UA16040U - A set of monoclonal antibodies of r2, r4, specific to horse-radish peroxidase enzyme, suitable for use in immuno fermentative analysis - Google Patents
A set of monoclonal antibodies of r2, r4, specific to horse-radish peroxidase enzyme, suitable for use in immuno fermentative analysis Download PDFInfo
- Publication number
- UA16040U UA16040U UAU200601617U UAU200601617U UA16040U UA 16040 U UA16040 U UA 16040U UA U200601617 U UAU200601617 U UA U200601617U UA U200601617 U UAU200601617 U UA U200601617U UA 16040 U UA16040 U UA 16040U
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- monoclonal antibodies
- fermentative
- immuno
- analysis
- specific
- Prior art date
Links
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 title claims abstract description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 4
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 claims 1
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000003815 abdominal wall Anatomy 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000011545 carbonate/bicarbonate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Abstract
Description
Опис винаходуDescription of the invention
Корисна модель стосується імунохімії та гібридомної технології і може бути використана для одержання 2 моноклональних антитіл (МКАТ) до ферменту пероксидази хрону (ПХ). Метою корисної моделі є одержання моноклональних антитіл до ферменту пероксидази хрону, придатних для використання у імуноферментному аналізі (ІФА).A useful model relates to immunochemistry and hybridoma technology and can be used to generate 2 monoclonal antibodies (MAQs) to the horseradish peroxidase (HP) enzyme. The purpose of the useful model is to produce monoclonal antibodies to the horseradish peroxidase enzyme suitable for use in enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).
Відомі МКАТ до пероксидази хрону |1). Проте згадані моноклональні антитіла є бівалениними - направленими одночасно до ферменту ПХ та флуоресцину ізотіоцианату. 70 Найбільш близьким до запропонованих є моноклональні антитіла, які взаємодіють із пероксидазою хрону та призначенні для застосування у біосенсорах |21.Known MKAT to horseradish peroxidase |1). However, the mentioned monoclonal antibodies are bivalenic - directed simultaneously to PC enzyme and fluorescein isothiocyanate. 70 The closest to the proposed ones are monoclonal antibodies that interact with horseradish peroxidase and intended for use in biosensors |21.
У порівнянні із вищезгаданим антитілами клони К2, К4 характеризуються більшою специфічністю та активністю у імуноферментному аналізі.In comparison with the above-mentioned antibodies, clones K2, K4 are characterized by greater specificity and activity in immunoenzymatic analysis.
Моноклональні антитіла продукуються гібридними клітинами, що одержані при злитті мієломних мишачих 12 клітин Зр 2/0 та спленоцитів мишей лінії ВаІр/с. Клони МКАТ К2, К4 характеризуються наступними ознаками (таблиця). і культуральній рідиніН -Monoclonal antibodies are produced by hybrid cells obtained by the fusion of myeloma mouse 12 Zr 2/0 cells and splenocytes of BaIr/c mice. MKAT clones K2, K4 are characterized by the following features (table). and culture liquidH -
Приклад 1. Одержання та очистка моноклональних антитіл із асцитичної рідиниExample 1. Preparation and purification of monoclonal antibodies from ascitic fluid
Для нагромадження значної кількості МКАТ гібридоми-продуценти антитіл культивували у черевних порожнинах мишей. Для цього за 10-14 днів до ін'єкції клітин мишам вводили внутрішньочеревно по 0О,5мл пристану. Мінеральне масло служило сильним стимулятором асцитоутворення. Потім вводили від 10 9 до 107 о тібридом-продуцентів МКАТ в їмл середовища. Через 5-8 днів у мишей починала накопичуватися рідина в «г черевній порожнині. Її відбирали шляхом проколювання черевної стінки товстою голкою. З однієї миші за кілька разів вдавалося отримати від 5 до 1Омл асцитичної рідини. Після центрифугування при З0ООоб/хв. на протязі 5 о хвилин асцит зберігали в замороженому стані. «оTo accumulate a significant amount of MKAT, antibody-producing hybridomas were cultivated in the abdominal cavities of mice. For this, 10-14 days before the injection of cells, mice were injected intraperitoneally with 00.5 ml of Pristan. Mineral oil served as a strong stimulator of ascites formation. Then, from 10 9 to 107 o of MKAT-producing tybridomas per ml of the medium were introduced. After 5-8 days, fluid began to accumulate in the abdominal cavity of the mice. It was taken by piercing the abdominal wall with a thick needle. It was possible to obtain 5 to 1 Oml of ascitic fluid from one mouse several times. After centrifugation at 3000 rpm. ascites was kept frozen for 5 minutes. "at
Антитіла, що знаходяться в асциті, осаджували сульфатом натрію (1895 та 1695), розчиняли у дистильованійAntibodies in ascites were precipitated with sodium sulfate (1895 and 1695), dissolved in distilled
Зо воді, переосаджували сульфатом амонію (5095) та розчиняли у мінімальній кількості води. -From water, reprecipitated with ammonium sulfate (5095) and dissolved in a minimum amount of water. -
Приклад 2. Спосіб використання кон'югату моноклональних антитіл до пероксидази хрону з ІЗОМ людини.Example 2. The method of using the conjugate of monoclonal antibodies to horseradish peroxidase with human IZOM.
Сорбцію МКАТ до ІМ людини у полістиролових планшетах проводили у 0,05М карбонат-бікарбонатному буфері (рНУО,б) протягом ночі при 4 9С в концентрації 2,5мкг/мл. Для відмивання використовували « фосфатно-сольовий буфер з додаванням 0,0595 твін-20 (ФСБТ), рН7,2-7,4. У лунки планшету вносили досліджувані зразки сироваток крові та позитивний контроль (кон'югат моноклональних антитіл до пероксидази в с хрону з ІЯМ людини). Планшет інкубували 1 годину при 372С і потім відмивали. Для виявлення зв'язаних з» антитіл використовували кон'югат рекомбінантного білку-антигену вірусу простого герпесу з пероксидазою хрону, який інкубували 1 годину при кімнатній температурі. Планшет тричі відмивали ФСОБТ і один раз водою. Як субстрат використовували 0,00395 розчин перекису водню в 0,15М нитратному буфері, рН5,О, а як хромоген - з 45 орто-фенілендиамін. Реакцію зупиняли 2М сірчаною кислотою. Оптичну щільність при довжині хвиль 492нм і бЗОнм вимірювали на спектрофотометрі.Sorption of MKAT to human MI in polystyrene tablets was carried out in 0.05 M carbonate-bicarbonate buffer (рНУО,б) overnight at 4 9С at a concentration of 2.5 μg/ml. Phosphate-salt buffer with the addition of 0.0595 Tween-20 (FSBT), pH 7.2-7.4 was used for washing. The tested blood serum samples and a positive control (conjugate of monoclonal antibodies to horseradish horseradish peroxidase from human IIM) were placed in the wells of the tablet. The tablet was incubated for 1 hour at 372C and then washed. A conjugate of the recombinant protein-antigen of the herpes simplex virus with horseradish peroxidase was used to detect antibodies bound to ", which was incubated for 1 hour at room temperature. The tablet was washed three times with FSOBT and once with water. A 0.00395 solution of hydrogen peroxide in a 0.15M nitrate buffer, pH5.0 was used as a substrate, and ortho-phenylenediamine with 45 was used as a chromogen. The reaction was stopped with 2M sulfuric acid. The optical density at the wavelength of 492 nm and bZOnm was measured on a spectrophotometer.
Ге»! Таким чином, пропонований метод одержання моноклональних антитіл до ПХ та позитивних контролів імуноферментних тест-систем на їх основі дозволяє одержувати універсальні контролі діагностичних наборів для о визначення ЯМ до будь-яких збудників інфекційних захворювань, які побудовані за принципом так званої «їз» 20 "ІдДМ-пастки".Gee! Thus, the proposed method of obtaining monoclonal antibodies to PC and positive controls of immunoenzymatic test systems based on them allows to obtain universal controls of diagnostic kits for the determination of MM to any pathogens of infectious diseases, which are built according to the principle of the so-called "Iz" 20 "IdDM -traps".
Перелік літературних джерел: с 1. Кагаула|їемм |., Вепгвіпуд 0., Каївег с. еї а). Ргодисіоп апа ЕЇГІЗА арріїсайоп ої бБівресіїс топосіопаї апіродіез адаіїпві Ппогевзсеіїп ізоїпіосуапаїе (БІТС) апа Ппогзегадівй регохідазе (НКР) // Шошгпа! оїList of literary sources: p. 1. Kagaula |iemm |., Vegpvipud 0., Kaiveg p. her a). Rgodisiop apa EIHIZA arriisayop oi bBivresiis toposiopai apirodiez adayipvi Ppogevzseiip isoipiosuapaie (BITS) apa Ppogzegadivy regohidase (NKR) // Shoshgpa! oh
Іттипоіодіса! Ме(подвв. - 1988. - Мо! І, 1. - Р.95-99. 29 2. Вгупда Е., Ноизкаа М., Вгапдепригдуб А. еї аЇ. Оріїса! ріозепзоге їТог геаІ-їте теазигетепі оїтапа|угев с іп Біоса ріазта // Віозепзогг апа Віоеіесігопісв. - 2002. - Моі|.17, 8. - Р.665-675.Ittypoiodis! Me(podvv. - 1988. - Mo! I, 1. - R.95-99. 29 2. Vgupda E., Noizkaa M., Vgapdeprigdub A. ei aY. ip Bios riazta // Viozepzogg apa Vioeiesigopisv. - 2002. - Moi|.17, 8. - R.665-675.
З. Мікоїауепко І.М., СаїЇКіп О.Ми., Сгарспепко М.І. еї аЇ. Ргерагайоп ої підніу ригйей питап Ідс, ІМ, апа ІдА ог іттипігайоп апа іттипоапаїувзів // ОКгаїпіса Віоогдапіса Асіа. - 2005. - Моі.2,2. - Р.3-11. г 4. Нептапзоп О.Т. Віосопішдай(е (есппідцев. - Зап Оіедо: Асадетіс Ргевзв, 2000. - Р.461-469.Z. Mikoiauepko I.M., SaiYikip O.My., Sgarspepko M.I. her and her Rgeragayop oi podniu rigyei pitap Ids, IM, apa IdA og ittipigayop apa ittipoapaiuvziv // OKgaipisa Vioogdapisa Asia. - 2005. - Moi.2,2. - R.3-11. g 4. Neptapzop O.T. Viosopishdai (esppidtsev. - Zap Oiedo: Asadetis Rhevzv, 2000. - R.461-469.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU200601617U UA16040U (en) | 2006-02-16 | 2006-02-16 | A set of monoclonal antibodies of r2, r4, specific to horse-radish peroxidase enzyme, suitable for use in immuno fermentative analysis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU200601617U UA16040U (en) | 2006-02-16 | 2006-02-16 | A set of monoclonal antibodies of r2, r4, specific to horse-radish peroxidase enzyme, suitable for use in immuno fermentative analysis |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA16040U true UA16040U (en) | 2006-07-17 |
Family
ID=37503623
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAU200601617U UA16040U (en) | 2006-02-16 | 2006-02-16 | A set of monoclonal antibodies of r2, r4, specific to horse-radish peroxidase enzyme, suitable for use in immuno fermentative analysis |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA16040U (en) |
-
2006
- 2006-02-16 UA UAU200601617U patent/UA16040U/en unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3158106B2 (en) | Monoclonal antibody and method for producing the same | |
| CN111693712A (en) | Method for detecting new coronavirus SARS-CoV-2N protein by adopting aptamer | |
| RU2009126617A (en) | DOG THYMUS STROMAL LYMPHOPOETIC PROTEIN AND ITS APPLICATION | |
| Sangesland et al. | A single human VH-gene allows for a broad-spectrum antibody response targeting bacterial lipopolysaccharides in the blood | |
| RU2395577C1 (en) | STRAIN OF HYBRID ANIMAL CELLS Mus musculus L - PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODIES FOR EXPOSING VP40 PROTEIN OF EBOLA VIRUS, ZAIRE SUBTYPE (Mainga STRAIN) (VERSIONS), MONOCLONAL ANTIBODY PRODUCED BY SAID STRAIN (VERSIONS) AND SET FOR "SANDWICH" FORMAT IMMUNOENZYMOMETRIC TEST SYSTEM FOR EXPOSING VP40 PROTEIN OF EBOLA VIRUS, ZAIRE SUBTYPE (Mainga STRAIN) | |
| UA16040U (en) | A set of monoclonal antibodies of r2, r4, specific to horse-radish peroxidase enzyme, suitable for use in immuno fermentative analysis | |
| CN104569392A (en) | ELISA kit for detecting syphilis specific IgM antibody and preparation method of ELISA kit | |
| RU2395576C1 (en) | STRAIN OF HYBRID ANIMAL CELLS Mus museums L - PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODIES FOR EXPOSING NUCLEOPROTEIN OF EBOLA VIRUS, ZAIRE SUBTYPE (Mainga STRAIN) (VERSIONS), MONOCLONAL ANTIBODY PRODUCED BY SAID STRAIN (VERSIONS) AND SET FOR "SANDWICH" FORMAT IMMUNOENZYMOMETRIC TEST SYSTEM FOR EXPOSING NUCLEOPROTEIN OF EBOLA VIRUS, ZAIRE SUBTYPE (Mainga STRAIN) | |
| WO1997023509A1 (en) | ANTIFACTOR Xa-TISSUE FACTOR PATHWAY INHIBITOR COMPLEX MONOCLONAL ANTIBODY AND USE OF THE SAME | |
| UA16041U (en) | A set of monoclonal antibodies of p2, p3, p4, p5, p6, specific to protein of p24 human immunodeficiency virus, suitable for use in immuno fermentative analysis | |
| PT86117B (en) | METHOD FOR THE PREPARATION OF NEGATIVE ANTIGRAM MONOCLONAL ANTIBODIES | |
| KR100998419B1 (en) | hapten compound and antibody | |
| UA16035U (en) | A set of monoclonal antibodies k3, k7, specific to immunoglobulins of class of g of cattle, suitable for use in immuno fermentative analysis | |
| WO2022027037A1 (en) | Anti-sars corona virus-2 spike protein antibodies | |
| WO1996029349A1 (en) | Monoclonal antibody specifically recognizing adeno-associated virus cap protein | |
| UA26768U (en) | MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgG OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNO-ENZYME TEST-SYSTEMS | |
| RU2686630C1 (en) | Strains of hybrid cells of animals mus_ musculus - producers of monoclonal antibodies to protein gp of ebola virus (subtype zaire) and monoclonal antibodies to protein gp of ebola virus (subtype zaire) | |
| RU2769817C1 (en) | STRAIN OF HYBRID ANIMAL CELLS Mus MUSCULUS 1F1 - PRODUCER OF A MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST THE NUCLEOCAPSID PROTEIN N OF THE SARS-CoV-2 VIRUS | |
| CN110157701A (en) | The method that promotion functions IgA antibody is largely secreted | |
| UA10588U (en) | Monoclonal antibodies 156S10, specific to human immunoglobulins of the class G, suitable to immuno analysis | |
| RU2771288C1 (en) | STRAIN OF HYBRID ANIMAL CELLS MUS MUSCULUS 2E1B5 - PRODUCER OF A MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST THE RECEPROT-BINDING DOMAIN OF PROTEIN S OF THE SARS-CoV-2 VIRUS | |
| RU2395575C1 (en) | STRAIN OF HYBRID ANIMAL CELLS Mus musculus L - PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODIES FOR EXPOSING VP40 PROTEIN OF MARBURG VIRUS, (Popp STRAIN) (VERSIONS), MONOCLONAL ANTIBODY PRODUCED BY SAID STRAIN (VERSIONS) AND SET FOR "SANDWICH" FORMAT IMMUNOENZYMOMETRIC SYSTEM FOR EXPOSING VP40 MATRIX PROTEIN OF MARBURG VIRUS (Popp STRAIN) | |
| RU2429008C1 (en) | METHOD OF PURIFICATION OF HUMAN RECOMBINANT GROWTH FACTOR VIIa | |
| JPH09302000A (en) | Anti-tissue factor monoclonal antibody and determination of tissue factor coagulation activity using the monoclonal antibody | |
| CN102250852B (en) | Clone and expression of bovine recombinant alpha-1,3-galactoside transferase (GT) |