WO2000072824A1

WO2000072824A1 - Microliposomes et leur procede de production

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Publication number: WO2000072824A1
Application number: PCT/JP2000/003472
Authority: WO
Inventors: Chikashi Nakanishi; Hidetoshi Tani; Akio Nishiura
Original assignee: Ono Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 1999-06-01
Filing date: 2000-05-30
Publication date: 2000-12-07
Also published as: KR20020011993A; AU4951000A; EP1181928A1

Description

明細書微小なリボソームおよびその製造方法技術分野

本発明は、糖類を用いて製造されるリボソームおよびその製造方法に関する。さらに詳しくは、高濃度の糖類を用いて製造される微小なリボソーム、およびその製造方法に関する。背景技術

リボソームは、脂質の閉鎖小包体であり、その小包体内部に封入した薬物を体内の特定部位に意図的に指向させること、また薬物の安定性や放出の持続性の確保を目的として利用されている。

その粒子径は、体内動態における重要な因子であり、例えば、血液循環系からの消失、各組織への分布、臓器による吸収、組織間の移行等に深くかかわっている。これらをスムーズに行なわせるためには、微小な粒子が好ましレ^ また、粒子径を微小化させることにより注射剤に要求されるフィル夕一ろ過滅菌が可能となる。このように注射製剤においては粒子径が重要な因子である。

従来のリボソームの製造方法は、リン脂質を水性分散媒中に水和《膨潤させる第 1工程と、所望の粒子径を得るために微小化させる第 2工程とからなるものが多く、それぞれの工程において種々の工夫がなされている。

例えば、第 1工程としては、脂質を揮発性有機溶媒に溶解した溶液から溶媒を留去し、容器内壁に脂質などからなる薄膜を形成させ、水性分散媒を加え撹拌し、脂質の薄膜を水和および膨潤させる方法がある。この方法は比較的簡便ではあるが水和 ·膨潤後のリボソームは多層小包体であり、その粒子径はおよそ数〜数 1 0 0ミクロンと比較的大きい。そこで、注射剤等の小さな粒子径まで微小化する必要がある場合、微小化の工程が必要となる。第 2工程となるリポソームの微小化や粒子径分布の均一化の方法としては、例えば、ポリカーボネートフィルタ一によるェクストルージョン、高圧乳化、超音波照射等がある（リボソーム（南江堂， 1988 年）参照）。微小化前の水和されたリボソームの粒子径が大きい場合には、同じ口径のポリカーポネ一トフィル夕一に、リボソーム分散液を繰り返し通過させたり（特許第 2 5 3 7 1 8 6号（W〇 8 6 0 0 2 3 8、 E P 1 8 5 7 5 6 ) 明細書参照）、高圧での乳化や超音波照射時間の延長が必要となり、製造時間や製造装置の大型化が問題となる。

そこで、上記の方法より容易に微小なリボソームを製造する方法、または有機溶媒を使用しないで、微小なリボソームを製造する方法がいくつか提案されている。

例えば、よく知られた方法として、（1 ) 界面活性剤除去法、有機溶媒注入法がある（リボソーム（南江堂， 1988)、ライフサイエンスにおけるリポソーム実験マニュアル（シュプリンガー ·フエアラーク東京， 1992) 参照）。界面活性剤除去法は、脂質を界面活性剤によって可溶化した後、界面活性剤を除去することにより微小なリボソームを得る方法として知られている。しかし、この方法を用いて大量調製する場合には、界面活性剤を除去する装置が必要であり、またその処理時間が問題となる。

有機溶媒注入法は、脂質をエタノールなどの水溶性有機溶媒に溶解し、その溶液を水性分散媒中に注入するものであり、水和が容易で、かつ微小なリポソームを製造する方法として知られている。この方法で得られるリポソ一ムの粒子径は、脂質溶液の濃度に大きく依存しており、脂質溶液をより希薄にすることによって微小なリボソームが得られる。しかし、脂質溶液を希薄にすると、必然的に用いる有機溶媒量が増えることになる。

さらに、これらの方法では、界面活性剤や有機溶媒を、透析やゲルろ過などにより除去する作業が必要であり、効率的な製造方法とは言えない。

( 2 ) 有機溶媒を用いずに脂質を水和する方法として、加熱する方法、せん断力を加える方法、粉末化する方法などの物理的手段により脂質の水和を促進させる方法が知られている。

しかし、脂質、薬物、水性分散媒またはその他の原料を脂質の相転移温度以上に加熱しながら撹拌する加温法（特公平 4一 36735号明細書または特公平 4一 28412号明細書参照）は、熱に弱い薬物を含む場合には適さず、脂質、薬物、水性分散媒またはその他の原料にせん断力を加えるメカノケミカル法は、脂溶性薬物の場合に回収率が定まりにくいという問題点がある。また、脂質とその他の原料を一旦溶解して粉末化する噴霧乾燥法（特公平 4一 3773 1号明細書参照）では、脂質の非晶質化と表面積の増大により水和が速やかに行なわれるが、やはり熱や回収率に問題があること、装置が大掛かりであることなどから、工業化が容易な方法ではない。

このようにそれぞれの方法には種々の問題がある上、水和後のリポソームの粒子径の微小化も十分なものではなかった。

一方、リボソームを製造する際に、糖類や電解質などの水溶性の添加物がよく用いられる。

これらを添加する主な目的は、（1) 注射剤として用いる際の等張化、 (2) 凍結乾燥時におけるリボソーム形態の保持、または（3) 脂質薄膜形成時の芯物質とするためである。

例えば、特開平 9_ 1 10828号（EP 758645) 明細書には、活性成分以外の助剤として、糖類（ラクトース、マンニトール等）の添加が可能である旨の記載があり、製造時に 10%マルトース溶液を用いている（実施例 4)。

リボソームテクノロジー（Gregory Gregoriadis 編集、 LIPOSOME TECHNOLOGY, Vol. I, 2nd Edition, 229-252 (1993 年発行））には、凍結乾燥時におけるリボソーム形態の保持に与える、種々の糖の効果が検討されている。

また、特公平 3— 62696号明細書には、糖類を賦形剤として用いて凍結乾燥することによりリポソーム製剤の特性が改善される旨の記載があり、製造時の糖類濃度は 1〜10%とある。特公平 5— 51338号（EP 1 19020) 明細書には、水可溶性粒状担体物質にリボソーム薄膜を被覆する方法が記載されており、その担体物質としてソルビトール、マンニトール、キシリトール、天然産出アミノ酸類、ラク！ス、デキストロース、スクロースが挙げられている。また、約 1〜 10 W/V, 好ましくは約 3〜 7 %WZVの濃度の等張水溶液を形成すベきであると記載されている。

このようにリボソームを製造する際に従来から糖類が添加されてはいるが、いずれも微小なリボソームを製造することを目的として添加されたものではなく、またその濃度も等張である 10%程度でしか用いられておらず、本発明のように高濃度では用いられていない。発明の開示

本発明の課題は、有機溶媒を極力使用せず、また過酷な物理的処理手段を使用しないで、効率的に微小なリボソームを製造する方法、およびその製造方法によって得られる微小なリボソームを提供することにある。

本発明者らは、上記課題を解決するために、鋭意研究を重ねた結果、リポソーム製造工程において、従来技術では採用されていない高濃度の糖類を用いることによって微小なリポソームが容易かつ効率的に製造できることを見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は以下の微小なリボソーム及びその製造方法を提供するものである。

[1] 高濃度の糖水溶液もしくは糖スラリーに、脂質を含むリボソーム原料を注入することにより得られる微小なリボソーム。

[2] 高濃度の糖水溶液もしくは糖スラリーに、脂質を含むリボソーム原料を注入することにより得られる粒子径が 400 nmより小さい前項 1に記載のリボソーム。

[3] 糖 10質量部に対して水を 1〜30質量部の割合で含む糖水溶液もしくは糖スラリーを用いる前項 1記載のリボソーム。 [4] 糖 10質量部に対して水を 2〜15質量部の割合で含む糖水溶液もしくは糖スラリーを用いる前項 3記載のリボソーム。

[5] 単糖類、二糖類および糖アルコールから選ばれる一種または二種以上の糖を用いる前項 1記載のリボソーム。

[6] グルコース、フルク ] ^一ス、ガラク 1 ス、マル! ^一ス、ラクト一ス、スクロース、トレハロース、キシリ 1 ^一ル、マンニトールおよびエリスリトールから選ばれる一種または二種以上の糖を用いる前項 5記載のリポソーム。

[7] 糖 10質量部に対して、脂質の割合が 5質量部以下となる量の脂質を含むリボソーム原料を用いる前項 1記載のリボソーム。

[8] 脂質を含むリボソーム原料として、脂質の水溶性有機溶媒溶液を用いる前項 1記載のリボソーム。

[9] 水溶性有機溶媒が、炭素数 4までの低級アルコール、アセトンおよびァセトニトリルから選ばれる前項 8記載のリボソーム。

[10] 脂質 10質量部に対して 1〜 100質量部の水溶性有機溶媒を使用する前項 8記載のリポソーム。

[1 1] 凍結乾燥リボソーム製剤としたときに、脂質 10質量部に対して、 0.5〜50質量部の水溶性有機溶媒が残存する前項 10記載のリボソーム。

[12] 凍結乾燥リボソーム製剤としたときに、脂質 10質量部に対して、 0.5〜30質量部の水溶性有機溶媒が残存する前項 11記載のリボソーム。

[13] 高濃度の糖水溶液もしくは糖スラリーに、脂質を含むリボソーム原料を注入し混合することを特徴とする微小なリポソームの製造方法。

[14] 高濃度の糖水溶液もしくは糖スラリーに、脂質を含むリボソーム原料を注入し混合して粒子径が 400 nmより小さいリボソームを得る前項 1

3に記載のリポソームの製造方法。

[15] 糖 10質量部に対して水を 1〜30質量部の比率で混合して得た糖水溶液もしくは糖スラリーを用いる前項 13記載のリボソームの製造方法。

[16] 糖 10質量部に対して水を 2〜15質量部の比率で混合して得た糖水溶液もしくは糖スラリーを用いる前項 15記載のリポソ一ムの製造方法。 [17] 単糖類、二糖類および糖アルコールから選ばれる一種または二種以上の糖を用いる前項 13記載のリボソームの製造方法。

[18] グルコース、フルク！ス、ガラクトース、マル! ^一ス、ラク！ ^一ス、スクロース、トレハロース、キシリ 1 ^一ル、マンニトールおよびエリスリトールから選ばれる一種または二種以上の糖を用いる前項 17記載のリポゾームの製造方法。

[19] 糖 10質量部に対して、脂質の割合が 5質量部以下となる量の脂質を含むリボソーム原料を用いる前項 13記載のリボソームの製造方法。

[20] 脂質を含むリボソーム原料として、脂質の水溶性有機溶媒溶液を用いる前項 13記載のリボソームの製造方法。

[21] 水溶性有機溶媒が、炭素数 4までの低級アルコール、アセトンおよびァセトニトリルから選ばれる前項 20記載のリボソームの製造方法。

[22] 脂質 10質量部に対して、 1〜100質量部の水溶性有機溶媒を使用する前項 20記載のリボソームの製造方法。

[23] 凍結乾燥リボソーム製剤としたときに、脂質 10質量部に対して、 0.5〜50質量部の水溶性有機溶媒が残存するリボソームを得る前項 22記載のリボソームの製造方法。

[24] 凍結乾燥リボソーム製剤としたときに、脂質 10質量部に対して、 0.5〜30質量部の水溶性有機溶媒が残存するリボソームを得る前項 23記載のリボソームの製造方法。発明の詳細な説明

本発明は、糖と水を加熱や撹拌によって混合した高濃度の糖水溶液もしくは糖スラリーに、脂質を含むリボソーム原料を注入し混合することにより得られる微小なリボソーム、及びその製造方法に関する。

本発明の方法によれば、有機溶媒の使用量を少量に抑えて、また過酷な物理的処理手段を採用せずに、容易かつ効率的に微小なリボソームを得ることができる。本発明によりリボソームを製造する際には、糖類は高濃度で用いられる。具体的には、糖 1 0質量部に対して、水 1〜3 0質量部の比率で混合されたものが用いられる。好ましくは糖 1 0質量部に対して、水 2〜1 5質量部、さらに好ましくは糖 1 0質量部に対して、水 3〜1 0質量部の比率で用いられる。また、その糖類は溶液、またはスラリーの状態で用いられる。

本発明で用いられる糖類としては、グルコース、フルクトース、ガラクトース等の単糖類、マル! ^一ス、ラクトース、スクロース、トレハロース等の二糖類、もしくはキシリトール、マンニトール、エリスリトール等の糖アルコール類があり、いずれも好ましい。また、糖類は一種または二種以上の糖類を組み合わせて用いてもよい。より好ましくは、グルコース、マルトース、ラク ] ^一ス、スクロース、トレハロース、キシリトールまたはそれらを組み合わせた糖類が用いられる。特に好ましくは、マルトースが用いられる。本発明においては、糖と脂質の比率は制限されない。好ましくは、糖 1 0 質量部に対して、脂質を含むリボソーム原料中の脂質が 5質量部以下となる比率で用いられる。より好ましくは、糖 1 0質量部に対して、リボソーム原料中の脂質が 1質量部以下、特に好ましくは 0. 0001〜0. 5質量部の比率となる量のリボソーム原料が用いられる。

本発明に用いられる脂質としては、リン脂質や糖脂質が挙げられる。例えば、卵黄レシチン、大豆レシチン、ホスファチジルコリン（ジミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステア口ィルホスファチジルコリン等）、リゾホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール（ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトィルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセ口ール等）、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールァミン、スフインゴミエリン、ジセチルホスフェート、ホスファチジン酸またはそれらの混合物が挙げられ、いずれも好ましい。より好ましくは、卵黄レシチン、ホスファチジルコリン（ジミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン等）、ホスファチジルグリセロール（ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール等）、またはそれらの混合物が挙げられる。

また、リボソーム原料として、上記した脂質以外に、膜安定化物質、例えば、コレステロール等を添加することができるし、酸化防止剤として、例えば、ひ—トコフエロール等を添加することができる。

本発明に用いられる脂質は、溶液、好ましくは濃厚な溶液、あるいは脂質溶液から溶媒を留去して得られた脂質の薄膜や粉末の状態で添加される。脂質溶液の溶媒としては、水溶性の有機溶媒が用いられる。例えば、メタノール、エタノールなどの炭素数が 4までの低級アルコール、アセトンまたはァセトニトリルがあり、いずれも好ましい。より好ましくは、エタノールが用いられる。

本発明の方法によると、有機溶媒の使用量を少量に抑えて、微小なリポソームを製造することができる。例えば、脂質 1 0質量部に対して、 1〜 1 0 0質量部の有機溶媒が用いられる。より好ましくは 1〜5 0質量部の比率で用いられる。

また、本発明のリボソームは凍結乾燥製剤にすることができる。その際、リボソーム製造時に用いた有機溶媒がいくらか残存する。しかし、本願発明では有機溶媒の使用量を少量に抑えて、微小なリボソームを製造できるので、残存する有機溶媒量も少量ですむことになる。例えば、脂質 1 0質量部に対して 1〜 1 0 0質量部の有機溶媒を用いたリボソームを凍結乾燥した場合に、残存する有機溶媒は 0. 5〜5 0質量部、より好ましくは、 0. 5〜 3 0質量部程度の少量となる。本発明において、リボソームに保持させる生理活性物質は特に制限されない。それらを保持させる方法としては、例えば、水溶性の生理活性物質は、前もつて糖水溶液または糖スラリー中に添加され、そこに脂質を含むリポソーム原料が注入される。また疎水性の生理活性物質は、必要最小限の有機溶媒で溶解され、脂質を含むリボソーム原料と混合して、糖水溶液または糖スラリー中に注入される。

高濃度の糖水溶液または糖スラリーに、脂質を含むリポソ一ム原料を注入し混合する際、必要により撹拌することができる。撹拌には通常の撹拌のほ力、、ホモジナイザーなどの乳化 ·分散装置を用いた撹拌でもよい。もちろん乳化 ·分散を促す装置を用いて撹拌することにより粒子径は速やかに小さくできる。

本発明の方法で製造することにより、過酷な物理的処理を使用しないで微小なリボソームを得ることができる。例えば、粒子径（動的光散乱法等で測定される）が約 4 0 0 n m以下の微小なリボソームを得ることができ、 3 0 0 n m以下の粒子径のリボソームをも容易に得ることができる。また、得られた微小なリポソームは必要により希釈することができる。

本発明により製造されるリボソームの粒子径は、実用上充分な程度に微小ではあるが、粒子径をさらに小さくしたり、粒子径分布をより均一にするために、さらに物理的処理、例えば、ポリカーボネートフィルターによるェクストル一ジョン、高圧乳化または超音波照射等の処理を行なってもよい。産業上の利用の可能性

本発明で得られる生理活性物質を含有するリボソームは、非経口投与のための注射剤、例えば、リボソーム注射液、または用時溶剤に溶解または懸濁して用いる固形の注射剤に製剤化され使用される。この注射剤は、安定剤、懸濁化剤、乳化剤、無痛化剤、緩衝剤、保存剤等を含んでいてもよい。これらは最終工程において滅菌するか無菌操作法によって調製される。また無菌の固形剤、例えば、凍結乾燥品を製造し、その使用前に無菌化または無菌の注射用蒸留水または他の溶剤に溶解して使用することもできる。

非経口投与のためのその他の製剤としては、例えば、外用液剤、軟膏剤、塗布剤、吸入剤、スプレー剤、坐剤および膣内投与のためのペッサリー等に製剤化され使用される。発明を実施するための最良の形態

以下に、実施例によって本発明を詳述するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

実施例 1

マルト一ス（1 kg) に水（1 L) を加え、加熱溶解した。室温まで冷却した 50 %マルトース水溶液に、卵黄レシチン（0.5g)、エタノール（1.0 g) と脂溶性薬物（PGE 1 · (ドデカノィルォキシ）ェチルエステル； 0.05g) からなるレシチン溶液を注入した。溶液を毎分 8,000回転で 30分間撹拌して、本発明のリボソームを得た。このリボソームを水で全量 10L まで希釈し、動的光散乱により平均粒子径を見積もった結果、リボソームの粒子径は 190 nmであった。実施例 2

マルト一ス（1 kg) に水（1 L) を加え、加熱溶解した。室温まで冷却した 50%マル! ^一ス水溶液に、卵黄レシチン（5.0g)、エタノール（8.0 g) と脂溶性薬物（PGE 1 · (ドデカノィルォキシ）ェチルエステル； 0.5 g) からなるレシチン溶液を注入した。溶液を毎分 10,000 回転で 30分間撹拌して、本発明のリボソームを得た。このリボソームを水で全量 10Lまで希釈し、動的光散乱により平均粒子径を見積もった結果、リボソームの粒子径は 180 nmであった。実施例 3

マルト一ス（2.5kg) に水（2.5L) を加え、加熱溶解した。室温まで冷却した 50 %マルトース水溶液に、卵黄レシチン（12 g)、エタノール (20 g) と脂溶性薬物（PGE 1 ，（ドデカノィルォキシ）ェチルエステル； 1 g) からなるレシチン溶液を注入した。溶液を毎分 8, 000回転で 30 分間撹拌して、本発明のリボソームを得た。このリボソームを水で全量 25 Lまで希釈し、動的光散乱により平均粒子径を見積もった結果、リボソームの粒子径は 210 nmであった。実施例 4

マルトース（1 k g) に水（0.3L) を加えたマル) ススラリーに、卵黄レシチン（5.0g) とエタノール（8.0g) からなるレシチン溶液を注入した。スラリーを毎分 8, 000回転で 15分間撹拌して、本発明のリボソームを得た。このリボソームを水で全量 10Lまで希釈し、動的光散乱により平均粒子径を見積もった結果、リボソームの粒子径は 200 nmであった。実施例 5

マルト一ス（20 g) に水（8ml) を加えたマル! ススラリーに、ジミリストイルホスファチジルコリン（0. lg) とエタノール（0.2g) からなる溶液を注入した。スラリーを毎分 100回転で 60分間撹拌して、本発明のリボソームを得た。このリボソームを水で全量 20 Om 1まで希釈し、動的光散乱により平均粒子径を見積もった結果、リボソームの粒子径は 130 nmであつこ。実施例 6

マルトース（20 g) に水（8ml) を加えたマルト一ススラリーに、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルグリセロールおよびコレステロールからなる混合物（65 : 5 : 30) (0.2g) とエタノール（0.3g) からなる溶液を注入した。スラリーを毎分 100回転で 60分間撹拌して、本発明のリボソームを得た。このリボソームを水で全量 20 Omlまで希釈し、動的光散乱により平均粒子径を見積もった結果、リポソ一ムの粒子径は 220 nmであった。比較例マルト一ス（l O g) に水（90m l) を加えた 10 %マルト一ス水溶液に、卵黄レシチン（0.3g) とエタノール（3. Og) からなるレシチン溶液を注入した。溶液を毎分 100回転で 60分間撹拌してリボソームを得た。このリボソームを水で、全量 10 Om 1まで希釈した。動的光散乱により平均粒子径を見積もった結果、リボソームの粒子径は 800 nmであった。実施例 7

各種糖の 50%水溶液（20m l ) に、卵黄レシチン（0.6g) とェ夕ノール（0.8g) からなるレシチン溶液を注入した。溶液を、毎分 100回転で 24時間撹拌して、本発明のリボソームを得た。このリポソ一ムを水で全量 10 Om 1まで希釈した。希釈液の波長 400 nmにおける吸光度を測定し、濁度を算出した。その結果を表 1に示す。

1

糖濁度

マル卜— -ス 1. 03

卜レハ口- -ス 1. 10

ラク卜一 -ス 0. 51

スクロー -ス 0. 97

ダルコ- -ス 0. 81

キシリト' —ル 0. 91 濁度は、粒子径の指標として用いられる値であり、濁度が小さい値ほど、粒子径も小さいことを表わしている（Gregory Gregoriadis 編集、 LIPOSOME TECHNOLOGY, Vol. I, 2nd Edition, 568-571 (1993年発行））。

表 1の結果を、マルトースを用いた実施例 1での結果を併せて考えると、各糖についても、マルトースを用いたときの粒子径と同等またはそれ以下の粒子径のリボソームを得ることができたことがわかる。

Claims

請求の範囲

1 . 高濃度の糖水溶液もしくは糖スラリーに、脂質を含むリボソーム原料を注入することにより得られる微小なリボソーム。

2 . 高濃度の糖水溶液もしくは糖スラリーに、脂質を含むリボソーム原料を注入することにより得られる粒子径が 4 0 0 n mより小さい請求の範囲 1 に記載のリボソーム。

3 . 糖 1 0質量部に対して水を 1〜3 0質量部の割合で含む糖水溶液もしくは糖スラリーを用いる請求の範囲 1記載のリボソーム。

4 . 糖 1 0質量部に対して水を 2〜1 5質量部の割合で含む糖水溶液もしくは糖スラリーを用いる請求の範囲 3記載のリボソーム。

5 . 単糖類、二糖類および糖アルコールから選ばれる一種または二種以上の糖を用いる請求の範囲 1記載のリボソーム。

6 . グルコース、フルク！ ^一ス、ガラクト一ス、マルトース、ラクト一ス、スクロース、トレハロース、キシリ ] ^一ル、マンニトールおよびエリスリトールから選ばれる一種または二種以上の糖を用いる請求の範囲 5記載のリポソーム。

7 . 糖 1 0質量部に対して、脂質の割合が 5質量部以下となる量の脂質を含むリボソーム原料を用いる請求の範囲 1記載のリボソーム。

8 . 脂質を含むリボソーム原料として、脂質の水溶性有機溶媒溶液を用いる請求の範囲 1記載のリボソーム。

9 . 水溶性有機溶媒が、炭素数 4までの低級アルコール、アセトンおよびァセトニトリルから選ばれる請求の範囲 8記載のリボソーム。

1 0 . 脂質 1 0質量部に対して 1〜1 0 0質量部の水溶性有機溶媒を使用する請求の範囲 8記載のリポソーム。

1 1 . 凍結乾燥リボソーム製剤としたときに、脂質 1 0質量部に対して、 0. 5〜 5 0質量部の水溶性有機溶媒が残存する請求の範囲 1 0記載のリポソーム。

12. 凍結乾燥リボソーム製剤としたときに、脂質 10質量部に対して、 0.5〜30質量部の水溶性有機溶媒が残存する請求の範囲 1 1記載のリポソ —ム。

13. 高濃度の糖水溶液もしくは糖スラリーに、脂質を含むリボソーム原料を注入し混合することを特徴とする微小なリポソームの製造方法。

14. 高濃度の糖水溶液もしくは糖スラリーに、脂質を含むリボソーム原料を注入し混合して粒子径が 400 nmより小さいリボソームを得る請求の範囲 13に記載の微小なリボソームの製造方法。

15. 糖 10質量部に対して水を 1〜30質量部の比率で混合して得た糖水溶液もしくは糖スラリーを用いる請求の範囲 13記載のリボソームの製造方法。

16. 糖 10質量部に対して水を 2〜15質量部の比率で混合して得た糖水溶液もしくは糖スラリーを用いる請求の範囲 15記載のリボソームの製造方法。

17. 単糖類、二糖類および糖アルコールから選ばれる一種または二種以上の糖を用いる請求の範囲 13記載のリボソームの製造方法。

18. グルコース、フルクトース、ガラク I ^一ス、マル 1 ^一ス、ラク！ス、スクロース、トレハロース、キシリトール、マンニトールおよびエリスリトールから選ばれる一種または二種以上の糖を用いる請求の範囲 17記載のリボソームの製造方法。

19. 糖 10質量部に対して、脂質の割合が 5質量部以下となる量の脂質を含むリボソーム原料を用いる請求の範囲 13記載のリボソームの製造方法。

20. 脂質を含むリボソーム原料として、脂質の水溶性有機溶媒溶液を用いる請求の範囲 13記載のリボソームの製造方法。

21. 水溶性有機溶媒が、炭素数 4までの低級アルコール、アセトンおよびァセトニトリルから選ばれる請求の範囲 20記載のリボソームの製造方法。

22. 脂質 10質量部に対して 1〜： 100質量部の水溶性有機溶媒を使用する請求の範囲 20記載のリボソームの製造方法。

2 3 . 凍結乾燥リボソーム製剤としたときに、脂質 1 0質量部に対して、. 5〜 5 0質量部の水溶性有機溶媒が残存するリポソームを得る請求の範囲 2 2記載のリボソームの製造方法。

2 4 . 凍結乾燥リボソーム製剤としたときに、脂質 1 0質量部に対して、 . 5〜3 0質量部の水溶性有機溶媒が残存するリボソームを得る請求の範囲 2 3記載のリボソームの製造方法。