UA76074C2 - Calmophil, pharmaceutical composition for substitution therapy aimed at recovering malfunctioned surfactant system of lungs - Google Patents

Description

Опис винаходу

Винахід відноситься до фармацевтичної промисловості, а саме до технології одержання лікарських засобів з 2 тканин морських гідробіонтів і може бути використаний як лікувальний засіб для відновлення функцій сурфактантної системи людини при її розладах.

Аналіз сучасної інформації вказує, що сурфактант легенів є сумішшю ліпідів та білків, які синтезуються і секретуються в альвеолярній рідині епітелі«альними клітинами другого типу, що вистилають легеневі альвеоли та зменшують поверхневий натяг. Головна функція сурфактанту - зниження поверхневого натягу при стані 70 легені-повітря/рідина з утворенням поверхнево-активної плівки, яка містить ліпідний моношар, збагачений дипальмітоїлфосфатидилхоліном (ДПФХ) до (40-50)95о. ДПФХ вміщує 2-насичені ацильні ланцюги. Ліпіди з ненасиченими жирними кислотами можуть щільно пакуватись в моношари. Ненасичені ліпіди розглядаються як дуже важливі для функції сурфактанту в зв'язку з тим, що рідинність сурфактантної плівки захищає плівку від жорсткості. До складу поверхнево-активних речовин (ПАР) новонароджених дітей входять такі фракції 12 фосфоліпідів, як ДПФХ, фосфатидилетаноламін (ФЕА), фосфатидилсерин (ФС), фосфатидилгліцерид (ФГ), сфінгомієлін, (СМ), фосфатидилінозитол (ФІ), фосфатидна кислота. В складі жирних кислот рідинних фосфоліпідів найбільшу перевагу має пальмітинова кислота.

Оскільки ряд захворювань легенів є наслідком недостачі сурфактанту, основою специфічного проявлення відомих препаратів-сурфактантів як природних, так і штучних є заміщувальна терапія (11).

ДПФХ є єдиним міцним фактором зниження поверхневого натягу, який відповідає за властивості зниження поверхневого натягу легеневого сурфактанту сумісно з іншими фосфоліпідами, а також із сурфактантом апопротеїну (білкові речовини, що підсилюють адсорбцію сурфактанту). Вважається, що фосфатидилхолін (ФХ),

ФЕА, ФГ і ФІ вносять значний вклад у підсилення властивостей розповсюдження та адсорбції легеневого сурфактанту. с 29 Відомо, що натуральний легеневий сурфактант включає суміш багатьох сполук, де головним є (39 дипальмітоїлФфХ, а саме 1,2-дипальмітоїл,З-гліцероФуХ - 4195, холестерол - біля 995, суміш білків - 995, ФЕА - 5905.

ФГі ФС - 496, ФІ- 296, СМ - 195, жирні кислоти - 195. Вказані компоненти можуть бути використані при дихальній недостатності, яка є супутником "респіраторного дистрес-синдрому" (РДС) у дорослих і дітей, який характеризується дефіцитом легеневого сурфактанту при захворюванні "гіалінових мембран" у новонароджених, З а також при порушеннях біосинтетичних процесів в альвеолоцитах другого типу, що виробляють сурфактант. ча

Пошкодження сурфактанту може викликатись як гіпоксією, так і гіпероксією, інфекцією дихальних шляхів.

Широкий діапазон етіологічних факторів підкреслює актуальність проблеми недостатності сурфактанту, яка може о виникнути в любому віці, особливо в реанімаційних хворих при штучній вентиляції легенів (21. Ге)

Відомо про замісну терапію для відновлення втраченого сурфактанту тварин. В зв'язку з цим виникає необхідність одержання штучних аналогів сурфактанту на основі підбору компонентів, які подібні за складом в речовинам природного сурфактанту. Показано позитивний вплив екзогенних сурфактантів із легенів корови |З| |і амніотичної рідини |4), які вводили дітям з дихальним синдромом. При цьому не було виявлено побічних токсичних ефектів. «

З встановленням факту, що штучний сурфактант зменшує тяжкість захворювання дихальних розладів і З 70 попереджує захворювання, проводиться пошук і створення синтетичних сурфактантноподібних засобів для с лікування синдрому РДС. Для отримання швидкого зниження поверхневого натягу легенів можливе

Із» використання ліпідної суміші, подібної легеневому сурфактанту іп мімо, яка складається з гетерогенної суміші ліпідів, що включає ДПФХ та інші фосфоліпіди з більш низькою температурою плавлення. В зв'язку з цим є актуальним і необхідним пошук фосфоліпідних сумішей природного походження, які були б близькі за своїм складом до сурфактанту і могли б використовуватися для лікування людини з недостатністю сурфактанту. і Відомо одержання штучного сурфактанту на основі ДПФХ або фосфоліпідної суміші в різних концентраціях,

Ге») до складу яких входять такі компоненти, як цукри, амінокислоти, спирти та жирні кислоти І|5). При клінічних і фармакологічних випробуваннях не всі штучні сурфактанти виявляють високу ефективність. о Відомо декілька синтетичних сурфактантів ("Есховум" - США (61, "Аіек" - Велика Британія), напівсинтетичні -і 20 ("Зигмапіа" - КО - США), природні ("Куросурф" - США) ГИ.

Відомий патент, де представлено застосування сумішей фосфоліпідів і нейтральних ліпідів як заміщувальної

Т» сурфактантної терапії різних форм РДС. Ці суміші показали значне підвищення поверхнево-активних ліпідів при використанні штучного сурфактанту |8І.

Відомо про компонент, що забезпечує активність композицій - аналогів препаратів для заміщувальної 29 сурфактантної терапії легеневих захворювань на основі гідрованого соєвого ФХ (фосфоліпон-90ОН) як активного

ГФ) компоненту ІФ), що забезпечує поверхнево-активні властивості препарату для заміщувальної сурфактантної терапії. о Відомо про вплив короткострокового ентерального вживання омега-3 ліпідів на жирнокислотний склад легенів макрофагів і сурфактантні фосфоліпіди, що підтверджує швидку модифікацію мембранних фосфоліпідів і 60 поліненасичених жирних кислот (ЖК) |10).

На даний час є важливі досліди, які вказують, що дефіцит есенціальних ЖК та фосфоліпідів впливає на розвиток різних захворювань і, в тому числі, свідчать про проявлення клініки захворювання легенів і недостатність сурфактанту. Це може бути пов'язано з відсутністю в організмі хворих поліненасичених ЖК та есенціальних фосфоліпідів (111. бо Існує гіпотеза, що низький рівень легеневих захворювань ескімосів є наслідком особливості харчування, в якому виявлено значний вміст ПНЖК «-3 та х-6.

Імовірно, що ПНЖК переводять продукцію ейкозаноїдів на інший шлях синтезу від арахідонової кислоти.

Таким чином, відбувається зменшення продукції бронхозвужуючих лейкотриєнів. Дослідження на тваринах показали, що додавання ейкозапентаєнової (ЕПК) або гама-ліноленової кислоти тваринам, які були під дією ендотоксинів, приводить до зменшення дії останніх на тромбоксан В-2 і підвищує стійкість легеневих судин (121. Є деякі відомості про те, що додавання ЕПК приводить до збільшення її вмісту у складі фосфоліпідів та до зменшення утворення лейкотриєнів у нейтрофілах. У зв'язку з цим захисний вплив ПНЖК при легеневих хворобах біологічно ймовірний. Результати епідеміологічних випробувань показали можливість захисних ефектів 7/0. ПНЖК проти астми у дітей і позитивні результати їх дії на бронхіти. Також показано, що споживання морських риб може захистити від епідемій та хронічних бронхітів. В останні роки омега-3 ПНЖК у вільному вигляді або в складі риб'ячого жиру використовуються для лікування деяких хвороб. Але відомо, що вільні омега-3 ПНЖК як нестабільні речовини можуть окислюватися в препаратах і в організмі при недостатності антиоксидантів. В той же час в складі фосфоліпідів ПНЖК проявляють стабільну резистентність до окислювальної деградації (ІЗ). Крім 75 цього відомо, що омега-3 ПНЖК в дієті швидко включаються в мембрани фосфоліпідів альвеолярних макрофагів, легенів і сурфактанту. Було також показано, що фосфоліпіди з омега-3 ПНЖК більш активно включаються в мембрани клітин ніж вільні ЖК - ЕПК і ДГК. При цьому омега-3 ПНЖК специфічно збільшуються в мембранних фосфоліпідах і не конкурують із зменшенням рівня арахідонової кислоти, яка є найбільш важливою омега-6 у складі ЖК фосфоліпідів у біологічних мембранах у порівнянні з ейкозапентаєновою кислотою.

В основу винаходу поставлено розробку способу одержання лікувального засобу для відновлення сурфактантної системи легенів при її розладах шляхом застосування нового способу обробки репродуктивних органів із морських гідробіонтів для одержання природного поверхнево-активного лікарського засобу на основі комплексу фосфоліпідів із омега-3 ПНЖК у структурі, що включають плазмалогенні фосфоліпіди, регуляторні коротколанцюгові пептиди та амінокислоти, якому притаманні поверхнево-активні властивості сурфактанту і с

Який, таким чином, виявляє позитивні властивості у якості заміщувальної терапії при розладах системи сурфактанту. Одержаний засіб забезпечує підвищення поверхневої активності та зменшення антигенних о властивостей.

Поставлена задача вирішується тим, що спосіб одержання лікувального засобу (торговельна марка - "Кальмофіл") для відновлення порушень сурфактантної системи людини, включає подрібнення сировини «І

Зо репродуктивних органів морських гідробіонтів (молочко, ікра головоногих молюсків - кальмарів та морських риб) у замороженому стані, екстракцію сировини етанолом, відокремлення етанольного екстракту від залишків в сировини фільтрацією, упарювання етанольного екстракту до остаточного видалення етанолу, очищення о одержаної фракції від похідних вуглеводнів, ефірів ЖК, продуктів окислення холестеролу та його ефірів перерозчиненням ліпід-білкової фракції в гексані, додаванням до гексанової фракції (5-15)95-го водного розчину ее, 10мММ Сасі» в етанолі у співвідношенні 1:5 та 1:10, відокремлення гексанового шару від спиртово-водної ї- фракції, додавання до гексанової фракції вітаміну Е до концентрації не менше 0,0595 і після упарювання гексанової фракції одержані ліпіди суспендують протягом 30-60 хвилин в фізіологічному розчині, додають гепарин у співвідношенні ПАР-.фізіологічний розчинтепарин - 1:100:(0,1-0,115), а отримані ліпосоми ліофілізують та одержують субстанцію кінцевого продукту. «

До складу ПАР з гонад кальмарів входять: фосфоліпіди-(75-85)9о серед яких основний - ФХ, що вміщує до 8 с (27-35)96 пальмітинової кислоти, (16-17)96 ейкозапентаєнової кислоти, (17-18)90 докозагексаєнової кислоти, в й тому числі плазмалогенні фосфоліпіди (плазменілфосфатидилхолін і плазменілфосфатидилетаноламін), які «» ефективно зменшують поверхневий натяг (14), загальний холестерол (0,5-2,5)95, ефіри жирних кислот (0,1-0,5)965, вуглеводи (0,1-0,5)905, вільні ЖК (0,1-2,8)95, амінокислоти (5-7мг/мл), вітамін Е не більше гепарин (0,1-0,15390 (21.

При дослідженні складу компонентів сурфактанту - поверхнево-активних речовин (ПАР) з морських організмів -і виявлена їх подібність до складу ПАР, вилучених з тканин легенів (таблиця 1, 2).

Ф о

Компоненти ПАР з морських Компоненти ПАР з їх й о ю во

Плазмалогени (плазменілфосфатидилетаноламін, плазменілфосфатидилхолін) 0,1-0,5 Вуглеводи б5 мкг/мл мкг/мл мг/мл гідролізаті, мкг/мл " /сурфактант/

Сукупність визначених авторами операцій способу, його режимів застосування схем і обробки репродуктивних тканин морських головоногих молюсків (кальмари) дозволяє одержати засіб з новим спектром 75 властивостей та вирішити поставлену задачу. Застосування операцій способу приводить до наступних переваг: - використання відходів рибної промисловості як сировини; - використання репродуктивних органів морських головоногих - молюсків (кальмарів) дозволяє одержати значний вміст фосфоліпідів з омега-3 ПНЖК, серед яких головним є ДПФХ з пальмітиновою кислотою та омега-3

ПНЖК в структурі, а також плазмалогенних фосфоліпідів (плазменілФЕА і плазменілфХ), цінних амінокислот, 2о включаючи значний вміст аргиніну, гліцину, а також глютамінової кислоти, які мають відношення до коротколанцюгових пептидів та пептидних біорегуляторів, які підвищують сурфактантноподібні властивості засобу; - за рахунок маніпуляції з перерозчиненням екстракту в гексані з додаванням водного розчину 10мММ Сасі»о в етанолі вдається видалити значну кількість ефірів холестеролу, жирних кислот та вуглеводнів, що покращує Га

Якість субстанції; - перевага нового способу полягає в тому, що одержана субстанція містить комплекс фосфоліпідів з омега-3 і)

ПНЖК, серед яких основний ДПФХ містить до (35-50)95 пальмітинової кислоти, до 2095 докозагексаєнової кислоти, (10-15)95 ЕПК, причому всі фосфоліпіди одержаного комплексу вміщують пальмітинову кислоту; - одержана субстанція містить регуляторні пептиди, амінокислоти, незначну кількість білку, в зв'язку з «І чим одержаний препарат не має побічної дії і не проявляє антигенних властивостей по відношенню до місцевих клітинних імунних реакцій в легенях про що свідчать експериментальні дослідження інгаляційного введення т препарату щурам з подальшим гістохімічним вивченням макрофагів. Число макрофагів при дії сурфактанту о протягом 1 години та 1, З, 7 діб не відрізняється від контролю. Наведені дані про відсутність антигенності препарату можуть бути обумовлені присутністю тільки невеликої домішки білку (0,1-0,5)96 в препараті, що є іш позитивним фактором. ч-

Використання вказаного способу має такі переваги: - значний вихід (до 8 90) біологічних ПАР із відходів морських організмів (репродуктивних органів кальмарів) у порівнянні з ПАР із легеневої тканини ссавців (до 1,596); « - покращення якості очистки за рахунок перерозчинення біологічних ПАР в гексані з додаванням спиртового розчину Сасі»; - с - проведення операції суспендування ліпідних компонентів для одержання ліпосом; ц - додавання до суміші ПАР гепарину, який покращує мікроциркуляцію кровообігу та стабілізує "» низькодисперсну структуру ліпосомного препарату; - наявність у фракції фосфоліпідів значної кількості плазмалогенів пояснює підвищення поверхневої активності сурфактантом з морських організмі; -І - спрощення способу одержання препарату; - одержана субстанція за рахунок фосфоліпідів з омега-3 ПНЖК в структурі має мембранно-протекторні та б імунно-модулюючі властивості, відновлює недостатність ПНЖК в організмі - докозагексаєнової і ав | ейкозапентаєнової та регулює вміст арахідонової кислоти, яка має відношення до синтезу простагландинів в організмі. і Короткострокове збагачення організму препаратом з фосфоліпідами омега-3 ПНЖК надає швидку модуляцію «з» мембранних фосфоліпідів легеневих тканин, альвеолярних макрофагів, легеневого сурфактанту.

Основою створеного комплексу є фосфоліпіди, серед яких головний є ДПФХ з омега-3 ПНЖК в структурі, плазмалогенні фосфоліпіди - плазменілФХ і плазменілФЕА із значною кількістю докозагексаєнової кислоти в структурі, які ефективно зменшують поверхневий натяг і стабілізують гексагональну структуру ФЛ та покращують поверхневу активність сурфактантноподібної фосфоліпідної суміші (14). До цього комплексу входять також вільні о амінокислоти із значним вмістом лізину, аргиніну, гліцину, глютамінової кислоти, які є біологічно активними ко речовинами, вітамін Е і гепарин.

Усунення новим способом одночасно значної кількості небажаних ліпідів у комплексі з білком дозволяє бо виділити субстанцію, яка за складом біологічно активних речовин має відношення до відновлення порушень функції сурфактантної системи організму і лікування легеневих захворювань, недостатності сурфактанту в організмі, хвороби гіалінових мембран новонароджених.

Суть винаходу полягає в тому, що для заміщувальної терапії легеневих захворювань та при недостатності сурфактанту особливо у новонароджених вперше виділена субстанція біологічно активних речовин з морських 65 організмів (фосфоліпіди з омега-3 ПНЖК в структурі - сурфактантноподібний комплекс), яка використовується для заміщувальної терапії легеневих захворювань, що ілюструється конкретними прикладами його здійснення та результатами дослідження одержаного кінцевого продукту - субстанції препарату.

Приклад 1 100г гонад кальмарів (молочко і ікра ) подрібнюють в замороженому стані на м'ясорубці, заливають 10 об'ємами етанолу, перемішують З години в реакторі з мішалкою, далі екстракт фільтрують, випаровують у вакуумі до повного видалення спирту. Одержану фракцію перерозчинюють в гексані у співвідношенні 1:5 при температурі (25-30)2С. У гексановий розчин додають 5906-й водний розчин 10мМ Сасі» в етанолі. Осад, що містить домішки білків і нейтральних ліпідів, після відстоювання відокремлюють, а в гексановий розчин додають вітамін Е у кількості не менше 0,05965, випарюють у вакуумі та одержують ліпідну фракцію, яку суспендують 70 протягом 30 хвилин у фізіологічному розчині, додають гепарин у кількості 0,195, ліофілізують і отримують субстанцію, яку використовують для одержання лікарської форми препарату. Вихід - 8г (8905).

Приклад 2 100г ікри кальмарів подрібнюють в замороженому стані на м'ясорубці, заливають 10 об'ємами етанолу, перемішують З години в реакторі з мішалкою, далі екстракт фільтрують, випарюють у вакуумі до повного 75 видалення спирту. Одержану фракцію перерозчинюють в гексані у співвідношенні 1:10 при температурі (25-30)20. У гексановий розчин додають 1095-й водний розчин 10мМ Сасі» в етанолі. Осад, що містить домішки білків і нейтральних ліпідів, після відстоювання відокремлюють, а в гексановий розчин додають вітамін Е у кількості не менш 0,05965, випарюють у вакуумі та одержують ліпідну фракцію, яку суспендують протягом 30 хвилин у фізіологічному розчині, додають гепарин у кількості 0,1595, ліофілізують і отримують субстанцію, яку використовують для одержання лікарської форми препарату. Вихід - 7,5г (7,590).

Приклад З 100г молочка кальмарів подрібнюють у замороженому стані на м'ясорубці, заливають 10 об'ємами етанолу, перемішують З години в реакторі з мішалкою, далі екстракт фільтрують, випарюють у вакуумі до повного видалення спирту. Одержану фракцію перерозчинюють в гексані у співвідношенні 1:5 при температурі Ге (25-30)20. У розчин гексану додають (5-15)96-й водний розчин 10мМ Сасі» в етанолі. Осад, що містить домішки (5) білків і нейтральних ліпідів, після відстоювання відокремлюють, а в розчин гексану додають вітамін Е у кількості не менш 0,0595 і випарюють у вакуумі. Одержану ліпідну фракцію суспендують протягом ЗО хвилин у фізіологічному розчині, додають гепарин у кількості 0,1595 для покращення мікроциркуляції кровообігу, одержаний розчин ліофілізують і отримують субстанцію, яку використовують для одержання лікарської форми « препарату. Вихід - 7,Ог (7905). чн

Приклад 4

Дослідження дії фосфоліпідного препарату з морських організмів як сурфактанту. | «в)

Проведення випробувань відбувалось в наступних направленнях: с - модулювання процесів інтоксикації, що призводить до порушень властивостей сурфактантної системи легенів і завершується літальним кінцем без застосування спеціальної терапії; - - застосування речовини із властивостями сурфактанту шляхом інгаляційної дії на експериментальних тваринах; - спостереження за станом тварин (кількість загиблих, показники стану сурфактантної системи легенів); « - розробка рекомендацій по застосуванню препарату, одержаного з відходів переробки кальмарів (гонади) для аерогенного впливу в умовах інтоксикації. т с При проведенні досліду вимірюють наступні показники: загибель тварин, зміни маси тіла, зниження величини ч поверхневого натягу сурфактанту легенів (сталагнометрично), кількість альвеолярних макрофагів в » трахеобронхіальному лаваші, клітинна реакція сурфактантної системи легенів, стан функції легенів за показниками об'єму піни, часу випарювання.

В дослідах для інгаляційного впливу використовують білих щурів на звичайному раціоні. Час спостереження - за тваринами -14 діб з моменту модулювання токсичного процесу. Речовина з властивостями сурфактанту

ФО застосовується для інгаляції в 195 - та 1095-му розчині на етанолі. Кількість речовини для інгаляції не перевищує 0,25мл/хв. Розмір часток, що інгалюються, складає від 0,03 до З,Омкм. В контрольних експериментах («в встановлена відсутність інгаляційного впливу на повадки та на тривалість життя щурів з масою тіла від 185,0 -1 20 до 210,0Ог.

В результаті застосування речовини з властивостями сурфактанту при максимальних ознаках інтоксикації без ї» застосування інших спеціальних методів антидотної терапії виживання щурів в досліджуваних групах зросло відповідно - при мепротановій, аміачній і бензиновій інтоксикаціях на 40, 35 і 50 95 (табл. 3). 5в й 11073 мл 11033, н/м 1103, н/м 11023, н/м во

Контроль без дії ФАР"""| 15,2-0,66 40,1-0,3 - - - - б5

"- ІСТ - інгаляційна доза токсичності; 75 - ПН - поверхневий натяг; "хх - ФАР - фізіологічно активна речовина.

Токсикологічну оцінку нового препарату - штучного сурфактанту з гонад кальмару - вивчали шляхом інгаляційного введення за допомогою приладу ПАЇ!І-2 білим щурам (вагою тіла 195,6 -4,5г) та білим мишам (вагою тіла 23,4-1,7г) протягом 7 діб в інтервалах 1 година, 1, З, 7 діб. В кожну з 4 груп брали по 10 тварин. Масові концентрації аерозолю препарату в межах від 33333,Омг/м? до 666 мг/м? підтримують протягом 4 70 годин інгаляційного впливу для щурів і 2 години для мишей. До інгаляції і після неї тварини знаходяться в умовах звичайного лабораторного утримання. Клінічні досліди за станом тварин і розподілом загибелі тварин проводять протягом 14 діб з моменту інгаляційного впливу препарату. Встановлено, що для білих щурів середня летальна концентрація складає 11200,0 -606,4мг/м?, а для білих мишей 8000 4542,0мг/м3. У відповідності з вимогами ДЕСТ 12.1.007-76 препарат відноситься до З класу небезпечності при інгаляційному впливі і є 12 сполукою з помірно небезпечними властивостями (табл. 4).

Таблиця 4

Токсикологічна характеристика дії сурфактанту з гонад кальмару

Більше 2500 мг/к" ни сч щі 6)

З клас небезпечності за ДЕСТ 12.1.007-76

Фармакологічну оцінку сурфактанту, отриманого з гонад кальмару, проводять в умовах його інгаляційного «т зо введення. Концентрація препарату, який вводиться аерозольне, була кратна одній десятій середньолетальної дози для білих щурів вагою тіла 195,6 -4,5г. Дослід проводять в динаміці (1 година, 71, З, 7 діб). В групи і - брали по 10 тварин. Концентрація аерозолю препарату (1120,0-254,Змг/м3) підтримується в камері протягом 4 Га») годин інгаляційного впливу.

В умовах описаного досліду загибелі піддослідних тварин не зареєстровано. Як після інгаляції, так і ке,

Зз5 протягом спостереження тварини відчували себе задовільно. Аерозольний вплив не приводить до наявних ча розладів з боку органів та систем (табл. 5).

Таблиця 5

Стан кондиціонерної та гідродинамікорегуляторної функції « 4 З а При інгаляції сурфактанту 1,09-0,08 2,3-0,8 5,3-0,8 6,9-0,9 "» Час випарення сурфактанту, мл/хв 0,0090-0,0001| 0,030-0,001 10,050-0,002| 0,020-0,001

При інгаляції речовини, яка має властивості сурфактанту /10,0080-0,0001 0,0070--0,0001 10,010-0,00210,0090-0,0002 -і Досліди з перевірки препарату "Кальмофіл" на поверхневий натяг та сурфактантну дію проведені б американськими дослідниками Університету (Каліфорнія, Лос-Анжелес) з препаратами - стандартами для замісної сурфактантної терапії "Зигмапіа" та "Ехозиї США. Показано близьку активність "Кальмофілу" до (ав) вказаних стандартів. При застосуванні препарату "Кальмофіл" порівняно з контролем підвищується виживання - 50 тварин. В дослідах іп мімо та іп мйго при токсичній дії окислювального стресу, індукованого гострим отруєнням ССІ,, введення препарату знижує токсичну дію метаболічної отрути, позитивно впливає на виживання чз» тварин, знижує інтенсивність перекисного окислення ліпідів (ПОЛ), корегує токсичний вплив ССІ). Дослідження іп мімо властивостей сурфактанту на недоношених кроликах з недостатністю сурфактанту, проведені в порівнянні з препаратами-стандартами "Зигмапіа" та "Ехозип", показали зниження рівня респіраторного тиску легенів (табл. б).

Ф) Таблиця 6 ке Специфічна дія лікувального засобу "Кальмофіл"

Препарат Параметри вимірювання во Поверхневий натяг, |Виживання тварин при інтоксикації. Активність (АО", ПОЛ, Пік респіра торного (дин/см) Захисний індекс (одиниці) СОДУ), 96 тиску легенів "Кальмофіл" Мін. - 11,7 1,5-2,0 Іп мімо: 249511

Макс. - 48,5 пол-153 сОд-72 іп мійго: 65 до-5О

-о ше 71 10 1 1 о

Макс. - 42,3

ЗЕМ ПОН ННЯ НО НН НАНУ ННЯ й вдо 01111111 яю п я ше

Макс. - 37,5 ше 1

Макс. - 67,5 вай 00000010 бот 1 о ло легенів "х - СОД - супероксиддисмутазна активність т Досліджуваний препарат ПАР є інтактним відносно функціональної активності та морфології макрофагів легенів. Він не виявляє антигенних властивостей відносно місцевих клітинних імунних реакцій в легенях, про що свідчить структурна та функціональна стабільність легеневих макрофагів та експериментальні досліди з інгаляційного введення препарату щурам при послідовному гістохімічному вивченні макрофагальної функції.

Число макрофагів при дії сурфактанту протягом інтервалів часу 1 година, 1, З, 7 діб не відрізнялись від контрольних. Одержані дані про відсутність антигенності препарату можуть бути обумовлені присутністю лише незначної домішки білку (0,1-0,5905) в препараті, що є позитивним фактором.

При використанні наведеного способу досягаються наступні переваги: - підвищується вихід ПАР з гонад кальмару - основи штучного сурфактанту (до 895) в порівнянні з ПАР, одержаних з тканин легенів телят (до 1,090) ЗІ; сч 29 - спрощується спосіб одержання цільового продукту; Го) - ефективно зменшується поверхневий натяг при наявності плазмалогенів (плазменілФЕА і плазменілфФуХ), що діють як антиоксиданти проти ліпідної пероксидації, а також як антиоксиданти ліпопротеїнів низької щільності; - вітамін Е захищає як ліпідні компоненти, так і білки сурфактанту легенів від оксидактивного окислення; - покращується мікроциркуляція кровообігу з додаванням гепарину; З

Зо - покращуються властивості сурфактанту при інгаляційному застосуванні завдяки додаванню іонів Са 7 на /ї- стадії очистки препарату, що сприяє кращій адсорбції сурфактанту поверхністю легень і розправленню впалих о альвеол.

При інгаляційному введенні препарату ПАР з гонад морських організмів, одержаного за новим способом, (Се) зв Досягається наступний ефект: М - підвищується поверхнева активність легенів у тварин за рахунок зниження поверхневого натягу до нормальних показників (48,5 та 11,7дин/см); - практично не змінюється в порівнянні з контролем кількість альвеолярних макрофагів протягом досліджуваного періоду (6,5-6,91073 макрофагів в мл). «

Одержані результати свідчать про доцільність винаходу для подальшого застосування в практиці лікування -о с хворих. Одержаний лікувальний засіб "Кальмофіл" доцільно використовувати в ургентній токсикологічній практиці при порушенні функцій сурфактантної системи легенів. Одноразове застосування сурфактантноподібної :з» речовини з морських організмів не виявляє відхилень у нормальних тварин, а в умовах інтоксикації сприяє нормалізації порушень функції легенів: знижує інтенсивність процесів ціноутворення, нормалізує клітинну реакцію сурфактанту легенів і певним чином полегшує протікання токсичного процесу. -І Таким чином, запропонований винахід вирішує задачу одержання з гонад морських організмів лікувального засобу "Кальмофіл", до складу якого входять фосфоліпіди з омега-3 ПНЖК, плазмалогенні фосфоліпіди,

Ме регуляторні пептиди, амінокислоти, вітамін Е та гепарин. Створений комплекс біологічно активних речовин має о адаптогенні та антиоксидантні властивості. Одержаний запропонованим способом лікарський засіб "Кальмофіл" 5р Може бути застосований для відновлення функції сурфактантної системи легенів людини при її розладах шляхом - заміщувальної терапії. ї» СПИСОК ПОСИЛАНЬ: 1. ОБА 5032585 Уи1.16, 1991. 2. Березовский В.А. Возможности коррекции состояния сурфактантной системьії. Врачебное дело, 1984, Мо вв, с. 107-111. 3. КО 2198670 СІ 20.02.2003. (Ф. 4. КО 2066197 СІ 10.09.1996. ка 5. ЕР 0286011А2 12.16.88. 6. ОА 5110866 1992. 60 7. Гребенников В.А. Респираторньйй дистрессо-синдром у новорожденньх. М., 1995. 8. ДЕ 2900300 (Кейлгіпо ІМ). УР. 58222022 (Теїййп К). ЕР 110498. ОА 4312860. 9. КО 2213746 СІ 10.10.2003. 10. Раїютро ДО, Гудоп Е-Е, Спеп - Рі еї а). Рану асій сотрозйоп ої Ішпод, тасгорпаде апа зипасіапі рпозроїїріаз апйег зпогі-егт епіега! Теедіпд мий п-3 Ііріав. - І іІрідв. - 1994. - 29,9. - р. 643 - 649. 65 11. Саптпіе І, СіІіетепі М, де Шаме! ОО аї аїЇ. РНозрпоїїріій зирріетепіайоп гемегзез БепаміогаЇ апа

Бріоспетіса! акМегайопе іпдисей бу п-3 роїушпзайшгайївй їТацу асій аеїісіепсу іп отісе. 9 іріїй Кез 2000

Маг,41(3):473-480. 12. Гевзвопв їїот (Пе віогу ої п-3 Тацу асіавз. М-3 Тацу асід5. Коїе ої роїушпзаїигаїей тТацу асідв іп

Ішпд аівсазе. Ат .). Сіїіп. Ми. 2000, 71, (15):15-3985. 13. опа У.Н., Упоці У., Міуагама Т., Віовсі. Віоїтесппої. Віоспет. 1997,01, Мо 12. 14. М.Киаїдег, КоПескК, Риї а аїЇ. Ріазтаюдепе епПесіїмему гедисе їйе зипасе іепвіоп ої зипасіапі

ІКе рпозрпоїїріа тіхішгев. Атег. У. РпПівіо!., 1998, у.274, 1, 1.143-148.

Claims (1)

1. Формула винаходу

   1. Лікувальний засіб для заміщувальної терапії сурфактантної системи легенів при її розладах, який відрізняється тим, що він одержаний з морських гідробіонтів та містить біологічно активні речовини у комплексі фосфоліпіди з омега-3 поліненасиченими жирними кислотами (ПНЖК) та плазмалогенні фосфоліпіди: пламенілфосфатидилхолін і плазменілфосфатидилетаноламін, загальний холестерол, жирні кислоти, пептиди, амінокислоти, гепарин, вітамін Е в наступному співвідношенні компонентів, мас. 9о: фосфоліпіди 75-85 плазмалогенні фосфоліпіди: плазменілфосфатидилхолін і плазменілфосфатидилетаноламін 0,1-0,5 загальний холестерол 0,2-2,5 й пептиди не більше 0,5 вітамін Е не більше 0,05 гепарин 0,1-0,15 жирні кислоти, амінокислоти решта. Га 29 2. Лікувальний засіб за п. 1, який відрізняється тим, що одержаний з репродуктивних органів морських (У гідробіонтів.

   З. Лікувальний засіб за п. 1 або за п. 2, який відрізняється тим, що фосфоліпідами з омега-3 ПНЖК є дипальмітоїлфосфатидилхолін з пальмітиновою кислотою та омега-3 ПНЖК в структурі.

   4. Спосіб одержання лікувального засобу для заміщувальної терапії сурфактантної системи легенів при її З розладах, який відрізняється тим, що подрібнюють сировину морських гідробіонтів в замороженому стані, ї- екстрагують сировину етанолом, після чого фільтрують одержаний екстракт від залишків сировини, очистку екстракту здійснюють в суміші органічних розчинників, а після повного видалення органічних розчинників сухий о залишок перерозчиняють у гексані з додаванням водного розчину Сасі» в етанолі, причому концентрацію Сасі» (Се) вибирають достатньою для максимального видалення фосфоліпідбілкової фракції, відскремлюють гексановий шар від спиртоводної фракції, додають до гексанової фракції вітамін Е, а після упарювання одержану суміш - суспендують у фізіологічному розчині, додають гепарин, а одержані ліпосоми ліофілізують та одержують субстанцію кінцевого продукту.

   5. Спосіб за п. 4, який відрізняється тим, що подрібнюють репродуктивні органи морських гідробіонтів. « дю 6. Спосіб за п. 4 або п. 5, який відрізняється тим, що до гексанової фракції додають вітамін Е в кількості -о не більше 0,05 95 засобу, що одержують.

   с 7. Спосіб за п. 4 або п. 5 або п. 6, який відрізняється тим, що після упарювання гексанової фракції одержану :з» суміш суспендують у фізіологічному розчині протягом 30-60 хвилин і додають гепарин при співвідношенні фосфоліпіди: фізіологічний розчин: гепарин - 1:100:(0,1-0,15). Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних -1 395 мікросхем", 2006, М 6, 15.06.2006. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України. (22) («в) - 50 «з» Ф) іме) 60 б5