WO1992018488A1 - Nouveau derive d'oxazinone - Google Patents

Description

明細書

新規なォキサ ジノ ン誘導体

[技術分野〕

本発明 は抗炎症作用、 好中球浸潤抑制作用 ま はセ リ ン ブ 口 テアーゼ阻害作用 を 有す る新規なォキサ ジノ ン誘導体に関 す る も の であ り、 医薬の分野で利用 さ れる。

[背景技術〕

炎症の基本的病態を 特徴づけ る免疫細胞、 特 に好中球の血 液中か ら組織への浸潤は、 それ にひき つづ く 血液成分の漏出 に よ る浮腫の形成、 さ ら に は組織の破壊を 伴っ た炎症症状の 進行に深 く 闋与 し てい る。 こ の よ う な炎症症状の進行に免疫 異常が関わっ てい る と 思われる疾患と して、 慢性闋節 リ ウ マ チ、 慢性気道感染症に基づ く 気管支炎、 成人呼吸窮迫症候群、 及び I I型喘息 と し て分類さ れる細気管支閉塞型喘息な どの呼 吸器系の疾患、 さ ら に は腸疾患の一つ であ る ク ー ロ ン病や皮 膚病の一つで あ る乾癬な どの非特異性炎症疾患等が挙げられ る。

好中球の浸潤と 浮腫形成、 組織破壊を伴 う 炎症症状の誘起 と の間の因果関係 にお いて は、 好中球の産生す る各種炎症性 サ イ ト 力 イ ン、 ケ ミ カ リレメ デイ エ一タ ー類 に加 えて、 プロ テ ァ一ゼが重要な役割を 果た し て いる と 考え ら れて い る。 プロ テ アーゼ は高等動物の肺、 軟骨、 血管壁、 皮膚等の生体内結 合組織の間質 を構成す る線維蛋 白質で あ る エ ラ ス チ ン及びコ ラ ーゲン を分解す る酵素で あ り、 さ ら に は細胞障害作用 を有 している。 なかでも、 エラ スチンを分解する プロ テアーゼで あるエ ラ ス タ一ゼは、 特に重要な役割を果 している と考え ら れている。 したがって、 エ ラス ターゼによ る組織破壊及び劣 化、 並びに細胞障害に起因する上記疾患、 さ ら には膊炎、 腎 炎、 動脈硬化等の多臓器の疾患及び敗血症等の各種疾患のた め の予防及び治療剤と して、 エ ラ ス タ ーゼ阻害剤が有効であ る と考え られる に到っ ている.

既に、 エラ スタ ーゼ阻害剤等のセ リ ンプロテアーゼ阻害剤 と して、 ペプチ ド性ま たは非ペプチ ド性のい く つかの化合物 が報告さ れている。 非ペプチ ド性阻害剤は、 例えば下記の文 献で報告さ れている： ジャ ーナル · ォブ ' ザ ' バイ オケ ミ ス V — (Journal of the Biochemistry) 2 5 7卷、 5 0 8 5 〜 5 0 9 1 頁 （ 1 9 8 2年） ； ジャーナル ' ォブ ' ザ ' メ デ ィ シナルケ ミ ス ト リ ー (Journal of the Medicinal Chemist ry) 3 0 卷、 1 0 1 7 〜 ： 1 0 2 3 頁 （ 1 9 8 7 年） ； 同 3 1 卷、 1 0 5 2〜 1 0 6 1 頁 （ 1 9 8 8 年） ； 同 3 3 巻、 4 6 4 ~ 4 7 9 頁 （ 1 9 9 0年） ； 特開平 1 一 3 0 8 2 2 7 号公 報、 再公表公報 W 0 8 8ノ 9 7 9 0 号公報； E P 0 3 3 7 5 4 9号公報等.

一方、 炎症局所においては、 プロテアーゼと共に内在性の プロテアーゼ阻害物質も多量に存在している。 こ の事実に基 づけば、 炎症の発症及び進行を予防し、 或は抑制するため に は、 プロ テアーゼ阻害活性のみでは不十分であ る と考え られ る， 例えば、 慢性闋節 リ ュ ウマ チにお ける 口 ウ ワー （Lower) らの仮説 [ジャーナル ' ォ ブ ' リ ューマ ト ール （ Journa 1 of Rheumatol) 1 4 卷、 4 9 頁 （ 1 9 8 7 年） 〕 が示す よ う に、 活性化さ れた好中球がひ と たび軟骨等 に浸潤す れば、 こ の好 中球は プロ テ アーゼ阻害剤の作用 を う ける こ と な し に、 軟骨 等の組織破壊を惹起す る と 考え ら れる。

したがっ て、 好中球機能 に対 して抑制的 に作用 す る効果的 な抗炎症剤と して、 好中球の炎症部位への定着 お よ び遊走に よ る浸潤 を 阻止 し、 更 に浸潤 し た好中球の エ ラ ス タ ーゼ に よ る 組織破壊を も 阻害す る薬剤が望ま れて い る。

(発明の開示 ]

本発明 は上記事情に鑑みてな さ れた も ので、 その 目 的は、 広 く 炎症発症の各過程 に作用 し、 組織破壊 を抑制す る作用 を も っ た薬剤を 開発する こ と であ る。

発明者等は、 上記 目 的を 達成する た め鋭意研究を 重ねた結 果、 セ リ ン プロ テ アーゼの 中で も特に エ ラ ス タ ーゼ に対 し て 優れた阻害作用 を 有 し、 かつ細菌由来の化学誘引物質に対す る ヒ ト 末梢血好中球の走化性を 抑制す る と 同時 に、 動物炎症 モ デルに おいて好中球浸潤抑制活性を も合わせも つ新規なォ キ サジノ ン誘導体 を見 い出 し、 本発明 を 完成す る に到っ た。

即ち、 本発明の第一の側面は、 下記一般式 〔 1 ) で示 さ れ る 新規なォキサジ ノ ン誘導体又は薬学的に許容 さ れる それ ら の酸付加塩で あ る。

A- X (CH₂)i- Y Ζ·

ただ し、 式中の R ¹〜 R ⁴、 R、 A、 X、 Yお よ び Z はそれ ぞれ次の意味を有する。

< Rウ：

水素原子、 低級アルキル基又は低級ァ シル基；

< R, R ²>：

同一又は異なっ て、 それぞれ水素原子、 低級アルキル 基又は低級アルキルチオ低級アルキル基で あ る。 又は R及び R ²が一緒になつ てアルキル鎖から なる環を形成 しても よ い； < R ³>:

水素原子、 フ ッ 素で置換 さ れても よ い低級アルキル基、 低級アルコ キシ基又はハ ロ ゲン原子；

< R⁴>:

水素原子、 低級アルキル基、 水酸基、 ハ ロ ゲン原子、 低級アルコ キシ基、 低級アルコ キシカ ルボニル基、 カルボキ シル基、 低級アルキルチオ基、 ニ ト ロ基、 低級ァ シ ロ キシ基 又は一 N R 5R ⁶ ( R ⁵及び R ⁶は同一又は異な つ て水素原子、 低級アルキル基又は低級ァ シル基であ るか、 又は隣接す る窒 素原子と ー鍺にな っ て置換基を 有 して も よ いへテ ロ環を形成 し ても よ い） ；

< A >： .

(C¾)_r— W-(CH₂)_n

又は

で ある。 た だ し、

' Wは単結合、 一 0—、 一 S—、 一 C H - C H — 又は 一 N R ⁹— （ R ⁹は水素原子、 低級アルキル基又は低 級ァ シル基） であ る ；

• U は一 C H—又は窒素原子で あ る ；

• Vリま ー 0—、 一 S —、 一 C O—、一 C H R io一

( R ¹⁰は水素原子、 低級アルキル基又は低級ァ シル , 基） 又は一 N R ¹¹— ( R ¹¹は水素原子、 低級ア ルキ ル基又は低級ァ シ ル基） であ る。

こ こ で、 U が窒素原子の と き は、 V 1は一 C 0—、 一 C H R io— （ R ¹⁰は前記と 同 じ ） 又は一 N R ii— ( R ¹¹は前記 に同 じ ） であ る ；

- V 2は = C R ¹²— （ R ¹²は水素原子、 低級アルキル基 又は低級ァ シ ル基） 又 は = N—で あ る ； • T は - C H—又は - N—であ る ；

• R⁷及び R ^aは同一又は異なっ て、 それぞれ水素原子、 フ ッ 素で置換 さ れても よ い低級アルキル基、 低級ァ シル基、 ハ ロ ゲン原子、 水酸基、 低級アル コ キシ基、 低級ァシ ロ キシ基、 力ルポキ シル基、 又は

- N R ¹³ R ¹⁴ ( R ¹³及び R "は同一又は異なっ て、 それぞれ水素原子、 低級アルキル基又は低級ァ シル 基を意味する ） で ある ；

• m、 nは独立 して 0 乃至 2 の整数を意味する （ただ し、 m + n ≤ 2 ) ；

- D は 2個以下の置換基を有し ても よ く、 ま た複数の ヘテ ロ原子を 含んでも よ い 5 乃至 7員の芳香環又は 脂環であ る。

<X >：

単結合、一 0—、一 S —、一 C O—又は一 N R ¹⁵—

( R ⁱ⁵は水素原子、 低級アルキル基又は低級ァシル基 であ る） ；

< Y >：

単結合、一 0—、一 C H - C H—又は一 N R "一 ( R 16 ' は水素原子、 低級アルキル基又は低級ァ シル基であ る ）

< Z >：

一 C H ₂—又は一 C O— （但 し、 Z がー C H ₂—の場合 は Yは単結合である ） ；

< 1 >： . 0 乃至 4 の整数 ま た、 本発明の他の側面 は、 上記ォ キサ ジノ ン誘導体 〖 I 〕 を 有効成分と して含有する 抗炎症剤、 及び好中球浸潤抑制剤 並びにセ リ ン プロ テア一ゼ阻害剤であ る。 以下、 本発明の詳細 を説明す る。

こ の明細書の記載に おいて言及 さ れる用語の定義及び具体 例は、 以下 に説明 する通 り であ る。

「低級アルキル基」 と は、 1 乃至 5 個の炭素原子 を有す る 直鎖又は分枝鎖状のアルキル基 を意味する。 そ の具体例 と し て、 例え ば、 メ チル基、 ェ チル基、 プ 口 ピル基、 イ ソ プロ ピ ル基、 ブチル基、 イ ソ ブチル基、 s e c —ブチル基、 t e r t 一ブチル基、 ペ ンチル基、 イ ソ ペン チル基等が挙げら る。

Γ低級アルキル チオ低級アルキル基」 と は、 1 乃至 5 個の 炭素原子 を有す る 直鎖又は分枝鎖状の低級アル キル基を 構成 単位と す る アルキルチオア ルキル基を 意味する。 そ の具体例 と して は、 例え ば、 メ チルチオ メ チル基、 メ チルチオェ チル 基、 ェチルチオメ チル基、 ェチルチオェチル基、 1 一 （ェチ ルチオ） ェチル基、 イ ソ プ ロ ピルチオ メ チル基等が挙げ ら れ る。

Γ R と R ²が一緒に な つ て アルキル鎖か ら な る環」 と は、 シ ク ロ プロ ノ ン環、 シ ク ロ ブ タ ン環、 シ ク ロ ペン タ ン環、 シ ク 口 へキサ ン環等で ある。

「ハ ロ ゲン原子」 と は、 フ ッ 素、 塩素、 臭素、 ヨ ウ 素であ る，

Γ低級アルコ キ シ基 j と は、 1 乃至 5 個の炭素原子を有す る 直鎖又は分枝鎖状のアルキル鎖で水素を 置換さ れた水酸基 を意味する， その具体例と して は、 例えば、 メ ト キ シ基、 ェ ト キシ基、 プロポキシ基、 イ ソ プロ ポキシ基、 ブ ト キシ基、 イ ソ ブ ト キシ基、 s e c — ブ ト キシ基、 ペンチルォキシ基等 が挙げら れる。

Γ低級アルコ キ シ力ルポニル基 J と して は、 例え ば、 メ ト キシカルポニル基、 エ ト キ シカルポニル基、 プロ ポキシカル ボニル基、 ィ ソ プロポキシ力ルボニル基、 ブ ト キシ カルポ二 ル基、 s e c — ブ ト キシカ ルポニル基、 t e r t — ブ ト キシ カ ルボニル基等が挙げられる。

「低級ァシル基 J と は、 1 乃至 5 個の炭素原子を有する直 鎖又は分枝鎖状の ァ シル基を意味する。 その具体例と しては、 例えば、 ホル ミ ル基、 ァセ チル基、 プロ ピ オ二ル基、 ブチ リ ル基、 イ ソ プチ リ ル基、 ノ レ リ ル基、 イ ソ ノ レ リ ル基等が挙 げられる。

Γ低級ァ シ ロ キ シ基」 と は、 上記で定義 した 「低級ァ シル 基」 で水素を置換された水酸基 を意味する。 その具体例と し て、 例え ば、 ァセ ト キシ基、 ェチルカ ルポ二ロ キシ基、 プ口 ピルカルボ二 ロ キ シ基、 ィ ソ プ ロ ピルカルボ二 ロ キ シ基、 ブ チルカルボ二 ロ キ シ基、 イ ソ ブチルカ ルボ二ロ キ シ基、 s e c ー ブチルカルポ二 ロ キシ基、 ィ ソ ペンチルカ ルポ二 ロ キシ 基等が挙げら れる。

「低級アルキルチオ基」 と は、 1 乃至 5 個の炭素原子 を有 す る 直鎖又は分枝鎖状のア ルキル鎖で水素 を置換 さ れた チォ 一ル基を 意味す る。 その具体例 と して、 例えば、 メ チルチオ 基、 ェチルチオ基、 プロ ピルチオ基、 イ ソ プロ ピルチオ基、 プチルチオ基、 t e r t —プチルチオ基、 ペン チルチオ基、 ィ ソ ペン チルチオ基等が挙げら れる。

D に お け る Γ 2 個以下の置換基を有 し て も よ く、 ま た複数 のへテ ロ原子 を含んで も よ い 5 乃至 7 員の芳香環又は脂環」 の具体例 と し て は、 例えば次の も のが挙げ ら れる。

た だ し、 R ^{1 7}及び R ^{1 8}は同一又 は異な っ て、 それぞ れ水素原子、 フ ッ 素で置換さ れても よ い低級アルキ ル基、 低級ァ シル基、 ハ ロ ゲン原子、 水酸基、 低級 ア ル コ キ シ基、 低級 ァ シ ロ キシ基、 カルボキ シル基 又は一 N R ^{1 9} R ^{2 0} ( R ^{1 9}及び R ^{2 0}は 同一又は異な つ て、 それぞれ水素原子、 低級ア ルキル基又は低級ァ シル基 を 意味す る） であ る。 本発明 に よれば、 一般式 [ I 〕 で示 される新規なォキサジ ノ ン誘導体は、 例えば下記の方法に よ り 製造す る こ と ができ る。 しか し、 目 的化合物 [ 1 〕 を製造する方 は こ れに限定 さ れるも のではな い。

ただ し、 下記反応式において、 A、 X、 Y、 Z、 R、 R R ²、 R ³、 R ⁴及び 1 は前記 と 同 じ意味を表 し、 ま た L ¹お よ び L ²はそれぞれ次の も の を意昧する。

- L i： 水素原子又はペプチ ド合成で通常用い られる 力 ルポキ シル保護基、 例えば、 ェチル基、 ベン ジル基等

• L 2： ペプチ ド合成において通常用い られる ア ミ ノ 保 護基、 例え ば、 ベ ンジルォキシ カ ルボ二ル基、 t e r t — ブ ト キシカ ルボ二ル基等

- -

Zが- CO"の場合

(e)

Z^*-CH厂の （この齢 Yは単結合を表わす）

(H)

こ こ に示 し た反応 （ a ) 乃至 （ e ) 及び （ g ) の各工程は、 いずれも ぺプチ ド合成 にお ける ぺプチ ド結合生成反応 と し て 公知の方法 を 適宜選択 し て 実施す る こ と がで き る （例 え ば、 「ペプチ ド合成の基礎と 実験 j 泉屋信夫等著、 丸善 （株） 出 版） 。 ま た反応 （ f ) 及び （ h ) は、 公知の還元的アルキル 化反応 を 用 いて実施さ れる。

以下、 上記反応式における各工程を、 順を追って詳述する。

( 1 ) Z が— C O—の場合；

反応 （ a ) においては、 ィ匕合物 （ A ) 又は （ A ' ) を、 必 要 に応 じ カ ルボキ シル基を 保護 し た ア ミ ノ 酸誘導体 （ B ) と 縮合さ せて化合物 （ C ) を 得る。 こ の反応 にお ける好ま し い 縮合方法 と し て は、 例えば次の よ う な方法 を挙げる こ と がで き る。

ま ず、 ィヒ合物 （ A ) と ク ロ 口 蟻酸イ ソ ブチルな どの炭酸乇 ノ アルキルエス テル と を、 不活性有機溶媒中 に お いて、 ト リ ェ チルァ ミ ン、 N—メ チルモルホ リ ン な どの三級ァ ミ ンの存 在下に反応さ せ混合酸無水物を 得る。 次い で、 こ の混合酸無 水物を単離す る こ と な く、 ア ミ ノ 酸誘導体 （ B ) と 縮合 さ せ る。. あ る レヽ は、 ィ匕合物 （ A ) と N—ヒ ド ロ キシ ス ク シ ン イ ミ ド と を、 不活性有機溶媒中 で、 水溶性カルポジ イ ミ ド塩酸塩 ( 1 ー ェ チル ー 3 — （ 3 —ジ メ チルァ ミ ノ プロ ピル） カ ルボ ジ イ ミ ド塩酸塩） 、 N， N ' — ジ シ ク ロ へ キシルカ ルポジ ィ ミ ドな どの脱水縮合剤の存在下で反応 さ せて N—ヒ ド ロ キ シ ス ク シ ン イ ミ ドエ ス テリレと する。 その後、 こ のエス テル と ィ匕 合物 （ B ) と を、 水一 アセ ト ン な どの よ う な混合溶媒中 に お いて炭酸ナ ト リ ゥ ムな どの塩基の存在下で反応させ、 化合物 ( C ) を得る。

一方、 化合物 （ A， ） を用い る場合には、 1 , 4一ジォキ サン、 テ ト ラ ヒ ド ロ フ ラ ンな どの適当 な溶媒中 において、 ト リ エチルァ ミ ンな どの三級ァ ミ ンの存在下 に、 _ 2 0 °Cか ら 室温で、 化合物 （ A ' ) を ホス ゲン、 ト リ ク ロ ロ メ チル ク ロ ロホルメ ー ト、 力ルポ二ルジィ ミ ダ ゾールな ど と 反応させ、 次いで化合物 （ B ) と 反応させる こ と に よ り 化合物 （ C ) を 得る， なお、 化合物 （ C ) は、 ィヒ合物 （ B ) の L iがカルポキ シル保護基であ る場合には、 不活性有機溶媒中で好適な アデ ィ ティ ブ （例えば 1 ー ヒ ド ロ キ シ ト リ ァ ゾール） の存在又は 非存在下に、 N, N， ージ シク ロ へキシルカルポジイ ミ ドな どを用いた縮合反応に よ っ ても 合成で き る。

反応 （ b ) において、 L 1がカルボキシル保護基であ る場合 は、 ま ず常法に よ り 化合物 （ C ) のカ ルボキシル保護基を除 去 して遊離カルボキシル基 と す る。 次いで、 こ の遊離力ルポ キ シ ル基を 有す る 化合物 と ァ ミ ノ 化合物 （ D ) と を、 反応 ( a ) と 同様に し て縮合さ せる こ と に よ リ イヒ合物 （ E ) を得 る，

更に、 化合物 （ E ) は反応 （ c ) 及び （ d ) を経由す る こ と に よ っ ても合成する こ と がで き る。 即ち、 ま ず反応 （ c ) に示す よ う に、 遊離ア ミ ノ 基を持つ化合物 （ D ) と 遊離カ ル ボキシル基を有す る ア ミ ノ 酸誘導体 （ F ) と か ら、 反応 （ a ) と 同様の縮合反応に よ り 化合物 （ G ) を合成す る。 続いて、 反応 （ d ) に従い、 化合物 （ G ) のァ ミ ノ 保護基 L ²を常法-に よ り 除去 し て得 た遊離ア ミ ノ 基 を 有す る 化合物 と、 ィヒ合物 ( A ) のカルボキ シル基を 反応 （ a ) と 同様に し て活性化 し た化合物 と の間で縮合反応 を行 う こ と に よ り 化合物 （ E ) を 得る。 ま た、 反応 （ d ) に おいて化合物 （ Α ' ) を 用 い る場 合 にも、 反応 （ a ) に おい て記 し た と 同様 に し てホ ス ゲン、 ト リ ク ロ ロ メ チル ク ロ 口 ホルメ ー ト、 カ ルボニルジイ ミ ダ ゾールな どを用 い る こ と に よ り 目 的と する 化合物 （ E ) を得 る こ と がで き る。

反応 （ e ) に お いて、 上記の如 く し て得 ら れた化合物 （ E ) を、 不活性有機溶媒中 にお いて、 水溶性カ ルポジイ ミ ド塩酸 塩、 N , N ' ー ジ シ ク ロ へ キシルカルポジ イ ミ ドな どの縮合 剤 を用 いて脱水縮合反応に よ る環化を 行う。 こ れに よ り、 目 的化合物であ る式 [ I ' 〕 で示 さ れる 本発明化合物 を得る こ と がで き る。

上記で は、 ベン ゾォ キサ ジノ ン環への閉環反応を 最終ス テ ッ プ （反応 （ e ) の段階） で行っ た力 化合物 （ G ) を 反応

( e ) と 同様の条件下で予め閉環反応 に付 し、 ベン ゾォキサ ジ ノ ン体 （ N ) と して おいても よ い。 こ の場合、 ベン ゾォキ サ ジノ ン体 （ N ) を、 反応 （ d ) で述べた方法 に よ り 化合物

( A ) ま た は （ Α ' ) と 反応さ せ る こ と に よ っ て最終 目 的化 合物 [ I ' 〕 が得 ら れる。

( 2 ) Ζ がー C Η ₂ — の場合；

反応 （ f ) に お いて は、 アルデヒ ド （ H ) と ア ミ ノ 酸誘 導体 （ B ) と を用 いて還元的ア ルキル化反応 を 行い、 化合物 ( J ) を得る， こ の反応に おけ る好ま し い還元的アルキル化 反応と し ては、 例えば次の よ う な方法を挙げる こ と がで き る · 即ち、 ま ず化合物 （ H ) と 化合物 （ B ) と を水、 メ タ ノ ール、 1， 4 -ジォキサン等の単独又は混合溶媒に溶か し、 弱酸性条 件下、 好ま し く は p H 5〜 7 に おいて、 一 3 0 'C〜室温、 好 ま し く は O 'C〜室温で反応 させる。 続いて、 こ の反応で生 じ たイ ミ ン を、 プラ チナ触媒存在下での接触還元、 あ る い は水 素化ホ ウ素ナ ト リ ゥ ム、 水素化シァノ ホ ウ 素ナ ト リ ウ ム等の 還元剤を用 いて還元する こ と に よ り 化合物 （ J ) を得る。

次に、 前記反応 （ b ) と全 く 同様に して、 L iがカルボキシ ル基保護基であ る場合には、 化合物 （ J ) のカ ルボキシル保 護基 L iを公知の方法に よ り 除去 し、 更に ア ミ ノ 化合物 （ D ) と縮合させる こ と に よ り 化合物 （ K ) を得る。

更に、 化合物 （ K ) は反応 （ g ) 及び （ h ) を経由 しても 合成する こ と がで き る。 即ち、 ま ず反応 （ g ) に示す よ う に、 遊離カルボキシル基を有す る ア ミ ノ 酸誘導体 （ F ) と ァ ミ ノ ィ匕合物 （ L ) と を、 前記反応 （ a ) と 同様 に し て縮合させて 化合物 （ M) を得る。 続いて、 反応 （ h ) に従 っ て、 化合物 ( M) のァ ミ ノ 保護基 L ²を公知の方法に よ り 除去 して得 られ る遊離ア ミ ノ 基を有す る化合物 を、 前記の反応 （ f ) の場合 と全 く 同様に して アルデヒ ド （ H ) と 還元的アルキル化反応 を行な う， 得 ら れた化合物の L ¹がカルボキシ保護基であ る場 合には、 カルボキシル保護基 L 1を公知の方法を用いて除去す る こ と に よ リ 化合物 （ K ) を得る。 な お化合物 （ M ) は、 化 合物 （ L ) の L 1がカルボ'キシル保護基である場合に は、 不活 性有機溶媒中で好適な アディ テ ィ ブ （例え ば 1 ー ヒ ド ロ キ シ ト リ ァ ゾー ル、 N—ヒ ド ロ キシ ー 5 —ノ ルポルネ ン一 2， 3 ー ジカ ルボン酸イ ミ ド） の添加又は非添加の条件下で、 N， N ' ー ジ シ ク ロ へキ シルカ ルポ ジイ ミ ドな どを 縮合剤と して 用 い縮合反応する こ と に よ り 合成する こ と がで き る。

上記の ご と く し て 得 ら れ たィヒ合物 （ K ) を、 前記の 反応 ( e ) と 全 く 同様 に し て脱水縮合反応 に付する こ と に よ り、 目 的化合物であ る 式 〔 1 " 〕 で示さ れる本発明 の化合物 を得 る こ と がで き る。

上記の各反応に おいて使用 さ れる不活性有機溶媒 と し て は、 例えば、 N, N— ジメ チルホルム ア ミ ド、 テ ト ラ ヒ ド ロ フ ラ ン、 1 , 4 - ジォ キサ ン、 1 , 2 —ジ メ ト キシ ェ タ ン、 塩化 メ チ レ ン、 酢酸ェ チルな ど を適宜選択 して使用 す る こ と がで き る。

反応終了後、 目 的化合物 を反応混合物中から単離、 精製す る には、 通常当該分野 にお いて公知の手段、 例え ば溶媒抽出、 カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー、 再結晶化等を 適宜選択 し て用 い る こ と に よ り 行う こ と がで き る。

'ま た、 出発原料 と し て使用 さ れる 式 （ A ) 、 ( A ' ) , ( Β ) 、 （ D ) 、 （ F ) 、 （ H ) 及び （ L ) の化合物は、 い ずれも それ 自 体公知物質と し て入手可能力、、 又は公知の前駆 物質よ り 既知の方法を 用 い て容易 に誘導、 合成す る こ と がで き る。

なお、 一般式 〔 I 〕 で示 さ れ る最終 目 的物を 合成す る に際 し、 必要に応じて適切な段階で保護基を導入 し、 適切な段階 において保護基を除去 しても良い，

上記方法によ り 製造される本発明の一般式 [ 1 〕 で示さ れ る ォキサジノ ン誘導体は、 薬理学的に許容される塩類を生成 する こ と ができ る。 こ れら の塩類と し ては、 例え ば、 塩酸、 硫酸、 燐酸、 臭化水素酸な どの無機酸との酸付加塩、 酒石酸、 マ レイ ン酸、 フマル酸、 コハク酸、 スルホ ン酸な どの有機酸 と の酸付加塩等が挙げられ、 こ れ らの化合物はいずれも抗炎 症剤又は好中球浸潤抑制剤若し く はセ リ ン プロ テア ーゼ阻害 剤と して有用である。

また、 本発明の一般式 〖 I 〕 で示さ れる ォキサジノ ン誘導 体においては、 種々の異性体が存在し得る， 例えば、 幾何異 性体と してのシス体及びト ラ ンス体が存在し得る。 ま た、 不 斉炭素原子が存在する場合は、 これら に基づく 立体異性体と しての鏡像異性体、 ジァス テ レ オマーが存在し得る。 し たが つ て本発明の範囲には、 こ れらすベての異性体及びそれ らの 混合物が包含される。

—般式 〔 I 〕 で示さ れる本発明のォキサジノ ン誘導体又は その塩類は、 医薬製剤の有効成分と し て用 いる こ と がで き る。 こ のォキサジノ ン誘導体又はその塩類を含有する 医薬製剤は、 例えば、 免疫異常によ る炎症性疾患である慢性関節 リ ウ マチ、 慢性気道感染症に基づく 気管支炎、 成人呼吸窮迫症候群、 及 び I I 型喘息と し て分類さ れる細気管支閉塞型喘息等の呼吸 器系の疾患、 腸疾患の一つ クー ロ ン病や皮膚病の一つである 乾癬等の非特異性炎症性疾患、 そのほ かに もエ ラ ス タ 一ゼに よ る組織破壊並びに劣化及び細胞障害 に起因す る脖炎、 腎炎、 動脈硬化及び敗血症等の疾患の予防及 び治療剤 と し て有用で あ る。

本発明の一般式 [ I ] で示さ れる ォ キサ ジノ ン誘導体又は その塩類を有効成分と して含有す る 医薬製剤は、 経口 あ る い は非経口 な どの適当 な投与方法に よ リ 投与する こ と が可能で あ る。 ま た、 本剤の適応症の特性に基づいて、 経気道的な投 与 を行な う こ と も 可能であ る。

例え ば、 経口投与形態と して は、 錠剤、 カ プセ ル剤、 顆粒 剤、 散剤、 液剤な どが挙げ ら れる。 ま た、 非経 口投与形態と し ては、 注射剤、 座剤、 軟膏剤、 液剤な どが挙げら れる。 こ れ らの製剤化に際 して は、 賦形剤、 結合剤、 崩壊剤あ る いは その他添加剤を 当 該分野に おけ る常法 に し たがい、 適宜選択 し て使用する こ と がで き る。 特 に、 経気道的な投与形態 と す る場合に は、 例え ば界面活性剤、 噴射剤を 適宜選択 し て使用 し、 エア ロ ゾルな どの噴射手段に よ リ投与する こ と ができ る。

こ の よ う に して得 ら れた 一般式 [ 1 〕 で示さ れる ォキサジ ノ ン誘導体又はそ の塩類を 有効成分と する 医薬製剤を 患者 に 投与する場合に は、 通常、 成人 1 日 当 り 一般式 〖 I 〕 で示さ れる ォキサジ ノ ン誘導体 1 ~ 1 O O m g の投与量が設定 さ れ る。 し か し なが ら、 その投与量 は、 患者の年齢、 性別、 体重 及び症状の程度、 更に は投与方法に応 じ て適宜増減 さ れる も のであ り、 こ れに 限定 さ れ る も のでは な い。 [実施の最良の形態〕

以下に、 実施例及び試験例を挙げて本発明を更に具体的に 説明するが、 本発明の要旨を越えない限リ、 こ れ ら によ って 限定されるも のではない。

実施例 1

2 - { 1 ( S ) 一 [ ( 9 一フ ルォ レニルメ 卜 キ シカ ルポニル） ァ ミ ノ 〕 一 2 —メ チル プロ ピル } 一 5 — メ チルー 4 H — 3, 1 —べン ゾォキサジン一 4 ーォ ン （化合物 1 ) の合成

a ) 2 - 〔 （ N—べンジルォキシカルボ二ルー L ー ノ リ ル） ァ ミ ノ 〕 一 6 — メ チル安息香酸

2—ア ミ ノ ー 6 —メ チル安息香酸 （ 3 . 1 5 s ) と炭酸ナ ト リ ウ ム （ 2 .4 5 g ) の水溶液 （ 1 8 m l ) 中 に、 ア セ ト ン ( 1 8 m I ) 及び N—べン ジルォキシ カルボ二ルー L ー ノ リ ン N—ヒ ドロ キシス ク シンイ ミ ドエステル （ 8 . 0 2 g ) を 加え、 室温で 5 時間攪拌し た。 1 N塩酸で酸性に した後、 酢 酸ェチルで抽出 した。 有機層を 1 N塩酸、 飽和食塩水で順次 洗净し無水硫酸ナ ト リ ウムで乾燥後、 濃縮 した。 残渣を シ リ 力 ゲルカ ラ ム ク ロマ ト グラ フ ィ ー に よ り 精製し、 3 . 7 1 g の 2 - [ ( N—ベン ジルォキ シカ ルボ二ルー L ー ノ リ ル） ア ミ ノ ] 一 6 —メ チル安息香酸を得た。

b ) 6 —メ チル一 2 — ( L—ノ リ ルァ ミ ノ ） 安息香酸

2 - 〔 （ N—べン ジルォキ シカルボ二ルー L ー ノ リ ル） ァ ミ ノ 〕 一 6 —メ チル安息香酸 （ 1 . 2 1 g ) を、 メ タ ノ ール ( 9 9 m l ) 及び水 （ 1 m l ) に溶解 し、 1 0 °/_o P d — C ( 2 0 0 m g ) を 加え、 水素気流下室温で 3 時間攪拌 し た。 ハ イ フ ロ ー ス ー パ ーセ ルで P d — C を 除去後、 濾液を濃縮 し、 8 3 O m g の 6 —メ チルー 2 — （ L ー ノ リ ルァ ミ ノ ） 安息香 酸 を得た。

c ) 2 — { ( N - ( 9 一フル ォ レニルメ ト キ シ カ ルボニル） 一 L ー ノ リ ル〕 ァ ミ ノ ） 一 6 — メ チル安息香酸

炭酸ナ ト リ ウ ム （ 2 8 4 m g ) と 6 — メ チル ー 2 — ( L - ノ リ ルァ ミ ノ ） 安息香酸 （ 3 3 6 m g ) と を 1, 4 —ジォキ サ ン一水 （ 1 7 m l — 1 2 m l ) に溶力 し、 氷冷下 に、 9 一 フ ルォ レ ニルメ ト キシ カルボニル ク ロ リ ド （ 3 4 5 m g ) の 1, 4 一ジ ォキサン溶液 （ 7 m l ) を滴下 し た。 室温に お いて 3 . 5 時間攪拌後、 反応液を 水中 に注ぎ、 濃塩酸を用 いて 液性を酸性と し た後、 酢酸エデルで抽出 し た。 有機層 を飽和 食塩水で洗浄 し、 無水硫酸マ グネ シ ウ ムで乾燥 し た後、 濃縮 し た。 残渣を シ リ カ ゲルカ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー （溶離液 ： へキサ ン一酢酸ェチルー 酢酸） に よ り 精製 し 2 — { [ N— ( 9 一フ ルォ レニルメ 卜 キ シカ ルポニル） 一 L ー ノ リ ル〕 ァ ミ ノ ） 一 6 —メ チル安息香酸 （ 4 6 0 m g ) を 得た。

d ) 2 - { 1 ( S ) 一 ( ( 9 一フ ルォ レ ニル メ ト キ シ カ ル ボニル） ァ ミ ノ 〕 一 2 —メ チル プロ ピル） 一 5 — メ チ ルー 4 H — 3, 1 — べン ゾォキサジ ン 一 4 一オ ン

2 - { ( N - ( 9 一フル ォ レ ニルメ ト キ シカ ルボニル） 一 L ー ノ リ ル〕 ァ ミ ノ ） 一 6 —メ チル安息香酸 （ 4 0 l m g ) の N， N—ジ メ チルホルム ア ミ ド溶液 （ 5 m 1 ) に、 氷冷下、 N, N ' ー ジ シ ク ロ へキシ ルカ ルポジ イ ミ ド （ 2 6 3 m g ) を加えて 3 時間攪拌し た。 析出 したジ シ ク ロへキシルゥ レ ア を滤去後、 滤液を濃縮 した。 残揸を シ リ カ ゲルカ ラ ム ク ロ マ ト グラ フ ィ ー （溶離液： へキサン一酢酸ェチル） で精製する こ と に よ り、 白色発泡体の 2 — { 1 ( S ) 一 [ ( 9 一フルォ レ ニルメ 卜 キシカルポニル） ァ ミ ノ 〕 一 2 —メ チルプロ ピル } 一 5—メ チルー 4 H— 3， 1 一 べン ゾォキサジ ン一 4一オ ン ( 3 3 7 m g ) を得た （表 1 参照） 。

実施例 2

2 — { 1 ( S ) 一 〔 （ 9 一 フ ルォ レニルメ ト キシカ ルポニル） ァ ミ ノ 〕 一 3 —メ チル ブチル } 一 5 — メ チルー 4 Η— 3， 1 一 べン ゾォキサジ ン一 4一オン (化合物 2 ) の合成

a ) 2 — { [ N— （ 9 —フルォ レニルメ ト キ シカ ルボ二ル） 一 L 一 口 イ シル〕 ァ ミ ノ ） 一 6 — メ チル安息香酸 アルゴンガス雰囲気下に おいて、 水素化ナ ト リ ウ ム （ 6 0 % dispersion in mineral oil) を n —へキサ ンで 3 回洗浄 し た後、 室温にてテ ト ラ ヒ ドロ フ ラ ン （ 5 m l ) 及び 2 —ァ ミ ノ ー 6 — メ チル安息香酸 （ 5 3 m g ) を加え た。 水素ガス の発生がおさ ま る まで攪拌 し た後、 N— （ 9 一フ ルォ レニル メ ト キシカルボニル） 一 L 一 口 イ シン ペン タ フルオ ロ フ ェ ニルエステル （ 2 0 0 m g ) をカ卩え、 室温で 3 時間攪拌 し た， 反応液を I N塩酸中 に注ぎ、 酢酸エデルで抽出 し た。 有機層 を飽和食塩水で洗浄後、 無水硫酸マ グネ シ ウ ムで乾燥 し濃縮 し た， 残渣を シ リ カゲルカ ラム ク ロマ ト グラ フ ィ ー （溶離液 ： へキサン一酢酸ェチルー酢酸） に よ り精製 し、 2 — { [ 一 （ 9 一 フ ルォ レ ニル メ ト キシ カルポニル） 一 L 一 口 イ シル〕 ァ ミ ノ ） 一 6 —メ チル安息香酸 （ 1 8 4 m _g ) を得た。

b ) 2 — { 1 ( S ) 一 [ ( 9 一フルォ レ ニル メ ト キシ カ ル ポニル） ァ ミ ノ 〕 一 3 — メ チル ブチル }' 一 5 — メ チル 一 4 H — 3, 1 —べ ン ゾ才キサ ジン一 4 一オ ン 2 — { ( N - ( 9 一フルォ レ ニルメ ト キ シ カ ルボニル） 一 L 一 口 イ シル〕 ァ ミ ノ ） 一 6 —メ チル安息香酸 （ 1 6 3 m g ) の酢酸ェチル溶液 （ 4 m l ) に、 氷冷下で、 N, N， ー ジ シ ク ロ へキ シルカ ルポジ イ ミ ド （ 6 9 m g ) を加 えてー晚攪拌 し た。 析出 し た ジ シ ク ロ へキシル ウ レ ァ を濾去 し た後、 濾液 を 濃縮 し た。 残渣 を シ リ カ ゲル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー (溶離液： へキサ ン一酢酸ェチル） に よ り 精製 し、 白色発泡 体であ る 2 — { 1 ( S ) 一 [ ( 9 一フ ルォ レニルメ ト キ シカ ルポニル） ァ ミ ノ 〕 一 3 — メ チルブチル } 一 5 — メ チル ー 4 H — 3, 1 — べン ゾォ キサ ジン一 4一オン （ 1 1 0 m g ) を 得た （表 1 参照） 。

実施例 3

2 — { 1 ( S ) 一 〔 （ 9 一 フ ルォ レニルォキシ ァセ チル） ァ ミ ノ 〕 一 2—メ チル プロ ピル） 一 5 —メ チ ' ルー 4 H — 3， 1 一べ ン ゾォ キサ ジ ン一 4 一 才 ン

(化合物 3 ) の合成

a ) ェ チル 9 一フ ルォ レニルォキ シア セ テ ー ト

9 一フルォ レ ノ ール （ 3 . 6 4 g ) 及びブロ モ酢酸ェ チル エ ス テ ル （ 3 m 1 ) の N， N—ジ メ チル ホ リレ ム ア ミ ド溶液 ( 4 0 m l ) 中 に、 水冷下で、 水素化ナ ト リ ウ ム （ 0 . 8 g、 6 0 % dispersion in mineral oil) を 5 分間力 けてカロえ、 次いで 5 0分間攪拌した。 反応液を氷冷 5 % H C 1 中 に注ぎ、 エーテルで抽出 し た。 有機層を飽和食塩水で洗浄し た後、 無 水硫酸マ グネシ ウ ムで乾燥 し、 濃縮し た。 残渣を シ リ カ ゲル フ ラ ッ シ ュカ ラ ム ク ロ マ ト グラ フ ィ ー （溶離液： 塩化メ チ レ ン 一 へキサン） に よ り 精製 し、 ェチル 9 一フ ルォ レニルォ キシアセテー ト （ 2 . 2 8 g ) を得た。

b ) 9 一フルォ レニルォキシ酢酸

ェチル 9 一フルォ レニルォキシアセテー ト （ 2 .2 8 g ) のエタ ノ ール溶液 （ 4 0 m l ) に、 水冷下で、 I N水酸化ナ ト リ ウ ム （ 1 0 m l ) を滴下 し、 室温で 4 時間攪拌 した。 反 応液を濃縮し た後、 水 を加えてエーテルで洗浄 した. 水冷下 において、 1 8 %塩酸を用 いて水層の液性を P H 3 〜 4 と し、 エーテルで抽出 し た。 有機層を無水硫酸マ グネ シ ウ ムで乾燥 し た後に濃縮 し、 9 一フルォ レニルォキシ酢酸 （ 1 . 7 7 g ) を得た。

c ) 2 - { 〔 N— （ 9一フルォ レニルォキシ ァセ チル） 一 L ー ノ リ ル〕 ァ ミ ノ ） 一 6 —メ チル安息香酸

9一フ ルォ レニルォキシ酢酸 （ 3 3 6 m g ) のテ ト ラ ヒ ド 口 フ ラ ン溶液 （ 5 m I ) に、 一 1 5 °C にお いて、 N—メ チル モルホ リ ン （ 1 6 5 ^ 1 ) およ びク ロ 口蟻酸イ ソ ブチル （ 1 8 1 1 ) を順次加えた。 0 .5 時間攪拌 した後、 6 —メ チル 一 2 — （ L ー ノ リ ルァ ミ ノ ） 安息香酸 （ 2 5 0 m g ) と N— メ チル乇ルホ リ ン （ 1 3 5 i l ) と を 含む N, N—ジメ チル ホルムア ミ ド溶液 （ 1 0 m 1 ) を滴下 し、 0 . 5 時間攪拌 し た。 室温で さ ら に 1 7 時間攪拌 し た後、 反応液 を I N塩酸中 に注 ぎ、 酢酸ェチルで抽出 した。 有機層 を 1 N塩酸お よ び飽和食 塩水で順次.洗浄 し た後、 無水硫酸マ グネシ ウ ムで乾燥 し、 濃 縮 し た。 残揸を シ リ カ ゲル カ ラ ム ク ロ マ ト グラ フ ィ ー （溶離 液： へキサ ン一酢酸ェチル ー酢酸） に よ り 精製 し、 2 —

{ [ N — （ 9 一フ ルォ レニルォ キ シァ セ チル） 一 L ーノ リ ル〕 ァ ミ ノ ） 一 6 — メ チル安息香酸 と 9 一フルォ レ ニルォキ シ酢 酸の約 2 : 1 の混合物 （ 3 5 6 m g ) を得た。

d ) 2 - { 1 ( S ) 一 [ ( 9 一フルォ レ ニルォキ シ ァ セ チ ル） ァ ミ ノ 〕 一 2—メ チルプロ ピル） 一 5 — メ チルー 4 H - 3 , 1 一 べン ゾォ キサジ ン一 4一オ ン

上記反応 （ c ) で得た混合物 （ 3 1 1 m g ) の N, N—ジ メ チルホルム ア ミ ド溶液 （ 1 0 m 1 ) に、 氷冷下で、 水溶性 カルポジイ ミ ド塩酸塩 （ 1 3 9 m g ) を加え、 0 °Cで 0 . 5 時 間、 次いで室温で 2 7 時間攪拌 し た。 反応液を 濃縮 し て得 ら れた残渣を シ リ カ ゲルカ ラ ム ク ロ マ ト グラ フ ィ ー （溶離液： 塩化メ チ レ ン一エ ーテル） に よ り 精製 し、 白色粉末状の 2 — { 1 ( S ) 一 ( ( 9 一フルォ レ ニルォ キシ ァセ チル） ァ ミ ノ 〕 一 2 —メ チルプロ ピル） 一 5 —メ チル ー 4 H — 3, 1 —ベ ン ゾォキサジ ン一 4一オ ン （ 2 0 4 m g ) を得た （表 1 参照） 。

実施例 4

2 - [ 1 ( S ) 一 〔 ( N - ( 9 一フルォ レ ニルカ ル ボニル） グ リ シル〕 ァ ミ ノ 〕 一 2 — メ チル プロ ピル〕 一 5 —メ チル ー 4 H — 3， 1 一べ ン ゾォキサジ ン一 4一オ ン （化合物 4 ) の合成 a ) N— （ 9 一フルォ レニルカルボニル） グ リ シ ン メ チ ルエス テル

フルオ レン一 9 一力ルボン酸 （ I . 5 g ) 及びグリ シン メ チルエステル塩酸塩 （ 0 . 9 O g ) の塩化メ チ レン溶液 （ 5 0 m l ) に、 氷冷下で、 ト リ エチルァ ミ ン （ 1 . 2 m I ) お よ び 1 ー ヒ ドロキシ ト リ ア ゾール （ 1 . 3 1 g ) を順次加え、 1 0 分後に水溶性カルポジイ ミ ド塩酸塩 （ 1 . 6 4 _g ) を加えた. O 'Cで 0 . 5 時間攪拌 した後、 室温で 2 0 時間攪拌した， 反応 液を 5 %塩酸、 飽和重そ う 水、 飽和食塩水で順次洗浄し た後、 無水硫酸マ グネシ ウ ムで乾燥し、 濃縮 した。 残渣を シ リ カゲ ルフ ラ ッ シュ カ ラ ム ク ロ マ ト グラ フ ィ ー （溶離液： ク ロ ロホ ルムーメ タ ノ ール） に よ り 精製 し、 N— （ 9 一フルォ レニル 力ルポニル） グリ シン メ チルエステル （ 1 . 8 7 g ) を得た. b ) N— （ 9 一フルォ レ ニルカルポニル） グ リ シ ン

N— （ 9 一フ ルォ レニルカ ルポニル） グ リ シ ン メ チル エステル （ 9 0 0 m g ) のエタ ノ ール溶液 （ 5 5 m l ) に、 永冷下で、 1 N水酸化ナ ト リ ウ ム （ 4. 2 m l ) を滴下 し、 室 温で 1 . 5 時間攪拌 した。 反応液を濃縮 して得た残渣を 0 . 5 N水酸化ナ ト リ ウ ム に溶か し、 エーテルで洗浄 し た。 水冷下 に おいて、 5 %塩酸を 用いて水層の液性を P H 3 〜 4 と し、 生 じた析出物 を濾取し た。 こ の析出物 を水で洗狰 し た後、 ェ タ ノ 一ルーエーテルよ リ 再結晶 して、 白色針状の N— （ 9 一 フ ルォ レニルカルポニル） グ リ シン （ 4 6 3 m g ) を得た。

c ) 2— C [ 〔 N— （ 9 一フ ルォ レニルカルポニル） グリ シル〕 一 L 一ノ^: リ ル〕 ァ ミ ノ 〕 一 6 —メ チル安息香酸 9 一フ ルォ レ ニルォ キシ酢酸のかわ り に N— ( 9 — フ ルォ レ ニルカルポニル） グ リ シ ン （ 1 8 8 in g ) を 用 い、 実施例 3 の （ c ) 場合と 全 く 同様 に し て、 こ れと 6 —メ チルー 2 — ( L —バ リ ル ァ ミ ノ ） 安息香酸 （ 1 2 6 m g )' と の縮合反応 を行う こ と に よ り、 2 — [ ( [ N— （ 9 一フルォ レ ニルカル ボニル） グ リ シル〕 一 L ー ノ リ ル〕 ァ ミ ノ 〕 一 6 — メ チル安 息香酸 （ 8 4 m g ) を 得た。

d ) 2 — [ 1 ( S ) 一 [ [ N — （ 9 一フ ルォ レ ニルカ ルポ ニル） グ リ シル〕 ァ ミ ノ 〕 一 2 — メ チル プロ ピル〕 一 5 —メ チル ー 4 H — 3, 1 — べ ン ゾォキサジ ン一 4一 ォ ン

2 - [ [ [ N— （ 9 一フ ルォ レニルカルボニル） グ リ シル〕 一 L ー ノ リ ル〕 ァ ミ ノ 〕 一 6 —メ チル安息香酸 （ 7 2 m g ) の N, N—ジ メ チルホルム ア ミ ド溶液 （ 3 m 1 ) に、 氷冷下 で、 水溶性カ ルポジイ ミ ド塩酸塩 （ 3 3 m g ) を加え 0 . 5 時 間攪拌 し た。 室温で 1 8 時間攪拌 した後、 反応液を濃縮 し た。 残渣を シ リ カ ゲルカ ラ ム ク ロ マ ト グラ フ ィ ー （溶離液： 塩化 メ チ レ ン一エ ー テル） に よ り 精製 し、 白色粉末状の 2 — [ 1 ( S ) 一 〖 〖 N— （ 9 一フ ルォ レニルカルポ二ル） グ リ シル〕 ァ ミ ノ 〕 一 2 —メ チル プロ ピル〕 一 5 —メ チル ー 4 H — 3， 1 一 べン ゾォキサ ジン一 4 —オ ン （ 6 0 m g ) を得た （表 1 参照） 。

実施例 5

2 - [ 1 ( S ) 一 ( [ N—ァ セ チルー- N — （ 9 ー フ ルォ レ ニル） 一 ^ 一 ァ ラ ニル〕 ァ ミ ノ 〕 一 2 — メ チ ルプロ ピル〕 一 5 —メ チルー 4 H — 3 , 1 —べン ゾ ォキサジ ン一 4 — オン （化合物 5 ) の合成 a ) N — ( 9 一フルォ レニル） 一 β — Ύ ラ ニ ン ェチルェ ステル

9 ー ァ ミ ノ フ ルオ レ ン （ 1 . 2 4 g ) のエ タ ノ ール溶液 ( 2 0 m l ) にアク リ ル酸ェチル （ 1 . 0 m l ) を加え、 8 0 'Cで 5 時間、 更に室温で 3 6 時間攪拌 した。 反応液を濃縮し た後、 残渣を塩化メ チ レン に と か し、 飽和食塩水で洗浄 し た. 有機層 を無水硫酸マ グネシ ウ ムで乾燥 し、 濃縮 し た。 得 られ た残渣を シ リ カ ゲル フ ラ ッ シ ュ カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ 一

(溶難液： 塩化メ チ レ ン一エーテル） で精製 し、 N — （ 9 一 フルォ レニル） — β — ァ ラ ニ ン 工チルエステル （ 1 . 2 5 g ) を得た，

b ) N—ァセ チルー N — （ 9 一フルォ レ ニル） 一 /? ー ァ ラ ニン ェチルエステル

N - ( 9 一フルォ レニル） - β —マ ラ ニ ン ェチルエス テ ル （ 0 . 7 7 g ) の塩化メ チ レン溶液 （ 2 5 m l ) 中 に、 氷冷 下で、 ト リ ェチルァ ミ ン （ 0 . 5 l m l ) 及び塩化ァ セ チル

( 0 . 2 8 m l ) を加え 0 . 5 時間攪拌 した。 更 に室温で 3 時 間攪拌 し た後、 反応液を氷冷 1 N塩酸中 に注ぎ、 塩化メ チ レ ンで抽出 した。 有機層 を飽和重そ う 水お よ び飽和食塩水で洗 浄 した後、 無水硫酸マ グネ シ ウ ムで乾燥し、 濃縮 し た。 残渣 を シ リ カ ゲルカ ラ ムク ロマ ト グラ フ ィ ー （溶離液： ク ロ ロ ホ ルムー メ タ ノ ール） にて精製し、 N—ァセ チルー N — （ 9 一 フルォ レニル） 一 β — 了 ラ ニ ン エデルエステル （ 0 . 8 5 g ) を 得た。

c ) N—ァセ チルー N— （ 9 一フルォ レ ニル） 一 β — 了 ラ 二 ン

Ν - ァセ チル ー Ν — ( 9 — フリレオ レニル）' - β —マ ラ ニ ン ェチルエス テル （ 4 3 5 m g ) のエ タ ノ ー ル溶液 （ 2 5 m l ) に、 氷冷下で、 1 N水酸化ナ ト リ ウ ム （ 1 . 6 m l ) を 滴下 し、 4 . 5 時間攪拌 した。 反応液を濃縮 し、 残渣を水 に と か し、 エ ー テルで洗浄 した。 水層の液性を、 5 %塩酸を 用 い て p H 3 ~ 4 と し、 析出 し た物質 を濾取 し た。 こ の析出物質 を 水冷水で洗浄 し た。 本物質を 酢酸ェ チル ー メ タ ノ ール混液 を 用 いて再結晶 し、 N—ァ セ チルー N — （ 9 一 フ ルォ レ ニル） 一 β —マ ラ ニ ン ( 1 6 8 m g ) を得た。

d ) 2 — [ [ [ N—ァセ チル ー N— （ 9 一フ ルォ レニル） 一 ^ 一 ァ ラ ニル〕 一 L ー ノ リ ル〕 ァ ミ ノ 〕 一 6 — メ チ ル安息香酸

9 — フ ルォ レニルォキシ酢酸のかわ リ に N—ァセ チル ー N 一 （ 9 一 フ ルォ レ ニル） 一 /5 —ァ ラ ニ ン （ 1 4 9 m g ) を用 い、 実施例 3 の （ c ) の場合と 全 く 同様に して、 こ れを 6 — メ チルー 2 — （ L ーノ リ ルァ ミ ノ ） 安息香酸 （ 9 l m g ) と 縮'合反応 さ せ る こ と に よ り、 2 — [ [ [ N—ァ セ チルー N — ( 9 一フ ルォ レニル） 一 ^ —ァ ラ ニル ] — L ー ノ リ ル〕 ア ミ ノ 〕 一 6 —メ チル安息香酸 （ 1 9 2 m g ) を得た。

e ) 2 - ( 1 ( S ) - [ [ N—ァセ チル ー N — （ 9 一 フ ル ォ レ ニル） 一 ^ 一 ァ ラ ニル ] ァ ミ ノ 〕 一 2 — メ チルプ 口 ピル〕 一 5 —メ チルー 4 H — 3， 1 一 べ ン ゾォキサ ジ ン一 4一オン

2— C 〔 [ N—ァセチルー N— （ 9 一フルォ レニル） 一 ーァ ラ ニル ] 一 L ーノ リ ル〕 ァ ミ ノ 〕 一 6 — メ チル安息香 酸 （ 9 1 m g ) を、 実施例 4の （ d ) の場合と 全 く 同様に し て、 水溶性カルポジィ ミ ド塩酸塩を用 いて脱水閉環する こ と に よ り、 白色発泡体の 2 — [ 1 ( S ) 一 [ ί Ν—ァセチルー Ν— （ 9 一フルォ レニル） 一 ー ァ ラ ニル〕 ァ ミ ノ 〕 一 2 — メ チルプロ ピル〕 一 5 —メ チルー 4 Η — 3, 1 —ベ ン ゾォキ サジン一 4一オン （ 6 6 m g ) を得た （表 1 参照） .

実施例 6

2 — { 1 ( S ) 一 [ (フルオ レン一 Δ⁹ '"—ァセ チ ル） ァ ミ ノ 〕 一 2 —メ チルプロ ピル } — 5 —メ チル - H - 3, 1 一べン ゾォキサジ ン一 4一オン （化 合物 6 ) の合成

a ) メ チル フルオ レン一 Δ ⁹·"—アセテー ト

9 一フルォ レ ノ ン （ 2 0 g ) と メ チル （ ト リ フ エ ニル ホスホ ラニ リ デン） アセテー ト （ 6 3 . 1 g ) の ト ルエン懸濁 溶液 （ 4 0 0 m l ) を 1 3 9 時間加熱還流 し た。 反応液を濃 縮 して得られた残渣を シ リ カ ゲルカ ラ ム ク ロ マ ト グラ フ ィ ー 離液： 塩化メ チ レ ン一へキサン） によ り精製 し、 黄色結 晶のメ チル フルオ レ ン一 Δ⁹ ' ー アセ テー ト （ 2 3 . 6 3 g ) を得た。

b ) フルオ レ ン一 Δ ⁹'^α—酢酸

メ チル フルオ レ ン ー厶 ⁹·α—アセテー ト （ 1 1 . 8 g ) の メ タ ノ ール懸濁溶液 （ 6 0 0 m l ) に、 氷冷下で、 I N水酸 ィ匕ナ ト リ ウ ム （ 1 3 0 m l ) を 滴下 し、 室温で 3 日 間攪拌 し た。 反応液を 濃縮 し た後、 水を 加えエーテルで洗净 し た。 氷 冷下に お いて、 濃塩酸 （ abt. 3 5 % ) を用 いる こ と に よ リ 水 層 の液性を P H I と し た。 析出 し た沈澱物 を攄過 し、 水 を用 いて中性にな る ま で洗っ た。 こ の沈澱物を 酢酸ェチル よ リ 再 結晶 し、 フルオ レ ン一 Δ⁹·⁰ ^—酢酸 （ 1 0 . 1 8 g ) を得た。

c ) 2 — { 1 ( S ) 一 [ ( t e r t —ブ ト キ シ カ ルボニル） ァ ミ ノ 〕 一 2—メ チルプロ ピル） 一 5 —メ チルー 4 H 一 3, 1 — べン ゾォ キサ ジ ン一 4一オン

窒素雰囲気下、 一 1 5 °C にお いて、 N— t e r t — ブ ト キ シカルボ二ルー L ーノ リ ン （ 4 6 . 8 g ) のテ ト ラ ヒ ド ロ フ ラ ン溶液 （ 2 5 0 m l ) 中 に、 N—メ チルモルホ リ ン （ 2 3 . 7 m l ) お よ びク ロ ロ ギ酸イ ソ ブチル （ 2 6 . 3 m l ) を順次加 え た。 1 . 5 時間攪拌 した後、 2 —ア ミ ノ ー 6 —メ チル安息香 酸 （ 2 3 . 2 7 g ) と N—メ チルモ ルホ リ ン （ 2 0 . 3 m l ) と を含む N, N—ジメ チルホルムア ミ ド溶液 （ 3 5 0 m 1 ) を 滴下 し、 1 時間攪拌 した。 室温で さ ら に 1. 8 時間攪拌 し た 後、 反応液を 1 0 % ク ェン酸 （ 5 0 0 m 1 ) 中 に注ぎ、 酢酸 ェ チルで抽出 し た。 有機層 を飽和食塩水で洗浄 し た後、 無水 硫''酸マ グネ シ ウ ム で乾燥 し、 濃縮 し た。

上記反応で得た反応混合物の N, N—ジ メ チルホルム ア ミ ド溶液 （ 5 0 0 m 1 ) 中 に、 氷冷下 に おい て、 水溶性カ ルボ ジ イ ミ ド塩酸塩 （ 6 0 g ) を加え、 0 °Cで 2 時間、 次いで室 温で 1 8 時間攪拌 し た。 反応液 を濃縮 して得 ら れた残揸 を シ リ カ ゲルカ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー （溶離液： 塩化メ チ レ ン 一エーテル） に よ り 精製し、 白色粉末状の 2 — { 1 ( S ) — [ ( t e r t —ブ ト キシカ ルボニル） ァ ミ ノ 〕 一 2 — メ チル プロ ピル） 一 5 — メ チルー 4 H — 3， 1 — ベン ゾォキサジン 一 4一オン （ 2 0 .5 5 g ) を得た。

d ) 2 — { 1 ( S ) 一 [ (フ ルオ レ ン一 Δ⁹· —ァセ チル） ァ ミ ノ ] 一 2 —メ チルプロ ピル） 一 5 — メ チルー 4 H 一 3, 1 — べン ゾォキサジン一 4一オン

2 — { 1 ( S ) 一 ( ( t e r t —ブ ト キ シカルボニル） ァ ミ ノ 〕 一 2—メ チルプロ ピル） 一 5 —メ チルー 4 H — 3, 1 一べン ゾォキサジン一 4一オン （ 9 . 3 l g ) の 1, 4 ージォ キサン溶液 （ 5 0 m 1 ) に、 0 °Cで攪拌し なが ら、 4 N塩酸 一 1， 4一ジォキサン溶液 （ 6 6 . 7 m l ) を滴下し、 O 'Cで 0 .7 5 時間攪拌後した。 反応液を濃縮し、 残渣にフルオ レン - Δ⁹·«—酢酸 （ 6 .2 5 g ) を加え、 N, N—ジメ チルホル ムア ミ ド （ 1 5 0 m 1 ) で溶解 した。 その後、 氷冷下におい て、 N—メ チルモルホ リ ン （ 3 . 3 m l ) 、 1 —ヒ ド ロ キシべ ン ゾ ト リ ア ゾ一ル （ 4 . 7 2 _g ) 及び水溶性カルボジイ ミ ド塩 酸塩 （ 5 . 9 1 g ) を順次加えた。 室温に戻 して 1 8 時間攪拌 し た後、 反応液を濃縮 し、 残渣を シ リ カ ゲルフ ラ ッ シ ュ カ ラ ム ク ロ マ ト グラ フ ィ ー （溶離液： 塩化メ チ レン一エーテル） に よ り 精製 し た。 さ ら に、 ク ロ 口 ホルム一酢酸 よ り 再結晶 し、 融点 2 2 3 . 5 — 2 2 4. 3 'Cの 2 — { 1 ( S ) 一 ( (フ ルォ レ ン一 Δ⁹'«—ァセ チル） ァ ミ ノ 〕 一 2 — メ チルプロ ピル） 一 5 —メ チルー 4 Η — 3, 1 — べ ン ゾォ キサ ジン一 4 一オ ン ( 5 . 7 6 g ) を得た （表 1 参照） 。 実施例 7

2 — 〖 （ 9 一フルォ レ ニルァ セ チル） ア ミ ノ メ チル〕 一 5 —メ チル ー 4 H — 3, 1 一べ ン ゾォキサジ ン一 4一オン ·

a ) 2 — ί ( t e r t —ブ ト キ シカ ルボニル） ア ミ ノ メ チ ル〕 一 5 —メ チルー 4 H — 3, 1 — べン ゾォキサジ ン 一 4一オン

窒素雰囲気下、 一 1 5 °C にお いて、 N— t e r t — ブ ト キ シカルボニル グ リ シン （ 3 . 2 6 g ) のテ ト ラ ヒ ド ロ フ ラ ン溶 液 （ 2 5 m l ) 中 に、 N—メ チルモルホ リ ン （ 2 . 0 3 m l ) お よ びク ロ ロ ギ酸イ ソ ブチル （ 2 . 2 5 m l ) を 順次加えた。 0 .5 時間攪拌後、 2 —ア ミ ノ ー 6 —メ チル安息香酸 （ 2 . 0 g ) と N—メ チルモルホ リ ン （ 1 . 7 4 m l ) と を含む N, N ー ジメ チルホルムア ミ ド溶液 （ 3 5 m l ) を滴下 し、 0 . 5 時 間攪拌 し た。 室温で さ ら に 3 時間攪拌後、 反応液を 1 0 % ク ェ ン酸中 に注ぎ、 酢酸ェチルで抽出 し た。 有機層 を 飽和食塩 水で洗浄後、 無水硫酸ナ ト リ ウ ムで乾燥 し濃縮 し た。

上記反応で得た反応混合物 （ 6 . 7 3 g ) の N， N—ジ メ チ ルホルム ア ミ ド溶液 （ 6 0 m 1 ) 中 に、 氷冷下で、 水溶性力 ルポジイ ミ ド塩酸塩 （ 4 . 1 8 g ) を加え、 0 °Cで 2 時間攪拌 し た。 反応液を濃縮 し て得 ら れた残渣 を シ リ カ ゲルカ ラ ム ク 口 マ ト グラ フ ィ ー （溶離液： へ キサン一酢酸ェ チル） に よ り 精製 し、 白色粉末状の 2 — （ ( t e r t 一ブ ト キ シ カルボ二 ル） ア ミ ノ メ チル ] 一 5 — メ チリレー 4 H — 3, 1 — べン ゾォ キサジ ン一 4 一オ ン （ 2 . 9 3 g ) を得た。 b ) 2 - 〔 （ 9 一フルォ レニルォキ シァセ チル） ア ミ ノ メ チル〕 一 5 —メ チルー 4 H— 3, 1 —べン ゾォキサジ ンー 4一オ ン

2 — 〔 （ t e r t —ブ ト キシカルボニル） ア ミ ノ メ チル〕 一 5 —メ チルー 4 H— 3, 1 —べン ゾォキサジ ン一 4一オン

( 1 0 6 . 7 m g ) に、 永冷下で、 攪拌しなが ら 5 0 % ト リ フ ルォロ酢酸一塩化メ チ レン溶液 （ 3 . 0 m l ) を滴下 し、 O 'C で 0 .6 7時間攪拌 した。 反応液を濃縮し て得た 2— （ァ ミ ノ メ チル） 一 5 —メ チルー 4 H— 3， 1 一べン ゾォキサジン一 4一オンの ト リ フルォ ロ酢酸塩 （ 1 1 9 m g ) に 9 一フ ルォ レニルォキシ酢酸 （ 7 8 m g ) を加え、 N, N—ジメ チルホ ルムア ミ ド （ 3 .0 m l ) を加えて溶解させた _β 更に、 氷冷下 において、 Ν—メ チルモルホ リ ン （ 3 5 .8 yti 1 ) 、 1 ー ヒ ド ロ キシベンゾ ト リ ア ゾール （ 4 8 . 5 m g ) 及び水溶性カルボ ジイ ミ ド塩酸塩 （ 6 8 . 7 m g ) を順次加え、 温度を室温に戻 し て 1 8 時間攪拌 した。 反応液を濃縮 し、 残渣 を シ リ カ ゲル カ ラムク ロ マ ト グラ フ ィ ー （溶離液： へキサン一酢酸ェチル） に よ り 精製し、 2 — 〔 （ 9 —フ ルォ レ ニルォキ シ ァセ チル） ア ミ ノ メ チル〕 一 5 —メ チルー 4 H— 3， 1 一 べン ゾォキサ ジン一 4一オン （ 1 5 .4 m g ) を得た （表 1 参照） 。

実施例 8

2 — { 1 一 〔 （ 9 一 フ ルォ レ ニルォキ シァセ チル） ァ ミ ノ ] 一 1 一メ チルェチル } 一 5 — メ チルー 4 H - 3, 1 —ベン ゾォキサジン一 4 一オ ン

a ) N— （ t e r t — ブ 卜キシカルボニル） 一 2 — ァ ミ ノ イ ソ酪酸

2—ア ミ ノ イ ツ酪酸 （ 2 0 . 6 g ) を 1 , 4 —ジォキサン一 水 （ 5 : 1 ) ( 6 0 0 m l ) に溶か し、 氷冷攪拌下 に、 1 N 水酸化ナ ト リ ウ ム （ 2 5 0 m l ) と ジ — t e ir t —ブチル ジカルボナ一 ト （ 5 4 . 6 1 g ) と を加え た。 室温で 4 8 時間 攪拌 し た後、 反応液を 濃縮 し た。 氷冷下、 残渣 に 5 %硫酸水 素カ リ ウ ム （ 5 0 0 m l ) を加えて p H 3 ~ 4 と し、 酢酸ェ チルで抽出 し た， 有機層 を 無水硫嫛マ グネ シ ウ ムで乾燥 し、 濃縮 し た。 残揸を へキサン （ 4 0 0 m l ) よ り 結晶化さ せ、 N — （ t e r t —ブ ト キシ カルボニル） 一 2 — ァ ミ ノ ィ ゾ酪 酸 （ 2 5 . 9 9 g ) を得た。

b ) 2 — { 1 - ( ( t e r t —ブ ト キシ カルポニル） ア ミ ノ 〕 一 1 一メ チルェ チル } 一 5 — メ チル ー 4 H — 3, 1 — べ ン ゾォキサジ ン一 4 一オ ン

窒素雰囲気下、 室温 にお いて、 N— （ t e r t —ブ ト キ シ カ ルボニル） 一 2 — ァ ミ ノ イ ソ 酪酸 （ 1 5 g ) のテ ト ラ ヒ ド 口 フ ラ ン溶液 （ 8 0 m l ) 中 に N—メ チルモルホ リ ン （ 8 . 3 m l ) 及びク ロ ロ ギ酸イ ソ ブチル （ 9 . 6 m l ) を順次加えた。 0 . 8 3 時間攪拌 し た後、 2 —ア ミ ノ ー 6 —メ チル安息香酸 ( 7 . 9 7 g ) と N—メ チルモ ルホ リ ン （ 7 . 7 m l ) と を含 む N, N—ジ メ チルホルム ア ミ ド溶液 （ 8 0 m 1 ) を 滴下 し、 1 8 時間攪拌 し た。

反応液 を 濃縮 し た後、 そ の残渣 に 5 %硫酸水素 カ リ ウ ム ( 2 5 0 m l ) を 加え て酢酸ェ チルで抽出 し た。 有機層 を飽 和食塩水で洗浄 し、 続いて無水硫酸マ グネ シ ウ ムで乾燥 し た 後、 濃縮 した》

上記反応で得 られた混合物 （ 2 6 . 1 3 _g ) の塩化メ チ レ ン 溶液 （ 1 5 0 m l ) 中 に、 室温で水溶性カ ルポジイ ミ ド塩酸 塩 （ 2 0 . 0 g ) を加え、 1 8 時間攪拌 し た。 反応液を濃縮し て得られた残渣を シ リ カゲルカ ラ ムク ロ マ ト グラ フ ィ ー （溶 離液： 塩化メ チ レ ン一エーテル） に よ り精製し、 2 — { 1 - [ ( t e r t —ブ ト キシカ ルボニル） ァ ミ ノ 〕 一 1 —メ チル ェチル } 一 5 —メ チルー 4 H— 3, 1 —べン ゾォキサジン一 4一オン （ 5 . 6 5 g ) を得た。

c ) 2 — { 1 — [ ( 9一フルォ レニルォキシ ァセ チル） ァ ミ ノ ） 一 1 一メ チルェチル } — 5 — メ チルー 4 H — 3 , 1 一 べン ゾォキサジ ン一 4一オ ン

2 - { 1 一 [ ( t e r t —ブ ト キシカルボニル） ァ ミ ノ 〕 一 1 —メ チルェチル } 一 5 —メ チル一 4 H — 3, 1 —べン ゾ ォキサジン一 4一オン （ 5 . 6 3 g ) に、 氷冷下で、 攪拌 しな がら 5 0 % ト リ フルォ ロ酢酸一塩化メ チ レ ン溶液 （ 2 5 0 m 1 ) を滴下 した。 続いて、 0 °Cで 0 . 5 8 時間攪拌した後、 反 応液を濃縮 した。 残揸に対 し、 4 N塩酸一 1， 4 ー ジォキサ ン溶液 （ 8 0 m 1 ) を 0 'Cで加えた。 0 . 5 8 時間攪拌し た後、 反応液を ト ルエンで共沸し、 2 — （ 1 一ア ミ ノ ー 1 一メ チル ェ チル） 一 5 —メ チルー 4 H— 3, 1 —べン ゾォキサジ ン一 4 一オンの塩酸塩を得た。 そこ へ 9 一フルォ レ ニルォキシ酢 酸 （ 4.4 7 g ) を加え、 N, N—ジメ チルホルムア ミ ド （ 1 8 0 m 1 ) 加えて溶解させた。 更に、 室温にお いて、 N—メ チルモルホ リ ン （ 2 . 2 m l ) 、 1 ー ヒ ド ロ キ シベン ゾ ト リ ア ゾール （ 2 . 9 8 g ) 及び水溶性カ ルポジ イ ミ ド塩酸塩 （ 5 . 0 9 g ) を順次加えた。 1 8 時間攪拌 し た後、 反応液を 濃縮 し、 残渣を シ リ カ ゲル ク ロ マ ト グラ フ ィ ー （溶離液： 塩化メ チ レ ン一エーテル） に よ り 精製 し た。 さ ら に塩化メ チ レ ン一 エーテル よ リ 再結晶 し、 融点 1 6 2 . 1 - 1 6 2 . 8 °Cの 2 — { 1 - ( ( 9 一フ ルォ レニルォキシァ セ チル） ァ ミ ノ 〕 一 1 一メ チルエデル） 一 5 —メ チル ー 4 H — 3, 1 —ベ ン ゾォキ サ ジン一 4一オン （ 6 . 3 4 g ) を得た （表 1 参照） 。

実施例 9

2 — [ 1 一 （ 9 一 フル ォ レニルォ キシ ァセ チル） ァ ミ ノ 〕 一 1 一ェチルプロ ピル ] 一 5 —メ チルー 4 H 一 3, 1 —ペ ン ゾォキサジン一 4 一オ ン （化合物 9 ) の合成

実施例 8 の 2 —ァ ミ ノ イ ソ 酪酸の代わ り に、 2 —ァ ミ ノ 2 —ェチル酪酸のナ ト リ ウ ム塩 （ 4 . 5 9 g ) を用い、 実施例 8 の場合 と 同様に して化合物 9 を合成 し た （表 1 参照） 。

実施例 1 0

2 - { 1 - [ ( 9 一フ ルォ レ ニル ォキ シァ セ チル） ァ ミ ノ 〕 シ ク ロ へキシル } 一 5 — メ チルー 4 H — 3， 1 一 べン ゾォ キサ ジ ン一 4一オ ン （化合物 1 0 ) の合成

実施例 8 の 2 —ァ ミ ノ イ ソ 酪酸の代わ り に、 1 ー ァ ミ ノ シ ク ロ へキサンカルボン酸 （ 4 . 2 9 g ) を用 い、 実施例 8 の 場合と 同様に し て化合物 1 0 を 合成 し た （表 1 参照） 。 本明細書中で具体的 に述べた上記実施例に係わる化合物の 構造式及び物理的性状を表 1 に纏めて示し た。

また、 本発明は こ れ ら の実施例に限 られる も ので はない こ と は勿論でぁ リ、 例え ば表 2 に示 した化合物も本発日月 に属す るものである。

MZS，

表 1 つづき

-zf-

PPP00/Z6dC/JDd

表 2 化合物 1 1

構造式 化合物 1 2

構造式 化合物 1 3

表 2つづき

構造式 化合物 1

構造式 化合物 1 5

構造式 化合物 1 6

表 2つづき

構造式 化合物 1 7

構造式 化合物 1 8 構适式 化合物 1 9

構造式 化合物 2 0

表 2つづき

構造式 化合物 2 1

構造式 化合物 2 2

構造式 化合物 2 3

表 2つづき

構造式

化合物 24

構造式

化合物 25 丫。 s 構造式

化合物 26

O ^H

表 2つづき

接 5¾式 化合物 2 7

構造式 化合物 2 8

構造式 化合物 2 9

構造式 化合物 3 0

次に、 本究明 に係わる前記一般式 [ 1 〕 で示される新規な ォキサジノ ン誘導体の、 プロテアーゼ阻害活性及び好中球走 化性抑制活性並びに力 ラゲニン誘導空気の う炎症抑制作用 に ついて行った試験結果を示す。

試験例 1 : 本発明化合物のセ リ ンプロテアーゼ阻害活性 本発明に係わるォキサジノ ン誘導体の ヒ ト好中球エ ラス ターゼ (Human Leukocyte Elastase: H L E ) , ヒ 卜膿性痰ェ ラ スターゼ ( Human Sputum Elastase: H S E ) 、 ヒ 卜好中球 カテブシ ン G (Human Cathepsin G: H C G ) 、 ゥ シ脖臓 o: — キモ 卜 リ プシン ( Bovine Pancreatic a -Chymo tryps i n : C Y T ) 及びゥ シ藤臓 卜 リ プシ ン （ Bovine Pancreatic Trypsin: T R Y ) を下記の方法で測定した.

( 1 ) H L E阻害活性の測定

a ) 酵素謌整法

ヒ ト静脈血を遠心分離し、 パ フ ィ ーコ一 ト を得、 こ れ に蒸留水を加えて低張処理する こ と に よ り 赤血球を破碎した。 残り の血球成分に 3 3 .4 %コン レイ 4 0 0溶液/ 9 %フ ィ コ ール溶液 （ 1 0 ： 2 4 ) を加え、 密度勾配遠心によ り 好中球 を取得した。 好中球画分は Hanks bufferで 3 回洗浄して細胞 を'回収した後、 使用する ま で一 8 0 'Cで凍結保存した。 凍結 保存してある細胞を 3 7 °Cの温水で解凍し、 9 倍量の Lysis buffer ( 0.1 M Tris-HCl pH7.5, 1M MgCl₂, 0.1% Brij 35)に懸 濁 した後、 氷冷し ながらポロ ト ロ ンで細胞を破砕した。 続い て、 1 0 0， 0 0 0 X gで 1 時間の遠心を行っ て沈澱を 除き、 上澄に 2倍量の 5 m M T r i s - H C l p H 7 . 5、 1 M N a C 1、 1 . 1 % B r i j 3 5 をカ卩え、 粗抽出酵 素液と し た。 次に、 得 られた粗抽出酵素液 を ァ プロ チニ ンァ フ ィ ニテ ィ カ ラ ム に吸着 さ せ、 5 0 m l G l y c i n e -

H C 1 p H 3 . 3、 1 M N a C 1、 0 . 1 %' B r i j 3 5 で溶出 し た活性画分を、 更 に M O N O S イ オ ン交換力 ラ ム にかけた。 こ の と き に、 2 M N a C 】 の リ ニア グ ラ ジ ェ ン ト で溶出 し た活性画分 を 2 5 m M T r i s — H C 1 P H 8 . 6 で透析 し たのち凍結乾燥 し、 酵素標品 と し た。

b ) 酵素阻害活性評価法

被検物質 を D M S O (蛍光分析用 ） に溶解 し、 種々 の濃 度の溶液を作成 し た。 その各々 に 2倍量の 0 . 2 M T r i s 一 H C 1 p H 8 . 6 を加え、 こ れ ら を被検物質溶液と し た。 —方、 合成基質 （MeOSuc-A -Pro-Val-pNA;フ ナコ シ） を D M S O に溶解 し、 こ れに 2倍量の 0 . 2 M T r i s — H C l P H 8 . 6 を加えた も の を基質溶液 と し た。

反応に は 9 6 穴マ イ ク ロ プレ ー ト （ ヌ ン ク ） を 用 い、 被検 物質 1 濃度 に対 し て 6 反復の反応を行っ た。 マ イ ク ロ プ レー ト の 1 ゥ エル当 り、 酵素溶液 （ 0.2M Tris-HCl _PH8.6) 1 4 0 μ l , 被検物質溶液 3 0 ^ 1、 基質溶液 3 0 1 を それぞれ 3 '7 °Cで 1 0 分間 プレ イ ン キ ュ ベー 卜 して お く。 酵素溶液と 被検物質溶液 を混合 し、 1 0 分間イ ン キ ュ ベー ト し たの ち、 基質溶液を加え酵素反応を 行っ た。 基質の分解は、 遊離 し て く る p N Aの吸光度 （ 4 0 5 n m ) を マイ ク ロ プレー ト リ ー ダー （ MTP-100;コ ロ ナ） で測定 し、 6 反復の平均値 と し て算 出 し た。 被検物質 を加えて いな い と き の基質の分解量に対す る被検物質の阻害濃度を、 I C ₅₀値と して求めた。 反応液中 の H L E及び合成基質の最終濃度は、 それぞれ 5 . 6 3 n M、 0 .2 6 2 5 m Mである。

( 2 ) H S E阻害活性の測定

a ) 酵素調整法

シグマ社よ リ購入した。

b ) 酵素阻害活性評価法

H L E阻害活性の測定に記述し た測定方法と 同様であ るが、 p H 7 . 0 の緩衝液を用いた。 反応液中の H S E、 合成 基質 （MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA;フナコ シ） の最終濃度は、 それぞれ 1 0 n M、 0 .2 5 m Mである，

( 3 ) H C G阻害活性の測定

a ) 酵素調整法

コスモノ イ ォ社よ り 購入した。

b ) 酵素阻害活性評価法

H L E阻害活性の測定に記述し た測定方法と 同様であ るが、 p H 7 .5 の緩衝液を用いた。 反応液中の H C G、 合成 基質 （ Ac-AIa-Ala-Pro-Phe-pNA;フナコ シ） の最終濃度は、 そ れぞれ 5 0 n M、 0 . 5 m Mである。

' ( 4 ) C Y T阻害活性の測定

a ) 酵素調整法

シグマ社よ リ購入し た.

b ) 酵素阻害活性評価法

H L E阻害活性の測定に記述し た測定方法と 同様であ るが、 P H 8 . 0 の緩衝液を用いた。 反応液中の C Y T、 合成 基質 （Ac-Ala- Ala - Pro - Phe - pNA;フ ナコ シ） の最終濃度は、 そ れぞれ 3 .4 n M、 0 . 2 7 3 m Mであ る。

( 5 ) T R Y阻害活性の測定

a ) 酵素調整法 · シ グマ社よ リ 購入 し た。

b ) 酵素阻害活性評価法

H L E 阻害活性の測定に記述 し た測定方法と 同様であ る 力 p H 7 . 5 の緩衝液を用いた。 反応液中 におけ る T R Y、 並びに合成基質 （ Z-Arg-pNA;フ ナコ シ） の最終濃度は、 それ ぞれ 2 5 n M、 l . O m Mであ る。

( 6 ) 結果

上記 1 ) 〜 5 ) の結果 を表 3 に示す。 プロテアーゼ阻害活性 表 3

IC₅₀値 (μΜ)

化合物

HLE HSE HCG CYT TRY

1 0.24 0.31 〉5.5 4.75 >6.89

2 0.73 0.30 >5.34 4.46 >6.68

3 0.51 〉27.5 3.43

' 0.75 11.3 6.58

5 0.24 〉12.3 1.96

6 0.64

7 1.28 >7.δ9 >7.59

8 1.00 表 3 か ら 明かな よ う に、 本発明 に係わる前記一般式 〖 I 〕 で示さ れるィヒ合物 には、 セ リ ン プロテアーゼの う ち特に ヒ ト 好中球エ ラ ス タ ーゼに封し て強い選択的な阻害活性を有する こ とが認め ら れた。 試験例 2 : 本発明化合物の ヒ ト好中球走化抑制活性

ヒ ト末梢血か ら好中球画分 を、 パ ー コ ール密度勾配遠心

( 2 3 0 0 r p m、 2 0分） で取得 した （ 6 0 %パ ー コ ー ル 画分、 好中球の純度 9 0 %以上） 。

あ ら か じめ、 ケ乇 タ キシスチ ャ ンパ一 （ ク ラ ボウ ） の各ゥ エル内に好中球走化因子である i M L P (ホル ミ ルメ チォ二 ル ロ イ シルフ ェ ニルァ ラ ニ ン） を 1 0 —⁷M含有する 1 3 0 0 1 の培地を加えておいた。 こ れに、 8 X 1 0⁵個の上記好中 球と、 各濃度 に調整 し た本発明化合物 を 含む イ ン タ ー セル

( 5 /i m径ポア） と を静置 した。 5 %炭酸ガス を含む培養器 内 において 3 7 °Cで 1 時間培養 したの ち、 イ ン タ ーセル側か ら チャ ンパ一側のイ ン タ 一セル膜面に遊走 した細胞数を 以下 の方法で計数 し た。 即ち、 チャ ンバ一側の イ ン タ ーセル膜面 を P B S で 4 回洗浄し、 メ タ ノ ールで固定後、 へマ ト キシ リ ン'ーェォ ジン液で細胞 を染色 し た。 次 に、 イ ン タ ーセルから 膜を と り はず してス ラ イ ド ガラ ス に乗せ、 風乾 し、 カナ ダバ ルサムで封入 した， こ れを顕微下で ラ ン ダム に 5 ケ所を観察 し、 細胞数を計数 した。 こ れら 5視野中の細胞数の平均値を 算出 し、 遊走細胞数と した。

本発明化合物を 加えなかっ た実験に おけ る遊走細胞数か ら f M L P を加えて いな い対照実験に お ける 遊走細胞数を.減 じ た値を 1 0 0 と し、 本発明化合物 に よ る走化性抑制作用 を 次 式に ょ リ 求めた。 その結果 を表 4 に示す。 本ィ匕合物を含む時の走化性

走化性抑制活性 (％)=100— X100

本化合物を含まない時の走化性

(本化合物と fMLP添加 （ LP無添加時 等の遊走細胞数） ― の遊走細胞数）

X100

= 100-

(fMLP添加時の遊走 一 (fMLP無添加時 細胞数） の遊走細胞数）

好中球走化性抑制活性 表 牛

表 4 か ら 明かな よ う に、 本発明 に係わる前記一般式 〔 I 〕 で示さ れる化合物 に は、 顕著な ヒ ト 好中球走化抑制作用 が認 め られた。

試験例 3 : 本発明化合物の力 ラ ゲニ ン誘導空気の う への好 中球浸潤抑制作用

S D系雌性ラ ッ ト （ 5 週齢 1 1 0 — 1 3 0 g ) を 用 い、 1 群を 5 匹 と し た。 は じ め に、 エ ー テル麻酔下で空気 8 m 1 を 背部皮下 に注入 して空気の う を作成 し た。 2 4 時間後、 こ の空気の う に、 1 %力 ラ ゲニ ン （和光製） 含有生理食塩水 を 5 m l 注入 した。 被験薬物 （本発明化合物） は、 2 0 0 ^ 1 D M S O (ジメ チルスルホキシ ド） に溶解 した溶液と し て、 力 ラゲニン注入後すみやか に背部空気の う 内に投与 し た。

5 時間後に ラ ッ ト を 卜 殺放血 し、 空気の う 内 に E D T A (エチ レ ンジア ミ ンテ ト ラ アセ テー ト ： 1 O m M ) を含む P B S を 5 m l 注入 した， 空気の う 内への浸出物 を洗浄 ' 回収 し、 その一定量を コ ールタ ーカ ウ ン タ ーで測定 して浸出細胞 数を計数 した.

薬物を投与 しなかっ た対照群での細胞浸潤数か ら 力 ラ ゲ二 ン を投与 し なかっ た実験の細胞数を減 じた値を 1 0 0 と し、 被験薬物の力 ラ ゲニン炎症にお ける細胞浸潤に対する抑制作 用 を次式に よ り 求めた。 その結果を表 5 に示す. 本化合物を含む時の細胞浸潤性

細胞浸潤抑制率(％)=100— X100 本化合物を含まない時の細胞浸潤性 本化合物と力ラゲ 力ラゲ二ン無添加 二ン投与時の浸潤

雄数 時の浸潤細胞数

:100—、· ' X100 力ラゲニン投与 「力ラゲニン無添加 時の浸潤細胞数 時の浸潤細胞数

力ラゲニン誘導空気のうへの好中球浸潤抑 作用

化合物 投与量 (μπιοΐ) 細胞浸潤性 細胞浸潤抑釗率 ( ） ン 卜 σ— _；レ 0 100

1 17 62 38

2 17 76 24 表 5 か ら 明かな よ う に、 本発明 に係わる 前記一般式 〖 I 〕 で示さ れる化合物 に は、 力 ラ ゲニ ン誘導空気の う への好中球 浸潤抑制作用が認め ら れた。 以上詳述 し た よ う に、 本発明 に係わ る ォ キサ ジ ノ ン誘導体 は新規化合物であ り、 広 く 炎症発症の各過程に作用 し、 組織 破壊を抑制する。 特に エラ ス タ ーゼに対 し て優れた阻害作用 を 有 し、 かつ細菌由来の化学誘引物質 に対する ヒ ト 末梢血好 中球の走化性を抑制 し、 ま た動物炎症モデルに お いて好中球 浸潤抑制活性 を も 合わせも つ。

こ の こ と か ら、 本発明物質は抗炎症剤又は好中球浸潤抑制 剤若 し く はセ リ ン プロ テアーゼ阻害剤 と し て有用で あ り、 医 薬品と し て使用す る こ と が可能である。

Claims

請求の範囲

1. 下記一般式 [ 1 〕 で示さ れる新規なォキサジノ ン誘導 体又は薬学的に許容さ れるそれ らの酸付加塩。

ただし、 式中の！^ ¹〜！^⁴、 R、 A、 X、 Y および Z はそれ ぞれ次の意味を有する。

ぐ R ：

水素原子、 低級アルキル基又は低級ァシル基；

< R, R ²>：

同一又は異なっ て、 それぞれ水素原子、 低級アルキル 基又は低級アルキルチオ低級アルキル基である。 又は R及び R .²が一緒になつてアルキル鎖から なる環を形成しても よい；

< R ³>：

水素原子、 フ ッ素で置換されても よ い低級アルキル基、 低級アルコ キシ基又はハロ ゲン原子；

< R > :

水素原子、 低級アルキル基、 水酸基、 ハ ロゲン原子、 低級アルコキシ基、 低級アルコ キシカ ルボニル基、 カルボキ シル基、 低級アルキルチオ基、 ニ ト ロ 基、 低級ァ シ ロ キ シ基 又は一 N R 5 R ⁶ ( R 5及び R ⁶は同一又 は異な っ て水素原子、 低級アルキル基又は低級ァ シル基であ る 力 又は隣接す る窒 素原子 と 一緒にな つ て置換基を 有 して も よ いへテ ロ環を形成 し ても よ い） ；

又

V¹ である。 ただし、

• Wは単結合、 一 0—、 一 S—、 一 C H = C H—又は 一 N R⁹— （ R ⁹は水素原子、 低級アルキル基又は低 級ァシル基） であ る；

• Uは一 C H—又は窒素原子である ；

. V i _ 0—、 — S—、 一 C O—、一 C H R io一

( R ¹⁰は水素原子、 低級アルキル基又は低級ァシル 基） 又は一 N R ¹¹— （ R ¹¹は水素原子、 低級アルキ ル基又は低級ァシル基） であ る。

こ こで、 Uが窒素原子のと きは、 V 1は一 C 0—、 一 C H R io— （ R ¹⁰は前記と 同じ） 又は一 N R ii— ( R ¹¹は前記に同 じ） である ；

• V²は - C R ¹²— （ R ¹²は水素原子、 低級アルキル基 又は低級ァシル基） 又は - N—である；

• T ¾ = C H—又は = N—であ る；

• R ⁷及び R ⁸は同一又は異なっ て、 それぞれ水素原子、 フ ッ素で置換されても よい低級アルキル基、 低級ァ シル基、 ハロ ゲン原子、 水酸基、 低級アルコキシ基、 • 低級ァシ ロキシ基、 力ルポキシル基、 又は

一 N R ¹³R " ( R i3及び R ¹⁴は同一又は異なっ て、 それぞれ水素原子、 低級アルキル基又は低級ァシル 基を意味する） である ；

• m、 nは独立して 0 乃至 2 の整数を意味する （ただ し、 m + n ≤ 2 ) ；

• D は 2個以下の置換基を有しても よ く、 ま た複数の ヘテ ロ原子を 含んでも よ い 5 乃至 7 員の芳香環又は 脂環であ る。

< X >：

単結合、一 0—、一 S —、一 C O—又は一 i^ R ¹⁵—

( R 1⁵は水素原子、 低級アルキル基又は低級ァ シル基 であ る） ；

< Y >：

単結合、一 0—、一 C H = C H—又は一 N R 16一 ( 16 は水素原子、 低級ア ルキル基又 は低級ァ シル基で あ る ）

< Z >：

一 C H ₂—又は一 C O (但 し、 Zがー C H ー の場合 は Y は単結合で ある ）

< 1 >：

0 乃至 4 の整数

2. D が、

ただし、 R i ⁷及び R ^{1 8}は同一又は異なっ て、 それぞ れ水素原子、 フ ッ素で置換されても よい低級アルキ ル基、 低級ァ シル基、 ハ ロ ゲン原子、 水酸基、 低級 アルコキシ基、 低級ァシ ロキシ基、 カルボキシル基 又は一 N R ^{1 9} R ²⁰ ( R ^{1 9}及び R ^{2 0}は同一又は異な つ て、 それぞれ水素原子、 低級アルキル基又は低級ァ シル基を意味する） であ る。

である請求の範囲第 1 項に記載の新規なォキサジノ ン誘導体 又は薬学的に許容されるそれらの酸付加塩。

3 . 医薬と して適当な担体と、 抗炎症作用的有効量の請求 の範囲第 1 項又は第 2 項記載の化合物 と を含んでなる抗炎症 剤,

4. 医薬と して適当な担体と、 好中球浸潤抑制作用的有効 量の請求の範囲第 1 項又は第 2項記載の化合物と を含んでな る好中球浸潤抑制剤。

5 . 医薬と して適当な担体と、 セ リ ンプロテアーゼ阻害作 用的有効量の請求の範囲第 1 項又は第 2項記載の化合物と を 含んでなるセ リ ン プロテアーゼ阻害剤。