WO2003091727A1 - Methode d'evaluation de la compatibilite sanguine - Google Patents

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blood
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Akon Higuchi
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Asahi Kasei Kabushiki Kaisha
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
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Definitions

  • the present invention relates to a method for evaluating the blood compatibility of a medical material. More specifically, an aqueous solution is prepared by dissolving a mixture of fibrinogen and at least one other plasma protein, and the aqueous solution is brought into contact with a test piece of a medical material to form an aqueous solution. The fibrinogen contained is adsorbed on the test piece, the amount of fibrinogen adsorbed on the test piece is measured, and the amount of the fibrinogen adsorbed is determined from the amount of the adsorbed fibrinogen.
  • a method for assessing the blood compatibility of a medical material including assessing the compatibility.
  • the use of the blood compatibility evaluation method of the present invention makes it possible to evaluate blood compatibility easily and with good reproducibility without using platelet-rich plasma in which evaluation results differ due to individual differences. Become. Conventional technology
  • Antithrombotic materials having such properties are used in devices and tools used for diagnosis and treatment of diseases, such as disposable injection needles, disposable syringes, disposable tubes, and the like.
  • Thrombus formation is a complex class reaction involving multiple components in the blood, but is said to consist of two main processes. One is the generation of insoluble fibrin by the cascade reaction of coagulation factors, and the other is the generation of thrombus by aggregation of platelets. These two processes form a typical thrombus.
  • a blood clot is formed on a medical device, etc.
  • the functions that should be fulfilled are severely impaired. For example, in the case of an artificial blood vessel, not only is it difficult to embolize and develop functions, but it is sufficiently expected that the detached thrombus will enter the bloodstream and cause embolism in other organs.
  • complement system there is a system in serum that plays an important role in host defense composed of 20 types of plasma proteins called the complement system.
  • the complement system plays an important role in the bactericidal activity of antibodies, and the activation pathway is roughly divided into the classical pathway and the alternative pathway. When blood comes into contact with medical material, complement activation occurs primarily through the alternative pathway, leading to abnormal immune responses and increased blood pressure.
  • platelets play an important role in the thrombus formation reaction. Platelet activity begins with attachment to blood vessels, which involves coagulation factor VII I and the subsequent coagulation reaction involves factor XII. Many of the medical materials currently used are used in places that come into contact with blood, so platelet-rich plasma (abbreviated as “PRP”) is prepared from the living body and is present there using PRP. Platelet adsorption is evaluated by evaluating the adhesion of platelets to the material.
  • PRP platelet-rich plasma
  • RI a radioisotope such as 111 In
  • Other methods for assessing blood compatibility include, for example, labeling isolated platelets with RI (a radioisotope such as 111 In ), contacting the material, and evaluating the radioactivity of the platelets adsorbed on the material.
  • RI a radioisotope such as 111 In
  • a method for determining platelet adsorption (Baboon Fibrinogen Adsorption and Platelet Adhesion to Polymeric Materials", Joseph A. Chin, Thomas A. Horbett, and Buddy D. Ralner, Thombos is and Haeotasis, 65, 608) -617 (1991)).
  • this evaluation method requires complicated operations such as platelet isolation and labeling with RI, it is desired to establish a highly reproducible and simple 'blood compatibility evaluation method'.
  • the present inventors surprisingly found that an aqueous solution obtained by dissolving a mixture of fibrinogen and at least one other plasma protein was used for testing medical materials. It was found that the amount of fibrinogen adsorbed on the test piece showed a good correlation with the amount of platelet adsorbed using PRP by contact with the test piece, thus completing the present invention. Reached.
  • a main object of the present invention is to provide a method for easily and easily evaluating blood suitability with good reproducibility.
  • FIG. 1 is a graph showing the correlation between the amount of fibrinogen adsorbed and the amount of platelet adsorbed measured using an aqueous solution containing fibrinogen, IgG and albumin;
  • Figure 2 is a graph showing the correlation between the amount of adsorbed IgG and the amount of adsorbed platelets measured using an aqueous solution containing fibrinogen, IgG and albumin;
  • Figure 3 contains fibrinogen, IgG and albumin A graph showing the correlation between the amount of albumin adsorbed and the amount of platelet adsorbed measured using an aqueous solution;
  • Figure 4 is a graph showing the correlation between the amount of fibrinogen adsorbed and the amount of platelet adsorbed measured using an aqueous solution containing only fibrinogen;
  • Figure 5 is a graph showing the correlation between the amount of IgG adsorbed and the amount of platelet adsorbed measured using an aqueous solution containing only IgG;
  • Figure 6 is a graph showing the correlation between the amount of albumin adsorbed and the amount of platelet adsorbed measured using an aqueous solution containing only albumin;
  • FIG. 7 is a SEM image of a test piece on which PRP-derived platelets are adsorbed.
  • FIG. 8 is an SEM image of a test piece to which platelets derived from PRP were adsorbed. Detailed description of the invention
  • an aqueous solution obtained by dissolving a mixture of fibrinogen and at least one other plasma protein.
  • the blood amount of the medical material is determined based on the amount of the adsorbed fibrinogen. Assess liquid compatibility,
  • a method for assessing the blood compatibility of medical materials including this.
  • the aqueous solution is 100 to 400 ppm of fibrinogen, 3,500 to 4,500 ppm of albumin and 500 to 400 ppm.
  • the aqueous solution is 200 to 400 ppm of fibrinogen
  • the present invention provides (a) an aqueous solution obtained by dissolving a mixture of fibrinogen and at least one other plasma protein,
  • an aqueous solution obtained by dissolving a mixture of fibrinogen and at least one other plasma protein (hereinafter often referred to as “plasma protein mixed aqueous solution”) ) Is provided.
  • Fibrinogen is an adsorbed protein that affects the adhesion of platelets, a type of plasma protein and one of the cells most involved in thrombus formation. Since fibrinogen is known to enhance cell adhesion, the present invention focused on fibrinogen.
  • the plasma proteins other than fibrinogen used in the present invention are not particularly limited, but include albumin, ⁇ 1-cellomcoid, ⁇ 1-antitrypsin, 1-macroglobulin, and a1- , Immunoglobulins such as ⁇ -gamma-lipoprotein IgA, ⁇ -globulin (IgG), and IgM, Clq, C3, C 4, fibronectin and the like.
  • the present inventors have found that when fibrinogen is used in combination with at least one other plasma protein in addition to fibrinogen, the amount of adsorbed fibrinogen and the amount of adsorbed platelets can be determined. It was found that there was a good correlation between them. The reason for this is not clear When fibrinogen is used in combination with at least one other plasma protein, an interaction similar to the in vivo environment occurs between the plasma proteins. It is considered that
  • At least one other plasma for use with fibrinogen 5233 is provided.
  • albumin and immunoglobulin are preferred. It is said that there are three types of adsorbed proteins in blood that affect platelet adhesion: fibrinogen, albumin, and ⁇ 1globulin (“Biomaterials ( Biomate rials).
  • Fibrino Igen strengthens cell adhesion.
  • Albumin globulin enhances cell adhesion. It is reported to weaken adhesion.
  • IgG immunoglobulin used in the present invention, and examples include IgG, IgA, IgM, and IgE, and IgG is preferred in terms of availability.
  • fibrinogen and other plasma proteins proteins from humans, cows, sheep, rabbits, rats, mice, etc., and genetically modified proteins can be used. However, when evaluating blood compatibility with human blood, it is preferable to use human-derived proteins.
  • the evaluation method of the present invention has a main purpose of evaluating the suitability of a medical material for human blood. Therefore, the ratio of plasma protein contained in a plasma protein mixed aqueous solution (that is, fibrinogen The weight ratio of other plasma proteins to that of other plasma proteins) is preferably the same as the proportion of plasma proteins present in the human blood.
  • the fact that the proportion of plasma protein is the same as that present in the blood means that fibrino --The environment where the gene is placed is close to the environment in human blood, which shows a high correlation between the amount of platelet adsorbed and the amount of fibrinogen adsorbed.
  • the ratio of plasma protein present in blood which is considered to be one of the reasons, can be easily obtained from the plasma protein concentration in blood.
  • ⁇ ⁇ Rack test values No Hook (Interpretation of Diagnostic Tests, Original 6th ed., Jacques Wal lach, Translated by Tsuguya Fukui, Translated by Tsuya Fukui, Hiroshi Tajima, Medical and Dental Publishing Co., Ltd., (1997))
  • Hook Interpretation of Diagnostic Tests, Original 6th ed., Jacques Wal lach, Translated by Tsuguya Fukui, Translated by Tsuya Fukui, Hiroshi Tajima, Medical and Dental Publishing Co., Ltd., (1997)
  • the normal values of humans for fibrinogen, albumin and erglobulin are as follows.
  • the weight ratio of fibrinogen-no-albumin immunoglobulin in the plasma protein-mixed aqueous solution is as follows: It is preferably 2/60/10 to 8Z900Z40, and more preferably 4/70/12 to 8/90/34.
  • the concentration of plasma protein contained in the plasma protein mixed aqueous solution is not particularly limited. It is preferably 1/10. In the method of the present invention, even if the plasma protein S concentration of the plasma protein mixed aqueous solution is 1/10 of the protein concentration present in blood, it is sufficient to evaluate the blood compatibility of the medical material.
  • the plasma protein mixed aqueous solution used in the present invention contains three types of plasma proteins, namely fibrinogen, albumin and immunoglobulin, based on the plasma protein concentration of human blood described in Table 1 above,
  • the preferred fibrinogen concentration should be between 100 and 400 ppm (ie, mg Z liter), more preferably between 200 and 400 ppm.
  • the preferred albumin concentration is between 3,000 and 4,500 ppm, more preferably
  • preferred immunoglobulin concentration is 500 to 2,00 ppm, more preferably 600 to 1,700 ppm .
  • aqueous solvent that dissolves a mixture of fibrinogen and at least one other plasma protein, it can maintain a pH of 6 to 8 to prevent protein denaturation and the like.
  • buffer There is no particular limitation on the buffer used. Physiological saline and phosphate buffer are preferred because they are readily available.
  • the aqueous solution obtained by dissolving the plasma protein mixture may be prepared by a method generally used for preparing a protein solution, and may be prepared by simply dissolving the plasma protein in an aqueous solvent at 0 ° C to room temperature. And it is possible.
  • aqueous solution of a plasma protein mixture contains salts in a buffer solution in addition to the plasma protein. Also, for example, sugar It does not matter which saccharides are contained.
  • step (b) of the evaluation method of the present invention the aqueous solution of plasma protein mixture is brought into contact with a test piece of a medical material, and fibrinogen contained in the aqueous solution of plasma protein mixture is adsorbed to the test piece.
  • the method for bringing the test piece into contact with the plasma protein mixed aqueous solution is not particularly limited as long as fibrinogen can be adsorbed to the test piece.
  • the method may be applied to a plasma protein solution at 37 ° C.
  • the test piece should be immersed for 1 to 3 hours.
  • step (c) of the evaluation method of the present invention the amount of fibrinogen adsorbed on the test piece is measured. Since the test specimen adsorbs at least one other plasma protein along with the fibrinogen, the amount of fibrinogen adsorbed must be selectively measured. Specifically, RI (radioisotope, for example, 1 2 5 I) with Huy yellowtail Roh one Gen labeled with, in the evaluation child radioactivity of the test piece, Hui yellowtail Roh one Gen intake Chakuryou 3 ⁇ 4r 5k method (Human lasma fibiri nogen adsorption and platelet adhesion to polystylene, We i-B or Ts ai, John M. Grunkemeier, Thomas A.
  • RI radioisotope, for example, 1 2 5 I
  • Huy yellowtail Roh one Gen labeled with, in the evaluation child radioactivity of the test piece
  • Hui yellowtail Roh one Gen intake Chakuryou 3 ⁇ 4r 5k method Human lasma fibiri nogen ad
  • ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay using an antibody that specifically binds to fibrinogen labeled with HRP (horseradish peroxidase); , Often referred to as "ELISA". Is the specificity high and the simplicity of the measurement? Thus, ELISA is preferred as the method used in step (c) of the present invention.
  • step (d) of the evaluation method of the present invention the blood compatibility of the medical material is evaluated from the amount of the adsorbed fibrinogen.
  • the platelet adsorbed amount is determined from the amount of fibrinogen adsorbed. Can be calculated. Specifically, a calibration curve as shown in Fig. 1 of the present application showing the relationship between the amount of fibrinogen adsorbed and the amount of platelet adsorbed was created, and the calibration curve was used to calculate platelet from the amount of fibrinogen adsorbed. The amount of adsorption can be determined.
  • the method of the present invention since biological materials such as plasma, PRP, and platelets are not used, it is necessary to take into account the variation in evaluation results due to individual differences, the date and time of blood collection, and the method of blood collection. In addition, it is possible to evaluate the blood compatibility based on the platelet adsorption amount. In addition, in the method of the present invention, for example, the amounts of absorbed amounts of fibrinogen of the film coated with the polymer to be evaluated and the uncoated film are measured, and the coated film and the uncoated film are measured. Hemocompatibility can also be compared from the difference in fibrinogen adsorption seen between uncoated films.
  • the medical material for which the blood compatibility can be evaluated by the method of the present invention there is no particular limitation on the medical material for which the blood compatibility can be evaluated by the method of the present invention, but the material constituting equipment or tools used for diagnosing or treating a disease, or a coating on the surface thereof
  • the material for forming is mentioned. Specifically, disposable needles, disposable syringes, disposable tubes, day disposable catheters, disposable force knuckles for artificial kidneys, blood collection devices, blood bags, transfusion devices, and transfusion solutions
  • This paper describes the blood compatibility of instruments, blood circuits for artificial kidneys, hollow fiber dialysers, human joints, intraocular lenses, materials forming artificial lungs and artificial blood vessels, or materials for forming a coating on the surface. It can be evaluated by the method of the invention.
  • Example 1 5 g of polysulfone (average molecular weight 3,500) was dissolved in 100 ml of 1,2-dichloroethane to prepare a polysulfone polymer solution. 10 g of this solution was applied on a 9 cm diameter dish and dried at normal pressure and room temperature to obtain a film having a thickness of about 70 zm. The obtained film was cut out into a circular shape with a diameter of 12.7 mm and used as a base film. An aqueous solution (poloxamer concentration of 0.1, 0.5, 1, 2, or 5) of Poloxamer (Adecapul mouth nick F_68 (trademark) manufactured by Asahi Denka Kogyo Co., Ltd., Japan) was used for this film. % By weight) and dried at normal pressure and room temperature to coat the base film to obtain test specimens of five kinds of medical materials having different coating amounts.
  • Example 1 5 g of polysulfone (average molecular weight 3,500) was dissolved in 100 ml of
  • human fibrinogen, human IgG and Hemocompatibility was assessed using human and human albumin.
  • Human IgG, human fibrinogen and human albumin, which are purified antigens, were dissolved in PBS, and human IgG was 1 and OOO ppm human fibrinogen was dissolved in PBS.
  • An aqueous solution of 0 ppm and 4,000 ppm of human albumin was obtained.
  • the various test pieces prepared in Reference Example 1 having different coating amounts were immersed in the above aqueous solutions, and the test pieces were brought into contact with the plasma proteins at 37 ° C for 2 hours to allow the plasma proteins to adsorb to the test pieces. .
  • the amounts of adsorbed fibrinogen, IgG and albumin were determined by ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) using HRP (Horse Radish Peroxidase) labeled antibodies corresponding to the respective purified antigens. The amount of the beach was measured. The amount of the purified antigen (fibrinogen, IgG or albumin) adsorbed on the test piece was represented by the absorbance (wavelength 450 nm).
  • the amount of platelets adsorbed from human platelet-rich plasma (P1a1 et Rich P1 asma; hereinafter abbreviated as "PRP") was measured.
  • Fresh human whole blood anticoagulated with citrate was centrifuged at 1,200 rpm for 10 minutes, and the upper PRP was collected after centrifugation.
  • Various test pieces with different coating amounts prepared in Reference Example 1 were placed in a 24-well plate, to which 1 ml of PRP was added, and immersed at 37 ° C for 2 hours. The platelets were adsorbed on the test piece by the method described above.
  • the amount of anti-adsorbed blood from human PRP was Masaru Tanakaeta 1., Biomateria 1 s, 21, 1471-1481 (2000), and determined by scanning electron microscope (SEM) observation. Specifically, in magnification 5 0 0 times conditions, the number of platelets present in the same field of view (xl 0 4 / cm 2) was platelet count adsorption.
  • Figure 1 shows the relationship between the amount of fibrinogen adsorbed and the amount of platelet adsorbed
  • Figure 2 shows the relationship between the amount of IgG adsorbed and the amount of platelet adsorbed
  • FIG. 2 shows the relationship between the amount of IgG adsorbed and the amount of platelet adsorbed
  • FIG. 2 shows the case of human IgG adsorbed and human albumin (FIG. 3)
  • Hemocompatibility was evaluated using a solution containing only human IgG, a solution containing only human fibrinogen, and a solution containing only human albumin as plasma proteins.
  • a reference example was prepared in the same manner as in Example 1 using 5, OOO ppm of a human IgG solution, 3 O of 0 ppm of a human fibrinogen solution and 50,000 ppm of a human albumin solution. The amount of each plasma protein bound to various test pieces with different coating amounts prepared in step 1 was measured.
  • Figure 4 shows the relationship between the amount of fibrinogen adsorbed and the amount of platelet adsorbed
  • Figure 5 shows the relationship between the amount of IgG adsorbed and the amount of platelet adsorbed
  • Figure 6 shows the relationship between the amount of albumin adsorbed and the amount of platelet adsorbed. It was shown to. As is evident from Figs. 4 to 6, even when fibrinogen alone or other plasma proteins were used alone, the amount of fibrinogen and platelet adsorbed as shown in Fig. No correlation was found between the two.
  • Reference example 2 shows the relationship between the amount of fibrinogen adsorbed and the amount of platelet adsorbed.
  • PRP was prepared from fresh whole blood anticoagulated with citrate in the same manner as in Example 1, and the amount of human PRP-derived platelets adsorbed on the PET test film was measured.
  • a test film made of PET was placed in a well of a 24-hole plate, and lm1 of PRP was added thereto. Platelets were adsorbed by immersing the test film in PRP at 37 ° C for 2 hours. The film on which the platelets had been adsorbed was observed under a scanning electron microscope (magnification: 2000). This platelet adsorption experiment was performed again using the same test film and a PRP prepared from a blood donation of a different individual.
  • Figure 7 shows the results of the first run
  • Figure 8 shows the results of the second run. As can be seen from Figs.
  • the blood compatibility evaluation method of the present invention evaluates the blood compatibility of medical materials without using biological materials such as plasma, platelet-rich plasma, and platelets. can do. Therefore, it is possible to easily and easily evaluate the blood compatibility with good reproducibility without considering individual differences, the date and time of blood sampling, and the variation of the evaluation results depending on the blood sampling method.

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Description

明 細 書 血液適合性の評価方法 技術分野
本発明は、 医用材料の血液適合性を評価するための方法に 関する。 更に詳細には、 フイ ブリ ノ一ゲンと少なく と も 1 種 の他の血漿蛋白 との混合物を溶解してなる水溶液を提供し、 該水溶液を医用材料の試験片と接触させて、 該水溶液に含ま れるフイ ブリ ノ一ゲンを該試験片に吸着させ、 該試験片に吸 着したフイ ブリ ノ 一ゲンの量を測定し、 そして該吸着したフ ィ プリ ノーゲンの量か ら該医用材料の血液適合性を評価する こ とを包含する、 医用材料の血液適合性を評価するための方 法に関する。 本発明の血液適合性の評価方法を用いる と、 個 体差などによって評価結果に違いが生じる血小板過剰血漿を 使う こ となく 、 再現性良く 、 簡便に血液適合性を評価する こ とが可能となる。 従来技術
近年、 各種の高分子材料の医用への適応について検討が進 め られてお り 、 人工腎臓用膜、 血漿分離用膜、 カテーテル、 人工肺用膜、 人工血管、 癒着防止膜、 人工皮膚等への高分子 材料の利用が期待されている。 これらの用途においては、 生 体にとって異物である合成材料 （高分子材料） を生体組織や 体液と接触させて使用する こ とになるので、 医用材料となる 高分子材料は生体適合性を有する こ とが必要である。 医用材 料に要求される生体適合性はその目的や使用法によって異な るが、 血液と接する医用材料には、 血液凝固系の抑制、 血小 板の粘着 · 活性化の抑制、 補体系の活性化の抑制という特性 が求め られる。 このよ うな特性を有する抗血栓性材料は、 疾 患の診断や治療に使われる機器や用具などに使われてお り 、 例えば、 デイ スポーザブル注射針、 ディ スポ一ザブル注射筒 ディ スポーザブルチューブ、 ディ スポーザブルカテーテル、 人工腎臓用ディ スポ一ザブル力ニューレ、 採血用器具、 血液 バッ グ、 輸血用器具、 輸液用器具、 人工腎臓用血液回路、 中 空糸透析器、 人工関節、 眼内レンズ、 人工肺、 人工血管など に使用 されている。
種々 の材料を生体組織や血液と接触させた場合、 最初に起 こる現象が蛋白質吸着であ り 、 吸着した蛋白質を介して細胞 接着が生じる。 このよ うな細胞接着によって血栓形成、 炎症 貧食などが生じる こ とになる。 血栓形成は血液中の多成分が 関与する複雑な階級反応であるが、 主に 2 つのプロセスか ら なる とされている。 1 つは凝固因子のカスケ一 ド反応による 不溶性フイ ブリ ンの生成であ り 、 他の 1 つは血小板の凝集に よる血栓の生成である。 この 2 つのプロセスによ り典型的な 血栓が形成される。 医療器具等に血栓が形成される と、 器具 の本来果たすべき機能は著しく損なわれる ことになる。 例え ば、 人工血管であれば栓塞し、 機能の発現は困難となるばか りでなく 、 剥離した血栓が血流に乗り、 他の臓器において栓 塞を起こすことも十分予想される。
また、 血清中には補体系という 2 0種の血漿蛋白よ り構成 される生体防御に重要な役割を担う系が存在する。 補体系は 抗体の殺菌活性に重要な役割を果たし、 その活性経路は古典 経路および第 2経路の 2 つに大別される。 血液が医用材料に 接触する と、 補体の活性化が主に第 2経路によって起こ り、 免疫応答の異常や血圧上昇といった症状を引き起こす。
上述したよう に、 医用材料にはその目的、 使用法に応じた 生体適合性が要求されるが、 特に血小板吸着量評価は抗血栓 性との相関の良さから、 抗血栓性材料を評価する際に初めに 選択する評価方法となっている。 血栓形成反応には、 凝固因 子に加え血小板も重要な役割を担っている。 血小板の働きは 血管への付着から始まるが、 これには凝固第 VII I 因子が関 与し、 続く 凝固反応には第 X II 因子が関与する。 現在使用さ れている医用材料の多く は血液と接触する箇所で使用されて いるため、 生体から血小板過剰血漿 （Platelet Rich Plasma. " P R P " と略す） を調製し、 P R P を用いてそこに存在す る血小板の材料に対する付着を評価する こ とで血小板吸着量 評価が行われている。 この方法は、 測定手技が確立されてお り 、 血栓形成の評価として採用されている （"Blood compatibi li ty aspects of poly(2-methoxyethylacrylate). (PMEA) -relationship between protein adsorption and platelet adhesion on PMEA surface", Mas ar u Tanaka, Tadash i Mo t omur a, Miho Kawad a, Takao Anz a i , Yuu Kas o r i To s h i f urn i Shiroya, Ken i ch i Sh imura, Mako t o On i s h i , Aki r a Moch i zuki ; B i oma t e r i a 1 s , 21, 1471 - 1481 (2000) ) 上述した血液適合性の評価方法は生体由来の材料である P R P を用いるため、 個体差や血漿採血の 日時、 採血方法など が P R P の血小板量および血小板の形態に影響を与える。 こ のよ うな P R P の性質のばらつきが測定系の不安定要因 とな つている。 従って、 再現性の高い、 簡便な血液適合性の評価 方法の確立が望まれている。
その他の血液適合性の評価方法と しては、 例えば、 単離し た血小板を R I ( 111 I n等の放射性同位元素） でラベル し 材料に接触させ、 材料に吸着した血小板の放射活性を評価す る こ とで、 血小板吸着量を求める方法 （"Baboon Fibrinogen Adsorption and Platelet Adhesion to Polymeric Materials", Joseph A. Ch inn, Thomas A. Horbett, and Buddy D. Ralner, Thombos i s and Hae otasis, 65, 608 - 617 ( 1991 ) ) が報告されている。 しかし、 この評価方法は、 血小板の単離 や R I による ラベル化といっ た複雑な操作が必要であるため 再現性の高い、 簡便な'血液適合性の評価方法の確立が望まれ ている。 発明の概要
本発明者は、 上記課題を解決すべく鋭意研究の結果、 驚く べきことに、 フイ ブリ ノ一ゲンと少なく とも 1種の他の血漿 蛋白 との混合物を溶解してなる水溶液を医用材料の試験片と 接触させる ことで、 試験片に吸着させたフイ ブリ ノ一ゲンの 量は、 P R Pを用いて測定した血小板吸着量と良好な相関性 を示すこ とを知見し、 本発明を完成するに至った。
従って、 本発明の主の目的は、 再現性良く 、 簡便に血液適 合性の評価を行うための方法を提供す'る ことにある。
本発明の上記'及びその他の諸目的、 諸特徴ならびに諸利益 は、 添付の図面を参照しながら行う以下の詳細な説明及び請 求の範囲から明 らかになる。 図面の簡単な説明
図面において ：
図 1 は、 フイ ブリ ノ一ゲン、 I g G及びアルブミ ンを含む 水溶液を用いて測定した、 フイ ブリ ノ一ゲン吸着量と血小板 吸着量の相関関係を示すグラフであ り ；
図 2 は、 フイ ブリ ノ一ゲン、 I g G及びアルブミ ンを含む 水溶液を用いて測定した I g G吸着量と血小板吸着量の相関 関係を示すグラフであり ；
図 3 は、 フイ ブリ ノ一ゲン、 I g G及びアルブミ ンを含む 水溶液を用 いて測定したアルブミ ン吸着量と血小板吸着量の 相関関係を示すグラフであ り ；
図 4 は、 フィ プリ ノーゲンのみを含む水溶液を用いて測定 したフ ィ プリ ノーゲン吸着量と血小板吸着量の相関関係を示 すグラ フであ り ；
図 5 は、 I g Gのみを含む水溶液を用 いて測定した I g G 吸着量と血小板吸着量の相関関係を示すグラ フであ り ；
図 6 は、 アルブミ ンのみを含む水溶液を用いて測定したァ ルブミ ン吸着量と血小板吸着量の相関関係を示すグラフであ り ；
図 7 は、 P R P 由来血小板の吸着した試験片の. S E M画像 であ り ； そして
図 8 は、 P R P 由来血小板の吸着した試験片の S E M画像 である。 発明の詳細な説明
本発明によれば、 （ a ) フイ ブリ ノ一ゲンと少なく と も 1 種の他の血漿蛋白 との混合物を溶解してなる水溶液を提供し
( b ) 該水溶液を医用材料の試験片と接触させて、 該水溶液 に含まれる フ ィ プリ ノ 一ゲンを該試験片に吸着させ、
( c ) 該試験片に吸着したフイ ブリ ノ一ゲンの量を測定し、 そして
( cl ) 該吸着したフ ィ プリ ノーゲンの量か ら該医用材料の血 液適合性を評価する、
こ と を包含する、 医用材料の血液適合性を評価するための方 法が提供される。 次に、 本発明の理解を容易にするために、 まず本発明の基 本的特徴及び好ましい態様を列挙する。
1 . ( a ) フ イ ブリ ノ一ゲンと少なく と も 1 種の他の血漿蛋 白 との混合物を溶解してなる水溶液を提供し、
( ) 該水溶液を医用材料の試験片と接触させて、 該水溶液 に含まれる フ ィ プリ ノーゲンを該試験片に吸着させ、
( c ) 該試験片に吸着したフイ ブリ ノ 一ゲンの量を測定し、 そして
( d ) 該吸着したフ ィ プリ ノーゲンの量か ら該医用材料の血 液適合性を評価する、
こ とを包含する、 医用材料の血液適合性を評価するための方 法。
2 . 該少な く と も 1 種の他の血漿蛋白がアルブミ ン及び免疫 グロブリ ンを包含する こ とを特徴とする、 前項 1 に記載の方 法。
3 · 該水溶液中のフ ィ プリ ノ一ゲン/アルブミ ン /免疫グロ ブリ ンの重量比が、 2 / 6 0 / 1 0 〜 8 Z 9 0 / 4 0 である こ とを特徴とする、 前項 2 に記載の方法。
4. 該水溶液が 1 0 0 〜 4 0 0 p p mのフイ ブリ ノ一ゲン、 3 , 0 0 0〜 4 , 5 0 0 p p mのアルブミ ン及び 5 0 0〜
2 , 0 0 0 p. p mの免疫グロブリ ンを含むこ とを特徴とする 前項 2又は 3 に記載の方法。
5 . 該水溶液が 2 0 0 〜 4 0 0 p p mのフイ ブリ ノ一ゲン、
3 , 5 0 0 〜 4， 5 0 0 p p mのアルブミ ン及び 6 0 0〜 1 , 7 0 0 p p mの免疫グロブリ ンを含むこ とを特徴とする 前項 4 に記載の方法。 以下、 本発明を詳細に説明する。
本発明は、 （ a ) フイ ブリ ノ 一ゲンと少なく と も 1 種の他 の血漿蛋白 との混合物を溶解してなる水溶液を提供し、
( b ) 該水溶液を医用材料の試験片と接触させて、 該水溶液 に含まれる フィ プリ ノ ーゲンを該試験片に吸着させ、
( c ) 該試験片に吸着したフイ ブリ ノ一ゲンの量を測定し、 そして
( d ) 該吸着したフ イ ブリ ノ 一ゲンの量か ら該医用材料の血 液適合性を評価する、
こ とを包含する、 医用材料の血液適合性を評価するための方 法である。
本発明の評価方法の工程 （ a ) においては、 フ イ ブリ ノ一 ゲンと少なく と も 1 種の他の血漿蛋白 との混合物を溶解して なる水溶液 （以下、 屡々、 「血漿蛋白混合水溶液」 と称す る） を提供する。 フイ ブリ ノ一ゲンは血漿蛋白の 1 種であ り 血栓形成に最も関与する細胞の一つである血小板の粘着に影 響を与える吸着蛋白質である。 フィ プリ ノーゲンは細胞の接 着を強める こ とが知 られている こ とか ら、 本発明においては フイ ブリ ノ 一ゲンに着目 した。
本発明で用いるフィ プリ ノ一ゲン以外の血漿蛋白に特に限 定はないが、 アルブミ ン、 α 1 -セロムコイ ド、 α 1 -アンチ ト リ プシン、 ひ 1 -マク ロ グロ ブリ ン、 a 1 -ノ、プ トグロブリ ン、 α ΐ -セル口プラスミ ン、 ト ランス フェ リ ン、 リ ポプロテイ ン I gA、 ァ -グロブリ ン（I gG)、 I gM等の免疫グロブリ ン、 C l q、 C 3、 C 4、 フィ ブロネクチン等が挙げられる。 本発明者は、 フ イ ブリ ノ ーゲンのみな らず、 フ イ ブリ ノ ーゲンと少なく とも 1 種の他の血漿蛋白 と を組み合わせて用いる と、 フィ プリ ノ —ゲン吸着量と血小板吸着量との間に良好な相関性が存在す る こ と を知見した。 その理由は明 らかではない力 フイ ブリ ノーゲンと少な く と も 1 種の他の血漿蛋白 と を組み合わせて 用いる と、 生体内における環境と同様の相互作用が血漿蛋'白 の間に生じるためであ る と考え られる。
フィ プリ ノ ーゲンと共に用いる少なく と も 1 種の他の血漿 5233
10
蛋白 としては、 アルブミ ンと免疫グロブリ ンが好ま しい。 血 小板の接着に影響を与える血中に存在する吸着蛋白質は、 フ イ ブリ ノ 一ゲン、 アルブミ ン、 τ 一 グロ ブリ ンの 3種類であ る と言われてお り （ 「バイオマテリ アル （Biomate rials
Science)」 、 p.56-65、 中原宣男、 石原一彦、 岩崎泰彦共著 コ ロナ社 （ 1999)) 、 フ イ ブリ ノ 一ゲンは細胞の接着を強め . アルブミ ンゃァ 一グロプリ ンは細胞の接着を弱める と報告さ れている。 これら 3 種の血漿蛋白 を組み合わせて用いた場合 に、 フィ プリ ノーゲン吸着量と血小板吸着量との間に極めて 良好な相関性が見られる。 本発明で使用する免疫グロブリ ン に特に限定はなく 、 I g G、 I g A、 I g Mや I g Eなどが 挙げられ、 入手容易性か ら I g Gが好ま しい。
フイ ブリ ノ一ゲンやその他の血漿蛋白 と しては、 ヒ ト、 牛 羊、 ゥサギ、 ラ ッ ト、 マウスなどの蛋白や、 遺伝子組み換え 蛋白を用いる こ とができる。 しかし、 ヒ ト の血液に対する血 液適合性を評価する場合には、 ヒ ト 由来の蛋白 を用いる こ と が好ましい。
本発明の評価方法は、 医用材料のヒ ト血液に対する適合性 を評価する こ とを主な目 的とするため、 血漿蛋白混合水溶液 に含まれる血漿蛋白 の割合 （即ち、 フイ ブリ ノ一ゲンに対す る他の血漿蛋白 の重量比） が、 ヒ ト血液中 に存在する血漿蛋 白 の割合と同一である こ とが好ま しい。 血漿蛋白の割合が血 液中に存在する割合と同一である という こ とは、 フイ ブリ ノ —ゲンの置かれている環境がヒ ト血液中の環境に近いという こ とであ り 、 この こ とが血小板吸着量とフイ ブリ ノ一ゲン吸 着量との間に高い相関性が見られる理由の一つ と考えられる 血液中に存在する血漿蛋白の割合は、 血液中の血漿蛋白濃 度か ら容易に求める こ とができる。 例えば、 ヮ ラ ッ ク検査値 ノ、ン ドフ ッ ク ( Interpretation of Diagnostic Tests、 原著 第 6版、 Jacques Wal lach著、 福井次矢監訳、 田島裕訳、 医 歯薬出版株式会社、 （ 1997)) による と、 フ イ ブリ ノ一ゲン、 アルブミ ン及びァ ー グロブリ ンのヒ トの正常値は以下の値で ある。
Figure imgf000013_0001
本発明で用いる血漿蛋白混合水溶液がフ ィ プリ ノーゲン、 アルブミ ン及び免疫グロプリ ンの 3種の血漿蛋白 を含有する 場合には、 血漿蛋白混合水溶液における フィ プリ ノーゲンノ アルブミ ン 免疫グロブリ ンの重量比は、 2 / 6 0 / 1 0〜 8 Z 9 0 Z 4 0 である こ とが好ま し く 、 4 / 7 0 / 1 2〜 8 / 9 0 / 3 4 である こ とが更に好ま しい。
更に本発明においては、 血漿蛋白混合水溶液に含まれる血 漿蛋白濃度に特に限定はないが、 血液に存在する蛋白濃度の 1 / 1 0 である ことが好ま しい。 本発明の方法においては、 血漿蛋白混合水溶液の血漿蛋 S濃度が血液に存在する蛋白濃 度の 1 / 1 0でも医用材料の血液適合性を評価するのに十分 である。 本発明で用いる血漿蛋白混合水溶液がフイ ブリ ノ一 ゲン、 アルブミ ン及び免疫グロプリ ンの 3種の血漿蛋白を含 有する場合には、 上記表 1 に記載のヒ ト血液の血漿蛋白濃度 に基づき、 好ま しいフイ ブリ ノ 一ゲンの濃度は 1 0 0〜 4 0 0 p p m (即ち、 m g Zリ ッ トル） 、 更に好ま し く は 2 0 0〜 4 0 0 p p mとする。 また、 好ま しいアルブミ ン濃 度は 3， 0 0 0〜 4 , 5 0 0 p p m、 更に好ま し く は
3 , 5 0 0〜 4 , 5 0 0 p p mと し、 好ま しい免疫グロブリ ン濃度は 5 0 0〜 2 , 0 0 0 p p m、 更に好ま し く は 6 0 0 〜 1 , 7 0 0 p p mとする。
フイ ブリ ノーゲンと少なく と も 1 種の他の血漿蛋白 との混 合物を溶解する水系の溶媒と しては、 蛋白の変性などを防ぐ ために p H 6〜 8 を維持する こ とが可能な緩衝液であれば特 に限定はない。 入手の容易さか ら、 生理食塩水や リ ン酸緩衝 液が好ま しい。 血漿蛋白 の混合物を溶解してなる水溶液は、 蛋白溶液の調製に通常用いる方法で調製すればよ く 、 水系の 溶媒に血漿蛋白 を 0 °C〜室温で静かに溶解するだけで調製す る こ とが可能である。
このよ う にして得られた血漿蛋白混合水溶液には、 血漿蛋 白の他に、 緩衝液中の塩が含まれる。 また、 例えばシ ョ 糖な どの糖類が含まれていてもかまわない。
本発明の評価方法の工程 （ b ) においては、 血漿蛋白混合 水溶液を医用材料の試験片と接触させて、 血漿蛋白混合水溶 液に含まれるフイ ブリ ノ一ゲンを該試験片に吸着させる。 血 漿蛋白混合水溶液と試験片を接触させる方法は、 フィ ブリ ノ 一ゲンが試験片に吸着する こ とのできる方法であれば特に限 定はなく 、 例えば、 3 7 °Cの血漿蛋白溶液に試験片を 1〜 3 時間浸漬すればよい。
次に、 本発明の評価方法の工程 （ c ) においては、 試験片 に吸着したフイ ブリ ノ一ゲンの量を測定する。 試験片にはフ イ ブリ ノ ーゲンと共に、 少なく とも 1種の他の血漿蛋白も吸 着しているので、 フィ プリ ノーゲンの吸着量を選択的に測定 しなければならない。 具体的には、 R I (放射性同位元素、 例えば、 1 2 5 I ) でラベルしたフイ ブリ ノ一ゲンを用い、 試験片の放射活性を評価するこ とで、 フイ ブリ ノ一ゲンの吸 着量 ¾r 5kめる方法 (Human lasma f i b i r i nogen adsorption and platelet adhesion to polystylene, We i -B o r Ts a i , John M. Grunkemeier, Thomas A. Ho r b e ί ί , I . B i omed . Mater. Res. , 44， 130- 139 ( 1999) ) や、 H R P (西洋ヮサ ビペルォキシダ一ゼ）で標識したフイ ブリ ノ一ゲンに特異的 に結合する抗体を用いる酵素免疫学的評価法 （Enzyme- Linked Immunosorbent Assay ； 以下、 屡々、 " E L I S A と略す） が挙げられる。 特異性が高いこ とと測定の簡便さか ら、 本発.明の工程 （ c ) で用いる方法と しては E L I S Aが 好ま しい。
次に、 本発明の評価方法の工程 （ d ) においては、 吸着し たフィ プリ ノ 一ゲンの量か ら医用材料の血液適合性を評価す る。 上述したよう に、 本発明の方法で測定したフ イ ブリ ノ 一 ゲンの吸着量と血小板吸着量の間には高い相関性が見られる ので、 フ イ ブリ ノ一ゲン吸着量か ら血小板吸着量を算出する こ とができる。 具体的には、 本願の図 1 のよう な、 フイ ブリ ノ一ゲンの吸着量と血小板吸着量との関係を示す検量線を作 成し、 それを用いてフィ プリ ノ ーゲン吸着量か ら血小板吸着 量を求める こ とができる。 従っ て、 本発明の方法によれば、 血漿、 P R P や血小板といった生体由来材料を使う こ とがな いので、 個体差や採血日 時、 採血方法などの影響による評価 結果のばらつきを考慮する こ となく 、 血小板吸着量に基づく 血液適合性を評価する こ とができる。 また、 本発明の方法に おいては、 例えば、 評価対象となる高分子などで被覆したフ イ ルムと未被覆フィ ルムのそれぞれのフ ィ プリ ノ ーゲン吸着 量を測定し、 被覆したフィ ルム と未被覆フィ ルムの間に見ら れる フィ プリ ノーゲン吸着量の差か ら血液適合性を比較する こ と もできる。
本発明の方法によって血液適合性を評価する こ とのできる 医用材料に特に限定はないが、 疾患の診断や治療に使われる 機器 · 用具な どを構成する材料も し く はそれらの表面に被膜 を形成するための材料が挙げられる。 具体的には、 ディ スポ 一ザブル注射針、 デイ スポーザブル注射筒、 デイ スポーザブ ルチューブ、 デイ スポーザブルカテーテル、 人工腎臓用ディ スポ一ザブル力ニューレ、 採血用器具、 血液バッ グ、 輸血用 器具、 輸液用器具、 人工腎臓用血液回路、 中空糸透析器、 人 ェ関節、 眼内レンズ、 人工肺や人工血管を構成する材料も し く はその表面に被膜を形成するための材料の血液適合性を本 発明の方法によって評価する こ とができる。
発明を実施するための最良の形態
以下に、 参考例、 実施例及び比較例によ り本発明を具体的 に説明するが、 本発明はこれら によって限定される ものでは ない。 参考例 1
医用材料の試験片となるポ リ スルフォ ンフ ィ ルムの調製
5 gのポ リ スルフォ ン （平均分子量 3 , 5 0 0 ) を 1 0 0 m l の 1 , 2 —ジク ロ ロェタ ンに溶解してポ リ スルフォ ンポ リマー溶液を調製した。 この溶液 1 0 g を直径 9 c mのシャ ーレ上に塗布して常圧 · 室温下で乾燥し、 膜厚が約 7 0 z m のフ ィ ルムを得た。 得られたフィ ルムを直径 1 2 . 7 m mの 円状に切 り抜き、 これを基盤フィ ルムと した。 このフィ ルム をポロ クサマ一 （Poloxamer) (日本国、 旭電化工業 （株） 製のアデカプル口ニッ ク F _ 6 8 (商標） ） の水溶液 （ポロ クサマー濃度は 0.1 , 0.5, 1 , 2又は 5 重量％ ) に浸漬し、 常圧 · 室温下で乾燥する こ とで基盤フィ ルムを被覆し、 被覆 量の異なる 5種の医用材料の試験片を得た。 実施例 1
フ ィ プリ ノ ーゲンと少な く と も 1 種の他の血漿蛋白 との混合 物を溶解してなる水溶液を用 いた血液適合性の評価
血漿蛋白 と してヒ ト フ イ ブリ ノ一ゲン、 ヒ ト I g Gおよ びヒ ト アルブミ ンを用いて血液適合性を評価した。 精製抗 原である ヒ ト I g G、 ヒ ト フイ ブリ ノ一ゲンおよびヒ ト ァ ルブミ ンを P B S に溶解し、 ヒ ト I g Gが 1 , O O O p p m ヒ ト フイ ブリ ノ一ゲンが 3 0 0 p p m、 そしてヒ ト アルブ ミ ンが 4 , 0 0 0 p p mの水溶液を得た。 参考例 1 で作製し た、 被覆量の異なる種々 の試験片をそれぞれ上記の水溶液に 浸漬し、 3 7 °Cで 2時間試験片と血漿蛋白 を接触させ、 血漿 蛋白を試験片に吸着させた。 フイ ブリ ノ 一ゲン、 I g Gおよ びアルブミ ンの吸着量をそれぞれの精製抗原に対応する H R P (Horse Radish Peroxidase) 標識化抗体を用いた E L I S A ( Enzyme-L i nked Immunosorbent Assay) 法によ り 疋量 した。 試験片に対する精製抗原 （フイ ブリ ノ一ゲン、 I g G 又はアルブミ ン） の吸着量は、 吸光度 （波長 4 5 0 n m ) で 表した。
更に参考例 1 で作製した試験片について、 ヒ ト血小板過剰 血漿 （ P 1 a 1 e t R i c h P 1 a s m a ； 以下、 " P R P " と略す） に 由来する血小板の吸着量を測定した。 クェン酸で抗凝固 した ヒ ト新鮮全血を 1， 2 0 0 r p mで 1 0 分間遠心し、 遠心分 離後の上層 となる P R P を分取した。 参考例 1 で作成した、 被覆量の異なる種々 の試験片を 2 4穴プレー トのゥエルに入 れ、 そこ に 1 m 1 の P R P を添加し、 3 7 °Cで 2 時間浸漬す る こ とで血小板を試験片に吸着させた。 ヒ ト P R P由来血小 キ反吸着量は、 Masaru T a n a k a e t a 1. , B i o m a t e r i a 1 s , 21, 1471 - 1481 (2000)を参考に、 走査型電子顕微鏡' （ S E M ) 観 察によって求めた。 具体的には、 拡大倍率 5 0 0倍の条件下 で、 同一視野に存在する血小板の数 （ x l 0 4/ c m 2 ) を 血小板吸着数と した。
フィ プリ ノーゲン吸着量と血小板吸着量との関係を図 1 に 示し、 I g G吸着量と血小板吸着量との関係を図 2 に示し、 アルブミ ン吸着量と血小板吸着量との関係を図 3 に示した。 フ イ ブリ ノ一ゲン吸着量 （図 1 ) と血小板吸着量との間に相 関性 （相関係数 = 0 . 7 4 7 ) が見られた。 一方、 ヒ ト I g G (図 2 ) およびヒ ト アルブミ ン （図 3 ) の場合は、 いずれ も血漿蛋白吸着量と血小板吸着量との間に相関性は見られな かっ た。 比較例 1〜 3
血漿蛋白 と して、 ヒ ト I g Gのみを含む溶液、 ヒ ト フイ ブ リ ノ ーゲンのみを含む溶液及びヒ ト アルブミ ンのみを含む溶 液をそれぞれ用いて血液適合性を評価した。
5 , O O O p p mの ヒ ト I g G溶液、 3 O 0 p p mのヒ ト フイ ブリ ノ一ゲン溶液及び 5 , 0 0 O p p mのヒ トアルブミ ン溶液をそれぞれ用い、 実施例 1 と同様に、 参考例 1 で作成 した被覆量の異なる種々 の試験片に対する各血漿蛋白の結合 量を測定した。
更に参考例 1 で作製した被覆量の異なる種々 の試験片につ いて、 実施例 1 と同様にヒ ト P R P 由来血小板の吸着量を測 定した。
フィ プリ ノーゲン吸着量と血小板吸着量との関係を図 4 に 示し、 I g G吸着量と血小板吸着量との関係を図 5 に示し、 アルブミ ン吸着量と血小板吸着量との関係を図 6 に示した。 図 4〜 6 か ら明 らかなよ う に、 フイ ブリ ノ一ゲン単独や、 他 の血漿蛋白 を単独で用いても、 図 1 に見られるよ うなフイ ブ リ ノーゲン吸着量と血小板吸着量との間の相関性は見られな かった。 参考例 2
P R P を用 いた血小板吸着量の測定
実施例 1 と同様にクェン酸で抗凝固 したヒ ト新鮮全血か ら P R P を調製し、 P E T製の試験フィ ルムに対する ヒ ト P R P 由来血小板の吸着量を測定した。 P E T製の試験フィ ルム を 2 4穴プレー トのゥエルに入れ、 そこに l m 1 の P R P を 添加した。 試験フィ ルムを P R P に 3 7 °Cで 2 時間浸漬する こ とで血小板を吸着させた。 血小板の吸着したフィ ルムは走 査型電子顕微鏡 （倍率 2 , 0 0 0 倍） で観察した。 この血小 板吸着実験は、 同 じ試験フ ィ ルム と異なる個体の供血か ら調 製した P R P を用いて再度実施した。 1 回目 の結果を図 7 に 示し、 2 回 目の結果を図 8 に示す。 図 7 及び図 8 から明 らか なよ う に、 同じ試験フ ィ ルムに吸着した血小板でも、 ヒ ト個 体差および血漿採血の日時、 採血方法などの影響を大きく受 けて、 吸着量および血小板の形態が大きく 異なっている。 従 つて、 p R p を用いた従来の血液適合性の評価方法は、 P R
Pの調製などの複雑な工程が必要な上に、 再現性が低い。
産業上の利用可能性 - 本発明の血液適合性の評価方法を用いる と、 生体由来の材 料である血漿、 血小板過剰血漿や血小板などを用いる こ とな く 、 医用材料の血液適合性を評価する こ とができる。 従って 個体差-や血漿採血の 日時、 採血方法などによる評価結果のば らっきを考慮する こ となく 、 再現性良く 、 簡便に血液適合性 を評価する こ とが可能となる。

Claims

請 求 の 範 囲
1 . ( a ) フイ ブリ ノ一ゲンと少な く と も 1 種の他の血漿蛋 白 との混合物を溶解してなる水溶液を提供し、
( b ) 該水溶液を医用材料の試験片と接触させて、 該水溶液 に含まれるフィ プリ ノ一ゲンを該試験片に吸着させ、
( c ) 該試験片に吸着したフイ ブリ ノ一ゲンの量を測定し、 そして
( d ) 該吸着したフイ ブリ ノーゲンの量か ら該医用材料の血 液適合性を評価する、
こ と を包含する、 医用材料の血液適合性を評価するための方 法。
2 . 該少なく と も 1 種の他の血漿蛋白がアルブミ ン及び免疫 グロ ブリ ンを包含する こ とを特徴とする、 請求項 1 に記載の 方法。
3 . 該水溶液中のフ ィ プリ ノーゲン/アルブミ ン /免疫グロ ブリ ンの重量比が、 2 / 6 0 / 1 0〜 8 / 9 0 / 4 0 である こ と を特徴とする、 請求項 2 に記載の方法。
4 . 該水溶液が 1 0 0〜 4. 0 0 p p mのフ ィ ブリ ノ 一ゲン、 3 , 0 0 0〜 4， 5 0 0 p p mのアルブミ ン及び 5 0 0〜 2 , 0 0 0 p p mの免疫グロブリ ンを含むこ とを特徵とする 請求項 2 又は 3 に記載の方法。
5 . 該水溶液が 2 0 0 〜 4 0 0 p p mのフィ ブリ ノ ーゲン、
3 , 5 0 0 〜 4， 5 0 0 p ]p mのアルブミ ン及び 6 0 0 〜 1 , 7 0 0 p p mの免疫グロブリ ンを含むこ とを特徴とする 請求項 4 に記載の方法。
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