WO1989009052A1

WO1989009052A1 - Composition for inhibiting absorption of nucleic acid bases

Info

Publication number: WO1989009052A1
Application number: PCT/JP1989/000313
Authority: WO
Inventors: Setsuro Fujii; Tetsuhiko Shirasaka; Masakazu Fukushima; Yuji Shimamoto
Original assignee: Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 1988-03-28
Filing date: 1989-03-24
Publication date: 1989-10-05
Also published as: EP0365683A1; EP0365683A4

Description

明細書核酸塩基の吸収抑制組成物く技術分野〉

本発明は、核酸塩基の吸収抑制組成物に関し、より詳しくは痛風の原因となる核酸塩基の吸収を抑制する組成物に関する。

ぐ背景技術〉

最近の日本人の食事における核酸塩基（プリン体およびピリミジン体）の摂取量は次第に増加し、欧米人の摂取量（6 00 〜 1 0 0 0 mg / 日）に近づきつつある。核酸塩基を多量に含有する食品には、動物の肉類、肝臓、腎臓等の臓器類、代表的にはいわし、たら、鲤、ひらめ、ます等の魚肉類、貝類、ベーコン、牛肉、鳥肉、ソーセージ、豚肉、これらのスープ、エキス類等のほか、オートミール等の穀類、いんげん豆、えんどう豆等の豆類、アスパラガス、きのこ、ほうれん草等の野菜類が含まれる。

生体に摂取されたプリン体は、キサンチンォキシダ一ゼによるキサンチンの尿酸への酸化を中心として代謝される（プリン代謝）。このとき、プリン体摂取量が過剰に過ぎたり、内因性プリン代謝異常が認められる場合には、上記プリン代謝の增進によって血中の尿酸濃度が上昇し、高尿酸血症をひき起こさせたり、さらにこれが持铳すると、関節への尿酸結晶の蓄積により痛風を発生させる。

従って、従来より痛風患者、特に急性関節炎発作期や腎不全合併症の痛風患者においては、プリン体含有量を低下させたプリン制限食による食事療法が採用されていた（例えば、「臨床栄養」， 4 9 , 3 1 9 ( 1 9 76 ) ；「京都医学会雑誌」， 2 2, 3 7 ( 1 9 7 3 ) ；「最新医学」， 2 9 , 486 ( 1 9 74 ) ；「 J AM Α」， 1 5 7 , 1 0 9 6 ( 1 9 55) 等を参照）。

しかしながら、このような食事療法によっても約 0. 5〜 1. 0 m g d Jの血中尿酸の低下効果が認められるにすぎない。また、上記プリン制限食は、それ自体繁雑なものであり、これによる栄養の偏りや患者の精神的苦痛を考慮すれば、決して満足できる療法とはいえない。

従って、現状ではプリン等の核酸塩基の含有量が特に多い食品の摂取を制限している程度である。

本発明の主たる目的は、従来の食事療法に代わって、核酸塩基の自由摂取にもかかわらず、その体内への過剰摂取あるいは蓄積を制限できる核酸塩基の吸収抑制組成物を提供することにある。

く発明の開示〉

本発明者らは上記目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、一般式：

R 1 - S - - C O O H (1) (式中、 Ri は水素原子または低級アルキル基、 R2 はアミノ基を有することのある低級アルキレン基である）で示されるチォ低級ァルカン酸またはその塩から選ばれる少なくとも一種を有効成分として含有する組成物がすぐれた核酸塩基吸収抑制作用を有するという驚くべき新たな事実を見出し、本発明を完成するに至った。

上記一般式 (1)において、 R¹ で示される低級アルキル基としては、 ,

例えばメチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、 sec- プチル、 t ert- プチル、ペンチル、へキシル基等の炭素数 1 〜 6の直鎖状または分岐鎖状アルキル基があげられる。また、 R 2 で示されるアミノ基を有することのある低級アルキレン基としては、例えばメチレン、エチレン、プロピレン、トリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレン、へキサメチレン、 2 — メチルテトラメチレン、アミノメチレン、 1 —アミノエチレン、 2 —アミノトリメチレン、 1 —アミノテトラメチレン、 2 —ァミノペンタメチレン、 1 —アミノー 2 —メチルテトラメチレン、 3 —ァミノへキサメチレン等の置換基としてアミノ基を有することのある炭素数 1 〜 6の直鑪状または分岐鎖状アルキレン基があげられる。

これらの各基を有する一般式 (1)で示される化合物のうち好ましいものとしては、例えば L — システィン、 L —メチォニン等をあげることができ、特に L - システィンが最適である。

また、本明細書における核酸塩基には、アデニン、グァニン、キサンチン、ヒポキサンチン、チミン、ゥラシル、シトシン等が包含される。

上記一般式 (1)で示される化合物はいずれも公知であるが、これらが核酸塩基の吸収抑制作用を奏することについては従来まつたく知られていない。また、上記化合物の薬理的に許容される塩においても、同様に核酸塩基の吸収抑制作用が認められる。このような塩としては、例えば上記一般式 (1)のチォ低級アル力ン酸に医薬的に許容される酸を付加させて得られる酸付加塩をあげることができる。このような酸としては、例えば塩酸、硫酸、リン酸、臭化水素酸等の無機酸、シユウ酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クェン酸、安息香酸、酢酸、 P — トルエンスルホン酸、エタンスルホン酸等の有機酸をあげることができる。

また、上記一般式 (1)で示されるチォ低級アルカン酸が酸性基を有する場合、これに医薬的に許容される塩基性化合物を作用させて得られる塩も同様の核酸塩基の吸収抑制作用を有する。上記塩基性化合物としては、例えば水酸化ナトリゥム、水酸化力リゥム、水酸化カルシウム等の金属水酸化物、炭酸ナトリウム、炭酸水素力リウム、炭酸水素ナ卜リゥム等のアル力リ金属炭酸塩、重炭酸塩等があげられる。

本発明の組成物は、経口摂取されるのが核酸塩基の生体内への吸収を有効に抑制する上で好ましい。これは、核酸塩基の吸収は主として腸管力、ら行われるからである。

経口摂取されるための形態は特に限定されるものではなく、通常の医薬品に見られるような各種の製剤形態であってもよく、あるいは一般的な食品の形態であってもよい。これらは通常の方法に従つて調製でき、用いる他の配合剤も任意に選択できる。

例えば、本発明の組成物は、上記有効成分の有効量を、慣用される製剤担体、例えば充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤等の希釈剤あるいは賦形剤と共に用いて医薬製剤形態に調製される。この医薬製剤の代表的なものとしては、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤等があげられる。錠剤の形態に成形するに際しては、担体として、例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシゥム、カオリン、結晶セルロース、ゲイ酸等の賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カノレボキシメチノレセノレロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壌抑制剤、第 4級アンモニゥム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ゲイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリェチレングリコール等の滑沢剤等を使用できる。さらに、錠剤は必要に応じて通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン披包錠、腸溶被錠、フイルムコーティング錠、さらに二重錠、多層錠とすることができる。丸剤の形態に成形するに際しては、担体として例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、ェタノール等の結合剤、ラミナラン、カンテン等の崩壊剤等を使用できる。カプセル剤は常法に従い有効成分を上記各種担体と混合して硬質ゼラチンカプセル、软質カプセル等に充填して調製される。

溶液剤、乳剤、懸濁剤等の液剤は、希釈剤として例えば水、乳酸水溶液、エチルアルコール、プロピレングリコール、ェトキシ化ィソステアリルアルコール、ポリオキシ化ィソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を使用し、常法により殺菌して調製される。これらの液剤中には、食塩、ブドウ糖、グリセリン等を配合することもでき、逸常の溶解捕助剤、緩衝剤等をも配台することができる。

さらに、上記各種の医薬製剤中には、必要に応じて抗酸化剤（例えばプチレート匕ヒドロキシトルエン、プロピルガレート、キノン、 - トコフロール等）、着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を含有させることもできる。

上記医薬製剤中において、有効成分である上記一般式 (1)で示される化合物またはその塩の含有量は特に限定されず、広範囲に選択することができるが、医薬製剤組成物中に少なくとも約 0 . 0 1重量 %、より好ましくは約 1〜 7 0重量％とするのが適当であり、錠剤では 1錠当たり約 0 . 0 1〜 l gの範囲とするのが適当である。

医薬製剤は、その形態、これを投与すべき患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度等に応じて、その有効量が経口投与される。その投与量は適宜選択され、特に限定されるものではないが、通常有効成分量が 1 日に体重 1 kg当たり約 3 0〜 1 5 O mg程度を目安として適宜増減させるのがよく、製剤は 1 日に 1〜4回に分けて投与することができる。

また、本発明の組成物は食品形態に調製することもできる。食形態と丄ては、経口摂取できる限り限定されるものではなく、通常知られている各種の飲食物、例えば調味料、菓子類（和菓子、洋菓子、氷菓等）、シロップ類、果実加工品、野菜加工品、畜肉加工品、魚肉製品、珍味類、缶詰 · ビン詰類、清涼飲料、即席飲食品等のいずれでもよい。これら食品形態への調製は、上記有効成分をその調製の任意の時期に、例えば混和、混入、溶解、浸漬、浸透、散布、塗布、噴霧、注入等の適宜の手段により配合することを除いて、常法に従って行うことができる。上記有効成分の配合量も特に限定されるものではないが、一般には 1回の摂取量が約 5 0 0 〜 2 0 0 0 mg程度となる量で配合するのが適当である。

上記のようにして調製される各種形態の本発明組成物を患者に投与または摂取させるに際しては、その投与または摂取の時期は任意に定めることができるが、核酸塩基の吸収は食事の摂取時に最も活発になるため、食事の摂取と同時またはその前後とするのが好ましい。

なお、本発明の組成物は経口摂取される形態以外に、例えば坐薬等の形態で用いることもできる。

く図面の簡単な説明 >

第 1図〜第 6図は、本発明における有効成分が生体の核酸塩基吸収を抑制する効果を有することを明らかにするために、実施例で行つた試験の結果を示すグラフである。

<産業上の利用可能性 >

本発明の組成物は、生体内での核酸塩基の吸収を抑制するのに適した形態で摂取されることにより、核酸塩基の体内への過剰摂取あるいは蓄積が制限され、痛風の予防および治療等に好適に利用することができる。

<籠冽 >

本発明組成物の有効成分が生体の核酸塩基吸収にいかなる効果を及ぼすかを調べた。

この試験には、餌と水を自由に与えた体重 1 8 0〜 2 0 0 gのゥイスターキング系ラットを使用し、これを対照群と実験群とに分けた 0

対照群には、核酸塩基（ゥラシル、チミン、シトシンまたはアデニン）をそれぞれ 5 mgZ ¾Πこなるように 5 %アラビアゴム溶液に加えて懸濁させ、超音波により 5分間処理した被検液を投与した。この被検液の投与量は、ラッ卜の体重 100 g当たり 11? (5 OmgZ kg) とした。また、実験群には、上記それぞれの核酸塩基 5ingZ¾e の懸濁液に試験化合物（本発明の有効成分化合物）を 15nigZieとなるように加えて、同様にして懸濁および超音波処理して得られた披検液を投与した。この披検液の投与量は、ラットの体重 1 00 g 当たり 1 ¾Γ( 1 50 mgXkg) とした。

なお、上記各群は 1群 2〜 3匹から構成し、各被検液は経口ゾンテを用いて経口投与した。

上記被検液の投与から 1 5分後、 30分後、 60分後および 1 2 0分後に、各群ラットをエーテル麻酔下で開腹し、直ちに下大静脈より約 5 ffi?の血液を採血し、これを 4での温度雰囲気下に 1〜 2時間放置し、ついで同じ温度雰囲気下にて 300 O rpm で 1 0分間遠心分離して血清を分離した。

得られた各血清中の核酸塩基の濃度を以下の方法に従って測定し、この測定値を核酸塩基の経口吸収量とした。

(血清中の核酸塩基濃度の測定方法）

上記で得られた血清について、以下に述べる前処理を行つた後、高速液体クロマトグラフィーで分析した。

すなわち、ゥラシルおよびチミンの定量の場合、上記血清 1 ^に酢酸ェチル 5 を加え、塩酸酸性下で振蘯した後、酢酸ェチル層を分取し、これを 4 CTCで加温乾固した後、少量の水を加えて溶解させた。このようにして前処理したサンプル 1 0 を、信和化工社製のウルトロン N— C 18 — Lカラム（5 /z m, 4. 6 I D mm x 1 0 mm) にアプライし、移動相として 2 %メタノールを含む 5 m Mテトラプチルアンモニゥム溶液（ p H 5〜6 ) を流し、流速 1 ffi? Z分、検出波長 26 ϋ ηπιで分析を行った。

また、シトシンおよびアデニンの定量は、これらの核酸塩基を含む前記血清 2 0 0〜 4 0 0 を、ウルトラフリー C 3 G C遠心濾過チューブ [ミリポア社製] にのせ、 1 0 0 0 0 rpra で 1 0分間遠心分離した後、得られた濾過液 2 0 JIをケ厶コ社製ケ厶コソルブ 3 0 0— C ₁₈ カラム（ 5 m, 4. 6 I D mm x 2 5 0 ram) にァプラィし、移動相として 2 0 mMリン酸緩衝液（ p H 3. 8) を流し、流速 1 分、検出波長 26 0 nmで分折を行った。

それぞれの核酸塩基濃度は、標準核酸塩基を正常ラット血清に添加した既知濃度の試料を、同条件下で分析して得られたクロマトグラムより計算して求めた。

試験化合物（本発明の有効成分化合物）として L一システィンを用いた場合の試験結果を第 1図〜第 4図のグラフに示す。各グラフにおいて、用いた核酸塩基はアデ二ン（第 1図）、チミン（第 2図）、ゥラシル（第 3図）およびシトシン（第 4図）である。各グラフの縱蚰は各核酸塩基の血中濃度（を、横軸は被検液の轻口投与後の時間（分）をそれぞれ示す。

さらに、核酸塩基としてヒポキサンチンを用いて、以下の方法により本発明の有効成分化合物によるヒポキサンチンの吸収抑制効果を試験した。

ヒポキサンチン 5mgZ^を含む被検液（対照群）およびこの被検液にさらに L一システィン 1 5 mgZ ¾?を加えた液（実験群）に、それぞれ [8— ¹⁴ C] ヒポキサンチン（4 9. 0 m C i / mmol 、 2 5 0 C i / 1? ) を 1 0 C iノ》Πこなるように添加混和し、これらをそれぞれラットに体重 1 0 0 g当たり 1 ¾ の投与量で経口ゾンテを用いて経口投与した。ついで、投与から 1 5分後、 3 0分後、 6 0分後にそれぞれ各群のラットの尾静脈より約 0 . 5 の血液を採取し、血漿を分離した。

得られた各血漿の 0 . l a?に、冷却したメ夕ノール 1 1？を加えて除蛋白を行い、 3 0 0 0回転で 1 0分間遠心分離後、上澄液 0 . 5 ffi?をバイアルに入れ、液体シンチレーター（AQUAS0L - Π ) の 1 0 ^を加えて液体シンチレーションカウンタ一にて放射活性を測定した。

得られた放射活性より、吸収されたヒポキサンチン量を血液 1 中にふくまれる [ 8— ^w C ] ヒポキサンチン相当量として表わした。その試験結果を第 5図のグラフに示す。このグラフにおいて、縦軸は血中の w C一ヒポキサンチン相当量 i n g w!l ) を、横軸は被検液の径ロ投与後の時間（分）を示している。また。（1)は実験群（L —システィンを含む被検液を使用）を、（2)は対照群（L一システィンを含まない被検液を使用）をそれぞれ示す。なお、プロットされた各値は各群ラット（n == 3 ) の平均疸である。

また、試験化合物として L一メチォニンを用い、核酸塩基としてゥラシルを用いて前記と同様にして試験した。その結果を上記各図と同様にして第 6図に示す。

各グラフにおいて、（1)は実験群（有効成分化合物を含む被検液を使用）を、（2)は対照群（有効成分化合物を含まない披検液を使用）をそれぞれ示す。また、プロットされた各値は各群ラット（ n = 2 〜 3 ) の平均値である。笫 1図〜第 6図から、本発明の有効成分化合物は血清中の核酸塩基濃度を顕著に低下させていることがわかる。

Claims

請求の範囲

― 式：

S - R2 一 C O O H

(式中、 R¹ は水素原子または低級アルキル基、 R² はァミノ基を有することのある低級ァルキレン基である）で示されるチォ低級アル力ン酸またはその塩を有効成分として含有し、生体内で核酸塩基の吸収を抑制するために生体内に摂取される核酸塩基の吸収抑制組成物。

2. 上記 Ri が水素原子、 R2 がアミノ基を有する低級アルキレン基である請求の範囲第 1項記載の核酸塩基の吸収抑制組成物。

3. 上記 R¹ が低級アルキル基、 R2 がアミノ基を有する低級ァルキレン基である請求の範囲第 1項記載の核酸塩基の吸収抑制組成物 _P

4. 上記チォ低級アル力ン酸が L一システィンである請求の範囲 ' 第 1項記載の核酸塩基の吸収仰制組成物。

5. 上記チォ低級アルカン酸が L一メチォニンである請求の範囲第 1項記載の核酸塩基の吸収抑制組成物。

6. 経口摂取される形態に調製される請求の範囲第 1項記載の核酸塩 ¾の吸収抑制組成物。

7. 上記 Ri が水素原子、 R2 がアミノ基を有する低級アルキレン基である請求の範囲第 6項記載の核酸塩基の吸収抑制組成物。

8. 上記 RJ が低級アルキル基、 R2 がアミノ基を有する低级ァルキレン Sである請求の範囲第 6項記載の核酸塩基の吸収抑制組成物。

9 . 上記チォ低級アル力ン酸が L一システィンである請求の範囲第 6項記載の核酸塩基の吸収抑制組成物。

1 0 . 上記チォ低級アルカン酸が L一メチォニンである請求の範囲第 6項記載の核酸塩基の吸収抑制組成物。