WO2004021971A2 - Extraits de fruits d'astrocaryum vulgare et preparations obtenues a caractere anti-inflammatoire - Google Patents
Extraits de fruits d'astrocaryum vulgare et preparations obtenues a caractere anti-inflammatoire Download PDFInfo
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- Example 1 illustrates the invention.
- Extract 30.18 46.25 62.53 71.69 68.79 64.52 60.21 200 mg / Kg
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Abstract
L'invention concerne les extraits de fuits d'astrocaryum vulgare, pulpe et amande caractérisés en ce que les dits extraits présentent une activité theérapeutique à caractère anti-inflammatoire, mise en évidence par le test à la carragénine, par voie orale et intrapéritonéale. Ces extraits sont notamment constitués par la partie insaponifiable des huiles extraites par un solvant hydrocarboné non polaire. Les préparations à caractère anti-inflammatoire, obtenues à partir de ces extraits, sont utilisées dans le domaine pharmaceutique, diététique et cosmétique.
Description
EXTRAITS DE FRUITS D'ASTROCARYUM VULGARE ET PRÉPARATIONS OBTENUES À
CARACTÈRE ANTI-INFLAMMATOIRE
Les processus inflammatoires variés sont encore aujourd'hui, dans les pathologies qui les génèrent, des affections qui restent difficiles à traiter du fait de leur extrême complexité. Il existe sur le marché plusieurs principes actifs, d'origine synthétique, efficaces mais dont l'intérêt est généralement perturbé par des effets secondaires gênants notamment lorsqu'ils sont administrés par voie orale.
L' indométacine qui est une des molécules les plus connues, génère des troubles du système digestif qui rendent son utilisation impossible chez les patients sensibles. Une amélioration de cette situation a été apportée par l'utilisation d'extraits naturels comme des extraits de soja et d'avocat (The possible « chondroprotective » effect of the unsaponifiable consituents of avocado and soya in vivo, KHAYYAL M. T., EL-GHAZALY M.A. , Drugs Explt. Clin. Res. XXIV(l), (1998) 41- 50) , cassis (Activité anti-inflammatoire du cassis natura medica, extrait des travaux réalisés par le Laboratoire de Pharmacologie de Toulouse, Prof ; DECLUME) , huile d'olive (Effect of Minor Components of Virgin Olive Oil on Topical Anti-inflammatory Assays, DE LA PUERTA R. , MARTINEZ-DOMINGUEZ E., RUIZ-GUTIERREZ V., Z. Naturforsch, (2000), 55c, 814-819 ) (In vivo effects of olive oil- based lipid emulsion on lymphocyte activation in rats, MOUSSA M., LE BOUCHER J. , GARCIA J., TKACZUK J. , RAGAB J. , DUTOT G., OHAYON E., GHISOLFI J. , THOUVENOT J.P., Chemical Nutrition (2000), 19(1), 49-54) etc.qui ont en commun de donner moins d'effets secondaires mais au détriment de leur activité.
L'activité anti-inflammatoire de ces extraits naturels est à attribuer pour une grande part à la présence de stérols, (Inhibitory Effects of Sterols Isolated from Chlorella vulgaris on
12-0-Tetradecanoylphorbol-13-acetate-Induced Inflammation and Tumor Promotion in Mouse Skin, YASUKAWA K. , AKIHISA T., KANNO H., KAMINAGA T., IZUMIDA M., SAKOH T., TAMURA T., TAKIDO M., Bio. Pharm. Bull. 19 (4 ) , (1996) , 573-576), alcools triterpéniques, (Triterpene Alcohols from the flo ers of compositae and their anti- inflammatory effects, AKIHISA T., YASUKAWA K, ONNUMA H., KASAHARA Y., YAMANOUCHI S., TAKIDO M., KUMAKI K. TAMURA . , Phytochemistry Vol. 43, n°6, (1996) 1255-1260), composés phénoliques..., en proportion très variable, sans qu'il soit possible à partir des travaux antérieurs rapportés sur le sujet de définir une composition optimale en regard du problème à traiter. Nous avons trouvé, à l'opposé de ces observations que les extraits d' Astrocaryum vulgare produits dans l'invention présentent de façon tout à fait inattendue des effets anti-inflammatoires, à concentration identique, de même nature que ceux de l' indométacine qui est une des meilleures références actuelles sur le marché sans présenter de problème particulier au niveau de l'ingestion orale puisque les fruits d' Astrocaryum vulgare sont massivement utilisés depuis très longtemps en alimentation humaine là où ce palmier est endémique, notamment en Amazonie.
Les extraits de fruits (pulpes et amandes) de l'invention sont essentiellement constitués par la partie insaponifiable des huiles extraites de façon classique par solvant hydrocarboné non polaire qui sera généralement de l'hexane ou par pression après traitement à la vapeur. Les fruits sont cueillis matures ; la pulpe est séparée de l'amande et les extraits obtenus testés séparémment par le même procédé qui consiste à induire un œdème dans la patte postérieure d'un rat de laboratoire, puis à mesurer la réduction de ce dernier dans le temps par injection intrapéritonéale ou par injection orale des extraits de l'invention. Les extraits peuvent être naturellement, selon différentes préparations, adaptés au mode d'action et aux sujets à traiter.
Un mode d'extraction préféré consistera à traiter les fruits mûrs d' strocaryum vulgare de manière à séparer la pulpe de l'amande mécaniquement .
La pulpe est ensuite extraite à l'hexane pendant environ 2 heures à la température d'ébullition du solvant.
Un mode d'extraction préféré des amandes consistera à les broyer mécaniquement puis à extraire de la même façon l'huile présente à l'hexane pendant environ 2 heures. L'hexane est ensuite évaporé des deux phases huileuses obtenues qui sont traitées séparément par un excès de la potasse alcoolique 2N à reflux pendant 1 heure. Les parties insaponifiables sont recueillies et constituent les extraits de fruits d' astrocaryum vulgare qui sont testés ensuite de façon à évaluer leurs propriétés anti-inflammatoires par la réduction de l'œdème généré sur la patte d'un rat par une injection de carragénine.
Un mode de test préféré pour démontrer l'activité antiinflammatoire des extraits de pulpe d' Astrocaryum vulgare consiste à injecter de la carragénine sous l'aponévrose plantaire de la patte postérieure du rat de façon à provoquer une réaction inflammatoire aiguë qui peut être réduite par les substances antiinflammatoires ; ce test bien connu est décrit par Winter
(Carrageenan-Induced Oedema in Hind Paw of the Rat as an Assay for Anti-iflammatory Drugs, WINTER C.A., Proc. Soc. Exp . Bio . Med III,
(1962) 544-547). La carragénine (0,05 ml à 1% dans NaCl à 0,9%) est injectée dans le coussinet plantaire de la patte postérieure droite du rat, 30 min après l'administration intra péritonéale des substances à tester.
Cette injection a été réalisée sur trois lots de rats dont chacun est composé de six rats de type istar mâle.
Le premier lot reçoit l'extrait de pulpe de fruits d' Astrocaryum vulgare, aux doses de 50, 100 et 200 mg/Kg.
Le deuxième lot d'animaux témoins sert de contrôle et reçoit l'excipient (Tween 80 à 2% dans NaCl à 0,9%). Le dernier lot,
reçoit de l' indometacine à la dose de 5 mg/Kg, qui sert de référence .
Pour chaque dose de substance, les concentrations de suspensions utilisées sont ajustées de manière à administrer exactement 2,5 ml par Kg de poids corporel.
Les mesures pléthysmographiques, déterminées à l'aide d'un pléthysmomètre LENCE 05.7150 sont faites lh, 2h, 3h, 4h, 5h, 6h,
7h, 8h, 23h et 24h après l'administration de la carragénine. La patte gauche non traitée sert de témoin.
L'activité anti-inflammatoire est calculée en pourcentage de réduction de l'oedème chez les rats traités par rapport aux témoins .
Ainsi donc pour des doses de 5 mg/kg d'extrait insaponifiable d'huile de pulpe et d' indometacine le pourcentage de réduction de l'œdème atteint une valeur proche de 70% après 4 heures.
De la même façon selon un même mode de mise en œuvre préféré l'extrait insaponifiable de l'huile d'amande permet une réduction de l'œdème dans les mêmes proportions et le même temps pour une concentration injectée identique à celle pratiquée pour l'extrait insaponifiable de l'huile de pulpe et de l' indometacine.
Dans un autre mode de mise en œuvre préféré les extraits insaponifiables de l'huile de pulpe sont administrés par voie orale aux doses de 5, 10, 50, 100 et 200 mg/kg sur cinq nouveaux lots de rats wistar maies. L'activité anti-inflammatoire d'extrait insaponifiable est comparée à celle de l' indometacine à la dose de
25 mg/kg.
La réduction de l'œdème est sensiblement inférieure et atteint la valeur de 60% après 4 heures avec une excellente tolérance gastrique contrairement à l' indometacine.
Les exemples qui suivent illustrent l'invention.
Exemple 1 :
Les fruits mûrs d' Astrocaryum vulgare sont traités de manière à séparer la pulpe de l'amande mécaniquement.
La pulpe est ensuite extraite à l'hexane pendant 2 heures à la température d'ébullition du solvant.
L'hexane est ensuite évaporé et la phase huileuse traitée en milieu basique par de la potasse alcoolique 2N, à reflux pendant 1 heure. La part insaponifiable résiduelle est recueillie et constitue l'extrait de pulpe dont l'activité anti-inflammatoire va être testée par la réduction de l'œdème généré sur la patte du rat par une injection de la carragénine.
L'injection de carragénine sous l'aponévrose plantaire de la patte postérieure du rat provoque une réaction inflammatoire aiguë qui peut être réduite par les substances anti-inflammatoires. Ce test bien connu est décrit par Winter (Carrageenan-Induced Oedema in Hind Paw of the Rat as an Assay for Anti-inflammatory Drugs, WINTER C.A., Proc. Soc . Exp . Bio . Med 111,(1962) 544-547.).
La carragénine (0,05 ml à 1% dans NaCl à 0,9%) est injectée dans le coussinet plantaire de la patte postérieure droite du rat, 30 min après administration intra péritonéale des substances à tester. Cette injection a été effectuée sur cinq lots de rats. Chaque lot est composé de six rats à 12 rats de type wistar mâle. Les trois premiers lots reçoivent l'extrait de pulpe de fruits d' strocaryum vulgare, aux doses de 50, 100 et 200 mg/Kg. Un lot d'animaux témoins sert de contrôle et reçoit l'excipient (Tween 80 à 2% dans NaCl à 0,9%). Le dernier lot, recevant de 1' indometacine à la dose de 5 mg/Kg, qui sert de référence. Pour chaque dose de substance, les concentrations de suspensions utilisées sont ajustées de manière à administrer exactement 2,5 ml par Kg de poids corporel.
Les mesures pléthysmographiques, déterminées à l'aide de pléthysmomètre de LENCE 05.7150 (P. LENCE, Arch. Int. Pharmacodyn,
136, 237-241, 1962) sont faites à lh, 2h, 3h, 4h, 5h, 6h, 7h, 8h, 23h et 24h après l'administration de la carragénine. La patte gauche non traitée sert de témoin.
L'activité anti-inflammatoire est calculée en pourcentage de réduction de l'oedème chez les rats traités par rapport aux témoins .
lh 2h 3h 4h 5h 6h 7h 8h 23h 24h
Indometacine
60.6 42.3 67.74 78.46 71.83 56.75 58.02 37.5 25.64 5mg/Kg 19.23
Extrait de pulpe: 50mg/Kg 36.36 5.76 37.10 70.42 64.61 55.40 46.91 42.04 10.25 11.53
lOOmg/Kg 42.42 21 .15 64.45 73.38 70.42 60.81 51.85 27.27 15.38 15.3?
200mg/Kg 42.42 38.46 61.30 72.30 71.83 55.40 46.91 35.22 23.07 19.23
Pourcentage de réduction de l'oedème (%) par l'extrait de pulpe d' Astrocaryum vulgare administré par voie intra-péritonéale
Exemple 2 :
Afin de déceler la concentration minimale de l'extrait d 'Astrocaryum vulgare dans l'activité anti-inflammatoire, des concentrations plus faibles que celles testées dans l'exemple 1 sont administrées avec un protocole expérimental identique à celui décrit dans l'exemple 1.
Les différentes concentrations testées sont de : 5, 10 et 100 mg/kg, Les mesures pléthysmographiques sont faites à lh, 2h, 3h, 4h, 5h, 6h après l'administration de la carragénine. La patte gauche non traitée sert de témoin.
Pour chaque groupe et pour chaque animal, le volume de l'œdème est calculé. Il est exprimé en pourcentage d'augmentation de la
patte par rapport à la mesure faite sur la patte non traitée (la patte gauche) .
L'œdème moyen de chaque groupe est calculé, ainsi que l'écart type. Il est comparé à celui du groupe témoin (groupe recevant le Tween dans NaCl) statistiquement au seuil de probabilité P = 0.01 par le test t de Student. (D. SCHWARTZ, Méthodes statistiques à l'usage des médecins et des biologistes, 4eme édition : Médecine, sciences, Flammarion, Paris). L'activité anti-inflammatoire est calculée en pourcentage de réduction de l'œdème chez les rats traités par rapport aux témoins.
Le pourcentage de réduction de l'œdème chez les animaux traités est calculé comparativement au groupe témoin. L'extrait testé présente une activité anti-inflammatoire remarquable lorsqu'il est administré par voie intra-péritonéale . Cette activité est comparable, voire supérieure à celle de 1' indometacine à la dose de 5 mg/Kg.
lh 2h 3h 4h 5h 6h
Extrait : 8.75 68.08 64.51 83.57 73.42 50.51 5mg/Kg lOmg/Kg 10.94 58.08 64.03 82.00 70.63 48.45
lOOmg/Kg 19.06 55.88 71.77 85.70 60.81 57.73
Pourcentage de réduction de l'oedème (%) par l' insaponifiable de pulpe d' Astrocaryum vulgare administré par voie intra-péritonéale
Exemple 3
Après séparation mécanique de la pulpe et de l'amande des fruits d'Astrocaryum vulgare, l'amande est extraite à l'hexane pendant 2 heures à la température d'ébullition du solvant.
L'hexane est ensuite évaporé et la phase huileuse est traitée par de la potasse alcoolique 2N, à reflux pendant 1 heure. La part insaponifiable résiduelle est recueillie et constitue l'extrait d'amande dont l'activité anti-inflammatoire est testée par le test de l'œdème à la carragénine. Le résultat est exprimé en pourcentage de réduction du volume de l'oedème, calculé à l'aide du pléthysmomètre de LENCE 05.7150.
La fraction insaponifiable de l'huile d'amande d' Astrocaryum vulgare présente une activité anti-inflammatoire marquée lorsqu'elle est administrée par voie intra-péritonéale, comme le montre les résultats obtenus, rassemblés dans le tableau ci- dessous.
lh 2h 3h 4h 5h 6h 7h
Indometacine 30.25 38.62 60.98 71.59 68.55 64.98 59.97 5mg/Kg
Extrait : 29.33 35.40 53.49 67.45 64.50 62.28 49.65 5 mg/Kg
Extrait : 28.51 39.46 53.47 69.25 66.53 60.23 52.31 10 mg/Kg
Extrait : 31.25 33.96 62.25 72.51 68.05 65.41 57.42 50 mg/Kg
Extrait : 29.16 45.28 64.35 73.21 67.05 63.25 59.64 100 mg/Kg
Extrait : 30.18 46.25 62.53 71.69 68.79 64.52 60.21 200 mg/Kg
Pourcentage de réduction de l'oedème (%) par l'extrait d'amande d' Astrocaryum vulgare administré par voie intrapéritonéale
Exemple 4 :
L'extrait de pulpe d'Astrocaryum vulgare préparé dans les conditions de l'exemple 1 a été testé en administration par voie orale pour évaluer son activité anti-inflammatoire. Le test choisi est celui de l'œdème à la carragénine.
La carragénine (0,05 ml à 1% dans NaCl à 0,9%) est injectée dans le coussinet plantaire de la patte postérieure droite du rat, une heure après administration orale des substances à tester. Cette injection a été effectuée sur sept lots de rats. Chaque lot est composé de six à douze rats de type wistar mâle. Les cinq premiers lots reçoivent la fraction insaponifiable, de l'huile extraite des pulpes de fruits d'Awara «Astrocaryum vulgare», aux doses de 5, 10, 50, 100 et 200 mg/Kg. Un lot d'animaux témoins sert de contrôle et reçoit l'excipient (Tween 80 à 2% dans NaCl à 0,9%). Le dernier lot, recevant de 1' indometacine à la dose de 25 mg/Kg, qui sert de référence. Pour chaque dose de substance, les concentrations de suspensions utilisées sont ajustées de manière à administrer exactement 1ml par 100g de poids corporel. Une précaution supplémentaire s'impose : cette injection est complétée par de l'eau ordinaire jusqu'à un volume total de 5 ml. Ce qui assure une hydratation uniforme chez tous les rats et minimise les variations individuelles de réponse à l'œdème des pattes.
Les mesures pléthysmographiques sont faites à lh, 2h, 3h, 4h, 5h, 6h et 7h, dans les conditions des exemples précédents, après l'administration de la carragénine. La patte gauche non traitée sert de témoin.
L'activité anti-inflammatoire est calculée en pourcentage de réduction de l'oedème chez les rats traités par rapport aux témoins.
Le volume de l'oedème est calculé à l'aide de pléthysmomètre de LENCE, appareil servant à la lecture de l'œdème.
Pour chaque groupe et pour chaque animal, le volume de l'œdème est calculé. Il est exprimé en pourcentage d'augmentation du volume de la patte par rapport à la mesure faite sur la patte non traitée. L'œdème moyen de chaque groupe est calculé, ainsi que l'écart type. Il est comparé à celui du groupe témoin statistiquement au seuil de probabilité P = 0.05 par le test t de Student référencé précédemment .
L'activité anti-inflammatoire est calculée en pourcentage de réduction de l'œdème chez les rats traités par rapport aux témoins. L'extrait de pulpe d' Astrocaryum vulgare présente une activité anti-inflammatoire marquée lorsqu'il est administré oralement, comme le montre les résultats visualisés dans le tableau suivant :
lh 2h 3h 4h 5h 6h 7h
Indometacine 24.57 48.7 78.6 82.21 60.63 58.31 56.45 25 mg/Kg
Extrait 32.41 43.51 56.61 59.61 58.42 56.62 50.98 5 mg/Kg
Extrait 29.51 46.61 49.00 58.32 56.97 56.32 54.27 10 mg/Kg
Extrait 30.23 42.00 60.65 63.45 56.23 55.59 55.28 50 mg/Kg
Extrait 32.14 47.57 60.38 74.7 64.67 60.16 55.26 lOOmg/Kg
Extrait : 29.6 41.76 61.25 76.18 70.51 61.32 55.45 20mg/Kg
Pourcentage de réduction de l'oedème (%) par l'extrait de pulpe d' Astrocaryum vulgare administré par voie orale
Exemple 5
L'extrait de l'amande d' Astrocaryum vulgare a été testé er administration par voie orale pour évaluer son activité antiinflammatoire. Le test choisi est celui de l'œdème à la carragénine.
Le protocole expérimental adopté pour cette étude est identique à celui décrit dans l'exemple 4.
La fraction extraite de l'huile d'amande d' Astrocaryum vulgare présente une activité anti-inflammatoire marquée lorsqu'elle est administrée oralement.
Cette activité présente un effet comparable à celui de 1' indometacine à 25 mg/Kg pour des concentrations plus élevées en extrait, comme le montre les résultats rapportés dans le tableau suivant :
lh 2h 3h 4h 5h 6h 7h
Indometacine
24.57 48.7 78.6 82.21 60.63 25mg/Kg 58.31 56.45
Extrait :
26.34 48.65 53.62 57.85 54.01 51.64 50.32 5 mg/Kg
Extrait :
25.96 10 mg/Kg 46.89 57.94 59.03 55.63 52.98 49.87
Extrait :
26.98 45.62 59.64 50 mg/Kg 67.87 61.25 58.23 52.43
Extrait :
27.64 49.32 62.87 69.28 100 mg/Kg 64.58 61.91 5.39
Extrait :
25.68 46.32 200 mg/Kg 63.58 70.21 67.23 61.54 5.97
Pourcentage de réduction de l'oedème (%) par l'extrait d'amande d' Astrocaryum vulgare administré par voie orale
Claims
REVENDICATIONS
- Extraits de fruits d'Astrocaryuin vulgare caractérisés en ce que les dits extraits possèdent une activité thérapeutique à caractère anti-inflammatoire ; - Extraits de fruits d' Astrocaryum vulgare selon la revendication 1 caractérisés en ce que les fruits sont matures ; - Extraits de fruits d' Astrocaryum vulgare selon les revendications 1 et 2 caractérisés en ce qu'ils sont constitués par la partie insaponifiable des huiles extraites par un solvant hydrocarboné non polaire ; - Extraits de fruits d' strocaryum vulgare selon les revendications 1 à 3 caractérisés en ce que le solvant d'extraction est l'hexane ; - Extraits de fruits d' Astrocaryum vulgare selon les revendications 1 et 2 caractérisés en ce qu'ils sont constitués par la partie insaponifiable des huiles extraites par pression après prétraitement à la vapeur ; - Extraits de fruits d' Astrocaryum vulgare selon les revendications 1 à 5 caractérisés en ce que la pulpe est la part du fruit concernée pour préparer l'extrait correspondant ; - Extraits de fruits d' Astrocaryum vulgare selon les revendications 1 à 6 caractérisés en ce que l'amande est la part du fruit concernée pour préparer l'extrait correspondant ; - Extraits de fruits d' Astrocaryum vulgare selon les revendications 1 à 7 caractérisés en ce que l'activité thérapeutique à caractère anti-inflammatoire est mise en évidence par le test à la carragénine par voie intrapéritonéale ;
- Extraits de fruits d' Astrocaryum vulgare selon les revendications 1 à 9 caractérisés en ce que l'activité thérapeutique à caractère anti-inflammatoire est mise en évidence par le test à la carragénine par voie orale ; - Extraits de fruits dr Astrocaryum vulgare selon la revendication là 8 caractérisés en ce que le produit de référence permettant de quantifier l'activité antiinflammatoire est l' indometacine ; - Extraits de fruits d' Astrocaryum vulgare selon les revendications 1 à 10 caractérise en ce que la réduction de l'œdème à la carragénine est comprise entre 60 et 70% pour un temps compris entre 3 et 4h après administration par injection de 5 mg/kg à 10 mg/kg d'extrait inasponifiable de l'huile de pulpe ; - Extraits de fruits d' Astrocaryum vulgare selon les revendications 1 à 11 caractérise en ce que la réduction de l'œdème à la carragénine est comprise entre 60 et 70% pour un temps compris entre 3 et 4h après administration par injection de 5 mg/kg à 10 mg/kg d'un extrait isnaponifiable de l'huile d'amande ; - Extraits de fruits d' Astrocaryum vulgare selon les revendications 1 à 12 caractérise en ce que la réduction de l'œdème à la carragénine entre 50 et 70% pour un temps compris entre 3 et 4h après administration par voie orale de 10 mg/kg à 75 mg/kg d'un extrait insaponifiable d'huile de pulpe ; - Extraits de fruits d' strocaryum vulgare selon les revendications 1 à 14 caractérise en ce que la réduction de l'œdème à la carragénine entre 50 et 70% pour un temps compris entre 3 et 4h après administration par voie orale de 10 mg/kg à 75 mg/kg d'un extrait insaponifiable d'huile d'amande ;
- Préparation à caractère anti-inflammatoire obtenue selon les revendications 1 à 14, utilisée dans les domaines pharmaceutique, diététique et cosmétique.
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