UA143248U - Спосіб отримання вакцини для профілактики і лікування псевдомонозів - Google Patents
Спосіб отримання вакцини для профілактики і лікування псевдомонозів Download PDFInfo
- Publication number
- UA143248U UA143248U UAU201908730U UAU201908730U UA143248U UA 143248 U UA143248 U UA 143248U UA U201908730 U UAU201908730 U UA U201908730U UA U201908730 U UAU201908730 U UA U201908730U UA 143248 U UA143248 U UA 143248U
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- vaccine
- light
- differs
- intensity
- solution
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 48
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title description 6
- MJVAVZPDRWSRRC-UHFFFAOYSA-N Menadione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C)=CC(=O)C2=C1 MJVAVZPDRWSRRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 claims abstract description 9
- 235000012711 vitamin K3 Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 239000011652 vitamin K3 Substances 0.000 claims abstract description 9
- 229940041603 vitamin k 3 Drugs 0.000 claims abstract description 9
- FVTCRASFADXXNN-SCRDCRAPSA-N flavin mononucleotide Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O FVTCRASFADXXNN-SCRDCRAPSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims abstract description 8
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 7
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims abstract description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 4
- 230000003497 anti-pneumococcal effect Effects 0.000 claims 1
- 229940124733 pneumococcal vaccine Drugs 0.000 claims 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 abstract description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 14
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 10
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 10
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- 239000003504 photosensitizing agent Substances 0.000 description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 4
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 4
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 4
- 208000033809 Suppuration Diseases 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 3
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 2
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 2
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 2
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 150000002211 flavins Chemical class 0.000 description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 108050001049 Extracellular proteins Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 206010037596 Pyelonephritis Diseases 0.000 description 1
- 101710084578 Short neurotoxin 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710182532 Toxin a Proteins 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 208000018879 impaired coordination Diseases 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 1
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 1
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 1
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 230000001699 photocatalysis Effects 0.000 description 1
- 238000007146 photocatalysis Methods 0.000 description 1
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 150000004053 quinones Chemical class 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Спосіб отримання мультиштамової протисиньогнійної вакцини шляхом фотодинамічної інактивації збудника. По-перше, беруть необхідну кількість актуальних штамів псевдомонад, інкубують їх з синьогнійним полівалентним бактеріофагом, потім додають рибофлавін-мононуклеотид та менадіону сульфат. Після чого розчин опромінюють світлом, осад відцентрифуговують та отриману вакцину у вигляді надосадної рідини використовують як вакцину без очищення.
Description
Корисна модель належить до мікробіології та біотехнології та може бути застосована для створення вакцин для лікування і профілактики псевдомонозів, викликаних в тому числі антибіотикорезистентними штамами синьогнійної палички (Рвендотопаз аегидіповза).
Пошук нових підходів до створення імунних препаратів продовжується в різних країнах світу.
В Україні відсутні як діагностичні препарати для ідентифікації збудника і визначення специфічних антитіл, так і вакцинні препарати для профілактики та лікування синьогнійної інфекції. Отримання таких препаратів вітчизняного виробництва є перспективним, актуальним та соціально і економічно обгрунтованим. Проблему боротьби з синьогнійною інфекцією можна розділити на кілька складових: по-перше - лікування хворих з синьогнійною інфекцією; по-друге - екстрена профілактика виникнення ускладнень, зумовлених Р. аєгидіпозва (у хворих з пораненнями, опіками, з відкритими травмами, при інвазивних методах лікування); втретє - профілактика інфікування Р. аєгидіпова груп ризику (медичний персонал госпіталів, реанімаційних, хірургічних, опікових відділень, бійців АТО, хворих перед плановими хірургічними втручаннями, тощо). При використанні традиційних методів для створення вакцин, коли необхідно вилучити протективні антигени із бактеріальної клітини, виникає ряд проблем.
По-перше, відсоткове співвідношення протективних антигенів незначне, тому при культивуванні необхідні великі об'єми біомаси, а також необхідним є багаторазові методики очищення і концентрації що зумовлює високі виробничі трати. По-друге, немає гарантування повної відсутності домішок, хімічних реагентів (фенолу, мертиоляту), що може викликати небажані реакції організму вакцинованих. Останні 20-ть років увагу дослідників було сконцентровано на отриманні різних фракційних вакцин - на основі білків зовнішньої мембрани, плазмідні, інкорпоровані в еукаріотичні клітини, ДНК-вакцини з фрагментами, що кодують джгутик В і екстрацелюлярний білок РЕ. Дослідження ДНК-вакцин сконцентровані на вилученні найбільш характерних фрагментів, що кодують специфічні вірулентні фактори, а також на основі введення таких вакцин.
Зворотною стороною застосування таких вакцин є непередбаченість можливих наслідків через присутність чужорідного матеріалу. Більшість раніше створених вакцин проходили лише стадію доклінічних досліджень або були припинені, з цілого ряду причин, на перших стадіях доклінічних досліджень.
Зо Найбільшого успіху досягла вакцина "Псевдовак", до складу якої включені структурні і позаклітинні антигени інактивованих 7 імунотипів штамів Р. аєгидіпоза.
Ефективність цієї вакцини вивчалась у дітей і дорослих з опіками, хірургічними втручаннями, у хворих реанімаційних відділень, що знаходяться на ІВЛ. Хоча вакцина оцінюється як достатньо ефективна, в літературі відсутні дані щодо перспективності застосування її у хворих з муковісцидозом, при різних формах хронічних неспецифічних захворювань легень тощо.
Позитивну оцінку для лікування муковісцидозу отримала вакцина "Аегидеп" (США і Швейцарія), до складу якої включені полісахариди, очищені з 12 штамів, кон'юговані з токсином А. При цьому слід зазначити, що в результаті реактогенності даних вакцин та їх недостатньої ефективності в результаті моноспецифічності, практичного застосування вони не знайшли.
По різних причинах на сьогодні для використання у клінічній практиці не знайшов місце жоден препарат, призначений для імунопрофілактики та імунотерапії синьогнійної інфекції.
Основна проблема створення високоефективних вакцин проти синьогнійної інфекції - це отримання вакцинних антигенів, які б викликали протективну відповідь незалежно від серотипу (, навіть, підтипу) збудника, та залишались малотоксичними і нереактогенними. Окремим напрямком досліджень вчених різних країн є застосування технологій отримання імуногенів шляхом інактивації вихідного продуцента фотодинамічним методом.
При фотоінактивації відносно біомолекул (видимим світлом) флавіни завдяки утворенню специфічних флавінових аптамерів здатні специфічно і незворотно фрагментувати ДНК та РНК збудників саме в місцях розташування флавінових аптамерів. Раніше вважалося, що механізм дії рибофлавіну пов'язаний з дією синглетного кисню, але в останній час це твердження було поставлено під сумнів у зв'язку з відсутністю характерних реакцій на синглетний кисень при опроміненні розчину рибофлавіну. В останній час механізм дії флавінів та хінонів пов'язують саме з радикальним фотокаталізом.
Відомий метод створення лікувальних вакцин, які містять інфекційні частки, що можуть бути вірусними, бактеріальними та/або клітинними за своєю природою. Метод включає стадії додавання до бактеріальної суспензії ефективної нетоксичної кількості ендогенного фотосенсибілізатора і наступний вплив на цей розчин світлового опромінення, достатнього для інактивації генетичного матеріалу інфекційного агенту, але недостатнього для руйнування його антигенних характеристик (05 Раїепі 875909282 "Ргерагайоп ої массіпез5 ивіпа рпоїозепзіїі2ег бо апа дн"). Недоліком методу є низька ефективність інактивації мікробних збудників під впливом спектра видимого світла спільно з фотосенсибілізаторами - похідними флавінів. У більшості випадків після інкубації протягом 6-36 хвилин розчину суспензії синьогнійної палички в присутності вказаних у найближчому аналогу фотосенсибілізаторів не призводила до 100 95 загибелі збудника. Окрім того, отримані авторами зразки вакцин були моноштамовими та могли захищати вакцинованих виключно від одного штаму синьогнійної палички. Ефективність вакцинації також зменшувалася у зв'язку з корпускулярним характером вакцини. Застосовані в представленому аналогу фотосенсибілізатори мали низьку розчинність та відповідно ефективність фотоінактивації для більшості мікроорганізмів. Вказані недоліки усуваються шляхом застосування одразу багатьох актуальних штамів синьогнійної паличики, а як сенсибілізаторів - більш розчинних у воді рибофлавіну мононуклеотиду та менадіону сульфату, які не застосовувалися в найближчому аналогу. Для підвищення протективної ефективності та зменшення реактогенності отриманої запропонованим методом вакцини, застосовується специфічний полівалентний, або адаптований до конкретних штамів псевдомонад синьогнійний бактеріофаг, що дозволяє збільшити кількість доступних антигенів мікроорганізмів в результаті фаголізису. При цьому отримана вакцина не являє собою корпускули (суспензію), як у найближчому аналогу, а є водорозчинною та не потребує додаткового очищення.
В основу корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб інактивації збудника (Рзендотопавзх аєгидіпоза) для отримання вакцини для профілактики і лікування псевдомонозів.
Поставлена задача вирішується тим, що отриманий завис необхідної кількості актуальних штамів культури синьогнійної палички у живильному середовищі, по-перше, інкубують з синьогнійним полівалентним бактеріофагом, потім додають рибофлавіну-мононуклеотид та менадіону сульфат, після чого розчин опромінюють світлом, осад віддентрифуговують та отриману вакцину у вигляді надосадкової рідини використовують як вакцину без очищення.
Інша умова реалізації корисної моделі описує додавання до розчину як фотосенсибілізатора рибофлавін-мононуклеотиду в концентраціях від 0,01 до 1 95.
Інша умова реалізації корисної моделі описує додавання до розчину як фотосенсибілізатора менадіону сульфату в концентраціях від 0,01 до 1 Об.
Інша умова реалізації корисної моделі описує застосування для інактивації збудника світла в області 260-400 нм та інтенсивністю від 1 до 100 Вт/см3.
Зо Інша умова реалізації корисної моделі описує застосування для інактивації збудника світла в області 260-400 нм та інтенсивністю від 1 до 100 Вт/см3 та/"або опромінення в області 400-600 нм та інтенсивністю від 10 до 100 Вт/см3, а опромінення розчину світлом триває від 3-х до 30 хвилин.
У вказаних умовах отримують ефективну вакцину, що має протективні властивості відносно синьогнійної інфекції.
Варіанти здійснення корисної моделі
Експериментальним шляхом були відпрацьовані параметри здійснення інактивації вакцинних штамів Реєецйдотопаз аєгидіпоза: концентрація культури, доза бактеріофагу, фотосенсибілізатори та їх дози, характер та вид опромінення, стабільність знезараження культури (Табл. 1).
Таблиця 1
Дослідження ефективності інактивації збудників при різних режимах обробки
Проба Інградієнти проби Вид опромінення Наявність Наявність
Мо рад р д опр росту: 24 год. | росту: 5 діб : 1х 107 ! без опроміне 6 1 |Р. аегидіпова (106 КУО/ мл) безопромінення 05 ЛО КУС/МЛ| кусумл
І вфізрозчин опромінення світом 400 - в 2х107 600 нм 2 хо КУсС/мл| куо/мл - - - З
Р. аегидіпоза ВМ світом 400 7 х 101 КУО/мл 2. т фізрозчин нм : КУС/мл жксиньогнійний бактеріофаг ВМ світлом 210 - З х 10! КУО/млі 102 КУО/мл ! опромінення світом 400 - й бх 102
Р. аегидіпоза 600 нм 8 х 10' КУО/мл КУО/МЛ 3. «фізрозчин опромінення світлом 210 їх 102 ж рибофлавін мононуклеоти Й ! х
Р. аегидіпоза вфізрозчин опромінення світом 400 - і 4. ж рибофлавін мононуклеотид | 600 нм 1 х 10 КУб/мл ж- менадіону сульфат натрію
Р. аегидіпоза (105 КУО/ мл) я ях рибофлавін опромінення світом 400 - 5. мононуклеотид й . 600 нм ж менадіону сульфат натрію ксиньогнійний бактеріофаг
Як видно із таблиці 1, запропонована технологія інактивації вакцинних штамів збудника найбільш ефективна для варіанту 5, де застосовуються обидва фотоінактиватори та синьогнійний бактеріофаг.
Приклад 1. Дослідження протективних властивостей вакцин-кандидатів на моделі псевдомонозу у мишей
Оцінювали в експерименті протективні властивості вакцини-кандидата, що була зроблена на основі запропонованого способу.
Попередньо протягом 24-48 годин культивують на поживному середовищі 20 актуальних регіональних штамів Р. аеєпідіпоза, готують завис культури у СТБ з 1 95 глюкози у концентрації 106 КУО/мл по Мс-Рапапа, додають суспензію фаголізату (полівалентного або адаптованого бактеріофагу) в співвідношенні 1 : 6 об'ємних одиниць, витримують розчин 30 хвилин при 35" С.
Рідину в реакторі регулярно перемішують до отримання однорідної суспензії. До суспензії в реакторі додають менадіону сульфату натрію та рибофлавіну мононуклеотиду з таким розрахунком, щоб кінцева концентрація кожного з компонентів становила 1,095. Розчин витримують із фотосенсибілізаторами 60 хвилин, після чого опромінюють ультрафіолетовим світлом (260 - 280 нм) протягом 30 хвилин, постійно перемішуючі розчин. Після цього розчин опромінюють видимим світлом (400 - 600 нм) протягом 30 хвилин та центрифугують при 8 000 об/хв. протягом 20 хвилин, після чого як вакцину використовують надосадову рідину.
Були використані безінбредні миші, вагою 20,0 - 24,0 г. (Табл. 2).
Для імунізації тварин в дослід було взято наступні вакцинні зразки: Мо 1 - термічно інактивована нагріванням корпускулярна вакцина (позитивний контроль); Ме 2 - неочищена поліштамова вакцина, інактивована рибофлавін-вікасоловим фотодинамічним способом (далі - "В";
Мо З - надосадова рідина, отримана після центрифугування зразку вакцини " В " протягом 20 хвилин при 8000 об/хв.;
Мо 4 - осад після центрифугування вакцини "В" протягом 20 хвилин при 8000 об/хв., ресуспендований у фізіологічному розчині.
Зо Кожний із зразків був досліджений на інбредних мишах (по 20 тварин на зразок), шляхом введення по 0,2 мл підшкірно (по 10 тварин) та по 0,5 мл внутрішньочеревно (по 10 тварин).
Схема введення була наступна: вакцинні зразки вводили на перший, третій та сьомий день.
Нагляд за дослідними тваринами дозволив зробити певні висновки щодо токсигенності та реактогенності зразків
По-перше, жодна із вакцинованих мишок не загинула протягом всього часу нагляду (25 днів).
На місці ін'єкції покрасніння, припухлості, некрозу не виникало; загальна поведінка, апетит, фізична активність також не змінювалась.
З метою визначення протективних властивостей вакцинних препаратів через 14 діб після вакцинації тваринам вводили інфікуючу дозу змішаної суспензії добових культур 8 штамів Р. аегидіпоза 109 КУО/мл, по 0,5 та 1,0 мл внутрішньочеревно.
Паралельно, в невакцинованій контрольній групі інфікували аналогічним методом 10 невакцинованих тварин (по 5 на дозу).
Як показали результати досліджень, у групі вакцинованих тварин загинула одна тварина на 11 день після зараження, в той час як в контрольній групі - б тварин (60,0 Фо) - загинули в перші 2-6 днів, а решта - за період 8 діб.
У всіх тварин контрольної групи спостерігалися симптоми інтоксикації (в'ялість, зниження апетиту, порушення координації рухів).
При розтину в черевній порожнині тварин мало місце набухання, некроз очеревини.
При засіві промивних вод черевної порожнини вилучали культуру Р. аєгидіпоза у великій кількості (107 - 108 КУО/мл).
У групі вакцинованих тварин при пункції черевної порожнини з наступним засівом ексудату на селективне середовище росту культури псевдомонад виявлено не було.
Таблиця 2
Ефективність розробленої вакцини за критерієм протективних властивостей
Мо Н . Кількість тварин у групі, п (п загинуло, т (т азва варіанту вакцини-кандидата | . й . . . п/п підшкірно/п внутрішньочеревно) підшкірно/т внутрішньочеревно)
Мо 1 - термічно інактивована 1 |нагріванням корпускулярна вакцина 20ч10/10) 10/11) позитивний контроль);
Мо 2 - неочищена поліштамова вакцина, інактивована рибофлавін- 2 |вікасоловим фотодинамічним 20ч10/10) 0" способом (таблиця 1, Зразок Мо 5, далі - "В"))
Мо З надосадова рідина, отримана
З після центрифугування зразку 2010710) 0 вакцини " В " протягом 20 хвилин при 8000 об/хв.;
Мо 4 - осад "В" після центрифугування вакцини "В" 4 | протягом 20 хвилин при 8000 об/хв., 20ч10/10) 0" ресуспендований у фізіологічному розчині.
Контроль - інфіковані, але не я я хр«0.001; застосовували критерій Хі-квадрат
Отримані експериментальні дані вказують на відсутність токсигенності та реактогенності вакцини-кандидата, отриманої рекомендованим способом, при збереженні протективних властивостей (90 95), що підтверджує перспективність даного способу отримання вакцинних препаратів.
Claims (7)
1. Спосіб отримання мультиштамової протисиньогнійної вакцини шляхом фотодинамічної інактивації збудника, який відрізняється тим, що, по-перше, беруть необхідну кількість актуальних штамів псевдомонад, інкубують їх з синьогнійним полівалентним бактеріофагом, потім додають рибофлавін-мононуклеотид та менадіону сульфат, після чого розчин опромінюють світлом, осад віддентрифуговують та отриману вакцину у вигляді надосадної рідини використовують як вакцину без очищення.
2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що рибофлавін-мононуклеотид додають в концентраціях від 0,01 до 1 95.
3. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що менадіону сульфат додають в концентраціях від 0,01 до 1 95.
4. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що світло - це опромінення в області 260-400 нм та інтенсивністю від 1 до 100 Вт/см3.
5. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що світло - це опромінення в області 400-600 нм та інтенсивністю від 10 до 100 Вт/см3.
6. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що світло - це послідовне опромінення в області 260- 400 нм та інтенсивністю від 1 до 100 Вт/см? та опромінення в області 400-600 нм та інтенсивністю від 10 до 100 Вт/см3.
7. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що експозиція світлом триває від З до 30 хвилин.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU201908730U UA143248U (uk) | 2019-07-19 | 2019-07-19 | Спосіб отримання вакцини для профілактики і лікування псевдомонозів |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU201908730U UA143248U (uk) | 2019-07-19 | 2019-07-19 | Спосіб отримання вакцини для профілактики і лікування псевдомонозів |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA143248U true UA143248U (uk) | 2020-07-27 |
Family
ID=80116744
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAU201908730U UA143248U (uk) | 2019-07-19 | 2019-07-19 | Спосіб отримання вакцини для профілактики і лікування псевдомонозів |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA143248U (uk) |
-
2019
- 2019-07-19 UA UAU201908730U patent/UA143248U/uk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104189898B (zh) | 铜绿假单胞菌疫苗及其制备方法 | |
| Hawgood | Doctor Albert Calmette 1863–1933: founder of antivenomous serotherapy and of antituberculous BCG vaccination | |
| Shepard et al. | Heat stability of Mycobacterium leprae immunogenicity | |
| US4472378A (en) | Live vaccine for the prevention of salmonellosis in water fowl, a process for making and applying the same | |
| UA143248U (uk) | Спосіб отримання вакцини для профілактики і лікування псевдомонозів | |
| RU2432174C1 (ru) | Способ получения эшерихиозного анатоксина | |
| CN101829321A (zh) | 一种预防黄颡鱼红头病的疫苗 | |
| SU997599A3 (ru) | Способ получени гетеровакцины дл лечени синдрома трихомонада | |
| RU2185191C1 (ru) | Способ получения антигенного препарата haemophilus influenzae типа b (hib) | |
| RU2523389C1 (ru) | Способ получения гипериммунной сыворотки против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят | |
| Karsner et al. | The principles of immunology | |
| Cameron | The significance of the endotoxin and pyogenic factor of Corynebacterium pseudotuberculosis in immunity | |
| RU2538624C1 (ru) | Способ получения туберкулина для массовой диагностики и профилактики туберкулеза | |
| RU2377016C1 (ru) | Способ получения стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины | |
| RU2162340C1 (ru) | Способ изготовления вакцины против сальмонеллеза свиней | |
| RU2147892C1 (ru) | Способ получения препарата на основе вирусно-бактериальных штаммов из местного очага для приготовления ассоциированной вакцины или поливалентной гипериммунной сыворотки против заболеваний крупного рогатого скота | |
| RU2675598C1 (ru) | Способ лечения радиационных поражений организма | |
| RU2148412C1 (ru) | Способ получения протективного коклюшного антигена | |
| Johnson et al. | Intracerebral infection of mice with ovine strains of Chlamydia psittaci: an animal screening test for the assay of vaccines | |
| RU2070819C1 (ru) | Способ получения вакцины против эшерихиоза телят | |
| RU2553554C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Pseudomonas aeruginosa ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПСЕВДОМОНОЗА СВИНЕЙ | |
| RU2540144C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНАТОКСИНА Bordetella pertussis | |
| RU2521513C1 (ru) | Применение этония в качестве адъюванта для производства сорбированной противоящурной вакцины | |
| RU2190424C1 (ru) | Антигенный состав чумной химической вакцины | |
| RU2553553C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Pseudomonas aeruginosa ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПСЕВДОМОНОЗА СВИНЕЙ |