WO1995019994A1 - Procede de solubilisation dans un milieu aqueux d'agents antitumoraux de la famille du taxol, et cyclodextrines ramifiees utilisables pour cette solubilisation - Google Patents

Procede de solubilisation dans un milieu aqueux d'agents antitumoraux de la famille du taxol, et cyclodextrines ramifiees utilisables pour cette solubilisation Download PDF

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WO1995019994A1
WO1995019994A1 PCT/FR1995/000075 FR9500075W WO9519994A1 WO 1995019994 A1 WO1995019994 A1 WO 1995019994A1 FR 9500075 W FR9500075 W FR 9500075W WO 9519994 A1 WO9519994 A1 WO 9519994A1
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inclusion complex
taxol
taxotere
compound
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PCT/FR1995/000075
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Jacques Defaye
Bruno Perli
Andrée Gadelle
Valérie DESCAMPS
Annie Coste Sarguet
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Commissariat A L'energie Atomique
Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs)
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    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
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    • C08B37/0015—Inclusion compounds, i.e. host-guest compounds, e.g. polyrotaxanes

Definitions

  • the subject of the invention is a method of solubilization in an aqueous medium of antitumor agents of the taxol family.
  • Taxol a diterpene compound derived from yew (Taxus spp), and a certain number of its derivatives, in particular Taxotere which is obtained by hemisynthesis starting from a natural precursor of taxol, belong to one of the most promising anti-tumor agents, as described in particular by P. Potier in Chem. Soc. Rev., 21, 1992, p. 113-119 and by M.C. Bissery et al in Cancer Research, 51, 1991, p. 4845-4852. Taxotere is currently in phase II clinical trials in Europe and the United States.
  • taxol has a water solubility of less than 0.004 mg / ml, and that of Taxotere is only slightly higher.
  • Another approach to solving this problem has been to find suitable molecules having a high solubility in an aqueous medium which are likely to combine with taxol and its derivatives to dissolve them in an aqueous medium.
  • the present invention specifically relates to a method of solubilization in an aqueous medium of antitumor agents of the taxol family, using for this purpose branched cyclodextrins.
  • the method of solubilization in an aqueous medium of an antitumor agent belonging to the family of taxol and its derivatives consists in combining this antitumor agent with a branched cyclodextrin of formula:
  • n 6 or 8 and the R 1 which may be identical or different, represent OH or SR ⁇ with R ⁇ representing a monosaccharide or an oligosaccharide such as a group of formula of type (II) when the monosaccharide is D-glucose or an oligosaccharide of D-glucose linked to ⁇ - (1-4) or of formula (III) when the monosaccharide is ⁇ -D-glucose or an oligosaccharide of D-glucose linked to ⁇ - (l -> 4):
  • p is equal to 0 or is an integer ranging from 1 to 5 provided that at least one of R 1 represents SR ⁇ , to form therewith a water-soluble inclusion complex.
  • Cyclodextrin derivatives of this type have been described in EP-A-0 403 366 which illustrates cyclomalto-oligosaccharide derivatives synthesized for various applications using these cyclomaltooligosaccharides to form inclusion complexes with hydrophobic molecules by apolar association.
  • the branched cyclodextrins corresponds to the abovementioned formula I in which all of the R ⁇ are identical and represent SR 2 .
  • Branched cyclodextrins of this type can be prepared by reacting the derivatives fully substituted in position 6 with an iodine atom of the corresponding cyclodextrins with the sodium salt of the thiomonosaccharide or thiooligosaccharide corresponding to the group R 2 .
  • the branched cyclodextrin used corresponds to formula I in which only one R 1 represents SR 2 , the other R 1 represents OH.
  • branched cyclodextrins can be prepared by reaction of the corresponding cyclodextrin substituted on a single cycle in position 6 by the tolylsulfonyl group, with the sodium salt of the thiomonosaccharide or of the thiooligosaccharide corresponding to the group R 2 .
  • the R 2 groups are preferably ⁇ -maltosyl or ⁇ -maltosyl groups corresponding respectively to the formulas
  • the antitumor agent used is a compound belonging to the family of taxol and its derivatives.
  • taxol and Taxotere corresponding to the formula:
  • R 3 represents -COOC (CH3) 3 and R 4 represents H in the case of Taxotere
  • R 3 represents -COCgHs and R 4 represents -COCH3 in the case of taxol.
  • the invention also relates to the inclusion complexes of a branched cyclodextrin corresponding to the above formula (I) with an antitumor agent of the taxol family and its derivatives.
  • the cyclodextrin of formula (I) is derived from ⁇ -cyclodextrin and that R 2 represents the ⁇ -maltosyl or ⁇ -maltosyl group.
  • inclusion complexes can be prepared in a conventional manner, for example by adding by adding to a solution of the branched cyclodextrin of formula (I) used, a concentrated solution of the antitumor agent of the taxol family in a solvent. organic miscible with water, for example acetone, followed by stirring the homogeneous solution obtained by subjecting it to a bubbling of inert gas such as nitrogen to remove most of the organic solvent. After removal of the organic solvent, the aqueous solution can be frozen and then lyophilized to isolate the inclusion complex thus formed.
  • the inclusion complex can also be prepared by dispersing the anti-tumor agent to be included in an aqueous solution of the branched cyclodextrin used and stirring the suspension obtained until obtaining a clear solution.
  • the inclusion complex thus formed can then be isolated as before by freezing and lyophilization.
  • the inclusion complex obtained can be used in a pharmaceutical composition comprising this inclusion complex, with a pharmaceutically acceptable vehicle, for the administration of the antitumor agent.
  • compositions which can be administered orally or parenterally are, for example solutions, powders, suspensions, etc. especially injectable solutions.
  • FIGS. 1 and 2 represent the nuclear magnetic resonance spectra of the high frequency proton, of the branched cyclodextrin of Example 3 (FIG. 2) and of the inclusion complex of this cyclodextrin with Taxotere (FIG. 1).
  • Example 1 Preparation of heptakis- (6-S- ⁇ -maltosyl-6-thio) cyclomaltoheptaose (compound n e 1)
  • the heptakis- (6-deoxy-6-iodo) cyclomaltoheptaose is prepared by the method described by A. Gadelle and J. Defaye in Angew Chem. Int. Ed. Engl. , .30, 1991, p. 78-80.
  • This salt is prepared by carrying out the following steps: a) Preparation of the 2, 3, 6, 2 ', 3',
  • This compound has the following characteristics: - [ ⁇ ] D : + 164 ° (c 1.1, H 2 0);
  • Example 1 The procedure of Example 1 is followed to prepare this compound starting from heptakis (6-deoxy-6-iodo) -cyclomaltoheptaose (0.5 g,
  • R 2 being the group of formula (IV).
  • the precipitate obtained is separated by filtration, washed with acetone and dried under vacuum. It is then redissolved in water and the solution is freed of mineral salts by passing over a column of mixed resin B-6113. Drying by lyophilization of the aqueous solution gives a solid (0.65 g) which shows in HPLC (Nucleosil C-18 column, 5 ⁇ ; eluent MeOH-water 3/22) a major component; This component is obtained in preparative HPLC using the same passage conditions, in the form of a white powder (0.46 g, yield of 65%).
  • HPLC Nucleosil C-18 column, 5 ⁇ ; eluent MeOH-water 3/22
  • Example 3 The procedure of Example 3 is followed to prepare this compound starting from 1.86 g (1.44 mmol) of 6 ⁇ -Op-tolylsulfonyl-cyclomaltoheptaose and 0.82 g (1.5 mmol) of the salt sodium from 1-thio- ⁇ -maltose, in 9 ml of 1, 3-dimethyl-2-oxohexahydropyrimidine. After 18 hours of heating at 60 ° C., the reaction mixture is treated as in Example 3. Purification by preparative HPLC of the reaction product leads to 1.32 g (62% yield) of a white solid which has the following characteristics:
  • the NMR spectrum of compound No. 3 has been shown for comparison in the absence of Taxotere under the same conditions.
  • Taxotere can be brought to 8 mmol / 1 (6.5 g / 1) in an aqueous solution at 48 mmol / 1 of compound 3. This gives a significant increase in the solubility of Taxotere, this being 1 'order of 0.004 g / 1 in the absence of cyclodextrin.
  • Example 7 Encapsulation of Taxotere in Compound No. 4.
  • Example 5 The same procedure is followed as in Example 5 to encapsulate the Taxotere in compound No. 4.
  • a solid product of perfectly defined composition is also obtained which can be dissolved in water.
  • this product has a slightly lower solubility in water than that of the inclusion complex obtained with compound No. 3 in which the substituent R 2 has ⁇ anomerism.

Abstract

L'invention concerne un procédé de solubilisation dans un milieu aqueux d'agents antitumoraux de la famille du taxol, et des cyclodextrines ramifiées utilisables pour cette solubilisation. Ce procédé consiste à combiner cet agent antitumoral avec une cyclodextrine ramifiée de formule (I) dans laquelle n = 6, 7 ou 8, R1 = OH ou SR2, avec R2 représentant de préférence le groupe α-maltosyle ou β-maltosyle, l'un au moins des R1 représentant SR2.

Description

PROCEDE DE SOLUBILISATION DANS UN MILIEU AQUEUX
D'AGENTS ANTITUMORAUX DE LA FAMILLE DU TAXOL, ET
CYCLODEXTRINES RAMIFIEES UTILISABLES POUR CETTE
SOLUBILISATION L'invention a pour objet un procédé de solubilisation dans un milieu aqueux d'agents antitumoraux de la famille du taxol.
Le taxol, composé diterpénique issu de l'if (Taxus spp) , et un certain nombre de ses dérivés dont notamment le Taxotere qui est obtenu par hémisynthèse en partant d'un précurseur naturel du taxol, appartiennent à l'une des familles les plus prometteuses d'agents antitumoraux, comme il est décrit notamment par P. Potier dans Chem. Soc. Rev., 21, 1992, p. 113-119 et par M.C. Bissery et al dans Cancer Research, 51, 1991, p. 4845-4852. Le Taxotere est présentement en phase II d'expérimentation clinique en Europe et aux Etats-Unis.
L'un des problèmes que posent ces composés, concerne leur faible solubilité dans l'eau et les fluides biologiques, ce qui limite considérablement leurs possibilités d'administration clinique, notamment par injection parentérale. A titre d'exemple, le taxol a une solubilité dans l'eau inférieure à 0,004 mg/ml, et celle du Taxotere est à peine plus élevée.
Pour résoudre ce problème, Nicolaou et al. ont décrit très récemment dans Nature, 364, 1993, p.464-466, des dérivés du 'taxol dénommé "protaxols", plus solubles dans l'eau qui seraient susceptibles de libérer le taxol dans des conditions physiologiques.
Une autre approche pour résoudre ce problème, qui fait justement l'objet de la présente invention, a été de trouver des molécules appropriées présentant une solubilité élevée dans un milieu aqueux qui soient susceptibles de se combiner avec le taxol et ses dérivés pour les solubiliser dans un milieu aqueux.
La présente invention a précisément pour objet un procédé de solubilisation dans un milieu aqueux d'agents antitumoraux de la famille du taxol, utilisant dans ce but des cyclodextrines ramifiées.
Selon l'invention, le procédé de solubilisation dans un milieu aqueux d'un agent antitumoral appartenant à la famille du taxol et de ses dérivés, consiste à combiner cet agent antitumoral avec une cyclodextrine ramifiée de formule :
Figure imgf000004_0001
dans laquelle n est égal à 6, 7 ou 8 et les R1 qui peuvent être identiques ou différents, représentent OH ou SR^ avec R^ représentant un monosaccharide ou un oligosaccharide tel qu'un groupe de formule de type (II) lorsque le monosaccharide est le D-glucose ou un oligosaccharide du D-glucose lié α-(l-»4) ou de formule (III) lorsque le monosaccharide est le β -D-glucose ou un oligosaccharide du D-glucose lié α-(l->4) :
(II)
Figure imgf000004_0002
Figure imgf000005_0001
dans lesquelles p est égal à 0 ou est un nombre entier allant de 1 à 5 à condition qu'au moins l'un des R1 représente SR^, pour former avec celle-ci un complexe d'inclusion soluble dans l'eau.
Des dérivés de cyclodextrines de ce type ont été décrits dans EP-A-0 403 366 qui illustre des dérivés de cyclomalto-oligosaccharide synthétisés en vue de diverses applications utilisant ces cyclomaltooligosaccharides pour former des complexes d'inclusion avec des molécules hydrophobes par association apolaire.
D'autres dérivés appartenant à cette même famille de composés revendiqués ont été préparés plus récemment, tels les α-D-mannosyl- et β-D-galactosyl cyclodextrines décrits par C. Lancelon-Pin et H. Driguez dans Tetrahedron Lett., 33(1992)3125-3128. Des β-glycosylamines β-cyclodextrines apparentées ont par ailleurs été décrites dans le même temps par H. Parrot-Lopez, H. Galons, A.W. Coleman, J. Mahuteau et M. Miocque dans Tetrahedron Lett. 33(1992) 209-212 comme agent de solubilisation de médicaments, et se sont trouvées également avoir des propriétés de solubilisation similaires vis-à-vis des diterpènes de la famille du taxol.
Selon l'invention, on a trouvé que parmi les dérivés de cyclomalto-oligosaccharides décrits dans EP-A-0 403 366, les cyclodextrines ramifiées répondant à la formule I précitée permettaient d'améliorer la solubilité dans l'eau ainsi que la biodisponibilité d'agents antitumoraux de nature diterpénique de la famille du taxol, dont en particulier le Taxotere. Selon un premier mode de réalisation de l'invention, la cyclodextrine ramifiée répond à la formule I précitée dans laquelle tous les R^ sont identiques et représentent SR2.
Des cyclodextrines ramifiées de ce type peuvent être préparées par réaction des dérivés totalement substitués en position 6 par un atome d'iode des cyclodextrines correspondantes avec le sel de sodium du thiomonosaccharide ou du thiooligosaccharide correspondant au groupe R2. Selon un second mode de réalisation de l'invention, la cyclodextrine ramifiée utilisée répond à la formule I dans laquelle un seul R1 représente SR2, les autres R1 représentant OH.
Ces cyclodextrines ramifiées peuvent être préparées par réaction de la cyclodextrine correspondante substituée sur un seul cycle en position 6 par le groupe tolylsulfonyle, avec le sel de sodium du thiomonosaccharide ou du thiooligosaccharide correspondant au groupe R2. Dans les deux modes de réalisation de l'invention, les cyclodextrines ramifiées utilisées correspondent de préférence à la formule I avec n=7, c'est-à-dire à la β-cyclodextrine. En effet, on a observé que les meilleurs résultats, en ce qui concerne l'augmentation de solubilité du taxol et de ses dérivés, étaient plus importants dans le cas de la β-cyclodextrine que dans le cas de l'a- et de la γ -cyclodextrine.
Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, dans la cyclodextrine ramifiée utilisée répondant à la formule I, les groupes R2 sont de préférence des groupes α-maltosyle ou β-maltosyle répondant respectivement aux formules
Figure imgf000007_0001
OU
Figure imgf000007_0002
Selon l'invention, l'agent antitumoral utilisé, est un composé appartenant à la famille du taxol et de ses dérivés.
A titre d'exemple de tels agents, on peut citer le taxol et le Taxotere répondant à la formule :
Figure imgf000008_0001
où R3 représente -COOC(CH3)3 et R4 représente H dans le cas du Taxotere, et R3 représente -COCgHs et R4 représente -COCH3 dans le cas du taxol.
Bien entendu, on peut utiliser dans 1'invention, des dérivés du taxol et du Taxotere ayant la même formule de base mais des substituants différents. L'invention concerne également les complexes d'inclusion d'une cyclodextrine ramifiée répondant à la formule (I) précitée avec un agent antitumoral de la famille du taxol et de ses dérivés
Dans ces complexes d'inclusion, on préfère également que la cyclodextrine de formule (I) soit dérivée de la β-cyclodextrine et que R2 représente le groupe α-maltosyle ou β-maltosyle.
Ces complexes d'inclusion peuvent être préparés de façon classique, par exemple par addition en ajoutant à une solution de la cyclodextrine ramifiée de formule (I) utilisée, d'une solution concentrée de l'agent antitumoral de la famille du taxol dans un solvant organique miscible à l'eau, par exemple l'acétone, suivie d'une agitation de la solution homogène obtenue en la soumettant à un barbotage de gaz inerte tel que l'azote pour éliminer la plus grande partie du solvant organique. Après élimination du solvant organique, on peut congeler la solution aqueuse, puis la lyophiliser pour isoler le complexe d'inclusion ainsi formé. Pour éviter l'utilisation d'un solvant organique, on peut aussi préparer le complexe d'inclusion en dispersant l'agent antitumoral à inclure dans une solution aqueuse de la cyclodextrine ramifiée utilisée et agiter la suspension obtenue jusqu'à l'obtention d'une solution claire. On peut ensuite isoler comme précédemment le complexe d'inclusion ainsi formé par congélation et lyophilisation.
Le complexe d'inclusion obtenu peut être utilisé dans une composition pharmaceutique comprenant ce complexe d'inclusion, avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable, en vue de l'administration de l'agent antitumoral.
Ces compositions pharmaceutiques qui peuvent être administrées par voie orale ou parentérale sont par exemple des solutions, des poudres, des suspensions, etc. en particulier des solutions injectables.
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples suivants donnés bien entendu à titre illustratif et non limitatif, en référence aux dessins annexés.
Les figures 1 et 2 annexées représentent les spectres de résonance magnétique nucléaire du proton à haute fréquence, de la cyclodextrine ramifiée de l'exemple 3 (figure 2) et du complexe d'inclusion de cette cyclodextrine avec le Taxotere (figure 1) . Exemple 1 ; Préparation de 1'heptakis-(6-S-α -maltosyl-6-thio)cyclomaltoheptaose (composé ne 1) Ce composé répond à la formule (I) dans laquelle n=7 et tous les R1 représentent SR2 avec R2 représentant le groupe de formule (IV) . Il est préparé par réaction de 1'heptakis- (6-désoxy-6-iodo) cyclomaltoheptaose avec le sel de sodium du 1-thio-α-maltose.
1. Préparation de l 'heptakis- (6-désoxy-6iodo) cyclomaltoheptaose
L'heptakis- (6-désoxy-6-iodo) cyclomaltoheptaose est préparé par le procédé décrit par A. Gadelle et J. Defaye dans Angew Chem. Int. Ed. Engl. , .30, 1991, p. 78-80.
2. Préparation du sel de sodium du 1-thio-α-maltose.
Ce sel est préparé en effectuant les étapes suivantes : a) Préparation du 2, 3, 6, 2 ' , 3' ,
4 ' , 6'-hepta-O-acétyl-2-hydroxymaltal
A une solution de bromure de 2,3, 6,2', 3',4', 6'-hepta-0-acétyl-α-maltose (D.H. Brauns, J. Am. Chem. Soc, 51, 1929, 1820-1831 ; 9 g, 12,8 mmol) dans du diméthylformamide (33 ml), on ajoute goutte à goutte le 1, 8-diazabicyclo [5,4,0] undéc-7-ène (1, 5-5) (1,95 ml, 13,11 mmol) . Le mélange réactionnel est maintenu pendant 20 h à température ambiante puis versé dans un mélange d'eau et de glace. Le précipité obtenu (6,04 g, rendement de 76 %) est récupéré par filtration, séché dans un dessicateur et recristallisé dans un mélange éthanol-eau.
Les caractéristiques de ce produit sont les suivantes :
F : 122-123°C
Figure imgf000010_0001
: + 68° (c 1,3, chloroforme) b) Préparation du 2, 3, 6, 2 ' , 3' , ' , 6'-hepta-O-acétyl-l-S-acétyl-l-thio-α-maltose A une solution de 2 g (2, 34 mmol) de l'hepta-O-acétyl-2-hydroxymaltal obtenu précédemment. dans 50 ml d'acétone, on ajoute 12 ml (168 mmol) d'acide thioacétique et goutte à goutte, l'hydroperoxyde de cumène. La solution est agitée pendant 40 h sous atmosphère d'azote, à température ambiante, puis' concentrée à 20°C. Le résidu solide est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (acétate d'éthyle-hexane 1:1, v/v) . On obtient 1,09 g (rendement 49 %) d'une poudre blanche, présentant un pouvoir rotatoire
Figure imgf000011_0001
de +139° (c 0,46, chloroforme) . c) ) Préparation du sel de sodium du 1-thio-α -maltose
A une solution de 2,1 g (3,03 mmol) de 1'hepta-O-acétyl-l-thioacétyl-α-maltose obtenu précédemment, dans 11 ml de chloroforme à -15°C, on ajoute du méthanolate de sodium (0,65 mol/1, 19 ml, 12,35 mmol) avec agitation et on maintient la réaction à -15°C pendant 15 min. Le thiolate qui précipite est séparé par filtration, lavé au chloroforme et séché dans un dessicateur. Il est utilisé sans autre purification ni caractérisation. 3. Préparation du composé n° 1
A une solution de
1'heptakis-(6-désoxy-6-iodo)cyclomaltoheptaose obtenu dans l'étape 1) (0,5 g, 0,26 mmol) dans la 1,3-diméthyl-2-oxohexahydropyrimidine (30 ml), on ajoute le sel de sodium du 1-thio-α-maltose (1,05 g, 2,76 mmol) obtenu en 2. Le mélange réactionnel est chauffé à 70°C sous atmosphère d'azote pendant 18 heures, puis refroidi et additionné d'acétone. Le précipité obtenu est séparé par filtration, lavé par l'acétone et séché sous vide. Il est ensuite dissous dans l'eau et purifié par ultrafiltation tangentielle
(appareil Millipore, Minitan-S muni d'une membrane d'acétate de cellulose PCAC 1K) . Le séchage de la solution par lyophilisation de la solution aqueuse résultante donne 0,89 g du composé n°l (rendement 96 %) .
Ce composé présente les caractéristiques suivantes : - [α]D : + 164° (c 1,1, H20) ;
- spectre de masse (FAB+) : m/z 3539, 3 (65,[ M+Na]+), 3180,2 (72, [M-C12H2ιO10S+Na]+, 2823 (82, [ M-2(C12H21O10S)+Na]+.
Exemple 2 : Préparation de 1 'heptakis- (6-S-fi -maltosyl-6-thio)-cyclomaltoheptaose (composé n° 2)
Ce composé répond à la formule (I) dans laquelle n est égal à 7 et tous les R1 représentent SR2 avec R2 étant le groupe de formule (V) .
On suit le mode opératoire de l'Exemple 1 pour préparer ce composé en partant d'heptakis (6-désoxy-6-iodo) -cyclomaltoheptaose (0,5 g,
0,26 mmol) et du sel de sodium du 1-thio-β-maltose
(0,61 g, 2,76 mmol) préparé comme il est décrit par M.
Mori et al.dans Chem. Pharm. Bull., 22, 1974, 1331-1338.
On obtient ainsi 0,67 g (rendement de 75 %) du composé n° 2. Ce composé présente les caractéristiques suivantes :
- [α]D : + 76° (c 0,97,eau) ; - spectre de masse (FAB+) : m/z 3554, 6 (29, 5, [
M+K]+), 3197,3 (47,5 [M-Cι H21O10S+Na]+) .
Exemple 3 : Préparation du 6J:-S-α
-maltosyl-6-jι-thiocyclomaltoheptaose (composé n° 3) Ce composé répond à la formule
Figure imgf000013_0001
avec R2 étant le groupe de formule (IV) .
A une solution de 0,62 g (0,48 mmol) de 6l-0-p-tolylsulfonyl-cyclomaltoheptaose préparé comme il est décrit par J. Defaye, A. Gadelle, A. Guiller, R. Darcy et T. 0'Sullivan, dans Carbohydr. Res., 192, 1989, p. 251-258 , dans 3 ml de 1,3-diméthyl-2-oxohexahydropyrimidine, on ajoute 0,27 g (0,72 mmol) du sel de sodium du 1-thio-α -maltose. La solution est chauffée à 50°C pendant 18 heures sous atmosphère d'azote, puis refroidie et additionnée d'acétone. Le précipité obtenu est séparé par filtration, lavé à l'acétone et séché sous vide. Il est ensuite redissous dans l'eau et la solution est débarrassée des sels minéraux par passage sur une colonne de résine mixte B-6113. Le séchage par lyophilisation de la solution aqueuse donne un solide (0,65 g) qui montre en CLHP (colonne Nucléosil C-18, 5μ ; éluant MeOH—eau 3/22) un composant majoritaire; Ce composant est obtenu en CLHP preparative en utilisant les mêmes conditions de passage, sous forme d'une poudre blanche (0,46 g, rendement de 65 %) .
Il présente les caractéristiques suivantes : - F : 283°C(déc.) , - [α]D : + 170° (c 1, eau) ; - spectre de masse (FAB+) : m/z 1497(100 , [M+Na]+), 1139(27, [M-C12H21O10S+Na]+) .
Exemple 4 : Préparation du 6^-S-β
-maltosyl-βj-thiocyclomaltoheptaose (composé n" 4) Ce composé répond à la formule (VI) avec R2 étant le groupe de formule (V) .
On suit le mode opératoire de l'Exemple 3 pour préparer ce composé en partant de 1,86 g (1,44 mmol) de 6^-O-p-tolylsulfonyl-cyclomaltoheptaose et de 0,82 g (1,5 mmol) du sel de sodium du 1-thio-β -maltose, dans 9 ml de la 1, 3-diméthyl-2-oxohexahydropyrimidine. Après 18 heures de chauffage à 60°C, le mélange réactionnel est traité comme dans l'Exemple 3. La purification par CLHP preparative du produit de la réaction conduit à 1,32 g (rendement de 62 %) d'un solide blanc qui présente les caractéristiques suivantes :
- F : 285°C
- [α]D : + 84° (c l, eau) Exemple 5 : Encapsulation du Taxotere dans le 6^,-S-α -maltosyl-6^-thiocyclomaltoheptaose (composé n° 3) .
On part d'une solution concentrée de Taxotere dans un solvant miscible à l'eau, constitué par de l'acétone, et on ajoute la quantité de solution concentrée correspondant à 0,75 umol de Taxotere à 500 μl d'une solution à 10 mmol/1 du composé n° 3 dans de l'eau stérile, à la température ambiante. On soumet la solution homogène ainsi obtenue à une agitation, tout en introduisant par barbotage un lent courant d'azote destiné à éliminer la plus grande partie de l'acétone. Après 2 heures, on congèle la solution aqueuse et on la lyophilise. On obtient ainsi un solide de composition parfaitement définie qui correspond à l'inclusion du Taxotere dans le composé n° 3. Le spectre de résonance magnétique nucléaire (RMN) du proton de ce produit à une concentration de 10 mmol/1 (1,8 mmmol/1 de Taxotere) dans D20, à 298K et 500 MHz, est représenté sur la figure 1. Sur la figure 2, on a représenté à titre comparatif le spectre RMN du composé n° 3 en l'absence de Taxotere dans les mêmes conditions.
En comparant ces deux figures, on remarque une modification du spectre du composé n° 3 au niveau du signal des H-3, qui confirme 1'encapsulation du Taxotere dans ce composé.
Exemple 6 ; Encapsulation du Taxotere dans le composé n° 3.
Dans cet exemple, on part du Taxotere à l'état pur et on disperse 6 mg (7,5 μmol) de ce produit dans 5 ml d'une solution contenant 10 mmol/1 du composé n°3 dans l'eau stérile, puis on agite la suspension obtenue à la température ambiante jusqu'à l'obtention d'une solution claire qui indique 1'encapsulation du Taxotere dans la molécule de cyclodextrine.
La lyophilisation de cette solution fournit, comme précédemment, un solide de composition parfaitement définie, présentant la même structure que celui obtenu dans l'Exemple 5. Dans les deux cas, la solubilité dans l'eau du
Taxotere peut être amenée à 8 mmol/1 (6,5 g/1) dans une solution aqueuse à 48 mmol/1 du composé n° 3. On obtient ainsi une augmentation importante de la solubilité du Taxotere, celle-ci étant de l'ordre de 0,004 g/1 en l'absence de cyclodextrine.
Exemple 7 : Encapsulation du Taxotere dans le composé n° 4.
On suit le même mode opératoire que dans l'exemple 5 pour encapsuler le Taxotere dans le composé n° 4. On obtient également un produit solide de composition parfaitement définie que l'on peut dissoudre dans l'eau. Toutefois, ce produit présente une solubilité dans l'eau légèrement inférieure à celle du complexe d'inclusion obtenu avec le composé n° 3 dans lequel le substituant R2 présente l'anomérie α.
Bien que les exemples se rapportent au Taxotere, il va de soi que l'invention s'applique de la même façon au taxol et à d'autres dérivés du taxol.
En effet, on observe avec le taxol et d'autres dérivés des résultats analogues.

Claims

REVENDICATIONS
1. Procédé de solubilisation dans un milieu aqueux d'un agent antitumoral appartenant à la famille du taxol et de ses dérivés, caractérisé en ce qu'il consiste à combiner cet agent antitumoral avec une cyclodextrine ramifiée de formule :
Figure imgf000017_0001
dans laquelle n est égal à 6, 7 ou 8 et les R1 qui peuvent être identiques ou différents, représentent OH ou SR2 avec R2 représentant un monosaccharide ou un oligosaccharide, à condition qu'au moins l'un des R^ représente SR2, pour former avec celle-ci un complexe d'inclusion soluble dans l'eau.
2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que R2 répond à la formule II lorsque le monosaccharide est le D-glucose ou des résidus D-glucose liés α-(l—>4) ou à la formule III lorsque le monosaccharide est le β-D-glucose ou un oligosaccharide du D-glucose lié α(l->4)
Figure imgf000017_0002
Figure imgf000018_0001
dans lesquelles p est égal à 0 ou est un nombre entier allant de 1 à 5
3. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que tous les
R1 sont identiques et représentent SR2.
4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce qu'un seul Ri représente SR2, les autres R1 représentant OH.
5. Procédé selon l'une - quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que n est égal à 7.
6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que R2 représente un groupe de formule :
Figure imgf000018_0002
Figure imgf000019_0001
7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que l'agent antitumoral est le Taxotere de formule :
Figure imgf000019_0002
dans laquelle R3 représente -COOC(CH3)3 et R4 représente H.
8. Complexe d'inclusion d'une cyclodextrine ramifiée de formule
Figure imgf000020_0001
dans laquelle n et R^ ont les significations données dans la revendication 1 ou 2, avec un agent antitumoral de la famille du taxol et de ses dérivés.
9. Complexe d'inclusion selon la revendication 8, caractérisé en ce que tous les R^ sont identiques et représentent SR2.
10. Complexe d'inclusion selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'un seul R^ représente SR2, les autres R1 représentent OH.
11. Complexe d'inclusion selon l'une quelconque des revendications 8 à 10, caractérisé en ce que n est égal à 7.
12. Complexe d'inclusion selon l'une quelconque des revendications 8 à 11, caractérisé en ce que R2 est un groupe répondant à la formule
(IV)
Figure imgf000020_0002
Figure imgf000021_0001
13. Complexe d'inclusion selon l'une quelconque des revendications 8 à 12, caractérisé en ce que l'agent antitumoral est le Taxotere de formule
Figure imgf000021_0002
dans laquelle R3 représente -COOC-CH3)3 et R4 représent H.
14. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend un complexe d'inclusion d'une cyclodextrine ramifiée selon l'une quelconque des revendications 8 à 13 avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
15. Cyclodextrine ramifiée répondant à la formule :
Figure imgf000022_0001
dans laquelle n est égal à 7 et tous les R1 représentent SR2 avec R représentant un groupe de formule
Figure imgf000022_0002
Figure imgf000023_0001
16. Cyclodextrine ramifiée répondant à la
Figure imgf000023_0002
à la formule
Figure imgf000023_0003
Figure imgf000024_0001
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