WO2001023544A1 - Fragment d'acide nucleique, vecteur de recombinaison contenant ledit fragment et procede permettant d'activer l'expression d'un gene de structure au moyen de ce dernier - Google Patents

Fragment d'acide nucleique, vecteur de recombinaison contenant ledit fragment et procede permettant d'activer l'expression d'un gene de structure au moyen de ce dernier Download PDF

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promoting
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Jun Ueki
Shinji Morioka
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Japan Tobacco Inc.
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    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells

Definitions

  • the present invention relates to a nucleic acid fragment having a function of promoting the expression of a structural gene located downstream, a recombinant vector containing the same, a method of expressing a structural gene using the same, and a method of promoting expression of a desired structural gene by the method.
  • a nucleic acid fragment having a function of promoting the expression of a structural gene located downstream, a recombinant vector containing the same, a method of expressing a structural gene using the same, and a method of promoting expression of a desired structural gene by the method.
  • Promoting the expression of foreign genes is the technology that is most needed when applying genetic engineering techniques to plants.
  • One such technique is the use of DNA fragments that have the effect of promoting gene expression.
  • Several introns such as the maize alcohol dehydrogenase intron (Gallis et al. Gene & Development 1, 1183-1200 (1987)), are used as DNA fragments to promote the expression of foreign genes. It is known (Simpson and Fi Ipowicz 1996. Plant Mo I. Bio 1.32: 1-41), and the first intron of rice phospholipase D (hereinafter sometimes referred to as “PLD”) ( International Publication No. W096 / 30510) is also known.
  • PLD rice phospholipase D
  • an object of the present invention is to provide an effect of promoting the expression of a structural gene located downstream.
  • An object of the present invention is to provide an excellent novel nucleic acid fragment and a method of using the same to promote the expression of a structural gene downstream thereof.
  • the present inventors have conducted intensive studies and found that the second intron of rice PLD has an excellent gene expression promoting effect, and completed the present invention.
  • the present invention relates to a nucleic acid fragment having the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 1 in the sequence listing, or substitution or deletion of one or more bases in the nucleotide sequence, or one or more nucleotides in the nucleotide sequence.
  • the present invention provides a nucleic acid fragment having an inserted or added nucleic acid fragment, which has an effect of promoting the expression of a structural gene located downstream thereof.
  • the present invention also relates to a nucleic acid fragment having the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 1 or a nucleic acid fragment that hybridizes with the nucleic acid fragment under stringent conditions, wherein the structural gene located downstream thereof is A nucleic acid fragment having an effect of promoting expression is provided.
  • the present invention provides a recombinant vector comprising at least the nucleic acid fragment of the present invention and a structural gene located downstream of the nucleic acid fragment, wherein the expression of the structural gene is promoted by the nucleic acid fragment.
  • the present invention provides a method for promoting the expression of a structural gene, comprising inserting the nucleic acid fragment of the present invention upstream of the structural gene.
  • the present invention provides a plant in which the expression of a desired structural gene is promoted or a progeny thereof that maintains the trait.
  • the nucleic acid fragment of the present invention has an order of magnitude greater in promoting the expression of the downstream structural gene than the known rice PLD first intron having a similar function. . Therefore, since the expression of the structural gene is greatly promoted by inserting the nucleic acid fragment of the present invention upstream of the structural gene, the present invention provides, for example, the expression of a foreign gene using a recombinant vector. It can be greatly promoted, and is expected to contribute greatly in the field of genetic engineering.
  • the nucleic acid fragment of the present invention is a nucleic acid fragment having the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 1 in the sequence listing, or one or more bases of which are substituted or deleted, or Nucleic acid fragment with one or more bases inserted or added A nucleic acid fragment having the effect of promoting the expression of a structural gene located downstream thereof.
  • nucleic acid fragment J a nucleic acid fragment in which one or more bases of the base sequence shown in SEQ ID NO: 1 have been substituted or deleted, or one or more bases have been inserted or added to the base sequence, and Nucleic acid fragments having an effect of promoting the expression of a structural gene located downstream (hereinafter, for convenience, sometimes referred to as “modified nucleic acid fragment J”) are also included in the scope of the present invention.
  • the portion corresponding to the sequence described in SEQ ID NO: 1 has 70% or more, more preferably 85% or more, and even more preferably 95 ⁇ 1 ⁇ 2 or more homology with the sequence described in SEQ ID NO: 1.
  • the homology of the nucleotide sequence can be easily calculated using a well-known computer software such as FASTA, and these modified nucleic acids have the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 1.
  • Core with And stringent-end conditions i.e., 50-65 ° C using a common hybridization solution such as 5X Denhardt's reagent, 6x SSG, 0.5% SDS or 0.1% SDS.
  • a common hybridization solution such as 5X Denhardt's reagent, 6x SSG, 0.5% SDS or 0.1% SDS.
  • nucleic acid fragment having the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 1 and
  • nucleic acid fragments of the present invention may be directly ligated, or another sequence may be interposed between them.
  • the nucleic acid of the present invention may be DNA or RNA, but DNA is preferred from the viewpoint of stability.
  • the nucleotide sequence of the nucleic acid fragment of the present invention has been clarified by the present invention, and is derived from the rice genome, so that it can be easily prepared by a nucleic acid amplification method such as PCR using rice genomic DNA as type III. Can be prepared. PCR is well known in the art, and kits and devices therefor are commercially available, and thus can be easily implemented.
  • the modified nucleic acid fragment is obtained by using the nucleic acid fragment thus obtained in a known manner. It can be easily prepared by subjecting it to site-directed mutagenesis.
  • nucleic acid fragments of the present invention When a plurality of nucleic acid fragments of the present invention are linked, a plurality of nucleic acid fragments of the present invention may be linked in advance, or the nucleic acid fragment of the present invention may be inserted into a region containing the nucleic acid fragment of the present invention. Good.
  • the expression of the structural gene can be promoted.
  • the structural gene is controlled by a promoter located upstream thereof.
  • the nucleic acid fragment of the present invention may be inserted between the promoter and the structural gene, or may be inserted upstream of the promoter. Is more preferred.
  • the distance between the nucleic acid fragment of the present invention and the structural gene is preferably 0 bp to 1 OO O bp, and the distance between the promoter and the nucleic acid fragment of the present invention is also preferably 0 bp to 1 OO O bp.
  • the present invention also provides a recombinant vector obtained by applying the method of the present invention to an expression vector.
  • the recombinant vector of the present invention can be easily prepared by inserting the nucleic acid fragment of the present invention and a structural gene whose expression is to be promoted into a cloning site of a commercially available expression vector.
  • an expression vector is preferably an expression vector for a plant, and various types are well known in the art and are commercially available.
  • These expression vectors include at least a replication origin for replication in a host cell, a promoter, a closing site for providing a restriction enzyme site for inserting a foreign gene, and a selection marker such as a drug resistance gene, Usually includes a terminator that stably terminates the transfer. In the method of the present invention, any of these known expression vectors can be employed.
  • a plant in which the expression of a desired structural gene is promoted can be obtained.
  • the method of plant transformation itself is well known in this field, and can be carried out by a well-known method such as electroporation using protoplasts or agrobacterium method.
  • a DNA fragment containing the second intron of rice PLD gene and 37 bases of exons at both ends was obtained using the following primers and a known rice genomic clone (SEQ ID NO: W095 / 0934). 5) was used as type I and amplified by PC.
  • the obtained PCR-amplified fragment was digested with Sma I and Eco RV, and inserted into the Sma I site of GL0NTEGH vector pBI221 having -Glucuronidase (GUS) gene downstream of the 35S promoter. By this operation, the amplified fragment is placed between the 35S promoter and the GUS gene.
  • Transient gene expression was examined by the method of Sheen (Sheen 1991, Plant Cell 13: 225-245). That is, the constructed plasmid was introduced by electroporation into protoplasts isolated from maize-leaved leaves, and transient expression of GUS was measured by the above method.
  • the first intron of the rice PLD gene (shown in SEQ ID NO: 3 in the sequence listing) was amplified by PCR according to the method described in International Publication WO096 / 30510, and the SmaI site of And introduced it into corn to investigate the occurrence of GUS. The results are shown in Table 1 below.
  • the nucleic acid fragment of the present invention has an effect of promoting the expression of the downstream structural gene by an order of magnitude compared to the known rice PLD first intron having a similar function.

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Description

明細書
核酸断片、 それを含む組換えベクター及びそれを用いた構造遺伝子の発現促進方 法
技術分野
本発明は、 下流に位置する構造遺伝子の発現を促進する機能を有する核酸断片、 それを含む組換えベクター及びそれを用いた構造遺伝子の発現方法並びに該方法 により所望の構造遺伝子の発現が促進された植物に関する。
背景技術
外来遺伝子の発現促進は、 遺伝子工学の手法を植物に応用する際に最も必要と される技術である。 その技術のひとつに遺伝子発現の促進効果を有する D N A断 片の利用がある。 外来遺伝子の発現を促進する D N A断片としては、 トウモロコ シのアルコールデヒドロゲナ一ゼのイントロン （Gal l is et al. Gene & Develop ment 1, 1183-1200 (1987)) をはじめ、 いくつかのイントロンが知られており （ Simpson and Fi I ipowicz 1996. Plant Mo I . B i o 1. 32: 1-41) 、 また、 イネのホ スホリパーゼ D (以下、 「P L D」ということがある）の第 1イントロン （国際公開 公報 W096/30510)も知られている。 また、 イントロン由来の D N A断片について、 イントロンの内部配列を一部削除したり、 あるいはイントロンの内部に同一のィ ントロンを挿入して発現促進作用へ及ぼす影響を調べた事例が報告されている （ Mascarenhas et aに Plant Mo I. Biol. 15, 913-920 (1990) , Clancy et aに PI ant Sci.98, 151—161 (1994)) 。
しかしながら、 現状では利用できる D N A断片の種類が限られており、 個々の D N A断片の作用が植物の種類によって異なったリ、 さらに同じ植物でも器官や 組織によって異なる （Simpson and Fi I ipowicz 1996. Plant Moに Biol. 32: 1-4 1) 等の理由から、 様々な種類の発現促進作用を有する D N A断片の存在が望ま れている。 また、 従来の D N A断片では、 発現促進効果も不十分である場合が多 いため、 よリ効果の大きい D N A断片の存在が望まれている。
発明の開示
従って、 本発明の目的は、 下流に位置する構造遺伝子の発現を促進する効果が 優れた新規な核酸断片及びそれを用いてその下流の構造遺伝子の発現を促進する 方法を提供することである。
本願発明者らは、 鋭意研究の結果、 イネの P L Dの第 2イントロンが、 優れた 遺伝子発現促進効果を有することを見出し、 本発明を完成した。
すなわち、 本発明は、 配列表の配列番号 1に示す塩基配列を有する核酸断片又 は該塩基配列のうち 1若しくは複数の塩基が置換し若しくは欠失し又は該塩基配 列に 1若しくは複数の塩基が挿入され若しくは付加された核酸断片であって、 そ の下流に位置する構造遺伝子の発現を促進する効果を有する核酸断片を提供する。 また、 本発明は、 配列表の配列番号 1に示す塩基配列を有する核酸断片又は該核 酸断片とストリンジェン卜な条件下でハイブリダィズする核酸断片であって、 そ の下流に位置する構造遺伝子の発現を促進する効果を有する核酸断片を提供する。 さらに、 本発明は、 上記本発明の核酸断片と、 該核酸断片の下流に位置する構造 遺伝子とを少なくとも含み、 前記核酸断片により、 該構造遺伝子の発現が促進さ れる組換えベクターを提供する。 さらに、 本発明は、 構造遺伝子の上流に上記本 発明の核酸断片を挿入することから成る、 構造遺伝子の発現促進方法を提供する。 さらに、 本発明は、 所望の構造遺伝子の発現が促進された植物又は該形質を維持 するその子孫を提供する。
本発明によリ、 構造遺伝子の発現促進効果が優れた新規な核酸断片が提供され た。 下記実施例から明らかなように、 本発明の核酸断片は、 その下流の構造遺伝 子の発現促進効果が、 同様な機能を有する公知のイネ P L D第 1イントロンと比 較しても桁違いに大きい。 従って、 本発明の核酸断片を構造遺伝子の上流に挿入 することにより、 該構造遺伝子の発現が大幅に促進されるので、 本発明は、 例え ば組換えべクタ一を用いた外来遺伝子の発現を大いに促進することができ、 遺伝 子工学の分野などにおいて大いに貢献するものと期待される。
発明を実施するための最良の形態
上記のように、 本発明の核酸断片は、 配列表の配列番号 1に示す塩基配列を有 する核酸断片又は該塩基配列のうち 1若しくは複数の塩基が置換し若しくは欠失 し又は該塩基配列に 1若しくは複数の塩基が挿入され若しくは付加された核酸断 片であって、 その下流に位置する構造遺伝子の発現を促進する効果を有する核酸 断片である。
上記の通リ、 配列番号 1に示す塩基配列のうち 1若しくは複数の塩基が置換し 若しくは欠失し又は該塩基配列に 1若しくは複数の塩基が挿入され若しくは付加 された核酸断片であって、 その下流に位置する構造遺伝子の発現を促進する効果 を有する核酸断片（以下、 便宜的に「修飾核酸断片 Jということがある）も本発明の 範囲に含まれる。 この場合、 修飾核酸断片中の、 配列番号 1記載の配列に対応す る部分は、 配列番号 1記載の配列と 7 0 %以上、 さらに好ましくは 8 5 %以上、 さらに好ましくは 9 5 <½以上の相同性を有していることが好ましい。 なお、 塩基 配列の相同性は、 FASTAのような周知のコンピュータ一ソフトを用いて容易に算 出することができる。 また、 これらの修飾核酸は、 配列番号 1で示される塩基配 列を有する核酸と、 ストリンジエンドな条件（すなわち、 5 X Denhardt's reagen t, 6 x SSG, 0. 5% SDS又は 0. 1 % SDSといった一般的なハイブリダィゼーシヨン 溶液を用いて 5 0〜6 5 °Cで、 好ましくは 5 0 °Cと 6 0 °Cの 2段階、 又は、 5 0 °C、 5 5 °C、 6 0 °C、 6 5 °Cの 4段階で反応を行なう）において、 ハイブリダィ ズするものであることが好ましい。
また、 配列番号 1で示される塩基配列を有する核酸断片の一部であってその下
/ L 'こ位置する構造遺伝子の発現を促進する効果を有する核酸断片も本願発明の範 囲に含まれる。 さらに、 上記した本発明の核酸断片を複数連結したものも、 本願 発明の範囲に含まれる。 この場合、 本発明の核酸断片を直接連結してもよいし、 それらの間に他の配列が介在していてもよい。
本発明の核酸は D N Aでも R N Aでもよいが、 安定性の観点から D N Aが好ま しい。
本発明の核酸断片は、 本発明によりその塩基配列が明らかにされており、 また、 イネのゲノム由来であるので、 イネのゲノミック D N Aを錶型とする P C R等の 核酸増幅法によリ容易に調製することができる。 P C Rはこの分野において周知 であり、 そのためのキット及び装置も市販されているので容易に実施することが できる。 また、 上記修飾核酸断片は、 このようにして得られた核酸断片を周知の 部位特異的変異法に付すことにより容易に調製することができる。
なお、 本発明の核酸断片を複数連結する場合には、 複数の本発明の核酸断片を 予め連結してもよいし、 本発明の核酸断片を含む領域に本発明の核酸断片を挿入 してもよい。
構造遺伝子の上流に上記した本発明の核酸断片を挿入することにより、 該構造 遺伝子の発現を促進することができる。 構造遺伝子は、 その上流に位置するプロ モーターにより制御されるが、 本発明の核酸断片は、 プロモーターと構造遺伝子 の間に挿入してもよいし、 プロモーターの上流に挿入してもよいが、 前者がより 好ましい。 この場合、 本発明の核酸断片と構造遺伝子の距離は 0 b p ~ 1 O O O b pが好ましく、 また、 プロモータ一と本発明の核酸断片との距離も 0 b p ~ 1 O O O b pが好ましい。 本発明はまた、 上記本発明の方法を発現べクターに適用して得られる組換えべ クタ一を提供する。 本発明の組換えベクターは、 市販の発現ベクターのクロー二 ング部位に本発明の核酸断片と、 発現を促進すべき構造遺伝子とを挿入すること により容易に調製することができる。 なお、 このような発現ベクターは、 植物用 発現べクタ一が好ましく、 種々のものがこの分野において周知であり、 かつ市販 されている。 これらの発現べクタ一は、 宿主細胞内で複製するための複製開始点、 プロモーター、 外来遺伝子を挿入するための制限酵素部位を与えるクロ一ニング 部位及び薬剤耐性遺伝子等の選択マーカーを少なくとも含み、 通常、 転写を安定 に終了させるターミネータ一を含む。 本発明の方法においては、 これらの公知の 発現べクタ一のいずれをも採用することができる。 - 上記の組換えべクタ一を用いて植物を常法により形質転換することにより、 所 望の構造遺伝子の発現が促進された植物を得ることができる。 植物の形質転換方 法自体はこの分野において周知であり、 プロトプラストを用いたエレクトロポレ —ション法ゃァグロバクテリゥム法等の周知の方法により行うことができる。 実施例
以下、 本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。 もっとも、 本発明は下 記実施例に限定されるものではない。 イネ P L D遺伝子の第 2イントロンおよび両端のェキソン 37塩基ずつを含む DNA断片 （その塩基配列を配列番号 2に示す） を、 次のプライマ一を用い、 公 知のイネゲノムクローン（W095/0934の配列番号 5)を錶型として用いて PC で 増幅した。
5 -aagtcccccgggccgcgccagcggaag-vi'
ύ' -gacacccacagccgtctatagttcgta-5'
得られた PCR増幅断片を Sma I と Eco RVとで消化し、 35Sプロモータ一の 下流に -Glucuronidase (GUS) 遺伝子を配した GL0NTEGH社製のベクタ一 pBI221 の Sma I部位に挿入した。 この操作により、 上記増幅断片は、 35Sプロモーター と GUS遺伝子の間に配置される。 一過的な遺伝子発現を Sheenの方法（Sheen 199 1, Plant Cel l 3： 225- 245)によって調べた。 すなわち、 構築したプラスミ ドを、 トウモロコシのェチォレ一トした葉から単離したプロトプラス卜へエレク トロポ レーシヨンによって導入し、 GUSの一過的な発現を上記方法にて測定した。
なお、 比較のため、 イネ P L D遺伝子の第 1イントロン （配列表の配列番号 3 に示す） を国際公開公報 W096/30510に記載された方法により PCRで増幅し、 上記と同様に PBI221の Sma I部位に揷入し、 トウモロコシに導入して GUSの発 現を調べた。 結果を下記表 1に示す。
表 1
Figure imgf000006_0001
この結果から明らかなように、 本発明の核酸断片は、 その下流の構造遺伝子の 発現促進効果が、 同様な機能を有する公知のイネ P LD第 1イントロンと比較し ても桁違いに大きい。

Claims

請求の範囲
1 . 配列表の配列番号 1に示す塩基配列を有する核酸断片又は該塩基配列のう ち 1若しくは複数の塩基が置換し若しくは欠失し又は該塩基配列に 1若しくは複 数の塩基が挿入され若しくは付加された核酸断片であって、 その下流に位置する 構造遺伝子の発現を促進する効果を有する核酸断片。
2 . 配列表の配列番号 1に示す塩基配列と 7 0 %以上の相同性を有する請求項 1記載の核酸断片。
3 . 配列表の配列番号 1に示す塩基配列を有する核酸断片又は該核酸断片とス トリンジェントな条件下でハイプリダイズする核酸断片であって、 その下流に位 置する構造遺伝子の発現を促進する効果を有する核酸断片。
4 . 配列表の配列番号 1に示す塩基配列を有する核酸断片又は該核酸断片の一 部であってその下流に位置する構造遺伝子の発現を促進する効果を有する請求項 1記載の核酸断片。
5 . 配列表の配列番号 1に示す塩基配列を有する請求項 4記載の核酸断片。
6 . 配列表の配列番号 2に示す塩基配列を有する請求項 1記載の核酸断片。
7 . 請求項 1ないし 6のいずれか 1項に記載の核酸断片と、 該核酸断片の下流 に位置する構造遺伝子とを少なくとも含み、 前記核酸断片により、 該構造遺伝子 の発現が促進される組換えベクター。
8 . 構造遺伝子の上流に請求項 1ないし 6のいずれか 1項に記載の核酸断片を 挿入することから成る、 構造遺伝子の発現促進方法。
9 . 請求項 7記載の方法により、 所望の構造遺伝子の発現が促進された植物又 は該形質を維持するその子孫。
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AU2011202966B2 (en) * 2005-03-08 2012-06-21 Basf Plant Science Gmbh Expression enhancing intron sequences
US8088971B2 (en) 2005-03-08 2012-01-03 Basf Plant Science Gmbh Expression enhancing intron sequences
US10800396B2 (en) 2017-12-13 2020-10-13 Ford Global Technologies, Llc Methods and system for adapting operation of a driveline disconnect clutch

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996030510A1 (fr) * 1995-03-29 1996-10-03 Japan Tobacco Inc. Fragment d'adn, vecteur de recombinaison le contenant et procede d'expression d'un gene etranger l'utilisant
WO1997047755A1 (fr) * 1996-06-12 1997-12-18 Japan Tobacco Inc. Procede pour l'expression de genes etrangers et vecteurs correspondants

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2233929T3 (es) * 1993-09-30 2005-06-16 Japan Tobacco Inc. Gen de la fosfolipasa d procedente de una planta.
KR19980703890A (ko) 1996-02-21 1998-12-05 미즈노 마사루 생체에서 생산되는 인지질의 조성을 변화시키는 방법 및 그를위한 재조합 벡터
JP2000152785A (ja) 1998-11-19 2000-06-06 Japan Tobacco Inc 核酸断片、それを含む組換えベクター及びそれを用いた構造遺伝子の発現促進方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996030510A1 (fr) * 1995-03-29 1996-10-03 Japan Tobacco Inc. Fragment d'adn, vecteur de recombinaison le contenant et procede d'expression d'un gene etranger l'utilisant
WO1997047755A1 (fr) * 1996-06-12 1997-12-18 Japan Tobacco Inc. Procede pour l'expression de genes etrangers et vecteurs correspondants

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DESMOND MASCARENHAS ET AL.: "Intron-mediated enhancement of heterologous gene expression in maize", PLANT MOLECULAR BIOLOGY, vol. 15, no. 6, 1990, pages 913 - 920, XP002933738 *
See also references of EP1134285A4 *

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