WO2001077182A1

WO2001077182A1 - Complexe anticorps-porteur, procede de production, methode de controle de la reaction antigene-anticorps par ledit complexe et procede de dosage immunologique

Info

Publication number: WO2001077182A1
Application number: PCT/JP2001/003017
Authority: WO
Inventors: Mahito Hirai; Nobuyuki Shigeto
Original assignee: Matsushita Electric Industrial Co., Ltd.
Priority date: 2000-04-07
Filing date: 2001-04-06
Publication date: 2001-10-18
Also published as: EP1270596A4; US20030143638A1; EP1270596A1

Description

明細書

抗体 ·担体複合体、その製造方法及び

それを用いた抗原抗体反応の調整方法並びに免疫学的測定法技術分野

本発明は、医療等の分野で、免疫クロマトグラフィー、ァフィ二ティークロマトグラフィー、ブロッテイング、免疫比濁法、抗体による組織内の抗原の染色、ォクタロニ一、酵素免疫法などの、抗原抗体反応を利用した免疫学的な分析、測定及び検査に用いられる、抗体 ·担体複合体に関する。背景技術

抗原抗体反応を用いた分析、測定及び検査などにおいては、測定可能な抗原の濃度範囲は抗体の感度に依存する。そのため、従来、被検物質である抗原の濃度範囲に応じた感度を有する抗体を得るには、市販の抗体の中から必要な感度を有する抗体を検索して入手するか、あるいは新規の抗体を作製する必要があった。発明の開示

しかし、作製方法を改良しても、得られるモノクローナル抗体あるいはポリクローナル抗体自体の感度を調整することができる範囲には限界があるため、被検物質である抗原の濃度範囲に応じた感度を有する抗体を得ることができない場合があった。

そこで本発明は、上記課題に鑑み、新規に抗体を作製することなく、容易に抗原に対する抗体の感度、すなわち抗原抗体反応の感度を調整することが可能な、抗体 ·担体複合体、その製造方法及びそれを用いた抗原抗体反応の感度調整方法並びに免疫学的測定法を提供することを目的とする。

上記課題を解決するために、本発明による抗体 ·担体複合体は、少なくとも 1 つの抗体を含む抗体 ·担体複合体であって、この抗体の各々の抗原結合部位が抗原と反応するように配置させる重合体構造を含むことを特徴とする。

好ましくは、上記重合体構造は、抗体重合体または担体重合体である。

好ましくは、上記担体は、蛋白質、炭水化物及び脂質からなる群から選択される。

好ましくは、上記担体は、抗体の F c部位に結合する。

本発明はまた、上記抗体 *担体重合体の製造方法に関し、この方法は、重合用試薬を用いて抗体と担体を共重合する工程を包含し得る。

本発明はまた、上記抗体，担体重合体の製造方法に関し、この方法は、重合用試薬を用いて担体を重合させ、担体重合体を形成する工程、及び該担体重合体に抗体を結合させる工程を包含し得る。

本発明はまた、上記抗体 ·担体重合体の製造方法に関し、この方法は、重合用試薬を用いて抗体を重合させ、抗体重合体を形成する工程、及び該抗体重合体に担体を結合させる工程を包含し得る。

本発明はまた、上記抗体，担体重合体の製造方法に関し、この方法は、重合用試薬を用いて担体を重合させ、担体重合体を形成する工程、重合用試薬を用いて抗体を重合させ、抗体重合体を形成する工程、及び該担体重合体と該抗体重合体とを結合させる工程を包含し得る。

好ましくは、上記重合用試薬は、 3 , 3 ' —ジチォビス（スルホスクシンイミジルプロピオネート）またはジチオスレィトールである。

本発明は、 1つの局面で、抗原抗体反応の感度を調整する方法に関し、この方法は：抗体と重合用試薬との反応における以下からなる群から選択されるパラメ一夕；抗体に対する重合用試薬の当量数、反応温度、反応時間、および抗体濃度；を変化させて重合度の異なる複数の抗体重合体を得る工程；この複数の抗体重合体と担体とを結合し、抗体 ·担体複合体のセットを得る工程；および得られた抗体 ·担体複合体のセッ卜のなかから、抗原と所望の程度で反応する抗体 ·担体複合体を選択する工程を包含する。

本発明は、 1つの局面で、免疫学的測定法に関し、この方法は、試料中の被検物質と、上記抗体 ·担体複合体とを抗原抗体反応させる工程を包含する。図面の簡単な説明

図 1は、本発明の一実施例において用いた重合前の抗 h C G抗体について高速液体クロマトグラフィーにより測定したクロマトグラムを示す図である。

図 2は、本発明の一実施例における一抗体重合体について高速液体クロマトグラフィ一により測定したクロマトグラムを示す図である。

図 3は、本発明の一実施例における他の抗体重合体について高速液体クロマトグラフィ一により測定したクロマトグラムを示す図である。

図 4は、本発明の一実施例における他の抗体重合体について高速液体クロマトグラフィ一により測定したクロマトグラムを示す図である。

図 5は、本発明の一実施例における他の抗体重合体について高速液体クロマ卜グラフィ一により測定したクロマトグラムを示す図である。

図 6は、本発明の一実施例における担体重合体について高速液体クロマトグラフィ一により測定したクロマトグラムを示す図である。

図 7は、本発明の一実施例における抗体 ·担体重合体の高速液体クロマ卜ダラフィ一により測定したクロマトグラムを示す図である。

図 8は、本発明の一実施例における免疫学的測定法に用いた免疫クロマトダラフィ一装置を示す斜視図である。発明を実施するための最良の形態

以下、本発明を詳しく説明する。

なお、本発明においては、特に指示のない限り、当該分野で公知であるタンパク質の分離及び分析法、ならびに免疫学的手法が採用され得る。これらの手法は、し i / J ru Jl / り 1 7

市販の酵素、キット、抗体、標識物質などを使用して行い得る。

上記のように本発明による抗体 ·担体複合体は、少なくとも 1つの抗体を含む抗体 ·担体複合体であって、この抗体の各々の抗原結合部位が抗原と反応するように配置させる重合体構造を含むことを特徴とする。このような抗体 ·担体複合体は、重合構造を含まない 2価の抗体に比べて抗原結合部位を多く有する。本発明による抗体 ·担体複合体はまた、抗原結合部位の内、有効に抗原との反応に関与することができる部位の割合を変化させ得るので、本発明による抗体 ·担体複合体を用いることにより、重合していない 2価の抗体と抗原との免疫反応に比べて、抗原抗体反応の感度を高感度または低感度に調整することができる。また、本発明による抗体 ·担体複合体は、抗体のみで形成されている抗体重合体に比べて、同じ抗体量でより大きなサイズを有するので、複合体分子表面に存在し抗原との反応が立体的に阻害されない抗原結合部位を増加することができ、その結果、抗原抗体反応の感度範囲を高感度側に広げることができる。また、本発明による抗体 ·担体複合体は、抗体のみで形成されている抗体重合体に比べて、少ない抗体量でこの抗体重合体と同じサイズの複合体を形成し、上記抗体重合体と同じ感度範囲の抗原抗体反応を行うことができる。ここで、最も効率的に高感度化された抗体 ·担体複合体としては、中心部が担体または担体重合体で構成され、その外面を 1つ以上の抗体分子が抗原結合部位を分子の外に向けた状態で結合したものである。さらにまた、本発明の抗体 ·担体複合体を標識物質で標識して免疫学的な分析等に用いる場合、抗体 ·担体複合体の内、担体の部分のみを標識することができるので、抗体を直接標識することにより抗体と抗原との反応が阻害されるというおそれが少ない。その結果、抗体のみで形成されている抗体重合体に比ベて、抗原抗体反応の感度範囲を高感度側に広げることができる。

本発明に用いることができる抗体は、特に制限されず、その由来やサブクラス等に関係なく使用できる。例えば、ヒトゃマウス由来の I g G、 I g M、 I g A、 I g E、 I g D、さらに、ラットやラビット、ャギ、ヒッジ、鶏など由来の I g G、 I g M、 I g A、 I g E、 I g D、 I g Yなどが挙げられる。これらの抗体は、市販品として入手しても、直接その動物から採取してもよい。

担体としては、抗原抗体反応を阻害しない構造材料であればよく、好ましくは生体構成材料であり、蛋白質、炭水化物及び脂質を用いることができる。例えば、血清蛋白質、ゼラチンなどの抗体としての機能を発揮しない蛋白質や、単糖、ォリゴ糖、多糖、複合糖質などの炭水化物や、単純脂質、複合脂質、誘導脂質などの脂質が挙げられる。この中で、重合反応を起こすことが容易な点で、蛋白質及び炭水化物が好ましい。さらに、被検物質である抗原以外の物質との反応性がないことから、酵素としての機能を発揮しない蛋白質が好ましい。さらには、抗体の反応を阻害せず、高い水溶性を有している点で、血清由来のアルブミン等が好ましい。

さらに、担体が、抗体の F c部位に結合する能力を有することが好ましい。このようにすると、抗原結合部位が担体の反対側に向いた状態で、抗体と担体が結合するので、抗体と担体との結合により抗体と抗原との反応が阻害されるというおそれが少なくなるため、調整可能な抗体の感度範囲を高感度側に広げることができる。ここで、抗体の F c部位に結合する担体としては、プロテイン A、プロティン Gなどが挙げられる。

本発明による抗体 ·担体複合体の製造方法は、重合用試薬を用いて抗体と担体を共重合することを特徴とする。

また、重合用試薬を用いて担体を重合させ、担体重合体を形成する工程及び前記担体重合体に抗体を結合させる工程を有していても良い。

また、重合用試薬を用いて抗体を重合させ、抗体重合体を形成する工程及び前記抗体重合体に担体を結合させる工程を有していても良い。

また、重合用試薬を用いて担体を重合させ、担体重合体を形成する工程、重合用試薬を用いて抗体を重合させ、抗体重合体を形成する工程及び前記担体重合体と前記抗体重合体とを結合させる工程を有していても良い。

0 この中で、重合用試薬を用いて担体を重合させ、担体重合体を形成する工程及び前記担体重合体に抗体を結合させる工程を有する抗体 ·担体複合体の製造方法は、中央部に担体重合体を有し、表面部に抗体を有する抗体，担体複合体を容易に形成することができ、調整可能な抗体の感度範囲を高感度側に広げることができるので好ましい。

重合用試薬には、重合反応をおこすことができる試薬であれば、特に制限なく用いることができる。例えば、抗体の重合用試薬としては、抗体と結合可能な官能基（スクシンィミジル基、ピリジルジスルフイド基等）を同一分子内に 2っ以上有する多官能性試薬や、蛋白質のシスルフィド結合を還元する試薬などが挙げられる。また、担体の重合用試薬としては、担体と結合可能な官能基（スクシンィミジル基、ピリジルジスルフイド基等）を同一分子内に 2つ以上有する多官能性試薬や、担体として蛋白質を用いる場合には、蛋白質のシスルフイド結合を還元する試薬などが挙げられる。

多官能性試薬としては、例えば、 3， 3'一ジチォビス（スルホスクシンイミジルプロピオネート）（以下、 DTSSPと略称する）、ビス（スルホスクシンィミジル）スべレート、ジスルホスクシンィミジルタートレー卜、エチレンダリコールビス（スルホスクシンィミジルスクシネート）、 N スクシンィミジル 3 (2 ピリジルジチォ）プロピオネート、ビス [2 (スルホスクシンイミドオクシカルボニルオクシ）ェチル] スルホン、ジメチルスべリミデート · 2H C N r マレイミドブチリルオクシスルホスクシミドエステル、スルホスクシミジ [4 ィォドアセチル] 、ビスマレイミドへキサン、 1, 4 ジ [3 ' (2 ' ピリジルジチォ）プロピオンアミド] ブタン、 2 メルカプトェチルァミン · Η(3しジチオスレィトール（以下、 DTTと略称する）などが挙げられる。

この中で、抗体との反応を制御し易いという点で、多官能性試薬が、 DTSS

Ρまたは DTTであることが好ましい。また、蛋白質のシスルフイド結合を還元する試薬としては、例えば、 2 メルカプトェ夕ノール等が挙げられる。

また、本発明による抗原抗体反応の感度調整方法は、上記の抗体 ·担体複合体において抗体の重合度を制御することを特徴とする。

本発明の抗体 ·担体複合体において、抗原抗体反応における抗原に対する感度は、まず抗体の重合の程度が増加するに従って高くなるが、最高感度を示した後、さらに重合の程度を増加させると、それに連れて低下し、やがて重合前の抗体の感度よりも低くなる。これは、まず抗体の重合の程度が増加するに従って、抗体 ·担体複合体における抗原結合部位の数が増加するため、抗原との反応の感度が高くなるが、さらに重合の程度を増加させると、抗原結合部位を介した重合が進行するか、または抗原結合部位と抗原との結合が立体的に阻害されることにより、抗原との反応の感度が低下すると考えられる。よって、抗体 ·担体複合体における抗体の重合の程度を制御することにより、抗原に対する抗体の感度を調整することができる。

また、本発明による免疫学的測定法は、試料中の被検物質と、上記の抗体 ·担体複合体との抗原抗体反応を用いて、上記被検物質を測定することを特徴とする。免疫学的測定法としては、従来公知の方法を特に限定なく用いることができるが、例えば、免疫クロマトグラフィー、ァフィ二ティークロマトグラフィー、ブロッティング、免疫比濁法、抗体による組織内の抗原の染色、ォク夕ロニ一、酵素免疫法等が挙げられる。実施例

以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明は以下の実施例のみに限定されるものではない。

(実施例 1 )

以下、本発明の一実施例について、図 1 ~ 7を用いて説明する。ここで、図 1 は重合前の抗体について高速液体クロマトグラフィーにより測定したクロマトグラム、図 2〜 5は本実施例における抗体複合体について高速液体クロマトグラフィ一により測定したクロマトグラム、図 6は本実施例における担体重合体の高速液体クロマトグラフィーにより測定したクロマトグラム、図 7は本実施例における抗体 ·担体複合体について高速液体クロマトグラフィーにより測定したクロマ卜グラムである。

1. 抗体重合体の作製

まず、抗体重合体を作製した。抗体としては、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン (以下、 hCGと略称する）に対する抗体（以下、抗 hCG抗体と略称する）を用いた。抗 hCG抗体 1 Omgを lmlの生理食塩濃度リン酸緩衝液（以下、 P BSと略称する）に加えて、 1 OmgZm 1の濃度に調製した。この溶液に、重合用試薬の多官能性試薬として、 20、 50、 100、 200当量とそれぞれ異なる当量数の DTSSPを加え、いずれも 30分間反応させることにより抗体を重合させ、抗体重合体を含む溶液（A) 、溶液（B) 、溶液（C) 及び溶液 (D) を得た。評価用の S e p h a c r y 1 S 300 HRカラム（アマシャムフアルマシア社製）を用い、高速液体クロマトグラフィー（以下、 HPLC と略称する）により流速 150 m 1ノ hの条件で抗体の重合度の評価及び精製を行った。

図 1〜5に得られた HPLCのクロマトグラムを示す。縦軸は吸光度（相対値）を表し、横軸は保持時間である。分子量が大きいほど保持時間が短いため、クロマトグラムのピークは左側に移動する。

図 1に、重合前の抗 h CG抗体のクロマトグラムを示す。保持時間 66〜 68 分付近に抗 hCG抗体のピークが現れている。保持時間 44分及び 56分付近にピークがみられるのは、溶液中で抗体が変成して凝集することにより、分子量が見かけ上大きくなつたためである。

図 2に、抗体に対して 20等量に当たる DTS S Pを用いて反応させた溶液 (A) のクロマトグラムを示す。抗体の重合がほとんど進んでいないため、クロマトグラムのパターンに変化は見られず、図 1と同様に保持時間 70分付近にピークを示した。

図 3に、抗体に対して 50等量に当たる D T S S Pを用いて反応させた溶液 (B) のクロマトグラムを示す。抗体の重合が少し進行し、保持時間 45分付近のピークがわずかに増加した。

図 4に、抗体に対して 100等量に当たる DTSSPを用いて反応させた溶液

(C) のクロマトグラムを示す。抗体の重合がさらに進んでいるため、 45分付近の大きなピークが得られた。

図 5に、抗体に対して 200等量に当たる DTS S Pを用いて反応させた溶液

(D) のクロマトグラムを示す。抗体の重合がさらに進んでいるため、保持時間 70分付近のピークは消えて 45分付近に非常に大きなピークが得られた。なお、保持時間 45分付近のピークに相当する抗体重合体の分子量は、カラムの排除限界である分子量 2 X 10⁶以上と考えられる。多官能性試薬の当量数を増加させることにより、保持時間 45分付近のピークが大きくなつたことから、より大きい重合度を有する抗体の割合が増加したことがわかる。

以上の結果から、反応時間を一定にし、加える多官能性試薬の当量を制御することにより、得られる抗体重合体の抗体の重合度を調整することができた。次に、抗体 ·担体複合体作製用の抗体重合体を作製した。まず、抗 hCG抗体濃度が 1 OmgZm 1の PBS溶液を調製した。多官能性試薬として、抗体 1 0 mgに対して 100等量に当たる 4. 056mgの DTSSPを 1 O O z 1の P BSで溶解した。抗体溶液 lmlと DTSSP溶液 10 1を 35°Cで 30分間ゆっくり撹拌した。反応終了後、 S e p h ad ex G 25カラム（アマシャムフアルマシア社製）を用いて、反応溶液から抗体重合体を含むフラクションを採取した。

2. 担体重合体の作製担体として牛血清アルブミン（以下、 BSAと略称する）を用いた。 1 10m gの BSAを 5m 1の PBSで溶解し、 BSA溶液を調製した。この BSAの量は 1 Omgの抗体に対して 25等量に当たる。次に DTT濃度が 77mg/m 1 の PBS溶液を調製した。この DTTの PBS溶液 lm 1と、 BSAの PBS溶液 5mlとを混合し、室温で 30〜40分ゆっくり撹拌した後、白濁直前に反応を停止させた。反応終了後、図 6に示すように、 G 25カラムを用いて、反応溶液から担体重合体を含むフラクション（保持時間 12〜18分）を採取した。

3. 抗体 ·担体複合体の作製

担体重合体を分取し、すぐに、先に分取した抗体重合体と混合して反応させた。反応は、 4°Cで一晩行った。この際、反応は担体重合体と抗体重合体とを混合するだけで進行した。これは、担体重合体を DTTで処理してカラムで分取した直後では、担体重合体上に遊離の SH基が残存しているためであると考えられる。反応終了後、図 7に示すように、 S 300HRカラムを用いて、反応溶液から抗体 ·担体複合体（A) を含むフラクション（保持時間 24〜44分）を採取した。

(比較例 1 )

比較例として、実施例 1と同様に、抗 h CG抗体濃度が 1 OmgZm 1の PB S溶液と、当量数が 70、 100、 200当量の DTSSPとを反応させた。反応終了後、 S 300HRカラムを用いて、保持時間 45分付近のフラクションを分取して抗体重合体（B) 、 (C) 及び（D) を得た。

(免疫クロマトグラフィーによる被検物質の測定）

次に、被検物質として hCGを含む試料について、実施例 1の抗体 ·担体複合体または比較例 1の抗体重合体を用いて、免疫学的測定法である免疫クロマトグラフィ一により行った hCGの測定について、図 8を用いて説明する。ここで、図 8は測定に用いた免疫クロマトグラフィー装置を示す斜視図である。

測定には、図 8に示す、多孔質担体 1からなる免疫クロマトグラフィー装置を用いた。抗体 ·担体複合体または抗体重合体を、以下の（化 1) に示す構造のシァニン系色素（以下、 SL I C3と略称する）で標識し、標識抗体として一定量を標識部 3に担持した。判定部 4には、固定化抗体として重合していない抗 hC G抗体を固定化させた。試料として抗原である h C Gを含む P B S溶液を用い、 )1じ0濃度が0、 40、 400、 4000、 40000 1 Uの試料を一定量、試料導入部 2に添加した。試料は標識部 3を経由して、判定部 4を通過して、吸液部 5に向かって移動する。その際、標識部 3を試料が通過する際には、標識部 3 に担持されていた標識抗体が試料の水分に溶解し、試料とともに移動を開始する。その後、溶解した標識抗体は判定部 4を通過する。ここで、抗原 ·抗体の特異的結合反応に基づき、陽性の場合は、判定部 4で固定化抗体と標識抗体とが抗原を介して反応し、判定部 4が着色される。陰性の場合は、反応が起こらず、標識抗体が判定部 4を通過し、吸液部 5に吸収される。判定部 4で得られた発色の強度の測定には反射吸光度測定（島津製作所製： C S 9300 P C) を用い、入射光 550 nm (SL I C 3の吸収波長）を入射したときの反射吸収値を測定した。

【化 1】

(表 1) に、比較例 1の抗体重合体について得られた測定結果を示す。データ値は色素の反射吸収値であり、値が大きいほど発色が強い、つまり抗体の反応の強さを示し、感度を高さを示す指標となる。 NDは色素の発色が見られず、感度が得られなかったことを示す。 PBSはネガティブコントロールとして用いている。なお、使用した抗体は、重合前の状態で約 400 I Uの濃度にまでしか感度が得られなかった。

【表 1】

ND:not detected

(表 1) に示すように、抗体に対して 70または 200等量の DTSS Pを用いて反応させた抗体重合体（B) または（D) では、 400 I Uの濃度の hCG にまでしか感度が得られなかった。しかし、抗体に対して 100等量の DTSS Pを用いて反応させた抗体重合体（C) では、 4 0 I Uの濃度の h C Gにまで感度が得られた。

なお、 2 0 0当量以上に D T S S Pの当量数を増加させると、さらに重合反応が進行して沈殿が発生し、抗体の感度が重合前よりも低下した。

同様に、実施例 1の抗体 ·担体複合体（A) について測定を行ったところ、 4

0 I Uの濃度の h C Gにまで感度が得られた。これは、抗体重合体を作製するェ程で同じ当量数の D T S S Pを用いた抗体重合体（C) の場合と同等の感度である。標識部 3に担持した総タンパク質量はほぼ同じにしたことから、実施例 1の抗体 ·担体複合体（A) は比較例の抗体重合体（C ) に比べて少ない抗体量で同等の感度を得られたことがわかる。

なお、標識抗体を作製する際に、抗体 ·担体複合体を作製した後に標識したが、担体重合体を標識した後、抗体重合体と標識した担体重合体とを反応させると、担体部分のみが標識された抗体 ·担体複合体を作製することができる。これにより、抗体を直接標識することにより抗体と抗原との反応が阻害されるというおそれが少なくなるため、調整可能な抗原に対する抗体 ·担体複合体の感度範囲を高感度側に広げることができる。

なお、反応に用いる多官能性試薬の当量数を制御することにより、得られた抗体 ·担体複合体中の抗体の重合度を制御し、抗体 ·抗体複合体の抗原に対する感度を調整したが、これに限定されず、様々なパラメ一夕を用いることが可能である。例えば、抗体と多官能性試薬との反応における反応温度、反応時間、抗体の濃度等が挙げられる。

また、重合した抗体の精製用に、 S e p h a c r y 1 S 3 0 0 H Rカラムまたは S e p h a d e x G 2 5カラムを用いたが、このカラムに限定されるわけではなく、高分子の精製が行えるカラムであれば他のカラムを用いてもよい。例えば、液体クロマトグラフィーのゲル濾過であって、抗体の分子量である 1 5 万と、それよりも数倍程度以上高い分子量のものを分離できるものであれば良い。また、 H P L Cではなく、電気泳動による精製方法を用いることもできる。さらに、試薬を用いた反応や温度を変化させることにより、沈殿、再結晶等の方法を用いても精製することができる。産業上の利用可能性

本発明の抗体 ·担体複合体によれば、少ない抗体量で、抗原に対する抗体自体の有する固有の感度に制限されることなく、抗原抗体反応の感度を変化させることができる。また、本発明の抗原抗体反応の感度調整方法によれば、新規に抗体を作製することなく、容易に抗原抗体反応の感度を調整することができる。本方法を用いることにより、抗原抗体反応を利用した分析、測定及び検査等において、測定感度を所望の値に制御することができるので、特に医療の分野に有効である。

Claims

請求の範囲

1 . 少なくとも 1つの抗体を含む抗体 ·担体複合体であって、該抗体の各々の抗原結合部位が抗原と反応するように配置させる重合体構造を含む、抗体 ·担体複合体。

2 . 前記重合体構造が、抗体重合体または担体重合体である、請求項 1に記載の抗体 ·担体複合体。

3 . 前記担体が、蛋白質、炭水化物及び脂質からなる群から選択される、請求項 1に記載の複合体。

4. 前記担体が、抗体の F c部位に結合する、請求項 1記載の抗体 ·担体複合体。

5 . 重合用試薬を用いて抗体と担体を共重合する工程を包含する、請求項 1に記載の抗体 ·担体複合体の製造方法。

6 . 重合用試薬を用いて担体を重合させ、担体重合体を形成する工程、及び該担体重合体に抗体を結合させる工程を包含する、請求項 1に記載の抗体 ·担体複合体の製造方法。

7 . 重合用試薬を用いて抗体を重合させ、抗体重合体を形成する工程、及び該抗体重合体に担体を結合させる工程を包含する、請求項 1に記載の抗体 ·担体複合体の製造方法。

8 . 重合用試薬を用いて担体を重合させ、担体重合体を形成する工程、重合用試薬を用いて抗体を重合させ、抗体重合体を形成する工程、及び該担体重合体と該抗体重合体とを結合させる工程を包含する、請求項 1に記載の抗体 ·担体複合体の製造方法。

9 . 前記重合用試薬が、 3 , 3 ' —ジチオピス（スルホスクシンィミジルプロピオネート）またはジチオスレィ I ^一ルである、請求項 5〜 8のいずれかに記載の抗体 ·担体複合体の製造方法。

1 0 . 抗原抗体反応の感度を調整する方法であって：抗体と重合用試薬との反応における以下からなる群から選択されるパラメ一夕；抗体に対する重合用試薬の当量数、反応温度、反応時間、および抗体濃度；を変化させて重合度の異なる複数の抗体重合体を得る工程；

該複数の抗体重合体と担体とを結合し、抗体 ·担体複合体のセットを得るェ程；および

得られた抗体 ·担体複合体のセッ卜のなかから、抗原と所望の程度で反応する抗体 ·担体複合体を選択する工程、を包含する、方法。

1 1 . 試料中の被検物質と、請求項 1から 4に記載の抗体 ·担体複合体とを抗原抗体反応させる工程を包含する、免疫学的測定法。