って、基準発光強度よりも大きい発光強度を示した被検物質は正の生理活性を有していると判定することができる。一方、基準発光強度よりも小さい発光強度を示した被検物質は、負の生理活性を有していると判定することができる。

【0 0 4 9】このように、第 4の方法によっても、各被検物質を用いた場合に得られる発光強度と基準発光強度とを比較することによって、その被検物質が植物の生理特性を向上させ得る物質であるか否かの判定が可能となる。

【0 0 5 0】第 5の方法においては、上記第 1〜第 4のいずれかの方法における、被検物質を植物の試料に接触させてから、発光誘起物質を更に接触させるまでに生じる発光のパターンに基づいて被検物質の植物に対する害作用の有無を判定する。

【0 0 5 1】例えば、第 3又は第 4のいずれかの方法によって正の生理活性を有すると判定された被検物質の中には、植物に特定の生理特性を向上させる作用を有する（すなわち、正の生理活性を有する）と同時に、植物の細胞死を引き起こす等の害作用を有しているものがある。通常、このような害作用を同時に有する被検物質は、被検物質の添加後、概ね 0〜1 2時間の間に特徴的な発光のパターンを示す場合が多い。【0 0 5 2】そこで、第 5の方法においては、まず、従来害作用を有していることが知られている物質を用いた場合の、被検物質の接触から発光誘起物質の接触までの発光のパターンを予め測定しておく。次いで、害作用を有しているか否かが未知である被検物質を用いた場合における同様の発光のパターンを測定する。

【0 0 5 3】そして、害作用を有している物質は、上述の如く特徴的な発光パターンを示す傾向にあることから、害作用が未知である物質が、害作用を有している物質を用いた場合と同様の発光パターンを示す場合には、当該害作用が未知である物質は、害作用を有しているものと判定することができる。

【0 0 5 4】このように、被検物質の接触から発光誘起物質の接触までに得られる発光のパターンを比較することによって、類似の発光パターンを示す被検物質を、害作用を有する物質であると判定することができる。

【0 0 5 5】また、上記 1〜 5の方法以外に、本発明の生理活性評価方法を応用することで、生理活性を有する物質のスクリーニングを行うことも可能である。【0 0 5 6】すなわち、まず、植物の試料に生理活性を有しない基準物質を用いて得られる発光、又は、植物の試料に被検物質を接触させずに得られる発光の発光強度を基準発光強度とする。また、複数の被検物質を用い、それぞれの被検物質を植物の試料に接触させた場合における発光強度を測定する。そして、これらの発光強度をそれぞれ比較して、基準発光強度以上であって最も大きい発光強度を与えた被検物質を、最も優れた生理活性を有する物質としてスクリーニングすることができる。

【0 0 5 7】次に、本発明の生理活性評価装置の一実施形態について、図 1及ぴ図 2を参照しつつ説明する。図 1は、本発明の一実施形態に係る生理活 1"生評価装置を示す上面図であり、図 2は、生理活性評価装置 1の II一 II線に沿う模式断面図である。

【0 0 5 8】図 1に示される生理活性評価装置 1は、試料を内部に収容する試験管 2 2を複数の保持部 2 0において個々に保持して各試験管 2 2を試薬投入位置から光検出位置まで移動させる搬送装置 2 (搬送手段)、被検物質又は発光誘起物質を試験管中に投入する一群の試料投入部 1 0 (試薬投入手段）、及び、植物の試料からの発光を検出する一群の光検出部 8 (光検出手段）から構成されている。【0 0 5 9】この生理活性評価装置 1においては、試料投入部 1 0と光検出部 8が交互に設けられており、それぞれの位置で各保持部 2 0と対向している。ここで、試料投入部 1 0に対向する位置が試薬投入位置、光検出部 8に対向する位置が光検出位置にそれぞれ該当する。このような構成を有する生理活性評価装置 1は、外部の光の影響を極力無くすため、例えば暗箱（図示せず）等の中に設置されることが好ましい。

【0 0 6 0】搬送装置 2は、回転可能なターンテーブル 4及びこのターンテープル 4を支持して回転させる支持台 6から構成されている。かかるターンテープノレ 4にはその回転中心を中心とした同心円上に複数の保持部 2 0が等間隔で設けられている。また、保持部 2 0には内部に植物の試料等を収容する試験管 2 2が保持されている。

【0 0 6 1】試料投入部 1 0は、試験管 2 2中に投入される試薬である被検物質又は発光誘起物質を収容する試料収容部 1 2、試薬の投入を制御する投入制御部 1 4、及び投入制御部 1 4の働きにより試料収容部 1 2から一定量放出された試薬を試験管 2 2内に投入するための投入管 1 6から構成されている。

【0 0 6 2】光検出部 8は、試験管内に収容された植物の試料が発する発光を検出する機能を有するものである。この光検出部 8には、分光フィルタ 3 6、遮光シャツタ 3 2、光電子増倍管 3 4、及び検出制御処理部 3 0が、搬送装置 2側からこの順に設けられている。また、支持台 6及びターンテーブル 4の光検出位置における光検出部 8側の側壁には、植物の試料等が発する発光を光検出部 8に到達させるために光透過窓 4 0及ぴ 4 2がそれぞれ設けられている。

【0 0 6 3】以下、生理活性評価装置 1を用いた生理活性評価方法について上述した第 1〜第 5の方法に対応させて説明する。

【0 0 6 4】第 1の方法では、まず、内部にそれぞれ同種の植物の試料が収容された複数の試験管 2 2を、搬送装置 2における保持部 2 0に設置し、ターンテ一ブル 4を回転させてそれぞれの試験管 2 2を試薬投入位置に移動させる。【0 0 6 5】次に、試薬投入位置において、試料投入部 1 0ごとにそれぞれ異なる種類の被検物質を収容した試料収容部 1 2から、各被検物質を投入管 1 6を通して各試験管 2 2内に同時に投入する。これにより各試験管 2 2中の植物の試料に、それぞれ異なる種類の被検物質が接触する。試料投入部 1 0による被検物質の投入は、投入制御部 1 4により制御されており、全ての試料投入部 1 0で同期して実施される。すなわち、被検物質の投入は測定対象の全ての試験管 2 2に対して同時に行われる。

【0 0 6 6】被検物質の投入後、ターンテーブル 4を回転させて各試験管 2 2 を試薬投入位置から光検出位置まで同時に移動させる。その後、一定時間静置しながら、光検出部 8において、各試験管 2 2から発生する光の強度を測定する。【0 0 6 7】ここで、光の強度は、以下に示すようにして測定される。まず、各試験管 2 2に収容されたそれぞれの植物の試料等から生じた発光が、試験管 2 2から透過窓 4 2及び 4 0を通って分光フィルタ 3 6に到達する。

【0 0 6 8】遮光シャツタ 3 2の開放時には、この分光フィルタ 3 6によって分光された光は、光電子增倍管 3 4によって増倍され、増倍された光は検出制御処理部 3 0に到達する。当該処理部 3 0は、到達した光における時間ごとの光の量子（フオトン）数をカウントして、この光量子数を試料から生じた光の強度として測定する。こうして得られた光の量子数は、検出制御処理部 3 0に接続された外部演算装置（図示せず）によって時間ごとの量子数としてグラフ化される。【0 0 6 9】なお、光検出部 8においては、生理活性の評価における一連の操作中、遮光シャツタ 3 2が常時開放された状態となっている。つまり、光検出部 8は常に測定可能な状態に保たれている。従って、各試験管が光検出位置に到達すると同時に光の検出が開始され、これにより測定対象の全ての試験管 2 2において被検物質の投入から同一の時間経過後に測定を開始することが可能となる。

【0 0 7 0】このようにして光の強度を測定しながら一定時間の静置を行った後、ターンテーブル 4を上記と逆の方向に回転させて各試験管 2 2を光検出位置から被検物質の投入を行った試薬投入位置まで戻すか、或いは、ターンテーブル 4を上記と同一方向に回転させて各試験管 2 2を次の試薬投入位置まで進める。その後、試料投入部 1 0より発光誘起物質を各試験管 2 2に同時に投入する。このようにして、被検物質が接触された植物の試料に、更に発光誘起物質を接触させる。

【0 0 7 1】この場合、試料投入部 1◦における被検物質と発光誘起物質との入れ換えは、被検物質が収容された試料収容部 1 2のュニットと発光誘起物質が収容された試料収容部 1 2のュ-ットをそれぞれ組み替えることにより実施することができる。または、一群の試料投入部 1 0の試料収容部 1 2に、交互に被検物質、発光誘起物質を収容して、ターンテープノレ 4を同一方向に回動させるようにしてもよい。こうすると、上述したように試料投入部 1 2のユニットを組み替えることなく、被検物質及び発光誘起物質を投入することが可能となる。

【0 0 7 2】発光誘起物質の投入後、再びターンテープル 4を回転させ、各試験管 2 2を試薬投入位置から光検出位置まで同時に移動させる。各試験管 2 2が光検出位置に到達するのと同時に、上述した方法と同様にしてそれぞれの試料から生じる光の強度の測定が開始され、これにより時間ごとに生じた光の量子数がグラフ化される。

【0 0 7 3】そして、第 1の方法においては、それぞれの試験管 2 2において得られた経過時間に対する光の強度（量子数）のグラフを比較し、発光誘起物質の投入後に、より大きい発光強度を示した被検物質を、より高い生理活性を有するものと判定する。かかる比較は、得られたグラフをそれぞれ視認して比較することにより行うことができるが、接続された外部演算装置が自動的に比較する機能を有していてもよい。

【0 0 7 4】第 2の方法においては、各試験管 2 2に投入される被検物質として、同一種であってそれぞれ濃度の異なる複数の被検物質を用いること以外は第

1の方法と同様にしてそれぞれ発光強度の測定を行う。そして、それぞれの試験管 2 2について得られた発光強度を比較し、最も大きい発光強度を示した試験管 2 2における被検物質濃度を至適処理濃度であると判定する。

【0 0 7 5】第 3の方法においては、試験管 2 2に投入される被検物質のうち少なくとも 1つを、生理活性を有しない基準物質と置き換えること以外は、第 1 の方法と同様にしてそれぞれ発光強度の測定を行う。そして、基準物質を接触させた試験管 2 2において得られる発光強度を基準発光強度とし、基準物質以外の被検物質を接触させた各試験管 2 2について得られる比較発光強度とそれぞれ比較して、用いた被検物質の生理活性の正負を判定する。

【0 0 7 6】第 4の方法においては、植物の試料が収容された試験管 2 2のうち少なくとも 1つに被検物質を投入せずに、他は第 1の方法と同様にしてそれぞれの発光強度の測定を行う。そして、被検物質を接触させなかった試験管 2 2において得られる発光強度を基準発光強度とし、被検物質を接触させた各試験管 2 2について得られる比較発光強度とそれぞれ比較して、用いた被検物質の生理活性の正負を判定する。

【0 0 7 7】また、第 5の方法を実施する場合、第 1〜第 4の方法において得られた被検物質の投入から発光誘起物質の投入までの時間に対する発光の強度の変化（発光のパターン）を、害作用を有する物質により過去に得られた発光パターンと比較する。そして、発光パターンが類似しているか否かを視認することにより、それぞれの被検物質が害作用を有しているか否かを判定する。

【0 0 7 8】以上、本発明の生理活性評価方法に好適な生理活性評価装置の実施形態を説明したが、本発明の生理活性評価装置は上記実施形態に限定されるものではなく、その要旨を逸脱しない限り様々な変形が可能である。【0 0 7 9】例えば、まず、ターンテーブル 4に設けられた複数の保持部 2 0 は、必ずしも同心円上に等間隔で配置されている必要はなく、ターンテーブル 4 の回転によって、試料投入部 1 0及び光検出部 8とそれぞれ対向できるように設けられている限り、他の形態であってもよい。

【0 0 8 0】具体的には、隣接する 2つの測定対象の保持部 2 0とターンテープル 4の中心部とを結ぶ直線が成す角度が、瞵接する 2つの試料投入を行う試料投入部 1 0と上記中心部とを結ぶ直線が成す角度、及び、隣接する 2つの光の測定を実施する光検出部 8と上記中心部とを結ぶ直線が成す角度とそれぞれ等しければ、測定対象の複数の保持部 2 0は、ターンテーブル 4の回転により試料投入部 1 0又は光検出部 8とそれぞれ対向させることができる。これにより各試料を同期させた測定が可能となる。

【0 0 8 1】また、試料投入部 1 0における被検物質と発光誘導物質との切り替えは、同一の試薬投入位置に対して、被検物質用の試料収容部 1 2、投入制御部 1 4及び投入管 1 6と、発光誘起物質用の試料収容部 1 2、投入制御部 1 4及び投入管 1 6とを併せて設け、これらを試薬投入のタイミングに合わせて切り替えるようにしてもよい。こうすれば、試料収容部 1 2のユエットを組み替えることなく被検物質と発光誘起物質の投入を切り替えることができる。

【0 0 8 2】さらに、光検出部 8は、搬送装置 2の側面において各試験管 2 2 と対向するように設けられているが、光の検出が可能である限り対向する位置からずれていてもよい。例えば、試験管 2 2側面に対して斜め方向から光の検出を行ってもよく、試験管 2 2の開口部から検出を行ってもよい。

【0 0 8 3】このように構成された生理活性評価装置 1によれば、ターンテーブル 4の回転のみで試薬の投入及び光の検出をそれぞれの試験管 2 2で同時に行うことができるようになる。このため、上記本発明の生理活性測定方法を簡易に実施することができるばかりでなく、それぞれの測定対象をほぼ同一の条件で測定することができ、これにより極めて正確な比較及び評価を行うことが可能となる。

[実施例]

【0 0 8 4】以下、本発明の生理活性評価方法を、その一例である病害抵抗性付与能力の評価を実施することにより更に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

[病害抵抗性付与能力の高さの判定]

【0 0 8 5】まず、植物の試料であるイネの細胞をビタミン、糖及ぴホモンを添加した M S培地で、 2 5 °C、暗所、 1 1 0〜1 2 0 r p mの条件で 1週間振とう培養した。

【0 0 8 6】次いで、培養したイネの細胞を静置して、細胞と水分が等量となるように上清を除いて細胞懸濁液とし、得られた細胞懸濁液の 3 . 5 m Lをプラスチック製の小型のぺトリ皿に移した。

【0 0 8 7】被検物質として 2， 6—ジクロ口イソニコチン酸（ I NA)、サリチル酸（S A) 及び蒸留水を用い、かかる被検物質をそれぞれ希釈液である上述の M S培地に溶解させて 4 0 0 μ Μの混合液とした。この混合液の上記細胞懸濁液と等量をぺトリ皿中に添加して、被検物質濃度が 2 0 0 Μである測定液を調製し、得られた測定液の発光の測定を開始した。

【0 0 8 8】発光の測定開始から 1 2時間経過した後、発光の測定を継続しながら、それぞれの測定液に、ェリシター溶液を 3 5 0 Lずつ添加した。ここで、ェリシター溶液は、 7 Θ間 P D液体培地で培養した発光誘起物質（ェリシター）であるホーマ属菌（Phoraa sp. ) G S 1 2— 2株の液体培養物から、ろ紙で菌糸を除去し、更に 0 . 2 μ πι孔径のメンブレンフィルターでろ過滅菌して得られたものである。こうしてエリシター溶液を添加した後、更に 2 0時間発光の測定を行つた。

【0 0 8 9】そして、得られた発光の強度をその大きさに従って、それぞれの被検物質が有する病害抵抗性付与能力の高さを判定した。また、参考例として、被検物質として蒸留水を用いて得られた測定液に、ェリシターを添 ¾!しなかった場合について発光の測定を行った。

【0 0 9 0】図 3は、被検物質として I NA、 S A及び蒸留水を用いた場合、及び、参考例における測定時間に対する発光強度の変化（測定時間に対する発光強度の変化を以下、「発光曲線」という。）を示すグラフである。図 3中、 L 3 1は I NAを用いた場合、 L 3 2は S Aを用いた場合、 L 3 3は蒸留水を用いた場合、 L 3 4は参考例における発光曲線をそれぞれ示している。また、矢印はェリシターを添加した時点を示している。

【0 0 9 1】図 3より、用いた被検物質の中では I NA、 S A、蒸留水の順に病害抵抗性付与能力が高いことが判明した。また、ェリシターを用いない場合は発光が生じないことが判明した。さらに、蒸留水は、通常、イネに対する病害抵抗性付与能力を有していないことから、蒸留水よりも大きな発光強度を示した I N A及ぴ S Aの双方とも病害抵抗性付与能力を有している（正の生理活性を有する）ことが判明した。

[被検物質の至適処理濃度の判定]

(ィネの細胞を用レ、た場合）

【0 0 9 2】植物の試料としてイネの細胞、被検物質として各濃度のプロべナゾール、各濃度のァシベンゾラルー S—メチル（A S M) 又は蒸留水を用いたこと以外は、上記「病害抵抗性付与能力の高さの判定」と同様にしてそれぞれの発光の測定を行った。なお、ェリシター添加後の発光の測定は 1 2時間行った。

【0 0 9 3】図 4は、植物の試料としてイネの細胞、被検物質としてプロべナゾールを用いた場合のそれぞれの濃度における発光曲線を示す。また、図 5は植物の試料としてイネの細胞、被検物質として A S Mを用いた場合のそれぞれの濃度における発光曲線を示す。図 4中、 L 4 1は 2 0 0 μ Μのプロべナゾール、 L 4 2は 2 0 X Μのプロべナゾール、 L 4 3は蒸留水を用いた場合の発光曲線をそれぞれ示している。また、図 5中、 L 5 1は 2 0 0 1^の 3 ]\4、 L 5 2は 2 0 ；xMのASM、 L 5 3は蒸留水を用いた場合の発光曲線をそれぞれ示している。【0 0 9 4】図 4より、被検物質としてプロべナゾールを用いた場合は、 2 0 0 Mが至適処理濃度であることが判明した。また 2 0 Mのプロべナゾールを用いた場合の発光強度は蒸留水を用いた場合よりも小さく、かかる濃度のプロべナゾールは病害抵抗性付与能力を有していない（負の生理活性を有する）ことが判明した。

【0 0 9 5】また、図 5より、被検物質として ASMを用いた場合は 2 0 0 Mが至適処理濃度であることが判明した。 AS Mの場合は 2 0 0 μ Μ及び 2 0 μ Μのどちらも発光強度が蒸留水処理の場合より大きく、いずれの濃度の A SMも病害抵抗性付与能力を有していることが判明した。

(タバコの細胞を用いた場合）

【0 0 9 6】植物の試料としてタバコの細胞、被検物質として各濃度のク口口タロニル（T PN) を用いたこと以外は、上記「病害抵抗性付与能力の高さの判定」と同様にしてそれぞれの発光の測定を行った。なお、ェリシター添加後の発光の測定は 1 2時間行った。

【0 0 9 7】図 6は、植物の試料としてタバコの細胞、被検物質として T P N を用いた場合のそれぞれの濃度における発光曲線をそれぞれ示す。図 6中、 L 6 1は 2mMの T PN、 L 6 2は 20 0 /i Mの T P N、 L 6 3は蒸留水を用いた場合の発光曲線をそれぞれ示している。

【0 0 9 8】図 6より、被検物質として T P Nを用いた場合の至適処理濃度は 2ιηΜであった。し力、し、 2mM及ぴ 2 0 0 μΜのどちらの場合も蒸留水の場合よりも発光強度が小さかったことから、 Τ ΡΝは、双方の濃度において病害抵抗性付与能力を有していないことが判明した。

[病害抵抗性付与能力の有無の判定]

(イネの細胞を用いた場合）

【0 0 9 9】植物の試料としてイネの細胞、被検物質として I NA、 ASM、プロべナゾーノレ、バリダマイシン A、力ノレプロノヽ。ミド、 TPN、チオファネートメチル又は蒸留水を用い、更にそれぞれの測定液の被検物質濃度を 200 zMとしたこと以外は、上記「病害抵抗性付与能力の高さの判定」と同様にしてそれぞれの発光の測定を行った。なお、ェリシター添加後の発光の測定は 12時間行つた。

【0100】被検物質のうちの蒸留水を基準物質とし、蒸留水を用いて得られた発光強度を基準発光強度とした。そして、かかる基準発光強度と各種の被検物質を用いて得られた発光強度とをそれぞれ比較することにより、各被検物質が有する病害抵抗性付与能力の有無の判定を行つた。

【0101】図 7〜図 1 3は、植物の試料としてイネの細胞、被検物質として上記各物質を用いた場合の発光の測定時間に対する発光強度の変化 (以下、「比較発光曲線」という）と、測定時間に対する基準発光強度の変化（以下、「基準発光曲線」とレヽう）とを比較するグラフである。図 7は I NAを用いた場合、図 8は ASMを用いた場合、図 9はプロべナゾールを用いた場合、図 10はバリダマイシン Aを用いた場合、図 1 1はカルプロパミドを用いた場合、図 12は TPNを用いた場合、図 1 3はチオファネートメチルを用いた場合をそれぞれ示す。なお、図 7〜図 1 3中、実線は比較発光曲線を、点線は基準発光曲線を、矢印はェリシター添加時点をそれぞれ示す。なお、それぞれの発光強度は、比較発光曲線及ぴ基準発光曲線のうちで、最も大きかった発光強度を 1とした場合の相対値で示している。

【0102】図 7〜図 1 3より、被検物質として I NA、 ASM、プロべナゾール、バリダマイシン A又はカルプロパミドを用いた場合は、それぞれの発光強度が基準発光強度よりも大きかった（図 7〜図 1 1) ことから、これらの被検物質は病害抵抗性付与能力を有していることが判明した。一方、 TPN及びチオファネートメチルを用いた場合はそれぞれの発光強度が基準発光強度よりも小さかつた（図 1 2及び図 1 3) こと力ゝら、これらの被検物質は病害抵抗性付与能力を有していないことが判明した。

(タバコの細胞を用いた場合）

【0103】植物の試料としてタバコの細胞を用い、被検物質としてキヤプタン、 TPN又は蒸留水を用いたこと以外は、上記「イネの細胞を用いた場合」と同様にしてそれぞれの被検物質が有する病害抵抗性付与能力の有無の判定を行つた。

【0104】図 14及ぴ図 1 5は、それぞれの被検物質を用いた場合の比較発光曲線と基準発光曲線とを比較するグラフである。図 14はキヤブタンを用いた場合、図 1 5は TP Nを用いた場合をそれぞれ示す。なお、図 14及び図 1 5中、実線は比較光曲線、点線は基準発光曲線、矢印はェリシター添加時点をそれぞれ示す。

【0105】図 14及び図 1 5より、被検物質としてキヤブタン又は TPNを用いた場合の発光強度は基準発光強度よりも小さく、どちらも病害抵抗性付与能力を有していないことが判明した。

[被検物質の害作用の判定]

【0106】植物の試料としてタバコの細胞を用い、被検物質として TPN、過酸化水素又は蒸留水を用い、更にそれぞれの測定液の被検物質濃度を' 2 mMとしたこと以外は、上記「病害抵抗性付与能力の高さの判定」と同様にしてそれぞれの発光の測定を行った。そして、被検物質の添加後ェリシターを添加するまでの発光曲線の形状（発光パターン）をそれぞれ観察した。また、 TPN又は過酸化酸素を用いた場合の発光強度と、蒸留水を用いた場合の発光強度（基準発光強度）とをそれぞれ比較することにより、これらの病害抵抗性の有無を判定した。なお、 TPN及び過酸化水素は、タバコの細胞に接触して細胞死を引き起こす物質であることが知られている。このことは、 TPN又は過酸化水素をタバコの細胞に接触させた際に、細胞死に伴って生じるェヴアンスブルー染色細胞の増加が見られたことにより確認された。【0107】図 16は、植物の試料としてタバコの細胞、被検物質として TP Nを用いた場合の比較発光曲線と基準発光曲線とを比較するグラフである。図 1 7は、植物の試料としてタバコの細胞、被検物質として過酸化水素を用いた場合の比較発光曲線と基準発光曲線とを比較するグラフである。図 16中、 L 1 61 は 2mMの TPN、 L 1 62は蒸留水を用いた場合の発光曲線をそれぞれ示している。また、図 1 7中、 L 1 71は 2 mMの過酸化水素、 L 1 72は蒸留水を用 Vヽた場合の発光曲線をそれぞれ示している。

【0108】図 1 6に示されるように、被検物質として TP Nを用いた場合は、被検物質の添加直後にェリシタ一添加直前のおよそ 10倍の発光強度が得られ、それが急激に減衰するという特徴的な発光パターンが認められた。また、 TPN を用いた場合のェリシター添加後の発光強度は基準努光強度よりも小さく、 T P Nは病害抵抗性付与能力を有していないことが確認された。

【0109】一方、図 1 7に示されるように、被検物質として過酸化水素を用いた場合は、被検物質の添加直後に一度発光強度が急激に減じた後、添加から 3 時間後に発光強度のピークが現れるという特徴的な発光パターンが認められた。また、過酸化水素を用いた場合のェリシター添加後の発光強度は基準発光強度よりも大きく、過酸化水素は病害抵抗性付与能力を有していることが確認された。【01 10】以上は、正又は負の生理活性を有する被検物質が害作用を生じる一例であり、上記したような特徴的な発光パターンを示す被検物質は、タバコ細胞の細胞死を高、確率で引き起こすことが判明した。

産業上の利用可能性

【01 1 1】本発明によれば、被検物質の植物に対する生理活性の高さを簡便に評価でき、また測定対象とする生理活性以外の要因による影響を極めて受けにくい評価方法及び装置を提供することが可能となる。

Claims

請求の範囲

1 . 被検物質の、植物に対する生理活性の高さを評価する生理活性評価方法であって、

複数の被検物質のそれぞれを、同種の植物の試料に接触させた後、それぞれ発光誘起物質を更に接触させて、生じる発光の強度を測定し、

前記強度の大きさに従って前記被検物質の生理活性の高さを判定することを特徴とする評価方法。

2 . 被検物質の、植物に対する生理活性の高さを評価する生理活性評価方法であって、

濃度が異なる被検物質のそれぞれを、同種の植物の試料に接触させた後、それぞれ発光誘起物質を更に接触させ、生じる発光の強度を測定し、

より大きい前記強度を示した前記濃度を至適処理濃度であると判定することを特徴とする評価方法。

3 . 被検物質の、植物に対する生理活性の高さを評価する生理活性評価方法であって、

被検物質を植物の試料に接触させた後、発光誘起物質を更に接触させて、生じる発光の強度を測定して比較発光強度とし、

生理活性を有しない基準物質を植物の試料に接触させた後、前記発光誘起物質を更に接触させて、生じる発光の強度を測定して基準発光強度とし、

前記基準発光強度よりも有意に大きい前記比較発光強度を示す被検物質を正の生理活性を有すると判定し、

前記基準発光強度よりも有意に小さい前記比較発光強度を示す被検物質を負の生理活性を有すると判定することを特徴とする評価方法。

4 . 前記基準物質が水であることを特徴とする請求の範囲第 3項記載の評価方法。

5 . 被検物質の、植物に対する生理活性の高さを評価する生理活性評価方法であって、

前記被検物質を植物の試料に接触させずに、前記発光誘起物質を前記試料に接触させて生じる発光の強度を測定して基準発光強度とし、

6 . 被検物質の、植物に対する生理活性の高さを評価する評価方法であって、請求の範囲第 1項〜第 5項のいずれか一項に記載の評価方法において、前記被検物質を植物の試料に接触させてから、前記発光誘起物質を更に接触させるまでに生じる^光のパターンに基づいて前記被検物質の植物に対する害作用の有無を判定することを特徴とする評価方法。

7 . 前記植物の試料が、培地で培養された前記植物の細胞であることを特徴とする請求の範囲第 1項〜第 6項のいずれか一項に記載の評価方法。

8 . 被検物質の、植物に対する生理活性の高さを評価する生理活性評価装置であって、

植物の試料を収容可能な複数の試験管を個々に保持して回転することにより、各試験管を試薬投入位置から光検出位置まで同時に回動させて搬送する搬送手段と、

前記試薬投入位置にある各試験管に収容された前記植物の試料に、被検物質又は発光誘起物質を、前記各試験管に対して同時に投入する一群の試料投入手段と、前記光検出位置に搬送された各試験管内の前記植物の試料から生じる発光を同時に検出する一群の光検出手段と、を備えることを特徴とする評価装置。

9 . 前記搬送手段が、前記試験管を保持する複数の保持部が設けられたターンテーブルであることを特徴とする請求の範囲第 8項記載の評価装置。

10. 前記複数の試験管が、同心円上に配置されるように保持されていることを特徴とする請求の範囲第 8項又は第 9項記載の評価装置。

1 1. 前記複数の試験管が、等間隔で配置されるように保持されていることを特徴とする請求の範囲第 10項記載の評価装置。