WO2004050187A1 - Utilisation d'acide hyaluronique pour les affections respiratoires des voies aeriennes superieures. - Google Patents

Utilisation d'acide hyaluronique pour les affections respiratoires des voies aeriennes superieures. Download PDF

Info

Publication number
WO2004050187A1
WO2004050187A1 PCT/FR2003/003507 FR0303507W WO2004050187A1 WO 2004050187 A1 WO2004050187 A1 WO 2004050187A1 FR 0303507 W FR0303507 W FR 0303507W WO 2004050187 A1 WO2004050187 A1 WO 2004050187A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
hyaluronic acid
respiratory
mucus
molecular weight
solution
Prior art date
Application number
PCT/FR2003/003507
Other languages
English (en)
Inventor
Edith Puchelle
Jean-Marie Zahm
Martine Briet
Béatrice RABY
Régis De Baynast
Franck Launay
Anthony Bresin
Original Assignee
Agro Industrie Recherches Et Developpements (A.R.D.)
Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Agro Industrie Recherches Et Developpements (A.R.D.), Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) filed Critical Agro Industrie Recherches Et Developpements (A.R.D.)
Priority to AU2003294100A priority Critical patent/AU2003294100A1/en
Publication of WO2004050187A1 publication Critical patent/WO2004050187A1/fr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A61K31/728—Hyaluronic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/12—Mucolytics

Definitions

  • the present invention relates to pharmaceutical uses of hyaluronic acid having a therapeutic activity vis-à-vis in particular respiratory affections of the upper airways.
  • hyaluronic acid is also meant its acceptable pharmaceutical salts, such as those of potassium, magnesium, sodium.
  • the integrity of the epithelium of the respiratory mucosa lining the tracheobronchial tree depends on a balance between aggressive factors and the many defense mechanisms that this epithelium has. These mechanisms include a first line of defense made up of mucus and the mucociliary system and a second line of defense made up of the junctional complexes of epithelial cells which form a physical barrier against airborne contaminants.
  • the mucus forms on the surface of the respiratory epithelial cells a protective film mobilized by the ciliary activity.
  • the effectiveness of such a system depends not only on the viscosity properties of the mucus but also on the mucosal-mucous and / or air-mucous interfacial forces. Surface properties are therefore extremely important to consider and preserve in the protective mechanisms of the respiratory mucosa.
  • the bronchial mucosa and mucus are exposed to multiple attacks such as those caused by proteases of bacterial and inflammatory origin which cause a modification of the water properties of the mucus linked to increased absorption of extracellular water, frequent exfoliation of epithelial cells and a change in the biochemical composition of mucus.
  • the respiratory mucosa reacts by increasing the secretion of mucus.
  • This hypersecretion is frequently accompanied by hyperviscosity and a modification of the adhesion properties of the mucus: this notably results in a decrease in the mucociliary purification and a stasis of the mucus which causes bronchial obstruction and disorders. respiratory function.
  • therapies aimed at correcting hypersecretion of mucus and its physico-chemical abnormalities have developed on the basis of the concept that hypersecretion and bronchial obstruction are linked to hyperviscosity. This gave birth to the development and marketing of a large number of molecules with mucolytic activity in order to normalize the hyperviscosity of the mucus.
  • An alteration in the efficiency of mucociliary transport, in connection with the inhalation of numerous infectious or non-infectious agents (atmospheric or occupational pollution), can induce an alteration of the integrity of the epithelial barrier and lead to more or less significant lesions. of the respiratory epithelium. These lesions can range from the loss of the junctionality of the epithelial barrier to complete epithelial scaling.
  • fibronectin extracellular matrix
  • growth factors epidermal growth factor
  • factor of growth of hepatocytes hepatocyte growth factor
  • One of the aims of the present invention is therefore to modify the surface properties of the respiratory mucus in order to promote its transport by ciliary activity and / or by coughing.
  • Another object of the invention is to allow the repair of the respiratory epithelium.
  • a pharmaceutical or hygiene composition containing hyaluronic acid in combination with any other suitable excipient and exhibiting therapeutic activity.
  • hyaluronic acid with a molecular weight of at most 10 5 Da.
  • the hyaluronic acid has a molecular weight of at most 5.10 4 Da.
  • the concentration of hyaluronic acid in the composition is between 0.01 and 10 mg / ml.
  • the hyaluronic acid used is of animal or biotechnological origin; it is advantageously hydrolyzed chemically or enzymatically to obtain a molecular weight of at most 10 5 Daltons.
  • the acid hydrolysis is carried out hot of a hyaluronic acid of animal origin (rooster crest, umbilical cord) or obtained by biotechnological route by fermentation of substrates of plant origin by a bacterium derived from a reference strain NCDO (national collection of dairy organism) 2733.
  • the molecular weight of these hyaluronic acids are generally between 5,000,000 Da and 500,000 Da.
  • our process makes it possible to hydrolyze these hyaluronic acids to obtain a polymer having the biological activities described in the invention and a molecular weight of between 10,000 Da and 49,000 Da. a) to prepare a hydrolyzed hyaluronic acid:
  • hyaluronic acid is dissolved in water at a temperature between 10 ° C and 80 ° C, at a concentration between 1 and 20 g / L, • the pH of the aqueous solution is adjusted to pH included between 1 and 3 by adding a strong acid, • preferably using an amount of hydrochloric acid allowing the pH to be brought to 1.8,
  • the hydrolyzed hyaluronic acid solution is cooled to room temperature by cooling the reactor or by passing through a heat exchanger,
  • the hydrolyzed hyaluronic acid solution is concentrated by passing through a falling flow vacuum evaporator to obtain a volume concentration factor of between 2 and 15, • the sodium chloride concentration is adjusted to 35g / L by adding NaCl crystalline,
  • the volumetric alcoholic strength of the mixture is between 60 ° and 85 °, • after decantation of the hyaluronic acid, the supernatant is removed, then a third solvent is added and a
  • 3 rd precipitate preferably using ethanol having a volumetric alcoholic strength of 96 °, the volumetric alcoholic strength of the mixture is between 85 ° and 96 °, after decanting the hyaluronic acid, the supernatant is removed, then added a fourth solvent and we get a
  • the volumetric alcoholic strength of the solution containing the hydrolyzed hyaluronic acid is between 96 and
  • the alcoholic solution containing the hydrolyzed hyaluronic acid is filtered on media, dried under vacuum at a temperature between
  • the powder is preferably dried at 45 ° C under a vacuum of 900 mbar.
  • the drying time is between 2 and 10 hours and preferably 6 hours.
  • the hyaluronic acid thus obtained has a molecular weight of between 10,000 Da and 49,000 Daltons and the following physicochemical properties:
  • Hyaluronic acid a high molecular weight polysaccharide, is distributed ubiquitously in the extracellular spaces. Among its biological functions, thanks to the physicochemical properties it possesses, hyaluronic acid appears to be involved in water homeostasis and in the lubrication of tissues (TC Laurent and JR Fraser. Faseb J. 6 1992, 6, 2397 -2404). At the pulmonary level, hyaluronic acid has been localized in the basolateral membrane of bronchial epithelial cells (SJ Green et al, J. Cell Sci. 1988, 89, 145-156)
  • hyaluronic acid of biotechnological origin and of different molecular weight (10 6 Da, 8 x 10 4 Da and 4 x 10 4 Da) were studied in an aqueous solution at a concentration of 0.1% by weight, according to the protocol below.
  • a commercial hyaluronic acid is produced, which, until now, is of animal origin (rooster crest, umbilical cord) or was obtained by fermentation from substrates of plant origin.
  • the molecular weight of such a hyaluronic acid is generally between 20,000 and 50,000 Da. This hydrolysis is carried out by dissolving this commercial hyaluronic acid in water until a 10 g / l solution of hyaluronic acid is obtained.
  • hydrochloric acid is added to this solution to obtain a pH between 1 and 2, preferably of the order of 1.8.
  • the mixture is heated to a temperature of approximately 80 ° C. with stirring until the viscosity of the solution no longer changes.
  • the pH is adjusted to a value of 6.5 by adding sodium hydroxide before precipitating the hydrolyzed hyaluronic acid according to the following sequence of steps: - sodium chloride (Na Cl) is added so as to obtain a concentration of 35 g / 1 of sodium chloride;
  • the hyaluronic acid thus obtained has a molecular weight of approximately 30,000 Daltons.
  • the hyaluronic acid solution is placed at the interface between the mucus and the support.
  • the transport of mucus by the simulated cough corresponds to the distance traveled by the sample under the effect of the air flow.
  • the frog palate having a mucosa comparable to the human respiratory mucosa, was used to quantify the transport capacity of respiratory mucus (E. Puchelle et al, Eur. J. Respir. Dis. 1983, 64, 293-303) .
  • the mucus samples, whether or not containing hyaluronic acid, are deposited on the mucosa of the frog's palate and the speed of transport of this mucus is measured.
  • hyaluronic acid induces a reduction in the work of adhesion of the respiratory mucus.
  • PM molecular weight
  • this reduction is significant (p ⁇ 0.01): it is 7.1% and 10.6% , respectively.
  • the mucociliary transport of respiratory mucus is significantly increased (p ⁇ 0.001) by the hyaluronic acid of PM 10 6 (+ 48.6%), PM 8x10 4 (+ 59.7%), and PM 4x10 4 (+ 70.8%).
  • Hyaluronic acid by its lubricating action, therefore improves the transport of respiratory mucus by ciliary activity and by coughing. This lubricating action is all the more effective the lower the molecular weight of hyaluronic acid.
  • hyaluronic acid The potential role of hyaluronic acid on cell repair was analyzed from hyaluronic acid of PM 4x10 4 in solution in a culture medium at 3 different concentrations: 0.01, 0.1 and 1 mg / ml .
  • An in vitro model for repairing the respiratory epithelium was used: explants of respiratory epithelium from human nasal polyps were cultured on a collagen matrix according to a technique described by Chevillard et al (Cell Tissue Research 1991, 264: 49-55). After 3 days of culture, video microscopy recordings of cell growth formed at the periphery of the explants were performed every 24 hours for 3 days.
  • the measurement of the evolution of the growth surface as a function of the days of culture made it possible to calculate a growth index, expressed in mm 2 / d.
  • the growth index of the control explants, measured in the absence of hyaluronic acid, is 0.9 ⁇ 0.4 mm 2 / d.
  • the growth index is significantly increased (p ⁇ 0.01) in the presence of 0.01 mg / ml of hyaluronic acid (1.7 ⁇ 0.5 mm 2 / d), of 0.1 mg / ml d hyaluronic acid (2.2 ⁇ 0.9 mm 2 / day) and 1 mg / ml of hyaluronic acid (1.9 ⁇ 0.9 mm 2 / day) compared to the control without hyaluronic acid.
  • the repair model used being essentially characterized by a migration of cells from the explant, it is therefore deduced therefrom that the presence of hyaluronic acid in the culture medium promotes the migration of respiratory epithelial cells in a dose-dependent manner.
  • the following tests were also carried out
  • hyaluronic acid The role of hyaluronic acid on cell regeneration was analyzed from hyaluronic acid in solution in culture medium at 4 different concentrations: 0.01, 0.1, 1 and 5 mg / ml and compared to control conditions without hyaluronic acid.
  • An in vitro model of regeneration of the nasal epithelium was used: explants of respiratory epithelium from human nasal polyps were cultured on a collagen I matrix according to a technique described by Chevillard et al (Cell Tissue Research 1991 , 264: 49-55) in culture medium. After 3 days of culture, the culture medium is also supplemented with the predefined concentrations of hyaluronic acid.
  • Videomicroscopy recordings of the cell growth formed at the periphery of the explants were performed every 24 h for 3 days.
  • the measurement of the growth surface as a function of the culture time (24, 48 and 72 h) made it possible to calculate a percentage of variation of the cell growth surface as a function of the different concentrations of hyaluronic acid.
  • hyaluronic acid is capable of regenerating the respiratory epithelium.
  • the mucus is frequently dehydrated and becomes adherent, on the one hand, and the integrity of the epithelial barrier can be altered, on the other hand.
  • the clearance of mucus by ciliary activity is reduced and clearance by coughing, the effectiveness of which is directly dependent on the adhesiveness properties of the mucus, represents the main mode of elimination of mucus from the airways. respiratory.
  • restoring the integrity of the epithelial barrier represents an important issue in the protective function of the respiratory epithelium.
  • Hyaluronic acid is therefore a potential treatment agent for all respiratory disorders of the upper airways, in particular of the nasal mucosa, where there is hyperadhesiveness of the mucus and / or epithelial lesions: inflammatory, infectious or allergic rhinitis, bronchitis acute (infectious, allergic or toxic) or chronic inflammatory, bronchiectasis, cystic fibrosis.
  • Hyaluronic acid in combination with any suitable excipient, can therefore be used for the treatment of these conditions. It can be administered by instillations or in the form of sprays for affections in the otolaryngological field; it can be in the form of sprays or by nebulization for bronchial pathologies.
  • composition contains hyaluronic acid in solution in solvents (water or physiological serum).
  • the invention relates to the prevention and treatment of alterations in the upper airways (nasal mucosa) in respiratory diseases such as cystic fibrosis and bronchiolitis, as well as the treatment of inflammation and infection of the upper airways.
  • Hyaluronic acid with a molecular weight of less than 40 kDa and a concentration of 0.1 mg / ml in physiological saline solution (NaCl 9% o) is administered in a pharmaceutical dose effective at the nasal level in the form of an instillation (3 / day) from a solution (2 ml) prepared in a single-dose bottle fitted with a mouthpiece having a geometry adapted to the nasal cavity of newborns, children or adults.
  • the daily dosage is between 2 and 10 ml for a solution and 0.2 to 10 mg of hyaluronic acid for a spray.
  • Administration can also be carried out using a pressurized bottle (for adult patients), using a formulation identical to that described above.
  • composition of a nasal spray intended for the prophylactic treatment of the nasal mucosa is given below:
  • Hyaluronic acid 0.001% - 1%
  • Solubilizer (ex: twen 20) 0.5% - 1%
  • the mode of administration of this solution is a medical device intended for the administration of a solution at the level of the nasal mucosa via the use of a carrier gas or by mechanical action.
  • Bacterial colonization of the upper respiratory tract can predispose to colonization of the bronchial airways, in particular in serious respiratory pathologies of the infant such as cystic fibrosis and bronchiolitis.
  • Eliminating the nasal carriage of bacteria like Staphyloccus aureus reduces the incidence of bacterial infections.
  • the increase in nasal mucociliary transport thanks to the acid prevents bacterial colonization at the nasal level (bacteria reservoir) and prevents infection at the bronchial level.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

L'acide hyaluronique présente une activité thérapeutique vis-à-vis notamment des affections respiratoires des voies aériennes supérieures.

Description

UTILISATION D'ACIDE HYALURONIQUE POUR LES AFFECTIONS RESPIRATOIRES DES VOIES AERIENNES SUPERIEURES.
La présente invention a pour objet des utilisations pharmaceutiques de l'acide hyaluronique présentant une activité thérapeutique vis-à-vis notamment des affections respiratoires des voies aériennes supérieures. Par acide hyaluronique on entend aussi ses sels pharmaceutiques acceptables, tels que ceux de potassium, magnésium, sodium.
L'intégrité de Pépithélium de la muqueuse respiratoire tapissant l'arbre trachéo-bronchique dépend d'un équilibre entre les facteurs d'agression et les nombreux mécanismes de défense dont cet épithélium dispose. Ces mécanismes comprennent une première ligne de défense constituée par du mucus et le système mucociliaire et une seconde ligne de défense constituée par les complexes jonctionnels des cellules épithéliales qui forment une barrière physique vis-à-vis des aérocontaminants.
Le mucus forme à la surface des cellules épithéliales respiratoires un film protecteur mobilisé par l'activité ciliaire. L'efficacité d'un tel système dépend non seulement des propriétés de viscosité du mucus mais aussi des forces interfaciales muqueuse-mucus et/ou air-mucus. Les propriétés de surface sont donc extrêmement importantes à considérer et à préserver dans les mécanismes de protection de la muqueuse respiratoire.
Au cours des phénomènes inflammatoires bronchiques, aigus ou chroniques, la muqueuse bronchique et le mucus sont exposés à de multiples agressions telles que celles provoquées par des protéases d'origine bactérienne et d'origine inflammatoire qui entraînent une modification des propriétés hydriques du mucus liée à une absorption accrue de l'eau extracellulaire, une fréquente exfoliation des cellules épithéliales et une modification de la composition biochimique du mucus.
Dans le but de se protéger de l'action délétère des agents pathogènes et de la réaction inflammatoire, la muqueuse respiratoire réagit en augmentant la sécrétion de mucus. Cette hypersécrétion s'accompagne fréquemment d'une hyperviscosité et d'une modification des propriétés d'adhérence du mucus : ceci a notamment pour conséquence une diminution de l'épuration muco-ciliaire et une stase du mucus qui provoque une obstruction bronchique et des troubles de la fonction respiratoire. Jusqu'à présent, les thérapeutiques visant à corriger l'hypersécrétion du mucus et ses anomalies physico-chimiques se sont développées en partant du concept que l'hypersécrétion et l'obstruction bronchique étaient liées à une hyperviscosité. Ceci a donné naissance à la mise au point et la mise sur le marché de très nombreuses molécules à activité mucolytique afin de normaliser l'hyperviscosité du mucus.
En fait, au cours des infections respiratoires, les sécrétions adhèrent fortement à la muqueuse respiratoire et leur élimination n'est que rarement améliorée par la simple prescription d'un agent mucolytique. En partant de cette observation, il est apparu que les problèmes de déshydratation et de lubrification étaient à considérer en priorité et que la protection de la muqueuse respiratoire, de même que l'efficacité du transport du mucus étaient conditionnées par les propriétés d'interface mucus-muqueuse respiratoire (Zahm JM et al, Biorheology 1989, 26: 747-752). Une altération de l'efficacité du transport mucociliaire, en relation avec l'inhalation de nombreux agents infectieux ou non infectieux (pollution atmosphérique ou professionnelle), peut induire une altération de l'intégrité de la barrière epitheliale et entraîner des lésions plus ou moins importantes de l'épithélium respiratoire. Ces lésions peuvent aller depuis la perte de la jonctionnalité de la barrière epitheliale jusqu'à une desquamation epitheliale complète.
La réparation de la surface de l'épithélium respiratoire après une lésion est, dans un premier temps, dépendante de l'étalement et de la migration des cellules autour de la zone lésée (Zahm et al, Am J Respir Cell Mol Biol 1991 , 5 :242-248 ; Hérard et al, Am J Respir Cell Mol Biol 1996, 15 : 624-632). Parmi les facteurs favorisant la migration des cellules au cours du processus de ré-épithélialisation, il a pu être montré que certaines protéines de la matrice extracellulaire (fibronectine) et des facteurs de croissance [facteur de croissance épidermique (epidermal growth factor), facteur de croissance d'hépatocytes (hepatocyte growth factor)] étaient capables de stimuler la migration des cellules et par conséquent de favoriser la ré-épithélialisation de la muqueuse respiratoire (Zahm et al, Wound Rep Reg 1993, 1 : 175-180 ; Hérard et al, Am J Physiol 1996, 271 ±726-733 ; Zahm et al, J Cell Physiol, 2000, 185 : 447-453). L'utilisation de molécules pouvant jouer ce rôle régénérant constitue donc un atout majeur dans le rétablissement de la fonction de barrière de la muqueuse respiratoire. Aussi, un des buts de la présente invention est-il de modifier les propriétés de surface du mucus respiratoire afin de favoriser son transport par l'activité ciliaire et/ou par la toux.
Un autre but de l'invention est de permettre la réparation de l'épithélium respiratoire.
Ces buts, ainsi que d'autres qui apparaîtront par la suite, sont atteints par l'utilisation d'une composition pharmaceutique ou destinée à l'hygiène contenant de l'acide hyaluronique, en association avec tout autre excipient approprié et présentant une activité thérapeutique vis-à-vis notamment des affections respiratoires des voies aériennes supérieures notamment de la muqueuse nasale, laquelle composition comprenant de l'acide hyaluronique d'un poids moléculaire d'au plus 105 Da.
De préférence, l'acide hyaluronique présente un poids moléculaire d'au plus 5.104 Da. Avantageusement, la concentration en acide hyaluronique dans la composition est comprise entre 0,01 et 10 mg/ml.
De préférence, l'acide hyaluronique utilisé est d'origine animale ou biotechnologique ; il est avantageusement hydrolyse par voie chimique ou enzymatique pour obtenir un poids moléculaire d'au plus 105 Daltons. Pour produire de l'acide hyaluronique d'un poids moléculaire conforme à la présente invention, on réalise l'hydrolyse acide à chaud d'un acide hyaluronique d'origine animale (crête de coq, cordon ombilical) ou obtenu par voie biotechnologique par fermentation de substrats d'origine végétale par une bactérie dérivée d'une souche de référence NCDO (national collection of dairy organism) 2733. Le poids moléculaire de ces acides hyaluroniques sont généralement compris entre 5.000.000 Da et 500.000 Da.
Avantageusement, notre procédé permet d'hydrolyser ces acides hyaluroniques pour obtenir un polymère présentant les activités biologiques décrites dans l'invention et un poids moléculaire compris entre 10.000 Da et 49.000 Da. a) pour préparer un acide hyaluronique hydrolyse :
• on dissout dans de l'eau à une température comprise entre 10°C et 80°C, l'acide hyaluronique à une concentration comprise entre 1 et 20 g/L, • on ajuste le pH de la solution aqueuse à des pH compris entre 1 et 3 par l'ajout d'un acide fort, • on utilise de préférence une quantité d'acide chlorhydrique permettant de porter le pH à 1 ,8 ,
• la durée de l'hydrolyse est comprise entre 60 et 540 minutes, « la viscosité de la solution en fin d'hydrolyse est comprise entre (Rhéomètre TA instrument, géométrie cône acier de 60 mm angle 4°, température d'analyse 50°C, gamme de contraintes de cisaillement de 0,1 à 10 s"1),
• on ajuste le pH de la solution d'acide hyaluronique hydrolyse entre 5 et 7 par l'ajout d'une base forte,
• on utilise de préférence une quantité d'hydroxyde de sodium permettant de porter le pH à 6,5 ,
• on refroidit la solution d'acide hyaluronique hydrolyse à température ambiante par refroidissement du réacteur ou par passage à travers un échangeur de chaleur,
• on concentre la solution d'acide hyaluronique hydrolyse par passage dans un évaporateur sous vide à flux tombant pour obtenir un facteur de concentration volumique compris entre 2 et 15, • on ajuste la concentration en chlorure de sodium à 35g/L par ajout de NaCI cristallin,
• on ajoute un 1er solvant pour obtenir un 1er précipité,
• on utilise preferentiellement de l'éthanol présentant un titre alcoolique volumétrique de 96°, • le titre alcoolique volumétrique du mélange est compris entre 45° et 60°,
• après décantation de l'acide hyaluronique on élimine le surnageant,
• on ajoute ensuite un deuxième solvant et on obtient un 2eme précipité,
• on utilise preferentiellement de l'éthanol présentant un titre alcoolique volumétrique de 96e,
• le titre alcoolique volumétrique du mélange est compris entre 60° et 85°, • après décantation de l'acide hyaluronique on élimine le surnageant, on ajoute ensuite un troisième solvant et on obtient un
3eme précipité, on utilise preferentiellement de l'éthanol présentant un titre alcoolique volumétrique de 96°, le titre alcoolique volumétrique du mélange est compris entre 85° et 96°, après décantation de l'acide hyaluronique on élimine le surnageant, on ajoute ensuite un quatrième solvant et on obtient un
4eme précipité, on utilise preferentiellement de l'éthanol présentant un titre alcoolique volumétrique de 99,9°, le titre alcoolique volumétrique de la solution contenant l'acide hyaluronique hydrolyse est compris entre 96 et
99,9°, on filtre la solution alcoolique contenant l'acide hyaluronique hydrolyse sur média, on sèche sous vide à une température comprise entre
30°C et 60°C, on sèche preferentiellement la poudre à 45°C sous un vide de 900 mbar.
La durée de séchage est comprise entre 2 et 10 heures et preferentiellement 6 heures. L'acide hyaluronique ainsi obtenu présente un poids moléculaire compris entre 10.000 Da et 49.000 Daltons et les propriétés physicochimiques suivantes :
Tableau
Figure imgf000007_0001
L'acide hyaluronique, polysaccharide de haut poids moléculaire, est distribué ubiquitairement dans les espaces extracellulaires. Parmi ses fonctions biologiques, grâce aux propriétés physico-chimiques qu'il possède, l'acide hyaluronique semblerait être impliqué dans l'homéostasie hydrique et dans la lubrification des tissus (TC Laurent and JR Fraser. Faseb J. 6 1992, 6, 2397-2404). Au niveau pulmonaire, l'acide hyaluronique a été localisé dans la membrane baso-latérale des cellules épithéliales bronchiques (SJ Green et al, J. Cell Sci. 1988, 89, 145-156)
Il a été mis en évidence par les inventeurs le rôle de l'acide hyaluronique dans les modifications des propriétés de surface du mucus respiratoire et dans sa capacité à favoriser la réparation de l'épithélium respiratoire.
Pour ce qui concerne la modification des propriétés de surface du mucus respiratoire, trois solutions d'acide hyaluronique d'origine biotechnologique et de poids moléculaire différent (106 Da, 8 x 104 Da et 4 x 104 Da) ont été étudiées dans une solution aqueuse à une concentration de 0,1% en poids, selon le protocole ci-dessous. Pour produire de l'acide hyaluronique d'un poids moléculaire conforme à la présente invention, on réalise une hydrolyse d'un acide hyaluronique du commerce, qui, jusqu'à présent, est d'origine animale (crête de coq, cordon ombilical) ou a été obtenu par voie fermentaire à partir de substrats d'origine végétale. Le poids moléculaire d'un tel acide hyaluronique est en général compris entre 20.000 et 50.000 Da. Cette hydrolyse est réalisée en dissolvant cet acide hyaluronique du commerce dans de l'eau jusqu'à obtenir une solution à 10 g/1 d'acide hyaluronique.
Puis, on ajoute à cette solution de l'acide chlorhydrique pour obtenir un pH compris entre 1 et 2, de préférence de l'ordre de 1 ,8. On chauffe à une température d'environ 80°C sous agitation et ce jusqu'à ce que la viscosité de la solution n'évolue plus. On ajuste le pH à une valeur de 6,5 par un ajout de soude avant de précipiter l'acide hyaluronique hydrolyse selon la succession d'étapes ci-après : - on ajoute du chlorure de sodium (Na Cl) de façon à obtenir une concentration de 35 g/1 de chlorure de sodium ;
- on ajoute sous agitation de l'éthanol 96° jusqu'à l'obtention d'un titre alcoolique final compris entre 50° et 60° ;
- on laisse décanter et on élimine le surnageant qui ne comprend pas d'acide hyaluronique ;
- on lave le précipité ainsi obtenu, pour le remettre en suspension, avec un volume correspondant à celui de la solution d'acide hyaluronique hydrolyse (1 litre pour 1 litre) avec un mélange alcool- eau à 70° ; puis on laisse décanter et on élimine le surnageant ; - on remet en solution le précipité obtenu comme décrit à l'étape précédente mais avec un mélange éthanol-eau à 85° ; puis on laisse décanter et on élimine le surnageant ;
- on répète cette opération avec un mélange éthanol-eau à 96° ;
- on élimine l'éthanol par filtration et on sèche l'acide hyaluronique à l'étuve sous vide à 40°C pendant 6 heures.
L'acide hyaluronique, ainsi obtenu présente un poids moléculaire d'environ 30.000 Daltons.
Douze échantillons de mucus respiratoire lyophilisés, provenant de patients bronchitiques chroniques, ont été reconstitués à différentes concentrations dans l'eau. Le travail d'adhésion des échantillons de mucus a été déterminé, en présence ou non d'acide hyaluronique, à partir de la mesure de la tension de surface et de l'angle de contact du mucus, selon des techniques développées par les inventeurs (Zahm JM et al, Biorheology 1989, 26: 747-752.) Un modèle expérimental a permis de simuler in vitro le phénomène de toux (M King et al, J. Appl. Physiol., 1985, 58, 1776-1782). L'échantillon de mucus, déposé sur un support, est transporté par un débit d'air instantané. La solution d'acide hyaluronique est placée à l'interface entre le mucus et le support. Le transport du mucus par la toux simulée correspond à la distance parcourue par l'échantillon sous l'effet du débit d'air. Le palais de grenouille, ayant une muqueuse comparable à la muqueuse respiratoire humaine, a été utilisé pour quantifier la capacité de transport du mucus respiratoire (E. Puchelle et al, Eur. J. Respir. Dis. 1983, 64, 293-303). Les échantillons de mucus, contenant ou non de l'acide hyaluronique, sont déposés sur la muqueuse du palais de grenouille et la vitesse de transport de ces mucus est mesurée. II a été ainsi constaté que l'acide hyaluronique induit une diminution du travail d'adhésion du mucus respiratoire. En présence d'acide hyaluronique de poids moléculaire (PM) égal à 8 x 104 et 4 x 104 Da, cette diminution est significative (p<0,01 ) : elle est de 7,1 % et de 10,6 %, respectivement.
Le transport mucociliaire du mucus respiratoire est augmenté significativement (p<0,001 ) par l'acide hyaluronique de PM 106 (+ 48,6 %), de PM 8x104 (+ 59,7 %), et de PM 4x104 (+70,8 %).
Le transport du mucus respiratoire par la toux est augmenté significativement (p<0,002) en présence d'acide hyaluronique de PM 106 (+ 20,1 %), de PM 8x104 (+ 31 ,7 %), et de PM 4x104 (+ 39,7 %). L'acide hyaluronique, par son action lubrifiante, améliore donc le transport du mucus respiratoire par l'activité ciliaire et par la toux. Cette action lubrifiante est d'autant plus efficace que le poids moléculaire de l'acide hyaluronique est faible.
Le rôle potentiel de l'acide hyaluronique sur la réparation cellulaire a été analysé à partir de l'acide hyaluronique de PM 4x104 en solution dans un milieu de culture à 3 concentrations différentes : 0,01 , 0,1 et 1 mg/ml. Un modèle in vitro de réparation de l'épithélium respiratoire a été utilisé : des explants d'épithélium respiratoire issus de polypes nasaux humains ont été mis en culture sur une matrice de collagene selon une technique décrite par Chevillard et al (Cell Tissue Research 1991 , 264 :49-55). Après 3 jours de culture, des enregistrements en vidéo-microscopie de la croissances cellulaire formée à la périphérie des explants ont été effectués toutes les 24 heures pendant 3 jours. La mesure de l'évolution de la surface de la croissance en fonction des jours de culture a permis de calculer un index de croissance, exprimé en mm2/j. L'index de croissance des explants témoins, mesuré en absence d'acide hyaluronique, est de 0,9 ± 0,4 mm2/j.
L'index de croissance est significativement augmenté (p < 0,01 ) en présence de 0,01 mg/ml d'acide hyaluronique (1 ,7 ± 0,5 mm2/j), de 0,1 mg/ml d'acide hyaluronique (2,2 ± 0,9 mm2/j) et 1 mg/ml d'acide hyaluronique (1 ,9 ± 0,9 mm2/j) par rapport au contrôle sans acide hyaluronique.
Le modèle de réparation utilisé étant essentiellement caractérisé par une migration des cellules depuis l'expiant, il en est donc déduit que la présence d'acide hyaluronique dans le milieu de culture favorise la migration des cellules épithéliales respiratoires d'une façon dose-dépendante. On a effectué aussi les essais suivants
Le rôle de l'acide hyaluronique sur la régénération cellulaire a été analysé à partir de l'acide hyaluronique en solution dans du milieu de culture à 4 concentrations différentes : 0.01 , 0.1 , 1 et 5 mg/ml et comparé à des conditions témoins sans acide hyaluronique. Un modèle in vitro de régénération de l'épithélium nasal a été utilisé : des explants d'épithélium respiratoire issus de polypes nasaux humains ont été mis en culture sur une matrice de collagene I selon une technique décrite par Chevillard et al (Cell Tissue Research 1991 , 264 :49-55) dans du milieu de culture. Après 3 jours de culture, le milieu de culture est également supplémenté avec les concentrations prédéfinies d'acide hyaluronique. Des enregistrements en vidéomicroscopie de la croissances cellulaire formée à la périphérie des explants ont été effectués toutes les 24 h pendant 3 jours. La mesure de la surface de la croissance en fonction du temps de culture (24, 48 et 72h) a permis de calculer un pourcentage de variation de la surface de la croissance cellulaire en fonction des différentes concentrations en acide hyaluronique.
Cinq explants ont été testés pour chaque condition de concentration en acide hyaluronique et une analyse de variance à un facteur a été utilisée pour interpréter les résultats d'un point de vue statistique. Les résultats obtenus sont représentés sur la figure 1. On observe une augmentation significative (p<0,001 ) de la croissance cellulaire lorsque les cellules sont incubées avec de l'acide hyaluronique. L'augmentation est maximale (p<0,001 ) pour la concentration de 0,01 mg/ml d'acide hyaluronique, par rapport au témoin sans acide hyaluronique. Pour les concentrations d'acide hyaluronique variant de 0,1 à 5 mg/ml, on observe une diminution progressive de la surface de la croissance cellulaire, mais cette surface reste néanmoins significativement supérieure à la surface du témoin sans acide hyaluronique(p<0,01 ).
En conclusion, l'acide hyaluronique est capable de régénérer de l'épithélium respiratoire.
Chez les patients dont l'épithélium respiratoire est altéré par diverses pathologies (asthme, mucoviscidose, broncho-pneumopathies obstructives chroniques, infections ou inflammations bronchiques ou ORL), le mucus est fréquemment déshydraté et devient adhérant, d'une part, et l'intégrité de la barrière epitheliale peut être altérée, d'autre part. Au cours de ces pathologies, la clairance du mucus par l'activité ciliaire est diminuée et la clairance par la toux dont l'efficacité est directement dépendante des propriétés d'adhésivité du mucus, représente le principal mode d'élimination du mucus hors des voies respiratoires. De plus, la restauration de l'intégrité de la barrière epitheliale représente un enjeu important dans la fonction de protection de l'épithélium respiratoire. L'acide hyaluronique est donc un agent de traitement potentiel de toutes les affections respiratoires des voies aériennes supérieures notamment de la muqueuse nasale, où il existe une hyper-adhésivité du mucus et/ou des lésions épithéliales: rhinites inflammatoires, infectieuses ou allergiques, bronchites inflammatoires aiguës (infectieuses, allergiques ou toxiques) ou chroniques, bronchiectasies, mucoviscidose.
L'acide hyaluronique, en association avec tout excipient approprié, peut donc être utilisée pour le traitement de ces affections. Il peut être administrée par instillations ou sous forme de sprays pour les affections du domaine oto-rhino-laryngologique ; il peut l'être sous forme de sprays ou par nébulisation pour les pathologies bronchiques.
La composition contient l'acide hyaluronique en solution dans des solvants (eau ou sérum physiologique).
L'invention a pour objet la prévention et le traitement des altérations des voies aériennes supérieures (muqueuse nasale) dans les maladies respiratoires comme la mucoviscidose et les bronchiolites, ainsi que le traitement de l'inflammation et de l'infection des voies aériennes supérieures. L'acide hyaluronique ayant un poids moléculaire inférieur à 40 kDa et une concentration de 0.1 mg/ml dans une solution saline physiologique (NaCI 9%o) est administré en une dose pharmaceutique efficace au niveau nasal sous la forme d'une instillation (3/jour) à partir d'une solution (2 ml) préparée dans un flacon monodose équipé d'un embout ayant une géométrie adaptée à la cavité nasale de nouveau-nés, d'enfants ou d'adultes. La posologie quotidienne est comprise entre 2 et 10 ml pour une solution et de 0.2 à 10 mg d'acide hyaluronique pour un spray.
L'administration peut également s'effectuer à l'aide d'un flacon pressurisé (pour les patients adultes), utilisant une formulation identique à celle décrite ci-dessus.
On donne ci-dessous un exemple de composition d'un spray nasal destiné au traitement prophylactique de la muqueuse nasale :
Acide hyaluronique 0,001 % - 1%
Solubilisant (ex : : twen 20) 0,5% - 1 %
Huiles essentielles (ex : menthe) 0,05%
Glycérine 1 % - 5%
Conservateur QS
Colorant QS
Eau PPI Qsp 100 pH : 6 - 7
Viscosité : < 100 cps
Le mode d'administration de cette solution est un dispositif médical destiné à l'administration d'une solution au niveau de la muqueuse nasale via l'utilisation d'un gaz vecteur ou par action mécanique.
La colonisation bactérienne des voies aériennes respiratoires supérieures (notamment au niveau nasal) peut prédisposer à la colonisation des voies aériennes bronchiques, en particulier dans des pathologies respiratoires graves du nourrisson comme la mucoviscidose et les bronchiolites.
L'élimination du portage nasal de bactéries comme Staphyloccus aureus réduit l'incidence des infections bactériennes. L'augmentation du transport muco-ciliaire nasal grâce à l'acide évite la colonisation bactérienne au niveau nasal (réservoir de bactéries) et prévient l'infection au niveau bronchique.

Claims

R E V E N D I C A T I O N S
1. Utilisation d'acide hyaluronique d'un poids moléculaire d'au plus 105 Da pour la fabrication d'un médicament destiné à favoriser le transport du mucus respiratoire.
2. Utilisation d'acide hyaluronique suivant la revendication 1 , pour la fabrication d'un médicament destiné à favoriser le transport du mucus de la muqueuse nasale.
3. Utilisation d'acide hyaluronique d'un poids moléculaire d'au plus 105
Da pour la fabrication d'un médicament destiné à la réparation de la barrière epitheliale respiratoire.
4. Utilisation d'acide hyaluronique suivant la revendication 3 pour la fabrication d'un médicament destiné à la réparation de la barrière epitheliale de la muqueuse nasale.
5. Utilisation suivant l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'acide hyaluronique a un poids moléculaire 'au plus 5.104 Da.
6. Utilisation suivant l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'acide hyaluronique est utilisée dans une composition en une concentration comprise entre 0,01 et 10 mg/ml.
7. Utilisation suivant l'une des revendications précédentes, pour prévenir la mucoviscidose.
8. Utilisation suivant l'une des revendications 1 à 6, pour traiter les bronchiolites.
9. Utilisation suivant l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que le médicament est sous la forme d'un spray ou d'une solution à instiller.
10. Utilisation suivant la revendication 9 dans laquelle la solution administrée à raison de 2 à 10 ml par jour ou le spray est administré en une quantité contenant de 0,2 mg à 10 mg par jour.
PCT/FR2003/003507 2002-11-28 2003-11-27 Utilisation d'acide hyaluronique pour les affections respiratoires des voies aeriennes superieures. WO2004050187A1 (fr)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU2003294100A AU2003294100A1 (en) 2002-11-28 2003-11-27 Use of hyaluronic acid for respiratory disorders or the upper airways

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR02/14979 2002-11-28
FR0214979A FR2847818B1 (fr) 2002-11-28 2002-11-28 Composition pharmaceutique a base d'acide hyaluronique

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2004050187A1 true WO2004050187A1 (fr) 2004-06-17

Family

ID=32309802

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR2003/003507 WO2004050187A1 (fr) 2002-11-28 2003-11-27 Utilisation d'acide hyaluronique pour les affections respiratoires des voies aeriennes superieures.

Country Status (3)

Country Link
AU (1) AU2003294100A1 (fr)
FR (1) FR2847818B1 (fr)
WO (1) WO2004050187A1 (fr)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2111855B1 (fr) 2006-04-13 2016-08-31 CHIESI FARMACEUTICI S.p.A. Compositions antibactériennes pour le traitement des infections des voise respiratoures supérieures et inférieures
WO2023079072A1 (fr) 2021-11-05 2023-05-11 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Utilisation d'acide hyaluronique de faible poids moléculaire pour le traitement d'une inflammation des muqueuses pulmonaires

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060183709A1 (en) * 2005-02-15 2006-08-17 Ahmad Alkayali Preparation of low molecular weight hyaluronic acid as a food supplement
FR2919185B1 (fr) * 2007-07-23 2010-09-10 Ard Sa Utilisation d'acide hyaluronique pour la preparation de compositions destinees a l'amelioration notamment de l'etat des muqueuses
IT1396468B1 (it) * 2008-11-11 2012-12-14 Farma Derma Srl Uso topico di acido ialuronico ad azione filmogena in preparati per il trattamento e profilassi di patologie delle vie respiratorie.
EP2985019B1 (fr) 2014-08-16 2021-10-20 Church & Dwight Co., Inc. Composition nasale ayant des propriétés antivirales
EP2985027B1 (fr) 2014-08-16 2021-03-31 Church & Dwight Co., Inc. Composition nasale renfermant un mélange d'acides hyaluroniques et une solution saline
EP3415154A1 (fr) 2017-06-16 2018-12-19 Sofibel S.A.S. Composition nasale

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995026735A1 (fr) * 1994-03-31 1995-10-12 Cantor Jerome O Soulagement de l'emphyseme par administration intratracheale d'acide hyaluronique
WO1999062546A1 (fr) * 1998-06-01 1999-12-09 Chiron Corporation Utilisation de polymeres d'acide hyaluronique pour une administration par les muqueuses d'antigenes vaccinaux
WO2001093846A2 (fr) * 2000-05-23 2001-12-13 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Procede de traitement des troubles respiratoires associes a une lesion de la fibre elastique pulmonaire
WO2002102317A2 (fr) * 2001-06-15 2002-12-27 Exhale Therapeutics, Inc. Traitement de troubles respiratoires associes a une bronchoconstriction, a l'aide d'un aerosol d'acide hyaluronique

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3310994B2 (ja) * 1991-07-03 2002-08-05 電気化学工業株式会社 アレルギー治療剤

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995026735A1 (fr) * 1994-03-31 1995-10-12 Cantor Jerome O Soulagement de l'emphyseme par administration intratracheale d'acide hyaluronique
WO1999062546A1 (fr) * 1998-06-01 1999-12-09 Chiron Corporation Utilisation de polymeres d'acide hyaluronique pour une administration par les muqueuses d'antigenes vaccinaux
WO2001093846A2 (fr) * 2000-05-23 2001-12-13 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Procede de traitement des troubles respiratoires associes a une lesion de la fibre elastique pulmonaire
WO2002102317A2 (fr) * 2001-06-15 2002-12-27 Exhale Therapeutics, Inc. Traitement de troubles respiratoires associes a une bronchoconstriction, a l'aide d'un aerosol d'acide hyaluronique

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CANTOR J O ET AL: "THE EFFECT OF HYALURONAN ON ELASTIC FIBER INJURY IN VITRO AND ELASTASE-INDUCED AIRSPACE ENLARGEMENT IN VIVO (44553)", October 2000, PROCEEDINGS OF THE SOCIETY FOR EXPERIMENTAL BIOLOGY & MEDICINE, WILLIAMS AND WILKINS, XX, PAGE(S) 65, ISSN: 0037-9727, XP001034126 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2111855B1 (fr) 2006-04-13 2016-08-31 CHIESI FARMACEUTICI S.p.A. Compositions antibactériennes pour le traitement des infections des voise respiratoures supérieures et inférieures
WO2023079072A1 (fr) 2021-11-05 2023-05-11 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Utilisation d'acide hyaluronique de faible poids moléculaire pour le traitement d'une inflammation des muqueuses pulmonaires

Also Published As

Publication number Publication date
FR2847818B1 (fr) 2008-04-04
FR2847818A1 (fr) 2004-06-04
AU2003294100A8 (en) 2004-06-23
AU2003294100A1 (en) 2004-06-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2167102B1 (fr) Utilisation d&#39;acide hyaluronique pour la preparation de compositions destinees a l&#39;amelioration de la fonction de protection de la peau, de l&#39;oeil et des muqueuses
EP2040721B1 (fr) Compositions médicinales contenant du miel
CH666897A5 (fr) Fractions d&#39;acide hyaluronique non inflammatoire, procedes et compositions pharmaceutiques.
WO2020147475A1 (fr) Utilisation d&#39;un produit de la rhodococcus ruber dans le traitement d&#39;un ulcère aphteux récurrent
CH672886A5 (fr)
JP2001505546A (ja) ヘルペスシンプレックスウイルスおよび他の感染病のための抗菌治療
CA2154103C (fr) Traitement des maladies, traumatismes ou troubles de la membrane muqueuse, et pour le soulagement de la douleur
WO2004050187A1 (fr) Utilisation d&#39;acide hyaluronique pour les affections respiratoires des voies aeriennes superieures.
EP2229947B1 (fr) Polymères biocompatibles pour une composition médicale
CN112823789A (zh) 用于治疗眼睛的组合物和方法
JP5258329B2 (ja) プラノプロフェン含有水性医薬組成物
CN112930189A (zh) 用于治疗眼睛的组合物和方法
CN108452316B (zh) 眼部感染的治疗或预防方法
RU2504396C1 (ru) Фармацевтическая композиция, содержащая ферменты: коллагеназу и лизоцим и/или сангвиритрин
WO2021181037A1 (fr) Composition pour le traitement de lesions du systeme respiratoire
EP0908184B1 (fr) Composition à base d&#39;eau de mer diluée destinée au lavage des fosses nasales
EP3570815B1 (fr) Composition à usage ophtalmique
CN116942721B (zh) 一种基于大蒜素的鼻腔护理液
TW200535140A (en) Prevention of loss of tight cell junctions using carbohydrate-containing compositions
JP2007291082A (ja) プラノプロフェン含有医薬組成物
JP4813741B2 (ja) 軟骨細胞プロテオグリカン生成促進用栄養補助剤
Hatipoglu et al. Effect of laminarin and chitosan gel formulations on the treatment of hydrofluoric acid induced corneal burns in the rabbits.
He et al. Black phosphorus quantum dot-modified ADSCs as a novel therapeutic for periodontitis bone loss coupling of osteogenesis and osteoimmunomodulation
TW202400239A (zh) 與經匯集胎兒扶持組織物相關之組合物及方法
EP4355310A1 (fr) Solution oculaire topique au xylitol

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MA MD MG MK MN MW MX MZ NO NZ OM PH PL PT RO RU SD SE SG SK SL TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): BW GH GM KE LS MW MZ SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IT LU MC NL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
122 Ep: pct application non-entry in european phase
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: JP

WWW Wipo information: withdrawn in national office

Country of ref document: JP