UA86355U - Спосіб визначення ампліфікації гена mycn у дітей, хворих на нейробластому - Google Patents
Спосіб визначення ампліфікації гена mycn у дітей, хворих на нейробластому Download PDFInfo
- Publication number
- UA86355U UA86355U UAU201308500U UAU201308500U UA86355U UA 86355 U UA86355 U UA 86355U UA U201308500 U UAU201308500 U UA U201308500U UA U201308500 U UAU201308500 U UA U201308500U UA 86355 U UA86355 U UA 86355U
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- musm
- amplification
- gene
- neuroblastoma
- dna
- Prior art date
Links
- 230000003321 amplification Effects 0.000 title claims abstract description 31
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 title claims abstract description 15
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 101150022024 MYCN gene Proteins 0.000 title abstract 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 12
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 20
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 claims description 5
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 abstract description 3
- 108700012912 MYCN Proteins 0.000 abstract 1
- 102000055056 N-Myc Proto-Oncogene Human genes 0.000 abstract 1
- 108700026495 N-Myc Proto-Oncogene Proteins 0.000 abstract 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 15
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 235000011449 Rosa Nutrition 0.000 description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 5
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 5
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 5
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- QDHHCQZDFGDHMP-UHFFFAOYSA-N Chloramine Chemical compound ClN QDHHCQZDFGDHMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 3
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 3
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 3
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 3
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 3
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 210000000574 retroperitoneal space Anatomy 0.000 description 2
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 2
- 101150082201 ASIP gene Proteins 0.000 description 1
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010007953 Central nervous system lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 208000016800 primary central nervous system lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000006163 transport media Substances 0.000 description 1
Abstract
Спосіб визначення ампліфікації гена MYCN у дітей, хворих на нейробластому, включає дослідження методом полімеразно-ланцюгової реакції з використанням специфічних праймерів. Полімеразно-ланцюгову реакцію проводять з використанням специфічних TaqMan-зондів MGB-типу з детекцією результатів в режимі реального часу та при виявлені в пухлинній клітині ампліфікацію гена MYCN більше 10 копій, прогнозують несприятливий перебіг захворювання.
Description
Корисна модель належить до медицини, а саме - онкології, і може бути використана для визначення наявності ампліфікації гена МУСМ в пухлинних клітинах у дітей, хворих на нейробластому.
Нейробластома складає 7-11 95 загальної кількості злоякісних новоутворень у дітей, займаючи четверте місце у структурі онкологічної захворюваності дітей після гострих лейкозів, пухлин центральної нервової системи та злоякісних лімфом. Частота виникнення нейробластом становить 0,85-1,1 на 100 тисяч дітей віком до 15 років. Віковий розподіл неоднорідний, частота виявлення цієї пухлини з віком зменшується. 90 95 хворих - новонароджені та діти віком до 6 років ПІ.
Важливе значення, особливо при використані сучасної протокольної терапії, є виявлення специфічних онкогенів на молекулярно-генетичному рівні з використанням полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) в режимі реального часу. Головна перевага ПЛР - її унікальна чутливість при досить невисокій вартості проведення досліджень. Метод дозволяє встановити несприятливий прогноз перебігу захворювання і точно визначити "групи ризику" хворих, з можливістю забезпечення оптимізації програм терапії вже на перших етапах лікування |21.
Нейробластома із агресивним перебігом характеризуються множинними сегментними абераціями хромосом та ампліфікацією гена МУСМ. Ген МУСМ є центральним стратифікаційним біологічним маркером, розташованим в дистальній частині короткого плеча 2- ої хромосоми (2ра24) та ампліфікується в пухлинних клітинах нейробластоми. Ампліфікація гена
МУСМ зазвичай досягає від 10 до 400 копій гена в пухлинній клітині з відповідним високим рівнем експресії, спостерігається у 25 95 первинних пухлин і корелює з прогресуючою стадією захворювання та резистентністю до лікування і дозволяє стратифікувати хворих дітей на нейробластому за групами ризику ІЗІ.
За прототип вибрано спосіб визначення ампліфікації гена МУСМ у зразках пухлинної тканини у дітей, хворих на нейробластому |Оцапійайме ВНеаїЇ-їйте РОСА ог диїсК зітийапеоив5 деїептіпаїйоп ої Шегару-зігаїйуіпд тапгкетз МУСМ атріїйісайоп, аеїейоп Тр апа 1194 / М. Воєпзспи,
А. Орепиег, М. РізсеНег Геї а!) // Оіадп. Мої. Раїйо!ї.-2005. - Мої. 14, Мо 3. - Р. 177-182, за яким використовують метод кількісної полімеразної ланцюгової реакції з використанням флуоресцентного барвника 5УВАСтееєп. Проведення аналізу включає такі етапи: виділення ДНК
Зо з біологічного матеріалу, ампліфікацію досліджуваної ділянки методом ПЛР з використанням двох пар специфічних праймерів та рлуоресцентного барвника 5УВРСтгееп, детекцію продуктів реакції методом кількісної ПЛР в режимі реального часу.
Позитивним в прототипі є те, що метод молекулярно-генетичного аналізу є досить чутливим та специфічним, і дозволяє виявити ампліфікацію гена у біологічному матеріалі.
Недоліком прототипу є те, що метод є трудомістким процесом та недостатньо чутливим при використанні флуоресцентного барвника 5УВВАСИтееп і допускає виникнення хибно позитивних результатів.
В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалити спосіб визначення ампліфікації гена МУСМ у дітей, хворих на нейробластому, методом полімеразної ланцюгової реакції з детекцією результатів в режимі реального часу з використанням специфічних ТадМап-зондів
МавВ-типу та з більш високою специфічністю гібридизації, що дасть можливість стратифікувати хворих за "групами ризику", підвищити точність прогнозування перебігу захворювання з можливістю подальшої оптимізації програм терапії.
Поставлена задача вирішується наступним чином:
Біоптат пухлини поміщали в мікропробірки, які містили 0,3 мл середовища для транспортування виробництва "Атбріоп", США, для стабілізації ДНК. Матеріал призначений для виділення ДНК, зберігався при температурі 2-8 "С протягом 1 доби або довготривало при - 7076.
Парафінізовану тканину звільняли від парафіну методом депарафінізації за допомогою ксилолу, згідно з методичними рекомендаціями (5). Геномну ДНК з пухлинної тканини виділяли методом адсорбції нуклеїнових кислот на "віїйса" мембрані за допомогою колонок "СОІАатрОМА
Міпіки" (ОІАСЕМ", США), згідно з рекомендаціями фірми-виробника. Для роботи з ДНК використовували тільки одноразові стерильні пластикові матеріали, з маркуванням "Нпазе-ігее", "Опазе-їтеє". Використаний пластиковий посуд (пробірки, наконечники) знезаражували в спеціальному контейнері, який містить дезінфікуючий 5 95-ний розчин хлораміну або 1Н розчин соляної кислоти.
Отриманий зразок ДНК одразу використовували для постановки полімеразної ланцюгової реакції або зберігали (впродовж 7 днів при 2-8 "С, впродовж 1 року при температурі мінус 20 7 та довготривало при -70 "С).
Перед проведенням реакції ампліфікації концентрацію отриманої ДНК доводили до 10-20 нг/мкл. Вимірювання концентрації ДНК проводили методом спектрофотометрії на спектрофотометрі МапоОгор1000 ("Тнептовсієпійіс", США).
Послідовності праймерів та ТадМап зондів були підібрані нами з використанням програми
Ргітег Ехргез5Ф Боїймаге м3.0 ("АрріїєдВіовувієтв", США) та синтезовані фірмою "АрріїєаВіозувієтв" (США): - прямий праймер В-асіїп - "ТСАСССАСАСТАТаСССАТСТАСОАЗ: - зворотній праймер ВД-асіїп - З СОСОК АССОСТСАТТОССА АТО КУ - флюоресцентний зонд В-асійп -
ОБАМА СС СССАТССАТСОСТОСЮТ -ТАМКА - прямий праймер МУСМ - З ССССТОСОСЕСТОСОСССОС ТЕКУ - зворотній праймер МУСМ - У ССС АС АСВ АСТСАЛЕЮТУ - флюоресцентний зонд МУСМ -
УК СССАСССТСТОСИСТО ТО СТО СОТ. ТАМЕА
Праймери використовували в концентрації ЗО нМ/т!, та зонди в концентрації 20 нМ/т!1. Для проведення реакції ампліфікації готували реакційну суміш: 1 мкл прямий праймер (МУСМ), 1 мкл зворотній праймер (МУСМ), 1 мкл флюоресцентний зонд (МУСМ), 1 мкл прямий праймер (В- асійп), 1 мкл зворотній праймер (В-асійпй), 1 мкл флюоресцентний зонд (В-асійп) 1,5 мкл ПЛР- води, 12,5 мкл ТадМап Опімегзаї РОСА Мавієї Міх ("Арріїєй Вуозузіетв", США). До суміші додавали 5 мкл розчину ДНК.
Ампліфікацію проводили на приладі 7300/7500 Аеаі-Тіте РОСА Бувієтв, "Арріїєа
Віозувзівєтв", (США), використовуючи наступний температурний режим: початок ампліфікації при 9570-5 хв, накопичення ампліфікаційного продукту протягом 50 циклів 94 "0-3 с, 58 70-6 б. і 7270-27 б. та стадія дисоціації (розділення отриманих продуктів за температурою плавлення) 95 70-15 с, 60 "0-30 с, 95 70-15 б.
Після закінчення реакції ампліфікації проводили облік одержаних результатів в режимі реального часу, згідно з рекомендаціями фірми-виробника приладу. Кількість копій гена МУСМ розраховують за формулою: хе 2 сі
Ко) де х - кількість копій гена МУСМ,
Дої-сі (В-асіїп) - сії (МУСМ) (б.
Як негативний контроль використовували ДНК, отриману з тканини головного мозку, а позитивний - ДНК зразків з верифікованою ампліфікацією гена МУСМ.
Відсутність ампліфікації гена МУСМ в пухлинній клітині свідчить про сприятливий перебіг захворювання та дозволяє оптимізувати програму терапії хворого. Виявлення більше 10 копій ампліфікації гена МУСМ в пухлинній клітині свідчить про несприятливий перебіг захворювання та відносить хворих до "групи високого ризику".
Переконливими прикладами ефективності запропонованого способу є представлені результати молекулярно-генетичних досліджень біологічного матеріалу хворих.
Ї Хворий Б. Д. Д. 2007 р. н., (амб. медична карта Мо 113523). Госпіталізований на консультацію в Національний інститут раку з діагнозом нейробластома лівого наднирника, з метастазами в печінку, парааортальні лімфовузли, кістковий мозок. Патогістологічний висновок (ПГ3) Мо 62117 від 02.12.201: нейробластома лівого наднирника, з метастазами печінку парааортальні лімфовузли, кістковий мозок, 4 стадія. В 2011 року було проведено операцію по резекції пухлини.
У хворого отримували біопсійний матеріал пухлини до лікування. Біоптат пухлини поміщали в мікропробірки, які містили 0,3 мл середовища для транспортування виробництва "Атрбіоп", (США), для стабілізації ДНК. Матеріал призначений для виділення ДНК, зберігався при температурі 2-8 "С протягом 1 доби або довготривало при -70 "С.
Парафінізовану тканину звільняли від парафіну методом депарафінізації за допомогою ксилолу, згідно з методичними рекомендаціями. Геномну ДНК з пухлинної тканини виділяли методом адсорбції нуклеїнових кислот на "віїйса" мембрані за допомогою колонок "СОІАатрОМА
Міпіки" (ОІАСЕМ", США), згідно з рекомендаціями фірми-виробника. Для роботи з ДНК використовували тільки одноразові стерильні пластикові матеріали, з маркуванням "Нпазе-ігее", "Опазе-їтеє". Використаний пластиковий посуд (пробірки, наконечники) знезаражували в спеціальному контейнері, який містить дезінфікуючий 5 95-ний розчин хлораміну або 1Н розчин соляної кислоти.
Отриманий зразок ДНК одразу використовували для постановки полімеразної ланцюгової реакції або зберігали (впродовж 7 днів при 2-8 "С, впродовж 1 року при температурі мінус 207 бо та довготривало при -70 "С).
Перед проведенням реакції ампліфікації концентрацію отриманої ДНК доводили до 10-20 нг/мкл. Вимірювання концентрації ДНК проводили методом спектрофотометрії на спектрофотометрі МапоОгор1000 ("Тнептовсієпійіс", США).
Послідовності праймерів та ТадМап зондів були підібрані нами з використанням програми
Ргітег Ехргез5Ф Боїймаге м3.0 ("АрріїєдВіовувієтв", США) та синтезовані фірмою "АрріїєаВіозувієтв" (США): - прямий праймер р-асіп - ГТС АСССАСАСТОТОСССАТСТАСОСАВ - зворотній праймер р-асііп - З САОСОСААССОСТСАТТОССААТОАВ - флуоресцентний зонд р-асійп - -БАМ АТС ССТОССССАТОССАТОСТОСИТ-ТА МВА - прямий праймер МУСМ - З -СССТОСКСТСТОССОССТТУ - зворотній праймер МУСМ - МОНА АСТАСААСТСАТСТТВЕ - флуоресцентний зонд МУСМ -
АОС ССС ОО ССО ГГ ТАМКА
Праймери використовували в концентрації ЗО нНМ/Лп1, та зонди в концентрації 20 нМ/ті!1.
Для проведення реакції ампліфікації готували реакційну суміш: 1 мкл прямий праймер (ММСМ), 1 мкл зворотній праймер (МУСМ), 1 мкл флуоресцентний зонд (МУСМ), 1 мкл прямий праймер (В-асійп), 1 мкл зворотній праймер (р-асіїп), 1 мкл флуоресцентний зонд (В-асійп) 1,5 мкл ПЛР- води, 12,5 мкл ТадМап Опімегзаї РОСА Мавієї Міх ("Арріїєй Вуозузіетв", США). До суміші додавали 5 мкл розчину ДНК.
Ампліфікацію проводили на приладі 7300/7500 Аеаі-Тіте РОСА Бувієтв, "Арріїєа
Віозузієтв", США, використовуючи наступний температурний режим: початок ампліфікації при 9570-5 хв, накопичення ампліфікаційного продукту протягом 50 циклів 94 70-3 с, 58 "0-6 с і 7270-27 б. та стадія дисоціації (розділення отриманих продуктів за температурою плавлення) 95 70-15 с, 60 "0-30 с, 95 706-156
Після закінчення реакції ампліфікації проводили облік одержаних результатів в режимі реального часу, згідно з рекомендаціями фірми-виробника приладу. Кількість копій гена МУСМ розраховують за формулою: х-2га
Ко) де х - кількість копій гена МУСМ,
Дої-сі (В-асіїп) - сі (МУСМ).
Як негативний контроль використовували ДНК, отриману з тканини головного мозку, а позитивний - ДНК зразків з верифікованою ампліфікацією гена МУСМ.
В результаті досліджень у хворого не було виявлено ампліфікацію гена МУСМ методом ПЦР в режимі реального часу, що свідчити про сприятливий перебіг захворювання. Хворому проведено 8 блоків хіміотерапії по протоколу СОЦЕК після операції. Спостерігається повна відповідь у хворого на лікування та 19 місячна ремісія.
Я. Хворий В.А.В. 2006 р. н. (амб. медична картка Мо 900581). Госпіталізований на консультацію в Національний інститут раку з діагнозом нейробластома заочеревинного простору справа. ПГЗ Мо 4/2009 від 12.01.2009 нейробластома заочеревинного простору справа, З стадія.
У хворого отримували біопсійний матеріал пухлини до лікування. Біоптат пухлини поміщали в мікропробірки, які містили 0,3 мл середовища для транспортування виробництва "Атрбіоп", (США), для стабілізації ДНК. Матеріал призначений для виділення ДНК, зберігався при температурі 2-8 "С протягом 1 доби або довготривало при -70 "С.
Парафінізовану тканину звільняли від парафіну методом депарафінізації за допомогою ксилола, згідно з методичними рекомендаціями.
Геномну ДНК з пухлинної тканини виділяли методом адсорбції нуклеїнових кислот на "віїїса" мембрані за допомогою колонок "ОІАатрОМА Міпіки" ("СОІАСЕМ", США), згідно з рекомендацією фірми-виробника. Для роботи з ДНК використовували тільки одноразові стерильні пластикові матеріали, з маркуванням "Нпазе-їтеє", "Опавзе-їеєєе". Використаний пластиковий посуд (пробірки, наконечники) знезаражували в спеціальному контейнері, який містить дезінфікуючий 5 уо-ний розчин хлораміну або 1Н розчин соляної кислоти.
Отриманий зразок ДНК одразу використовували для постановки полімеразної ланцюгової реакції або зберігали (впродовж 7 днів при 2-8 "С, впродовж 1 року при температурі мінус 20 "С та довготривало при -70 "С).
Перед проведенням реакції ампліфікації концентрацію отриманої ДНК доводили до 10-20 нг/мкл. Вимірювання концентрації ДНК проводили методом спектрофотометрії на спектрофотометрі МапоОгор1000 ("Тнептовсієпійіс", США).
Послідовності праймерів та ТадМап зондів були підібрані нами з використанням програми
Ргітег Ехргез5Ф Боїймаге м3.0 ("АрріїєдВіовувієтв", США) та синтезовані фірмою "АрріїєаВіозувієтв" (США): - прямий праймер Р-асіп - З ТСАСССАСАСЄТО ОСОСАТСТАСВАХУ - зворотній праймер Р-асіїп - З САССОЗАЛОСОСТСАТТОССААТОА Є - флуоресцентний зонд Р-асіїйп - еКАМ АНТ КАТ САС ТА МКА - прямий праймер МУСМ -
КОТ ОО СОС
- зворотній праймер МУСМ -
ГО ААСТАСААСТСАТСТТК
- флуоресцентний зонд МУСМ - ув АС АССЦСТСТОСОО ОСТ СО ОТГ А ТАМ
Праймери використовували в концентрації ЗО нМ/т!, та зонди в концентрації 20 нМ/т!1. Для проведення реакції ампліфікації готували реакційну суміш: 1 мкл прямий праймер (МУСМ), 1 мкл зворотній праймер (МУСМ), 1 мкл флуоресцентний зонд (МУСМ), 1 мкл прямий праймер (ВД- асінп), 1 мкл зворотній праймер (р-асііп), 1 мкл флуоресцентний зонд (В-асіїп) 1,5 мкл ПЛР-води, 12,5 мкл ТадМап Опімегза! РОСА Мавієг Міх ("Арріїеєд Вуозузієтв", США). До суміші додавали 5 мкл розчину ДНК.
Ампліфікацію проводили на приладі 7300/7500 Аеаі-Тіте РОСА Бувієтв, "Арріїєа
Віозузієтв", США, використовуючи наступний температурний режим: початок ампліфікації при 9570-5 хв, накопичення ампліфікаційного продукту протягом 50 циклів 94 "0-3 с, 58 70-6 б. і 7270-27 б. та стадія дисоціації (розділення отриманих продуктів за температурою плавлення) 95 70-15 с, 60 "0-30 с, 95 "С-15 с.
Після закінчення реакції ампліфікації проводили облік одержаних результатів в режимі реального часу, згідно з рекомендаціями фірми-виробника приладу. Кількість копій гена МУСМ розраховують за формулою: хе 2 сі де х - кількість копій гену МУСМ,
Зо Деї-сі (В-асіїп) - сі (МУСМ).
Як негативний контроль використовували ДНК отриману з тканини головного мозку, а позитивного - ДНК зразків з верифікованою ампліфікацією гена МУСМ.
В результаті досліджень методом ПЦР в режимі реального часу, у хворого було виявлено 512 копій гена МУСМ, що свідчить про належність хворого до "групи високого ризику" та передбачає поганий прогноз. Після повторного проведення досліджень методом ПЦР в режимі реального часу з використанням парафінізованого операційного матеріалу було виявлено 512 копій гена МУСМ. Хворий належить до "групи високого ризику" Йому проведено 8 блоків хіміотерапії за протоколом НА-МВІ-1/ЕБІОР. Спостерігалась неповна відповідь на лікування.
Через 1 рік у хворого розвився рецидив. Враховуючи належність хворого до "групи високого ризику" та ускладнень під час проведення хіміотерапії, прогноз захворювання несприятливий.
Таким чином, визначення наявності ампліфікації гена МУСМ в пухлинній тканині за допомогою молекулярно-генетичних методів, а саме полімеразно-ланцюгової реакції в режимі реального, дозволяє передбачити ризик виникнення несприятливого прогнозу перебігу захворювання, своєчасно визначити "групи ризику" хворих та забезпечити можливість оптимізації програм терапії вже на перших етапах лікування.
Джерела інформації: 1. Ткгадегб. Мешигобіазюта: іпсідепсе, Біоіосду апа оцісоте / С. Тгадег. - «осКНоїЇт: КагоїїпеоКа
Іпзійшес, 2009. - 56 р. 2. ВеаїЇ-їте диапійайме РОСА ог Ше теєавзигетепі ої МУСМ аптрійїісайоп іп питап пешигоріазіота м/йй Ше ТадМап аеїесійоп зузієт / С. Вадді, М. Вадпопі, сх. Топіпі Геї а // Сііп.
Спнет. - 1999. - Мої. 45, Мо 11. - Р. 1918-1924.
З. Сіїпіса! відпі'тісапсе ої МУСМ атрійісайоп апа ріоіду іп Тамогаріє-5їаде пепгобіазюта: а героп їот Ше Спіідгеп'є ОпсоЇоду Стоир / ). Зсппеіденптап, МУ. І опдоп, С. Вгодеитг Геї а!) // 9. Сіїп.
Опсо). - 2008. - Мої. 26, Ме 6. - Р. 913-918. 4. СОцапійайме Неа!-іте РСВ ог диіскК вітийапеоив дегептіпаїйоп ої Іегару-в5ігайуїпу таке
МУСМ атріїйісайоп, адеїейоп Тр апа 114 / М. Воепзсі, А. Обепиег, М. РізеНег Геї а. // Оіадп. Мої.
Раїної. - 2005. - Мої. 14, Мо 3. - Р. 177-182 (прототип). 5. Виділення нуклеїнових кислот з клінічного матеріалу: методичні рекомендацій / Н.Г.
Горовенко, 3.1. Россоха, С.В. Подольська |га ін.|. - К., 2010. - 39 с.
6. біпда! А. Титог таКегз іп реаіайіс зоїїд їштогз / А. Зіпдаї, 5. Адагмаїа // 9. Іпаіап. Авзвос
Реадіаїг. Зигу. - 2005. - Мої. 10, Мо 3. - Р. 183-190.
Claims (1)
- ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІСпосіб визначення ампліфікації гена МУСМ у дітей, хворих на нейробластому, що включає дослідження методом полімеразно-ланцюгової реакції з використанням специфічних праймерів, який відрізняється тим, що полімеразно-ланцюгову реакцію проводять з використанням специфічних ТадМап-зондів МОЕВ-типу з детекцією результатів в режимі реального часу та при виявлені в пухлинній клітині ампліфікацію гена МУСМ більше 10 копій, прогнозують несприятливий перебіг захворювання.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU201308500U UA86355U (uk) | 2013-07-08 | 2013-07-08 | Спосіб визначення ампліфікації гена mycn у дітей, хворих на нейробластому |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU201308500U UA86355U (uk) | 2013-07-08 | 2013-07-08 | Спосіб визначення ампліфікації гена mycn у дітей, хворих на нейробластому |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA86355U true UA86355U (uk) | 2013-12-25 |
Family
ID=52286027
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAU201308500U UA86355U (uk) | 2013-07-08 | 2013-07-08 | Спосіб визначення ампліфікації гена mycn у дітей, хворих на нейробластому |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA86355U (uk) |
-
2013
- 2013-07-08 UA UAU201308500U patent/UA86355U/uk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20220325350A1 (en) | Methods, compositions, and devices for rapid analysis of biological markers | |
| US20230348971A1 (en) | Transposition into native chromatin for personal epigenomics | |
| US20230181173A1 (en) | Methods, compositions, kits and devices for rapid analysis of biological markers | |
| JP2019201658A (ja) | 非干渉性、ノイズキャンセル性のポリヌクレオチド識別タグを用いたマルチプレックスパイロシーケンシング | |
| Kanduri et al. | Distinct transcriptional control in major immunogenetic subsets of chronic lymphocytic leukemia exhibiting subset-biased global DNA methylation profiles | |
| ES2767853T3 (es) | Detección de la restricción de cadena ligera de inmunoglobulina por hibridación in situ de ARN | |
| Afrin et al. | Targeted next-generation sequencing for detecting MLL gene fusions in leukemia | |
| Wang et al. | Nanolock–nanopore facilitated digital diagnostics of cancer driver mutation in tumor tissue | |
| JP4317854B2 (ja) | 微量胃癌細胞の検出法 | |
| JP2018504123A5 (uk) | ||
| US20240084389A1 (en) | Use of simultaneous marker detection for assessing difuse glioma and responsiveness to treatment | |
| UA86355U (uk) | Спосіб визначення ампліфікації гена mycn у дітей, хворих на нейробластому | |
| CN103866024A (zh) | 基于焦磷酸测序的检测结核分枝杆菌已胺丁醇耐药性的方法 | |
| US20220056539A1 (en) | Molecular pathogenesis of microcarcinoma of the thyroid | |
| JP6551656B2 (ja) | 卵巣癌に関する情報の取得方法、ならびに卵巣癌に関する情報を取得するためのマーカーおよび卵巣癌検出用キット | |
| WO2022226237A1 (en) | Methods to analyze host-microbiome interactions at single-cell and associated gene signatures in cancer | |
| Beaver et al. | Circulating cell-free DNA for molecular diagnostics and therapeutic monitoring | |
| EP2818865A1 (en) | Method for the identification of effective drugs |