UA63657A - EIA DIAGNOSTIC SYSTEM FOR ASSAYING IgG AGAINST BRUCELLA ABORTUS IN BLOOD SERUM AND MILK OF THE CATTLE («DIA-BRUCELLA AB.-COMBI-V») - Google Patents
EIA DIAGNOSTIC SYSTEM FOR ASSAYING IgG AGAINST BRUCELLA ABORTUS IN BLOOD SERUM AND MILK OF THE CATTLE («DIA-BRUCELLA AB.-COMBI-V») Download PDFInfo
- Publication number
- UA63657A UA63657A UA2003054598A UA2003054598A UA63657A UA 63657 A UA63657 A UA 63657A UA 2003054598 A UA2003054598 A UA 2003054598A UA 2003054598 A UA2003054598 A UA 2003054598A UA 63657 A UA63657 A UA 63657A
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- cattle
- milk
- brucella
- combi
- dia
- Prior art date
Links
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 title claims abstract description 16
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 title claims abstract description 15
- 239000008267 milk Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 title claims abstract description 15
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title abstract description 8
- 241000589567 Brucella abortus Species 0.000 title abstract 3
- 229940056450 brucella abortus Drugs 0.000 title abstract 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 claims abstract 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 6
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 206010006500 Brucellosis Diseases 0.000 description 7
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000002313 adhesive film Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Опис винаходуDescription of the invention
Винахід належить до імунохімії, ветеринарної медицини та може бути використаний для проведення імунологічних досліджень, діагностичних аналізів сироваток крові та молока великої рогатої худоби на наявність антитіл класу дос до ВгисеїЇа арогпіив.The invention belongs to immunochemistry, veterinary medicine and can be used for conducting immunological studies, diagnostic analyzes of blood sera and milk of cattle for the presence of antibodies of class dos to VhyseiYia arogpiiv.
Відомий тест для виявлення протибруцельозних антитіл тільки в сироватках крові ВРХ базується на імуноферментному аналізі (ІФА) (1). Для визначення антитіл проти бруцел в молоці ця тест-система не призначена.A well-known test for detection of anti-brucellosis antibodies only in blood sera of cattle is based on enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) (1). This test system is not intended for the determination of antibodies against Brucella in milk.
В основу винаходу покладено завдання створити імуноферментну тест-систему для визначення наявності антитіл класу ДО до ВгисеМйа арогіиз в сироватках крові та молоці ВРХ на основі антигенів, виділених з очищених культур штаму збудника бруцельозу - ВгисеМа арогпиз 1119. Антигени сорбують на поверхні полістиролових планшетів. В складі кон'югатів використовуються моноклональні антитіла (анти до ВРХ), мічені ферментом. Ферментативну реакцію визначають за допомогою проявника. За одну постановку (7/Охв) можна 12 проаналізувати 88 сироваток. Інтенсивність забарвлення в лунках із зразками сироваток або молока пропорційна концентрації специфічних антитіл до Вгисейа арогіи5. Облік результатів проводять відносно інтенсивності забарвлення в лунках із контролем граничного значення (КГЗ) візуально або вимірюють оптичну густину суміші у лунках за допомогою спектрофотометра.The invention is based on the task of creating an immunoenzymatic test system to determine the presence of DO antibodies to VhyseMya arogyiz in blood sera and milk of cattle on the basis of antigens isolated from purified cultures of the strain of the causative agent of brucellosis - VyseMya arogyiz 1119. Antigens are sorbed on the surface of polystyrene tablets. In the composition of conjugates, monoclonal antibodies (anti-bovine antibodies) labeled with an enzyme are used. The enzymatic reaction is determined using a developer. 88 sera can be analyzed in one setup (7/Ochv). The intensity of staining in the wells with serum or milk samples is proportional to the concentration of specific antibodies to Vgyseia arogya5. The results are recorded in relation to the intensity of the color in the wells with the control of the limit value (CGV) visually or the optical density of the mixture in the wells is measured using a spectrophotometer.
Приклад 1. Визначення антитіл проти антигенів збудника бруцельозу в сироватці крові ВРХ.Example 1. Determination of antibodies against antigens of the causative agent of brucellosis in blood serum of cattle.
В кожну лунку стрипів планшету вносять по 8Омкл розчину для розведення сироваток і по 20мкл зразків досліджуваних сироваток, залишивши вільними 5 лунок першого ряду (контрольні лунки).In each well of the strips of the tablet, add 8 μl of serum dilution solution and 20 μl of samples of the tested sera, leaving 5 wells of the first row free (control wells).
В одну лунку вносять 20мкл негативного контролю (К' - сироватка крові ВРХ, яка не містить антитіла проти20 μl of negative control (K' - bovine blood serum, which does not contain antibodies against
ВгисеїМа арогіив), а в другу 2омкл позитивного контролю (К" - сироватка крові ВРХ, яка містить антитіла доVhyseiMa arogiiv), and in the second 2 omcl of positive control (K" - blood serum of cattle, which contains antibodies to
ВгисеїПа аброгіиз у високому титрі) і в три лунки по 20мкл контролю граничного значення (КГЗ) - низькотитражна позитивна сироватка. «VhyseiPa abrogiiz in a high titer) and in three wells of 20 μl of the limit value control (KGZ) - low titer positive serum. "
Накривають стрипи клейкою плівкою або кришкою та інкубують при кімнатній температурі 20хв.Cover the strips with an adhesive film or lid and incubate at room temperature for 20 minutes.
Після закінчення інкубації видаляють вміст лунок за допомогою промивача або 8-канальної піпетки та промивають лунки чотири рази розчином для промивання планшетів. МAt the end of the incubation, remove the contents of the wells using a washer or an 8-channel pipette and wash the wells four times with a solution for washing tablets. M
В лунки стрипів вносять по 100мкл розчину моноклонального кон'югату - анти ІдО-ВРХ, міченого пероксидазою, та інкубують при кімнатній температурі 2Охв. ів)Add 100 μl of a solution of the monoclonal conjugate - anti-IdO-BRK, labeled with peroxidase, to the wells of the strips, and incubate at room temperature for 2 hours. iv)
Після закінчення інкубації промивають лунки шість разів і вносять туди по 10Омкл розчину проявника с (перекис водню з хромогеном тетраметилбензидином) та інкубують при 18-227С у темряві ЗОхв.After the end of the incubation, the wells are washed six times and 10 μl of the developer c solution (hydrogen peroxide with the chromogen tetramethylbenzidine) are added there and incubated at 18-227C in the dark.
Зупиняють кольорову реакцію, додаючи до всіх проб по 50 мкл стоп-реагенту. соThe color reaction is stopped by adding 50 μl of stop reagent to all samples. co
Не більше як через 1хв. після зупинення кольорової реакції проводять облік результатів візуально відносно с інтенсивності забарвлення у лунках з КГЗ, або визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі за допомогою спектрофотометра.No more than 1 minute later. after stopping the color reaction, the results are recorded visually in relation to the intensity of the color in the wells with KGZ, or the optical density (OD) in the wells is determined in the two-wave mode using a spectrophotometer.
Приклад 2. Визначення антитіл проти антигенів збудника бруцельозу в молоці ВРХ проводять аналогічно прикладові 1, але зразки молока перед аналізом знежирюють центрифугуванням при 150Отис.об/хв протягом « 20 15хв. | | | Й -оExample 2. Determination of antibodies against antigens of the causative agent of brucellosis in cattle milk is carried out similarly to example 1, but before analysis, milk samples are defatted by centrifugation at 150 rpm for 20 15 minutes. | | | And - about
Приклад 3. Визначення чутливості та специфічності пропонованої тест-системи. с Використовуючи названі тест-системи, досліджували сироватки крові та зразки молока (10 достеменно :з» позитивних сироваток, 10 достеменно позитивних проб молока та 100 достеменно негативних зразків сироваток та молока). Усі зразки досліджували у чотирьох повторностях кожною тест-системою за описаною методикою. З 415 20 позитивних зразків наявність антитіл проти збудника бруцельозу показали 20, що становить 10095 чутливості. о З 100 негативних сироваток у пропонованій тест-системі виявилися справді негативними 95 (специфічність - 95905). В порівняльній тест-системі з 20 достеменно позитивних зразків 1 проба молока визначена як негативна. о Чутливість становила 9595. З 100 негативних зразків виявилися справді негативними 95 зразка (специфічність - о 9596).Example 3. Determination of sensitivity and specificity of the proposed test system. c Using the named test systems, blood sera and milk samples were examined (10 definitely positive sera, 10 definitely positive milk samples and 100 definitely negative samples of sera and milk). All samples were tested in four repetitions by each test system according to the described method. Out of 415 20 positive samples, 20 showed the presence of antibodies against the causative agent of brucellosis, which is 10095 sensitivity. o Out of 100 negative sera in the proposed test system, 95 turned out to be truly negative (specificity - 95905). In the comparative test system, out of 20 definitely positive samples, 1 milk sample was determined to be negative. o Sensitivity was 9595. Out of 100 negative samples, 95 samples turned out to be truly negative (specificity - o 9596).
Таким чином, пропонована тест-система забезпечує виявлення антитіл проти антигенів збудника бруцельозу о у сироватках та молоці ВРХ. Проста і надійна в роботі, проявляє високу чутливість та специфічність. «м Використана література: 1. Патент Мо48811 А ША Тест-система діагностична імуноферментна для визначення протибруцельозних антитіл в сироватках крові людини або великої рогатої худоби (ВРХ) Семиноженко В., Козаченко Л., Кириленко |. та ін. від 27.05.2002; 2. МасМійап А.Р., (аск у. Воміпе БітсейПЙйовів. - п: Мапиаі! ої 5(ападагаз їог Оіадповіїс Тевів апа в. Массіпез, ОНісе Іпіегпайопаї! дез Ерігооїісв, Рагів, 2000, А4їп Едйоп, 328-345. 3. А.Т.Михайлов, В.Н.Симирский "Методьї иммунохимического анализа в биологии развития". М. "Наука",Thus, the proposed test system provides detection of antibodies against antigens of the causative agent of brucellosis in sera and milk of cattle. Simple and reliable in operation, shows high sensitivity and specificity. "m Used literature: 1. Patent Мо48811 А ША Diagnostic immunoenzymatic test system for the determination of anti-brucellosis antibodies in blood sera of humans or cattle (cattle) Seminozhenko V., Kozachenko L., Kyrylenko |. etc. from 27.05.2002; 2. MasMiyap A.R., (ask u. Vomipe BitseyPyoviv. - p: Mapiai! oi 5(apadagaz yog Oiadpoviis Teviv apa v. Massipez, ONise Ipiegpaiopai! dez Erigooiisv, Ragiv, 2000, A4ip Edyop, 328-345. 3 A.T.Mykhaylov, V.N.Symirsky "Methods of immunochemical analysis in developmental biology", M. "Nauka",
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2003054598A UA63657A (en) | 2003-05-21 | 2003-05-21 | EIA DIAGNOSTIC SYSTEM FOR ASSAYING IgG AGAINST BRUCELLA ABORTUS IN BLOOD SERUM AND MILK OF THE CATTLE («DIA-BRUCELLA AB.-COMBI-V») |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2003054598A UA63657A (en) | 2003-05-21 | 2003-05-21 | EIA DIAGNOSTIC SYSTEM FOR ASSAYING IgG AGAINST BRUCELLA ABORTUS IN BLOOD SERUM AND MILK OF THE CATTLE («DIA-BRUCELLA AB.-COMBI-V») |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA63657A true UA63657A (en) | 2004-01-15 |
Family
ID=34516318
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2003054598A UA63657A (en) | 2003-05-21 | 2003-05-21 | EIA DIAGNOSTIC SYSTEM FOR ASSAYING IgG AGAINST BRUCELLA ABORTUS IN BLOOD SERUM AND MILK OF THE CATTLE («DIA-BRUCELLA AB.-COMBI-V») |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA63657A (en) |
-
2003
- 2003-05-21 UA UA2003054598A patent/UA63657A/en unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0325045B1 (en) | Immunoassay method for detecting antigens | |
| US5051356A (en) | Specific binding composition comprising a low pI protein or carbohydrate and a diagnostic test kit and method of use | |
| EP0619884B1 (en) | Alloantigen testing by binding assay | |
| Westblom et al. | Diagnosis of Helicobacter pylori infection in adult and pediatric patients by using Pyloriset, a rapid latex agglutination test | |
| US4322495A (en) | Immunoassay | |
| US5270169A (en) | Detection of HLA antigen-containing immune complexes | |
| JPS632348B2 (en) | ||
| US5132205A (en) | High ph extraction composition and its use to determine a chlamydial, gonococcal or herpes antigen | |
| US6146839A (en) | Chlamydia pneumoniae antigens, method for production of the antigens, method and reagents for measurement of anti-Chlamydia pneumoniae antibodies using the antigens | |
| EP0386854B1 (en) | Immunological determination of a coagulation factor in a sample | |
| UA63657A (en) | EIA DIAGNOSTIC SYSTEM FOR ASSAYING IgG AGAINST BRUCELLA ABORTUS IN BLOOD SERUM AND MILK OF THE CATTLE («DIA-BRUCELLA AB.-COMBI-V») | |
| JPS60205367A (en) | Enzyme-immunity fluorescent testing method of anti-epstein-barr virus antobody | |
| NO317151B1 (en) | Paving of antibody production | |
| JP3337575B2 (en) | Method for determining anti-streptolysin O antibody | |
| Gouriet et al. | Comparison of the new InoDiag automated fluorescence multiplexed antigen microarray to the reference technique in the serodiagnosis of atypical bacterial pneumonia | |
| Sumi et al. | Dot-immunobinding assay | |
| UA48811A (en) | Diagnostic immunoenzyme kit for assaying antibrucellosis antibodies in human and cattle blood serum | |
| WO1990010232A1 (en) | Composition containing labeled streptococcal antibody, test kit and assay using same | |
| Surendran et al. | Dot-immunobinding assay (Dot-Iba) | |
| UA68240A (en) | Immunoenzyme kit for assaying antibodies against mycobacterium bovis in blood serum of the cattle | |
| RU2282191C2 (en) | Method of determining functional activity of antichlamydial antibodies | |
| UA57639A (en) | Diagnostic immunoenzyme kit for assaying antibodies against hepatitis c virus in human blood serum or plasma ("dia-hcv") | |
| UA48561A (en) | Diagnostic immunoenzyme assay kit providing for detecting antibodies against lepstospira in human and animal blood serum | |
| UA61538A (en) | Diagnostic eia system for detecting antibodies against bovine leukemia virus in blood serum and cow milk | |
| UA68755A (en) | EIA KIT FOR DETECTION OF SURFACE ANTIGEN (HBsAg) OF HEPATITIS B VIRUS (DIA-HBV) |