UA48811A - Diagnostic immunoenzyme kit for assaying antibrucellosis antibodies in human and cattle blood serum - Google Patents
Diagnostic immunoenzyme kit for assaying antibrucellosis antibodies in human and cattle blood serum Download PDFInfo
- Publication number
- UA48811A UA48811A UA2001128687A UA2001128687A UA48811A UA 48811 A UA48811 A UA 48811A UA 2001128687 A UA2001128687 A UA 2001128687A UA 2001128687 A UA2001128687 A UA 2001128687A UA 48811 A UA48811 A UA 48811A
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- antibodies
- human
- cattle
- kit
- diagnostic
- Prior art date
Links
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 title claims abstract description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title abstract description 11
- 206010006500 Brucellosis Diseases 0.000 claims description 14
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 2
- 241000589567 Brucella abortus Species 0.000 abstract 1
- 241001148106 Brucella melitensis Species 0.000 abstract 1
- 229940056450 brucella abortus Drugs 0.000 abstract 1
- 229940038698 brucella melitensis Drugs 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000002313 adhesive film Substances 0.000 description 1
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Опис винаходуDescription of the invention
Винахід належить до імунохімії, медицини, ветеринарної медицини та може бути використаний для 2 імунологічних досліджень, для діагностики інфікованості збудниками бруцельозу людей або великої рогатої худоби.The invention belongs to immunochemistry, medicine, veterinary medicine and can be used for 2 immunological studies, for diagnosis of infection with brucellosis pathogens of humans or cattle.
Відомий тест для виявлення зараженості бруцельозом базується на реакції зв'язування комплементу (РЗК) 11,21.A well-known test for detecting brucellosis infection is based on the complement binding reaction (CRT) 11,21.
В основу винаходу поставлена задача створити імуноферментну тест-систему на основі антигенів, виділених з очищених культур штамів збудників бруцельозу - ВгисеМйа арогиз 1119 та ВгисеПйа теїМКепвзів. Антигени сорбують на поверхні полістиролових планшетів. В складі кон'югатив використовуються антивидові антитіла (анти ІЯМЖНОоС людини або ВРХ), мічені ферментом. Ферментативну реакцію визначають за допомогою розчину субстрату з хромогеном. За одну постановку (2 години) можна проаналізувати 88 сироваток.The invention is based on the task of creating an immunoenzymatic test system based on antigens isolated from purified cultures of strains of brucellosis pathogens - VhyseMya arogyz 1119 and VysePyia teiMKepvziv. Antigens are adsorbed on the surface of polystyrene tablets. In the composition of conjugates, anti-species antibodies (human or bovine anti-IAMZhNOoS), labeled with an enzyme, are used. The enzymatic reaction is determined using a substrate solution with a chromogen. 88 sera can be analyzed in one setup (2 hours).
Приклад 1. Визначення антитіл проти антигенів збудників бруцельозу в сироватці крові людини. 12 В кожну лунку стрипів планшету вносять по 8Омкл розчину для розведення сироваток і по 20мкл зразків досліджуваних сироваток, залишивши вільними 5 лунок першого ряду (контрольні лунки).Example 1. Determination of antibodies against antigens of brucellosis pathogens in human blood serum. 12 In each well of the strips of the tablet, add 8 μl of the serum dilution solution and 20 μl of the tested serum samples, leaving 5 wells of the first row free (control wells).
В три лунки вносять по 20мкл негативного контролю (К" - негативна на бруцельоз сироватка крові людини), а в дві інші - по2домкл позитивного контролю (К" - позитивна бруцельозна сироватка крові людини).Add 20 μl of negative control (K" - brucellosis-negative human blood serum) into three wells, and 2 ml of positive control (K" - positive brucellosis human blood serum) into the other two wells.
Накривають стрипи клейкою плівкою або кришкою та інкубують при температурі 37 "С 60 хв.Cover the strips with an adhesive film or a lid and incubate at a temperature of 37 "C for 60 minutes.
Після закінчення інкубації видаляють вміст лунок за допомогою промивача або 8-канальної піпетки та промивають лунки чотири рази розчином для промивання планшетів.At the end of the incubation, remove the contents of the wells using a washer or an 8-channel pipette and wash the wells four times with a solution for washing tablets.
В лунки стрипів вносять по 1О00мкл розчину антивидового кон'югату -анти ІДМ'ІдС-людини, міченого пероксидазою, та інкубують при 37 "С у термостаті 45 хв.Into the wells of the strips, add 1000 μl of a solution of the peroxidase-labeled anti-species conjugate -anti-IDM'IdS-human, and incubate at 37 "C in a thermostat for 45 minutes.
Після закінчення інкубації промивають лунки шість разів і вносять туди по 10Омкл розчину проявника (субстрату з хромогеном) та інкубують при 18-22 "С у темряві 10-25хв. «After the end of the incubation, the wells are washed six times and 10 µl of the developer solution (substrate with chromogen) are added there and incubated at 18-22 "C in the dark for 10-25 minutes."
Зупиняють кольорову реакцію, додаючи до всіх проб по 5О0мкл стоп-реагенту.The color reaction is stopped by adding 500 μl of stop reagent to all samples.
Не більше як через 1 хв. після зупинення кольорової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі за допомогою спектрофотометра. Значення ОГ зразка прямо пропорційне кількості «- зр Внтитіл у сироватціNo more than 1 minute later. after stopping the color reaction, determine the optical density (OD) in the wells in the two-wave mode using a spectrophotometer. The value of OG of the sample is directly proportional to the amount of «- zr Vntitil in the serum
Приклад 2. Визначення антитіл проти антигенів збудників бруцельозу в сироватці крові ВРХ проводили -- аналогічно прикладові 1, але як антивидовий кон'югат застосовували мічений пероксидазою хрону со анти-І9МдО-ВРХ кон'югат; за позитивний контроль (К") правила позитивна на бруцельоз сироватка крові ВРХ, а за негативний контроль (К--.) - негативна на бруцельоз сироватка крові ВРХ. соExample 2. Determination of antibodies against antigens of brucellosis pathogens in cattle blood serum was carried out similarly to example 1, but horseradish peroxidase-labeled anti-I9MdO-cattle conjugate was used as an anti-species conjugate; for the positive control (K") rules positive for brucellosis blood serum of cattle, and for the negative control (K--.) - negative for brucellosis blood serum of cattle.
Приклад 3. Визначення чутливості та специфічності пропонованої тест-системи. «гExample 3. Determination of sensitivity and specificity of the proposed test system. "Mr
Використовуючи названі тест-системи, досліджували сироватки крові (20 достеменно позитивних та 100 достеменно негативних сироваток). Усі сироватки досліджували у чотирьох повторностях кожною тест-системою за описаною методикою. З 20 позитивних сироваток наявність антитіл проти збудника бруцельозу показали 20, що становить 10095 чутливості. З 100 негативних сироваток у пропонованій тест-системі виявилися справді « 0 негативними 95 (специфічність - 9595). В РЗК, яку порівнювали з пропонованою тест-системою, з 20 достеменно тв) с позитивних сироваток 4 визначено як негативні (титр « 1:50). Чутливість РЗК становила 8095. З 100 негативних сироваток в РЗК виявилися справді негативними 92 зразка (специфічність - 9296). з Таким чином, пропонована тест-система забезпечує виявлення антитіл проти антигенів збудника бруцельозу у сироватках людей або ВРХ. Проста і надійна в роботі, проявляє високу чутливість та специфічність.Using the named test systems, blood sera were examined (20 definitely positive and 100 definitely negative sera). All sera were tested in four replicates with each test system according to the described method. Out of 20 positive sera, 20 showed the presence of antibodies against the causative agent of brucellosis, which is 10095 sensitivity. Out of 100 negative sera in the proposed test system, 95 turned out to be truly "0 negative" (specificity - 9595). In RZK, which was compared with the proposed test system, out of 20 positively positive sera, 4 were determined to be negative (titre "1:50). The sensitivity of RZK was 8095. Out of 100 negative sera in RZK, 92 samples turned out to be truly negative (specificity - 9296). Thus, the proposed test system provides the detection of antibodies against the antigens of the causative agent of brucellosis in human or cattle sera. Simple and reliable in operation, shows high sensitivity and specificity.
Використана література ї5» 1. Кайтмазова Е.И., Черньшева М.И. Лабораторная диагностика бруцеллеза. - В кн.: Бруцеллез (ред.Used literature 15» 1. Kaitmazova E.I., Chernsheva M.I. Laboratory diagnosis of brucellosis. - In the book: Brucellosis (ed.
П.А.Вершилова). - М.: "Медицина", 198-241. бо 2. МасМІШап А.Р., еїаск 3. Воміпе Бгисеїйовів. - Іп: Мапиа! ої е(апдагаз бог ОіІадповіс Тевів апа о Массіпез, ОПісе ІпіегпайПопаї! дез ЕрігооїйІсв, Рагів, 2000, 4 ЕаШоп, 328-345. 3. А.Т.Михайлов, В.Н.Симирский "Методьї иммунохимического анализа в биологии развития" М. "Наука",P.A. Vershilova). - M.: "Medicine", 198-241. bo 2. MasMIShap A.R., eiask 3. Vomipe Bhyseiiov. - Ip: Mapia! oi e(apdagaz god OiIadpovis Teviv apa o Massipez, OPise IpiegpaiPopai! dez ErigooiiIsv, Ragiv, 2000, 4 EaShop, 328-345. 3. A.T. Mykhaylov, V.N. Simyrskyi "Methods of immunochemical analysis in developmental biology" M "Science",
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2001128687A UA48811A (en) | 2001-12-17 | 2001-12-17 | Diagnostic immunoenzyme kit for assaying antibrucellosis antibodies in human and cattle blood serum |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2001128687A UA48811A (en) | 2001-12-17 | 2001-12-17 | Diagnostic immunoenzyme kit for assaying antibrucellosis antibodies in human and cattle blood serum |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA48811A true UA48811A (en) | 2002-08-15 |
Family
ID=77179756
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2001128687A UA48811A (en) | 2001-12-17 | 2001-12-17 | Diagnostic immunoenzyme kit for assaying antibrucellosis antibodies in human and cattle blood serum |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA48811A (en) |
-
2001
- 2001-12-17 UA UA2001128687A patent/UA48811A/en unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0216191B1 (en) | Immunoassay for htlv-iii antigens | |
| US4322495A (en) | Immunoassay | |
| JPH02503029A (en) | Use of polyoxyethylene ethers to improve the performance of immunoassays using peroxidase conjugates | |
| Westblom et al. | Diagnosis of Helicobacter pylori infection in adult and pediatric patients by using Pyloriset, a rapid latex agglutination test | |
| JPH02138869A (en) | Inspection of antigen | |
| UA48811A (en) | Diagnostic immunoenzyme kit for assaying antibrucellosis antibodies in human and cattle blood serum | |
| WO1987006620A1 (en) | Diagnostic kit for sexually transmitted diseases | |
| HU225687B1 (en) | Detection of antibody production | |
| JPS60205367A (en) | Enzyme-immunity fluorescent testing method of anti-epstein-barr virus antobody | |
| Sumi et al. | Dot-immunobinding assay | |
| UA63657A (en) | EIA DIAGNOSTIC SYSTEM FOR ASSAYING IgG AGAINST BRUCELLA ABORTUS IN BLOOD SERUM AND MILK OF THE CATTLE («DIA-BRUCELLA AB.-COMBI-V») | |
| WO1990010232A1 (en) | Composition containing labeled streptococcal antibody, test kit and assay using same | |
| UA68240A (en) | Immunoenzyme kit for assaying antibodies against mycobacterium bovis in blood serum of the cattle | |
| UA48561A (en) | Diagnostic immunoenzyme assay kit providing for detecting antibodies against lepstospira in human and animal blood serum | |
| UA68755A (en) | EIA KIT FOR DETECTION OF SURFACE ANTIGEN (HBsAg) OF HEPATITIS B VIRUS (DIA-HBV) | |
| WO1990002336A1 (en) | Immunoassay for determining a chlamydial antigen comprising pretreatment of the sample with a chelating agent | |
| UA61538A (en) | Diagnostic eia system for detecting antibodies against bovine leukemia virus in blood serum and cow milk | |
| Bhopale et al. | Assessment of enzyme linked immunosorbent assay based diagnostic kits (Toxokit-G and Toxokit-M) for the detection of IgG and IgM antibodies to Toxoplasma gondii in human serum | |
| RU2282191C2 (en) | Method of determining functional activity of antichlamydial antibodies | |
| UA57639A (en) | Diagnostic immunoenzyme kit for assaying antibodies against hepatitis c virus in human blood serum or plasma ("dia-hcv") | |
| UA66567A (en) | IMMUNOENZYME ASSAY KIT FOR QUANTIFYING IgG AGAINST RUBELLA VIRUS IN HUMAN BLOOD SERUM (DIA-RUBELLA-IgG) | |
| UA66099A (en) | IMMUNOENZYME ASSAY KIT FOR DETECTING IgM AGAINST CYTOMEGALOVIRUS IN HUMAN BLOOD SERUM (DIA-CMV-IgM) | |
| UA10590U (en) | IMMUNOENZYME ASSAY KIT FOR DETECTING IgM AGAINST TREPONEMA PALLIDUM (DIA-IgM-SYPH) | |
| RU1780006C (en) | Method for diagnosing tuberculosis | |
| JP2022161885A (en) | Immunoassay method and reagent |