UA46357A - Набір для визначення активності кальпаїнів в біологічних рідинах - Google Patents
Набір для визначення активності кальпаїнів в біологічних рідинах Download PDFInfo
- Publication number
- UA46357A UA46357A UA2001074537A UA200174537A UA46357A UA 46357 A UA46357 A UA 46357A UA 2001074537 A UA2001074537 A UA 2001074537A UA 200174537 A UA200174537 A UA 200174537A UA 46357 A UA46357 A UA 46357A
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- activity
- tablet
- kit
- preparation
- proteinases
- Prior art date
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 42
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims abstract description 22
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 claims abstract description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 14
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 11
- AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N urea hydrogen peroxide Chemical compound OO.NC(N)=O AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims abstract description 5
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 21
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 20
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 20
- 229940071106 ethylenediaminetetraacetate Drugs 0.000 claims description 18
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 11
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 claims description 10
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 9
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 9
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims description 9
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 5
- 102100032491 Serine protease 1 Human genes 0.000 claims description 3
- 101710151387 Serine protease 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 101710119665 Trypsin-1 Proteins 0.000 claims description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 7
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 abstract description 2
- 244000309464 bull Species 0.000 abstract description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 abstract 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 abstract 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 abstract 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 abstract 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 abstract 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 4
- 102000007590 Calpain Human genes 0.000 description 3
- 108010032088 Calpain Proteins 0.000 description 3
- 102100024539 Chymase Human genes 0.000 description 3
- 108090000227 Chymases Proteins 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 101150010457 SAS5 gene Proteins 0.000 description 2
- -1 azo compound Chemical class 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000002849 elastaseinhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- GTTYPHLDORACJW-UHFFFAOYSA-N nitric acid;sodium Chemical compound [Na].O[N+]([O-])=O GTTYPHLDORACJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 2
- 230000001810 trypsinlike Effects 0.000 description 2
- GEHMBYLTCISYNY-UHFFFAOYSA-N Ammonium sulfamate Chemical compound [NH4+].NS([O-])(=O)=O GEHMBYLTCISYNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910004709 CaSi Inorganic materials 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000017274 Diospyros sandwicensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000282838 Lama Species 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 102100033174 Neutrophil elastase Human genes 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 101710132772 Peroxidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 101000693530 Staphylococcus aureus Staphylokinase Proteins 0.000 description 1
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000004982 aromatic amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 108090000155 pancreatic elastase II Proteins 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003142 primary aromatic amines Chemical class 0.000 description 1
- 229950008679 protamine sulfate Drugs 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Набір для визначення активності кальпаїнів в біологічних рідинах, який містить полістироловий планшет з іммобілізованим маркерним ферментом, що комплексно пов'язаний із білковим субстратом альбуміну сироватки бика, препарат протеїнази - трипсин, фосфатний буфер для приготування робочого розчину протеїнази, контрольного матеріалу і дослідних проб для аналізу, детергент для приготування миючої рідини, інгібітор для пригнічення активності окремих протеїназ, цитратний буфер, ортофенілендіамін і гідроперит для виявлення залишкової активності маркерного ферменту. Набір додатково містить хлорид кальцію, цистеїн та як інгібітор для пригнічення активності окремих протеїназ використовують етилендіамінтетраацетат.
Description
Опис винаходу
Винахід відноситься до біохімії і може бути використано у біології та медицині для наукових досліджень 2 для визначення активності кальцій-залежних протеїназ в біологічних рідинах, а також - в клінічній практиці.
Відомий "Набір реактивів для визначення первинних ароматичних амінів у розчинах і біологічних рідинах" (див. Пат. РФ М 2097762, з 01 М 33/48, А 61 В 19/02), який містить у відповідних упаковках: - наважку трихлороцтової кислоти. При розчиненні у ЗХОмл дистильованої води дає розчин, що приводить до осаду білків; - смужки паперу із натрієм азотнокислим, які призначені для утворення діазотуючого розчину безпосередньо перед аналізом (ех (етроге); - наважку амонію сульфамінокислого, котра при розчиненні у 25мл дистильованої води дає розчин для зв'язування залишку натрію азотнокислого; - розчин М-(1)-нафтилетилендіамінодигідрохлориду для утворення забарвленої азосполуки, смужки паперу, 12 що містять 0,018мкмоль стандартного аміну, який аналізують. Використання набору дозволяє спростити проведення аналізу і підвищити його точність.
Недоліком відомого рішення є призначення набору тільки для визначення ароматичних амінів.
Відомий також "Набір для визначення активності нетрипсиноподібних протеїназ (НП), хімази, еластазоінгібіторної активності о-1-інгібітора протеїназ (о-1-І7) та рівня о-2-макроглобуліну (о0-2-МГ) в біологічних рідинах" (див. деклараційний патент України Мо 34208 А, МПК (301М33/48, Аб1819/02) - прототип, який містить полістироловий планшет з іммобілізованим маркерним ферментом, що комплексно пов'язаний із субстратом протеолітичної реакції, препарат протеїнази, фосфатний буфер для приготування робочого розчину протеїнази, контрольного матеріалу і дослідних проб для аналізу, детергент для приготування миючої рідини, цитратний буфер, ортофенілендіамін і гідроперит для виявлення залишкової активності маркерного ферменту. У 29 наборі для визначення хімази планшет іммобілізований маркерним ферментом, який комплексно пов'язаний із « субстратом білкової природи, що містить послідовність Рго-Рпе. У наборі для визначення 0-2-МГ планшет іммобілізований маркерним ферментом, який комплексно пов'язаний із протамінсульфатом. Набір для визначення НП, хімази містить мг інгібітору трипсину із сої (СІТ) для пригнічення активності трипсиноподібних протеїназ. Набір для визначення о-2-МГ містить Змг СІТ для пригнічення залишкової - активності трипсину. У наборі для визначення еластазоінгібіторної активності о-1-І препаратом протеїнази є М) еластаза. Усі компоненти надані у окремих упаковках при наступному складі компонентів: препарат протеїнази со (трипсин - 1мг, еластаза - 2 - бмкл), детергент - 0,75мл, фосфатний буфер - 12,5мл, цитратний буфер - бмл, ортофенілендіамін - 2мг або 1 таблетка, гідроперит -1 таблетка, СІТ -1 або Змг, відповідно. (Се)
Недоліком відомого набору є неспецифічність щодо визначення кальпаїнів. «т
В основу винаходу поставлена задача розробки набору, за допомогою якого можна специфічно визначати активність кальпаїнів у біологічних рідинах.
Ця задача вирішується тим, що у наборі для визначення активності кальпаїнів в біологічних рідинах, який містить полістироловий планшет з іммобілізованим маркерним ферментом, що комплексно пов'язаний із « 20 субстратом білкової природи, а саме альбуміном сироватки бика (БСА), препарат протеїнази, фосфатний буфер 73 с для приготування робочого розчину протеїнази, контрольного матеріалу і дослідних проб для аналізу, детергент для приготування миючої рідини, інгібітор для пригнічення активності окремих протеїназ, цитратний буфер, :з» ортофенілендіамін і гідроперит для виявлення залишкової активності маркерного ферменту, усі компоненти подані в окремій упаковці при наступному складі: препарат протеїнази - трипсин - їмг, фосфатний буфер - 12,5мл, детергент - 0,75мл, цитратний буфер - бмл, ортофенілендіамін (ОФД) - 2мг або 1 таблетка, гідроперит - їз 1 таблетка.
Згідно винаходу набір додатково містить хлорид кальцію (СаСі») у кількості не більш 18,Змг, цистеїн у (22) кількості не більш 25,98мг, а у якості інгібітору для пригнічення активності окремих протеїназ використовують с етилендіамінтетраацетат (ЕДТА) у кількості 96,Змг і менш.
Додаткова наявність у наборі Сасі 5 і цистеїну сприяє активації Са 2"-залежних нейтральних протеїназ, а о використання в якості інгібітору ЕДТА забезпечує пригнічення металопротеїназ. Це обумовлено тим, що "І активність кальпаїнів визначають як різницю протеолітичної активності зразків біологічної рідини з добавленням Сасі 5 і цистеїну до кінцевих концентрацій 5тМ і дублікатів зразків з добавленням ЕДТА до кінцевої концентрації т10тМ.
Вміст і певна кількість компонентів у наборі забезпечує оптимальні умови для здійснення високочутливого ферментативного способу оцінки активності кальпаїнів одночасно 18 проб у дублікаті.
Р» Дослідження по запропонованому наборові були проведені в Інституті терапії АМН України. Розрахунки комплектування наборів перевірено лабораторними іспитами.
Набір складається із наступних компонентів: 60 - Полістироловий планшет з іммобілізованим маркерним ферментом (наприклад, пероксидаза), який комплексно пов'язаний із субстратом білкової природи (альбумін сироватки бика) крім лунки АЇ - для контролю насичення забарвлення. - Препарат протеїнази (трипсин) - мг. - Фосфатний буфер для приготування вихідних розчинів трипсину, ЕДТА, Сасі 5» і цистеїну, контрольного 65 матеріалу і дослідних проб для аналізу - 12,5мл. - Детергент для приготування миючої рідини, твін-20 - 0,75мл.
- Інгібітор ЕДТА - 96,Змг і менш. - Сасі » - не більш 18,Змг. - Цистеїн - не більш 25,98мг. - Цитратний буфер - бмл. - ОФД - 2мг або 1 таблетка. - Гідроперит для виявлення залишкової активності маркерного ферменту пероксидази -1 таблетка.
Аналіз здійснюють за інструкцією, яка надається до набору.
Приготування реагентів і матеріалів здійснюють таким чином: 70 1. Готують рідину для відмивання: 0,5мл детергенту додають до 1л дистильованої води. 2. Готують фосфатний буфер: рідину доводять до 250мл дистильованою водою і додають 0,25мМкл детергенту.
З. Відмивають планшет 2 - З рази дистильованою водою, яка містить детергент. 4. Готують вихідний розчин трипсину додаванням 2мл 0,0025 М НОЇ, потім 160мкл отриманого розчину 7/5 додають до 25мл фосфатного буферу, що приготовлено згідно п.2. 5. Готують контрольний матеріал шляхом послідовного розведення за схемою згідно таблиці. ю 8 21овов тема, ові оима 30001110 лемв 098, ик 40060111 зм 06001100 ом 25 50040000 лем009 им 57777702 лама ов оовма « 81111111 ар вихідногорозчигу 0505 вихідного розчину) ча зо 6. Згідно винаходу готують розчин, який містить СасСі 5 і цистеїн, додаванням фосфатного буферу, що приготовлено згідно п.2. Для цього додають у флакони з Сасі » і цистеїном по 1,5мл буферу та змішують їх. іт) 7. Згідно винаходу готують розчин ЕДТА додаванням Змл фосфатного буферу, який приготовлено згідно п.2. со 8. Готують суміш для виявлення активності маркерного ферменту: цитратний буфер розводять у 2 рази дистильованою водою, додають ОФД, гідроперит (готується суміш перед використанням). |се) 35 Можливість проведення аналізу з використанням запропонованого набору наводиться у прикладах. «т
Приклад 1. Визначення активності кальпаїнів у біологічних рідинах у щурів. 1. Окремо на титрувальній дошці готують дослідні зразки (п - 18 - 38) сироватки крові та екстрактів тканин щурів. 2. Вносять у лунки титрувальної дошки контрольний матеріал, приготовлений згідно вищенаведеної таблиці. « 3. Перед проведенням протеолітичної реакції розщеплення іммобілізованого комплексу добавляють в лунки - с відмитого планшета (ряди З - 12) по 1їОмкл Сасі 5 «цистеїн (наприклад, ряди 3, 5, 7, 11) і паралельно ЕДТА (наприклад, ряди 4, 6, 8, 12). :з» 4. Вносять контрольний матеріал (ряди 1-й і 2-й) і дослідні зразки (крім лунок АЗ, А4, ВЗ, В4), які приготовлені згідно пп. 1, 2, у лунки планшета, який містить Сасі окцистеїн або ЕДТА, інкубують при 377С 15хв (реакція розщеплення іммобілізованого кон'югату маркерного ферменту пероксидази з БСА). їх Лунки АЗ, ВЗ, А4, В4 планшету використовують як додатковий контроль для оцінки впливу Сасі. окцистеїн або ЕДТА на активність іммобілізованого маркерного ферменту, в ці лунки додають по 1Омкл Сасі 5 «цистеїн
Ме, або ЕДТА та робочий буфер замість дослідних проб. с 4. Відмивають плашку як вказано раніше. 5. Готують 5095 сірчану кислоту (у набір не входить). о 6. Визначають активність маркерного ферменту додаванням суміші, що містить ОФД та гідроперит у "м цитратному буфері. Інкубують до появи диференційного забарвлення. 7. Зупиняють реакцію додаванням по 5Омкл у лунку 5095 сірчаної кислоти. 8. Визначають оптичну густину розчинів при 49Онм за допомогою багатоканального мікроспектрофотометра. 9. Будують калібровочний графік за результатами вимірювань контрольних зразків розраховують активність кальпаїнів у дослідних пробах за формулою: » (АГ- АТО 4 ях --ьро-- сіа/е ага, во А. - протеолітична активність зразку з добавленням Сасі онцистеїна, яка визначена за калібровочним графіком залежності оптичної густини (з урахуванням впливу на активність іммобілізованого маркерного ферменту) від концентрації трипсину у контрольних зразках, мкг/мл,
А» - протеолітична активність зразку з добавленням ЕДТА, яка визначена за калібровочним графіком залежності оптичної густини (з урахуванням впливу на активність іммобілізованого маркерного ферменту) від в5 концентрації трипсину у контрольних зразках, мкг/мл, 4 - коефіцієнт перерахунку на 1 год.,
1000 - коефіцієнт перерахунку на 1л, 1000 - коефіцієнт перерахунку в мг.
Приклад 2. Визначення активності кальпаїнів у сироватці крові людини. 1. Окремо на титрувальній дошці готують дослідні зразки (п - 40): зразки сироватки крові людини розводять у 250 разів фосфатним буфером, наприклад, шляхом послідовного розведення у 25 та 10 разів (до 9бОмкл буферу додають 4Омкл сироватки, потім до 180мкл буферу - 20мкл 1-го розведення сироватки). 2. Вносять у лунки титрувальної дошки контрольний матеріал, приготовлений згідно таблиці на стор.3. 3. Перед проведенням протеолітичної реакції розщеплення іммобілізованого комплексу добавляють в лунки 7/0 Відмитого планшета (ряди З - 12) по 1Омкл Сасі 2 «цистеїн (наприклад, ряди З, 5, 7, 11) і паралельно ЕДТА (наприклад, ряди 4, 6, 8, 12). 4. Вносять контрольний матеріал (ряди 1-й і 2-й) і дослідні зразки (крім лунок АЗ, А4, ВЗ, В4), які приготовлені згідно пп. 1, 2, у лунки планшета, який містить Сасі окцистеїн або ЕДТА, інкубують при 377С 15хв (реакція розщеплення іммобілізованого кон'югату маркерного ферменту пероксидази з БСА).
Лунки АЗ, ВЗ, А4, В4 планшету використовують як додатковий контроль для оцінки впливу Сасі. окцистеїн або ЕДТА на активність іммобілізованого маркерного ферменту, в ці лунки додають по 1Омкл Сасі 5 «цистеїн або ЕДТА та робочий буфер замість дослідних проб. 5. Відмивають плашку як вказано раніше. 6. Готують 5095 сірчану кислоту (в набір не входить). 7. Визначають активність маркерного ферменту додаванням суміші, що приготовлена з цитратного буферу,
ОФД та гідропериту. Інкубують до появи диференційного забарвлення. 8. Зупиняють реакцію додаванням по 5Омкл у лунку 5095 сірчаної кислоти. 9. Визначають оптичну щільність розчинів при 49О0нм за допомогою багатоканального мікроспектрофотометра. 10. Будують калібровочний графік за результатами вимірювань контрольних зразків та розраховують активність кальпаїнів за формулою: « (Аг-Аг2)ОЮЮ 4 250 еру топ Щ Кк зо А. - протеолітична активність зразку з добавленням Сасі онцистеїна, яка визначена за калібровочним графіком залежності оптичної густини (з урахуванням впливу на активність іммобілізованого маркерного о ферменту) від концентрації трипсину у контрольних зразках, мкг/мл, с
А» - протеолітична активність зразку з добавленням ЕДТА, яка визначена за калібровочним графіком залежності оптичної густини (з урахуванням впливу на активність іммобілізованого маркерного ферменту) від ісе) концентрації трипсину у контрольних зразках, мкг/мл, «Е 4 - коефіцієнт перерахунку на 1 год., 1000 - коефіцієнт перерахунку на 1л, 1000000 - коефіцієнт перерахунку в г. 250 - розведення зразків сироватки крові людини. «
Висновок: Вказані приклади підтверджують можливість здійснення специфічного і високочутливого - с (1079Од//мл) способу визначення активності кальпаїнів у біологічних рідинах (у щурів і людей), спрощення й постановки аналізу за рахунок використання наборів. "» Технічний результат 1. Можливість специфічного визначення активності кальпаїнів мікрометодом. 2. Висока чутливість аналізу: 1079 - 10719Од /мл. т» З. Спрощення проведення аналізу. (22) сю
Claims (1)
- Формула винаходу с 50 | | Що | | | М | Й Набір для визначення активності кальпаїнів в біологічних рідинах, який містить полістироловий планшет з "І іммобілізованим маркерним ферментом, що комплексно пов'язаний із білюоювим субстратом альбуміну сироватки бика, препарат протеїнази - трипсин, фосфатний буфер для приготування робочого розчину протеїнази, контрольного матеріалу і дослідних проб для аналізу, детергент для приготування миючої рідини, інгібітор для пригнічення активності окремих протеїназ, цитратний буфер, ортофенілендіамін і гідроперит для виявлення залишкової активності маркерного ферменту, усі компоненти подані в окремій упаковці при наступному складі: » трипсин - 1 мг, фосфатний буфер - 12,5 мл, детергент - 0,75 мл, цитратний буфер - 6 мл, ортофенілендіамін - 2 мг або 1 таблетка, гідроперит -1 таблетка, який відрізняється тим, що набір додатково містить хлорид кальцію у кількості не більше 18,3 мг, цистеїн у кількості не більше 25,98 мг, а як інгібітор для пригнічення бр активності окремих протеїназ використовують етилендіамінтетраацетат у кількості 96,3 мг і менше.Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2002, М 5, 15.05.2002. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України. б5
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2001074537A UA46357A (uk) | 2001-07-02 | 2001-07-02 | Набір для визначення активності кальпаїнів в біологічних рідинах |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2001074537A UA46357A (uk) | 2001-07-02 | 2001-07-02 | Набір для визначення активності кальпаїнів в біологічних рідинах |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA46357A true UA46357A (uk) | 2002-05-15 |
Family
ID=74207600
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2001074537A UA46357A (uk) | 2001-07-02 | 2001-07-02 | Набір для визначення активності кальпаїнів в біологічних рідинах |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA46357A (uk) |
-
2001
- 2001-07-02 UA UA2001074537A patent/UA46357A/uk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105785043B (zh) | 用于定量检测afp‑l3%的试剂盒 | |
| CN104977400A (zh) | 一种不孕不育联合检测试剂盒及其检测方法 | |
| Jimenez-Porras | Differentiation between Bothrops nummifer and Bothrops picadoi by means of the biochemical properties of their venoms | |
| WO2006123789A1 (ja) | 酵素分析方法 | |
| CN102798726B (zh) | 维生素b12化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN104634970B (zh) | 用于检测脂蛋白相关磷脂酶a2的试剂盒及其制备和应用 | |
| CN101424602A (zh) | 标本前处理液、病毒检测用试剂盒及病毒检测方法 | |
| Plantner | A microassay for proteolytic activity | |
| CN109061175A (zh) | 一种检测骨钙素的试剂盒及使用方法 | |
| JP4197393B2 (ja) | ＩｇＡ腎症の検査法 | |
| CN102749456B (zh) | 血管紧张素ⅰ化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法 | |
| UA46357A (uk) | Набір для визначення активності кальпаїнів в біологічних рідинах | |
| US5320945A (en) | Method and reagent for the determination of antithrombin III | |
| Santarius et al. | Radial diffusion as a sensitive method for screening endopeptidase activity in plant extracts | |
| CN106198959A (zh) | 血清透明质酸化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN101368965A (zh) | 一种检测巨细胞病毒IgM抗体的化学发光法免疫分析诊断试剂盒 | |
| EP1031035B1 (en) | Haptoglobin assay | |
| AU622339B2 (en) | Method and reagent for the determination of antithrombin iii | |
| US4095948A (en) | Determination of uric acid | |
| Sato et al. | Identification of human urinary stains by the quotient uric acid/urea nitrogen | |
| UA44066C2 (uk) | Набір для визначення концентрації катепсину g в біологічних рідинах | |
| UA34208C2 (uk) | Набір для визначення активності хімази в біологічних рідинах | |
| UA66517A (en) | Set for determining the activity of metalloelostase in biological liquids | |
| UA72656C2 (en) | Set for determining the activity of no-tripsin-like proteinases in biological liquids | |
| UA72345C2 (en) | Complete set for determining the activity of -2-macroglobulin in biological liquids |