UA125130C2 - Піримідинова сполука як інгібітор jak кінази - Google Patents

Піримідинова сполука як інгібітор jak кінази Download PDF

Info

Publication number
UA125130C2
UA125130C2 UAA202003146A UAA202003146A UA125130C2 UA 125130 C2 UA125130 C2 UA 125130C2 UA A202003146 A UAA202003146 A UA A202003146A UA A202003146 A UAA202003146 A UA A202003146A UA 125130 C2 UA125130 C2 UA 125130C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
compound
pharmaceutically acceptable
inflammatory
acceptable salt
skin disease
Prior art date
Application number
UAA202003146A
Other languages
English (en)
Inventor
Дженніфер Козак
Дженнифер Козак
Райан Гадсон
Райан ХАДСОН
Ґарі І.Л. Брандт
Гари И.Л. Брандт
Роберт Мюррей МакКіннелл
Роберт Мюррей Маккиннелл
Марта Деброс
Джеррі Нзерем
Джерри НЗЕРЕМ
Original Assignee
Тереванс Байофарма Ар Енд Ді Айпі, Елелсі
ТЕРЕВАНС БАЙОФАРМА Ар энд Ди АйПи, ЭлЭлСи
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Тереванс Байофарма Ар Енд Ді Айпі, Елелсі, ТЕРЕВАНС БАЙОФАРМА Ар энд Ди АйПи, ЭлЭлСи filed Critical Тереванс Байофарма Ар Енд Ді Айпі, Елелсі
Publication of UA125130C2 publication Critical patent/UA125130C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D451/00—Heterocyclic compounds containing 8-azabicyclo [3.2.1] octane, 9-azabicyclo [3.3.1] nonane, or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane or granatane alkaloids, scopolamine; Cyclic acetals thereof
    • C07D451/14—Heterocyclic compounds containing 8-azabicyclo [3.2.1] octane, 9-azabicyclo [3.3.1] nonane, or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane or granatane alkaloids, scopolamine; Cyclic acetals thereof containing 9-azabicyclo [3.3.1] nonane ring systems, e.g. granatane, 2-aza-adamantane; Cyclic acetals thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D451/00—Heterocyclic compounds containing 8-azabicyclo [3.2.1] octane, 9-azabicyclo [3.3.1] nonane, or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane or granatane alkaloids, scopolamine; Cyclic acetals thereof
    • C07D451/02—Heterocyclic compounds containing 8-azabicyclo [3.2.1] octane, 9-azabicyclo [3.3.1] nonane, or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane or granatane alkaloids, scopolamine; Cyclic acetals thereof containing not further condensed 8-azabicyclo [3.2.1] octane or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane; Cyclic acetals thereof
    • C07D451/04—Heterocyclic compounds containing 8-azabicyclo [3.2.1] octane, 9-azabicyclo [3.3.1] nonane, or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane or granatane alkaloids, scopolamine; Cyclic acetals thereof containing not further condensed 8-azabicyclo [3.2.1] octane or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane; Cyclic acetals thereof with hetero atoms directly attached in position 3 of the 8-azabicyclo [3.2.1] octane or in position 7 of the 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Dental Preparations (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Даний винахід стосується сполуки формули (I): (I) або її фармацевтично прийнятної солі, яка являє собою інгібітор JAK кіназ. Даний винахід також стосується фармацевтичних композицій, які містять таку сполуку, кристалічної форми, способів застосування такої сполуки для лікування запальних шкірних захворювань і інших захворювань, та способів і проміжних сполук, застосовних для отримання такої сполуки. 91

Description

о
М о-4 нм г
М нм М
З З
Щ.
Е або її фармацевтично прийнятної солі, яка являє собою інгібітор ЗАК кіназ. Даний винахід також стосується фармацевтичних композицій, які містять таку сполуку, кристалічної форми, способів застосування такої сполуки для лікування запальних шкірних захворювань і інших захворювань, та способів і проміжних сполук, застосовних для отримання такої сполуки. 0
М су
ІДЕ
Я
НИ І і я
Е
0 Н
Галузь техніки, до якої належить винахід
Даний винахід стосується піримідинової сполуки, застосовної як інгібітор ЗАК кінази. Даний винахід також стосується фармацевтичних композицій, що містять таку сполуку, кристалічних форм таких сполук, способів застосування такої сполуки для лікування запальних і аутоїмунних захворювань, і способів і проміжних сполук, застосовних для отримання такої сполуки.
Існуючий рівень техніки
Інгібування ферментів сімейства ЗАК може інгібувати передачу сигналів багатьох ключових прозапальних цитокінів. Таким чином, інгібітори ЧУАК, очевидно, застосовні при лікуванні атопічного дерматиту й інших запальних шкірних захворювань, алергічного риніту, астми, хронічної обструктивної хвороби легень (ХОХЛ) і інших запальних захворювань легень, виразкового коліту і інших запальних шлунково-кишкових захворювань, а також очних запальних захворювань.
Атопічний дерматит (АЮ) являє собою поширене хронічне запальне шкірне захворювання, яким тільки в Сполучених Штатах Америки уражено приблизно 14 мільйонів осіб. За оцінками,
АВ уражено 10-20 95 дітей і 1-3 95 дорослих в розвинених країнах (Вао еї аї., "АК 5ТАТ, 2013, 2, е24137), і його поширеність зростає. З АЮ пов'язують підвищення вмісту прозапальних цитокінів, які залежать від сигнального шляху ЗАК-5ТАТ, зокрема 1-4, 11 -5, 11-10, 11-12, 11-13,
ІРМУу ї ТІ Р (Вао еї аї., І еипо еї аї., Тпе доигпаї ої Сіїпіса! Іпиезіїдайоп, 2004, 113, 651-657). Крім того, було показано, що підвищена регуляція 1-31, іншого цитокіну, який передає сигнали за допомогою димеризації УАК, пов'язана із свербіжем, асоційованим із хронічним АЮ (ЗопкКоїу еї а!., ЧФдоштаї ої АІегду апа Сіїпіса! Іттипоіоду, 2006, 117, 411-417).
Внаслідок модулюючого ефекту сигнального шляху УХАК/5ТАТ на імунну систему, системно вплив інгібіторами АК може характеризуватися побічним системним імуносупресуючим ефектом. Тому, було б бажано надати новий інгібітор ЗАК, який здійснює свій ефект в місці прикладаня дії без значних системних ефектів. Зокрема, для лікування запальних шкірних захворювань, таких як атопічний дерматит, було б бажано надати новий інгібітор УАК, який можна вводити місцево і забезпечувати терапевтично значний вплив на шкіру, і який легко видаляється для мінімізації системного впливу.
Суть винаходу
Згідно з одним аспектом, даний винахід стосується сполуки, що характеризується активністю як інгібітор ЗАК кінази.
Відповідно, даний винахід стосується сполуки формули (1):
С о-5
Н
/ у ! ї
МАХ нм - ьо 1
Е он () або її фармацевтично прийнятної солі.
Даний винахід також стосується кристалічної форми сполуки (1).
Даний винахід також стосується фармацевтичної композиції, яка містить сполуку (1) і фармацевтично прийнятний носій.
Даний винахід також стосується способу лікування у ссавця запальних і аутоімунних захворювань шкіри, зокрема атопічного дерматиту і гніздової алопеції, причому спосіб включає введення ссавцеві сполуки (І) або її фармацевтично прийнятної солі.
Даний винахід також стосується способів синтезу і проміжних сполук, описаних в цьому документі, які застосовні для отримання сполуки (1).
Даний винахід також стосується сполуки (І), описаної в цьому документі, для застосування при лікуванні запальних захворювань або порушень.
Короткий опис креслень
Різні аспекти даного винаходу проілюстровані за допомогою посилання на прикладені креслення.
На Фігурі 1 представлена порошкова рентгенівська дифрактограма (РХКО) кристалічної
Форми І сполуки (І) (тут і далі в тексті - Форми Ї).
На Фігурі 2 представлена термограма диференційної скануючої калориметрії (05502) для кристалічної Форми І.
На Фігурі З представлений крива термогравіметричного аналізу (ТОА) кристалічної Форми І.
На Фігурі 4 представлена ізотерма динамічної сорбції вологи для кристалічної Форми І.
На Фігурі 5 представлена порошкова рентгенівська дифрактограма (РХКО) кристалічної
Форми ЇЇ сполуки (І) (тут і далі в тексті - Форми Ії).
На Фігурі 6 представлена термограма диференційної скануючої калориметрії (0552) для кристалічної Форми ІІ.
На Фігурі 7 представлена крива термогравіметричного аналізу (ТОА) кристалічної Форми ІІ.
На Фігурі 8 представлена ізотерма динамічної сорбції вологи для кристалічної Форми ІІ.
Детальний опис винаходу
Серед інших аспектів даний винахід стосується інгібітора кінази УАК формули (І), його фармацевтично прийнятних солей і проміжних сполук для його отримання.
Хімічні структури в даному документі названі згідно з номенклатурою ІОРАС, реалізованою в програмному забезпеченні СпетОгами (РегкіпЕІтег, Іпс., Сатрбгідде, МА). Наприклад, сполука ():
С о-5
Н
/ у ! ї
МАХ нм - ьо 1
Е он () називається (2-((18, З5, 55)-9-(етилсульфоніл)-9-азабіцикло/3.3.1|нонан-3-ілу/метил)аміно)-
Б-фтор-6-(5-метил-1 Н-піразол-3-іл)аміно)піримідин-4-іл)метанол.
Символьне позначення (1К, 35, 55) описує екзо-орієнтацію піримідиніламіногрупи відносно 9-азабіцикло!|3.3.1|нонанової групи.
Крім того, піразолільний фрагмент сполуки (І), а також інших сполук, розкритих в цьому документі, існує в таутомерній формі. Потрібно розуміти, що хоча суворо визначені структури представлені і названі в конкретній формі, даний винахід також включає їх таутомери.
Сполуки згідно з даним розкриттям містять один або кілька хіральних центрів, а тому такі
Зо сполуки (і їх проміжні сполуки) можуть існувати у вигляді рацемічних сумішей; чистих стереоізомерів (тобто енантіомерів або діастереоізомерів); стереоіїзомер-збагачених сумішей і т. п. Якщо не вказано інше, то передбачається, що хіральні сполуки, представлені або названі в цьому документі без певної стереохімії по хіральному центру, включають абсолютно всі можливі стереоіїзомерні варіанти по стереоцентру, який не визначений. Якщо не вказано інше, то зображення або найменування конкретного стереоізомеру означає, що вказаний стереоцентр характеризується вказаною стереохімією з розумінням того, що малі кількості інших стереоіїзомерів також можуть бути присутніми за умови, що застосовність зображеної або названої сполуки не виключається присутністю іншого стереоізомеру.
Сполука формули (І) може існувати у вигляді вільної основи або в різних сольових формах, таких як монопротонована сольова форма, дипротонована сольова форма, трипротонована сольова форма або їх суміші. Якщо не вказано інше, то всі вказані форми включені в обсяг даного винаходу.
Даний винахід також включає мічені ізотопами версії сполук згідно з даним розкриттям, включаючи сполуку формули (І), де певний атом замінений або збагачений атомом, що має той же атомний номер, але атомна маса якого відрізняється від атомної маси, що переважає в природі. Приклади ізотопів, які можуть бути введені в сполуку формули (І), включають, без обмеження, 2Н, ЗН, "С, 196, 146, 193М, 15М, 150), 170, 180, 555 і 18. Особливий інтерес становлять сполуки формули (І), збагачені тритієм або вуглецем-14, які можуть бути використані, наприклад, для досліджень по розподілу препаратів у тканинах. Крім того, особливий інтерес становлять сполуки формули (І), збагачені дейтерієм, особливо у важливих для обміну речовин місцях, і, як передбачається, вказані сполуки мають більшу метаболічну стабільність. Крім того, особливий інтерес становлять сполуки формули (І), збагачені дейтерієм, особливо в місцях метаболізму, які, як передбачається, мають більшу метаболічну стабільність. Крім того, особливий інтерес становлять сполуки формули (І), збагачені позитрон-випускаючими ізотопами, такими як "С, "8, 150 і зм), які можуть бути використані, наприклад, для досліджень методом позитронно-емісійної томографії (РЕТ).
Визначення
Якщо не вказано інше, то при описі даного винаходу, включаючи його різні аспекти і варіанти здійснення, наступні терміни мають наступні значення.
Термін "алкіл" означає одновалентну насичену вуглеводневу групу, яка може бути нерозгалуженою або розгалуженою, або являти собою їх комбінацію. Якщо не вказано інше, то вказані алкільні групи звичайно містять від 1 до 10 атомів вуглецю. Ілюстративні алкільні групи включають, як приклад, метил (Ме), етил (ЕЮ), н-пропіл (п-Рг) або (пРіг), ізопропіл (і-Рі) або (ІРг), н-бутил (п-Ви) або (пВи), втор-бутил, ізобутил, трет-бутил (І-Ви) або (ІВи), н-пентил, н-гексил, 2,2-диметилпропіл, 2-метилбутил, З-метилбутил, 2-етилбутил, 2,2-диметилпентил, 2- пропілпентил і т.п.
У тому випадку, якщо для конкретного терміну вказана певна кількість атомів вуглецю, то кількість атомів вуглецю показана такою, що передує терміну. Наприклад, термін "С:-залкіл" означає алкільну групу, що містить від 1 до З атомів вуглецю, де атоми вуглецю знаходяться в будь-якій хімічно прийнятній конфігурації включаючи нерозгалужену або розгалужену конфігурації.
Термін "алкокси" означає одновалентну групу -О-алкіл, де значення алкілу визначене вище.
Ілюстративні алкоксигрупи включають, як приклад, метокси, етокси, пропокси, бутокси і т.п.
Термін "циклоалкіл" означає одновалентну насичену карбоциклічну групу, яка може бути
Зо моноциклічною або поліциклічною. Якщо не вказано інше, то вказані циклоалкільні групи звичайно містять від З до 10 атомів вуглецю. Ілюстративні циклоалкільні групи включають, як приклад, циклопропіл (сРг), циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, адамантил і т.п.
Термін "галоген" означає фтор, хлор, бром або йод.
Термін "гетероцикліл", "гетероцикл", "гетероциклічний" або "гетероциклічне кільце" означає одновалентну насичену або частково ненасичену циклічну неароматичну групу, що містить всього від З до 10 кільцевих атомів, де кільце містить від 2 до 9 кільцевих атомів вуглецю і від 1 до 4 кільцевих гетероатомів, вибраних з атома азоту, кисню і сірки. Гетероциклічні групи можуть бути моноциклічними або поліциклічними (наприклад, конденсованими або з'єднаними місточковими зв'язками). Ілюстративні гетероциклічні групи включають, як приклад, піролідиніл, піперидиніл, піперазиніл, імідазолідиніл, морфолініл, тіоморфолініл, індолін-З-іл, 2-імідазолініл, тетрагідропіраніл, 1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-2-іл, хінуклідиніл, 7-азанорборнаніл, нортропаніл і т. п., де місцем приєднання є будь-який доступний кільцевий атом вуглецю або азоту. Якщо точка приєднання гетероциклічної групи очевидна з контексту, то, як альтернатива, такі групи можуть називатися невалентними фрагментами, такими як піролідин, піперидин, піперазин, імідазол, тетрагідропіран і т.п.
Термін "т-ерапевтично ефективна кількість" означає кількість, достатню для ефективного лікування при введенні пацієнту, який потребує лікування.
Термін, що використовується в цьому документі, "лікування" означає лікування захворювання, порушення або медичного стану у пацієнта (наприклад, запального шлунково- кишкового захворювання), такого як ссавець (зокрема, людина), який включає одне або кілька з наступного: (а) профілактику виникнення захворювання, порушення або медичного стану, тобто профілактику повторної появи захворювання або медичного стану, або профілактичне лікування пацієнта, який схильний до захворювання або медичного стану; (р) зниження інтенсивності симптомів захворювання, порушення або медичного стану, тобто усунення або індукцію регресії захворювання, порушення або медичного стану у пацієнта, включаючи нейтралізацію ефектів інших терапевтичних засобів; (с) пригнічення захворювання, порушення або медичного стану, тобто, сповільнення або 60 зупинку розвитку захворювання, порушення або медичного стану у пацієнта; або
(4) полегшення симптомів захворювання, порушення або медичного стану у пацієнта.
Термін "фармацевтично прийнятна сіль" означає сіль, яка є прийнятною для введення пацієнту або ссавцеві, такому як людина (наприклад, солі, що характеризуються прийнятною безпекою для ссавців в заданому режимі дозування). Ілюстративні фармацевтично прийнятні солі включають солі оцтової, аскорбінової, бензолсульфонової, бензойної, камфорсульфонової, лимонної, етансульфонової, 1,2-етандисульфонової, фумарової, гентизинової, глюконової, глюкуронової, глутамінової, гіпурової, бромистоводневої, соляної, ізетіонової, молочної, лактобіонової, малеїнової, яблучної, мигдалевої, метансульфонової, слизевої, нафталінсульфонової, нафталін-1,5-дисульфонової, нафталін-2,6-дисульфонової, нікотинової, азотної, оротової, памової, пантотенової, фосфорної, бурштинової, сірчаної, винної, пара- толуолсульфонової і ксинафоєвої кислоти і т.п.
Термін "її сіль" означає сполуку, яка формується, коли атом водню кислоти замінюється катіоном, таким як катіон металу або органічний катіон, і т. п. Наприклад, катіон може являти собою протоновану форму сполуки формули (І), тобто форму, в якій одна або кілька аміногруп були протоновані кислотою. Звичайно, сіль являє собою фармацевтично прийнятну сіль, однак це не обов'язково для солей проміжних сполук, які не призначені для введення пацієнту.
Термін "амінозахисна група" означає захисну групу, придатну для запобігання небажаним реакціям атома азоту аміногрупи. Ілюстративні амінозахисні групи включають, без обмеження, форміл; ацильні групи, наприклад, алканоїльні групи, такі як ацетил і трифторацетил; алкоксикарбонільні групи, такі як трет-бутоксикарбоніл (Вос); арилметоксикарбонільні групи, такі як бензилоксикарбоніл (Сб2) і 9-флуоренілметоксикарбоніл (ЕГтос); арилметильні групи, такі як бензил (Вп), тритил (Ті) і 1,1-ди-(4"-метоксифеніл)-метил; силільні групи, такі як триметилсиліл (ТМ5), триїзопропілсиліл (ТІР5), трет-бутилдиметилсиліл (ТВ5 або ТВвОМ5), 12- (триметилсиліл)етоксиметил (ЗЕМ); і т. п. Численні захисні групи, а також їх введення і видалення описані в документі Т.М/. Сгеєепе апа с.М. Умшї5, Ргоїесіпуд Сгоцр5 іп Огдапіс зЗупіпевзів, Тпіга Едйоп, УМіїєу, Мем Могк.
Загальні методики синтезу
Сполука (І) і її проміжні сполуки можуть бути отримані згідно з наступними загальними способами і методиками із застосуванням комерційно доступних або вихідних речовин і
Зо реагентів, що легко отримуються. Якщо не вказано інше, то замісники і змінні (наприклад, К і Х), що використовуються в подальших схемах, мають ті ж значення, що і значення, вказані по тексту цього документа. Крім того, якщо не вказано інше, то сполуки, що мають кислий або основний атом, або функціональну групу, можуть бути використані або можуть бути отримані у вигляді солі (в деяких випадках перед проведенням реакції застосування солі в конкретній реакції потребує перетворення солі в несольову форму, наприклад, у форму вільної основи, за допомогою стандартних процедур).
Хоча в подальших методиках може бути представлений або описаний конкретний варіант здійснення даного винаходу, фахівцям в даній галузі техніки повинно бути зрозуміло, що інші варіанти здійснення або аспекти даного винаходу також можуть бути реалізовані за допомогою вказаних методик або за допомогою інших методів, реагентів і вихідних речовин, відомих фахівцям у даній галузі техніки. Зокрема, потрібно розуміти, що сполука (І) може бути отримана цілим рядом технологічних способів, в яких реагенти об'єднують в різному порядку для наданя різним проміжним сполукам шляху, необхідного для отримання кінцевого продукту.
Загальні способи отримання сполуки (І) проілюстровані на схемах 1 і 2.
Схема 1 в. 2-4
М но М он но М он х М х
Кх кх З що що | чн, є М О00-- як є Доо-- дм ---х е Кк о он о о7 о о7 2-1 (М (М
(о) і» А / (о, рий 07 0- 0-3
НИ 1-9 НМ ох пщх Нм
М М ох хх М, ня- -
НМ М Хо -- -я М -- - -ь хх Нм н - НМ М р М
Е Е - АДМ
Е
Кк в 97 То7 07 То он (1) (І) ()
Вихідна речовина 2-1 може бути перетворена до складного ефіру (М) шляхом здійснення взаємодії зі спиртом в присутності кислоти, де К являє собою алкільну групу. Згідно з деякими варіантами здійснення, К являє собою Сі-ігалкільну групу. Згідно з деякими варіантами здійснення, спирт являє собою етанол. Сполука (М) може бути перетворена до дигалогеновмісної сполуки (ІМ). Згідно з деякими варіантами здійснення, сполука (ІМ) являє собою дихлоровмісний аналог. Згідно з деякими варіантами здійснення, реагент являє собою
РОСІз. Сполука (ІМ) може бути перетворена до сполуки (ІІ) шляхом здійснення взаємодії зі сполукою 2-4 в присутності основи. Сполука (І) може бути отримана шляхом здійснення взаємодії сполуки (ІІІ) зі сполукою 1-9 в присутності основи. На завершення, сполука (ІІ) може бути відновлена до сполуки (І) в присутності відновника. Згідно з деякими варіантами здійснення, відновник являє собою джерело гідриду літію або натрію. Згідно з деякими варіантами здійснення, відновник являє собою ГіАІНа., МаВвНа або ГіВНа. Згідно з деякими варіантами здійснення, К являє собою етил. Необов'язково, може бути отримана фармацевтично прийнятна сіль сполуки (1).
Для даного загального способу, згідно з деякими варіантами здійснення, К являє собою сС.- іїгалкіл. Згідно з деякими варіантами здійснення, К являє собою С:-валкіл. Згідно з деякими варіантами здійснення, К являє собою Сі-залкіл. Згідно з деякими варіантами здійснення, К являє собою етил. Згідно з деякими варіантами здійснення, Х являє собою ЕК, СІ або Вг. Згідно з деякими варіантами здійснення, Х являє собою СІ. Згідно з деякими варіантами здійснення, М являє собою етил, і Х являє собою СІ.
Схема 2
Ро РО
РО
НМ СМ) нм пи х Нм
МАХ М г
Ж М
НМ-- нм М х --Ж - -- жк НМ М -- - - Я -к хх ьо НМ М рак М
Е Е - р
Е
Кк в
ІФ) о7 Ге) о7 он (1) (МІ) (МІ)
о
М о-5
НМ іх
М НМ Х
/
М нм - ку - 6 дщЩщ ж нм М ря -- т « -5-к З а
Я
ЯМ
Е он ! ах) он о
Як альтернатива, може бути здійснена взаємодія сполуки (ІІ) зі сполукою (МІ), де РО являє собою амінозахисну групу, в присутності основи, такої як СІРЕА, з отриманням сполуки (МІ).
Сполука (МІЇ) може бути відновлена до відповідного спирту (МІ!) відновником. Згідно з деякими варіантами здійснення, відновник являє собою джерело гідриду літію або натрію. Згідно з деякими варіантами здійснення, відновник являє собою І їАІНа, МаВнНа або ІіЇВНа»-. Зі сполуки (МІ) може бути знятий захист з отриманням сполуки (ІХ). Якщо РО являє собою Вос, то зняття захисту може проводитися в присутності сильної кислоти, такої як ТЕА або НСІ. На завершення, може бути здійснена взаємодія сполуки (ІХ) з джерелом етансульфонілу, таким як етансульфонілхлорид.
Для даного загального способу, згідно з деякими варіантами здійснення, РО являє собою трет-бутоксикарбоніл (Вос). Згідно з деякими варіантами здійснення, Е являє собою сСч-1ігалкіл.
Згідно з деякими варіантами здійснення, К являє собою С-валкіл. Згідно з деякими варіантами здійснення, КЕ являє собою Сі-залкіл. Згідно з деякими варіантами здійснення, КЕ являє собою етил. Згідно з деякими варіантами здійснення, Х являє собою ЕК, СІ або Вг. Згідно з деякими варіантами здійснення, Х являє собою Сі. Згідно з деякими варіантами здійснення, К являє собою етилпл, і Х являє собою СІ.
Кристалічна Форма І
Згідно з одним аспектом, дане розкриття стосується кристалічної форми (Форми І) сполуки (І) о
М о-5
Н
ГО
Мах
М нм Б о
Ще
Е
Згідно з одним аспектом, кристалічна форма характеризується порошковою рентгенівською дифрактограмою, що містить дифракційні піки при значеннях 29, що дорівнюють 11,19:50,20, 11,73:20,20, 18,8020,20 ї 19,29:20,20. Згідно з одним аспектом, кристалічна форма додатково характеризується додатковими дифракційними піками при значенні 28, що дорівнює 6,75:0,20.
Згідно з одним аспектом, кристалічна форма додатково характеризується двома або більше додатковими дифракційними піками при значеннях 289, вибраних з 5,91250,20, 6,28:50,20, 8,08:0,20, 16,68:50,20, 17,6250,20, 20,53:50,20 і 22,16:50,20.
Як добре відомо в галузі порошкової рентгенівської дифрактометрії, положення піків у
Зо порошкових рентгенівських дифрактограмах відносно менш чутливі до деталей проведення експерименту, таких як деталі приготування зразка і геометрія приладу, ніж величини відносної висоти піків. Тому, згідно з одним аспектом, кристалічна Форма І характеризується порошковою рентгенівською дифрактограмою, в якій положення піків по суті відповідають положенням піків, представленим на Фігурі 1.
Згідно з одним аспектом, кристалічну Форму | характеризують по її поведінці внаслідок впливу високою температурою. Як представлено на Фігурі 2, крива диференційної скануючої калориметрії (053), записана при швидкості нагрівання 109С на хвилину, характеризується піком ендотермічного теплового потоку, що ототожнюється з переходом в розплав, з максимумом ендотермічного теплового потоку при температурі 250,99С-29С. Згідно з іншим аспектом, Форма І характеризується кривою диференційної скануючої калориметрії, що по суті відповідає кривій, представленій на Фігурі 2.
На кривій термогравіметричного аналізу (ТА) на Фігурі З продемонстрована втрата маси приблизно на 0,7095 між 22С і 125"С при продуванні Ма. Сполука розкладається з температурою початку розкладаня приблизно при 250 "С.
Як описано в Отриманні 2, Форма І може бути отримана шляхом розчинення сполуки (І) в етанолі при нагріванні. Отриманий розчин потім охолоджують приблизно до 25 "С. Форма може бути виділена шляхом фільтрування.
Згідно з одним аспектом, даний винахід стосується способу отримання кристалічної Форми І, причому спосіб включає: (а) розчинення сполуки (І) в розчиннику, такому як етанол, з необов'язковим застосуванням нагрівання з формуванням реакційної суміші; (5) охолоджування розчину приблизно до 25 "С з необов'язковим перемішуванням; і (с) виділення кристалічної
Форми І з реакційної суміші, наприклад, шляхом фільтрування.
Кристалічна Форма І!
Згідно з одним аспектом, дане розкриття стосується кристалічної форми (Формі Ії) сполуки (І): о
А / о-5
Н
/ У ! )
М, нм - ь
Ти
Е он (), яка являє собою безводну кристалічну форму вільної основи.
Згідно з одним аспектом, кристалічна форма характеризується порошковою рентгенівською дифрактограмою, що містить дифракційні піки при значеннях 29, що дорівнюють 11,4:50,2, 16,2:20,2, 16,6:50,2, 17,7-0,2 і 21,9:50,2.
Згідно з одним аспектом, кристалічна форма додатково характеризується додатковими дифракційними піками при значеннях 28, що дорівнюють 8,9:50,2, 9,5:20,2 і 10,2:50,2.
Згідно з одним аспектом, кристалічна форма додатково характеризується двома або більше додатковими дифракційними піками при значеннях 28, вибраних із 14,4:20,2, 19,050,2, 19,250,2, 19,6:20,2, 20,120,2, 20,430,2, 20,650,2, 20,6850,2, 21,3:0,2, 25,9:30,2, 30,10,2, 30,5-0,2, 30,90 2, 32,650,2 і 33,8:50,2.
Як добре відомо в галузі порошкової рентгенівської дифрактометрії, положення піків у порошкових рентгенівських дифрактограмах відносно менш чутливі до деталей проведення експерименту, таких як деталі приготування зразка і геометрія приладу, ніж величини відносної висоти піків. Тому, згідно з одним аспектом, кристалічна Форма ІІ характеризується порошковою рентгенівською дифрактограмою, в якій положення піків по суті відповідають положенням піків, представленим на Фігурі 5.
Згідно з одним аспектом, кристалічну Форму Ії характеризують по її поведінці внаслідок впливу високою температурою. Як представлено на Фігурі 6, крива диференційної скануючої калориметрії (053), записана при швидкості нагрівання 109С на хвилину, характеризується піком ендотермічного теплового потоку, що ототожнюється з переходом у розплав, з максимумом ендотермічного теплового потоку при температурі 238,12Сж290б. Згідно з іншим аспектом, Форма ІІ характеризується кривою диференційної скануючої калориметрії, що по суті відповідає кривій, представленій на Фігурі 6.
На кривій термогравіметричного аналізу (ТОА) на Фігурі 7 продемонстрована втрата маси, асоційована з розкладаням після 222 76.
Ілюстративна крива ОМ5 для Форми ІІ представлена на Фігурі 8. Загальне поглинання вологи при значеннях відносної вологості (КН) в діапазоні від 5 до 90 96 становило 0,02 95.
Форма ІІ є негігроскопічною.
Як описано в Отриманні 20, Форма ІЇ може бути отримана шляхом суспендування сполуки 2- 6 у суміші ЕЮН ії ТНЕ, охолодженій до 5 "С. До цієї суспензії може бути доданий І іВНа. Після додавання температура може підвищитися до 10 "С, і реакційна суміш може перемішуватися протягом 2 годин. Реакційна суміш може бути погашена сумішшю хлориду амонію, розчиненого у воді. Після нагрівання до 45 "С для формування кристалів може бути повільно додана вода.
Отриману завись можна витримувати при 45"С протягом кількох годин, потім може перемішуватися при 15 "С і фільтруватися. Кристалічна Форма ІІ може бути промита ЕЮН і водою, а потім висушена з отриманням Форми ЇЇ проміжного ступеня очищення.
Ця Форма ІІ проміжного ступеня очищення може бути розчинена в ОМ5О при нагріванні з подальшим повільним додаванням п-РГОН з підтриманням внутрішньої температури приблизно при 86 "С. Суміш перемішують приблизно при 92"С приблизно протягом 4 годин. Потім отриману суміш повільно охолоджують приблизно до 20 "С і перемішують приблизно при 20 "С протягом кількох годин. Потім Форма ІЇ може бути виділена шляхом фільтрування. Кристалічна
Форма ІЇ може бути промита пРГОН і етанолом з подальшим фільтруванням.
Згідно з одним аспектом, дане розкриття стосується способу очищення кристалічної Форми
ІЇ проміжного ступеня очищення, причому спосіб включає: (а) розчинення Форми ІЇ проміжного ступеня очищення в розчиннику, такому як ОМ5О, з нагріванням суміші; (Б) повільне додавання п-РгОн; (с) нагрівання суміші приблизно при 90 "С; (4) охолоджування розчину приблизно до 20"С; ії (е) виділення кристалічної Форми !/ з реакційної суміші, наприклад, шляхом фільтрування.
Фармацевтичні композиції
Зо Сполуку (І) ї її фармацевтично прийнятні солі звичайно використовують у вигляді фармацевтичної композиції або лікарської форми. Сполука (І) може бути присутня у вигляді кристалічної форми, такої як Форма І або Форма ІІ. Подібні фармацевтичні композиції можуть бути введені пацієнту будь-яким прийнятним шляхом введення, включаючи, без обмеження, пероральний, місцевий (зокрема трансдермальний), ректальний, інтраназальний, інгаляційний і парентеральний способи введення.
Відповідно, згідно з одним з аспектів, що стосується композицій, даний винахід стосується фармацевтичної композиції, яка містить фармацевтично прийнятний носій або наповнювач і сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль. Згідно з іншим аспектом, що стосується композицій, даний винахід стосується фармацевтичної композиції, яка містить фармацевтично прийнятний носій або наповнювач і кристалічну форму сполуки (І) або її фармацевтично прийнятної солі, наприклад, Форму І або Форму ІІ. Подібні фармацевтичні композиції можуть необов'язково містити інші терапевтичні засоби і/або засоби для приготування лікарських форм.
При обговоренні композицій і їх застосувань, "сполука згідно з даним винаходом" також може називатися в даному описі "діючою речовиною".
Фармацевтичні композиції згідно з даним розкриттям звичайно містять терапевтично ефективну кількість сполуки (І) або її фармацевтично прийнятної солі. Проте, фахівцям в даній галузі техніки потрібно розуміти, що фармацевтична композиція може містити більшу, ніж терапевтично ефективна, кількість, тобто являти собою нефасовані композиції, або меншу, ніж терапевтично ефективна, кількість, тобто являти собою окремі стандартні дози, призначені для багаторазового введення з метою отримання терапевтично ефективної кількості.
Як правило, подібні фармацевтичні композиції містять приблизно від 0,1 приблизно до 95 мас. 95 діючої речовини; включаючи приблизно від 5 приблизно до 70 мас. 95 діючої речовини.
У фармацевтичних композиціях згідно з даним винаходом може бути використаний будь- який традиційний носій або наповнювач. Вибір конкретного носія або наповнювача, або комбінації носіїв або наповнювачів, буде залежати від способу введення, що використовується при лікуванні конкретного пацієнта, або типу медичного стану або патологічного стану. У зв'язку з цим приготування придатної фармацевтичної композиції для конкретного способу введення добре погоджує з компетенціями фахівців у галузі фармацевтики. Крім того, носії або наповнювачі, що використовуються у фармацевтичних композиціях згідно з даним винаходом, є бо комерційно доступними. Як додаткова ілюстрація, традиційні методики приготування лікарських форм описані в документах Кетіпдіоп: Те Зсіепсе апа Ргасіїсе ої Рпаптасу, 201 Еайоп,
Прріпсой УМіШатеь 8 У/пйе, Вайтоге, Магуїапа (2000); ії Н.С. Апзеї еї аї.,, Рпагптасеціїйса! Созаде
Еоптв апа Огид Оеєїїмегу Зувієт5, 7 Еайіоп, Гірріпсой УМПШіатв5 5 М/Упйе, Вайітоге, Магуїапа (1999).
Ілюстративні приклади сполук, які можуть служити як фармацевтично прийнятні носії, включають, без обмеження, наступні речовини: цукри, такі як лактоза, глюкоза і сахароза; крохмалі, такі як кукурудзяний крохмаль і картопляний крохмаль; целюлози, такі як мікрокристалічна целюлоза і її похідні, такі як карбоксиметилцелюлоза натрію, етилцелюлоза і ацетат целюлози; порошкоподібний трагакант; солод; желатин; тальк; наповнювачі, такі як олія какао і віск для супозиторіїв; олії, такі як арахісова олія, бавовняна олія, сафлорова олія, кунжутна олія, оливкова олія, кукурудзяна олія і соєва олія; гліколі, такі як пропіленгліколь; поліоли, такі як гліцерин, сорбіт, маніт і поліетиленгліколь; складні ефіри, такі як етилолеат і етиллаурат; агар; буферні агенти, такі як гідроксид магнію і гідроксид алюмінію; альгінова кислота; апірогенна вода; ізотонічний сольовий розчин; розчин Рінгера; етиловий спирт; фосфатні буферні розчини; і інші нетоксичні сумісні речовини, що використовуються у фармацевтичних композиціях.
Фармацевтичні композиції звичайно отримують шляхом ретельного і однорідного змішування або складаня суміші активного агента з фармацевтично прийнятним носієм і одним або кількома необов'язковими інгредієнтами. Потім отримана рівномірно складена суміш може бути сформована або завантажена в таблетки, капсули, пілюлі і т. п. із застосуванням традиційних методик і обладнання.
Фармацевтичні композиції згідно з даним розкриттям можуть бути розфасовані в стандартну лікарську форму. Термін "стандартна лікарська форма" стосується фізично дискретної одиниці, придатної для дозованого введення пацієнту, тобто кожної одиниці, що містить задану кількість діючої речовини, яка розрахована для отримання цільового терапевтичного ефекту, як окремо, так і в комбінації з однією або кількома додатковими одиницями. Наприклад, подібні стандартні лікарські форми можуть являти собою капсули, таблетки, пілюлі і т.п., або окремі упаковки, придатні для парентерального введення.
Згідно з одним варіантом здійснення, фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом
Зо підходять для перорального введення. Фармацевтичні композиції, придатні для перорального введення, можуть бути приготовані у вигляді капсул, таблеток, пілюль, коржиків, крохмальних облаток, драже, порошків, гранул; або у вигляді розчину або суспензії у водній або неводній рідині; або у вигляді рідкої емульсії типу "масло-у-воді" або "вода-в-маслі"; або у вигляді еліксиру або сиропу; і причому кожна фармацевтична композиція містить зазделегідь визначену кількість сполуки згідно з даним винаходом як діючого інгредієнта.
Будучи призначеними для перорального введення у вигляді твердої лікарської форми (наприклад, у вигляді капсул, таблеток, пілюль і т.п.), фармацевтичні композиції згідно з даним розкриттям звичайно містять діючу речовину або її фармацевтично прийнятну сіль і один або кілька фармацевтично прийнятних носіїв. Такі тверді лікарські форми можуть також необов'язково включати: наповнювачі або розріджувачі, такі як крохмаль, мікрокристалічна целюлоза, лактоза, сахароза, глюкоза, маніт і/або кременева кислота; зв'язувальні речовини, такі як карбоксиметилцелюлоза, альгінати, желатин, полівінілпіролідон, сахароза і/або аравійська камедь; зволожувачі, такі як гліцерин; розпушувачі, такі як агар-агар, карбонат кальцію, картопляний крохмаль або крохмаль з тапіоки, альгінова кислота, деякі силікати і/або карбонат натрію; агенти, що сповільнюють розчинення, такі як парафін; прискорювачі всмоктування, такі як четвертинні амонієві сполуки; змочувальні агенти, такі як цетиловий спирт і/або моностеарат гліцерину; абсорбенти, такі як каолін і/або бентонітова глина; лубриканти, такі як тальк, стеарат кальцію, стеарат магнію, тверді поліетиленгліколі, лаурилсульфат натрію і/або їх суміші; пігменти; і буферні добавки.
У фармацевтичних композиціях згідно з даним розкриттям також можуть бути присутніми регулятори вивільнення, змочувальні агенти, глазурувальні засоби, підсолоджувачі, смакові і ароматизуючі добавки, консерванти і антиоксиданти. Приклади фармацевтично прийнятних антиоксидантів включають: водорозчинні антиоксиданти, такі як аскорбінова кислота, гідрохлорид цистеїну, бісульфат натрію, метабісульфат натрію, сульфіт натрію і т.п.; розчинні в маслі антиоксиданти, такі як аскорбілпальмітат, бутилзаміщений гідроксіанізол, бутилзаміщений гідрокситолуол, лецитин, пропілгалат, альфа-токоферол і т.п.; і агенти, які хелатують метали, такі як лимонна кислота, етилендіамінтетраоцтова кислота, сорбіт, винна кислота, фосфорна кислота і т.п. Глазурувальньні засоби для таблеток, капсул, пілюль і т.п. включають засоби, що використовуються для ентеросолюбільних покриттів, такі як ацетатфталат целюлози, бо полівінілацетатфталат, фталат гідроксипропілметилцелюлози, співполімери метакрилової кислоти і складного ефіру метакрилової кислоти, ацетаттримеллітат целюлози, карбоксиметилетил-целюлоза, ацетатсукцинат гідроксипропілметилцелюлози і т.п.
Фармацевтичні композиції згідно з даним розкриттям також можуть бути приготовані для забезпечення повільного або регульованого вивільнення діючої речовини із застосуванням, наприклад, гідроксипропілметилцелюлози в різних пропорціях, або інших полімерних матриць, ліпосом і/або мікросфер. Крім того, фармацевтичні композиції згідно з даним розкриттям можуть необов'язково містити агенти, що надають непрозорість, і можуть бути складені таким чином, що вони вивільняють лише активний інгредієнт або переважно вивільняють діючий інгредієнт в певній частині шлунково-кишкового тракту, необов'язково пролонговано. Приклади використовуваних композицій, що імплантуються, включають полімерні речовини і воски. Діюча речовина також може знаходитися у вигляді мікрокапсул, у випадку необхідності разом з одним або кількома описаними вище наповнювачами.
Придатні рідкі лікарські форми для перорального введення включають, як ілюстрація, фармацевтично прийнятні емульсії, мікроемульсії, розчини, суспензії, сиропи і еліксири. Рідкі лікарські форми, як правило, містять діючу речовину і інертний розріджувач, такий як, наприклад, вода або інші розчинники, солюбілізатори і емульгатори, такі як етиловий спирт, ізопропіловий спирт, етилкарбонат, етилацетат, бензиловий спирт, бензилбензоат, пропіленгліколь, 1,3-бутиленгліколь, олії (зокрема, бавовняну, арахісову, кукурудзяну олія, олію з насіння, оливкову, касторову і кунжутну олію), олеїнову кислоту, гліцерин, тетрагідрофуриловий спирт, поліетиленгліколі і складні ефіри жирних кислот і сорбітану і їх суміші. Як альтернатива, певні рідкі лікарські форми можуть бути перетворені, наприклад, шляхом розпилювального сушіння, в порошки, які використовують для отримання твердих лікарських форм за допомогою традиційних методик.
Крім діючого інгредієнта або його фармацевтично прийнятної солі, суспензії можуть містити суспендуючі засоби, такі як, наприклад, етоксиловані ізостеарилові спирти, поліоксіетиленсорбіт і складні ефіри сорбітану, мікрокристалічна целюлоза, метагідроксид алюмінію, бентоніт, агар- агар і трагакант і їх суміші.
Сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль також можна вводити парентерально (наприклад, шляхом внутрішньовенної, підшкірної, внутрішньом'язової або
Зо внутрішньочеревинної ін'єкції. Для парентерального введення діючу речовину або її фармацевтично прийнятну сіль звичайно змішують з придатним для парентерального введення носієм, включаючи, наприклад, стерильні водні розчини, сольовий розчин, низькомолекулярні спирти, такі як пропіленгліколь, поліетиленгліколь, рослинні олії, желатин, ефіри жирних кислот, такі як етилолеат, і т. п. Парентеральні лікарські форми також можуть містити один або кілька антиоксидантів, солюбілізаторів, стабілізаторів, консервантів, змочувальних агентів, емульгаторів, буферних агентів або диспергаторів. Вказані лікарські форми можуть бути перетворені в стерильні шляхом застосування стерильного середовища для ін'єкцій, стерилізуючого засобу, за допомогою фільтрації, опромінення або шляхом теплової обробки.
Як альтернатива, фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом готують для введення шляхом інгаляції. Придатні фармацевтичні композиції для введення шляхом інгаляції звичайно знаходяться у вигляді аерозолю або порошку. Подібні композиції, як правило, вводять за допомогою добре відомих пристроїв для доставки, таких як дозуючий інгалятор, інгалятор для інгаляції сухого порошку, розпилювач або аналогічний пристрій для доставки.
При введенні шляхом інгаляції із застосуванням герметичного контейнера фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом звичайно містять діючий інгредієнт і придатний пропелент, такий як дихлордифторметан, трихлорфторметан, дихлортетрафторетан, діоксид вуглецю або інший придатний газ. Крім того, фармацевтична композиція може знаходитися у вигляді капсули або картриджа (виготовленого, наприклад, з желатину), що містить сполуку згідно з даним винаходом або її фармацевтично прийнятну сіль і порошок, придатний для застосування в порошковому інгаляторі. Придатні порошкові основи включають, наприклад, лактозу або крохмаль.
Місцеві лікарські форми
Для лікування шкірних захворювань сполуку згідно з даним винаходом або її фармацевтично прийнятну сіль переважно включають у лікарську форму для місцевого введення у шкіру. Композиції для місцевого застосування включають рідкі або напівтверді носії, які можуть містити, без обмеження, полімери, загусники, буфери, нейтралізатори, хелатоутворювальні агенти, консерванти, поверхнево-активні речовини або емульгатори, антиоксиданти, воски або олії, пом'якшувальні речовини, сонцезахисні засоби і розчинник або систему змішаних розчинників. Композиції для місцевого застосування, застосовні в даному бо винаході, можуть бути виготовлені у вигляді широкого спектра продуктів. До них належать, без обмеження, лосьйони, креми, гелі, олівці, спреї, мазі, пасти, піни, муси і очищувальні засоби.
Вказані типи продуктів можуть включати кілька типів систем перенесення, включаючи, без обмеження, частинки, наночастинки і ліпосоми. При бажанні можуть бути додані розпушувачі, такі як зшитий полівінілпіролідон, агар або альгінова кислота або її сіль, така як альгінат натрію.
Методики приготування лікарських форм і введення можуть бути знайдені в Кептіпдіоп: Те
Зсіепсе апа Ргасіїсе ої Рнпаптасу, 191й Еа. (Еазюп, Ра.: Маск Рибіїзпіпуд Со., 1995). Лікарська форма може бути вибрана для підвищення до максимума доставки до бажаної мішені в організмі.
Лосьйони, які являють собою препарати, які повинні наноситися на шкіру або поверхню волосся без тертя, звичайно являють собою рідкі або напіврідкі препарати, в яких дисперговані тонкоподрібнені тверді, воскоподібні або рідкі речовини. Лосьйони звичайно містять суспендуючі агенти для отримання кращих дисперсій, а також сполуки, застосовні для локалізації і утримання діючої речовини в контакті зі шкірою або волоссям, наприклад, метилцелюлозу, карбоксиметилцелюлозу натрію і т.п.
Креми, які містять діючу речовину або її фармацевтично прийнятну сіль для доставки відповідно до даного винаходу, являють собою в'язкі рідкі або напівтверді емульсії, або типу "масло-у-воді", або типу "вода-в-маслі". Основи кремів є такими, що змиваються водою і містять масляну фазу, емульгатор і водну фазу. Масляна фаза, як правило, складається з вазелінового масла або жирного спирту, такого як цетиловий або стеариловий спирт; водна фаза звичайно, хоча і не обов'язково, перевищує масляну фазу по об'єму і, як правило, містить зволожувач.
Емульгатор у складі крему, як пояснено в Кетіпдіоп: Зсіепсе апа Ргасіїсе ої Рпаптасу, як правило, являє собою неїіоногенну, аніоногенну, катіоногенну або амфотерну поверхнево- активну речовину. Компоненти кремових лікарських форм можуть включати: масляні основи, такі як вазелінове масло, мінеральні масла, рослинні олії і тваринні жири і тригліцериди; основи для кремів, такі як ланолінові спирти, стеаринова кислота і цетостеариловий спирт; основу для гелей, таку як полівініловий спирт; розчинники, такі як пропіленгліколь і поліетиленгліколь; емульгатори, такі як полісорбати, стеарати, такі як гліцерилстеарат, октилгідроксистеарат, поліоксилстеарат, РЕС стеарилові ефіри, ізопропіллальмітат і сорбітану моностеарат; стабілізатори, такі як полісахариди і сульфіт натрію; пом'якшувальні засоби (тобто зволожувачі),
Зо такі як тригліцериди зі середньою довжиною ланцюга, ізопропілміристат і диметикон; загусники, такі як цетиловий спирт і стеариловий спирт; антимікробні засоби, такі як метилпарабен, пропіллпарабен, феноксіетанол, сорбінова кислота, діазолідинілсечовина і бутилований гідроксіанізол; підсилювачі проникнення, такі як М-метилпіролідон, пропіленгліколь, поліетиленглікольмонолаурат і т.п.; і хелатоутворювальні агенти, такі як едетат динатрію.
Гелеві лікарські форми також можуть бути використані в зв'язку з даним винаходом.
Фахівцям, які працюють у галузі приготування лікарських форм для місцевого застосування, потрібно розуміти, що гелі є напівтвердими. Однофазні гелі містять органічні макромолекули, по суті рівномірно розподілені у всій рідині-носії, яка звичайно є водною, але також може являти собою розчинник або суміш розчинників.
Мазі, які є напівтвердими препаратами, звичайно основані на вазеліновому маслі або інших продуктах нафтопереробки. Фахівцям у даній галузі техніки потрібно розуміти, що конкретна основа для мазей, яка підлягає застосуванню, забезпечує оптимальну доставку діючої речовини, вибраної для даної композиції, і, переважно, забезпечує інші бажані характеристики, наприклад, пом'якшення і т. п. Як і у випадку інших носіїв або основ, основа для мазей повинна бути інертною, стабільною, тако, що не спричиняє подразнення, і не сенсибілізуючою. Як пояснено в Кетіпдіоп: Те Зсіепсе апа Ргасіїсе ої Рпаптасу, 191 Еа. (Еазіоп, Ра.: Маск
Рибіїєпіпд Со., 1995) на сторінках 1399-1404, основи для мазей можуть бути розділені на чотири класи: маслянисті основи; емульговані основи; емульсійні основи; і водорозчинні основи.
Масляні основи для мазей включають, наприклад, рослинні олії, жири, отримані від тварин, і напівтверді вуглеводні, отримані з нафти. Емульговані основи для мазей, також відомі як абсорбуючі основи для мазей, містять мало води або не містять її зовсім, і включають, наприклад, гідроксистеаринсульфат, безводний ланолін і гідрофільний вазелін. Емульсійні основи для мазей являють собою або емульсії типу "вода-в-маслі" (М/О), або емульсії типу "масло-у-воді" (О/ЛЛ/), і включають, наприклад, цетиловий спирт, гліцерилмоностеарат, ланолін і стеаринову кислоту. Водорозчинні основи для мазей можуть бути отримані з поліетиленгліколів різної молекулярної маси; для додаткової інформації знову ж може бути наведене посилання на
Ветіпдіюп: Тне 5сієпсе апа Ргасіїсе ої Ріагтасу, див. вище. Придатні масляні речовини для застосування в лікарських формах у вигляді мазі включають вазелінове масло (вазелін), бджолиний віск, олію какао, олію ши і цетиловий спирт. При бажанні, мазі можуть необов'язково 60 додатково містити підсилювачі проникнення.
Застосовні лікарські форми згідно з даним винаходом також охоплюють спреї. Спреї, як правило, забезпечують діючу речовину у водному і/або спиртовому розчині, який для доставки можна нанести на шкіру або волосся. Такі спреї включають спреї, які складені для забезпечення концентрації розчину діючої речовини в місці введення після доставки, наприклад, розчин, що розпилюється, може складатися головним чином зі спирту або іншої подібної леткої рідини, в якій може бути розчинений лікарський засіб або діюча речовина. При доставці на шкіру або волосся носій випаровується, залишаючи концентровану активну речовину в місці введення.
Фармацевтичні композиції для місцевого застосування також можуть містити придатні тверді носії або носії в гелевій фазі. Приклади таких носіїв включають, без обмеження, карбонат кальцію, фосфат кальцію, різні цукри, крохмалі, похідні целюлози, желатин і полімери, такі як полієтиленгліколі.
Фармацевтичні композиції для місцевого застосування також можуть містити придатний емульгатор, який стосується засобу, який посилює або полегшує змішування і суспендування по типу "масло-у-воді"т або "вода-в-маслі". Емульгуючий агент, що використовується в цьому документі, може складатися з єдиного емульгуючого агента або може являти собою неіоногенну, аніоногенну, катіоногенну або амфотерну поверхнево-активну речовину або суміш двох або кількох таких поверхнево-активних речовин; переважними для застосування в цьому документі є неіоногенні або аніонні емульгатори. Такі поверхнево-активні агенти описані в документі "МеСшіспеоп'є ЮОеїегдепі апа ЕЄтиїб5йіег5, « Мой Атегісап Еайіоп, 1980 Аппиаї, опублікованому МеСиїспеоп Оімізіоп, МС Рибіїєпіпд Сотрапу, 175 Коск Коай, Сієп КоскК, Му. 07452, О5А.
Можуть використовуватися високомолекулярні спирти, такі як цетеариловий спирт, цетиловий спирт, стеариловий спирт, емульгуючий віск, гліцерилмоностеарат. Іншими прикладами є дистеарат етиленгліколю, тристеарат сорбітану, моностеарат пропіленгліколю, моноолеат сорбітану, моностеарат сорбітану (ЗРАМ 60), монолаурат діетиленгліколю, монопальмітат сорбіту, діолеат сахарози, стеарат сахарози (СКООЕЗТА-160), лауриловий ефір поліоксіетилену (ВКІУ 30), поліоксіетилен (2) стеариловий ефір (ВКІУ 72), поліоксіетилен (21) стеариловий ефір (ВКІЮ 721), моностеарат поліоксіетилену (МугЇ 45), моностеарат поліоксіегиленсорбітану (ТМУЕЕМ 60), моноолеат поліоксіетиленсорбітану (ТМ/ЕЕМ 80),
Зо монолаурат поліоксисорбітану (ТМУЕЕМ 20) і олеат натрію. Холестерин і похідні холестерину також можуть бути використані в емульсіях для зовнішнього застосування.
Приклад придатних неіоногенних емульгуючих агентів описаний Раші Г. І іпапег в документі "Етиївіоп5 апа Етиївіоп", едітед Бу Кеппеїйй І іззапі, рибіїзнейа Бу ОекККег, Мем МоїКк, М.У., 1974.
Приклади неіоногенних емульгаторів, які можуть бути використані, включають, без обмеження, продукти ВКІУ, такі як ВК 2 (поліоксіетилен (2) стеариловий ефір), ВКІУ 520 (поліоксіетилен (20) стеариловий ефір), ВКІО 72 (поліоксіетилен (2) стеариловий ефір з НІ В 4,9), ВКІУ 721 (поліоксіетилен (21) стеариловий ефір з НІ В 15,5), Вгі) 30 (поліоксіетилен лауриловий ефір з
НІВ 9,7), Роїажлах (емульгуючий віск з НІ В 8,0), Зрап 60 (моностеарат сорбіту з НІ В 4,7),
Стодевіа Е-160 (стеарат сахарози з НІ В 14,5).
Фармацевтичні композиції для місцевого застосування також можуть містити придатні пом'якшувальні засоби. Пом'якшувальні засоби являють собою речовини, що використовуються для попередження або пом'якшення сухості, а також для захисту шкіри або волосся. Застосовні пом'якшувальні засоби включають, без обмеження, цетиловий спирт, ізопропілміристат, стеариловий спирт і т.п. Широкий вибір придатних пом'якшувальних засобів відомий і може бути використаний в цьому документі; див. наприклад, документи Задагіп, Созтеїйс5, Зсіепсе апа
Тесппоіоду, 2па Едйоп, Мої. 1, рр. 32-43 (1972), і патент Ме США 4,919,934, виданий ЮОескКпег єї аІ., поданий 24 квітня 1990 року, які обидва включені у всій своїй повноті в цей документ за допомогою посилання.
Фармацевтичні композиції для місцевого застосування також можуть містити придатні антиоксиданти, речовини, які, як відомо, інгібують окислення. Антиоксиданти, придатні для застосування відповідно до даного винаходу, включають, без обмеження, бутилований гідрокситолуол, аскорбінову кислоту, аскорбат натрію, аскорбат кальцію, аскорбілпальмітат, бутилований гідроксіанізол, 2,4,5-тригідроксибутирофенон, 4-гідроксиметил-2,б-ди-трет- бутилфенол, ериторбінову кислоту, гваякову смолу, пропілгалат, тіодипропіонову кислоту, дилаурилтіодипропіонат, трет-бутилгідрохінон і токофероли, такі як вітамін Е, і т. п., включаючи фармацевтично прийнятні солі і складні ефіри вказаних сполук. Переважно, антиоксидант являє собою бутилований гідрокситолуол, бутилований гідроксіанізол, пропілгалат, аскорбінову кислоту, їх фармацевтично прийнятні солі або складні ефіри, або їх суміші. Найбільш переважно, антиоксидант являє собою бутилований гідрокситолуол. бо Фармацевтичні композиції для місцевого застосування також можуть містити придатні консерванти. Консерванти являють собою сполуки, що додаються у фармацевтичну композицію для дії як антимікробного агента. До консервантів, відомих у даній галузі техніки як ефективні і прийнятні в парентеральних препаратах, належать хлорид бензалконію, бензетоній, хлоргексидин, фенол, мета-крезол, бензиловий спирт, метилпарабен, пропілпарабен, хлорбутанол, орто-крезол, пара-крезол, хлоркрезол, нітрат фенілртуті, тимеросал, бензойна кислота і їх різні суміші; див., наприклад, УмаПНацйвхзег, К.-Н., ЮОємеЇІор. Віо!Ї. стапаага, 24:9-28 (1974) (5.. Кгадег, Вазеї).
Фармацевтичні композиції для місцевого застосування також можуть містити придатні хелатуючі агенти для формування комплексів з катіонами металів, які не проникають через ліпідний бішар. Приклади придатних хелатоутворювальних агентів включають етилендіамінтетраоцтову кислоту (ЕОТА), етиленгліколь-біс(бета-аміноетиловий ефір)-М, М,
М',М'-тетраоцтову кислоту (ЕСТА) і тетракалієву сіль 8-аміно-2-(2-аміно-5- метилфенокси)метил|-б-метоксихінолін-М, М, М'/М'-тетраоцтової кислоти (ОШІМ-2). Переважно хелатуючими агентами є ЕДТА і лимонна кислота.
Фармацевтичні композиції для місцевого застосування також можуть містити придатні нейтралізуючі агенти, що використовуються для коригування рН композиції до фармацевтично прийнятного діапазону. Приклади нейтралізуючих агентів включають, без обмеження, троламін, трометамін, гідроксид натрію, соляну кислоту, лимонну кислоту і оцтову кислоту.
Фармацевтичні композиції для місцевого застосування також можуть містити придатні агенти, які підвищують в'язкість. Дані компоненти є дифундуючими сполуками, здатними збільшувати в'язкість полімеровмісного розчину за допомогою взаємодії агента з полімером. Як агент, що підвищує в'язкість, може використовуватися Сагророї ОПге 10.
Рідкі лікарські форми, такі як лосьйони, придатні для місцевого застосування, можуть включати придатний водний або неводний носій з буферами, суспендуючими і диспергуючими агентами, загусниками, підсилювачами проникнення і т. п. Тверді лікарські форми, такі як креми або пасти і т. п., можуть включати, наприклад, будь-які з наступних інгредієнтів, воду, олію, спирт або мастило як субстрат з поверхнево-активною речовиною, полімерами, такі як поліеєтиленгліколь, загусниками, твердими речовинами і т. п. Рідкі або тверді лікарські форми можуть включати технологічні засоби для поліпшення доставки, такі як ліпосоми, мікросоми,
Зо мікрогубки і т. п. Крім того, сполуки можуть бути доставлені із застосуванням системи з уповільненим вивільненням, такої як напівпроникні матриці з твердих гідрофобних полімерів, що містять терапевтичний засіб. Різні матеріали з уповільненим вивільненням були створені і добре відомі фахівцям в даній галузі техніки.
У лікарській формі для місцевого застосування, сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль може міститися в кількості від 0,1 до 50 мас. 95. Згідно з деякими варіантами здійснення, сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль міститься в кількості від 0,1 до 25 мас. 95.
Згідно з деякими варіантами здійснення, сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль міститься в кількості від 0,1 до 10 мас. 95. Згідно з деякими варіантами здійснення, сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль міститься в кількості від 0,25 до 5 мас. 95. Згідно з деякими варіантами здійснення, сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль міститься в кількості від 0,25 до 2 мас. 95. Згідно з деякими варіантами здійснення, сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль міститься в кількості від 0,25 до 1 мас. 95. Згідно з деякими варіантами здійснення, сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль міститься в кількості від 0,05 до 0,5 мас. 95.
Згідно з деякими варіантами здійснення, сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль міститься в кількості приблизно 0,1,0,2,0,3,04,0,5,0,6,0,7,0,8,0,9,1,1,1,1,2,1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7,1,8,1,952,21,22,2,3,24,2,5,26,2,7,2,8, 2,9, 3, 3,25, 3,5, 3,75,4,4,5,5,5,5,6,6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 або 10 мас. 95.
Згідно з деякими варіантами здійснення, фармацевтична композиція, яка містить сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль, додатково містить один або кілька додаткових терапевтичних засобів. Згідно з деякими варіантами здійснення, один або кілька додаткових терапевтичних засобів застосовні для лікування аутоїмунного шкірного захворювання. Згідно з деякими варіантами здійснення, один або кілька додаткових терапевтичних засобів застосовні для лікування запального шкірного захворювання. Згідно з деякими варіантами здійснення, один або кілька додаткових терапевтичних засобів застосовні для лікування атопічного дерматиту. Згідно з деякими варіантами здійснення, один або кілька додаткових терапевтичних засобів застосовні для лікування гніздової алопеції. Конкретний клас сполук або конкретні сполуки, які можуть бути об'єднані зі сполукою (І) у фармацевтичній композиції, проілюстровані в подальших параграфах. бо Наступні необмежувальні приклади ілюструють характерні фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом.
Пероральна тверда лікарська форма у вигляді таблетки
Сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль піддають сухому змішуванню з мікрокристалічною целюлозою, полівінілпіролідоном і кроскармелозою натрію в співвідношенні 4:5:1:1 і шляхом пресування в таблетки отримують стандартну лікарську форму, що містить, наприклад, 5 мг, 20 мг або 40 мг діючої речовини на таблетку.
Пероральна тверда лікарська форма у вигляді капсули
Сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль об'єднують з мікрокристалічною целюлозою, полівініл-піролідоном і кроскармелозою натрію в співвідношенні 4:5:1:1 шляхом вологого гранулювання і завантажують у капсули з желатину або гідроксипропілметилцелюлози з отриманням стандартної лікарської форми, що містить, наприклад, 5 мг, 20 мг або 40 мг діючої речовини на капсулу.
Рідка лікарська форма
Рідку лікарську форму, що містить сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль (0,1 Об), воду (98,9 95) і аскорбінову кислоту (1,0 95), отримують шляхом додавання сполуки згідно з даним винаходом до суміші води і аскорбінової кислоти.
Пероральна лікарська форма з ентеросолюбільним покриттям
Сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль розчиняють у водному розчині, що містить полівінілпіролідон, і наносять шляхом розпилення на гранули з мікрокристалічної целюлози або цукру зі співвідношенням діюча речовина:ггранули-1:5 мас/мас., а потім наносять ентеросолюбільне покриття, яке збільшує масу приблизно на 5 95, яке містить акриловий співполімер, наприклад комбінацію акрилових співполімеров, доступну під торговими марками
Ецагаяаі-І92 ї Ецагадчі-59, або ацетатсукцинат гідроксипропілметилцелюлози. Гранули з ентеросолюбільним покриттям завантажують в капсули Кк желатину або гідроксипропілметилцелюлози з отриманням стандартної лікарської форми, що містить, наприклад, 30 мг діючої речовини на капсулу.
Пероральна лікарська форма з ентеросолюбільним покриттям
Ентеросолюбільне покриття, що містить комбінацію Ецйсдгаді-/І? і Ецагаді-59 або ацетатсукцинат гідроксипропілметилцелюлози, наносять на описані вище пероральну лікарську
Зо форму у вигляді таблетки або пероральну лікарську форму у вигляді капсули.
Лікарська форма у вигляді мазі для місцевого введення
Сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль об'єднують з вазеліновим маслом, Св-
Сіотригліцеридом, октилгідроксистеаратом і М-метилпіролідоном в співвідношенні для отримання композиції, яка містить від 0,05 мас. 9о до 5 мас. 95 діючої речовини.
Лікарська форма у вигляді мазі для місцевого введення
Сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль об'єднують з вазеліновим маслом, Св-
Сіотригліцеридом, октилгідроксистеаратом, бензиловим спиртом і М-метилпіролідоном в співвідношенні для отримання композиції, яка містить від 0,05 мас. 95 до 5 мас. 95 діючої речовини.
Лікарська форма у вигляді мазі для місцевого введення
Сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль об'єднують з білим вазеліном, пропіленгліколем, моно- і ди-гліцеридами, парафіном, бутилованим гідрокситолуолом і динатрію-кальцію едетатом в співвідношенні для отримання композиції, яка містить від 0,05 мас. 95 до 5 мас. 95 діючої речовини.
Лікарська форма у вигляді мазі для місцевого введення
Сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль об'єднують з мінеральним маслом, парафіном, пропіленкарбонатом, білим вазеліном і білим воском з отриманням композиції, яка містить від 0,05 мас. 95 до 5 мас. 95 діючої речовини.
Лікарська форма у вигляді крему для місцевого введення
Мінеральне масло об'єднують зі сполукою (І) або її фармацевтично прийнятною сіллю, пропіленгліколем, ізопропілпальмітатом, полісорбатом 60, цетиловим спиртом, сорбітанмоностеаратом, поліоксил 40 стеаратом, сорбіновою кислотою, метилпарабеном і пропілларабеном з формуванням масляної фази, яку об'єднують з очищеною водою шляхом змішування із зусиллям зсуву з отриманням композиції, яка містить від 0,05 мас. 9о до 5 мас. 95 діючої речовини.
Лікарська форма у вигляді крему для місцевого введення
Лікарська форма у вигляді крему, що містить сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль, бензиловий спирт, цетиловий спирт, безводну лимонну кислоту, моно- і дигліцериди, олеїловий спирт, пропіленгліколь, цетостеарилсульфат натрію, гідроксид натрію, стеариловий 60 спирт, тригліцериди і воду, містить від 0,05 мас. 95 до 5 мас. 95 діючої речовини.
Лікарська форма у вигляді крему для місцевого введення
Лікарська форма у вигляді крему, що містить сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль, цетостеариловий спирт, ізопропілміристат, пропіленгліколь, цетомакрогол 1000, диметикон 360, лимонну кислоту, цитрат натрію і очищену воду, з імідосечовиною, метилпарабеном і пропілпарабеном як консервантами, містить від 0,05 мас. 95 до 5 мас. 95 діючої речовини.
Лікарська форма у вигляді крему для місцевого введення
Лікарська форма у вигляді крему, що містить сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль, стеаринову кислоту, цетостеариловий спирт, ізопропілпальмітат, октилгідроксистеарат,
ВКІУ 52 (РЕС 2 стеариловий ефір), ВКІЮ 520 (РЕС 20 стеариловий ефір), М-метилпіролідин,
РЕ і воду, містить від 0,05 мас. 95 до 5 мас. 95 діючої речовини.
Лікарська форма у вигляді крему для місцевого введення
Лікарська форма у вигляді крему, що містить сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль, стеаринову кислоту, цетостеариловий спирт, ізопропілпальмітат, октилгідроксистеарат,
ВКІУ 52 (РЕС 2 стеариловий ефір), ВКІЮ 520 (РЕС 20 стеариловий ефір), М-метилпіролідин,
РЕС400 і воду, містить від 0,05 мас. 95 до 5 мас. 95 діючої речовини.
Застосовність
Було показано, що сполука (І) є потужним інгібітором ферментів сімейства ЗАК: АКТ, ЧАК,
УАКЗ ії ТУК2. Інгібування ферментів сімейства ЗАК може інгібувати передачу сигналів багатьох ключових прозапальних цитокінів. Тому, передбачається, що сполука (І) буде застосовна при лікуванні запальних захворювань, таких як запальні шлунково-кишкові захворювання, запальні і шкірні захворювання, що супроводжуються свербіжем, запальні очні захворювання і запальні респіраторні захворювання.
Запальне шкірне захворювання
Атопічний дерматит був пов'язаний з підвищенням вмісту прозапальних цитокінів, які залежать від сигнального шляху ЧЗАК-5ТАТ, зокрема, 1-4, 11 -5, 1-10, 11-13 і ІЕМу. Оскільки сполуки (І) демонструють ефективне інгібування всіх чотирьох ферментів УАК, передбачається, що вони будуть ефективно інгібувати прозапальні цитокіни, характерні для атопічного дерматиту й інших запальних шкірних захворювань. Також було показано, що сполука (1) характеризується значенням ріСзо 7,8 для інгібування Т5І Р-індукованого вивільнення ТАКС в
Зо методі аналізу 4. Сполука (І) характеризується значенням ріСво 8,5 для інгібування ІІ -13- індукованого фосфорилування 5ТАТЄ в клітинних методах аналізу, описаних в методі аналізу 2.
Сполука (І) також характеризується значенням ріСзо 8,3 для інгібування ІІ-13-індукованого фосфорилування 5ТАТЄ6 в нормальних епідермальних кератиноцитах людини в методі аналізу 13. Крім того, модельні лікарські форми сполуки (І) у вигляді крему і мазі в методі аналізу 6 продемонстрували значний вплив сполуки в епідермальному і дермальному шарах у міні-пігів без значного впливу на плазму крові. При фармакодинамічному методі аналізу ех мімо із застосуванням свіжовирізаної шкіри людини було показано, що сполука (І) інгібує експресію генів СХСІ 10 ії ССІ 2. Було показано, що сполука (І) має хорошу проникність в методі аналізу на шкірі людини. Сполука (І) також інгібує ІІ -31-індуковану продукцію реТАТЗ на 80 95 в моделі іп мімо в методі аналізу 9. На завершення, сполука (І) характеризується залежним від дози ефектом в моделі ТРА-індукованого іритантного контактного дерматиту на мишах в методі аналізу 10.
Також було показано, що сполука (І) характеризується значенням ріСзо 8,4 для інгібування
ІЇ-2-індукованого фосфорилування ЗТАТ5О в клітинних методах аналізу, описаних в методі аналізу 11, значенням ріСвхо 7,2 для інгібування ІІ -12-індукованого фосфорилування 5ТАТА в
СОЗя Т-клітинах людини в методі аналізу 12, значенням ріСзво 8,4 для інгібування ІІ-22- індукованого фосфорилування З5ТАТЗ у нормальних епідермальних кератиноцитах людини в методі аналізу 14. На завершення, відновлення сполукою (І) супресованої інтерлейкіном-22 (ІІ - 22) експресії філагрину спостерігали при концентрації «1 мкМ. 1-12, 1/-22 і 1-23 є цитокінами, причетними до псоріазу (Ваїїмад еї аї., СуюКіпе, 2015, 73(2), 342-350 2015). Вказані цитокіни передають сигнали через ферменти ДАК і Тука (Івпігакі еї аї., 9У. Іттипої., 2011, 187, 181-189).
Терапія антитілами, яка цілеспрямовано впливає на вказані цитокіни, продемонструвала клінічну застосовність при псоріазі (Зспадіег еї аї., Різеазе-а-Мопій, 2018, 1-40). Можна передбачати, що місцевий інгібітор ЗАК, який може блокувати вказані цитокіни, буде ефективний при даному захворюванні. Оскільки вказані цитокіни передають сигнали через Тук2 і УЗАК2, передбачається, що сполука (І) має активність відносно даного захворювання.
Передбачається, що стійкий вміст інгібіторів УЗАК у шкірі за відсутності значного системного вмісту приведе до потужної місцевої протизапальної і протисвербіжної активності в шкірі без побічних ефектів, викликаних системним впливом. Передбачається, що такі сполуки будуть бо корисні при ряді шкірних запальних або таких, що супроводжуються свербежем, станів, які включають, без обмеження, атопічний дерматит, вітиліго, шкірну Т-клітинну лімфому і її підтипи (синдром Сезарі, грибоподібний мікоз, педжетоїдний ретикульоз, гранулематозна в'яла шкіра, лімфоматоїдний папульоз, хронічний ліхеноїдний парапсоріаз, гострий ліхеноїдний (і варіоліформний парапсоріаз, СОЗ30- шкірна Т-клітинна лімфома, вторинна шкірна СО30- великоклітинна лімфома, відмінна від грибоподібного мікозу СОЗ3О- шкірна Т-клітинна лімфома, плейоморфна Т-клітинна лімфома, лімфома Леннерта, Т-клітинна лімфома підшкірного типу, ангіоцентрична лімфома, бластна МК-клітинна лімфома), вузлуватий свербець, червоний плоский лишай, контактний дерматит, дисгідротичну екзему, екзему, нумулярний дерматит, себорейний дерматит, застійний дерматит, первинно локалізований амілоїдоз шкіри, бульозний пемфігоїд, шкірні вияви реакції ""рансплантат проти хазяїна", пемфігоїд, дискоїдний вовчак, анулярну гранульому, хронічний простий лишай, свербіж, свербіж в ділянці вульви/мошонки/періанальний свербіж, склеротичний лишай, свербіж при постгерпетичній невралгіїії, плоский фолікулярний лишай, псоріаз і декальвіруючий фолікуліт. Зокрема, атопічний дерматит (Вао евї аї., "АК-5ТАТ, 2013, 2, е24137), гніздова алопеція (Хіпа еї аї!., Маї Мей. 2014, 20, 1043-1049), включаючи її підтипи, такі як одновогнищева гніздова алопеція, багатовогнищева гніздова алопеція, крайова гніздова алопеція, універсальна гніздова алопеція, тотальна гніздова алопеція і гніздова алопеція бороди, вітиліго (Стаідіом еї ам, "ЗАМА Оегтайої. 2015, 151, 1110-1112), шкірна Т-клітинна лімфома (Меїспірогоик еї аї., Сеї! Сусіє. 2014; 13, 3331- 3335), вузлуватий свербець (Зопкоїу еї аї., У АПегду Сіїп Іттипої. 2006, 117, 411-417), червоний плоский лишай (М/еІ2-Кибіак еї аї., У Іттипої!ї Кев5. 2015, 10:854747), первинно локалізований амілоїдоз шкіри (ТапаКа еї аї., Вг 9 Оептаїйої!. 2009, 161, 1217-1224), бульозний пемфігоїд (Реїсіапі еї аї., Ійї У Іттипораїйо! РІПаптасої. 1999, 12, 55-61) і шкірні вияви реакції "трансплантат проти хазяїна" (ОКіуата еї аї.,, У Іпмеб5і Оегтаїйо!І. 2014, 134, 992-1000) характеризуються підвищенням вмісту певних цитокінів, які передають сигнали за допомогою активації ЧАК. Відповідно, сполука (І) може бути здатна полегшувати асоційоване шкірне запалення або свербіж, що викликаються вказаними цитокінами. Зокрема, передбачається, що сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль застосовні для лікування атопічного дерматиту і інших запальних захворювань шкіри.
Як представлено в Таблиці 13, було показано, що сполука (І) характеризується високим
Зо кліренсом в мікросомах людини. З цієї причини вона має перевагу швидкого очищення, що зводить до мінімуму системний вплив і знижує ризик побічних ефектів.
Як представлено в Таблиці 13, сполука (І) також має високу проникність, що сприятливо для шкірних призначень, що, ймовірно, пов'язано з кращим проникненням в шкіру.
Тому, згідно з деякими варіантами здійснення, даний винахід стосується способу лікування запального або аутоїмунного шкірного захворювання у ссавця (наприклад, людини), що включає нанесення фармацевтичної композиції, яка містить сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль і фармацевтичний носій на шкіру ссавця.
Згідно з деякими варіантами здійснення, даний винахід стосується способу лікування запального або аутоімунного шкірного захворювання у ссавця (наприклад, людини), що включає введення ссавцеві сполуки (І) або її фармацевтично прийнятної солі.
Згідно з деякими варіантами здійснення, запальне шкірне захворювання являє собою атопічний дерматит. Згідно з деякими варіантами здійснення, атопічний дерматит характеризується легким і помірним ступенем вираженості. Згідно з деякими варіантами здійснення, атопічний дерматит характеризується помірним і тяжким ступенем вираженості.
Згідно з деякими варіантами здійснення, аутоїмунне шкірне захворювання являє собою гніздову алопецію.
Сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль також можна використовувати в комбінації з однією або кількома сполуками, застосовними для лікування запальних захворювань шкіри.
Згідно з деякими варіантами здійснення, одна або кілька сполук являють собою стероїд, кортикостероїд, антибіотик, антагоніст гістамінового рецептора НІ, інгібітор кальциневрину, антагоніст ІІ-13, інгібітор РОЕ 4, антагоніст зв'язаного з с-білком рецептора 44, антагоніст ІІ -4, антагоніст рецептора 5-НТа, антагоніст рецептора 5-НТ2Б, агоніст альфа-2-адренорецептора, антагоніст канабіноїдного рецептора СВІ, антагоніст хемокіну ССЗ, інгібітор колагенази, інгібітор цитозольної фосфоліпази Аг, інгібітор ліганду еотаксину, інгібітор фактора транскрипції
САТА 3, інгібітор гістамінового рецептора На, антагоніст ІІ -10, антагоніст 1-12, антагоніст 1-17, антагоніст І--2, антагоніст І -23, модулятор рецептора 1-4, антагоніст 1-15, антагоніст 1-6, антагоніст І/-8, антагоніст 1-9, антагоніст ІЇ/-5, антагоніст імуноглобуліну Е, модулятор імуноглобуліну Е, антагоніст рецептора гамма-інтерферону, ліганд гамма-інтерферону, інгібітор ліганду інтерлейкіну 33, антагоніст рецептора інтерлейкіну-31, антагоніст лейкотрієну, агоніст бо печінкового рецептора Х бета, інгібітор ядерного фактора каппа-В, антагоніст рецептора ОХ-40,
антагоніст РОЮБ2, інгібітор фосфоліпази А2, стимулятор домену 5Н2 інозитолфосфатази 1, інгібітор ліганду тимічного стромального лімфопротеїну, модулятор ТІК, модулятор ліганду ТМЕ альфа, стимулятор гена ТІ КУ, стимулятор білка-4 цитотоксичних лімфоцитів, агоніст опіоїдного рецептора каппа, інгібітор галектину-3, інгібітор гістондеацетилази-ї1, інгібітор гістондеацетилази-2, інгібітор гістондеацетилази-3, інгібітор гістондеацетилази-б, інгібітор гістондеацетилази, агоніст глюкокортикоїдів, інгібітор тирозинкінази 5УуК, антагоніст рецептора
ТІКА, антагоніст інтегрину альфа-4/бета-1, антагоніст інтерлейкін-1-подібного рецептора, інгібітор інтерлейкін-1-перетворювального ферменту, антагоніст рецептора інтерлейкіну-31, інгібітор потенціал-залежного калієвого каналу КСМА-3, інгібітор гена РОЕЗВ, інгібітор калікреїну 2, агоніст рецептора-1 сфінгозин-1-фосфату, стимулятор білка пігментного епітелію сітківки, інгібітор глікопротеїну СО28 Т-клітинної поверхні, антагоніст ТЕ бета або антагоніст ванілоїдного МК1.
Згідно з деякими варіантами здійснення, сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль вводять у комбінації з бетаметазоном, фузидовою кислотою, К-МО-02, дупілумабом, розипторацетатом, АБ-101, циклоспорином, ІМО-0354, секукінумабом, Актимуном, лебрикизумабом, СМР-001, меполізумабом, пегкантиратинібом, тезепелумабом, ММ-36, кризаборолом, АЇХ-101, бертилімумабом, ЕВ-825, АХ-1602, ВМ2-1, абатацептом, такролімусом,
АМВ-020, УТЕ-052, 2РІ -389, устекінумабом, ОВК-830, 15К-3772847, АБМ-002, реметиностатом, апреміластом, тимапіпрантом, МОК-106, асиватрепом, немолізумабом, февіпіпрантом, доксицикліном, МОРК-676Б, дезлоратадином, тралокінумабом, фексофенадином, пімекролімусом, бепотастином, налфурафіном, МТР-38543, О-301, лігелізумабом, ЕМТ-201,
ОМТ-210, КРІ-150, АКР-11, Е-6005, АМОа-0101, АМХ-001, РОа-102, 2РІ-521, МЕ0І-9314, АМ-1030,
М/ОІ-071007, МТ-0814, валератом бетаметазону, 5В-011, епінастином, такролімусом, транліластом або віромедом, або будь-якою їх комбінацією.
Згідно з деякими варіантами здійснення, сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль вводять в комбінації зі стероїдом, антибіотиком або зволожувачем (Іакнапі еї аї., Реаїайтіс
Оептайюіоду, 2017, 34, 3, 322-325). Згідно з деякими варіантами здійснення, одна або кілька сполук являють собою грампозитивний антибіотик, такий як мупіроцин або фузидова кислота.
Сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль також можуть бути використані в комбінації
Зо з грампозитивними антибіотиками, такими як мупіроцин і фузидова кислота, для лікування запального шкірного захворювання. Тому, згідно 3 одним аспектом, даний винахід стосується способу лікування запального шкірного захворювання у ссавця, причому спосіб включає нанесення сполуки згідно з даним винаходом або її фармацевтично прийнятної солі і грампозитивного антибіотика на шкіру ссавця. Згідно з одним аспектом, даний винахід стосується фармацевтичної композиції, яка містить сполуку згідно з даним винаходом або її фармацевтично прийнятну сіль, грампозитивний антибіотик і фармацевтично прийнятний носій.
Тому, згідно з одним аспектом, даний винахід стосується терапевтичної комбінації для застосування при лікуванні шкірних запальних порушень, причому комбінація включає сполуку () або її фармацевтично прийнятну сіль і один або кілька інших терапевтичних засобів, застосовних для лікування шкірних запальних порушень. Вторинний) засіб(и), за наявності, присутні в терапевтично ефективній кількості, тобто в будь-якій кількості, яка забезпечує терапевтично сприятливий ефект при спільному введенні зі сполукою (І) або її фармацевтично прийнятною сіллю.
Тому також передбачена фармацевтична композиція, яка містить сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль і один або кілька інших терапевтичних засобів, застосовних для лікування шкірних запальних порушень.
Крім того, згідно з аспектом, пов'язаним зі способом, даний винахід стосується способу лікування шкірних запальних порушень, причому спосіб включає введення ссавцеві сполуки (І) або її фармацевтично прийнятної солі і одного або кількох інших терапевтичних засобів, застосовних для лікування шкірних запальних порушень.
Шлунково-кишкове запальне захворювання
Внаслідок інгібування ферментів сімейства ЧАК передбачається, що сполука (І) буде застосовна для цілого ряду шлунково-кишкових запальних показань, які включають, без обмеження, виразковий коліт (проктосигмоїдит, панколіт, виразковий проктит і лівосторонній коліт), хворобу Крона, колагенозний коліт, лімфоцитарний коліт, хворобу Бехчета, целіакію, коліт, індукований інгібіторами контрольних точок імунітету, ілеїт, еозинофільний езофагіт, коліт, пов'язаний з реакцією "трансплантат-проти-хазяїна", і інфекційний коліт. Виразковий коліт (Веітипа еї аї., ) Сіїп Іттипоіоаду, 1996, 16, 144-150), хвороба Крона (УУсужмойдії еї аї., Ешиг У
Савзігоєпієгоїоду Нераїоіоду, 1999, 11, 267-276), колагенозний коліт (Китауаї еї аї., Мої! бо Ітітипоїоду, 2013, 55, 355-364), лімфоцитарний коліт (Китауаї еї аІ., 2013), еозинофільний езофагіт (М/еіпогапа-СоіснЬегу еї аїЇ., Іттипо! Не5, 2013, 56, 249-260), коліт, пов'язаний з реакцією "трансплантат-проти-хазяїна" (Соодпії! еї а!., Віоса, 2001, 117, 3268-3276), інфекційний коліт (Зіайтасі еї аї., Іпї У Соіогесіа! Оі5, 2004, 19, 308-315), хвороба Бехчета (2пои еї аї.,
Ацоіттип Вем, 2012, 11, 699-704), целіакія (де Міно еї аї., Ууопіа У Сазігоепіегої, 2009, 15, 4609- 4614), коліт, індукований інгібіторами імунних контрольних точок (наприклад, коліт, індукований інгібітором СТІ А-4 (Уапо еї аї., 9 Тгапвіайоп Мей, 2014, 12, 191), коліт, індукований інгібітором
РО-1- або РО-1І 1) і ілеїт (МУататоїйо еї аї., ід Імег Оіб5, 2008, 40, 253-259) характеризуються підвищенням вмісту певних прозапальних цитокінів. Оскільки багато прозапальних цитокінів передають сигнали за допомогою активації ЗАК, описані в даній заявці сполуки можуть бути здатні пом'якшувати запалення і забезпечувати послаблення симптомів.
Тому, згідно з деякими варіантами здійснення, дане розкриття стосується способу лікування шлунково-кишкового запального захворювання у ссавця (наприклад, людини), що включає введення ссавцеві фармацевтичної композиції, яка містить фармацевтично прийнятний носій і сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль.
Згідно з деякими варіантами здійснення, дане розкриття стосується способу лікування шлунково-кишкового запального захворювання у ссавця (наприклад, людини), що включає введення ссавцеві сполуки (І) або її фармацевтично прийнятної солі.
Даний винахід додатково стосується способу лікування виразкового коліту у ссавця, причому спосіб включає введення ссавцеві сполуки згідно з даним винаходом або її фармацевтично прийнятної солі, або фармацевтичної композиції, що містить фармацевтично прийнятний носій і сполуку згідно з даним винаходом або її фармацевтично прийнятну сіль.
При застосуванні для лікування виразкового коліту сполуку згідно 3 даним винаходом звичайно вводять перорально у вигляді однієї добової дози або у вигляді кількох доз протягом доби, хоча можуть використовуватися інші форми введення. Кількість діючої речовини, що вводиться в одній дозі, або загальна кількість, що вводиться протягом доби, звичайно визначається лікарем в світлі відповідних обставин, що включають стан, який підлягає лікуванню, вибраний шлях введення, конкретну сполуку, що вводиться, і її відносну активність, вік, масу тіла і відповідь конкретного пацієнта, тяжкість симптомів пацієнта і т.п.
Передбачається, що для людини зі середньою масою тіла 70 кг придатні дози для лікування
Зо виразкового коліту і інших шлунково-ксишкових запальних захворювань будуть варіювати приблизно від 1 приблизно до 400 мг/добу діючої речовини, включаючи приблизно від 5 приблизно до 300 мг/добу і приблизно від 20 приблизно до 70 мг/добу діючої речовини.
Сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль також можуть бути використані в комбінації з одним або кількома засобами, які діють по тому ж механізму або по інших механізмах при лікуванні шлунково-ксишкових запальних порушень. Застосовні класи засобів для комбінованої терапії включають, без обмеження, аміносаліцилати, стероїди, системні імуносупресанти, антитіла проти ТМЕа, антитіла проти МГ А-4, антитіла проти інтегрину а«р7, антибактеріальні засоби і лікарські засоби від діареї.
Аміносаліцилати, які можуть бути використані в комбінації зі сполукою (І), включають, без обмеження, мезаламін, осалазин і сульфасалазин. Приклади стероїдів включають, без обмеження, преднізон, преднізолон, гідрокортизон, будесонід, беклометазон і флутиказон.
Системні імуносупресанти, застосовні для лікування запальних захворювань, включають, без обмеження, циклоспорин, азатіоприн, метотрексат, б-меркаптопурин і такролімус. Крім того, в комбінованій терапії можна використовувати антитіла проти ТМЕс, які включають, без обмеження, інфліксимаб, адалімумаб, голімумаб і цертолізумаб. Застосовні сполука, які діють по інших механізмах дії, включають антитіла проти МІ А-4, такі як наталізумаб, антитіла проти інтегрину са4ВД7, такі як ведолізумаб, антибактеріальні засоби, такі як рифаксимін, і лікарські засоби від діареї, такі як лоперамід (Могаїйагі єї аї., Ехрегі, ВіоїЇ. Тег. 2014, 14, 583-600, ЮОапезе,
С;іл, 2012, 61, 918-932, І ат єї а!., ІттипоїНегару, 2014, 6, 963-971).
Тому, згідно з одним аспектом, даний винахід стосується терапевтичної комбінації для застосування при лікуванні шлунково-кишкових запальних порушень, причому комбінація включає сполуку згідно з даним винаходом або її фармацевтично прийнятну сіль і один або кілька інших терапевтичних засобів, застосовних для лікування шлунково-кишкових запальних порушень. Наприклад, винахід стосується комбінації, яка включає сполуку згідно з даним винаходом або її фармацевтично прийнятну сіль і один або кілька засобів, вибраних з аміносаліцилатів, стероїдів, системних імуносупресантів, антитіл проти ТМЕа, антитіл проти
МІ А-4, антитіл проти інтегрину са4«ВД7, антибактеріальних засобів і лікарських засобів від діареї.
Додатковий) засіб(и), при наявності, присутній(ї) в терапевтично ефективній кількості, тобто в будь-якій кількості, яка забезпечує терапевтично сприятливий ефект при спільному введенні зі бо сполукою згідно з даним винаходом або її фармацевтично прийнятною сіллю.
Тому також передбачена фармацевтична композиція, яка містить сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль і один або кілька інших терапевтичних засобів, застосовних для лікування шлунково-кишкових запальних порушень.
Крім того, згідно з одним аспектом, що стосується способу, даний винахід стосується способу лікування шлунково-кишкових запальних порушень, що включає введення ссавцеві сполуки (І) або її фармацевтично прийнятної солі і одного або кількох інших терапевтичних засобів, застосовних для лікування шлунково-кишкових запальних порушень.
Респіраторні захворювання
Цитокіни, які передають сигнали через шлях ЧЗАК-5ТАТ, зокрема 1-2, ІІ -3, 1-4, 11 -5, 11 -6, І - 9, 17-11, 17-13, 17-23, 11-31, 11-27, тимусний стромальний лімфопоетин (Т5І Р), інтерферон-у (ІЄМуУ) ї гранулоцитарно-макрофагальний колонієстимулюючий фактор (5М-С5БЕ), залучені в запалення при астмі і інших запальних респіраторних захворюваннях. Як описано вище, було показано, що сполука (І) є потужним інгібітором кіназ ЗАК і демонструє ефективне інгібування прозапальних цитокінів ІІ -13 у клітинних методах аналізу.
Протизапальна активність інгібіторів "АК була надійно продемонстрована на доклінічних моделях астми (Маїаміуа еї аї., п Іттипорпагтасої, 2010, 10, 829-836; Маїзипада еї аї.,
Віоспет апа Віорпуз Не5 Соттип, 2011, 404, 261-267; Киадіася евї а!., Єиг / Рнаптасої, 2008, 582, 154-161.) Відповідно передбачається, що сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль можуть бути застосовні для лікування запальних респіраторних порушень, таких як астма. На доповнення до астми, запалення і фіброз легень характерні для інших респіраторних захворювань, таких як хронічна обструктивна хвороба легень (СОРО), муковісцидоз (СЕ), пневмоніт, інтерстиціальні захворювання легень (включаючи ідіопатічний легеневий фіброз), гостре пошкодження легень, гострий респіраторний дистрес-синдром, бронхіт, емфізема і облітеруючий бронхіоліт. Тому, сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль можуть бути застосовні для лікування хронічної обструктивної хвороби легень, муковісцидозу, пневмоніту, інтерстиціальних захворювань легень (включаючи ідіопатічний легеневий фіброз), гострого пошкодження легень, гострого респіраторного дистрес-синдрому, бронхіту, емфіземи, облітеруючого бронхіоліту, хронічної дисфункції алотрансплантата легені (СІ АБ), відторгнення трансплантата легені і саркоїдозу.
Зо Тому, згідно з одним аспектом, дане розкриття стосується способу лікування респіраторного захворювання у ссавця (наприклад, людини), що включає введення ссавцеві сполуки (І) або її фармацевтично прийнятної солі.
Згідно з одним аспектом, респіраторне захворювання являє собою астму, хронічну обструктивну хворобу легень, муковісцидоз, пневмоніт, хронічну обструктивну хворобу легень (СОРО), муковісцидоз (СЕ), пневмоніт, інтерстиціальні захворювання легень (включаючи ідіопатічний легеневий фіброз), гостре пошкодження легень, гострий респіраторний дистрес- синдром, бронхіт, емфізему, облітеруючий бронхіоліт, алергічний риніт або саркоїдоз. Згідно з одним аспектом, респіраторне захворювання являє собою астму або хронічне обструктивне захворювання легень.
Згідно з іншим аспектом, респіраторне захворювання являє собою легеневу інфекцію, гельмінтну інфекцію, легеневу артеріальну гіпертензію, саркоїдоз, лімфангіолейоміоматоз, бронхоектаз або інфільтративне захворювання легень. Згідно з ще одним аспектом, респіраторне захворювання являє собою пневмоніт, викликаний лікарськими засобами, пневмоніт, викликаним грибками, алергічний бронхолегеневий аспергільоз, пневмоніт при гіперчутливості, еозинофільний гранулематоз із поліангіїтом, ідіопатічну гостру еозинофільну пневмонію, ідіопатічну хронічну еозинофільну пневмонію, гіпереозинофільний синдром, синдром Леффлера, облітеруючий бронхіоліт з організуючою пневмонією або пневмоніт, індукований інгібітором контрольної точки імунітету.
Дане розкриття додатково стосується способу лікування респіраторного захворювання, причому спосіб включає введення ссавцеві фармацевтичної композиції, яка містить сполуку (1) або її фармацевтично прийнятну сіль і фармацевтично прийнятний носій.
Сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль також можуть бути використані в комбінації з однією або кількома сполуками, застосовними для респіраторних захворювань.
Очні захворювання
Багато очних захворювань асоційовані з підвищенням вмісту прозапальних цитокінів, які стосуються шляху передачі сигналів ЧАК-ЗТАТ.
Тому, сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль можуть бути використані для лікування цілого ряду очних захворювань, які включають, без обмеження, увеїт, діабетичну ретинопатію, діабетичний макулярний набряк, синдром сухого ока, вікову макулярну бо дегенерацію і атопічний кератокон'юктивіт.
Зокрема, увеїт (Ногаї апа Сабзрі, У Іпіегегоп СуїоКіпе Ке5, 2011, 31, 733-744), діабетична ретинопатія (Арсоцмег, У Сіїп СеїЇ Іттипої, 2013, Зиррі 1, 1-12), діаабетичний макулярний набряк (бБойпп еї аї., Атегісап Уоцтта! ої Орійпатоіоду, 2011, 152, 686-694), синдром сухого ока (біємепзоп вї аї., Атсп Орпійаїтої, 2012, 130, 90-100), оклюзія вен сітківки (ЗпСспиКкО еї аї, Іпаіїап доитаї ої ОрпіНаІтоїіоду, 2015, 63(12), 905-911) і вікова макулярна дегенерація (КпіскеїЇбеїп еї аІ., Іпї Орпіна!тої Сіїп., 2015, 55(3), 63-78) характеризуються підвищенням вмісту певних прозапальних цитокінів, які передають сигнал по шляху ЗАК-5ТАТ. Відповідно, сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль можуть бути здатні пом'якшувати симптоми асоційованого запалення ока і повертати розвиток захворювання або забезпечувати ослаблення симптомів.
Тому, згідно з одним аспектом, даний винахід стосується способу лікування очного захворювання у ссавця, що включає введення в око ссавця сполуки (І) або її фармацевтично прийнятної солі або фармацевтичної композиції, яка містить сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль і фармацевтичний носій. Згідно з одним аспектом, очне захворювання являє собою увеїт, діабетичну ретинопатію, діабетичний макулярний набряк, синдром сухого ока, вікову макулярну дегенерацію або атопічний кератокон'юктивіт. Згідно з одним аспектом, спосіб включає введення сполуки (І) або її фармацевтично прийнятної солі за допомогою ін'єкції в скловидне тіло.
Сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль також можуть бути використані в комбінації з однією або кількома сполуками, застосовними для очних захворювань.
Інші захворювання
Сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль також можуть бути застосовні для лікування інших захворювань, таких як запальні захворювання, аутоїмунні захворювання і злоякісні пухлини.
Сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль також можуть бути застосовні для лікування ротової порожнини, мукозиту слизової оболонки порожнини рота і рецидивного афтозного стоматиту.
Сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль також можуть бути застосовні для лікування одного або кількох з артриту, ревматоїдного артриту, ювенільного ревматоїдного артриту, відторгнення трансплантата, ксерофтальмії, псоріатичного артриту, діабету,
Зо інсулінозалежного діабету, хвороби рухових нейронів, мієлодиспластичного синдрому, болю, саркопенії, кахексії, септичного шоку, системного червоного вовчака, лейкозу, хронічного лімфоцитарного лейкозу, хронічного мієлолейкозу, гострого лімфобластного лейкозу, гострого мієлобластного лейкозу, анкілозивного спондиліту, мієлофіброзу, В-клітинної лімфоми, гепатоцелюлярного раку, хвороби Ходжкіна, злоякісної пухлини молочної залози, множинної мієломи, меланоми, неходжкінської лімфоми, недрібноклітинного раку легені, світлоклітинного раку яєчників, пухлини яєчника, пухлини підшлункової залози, істинної поліцитемії, синдрому
Шегрена, саркоми м'яких тканин, саркоми, спленомегалії, Т-клітинної лімфоми і великої таласемії.
Дане розкриття стосується способу лікування вказаних захворювань у ссавця, що включає введення ссавцеві сполуки (І) або її фармацевтично прийнятної солі або фармацевтичної композиції, яка містить сполуку (І) або її фармацевтично прийнятну сіль і фармацевтичний носій.
У попередніх параграфах, у випадку застосування при комбінованій терапії засоби можуть бути включені до складу єдиної фармацевтичної композиції, розкритої вище, або засоби можуть бути надані в окремих композиціях, які вводять одночасно або в різний час, одним і тим же або різними шляхами введення. При роздільному введенні засоби вводять досить близько за часом для того, щоб забезпечити цільовий терапевтичний ефект. Такі композиції можуть бути упаковані окремо або можуть бути упаковані разом у вигляді набору. Два або кілька терапевтичних засобів у наборі можуть бути введені одним і тим же шляхом введення або різними шляхами введення.
ПРИКЛАДИ
Подальші приклади синтезу і біологічні приклади запропоновані для ілюстрації даного винаходу і ніяким чином не повинні тлумачитися як такі, що обмежують обсяг даного винаходу.
У представлених нижче прикладах, якщо не вказано інше, то наступні скорочення мають наступні значення. Скорочення, не вказані нижче, мають їх загальноприйняті значення.
АСМ - ацетонітрил
Вп - бензил
Вос - трет-бутоксикарбоніл доб. - доба (діб) 60 ПІРЕА-М, М-діїзопропілетиламін
ОМЕ-М, М-диметилформамід
РМ50О - диметилсульфоксид
ЕКОДдс - етилацетат
ЕКОН - етиловий спирт год. - година (годин)
НАТИ-М, М, М'/М'-тетраметил-О-(7-азабензотриазол-1-іл)ууронію гексафторфосфат
ІРА - ізопропіловий спирт
Меон - метанол хв. - хвилина (хвилини)
ММР-М-метилпіролідон к.т. - кімнатна температура
ТЕА - триетиламін
ТНЕ - тетрагідрофуран
ТЕА - трифтороцтова кислота
Реагенти і розчинники купували у комерційних постачальників (Аїагісп, РійКа, 5ідта, і т.п.) і використовували без додаткового очищення. Розвиток реакцій відстежували методом тонкошарової хроматографії (ТІ С), аналітичної високоефективної рідинної хроматографії (анал.
НРІ С) і/або мас-спектрометрії. Виділення продуктів з реакційних сумішей проводили, як більш визначено описано для кожної реакції; головним чином, їх очищували шляхом екстрагування або іншими способами очищення, такими як залежна від температури і залежна від розчинника кристалізація і осадження. Крім того, реакційні суміші рутинно очищували методом колонкової хроматографії або методом препаративної НРІС, звичайно із застосуванням колонок з набиванням С18 або ВО5 сорбентом і традиційних елюєнтів. Типові умови препаративної НРІ С описані нижче.
Охарактеризацію продуктів реакції рутинно проводили методами мас- і "Н-ЯМР- спектрометрії. Для ЯМР-аналізу зразки розчиняли в дейтерованому розчиннику (такому як
СОзО0, СОСІз або ас-ОМмМ509), і отримували спектри "Н-ЯМР із застосуванням приладу Магіап
Сетіпі 2000 (400 МГц) у стандартних умовах спостереження. Мас-спектрометричну ідентифікацію сполук проводили методом іонізації електророзпиленням (Е5БМ5) на приладі
Зо Арріїед Віозухіїетв5 (Бовієг Сйу, СА) тоаеї АРІ 150 ЕХ або Умаїег5 (Мійога, МА) 3100, з'єднаному з системами автоочищення.
Якщо не вказано інше, то для препаративної НРІ С очищення використовували наступні умови.
Колонка: С18, 5 мкм, 21,2х150 мм, або С18, 5 мкм, 21х250 мм, або С14, 5 мкм, 21х250 мм
Температура колонки: кімнатна температура
Швидкість потоку: 20,0 мл/хв.
Рухомі фази: А-водажО,05 95 ТЕА; В-ААСМ--0,05 96 ТЕА
Об'єм, що вводиться: (100-1500 мкл)
Довжина хвилі детектора: 214 нм
Неочищені сполуки розчиняли в суміші вода:оцтова кислота-1:!1 приблизно до 50 мг/мл.
Проводили аналітичний тестовий прогон протягом 4 хвилин із застосуванням С18 колонки 2,1х50 мм, а потім препаративний аналіз протягом 15 або 20 хвилин із застосуванням об'єму, що вводиться, 100 мкл і градієнта, основаного на залежному від 95 В утримуванні при аналітичному тестовому прогоні. Точні градієнти залежали від зразка. Образи з близько елюйованими домішками перевіряли на С18 колонці 21х250 мм і/або С14 колонці 21х150 мм для кращого розділення. Фракції, що містять цільовий продукт, ідентифікували методом мас- спектрометричного аналізу.
Умови аналітичної НРІ С
Спосіб А
Колонка: ГОМА С18 (2), 150х4,60 мм, З мкм
Температура колонки: 372
Швидкість потоку: 1,0 мл/хв.
Об'єм, що вводиться: 5 мкл
Підготовка зразка: розчинення в суміші АСМ:вода-1:1
Рухомі фази: А-вода:-АСМ:ТЕА (98:2:0,05), В-вода:-АСМ:ТЕА (2:98:0,05)
Довжина хвилі детектора: 250 нм
Градієнт: всього 32 хв. (час (хв.)/95 В): 0/2, 10/20, 24/90, 29/90, 30/2, 32/2
Спосіб В
Колонка: ГОМА С18 (2), 150х4,60 мм, З мкм бо Температура колонки: 372
Швидкість потоку: 1,0 мл/хв.
Об'єм, що вводиться: 10 мкл
Підготовка зразка: розчинення в суміші АСМ:вода-1:1
Рухомі фази: А-вода:"АСМ:ТЕА (98:2:0,05), В-вода"АСМ:ТЕА (10:90:0,05)
Довжина хвилі детектора: 254 нм
Градієнт: всього 35 хв. (час (хв.)/95 В): 0/2, 20/25, 23/90, 26/90, 27/2, 35/2
Спосіб С
Колонка: Рогозпеї! 120 5В-Ад, 150х4,60 мм, 2,7 мкм, кат. 24683975-914
Температура колонки: 352С
Швидкість потоку: 1,0 мл/хв.
Об'єм, що вводиться: 5 мкл
Підготовка зразка: розчинення в суміші МРВ:МРА-50:50
Рухомі фази: А-ацетонітрил:вода:трифтороцтова кислота (1:99:0,290),
В-ацетонітрил:вода:трифтороцтова кислота (90:10:0,20)
Градієнт: нини шини пиши пили или пи СХ: я ПОЕТ КТ Я ПОТ Я ПО 11220717 17777717171717171717117100777777771171771111111111лобо1 нин шин шин пили гу ни
Отримання 1: трет-бутил-(1А, 35, 55)-9-(етилсульфоніл)-9-азабіцикло|3.3.1|нонан-3- іл)ууметил)карбам ат
Вп Вп Вп оне7 7 оно МН,ОН-НСЇ зи Вомнь снІсооК ма
Й » -- ----»- ----'-я» он о (в) діоксанін,о ЕФОАС/Н,О Х п-РГОН о МОН МН, 1-1 12 13 1-4
Вп Вп сі (о
Вос;Оо Ме н. бтевк я й
ТЕА ман РО(ОНУС -/7о діоксан/НО ОМЕ ІРА/ТНЕ півидик 23
МН М-
Вос/. ве 7 Вос' ий 1-7 Вос 1-8 1-5 1-6
Со ок
АМ НСУБОЮАс
ЕЮАс 23 нМ- 1-9
Стадія 1: У паралелі ставили п'ять реакцій. До розчину сполуки 1-1 (2,00 кг, 13,7 моль, 1,00 екв.) в діоксані (5,00 л) і воді (20,0 л) при 10 "С по краплях додавали глутаральдегід (2,06 кг, 20,5 моль, 1,5 екв.) і фенілметанамін (1,54 кг, 14,4 моль, 1,05 екв.). Після додавання реакційну суміш перемішували при 20"С протягом 16 год. Методами ТС (петролейний ефір/етилацетат-5/1, продукт Н-0,40) їі Ї/СМ5 виявляли завершення реакції. Значення рн реакційної суміші коригували до рН 2 додаванням концентрованої НСІ (12н) при 20 "С. Після додавання реакційну суміш нагрівали до 60 С і перемішували протягом 1 год. Після
Зо охолоджування до 10 "С до суміші додавали етилацетат (10,0 л). Потім значення рН суміші коригували до рН 10 додаванням водного розчину гідроксиду натрію (12н) при 10 "С. Суміш перемішували протягом 10 хв. Органічний шар розділяли. Водний шар екстрагували етилацетатом (3,00 л). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином (4,00 л), сушили над сульфатом натрію і фільтрували. Органічний шар від п'яти паралельних реакцій об'єднували і концентрували. Залишок очищували методом колонкової хроматографії (51іО», петролейний ефір/етилацетат-30/1-2/1) з отриманням сполуки 1-2 (10,0 кг, вихід 51,5 95, чистота 97 95). (т/2): (МАНІ розрах. для Сі5НізМО 230,15 виявл. 230,0. "Н-ЯМР: 400 МГц ОМ50О-йв б 7,24-7,А41 (м, 5Н), 3,88 (с, 2Н), 3,20-3,21 (м, 2Н), 2,73-2,79 (м, 2Н), 2,07 (д, 9У-16,4 Гц, 2Н), 1,75- 1,684 (м, 2Н), 1,45-1,50 (м, ЗН), 1,24-1,36 (м, 1Н).
Стадія 2: У паралелі ставили три реакції. До розчину сполуки 1-2 (3,00 кг, 13,1 моль, 1,0 екв.) в етилацетаті (24,0 л) і воді (9,00 л) при 20 "С додавали СНІЗСООК (2,05 кг, 20,9 моль, 1,6 екв.) і
МНгОН-НСІ (1,82 кг, 26,2 моль, 2,0 екв.). Суспензію нагрівали до 45 "С і перемішували протягом 16 год. Методами ТІ С (петролейний ефір/етилацетат-2/1, продукт К-0,30) і Ї/СМ5 виявляли завершення реакції. Значення рН суспензії коригували до рН 8 додаванням насиченого водного розчину бікарбонату натрію, а потім розбавляли водою (15,0 л) і етилацетатом (10,0 л).
Органічний шар розділяли. Водний шар екстрагували етилацетатом (3х10,0 л). Органічний шар від трьох реакційних сумішей об'єднували, сушили над сульфатом натрію, фільтрували і концентрували. Неочищений продукт розбавляли н-гептаном (12,0 л) і перемішували протягом 12 год. Тверду речовину збирали шляхом фільтрування з отриманням сполуки 1-3 (8,00 кг, вихід 83,4 96). (т/2): МАНІ" розрах. для СіБНгоМ2О 245,16 виявл. 245,1. "Н-ЯМР: 400 МГц ЮОМ5О-й6 10,16 (с, 1Н), 7,22-7,38 (м, 5Н), 3,83 (с, 2Н), 2,97(ушир. с, 2Н), 2,87 (д, 9У-16,0 Гц, 1Н), 2,60-2,62 (м, 1Н), 2,20-2,25 (м, 1Н), 2,09-2,13 (м, 1Н), 1,72-1,85 (м, ЗН), 1,39-1,49 (м, ЗН).
Стадія 4: У паралелі ставили сорок п'ять реакцій. До розчину сполуки 1-3 (160 г, 655 ммоль, 1,0 екв.) в п-РгОн (3,20 л) при 110 "С протягом З год. порціями додавали Ма (181 г, 7,86 моль, 12 екв.). Суміш перемішували при 110 С протягом 2 год. Методом ТІ/С (петролейний ефір/етилацетат-2/1, вихідна речовина Ке0,40) виявляли завершення реакції. Суміш охолоджували до 70"С, вливали у воду з льодом (4,00 л). Водний шар екстрагували етилацетатом (2х1,0 л). Об'єднаний органічний шар від сорока п'яти реакційних сумішей промивали сольовим розчином (20,0 л), сушили над сульфатом натрію, фільтрували і концентрували. Залишок розбавляли н-гексаном (12,0 л), перемішували протягом 12 год.
Зо Суспензію фільтрували з отриманням фільтрату. Фільтрат концентрували з отриманням сполуки 1-4 (6,00 кг, вихід 88,4 95) у вигляді жовтого масла. "Н-ЯМР 400 МГц ЮОМ50О-ав: 6 7,18- 7,35 (м, 5Н), 3,76 (с, 2Н), 3,26-3,35 (м, 1Н), 2,76 (с, 2Н), 1,86-1,90 (м, 2Н), 1,67-1,73 (м, 2Н), 1,54- 1,59 (м, 5Н), 1,41-1,45 (м, ЗН).
Стадія 5: У паралелі ставили дві реакції. До розчину сполуки 1-4 (2,10 кг, 9,12 моль, 1,1 екв.) в діоксані (12,6 л) і воді (1,26 л) при 0 "С по краплях додавали ЕМ (1,01 кг, 10,0 моль, 1,1 екв.) і (Вос)26О (2,19 кг, 10,0 моль, 1,1 екв.), підтримуючи температуру нижче 20 "С. Суміш нагрівали до 40" і перемішували протягом 10 год. Методом ТІ С (петролейний ефір/етилацетат-2/1, продукт
Неє0,40) виявляли завершення реакції. Суміш охолоджували до 10 "С, фільтрували з отриманням осаду на фільтрі. Фільтрат концентрували. Осад на фільтрі промивали н-гексаном (3,00 л) з отриманням сполуки 1-5 (4,00 кг, вихід 66,4 95) у вигляді білої твердої речовини. "Н-
ЯМР: 400 МГц ОМ50-ав: 6 7,28-7,33 (м, 4Н), 7,19-7,22 (м, 1Н), 6,64 (д, 9У-8,0 Гу, 1Н), 4,10-4,17 (м, 1Н), 3,77 (с, 2Н), 2,77 (с, 2Н), 1,88-1,90 (м, 2Н), 1,72-1,75 (м, ЗН), 1,57-1,61 (м, ЗН), 1,43-1,48 (м, 2Н), 1,38 (с, 9Н).
Стадія 6: У паралелі ставили чотири реакції. До суспензії сполуки 1-5 (1,50 кг, 4,54 моль, 1,0 екв.) в ОМЕ (13,5 л) в атмосфері М2 при 0 "С порціями додавали Ман (272 г, 6,81 моль, чистота 6О 95, 1,5 екв.). Суспензію нагрівали природним чином до 25 "С і перемішували протягом 30 хв.
Після охолоджування до 0 "С до суспензії по краплях додавали Меї (773 г, 5,45 моль, 1,2 екв.).
Реакційну суміш нагрівали природним чином до 25"С і перемішували протягом 12 год.
Методами ТС (петролейний ефір/етилацетат-5/1, продукт Ке-0,50) і ІСМ5 виявляли завершення реакції. Суміш вливали у воду з льодом (30,0 л), екстрагували етилацетатом (9,00 л, 3,00 л). Об'єднаний органічний шар від чотирьох реакційних сумішей промивали водою з льодом (20,0 л), сольовим розчином (10,0 л), сушили над сульфатом натрію, фільтрували і концентрували з отриманням сполуки 1-6 (6,00 кг, неочищ.) у вигляді жовтого масла.
Неочищений продукт використовували на наступній стадії. "Н-'ЯМР: 400 МГц ЮОМ50О-ав б 7,21- 7,37 (м, 5Н), 4,87 (ушир. с, 1Н), 3,80 (с, 2Н), 2,86 (с, 2Н), 2,68 (с, ЗН), 1,64-1,99 (м, 6Н), 1,40-1,49 (м, 13Н). (т/2): ІМ-АНІ" розрах. для СгіНзгМ2О» 344,25 виявл. 345,2.
Стадія 7: У паралелі ставили тридцять дев'ять реакцій. До розчину сполуки 1-6 (150 г, 435 ммоль, 1,0 екв.) в ІРА (500 мл) і ТНЕ (500 мл) додавали РЯА(ОН)г/С (70 г, чистота 40 ор).
Суспензію кілька разів дегазували в умовах вакууму і продували Нг2. Суміш перемішували в бо атмосфері Не (50 фунт./кв.дюйм) при 25 "С протягом 16 год. Методами ТС (петролейний ефір/етилацетат-5/1, вихідна речовина Ке0,50) і | СМ5 виявляли завершення реакції. Збирали тридцять дев'ять реакційних сумішей. Суміш фільтрували з отриманням фільтрату. Осад на фільтрі промивали ІРА/ТНЕ (1/1, 25,0 л). Об'єднаний фільтрат концентрували з отриманням сполуки 1-7 (3,85 кг, неочищ.) у вигляді світло-жовтого масла. Неочищений продукт використовували безпосередньо на наступній стадії. (пт/27): (МАНІ розрах. для С1і4«НовМ2О» 255,20 виявл. 255,1. "Н-ЯМР: 400 МГц ОМ5О-дв б 4,88 (ушир. с, 1Н), 3,08 (с, 2Н), 2,60 (с, ЗН), 1,73-1,76 (м, 5Н), 1,51-1,61 (м, 5Н), 1,39 (с, 9Н).
Стадія 8: У паралелі ставили чотири реакції. До розчину сполуки 1-7 (750 г, 2,95 моль, 1,0 екв.) в 2-метилтетрагідрофурані (3,00 л) в атмосфері М2 при 0 "С по краплях додавали піридин (466 г, 5,90 моль, 2,0 екв.) і етансульфонілхлорид (398 г, 3,10 моль, 1,05 екв.). Суміш нагрівали до 25"С і перемішували протягом З год. Методом ТС (петролейний ефір/етилацетат-2/1, продукт К-0,50) виявляли завершення реакції. Збирали чотири реакційні суміші. Суміш гасили додаванням води з льодом (10,0 л). Органічний шар розділяли, промивали 0,5 н НСІ (2х3,00 л).
Об'єднаний водний шар екстрагували етилацетатом (3,00 л), органічний шар знову промивали 0,5 н НСЇІ (500 мл). Об'єднаний органічний шар промивали сольовим розчином (5,00 л), сушили над сульфатом натрію, фільтрували і концентрували з отриманням сполуки 1-8 (2,20 кг, неочищ.) у вигляді жовтого масла. Неочищений продукт використовували на наступній стадії. "Н-ЯМР: 400 МГц ОМ50-ав б 4,94 (ушир. с, 1Н), 3,98 (с, 2Н), 3,10 (кв, У-7,2 Гц, 2Н), 2,58 (с, ЗН), 1,83-1,91 (м, 5Н), 1,56-1,71 (м, 5Н), 1,40 (с, 9Н), 1,19 (т, У-7,2 Гц, ЗН).
Стадія 9: У паралелі ставили чотири реакції. До розчину сполуки 1-8 (550 г, 1,59 моль, 1,0 екв.) в ЕЮАс (2,75 л) при 25"С по краплях додавали НСІ/ЕТОАс (4 М, 3,0 екв.). Суміш перемішували при 25 "С протягом 12 год. Методом ТІ С (петролейний ефір/етилацетат-2/1, вихідна речовина Ке-0,50) виявляли завершення реакції. Збирали чотири реакційні суміші.
Суміш фільтрували з отриманням осаду на фільтрі з отриманням сполуки 1-9 (1,25 кг, неочищ.,
НОСІ) у вигляді жовтої твердої речовини. "Н-ЯМР: 400 МГц ЮОМ50О-ав б 9,04 (с, 1Н), 4,02 (с, 2Н), 3,88-3,94 (м, 1Н), 3,09 (кв, 9У-7,2 Гц, 2Н), 2,09-2,14 (м, 2Н), 1,61-1,84 (м, 8Н), 1,19 (т, 9У-7,2 Гу,
ЗН).
Отримання 2: (2-((18, 35, 55)-9-(етилсульфоніл)-9-азабіциклої|3.3.1|нонан-3- іл)ууметил)аміно)-5-фтор-6-(5-метил-1 Н-піразол-3-іл)ламіно)піримідин-4-іл)метанол (І)
НМ 2-4 но М он М у
СІ М СІ но Ба | З | міш а
НС ри ВО, й дм РОСІЇ» ДА мн, й ОН РИМЕЄ Е ТОРА оон ої Зо7 о зол 00 вон 2-1 2-2 2-3 (о)
С» А / З - - 07 ів) 0-3 1-9
НМ ох ик х Нм
М ча М хх Ц Х нй--- мавн, М сасі, нм М сі - - - Ж6Є л - 6 зш 25Аз ьеах НМ М -- - - жк
З ПІРЕА, ОМБО | З 7-00 ТНЕ/ЕюН Нм | г -
М
Е 4 Е й" Е гай 07 о7 07 о7 Ф он 2-5 2-6
Стадія 1: Розчин сполуки 2-1 (1,00 кг, 5,74 моль, 1,0 екв.) в етанолі (15,0 л) з насиченою НСІ (1,40 кг, 38,4 моль) перемішували при 90 "С протягом 60 год. Методом НРІС виявляли один детектований основний пікс Реакційну суміш фільтрували. Осад на фільтрі збирали з отриманням сполуки 2-2 (1,00 кг, вихід 81,8 95, чистота 98,8 95) у вигляді білої твердої речовини. "Н-ЯМР: 400 МГц ОМ50О-ав 5 11,82 (ушир. с, 1Н), 10,82 (ушир. с, 1Н), 4,31 (кв, 9-7,2 Гц, 2Н), 1,27
(т, У-6,8 Гц, ЗН).
Стадія 2: У паралелі ставили п'ять реакцій. До розчину сполуки 2-2 (560 г, 2,77 моль, 1,0 екв.) в РОСІз (1,68 л) додавали М, М-дієтиланілін (289 г, 1,94 моль, 0,7 екв.). Суміш перемішували при 140 "С протягом 12 год. Методом ТІ С (петролейний ефір/етилацетат-10/1, продукт Е--0,50) виявляли повне витрачання сполуки 2-2. Збирали п'ять реакційних сумішей.
Реакційну суміш концентрували в умовах зниженого тиску з отриманням залишку. Залишок розбавляли етилацетатом (25,0 л). Розчин вливали в колений лід (25,0 л). Водну фазу екстрагували етилацетатом (25,0 л). Об'єднані органічні шари промивали насиченим розчином карбонату натрію (2х10,0 л), сушили над сульфатом натрію, фільтрували і концентрували в умовах зниженого тиску з отриманням залишку. Залишок очищували методом колонкової хроматографії (5іО2, петролейний ефір/етилацетат-1/0-50/1) з отриманням сполуки 2-3 (2,00 кг) у вигляді коричневої рідини. "Н-ЯМР: 400 МГц СОСІ» б 4,51 (кв, 9У-7,2 Гц, 2Н), 1,44 (т, 9-7,2 Гу,
ЗН).
Стадія 3: У паралелі ставили чотири реакції. Суміш сполуки 2-3 (480 г, 2,01 моль, 1,0 екв.), сполуки 2-4 (224 г, 2,31 моль, 1,15 екв.), ОІРЕА (519 г, 4,02 моль, 2,0 екв.) в етанолі (2,60 л) тричі дегазували і продували Ме, а потім перемішували суміш при 25 "С протягом 4 год. в атмосфері М». Методом ТІ С (петролейний ефір/етилацетат-10/1) виявляли повне витрачання сполуки 2-3. Методом ТС (петролейний ефір/етилацетат-1/1, продукт Ке0,40) виявляли формування однієї нової плями. Збирали чотири реакційні суміші. Реакційну суміш фільтрували, і збирали осад на фільтрі. Фільтрат концентрували в умовах зниженого тиску з отриманням залишку. Залишок розтирали з водою (38,0 л) і фільтрували. Осад на фільтрі (300 г) розтирали з етанолом (600 мл) і фільтрували. Два осади на фільтрах збирали з отриманням сполуки 2-5 (1,50 кг, вихід 62,2 95) у вигляді жовтої твердої речовини. "Н-ЯМР: 400 МГц ОМ50О-айв б 12,31 (с, 1Н), 10,76 (с, 1Н), 6,38 (с, 1Н), 4,35 (кв, 9-7,2 Гц, 2Н), 2,27 (с, ЗН), 1,30 (т, 9У-7,2 Гц, ЗН).
Стадія 4: У паралелі ставили чотири реакції. Розчин сполуки 2-5 (254 г, 848 ммоль, 1,0 екв.), сполуки 1-9 (300 г, 1,06 моль, НС, 1,25 екв.) і ОІРЕА (548 г, 4,24 моль, 5,0 екв.) в ОМ5О (600 мл) перемішували при 130 "С протягом 16 год. Методами ТІ С (етилацетат/петролейний ефір-2/1,
Ве0,30) і Г/СМ5 виявляли, що залишилося «9 95 вихідної речовини. Суміш охолоджували до 2576. Чотири реакційні суміші збирали, вливали у воду з льодом (12,0 л). Формувався жовтий
Зо осад. Тверду речовину збирали шляхом фільтрування з отриманням сполуки 2-6 (1,50 кг, чистота «76 95) у вигляді жовтої твердої речовини. (Іт/2): (МАНІ. розрах. для С22НзгЕМ7045 510,22 виявл. 510,2. Суспензію сполуки 2-6 (440 г, 656 ммоль, чистота -«-76 9б) в етанолі (1,10 л) нагрівали до 95"С до розчинення твердої речовини. Розчин охолоджували до 25С і перемішували протягом 12 год. Методом НРІС виявляли чистоту «96,9 95. Збирали три реакційні суміші. Суспензію фільтрували з отриманням осаду на фільтрі з отриманням сполуки 2-6 (7570 г, 96,9 95 чистота) у вигляді світло-жовтої твердої речовини. Продукт використовували безпосередньо на наступній стадії. "Н-'ЯМР: 400 МГц ОМ50-ав 5 12,12 (с, 1Н), 9,73 (с, 1Н), 6,35 (с, 1Н), 5,59 (ушир. с, 1Н), 4,32 (м, 2Н), 4,02 (с, 2Н), 3,13 (кв, 9У-7,2 Гц, 2Н), 2,83 (с, ЗН), 2,20 (с,
ЗН), 1,94 (с, ЗН), 1,64-1,73 (м, 5Н), 1,76-1,87 (м, 5Н), 1,29 (т, 9У-7,2 Гц, ЗН), 1,21 (т, 9У-7,2 Гц, ЗН).
Стадія 5: У паралелі ставили п'ять реакцій. До розчину сполуки 2-6 (130 г, 255 ммоль, 1,0 екв.) в тетрагідрофурані (3,25 л) і етанолі (3,25 л) при 0 "С порціями додавали Мавна (77,2 г, 2,04 моль, 8,0 екв.) і Сасіг (113 г, 1,02 моль, 4,0 екв.). Суміш нагрівали до 10 "С і перемішували протягом 2 год. Методом ТІС (етилацетат/петролейний ефір-3/1, продукт Ке0,20) виявляли завершення реакції. Збирали п'ять реакційних сумішей. Суміш гасили додаванням насиченого розчину карбонату натрію (6,00 л), розбавляли етилацетатом (15,0 л) і перемішували протягом 0,5 год. Суспензію фільтрували з отриманням фільтрату. Органічний шар розділяли, і екстрагували водний шар етилацетатом (2х5,00 л). Об'єднаний органічний шар промивали сольовим розчином (5,00 л), сушили над сульфатом натрію, фільтрували і концентрували з отриманням сполуки (І) (500 г, неочищ.) у вигляді світло-жовтої твердої речовини.
Очищення: У паралелі ставили п'ять реакцій. Суспензію сполуки (І) (100 г, 210 ммоль) в етанолі (3,00 л) нагрівали до 95 "С до розчинення твердої речовини. Розчин охолоджували до 2570 і перемішували протягом 12 год. з формуванням великої кількості осаду. Методом НРІС виявляли чистоту 100 95. Збирали п'ять реакційних сумішей. Тверду речовину збирали шляхом фільтрування з отриманням всього 330 г сполуки (І) (чистота 99,3 95) у вигляді світло-жовтої твердої речовини (кристалічна форма 1). (птп/2): (МАНІ розрах. для СгоНзоєМ7Оз5 468,21 виявл. 468,3. "Н-ЯМР: 400 МГц ОМ50-ав 5 12,02 (с, 1Н), 9,29 (с, 1Н), 6,34 (с, 1Н), 5,61 (ушир. с, 1Н), 5,02 (т, У-6,8 Гц, 1Н), 4,33 (д, 9У-4,0 Гц, 2Н), 4,02 (с, 2Н), 3,12 (кв, 9У-7,2 Гц, 2Н), 2,84 (с, ЗН), 2,19 (с, ЗН), 1,82-2,01 (м, ЗН), 1,63-1,74 (м, 5Н), 1,21 (т, 9У-7,2 Гц, ЗН).
Отримання 3: етил-5-фтор-2,6-дигідроксипіримідин-4-карбоксилат но М он г
М
Е о 07
Розчин 5-фтор-2,6-дигідроксипіримідин-4-карбонової кислоти (20,4 г, 120 ммоль) в ОМЕ (200 мл) обробляли ЮВИ (18,7 г, 123 ммоль) і перемішували протягом 0,5 год. при 25 "С. Потім додавали Ей (19,2 г, 123 ммоль), і нагрівали отриманий розчин до 60 "С протягом З годин. До суміші додавали НгО (1000 мл), отриманий осад збирали шляхом фільтрування, промивали
НгО (200 мл) і сушили з отриманням етил-5-фтор-2,б-дигідроксипіримідин-4-карбоксилату (19 г, вихід 80 Об).
Отримання 4: етил-2,6-дихлор-5-фторпіримідин-4-карбоксилат
СІ М СІ г
М
Е о 07»
Суміш етил-5-фтор-2,6-дигідроксипіримідин-4-карбоксилату (5 г, 24,8 ммоль), РИМЕСЬ (2,58 г, 17,3 ммоль), РОСІ» (130 г, 855,9 ммоль) нагрівали до 100 "С протягом 4 годин. Потім реакційну суміш охолоджували до кімнатної температури і вливали у воду з льодом (500 мл), Водний шар екстрагували ЕАс (1000 мл), органічний шар промивали нас. МансСоз (200 мл), сольовим розчином (200 мл), сушили над Маг5О:, фільтрували і концентрували в умовах вакууму.
Залишок очищували методом колонкової хроматографії (80 г колонка; 0-50 96 ЕАсС в гексанах) з отриманням етил-2,6-дихлор-5-фторпіримідин-4-карбоксилату у вигляді жовтого масла (3,8 г, 65 об).
Отримання 5: етил-2-хлор-5-фтор-6-(5-метил-1 Н-піразол-3-іл)іаміно)піримідин-4- карбоксилат ним
ОХ
МАХ нм М СІ г
М
Е о 07»
Суміш етил-2,6б-дихлор-5-фторпіримідин-4-карбоксилату (3,8 г, 16 ммоль), 5-метил-1Н - піразол-3-аміну (1,86 г, 19 ммоль) і ОІРЕА (4 г, 32 ммоль) в ЕЮН (100 мл) перемішували при к.т. протягом 2 год. Реакційну суміш концентрували в умовах вакууму. Потім додавали воду (500 мл), реакційну суміш фільтрували, осад на фільтрі промивали 100 мл НО і сушили в умовах вакууму з отриманням етил-2-хлор-5-фтор-6-(5-метил-1 Н-піразол-З3-іл)аміно)піримідин-4- карбоксилату (3,8 г, виход 80 9б).
Отримання 6: трет-бутил-(1А, 35, 55)-3-((4-(етоксикарбоніл)-5-фтор-6-(5-метил-1 Н-піразол-
З-ілламіно)піримідин-2-іл)(метил)аміно)-9-азабіцикло(|3.3.1|нонан-9-карбоксилат
Вос нм
З
МАХ - -
Нм з о
Щ.
Е о 07»
Суміш етил-2-хлор-5-фтор-6-(5-метил-1Н-піразол-3-іл)яаміно)дпіримідин-4-карбоксилату (1,7 г, 5,684 ммоль), трет-бутил-(1НВ, 35, 55)-3-(метиламіно)-9-азабіцикло|3.3.1|нонан-9-карбоксилату (2,17 г, 8,527 ммоль) і ОІРЕА (1,47 г, 11,368 ммоль) в ОМ5О (50 мл) нагрівали до 1109С протягом 18 год. Реакційну суміш вливали у воду (200 мл), реакційну суміш фільтрували, осад на фільтрі промивали 200 мл НО і сушили в умовах вакууму з отриманням неочищеного трет- бутил-(1А, Зв, 55)-3-(4-(етоксикарбоніл)-5-фтор-6-(5-метил-1Н-піразол-3-іл)аміно)піримідин-2- ілуу метил)аміно)-9-азабіциклоЇ3.3.1|нонан-9-карбоксилату (3,5 г, неочищ.). (т/27): МАНІ" розрах. для Сг5На7ЕМ7О4 518,29 виявл. 518,2.
Отримання 7: трет-бутил-(1В, 35, 55)-3-(5-фтор-4-(гідроксиметил)-6-(5-метил-1 Н-піразол-3- іллуаміно)піримідин-2-іл)(метил)аміно)-9-азабіцикло|3.3.1|Інонан-9-карбоксилат
Вос нм
З
Мах - - нм - ь
Ще
Е он
Суміш трет-бутил-(1А8, 35, 55)-3-(4-(етоксикарбоніл)-5-фтор-6-(5-метил-1 Н-піразол-3- іллуаміно)піримідин-2-іл)у(метил)аміно)-9-азабіцикло|3.3.1|Інонан-9-карбоксилат (3,5 г, 7 ммоль),
Мавнаеа (2,1 г, 56 ммоль) і СасСіг (3,1 г, 28 ммоль) в суміші ЕЮН (50 мл) і ТНЕ (50 мл) перемішували протягом ночі при 25 "С. Реакційну суміш гасили додаванням МагСОз (водн.) (80 мл) і Н2гО (80 мл), водний шар екстрагували ЕТОАс (3х100 мл), об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, сушили над Ма»5Ох і концентрували в умовах вакууму. Залишок очищували методом препаративної НРІ С з отриманням трет-бутил-(18, 35, 55)-3-((5-фтор-4- (гідроксиметил)-6-(5-метил-1 Н-піразол-3-іл)аміно)піримідин-2-ілу(метил)аміно)-9- азабіцикло/3.3.1|нонан-9-карбоксилату (1,4 г, 44 95). (т/2): (МАНІ розрах. для СгзНаБЕМ?7Оз 476,28 виявл. 476,3.
Отримання 8: (2-((1А8, 35, 55)-9-азабіцикло|3.3.1|Інонан-3-ілууметил)аміно)-5-фтор-6-((5- метил-1Н-піразол-3-іл)аміно)піримідин-4-іл)уметанол
НМ г
МАХ нм З -
Ще
Е он
Розчин трет-бутил-(1А, З5, 55)-3-(5-фтор-4-(гідроксиметил)-6-((5-метил-1 Н-піразол-3- іллуаміно)піримідин-2-іл)у(метил)аміно)-9-азабіцикло|3.3.1|Інонан-9У-карбоксилату (1,4 г, 2,95 ммоль) в суміші НСі/діоксан (50 мл) перемішували при 25 "С протягом 4 год. Реакційну суміш фільтрували, осад на фільтрі промивали 100 мл Е(ОАс і сушили в умовах вакууму з отриманням (2-((1А, 35, 55)-9-азабіциклоЇ3.3.1|нонан-3-ілухуметил)аміно)-5-фтор-6-(5-метил-1 Н-піразол-3- іллуаміно)піримідин-4-ілуметанолу (1,4 г, 100 95). (т/2): (МАНІ розрах. для СівН27ЕМ7О 376,23 виявл. 376,2.
Отримання 9: (2-((18, 35, 55)-9-(етилсульфоніл)-9-азабіциклої|3.3.1|нонан-3- іл)ууметил)аміно)-5-фтор-6-(5-метил-1 Н-піразол-3-іл)аміно)піримідин-4-іл)уметанол о
М о-5 нм
З
М, - - нм - ь
Ще.
Е он (), (2-(18, Зв, 55)-9-азабіцикло|3.3.1|нонан-З3-іл(метил)аміно)-5-фтор-6-((5-метил-1 Н-піразол-3- іл)аміно)піримідин-4-іл)уметанол (95 мг, 0,253 ммоль) розчиняли в піридині (4,0 мл) і обробляли етансульфонілхлоридом (0,024 мл, 0,253 ммоль). Реакційну суміш перемішували протягом 2 годин, а потім концентрували в умовах вакууму. Неочищений залишок розчиняли в З мл суміші оцтова кислота/вода-1/1, фільтрували для видалення твердих частинок і очищували методом препаративної НРІ С (Адіїепі Оупатах 250х21,4 мм, 10 мкм, 15 мл/хв., 2-50 95 АСМ--0,05 90
ТЕА/АСМ) із застосуванням градієнта 2-50 95 АСМ у воді з 0,05 95 ТЕА). Чисті фракції збирали і ліофілізували з отриманням трифторацетату вказаної в заголовку сполуки (12,92 мг, вихід 8,8 95, чистота 99,9 Фо). (т/2): (М-АНІ" розрах. для СгоНзіЕМ7Оз5 468,22 виявл. 468.
Отримання 10: метил-2-хлор-6-(5-метил-1Н-піразол-3-іл)уаміно)піримідин-4-карбоксилат ни
З
М ни М СІ г
ЕМ
(о); 07
Суміш 5-метил-1Н-піразол-З-аміну (5,6 г, 58 ммоль), метил-2,б-дихлорпіримідин-4- карбоксилату (12,0 г, 58 ммоль) і СІРЕА (15,0 г, 116 ммоль) в ОМ5О (120 мл) перемішували при 25 "С протягом 12 годин. Додавали НгО (500 мл), тверду речовину, яка випала в осад, збирали шляхом фільтрування з отриманням вказаної в заголовку проміжної сполуки (15 г, 97 90) у вигляді жовтої твердої речовини. (іп/2): (МАНІ розрах. для СтоНіїСІМ5О» 268,05 виявл. 268,1.
Отримання 11: трет-бутил-(1А, З5, 55)-3-((4-(метоксикарбоніл)-6-(5-метил-1 Н-піразол-3- іллуаміно)піримідин-2-іл)(метил)аміно)-9-азабіцикло|3.3.1|Інонан-9-карбоксилат
Вос нм
З
МАХ - -
Нм з ко
Ще (в) 07
Суміш метил-2-хлор-6-(5-метил-1Н-піразол-3-іл)аміно)піримідин-4-карбоксилату (12,0 г, 45 ммоль), трет-бутил-(1В, 35, 55)-3-(метиламіно)-9-азабіцикло|3.3.1|нонан-9-карбоксилату (13,7 г, 54 ммоль) і ОІРЕА (12,0 г, 90 ммоль) в ММР (120 мл) перемішували при 1209 протягом 16 годин. Реакційну суміш вливали в НО (2000 мл), тверду речовину, яка випала в осад, збирали шляхом фільтрування з отриманням вказаної в заголовку проміжної сполуки (15 г, 68 905) у вигляді білої твердої речовини. (т/з2): МАНІ" розрах. для СгаНзвІМ7О4 486,28 виявл. 486,3.
Отримання 12: трет-бутил-(1А, 35, /55)-3-((4-карбамоїл-6-(5-метил-1Н-піразол-3- іллуаміно)піримідин-2-іл)(метил)аміно)-9-азабіцикло|3.3.1|Інонан-9-карбоксилат
Вос нм
З
МА - -
Нм з с
Ще. о Мн,
У герметизованій пробірці ємністю 100 мл до трет-бутил-(1А, 35, 55)-3-((4- (метоксикарбоніл)-6-(5-метил-1 Н-піразол-3-іл)іаміно)піримідин-2-іл)(метил)аміно)-9- азабіцикло/3.3.1|нонан-9-карбоксилату (3 порції по 2 г, 4,12 ммоль) додавали МНз/меон (З аліквоти по 60 мл), і перемішували реакційну суміш при 25 "С протягом 12 годин. Реакційну суміш концентрували в умовах вакууму з отриманням вказаної в заголовку проміжної сполуки (3,7 г, 64 95). (т/2): (МАНІ розрах. для СгзНа5МевОз 471,28 виявл. 471,3.
Отримання 13: 2-((1А8, Зв, 55)-9-азабіцикло/3.3.1|нонан-3-іл)ууметил)аміно)-6-(5-метил-1 Н- піразол-З-ілламіно)піримідин-4-карбоксамід
НМ сх
М
Нм з о
І в) Мн,
До суміші трет-бутил-(18, З5, 55)-3-(4-карбамоїл-6-((5-метил-1 Н-піразол-3- іллуаміно)піримідин-2-іл)у(метил)аміно)-9-азабіцикло|3.3.1|Інонан-9-карбоксилату (3,7 г, 7,9 ммоль) в діоксані (185 мл) додавали НсСі/діоксан (37 мл). Реакційну суміш перемішували при 256 протягом З годин. Методом ТІ С виявляли відсутність вихідної речовини. Розчинник видаляли, і промивали неочищений продукт сумішшю етилацетат/меон (100/1) з отриманням вказаної в заголовку проміжної сполуки у вигляді гідрохлориду (4,0 г, 95 в). (т/2): МАНІ" розрах. для
СівН2?7 МО 371,23 виявл. 371,1.
Отримання 14: 2-((18, 35, 55)-9-(етилсульфоніл)-9-азабіцикло|3.3.1|нонан-3- ілуу метил)аміно)-6-(5-метил-1 Н-піразол-З-іл)аміно)піримідин-4-карбоксамід (С-1) (в) о ит,
НМ ох
Мах, нм з ко
ЩІ в) Мн, 2-Ц1В, 35, 55)-9-азабіцикло/3.3.1|нонан-3-іл(метил)аміно)-6-((5-метил-1Н-піразол-3- іл)яаміно)дпіримідин-4-карбоксамід (40 мг, 0,108 ммоль) і СІРЕА (0,057 мл, 0,324 ммоль) розчиняли в ОМЕ (1,50 мл) і охолоджували до 0 "С. Додавали етансульфонілхлорид, реакційну суміш залишали нагріватися до кімнатної температури і перемішували протягом 72 годин.
Реакційну суміш концентрували в умовах вакууму, і очищували неочищений продукт методом обернено-фазової препаративної НРІ С (Адіїепї бупатах 250х21,4 мм, 10 мкм, 15 мл/хв., 2-70 95
АСМ-0,1 95 ТЕА/АСМ) з отриманням трифторацетату вказаної в заголовку сполуки (4,5 мг, 9,01 95). (т/2): ІМ-АНІ" розрах. для СгоНзіМгвОз5 463,22 виявл. 463,2.
Отримання 15: метил-2-хлор-6-(5-метил-1Н-піразол-3-іл)уаміно)піримідин-4-карбоксилат
Зо ни г
М ни М СІ г
ЕМ
(о); 07
Суміш 5-метил-1Н-піразол-З-аміну (5,6 г, 58 ммоль), метил-2,б-дихлорпіримідин-4- карбоксилату (12,0 г, 58 ммоль) і СІРЕА (15,0 г, 116 ммоль) в ОМ5О (120 мл) перемішували при 259С протягом 12 годин. Додавали НО (500 мл), і збирали тверду речовину, що випала в осад, шляхом фільтрування з отриманням вказаної в заголовку сполуки (15 г, 97 9Ув). (т/2): (МАНІ розрах. для СтіоНіїСІМ5О» 268,05 виявл. 268,1.
Отримання 16: трет-бутил-(1А, З5, 55)-3-((4-(метоксикарбоніл)-6-(5-метил-1 Н-піразол-3- іллуаміно)піримідин-2-іл)(метил)аміно)-8-азабіциклої|3.2.1|октан-8-карбоксилат
Вос нм ох
МАХ
Нм з ко
ЩІ
(в) 07
Суміш метил-2-хлор-6-(5-метил-1Н-піразол-3-іл)аміно)піримідин-4-карбоксилату (8,3 г, 31,0 ммоль), трет-бутил-(1А8, З5, 55)-3-(метиламіно)-8-азабіциклоЇ3.2.1|октан-8-карбоксилату (8,2 г, 34,1 ммоль) і ОІРЕА (10,8 мл, 62,0 ммоль) в ОМ5О (85 мл) перемішували при 1202С протягом 16 годин. Суміш вливали в 2 л води, енергійно перемішували, а потім фільтрували з отриманням вказаної в заголовку сполуки (11,1 г, 76 У). (т/2): ІМАНІ" розрах. для СгзіНзаМ7О4 472,27 виявл. 472,3.
Отримання 17: трет-бутил-(1А, 35, 55)-3-(4-(гідроксиметил)-6-(5-метил-1 Н-піразол-3- іллуаміно)піримідин-2-іл)(метил)аміно)-8-азабіциклої|3.2.1|октан-8-карбоксилат
Вос нм
ОХ
МАХ
Нм з о
Ще он
До суміші МаВна (8 г, 212 ммоль) в Меон (100 мл) при 0С додавали трет-бутил-(1В, З5, 55)-3-(4-(метоксикарбоніл)-6-((5-метил-1Н-піразол-3-іл)аміно)піримідин-2-ілу/метил)аміно)-8- азабіцикло/3.2.1|октан-8-карбоксилат (10 г, 21,2 ммоль) в ТНЕ (100 мл). Потім реакційну суміш нагрівали до температури сублімації протягом 1 год. Реакційну суміш гасили додаванням води (500 мл), і екстрагували суміш етилацетатом (3х200 мл). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином (1х100 мл), сушили над безводним Маг25О4 і концентрували в умовах вакууму. Неочищений залишок очищували методом флеш-хроматографії на силікагелі (петролейний ефір/етилацетат-4/1) з отриманням вказаної в заголовку сполуки (7 г, 68 95). (т/2): (МАНІ розрах. для СггНзаМ7Оз 444,27 виявл. 444,3.
Отримання 18: (2-((18, 35, 55)-8-азабіцикло/3.2.1|октан-3-ілууметил)аміно)-6-(5-метил-1 Н- піразол-З3-іл)ламіно)піримідин-4-іл)уметанол
НМ ох
МАХ
Нм з ко
Ще он
Суміш трет-бутил-(18, 35, 55)-3-((4-(гідроксиметил)-6-((5-метил-1 Н-піразол-3- іллуаміно)піримідин-2-іл)у(метил)аміно)-8-азабіцикло|3.2.1|октан-З-карбоксилату (6,5 г, 14,7 ммоль) в суміші НеСі/діоксан (100 мл) перемішували при к.т. протягом 1 год. Суміш концентрували в умовах вакууму з отриманням гідрохлориду вказаної в заголовку проміжної сполуки (4,8 г, 100 95). (птп/27): (МАНІ: розрах. для С17НовіМ7О 344,22 виявл. 344,1.
Отримання 19: 3-(18, З5, 55)-3-(4-(гідроксиметил)-6-(5-метил-1Н-піразол-З-іл)- аміно)піримідин-2-ілууметил)аміно)-8-азабіциклоїЇ3.2.1|октан-8-іл)пропаннітрил (С-2)
М
НМ ох
Мах нм б ьо
ЩІ он (2-((18, 35, 55)-8-азабіцикло|3.2 1|октан-3-іл)ух/метил)аміно)-6-(5-метил-1 Н-піразол-3- іл)уаміно)піримідин-4-іл)уметанол (50 мг, 0,146 ммоль) і ОІРЕА (0,076 мл, 0,437 ммоль) розчиняли в Меон (1,50 мл). Додавали акрилонітрил (0,014 мл, 0,218 ммоль), і перемішували реакційну суміш при кімнатній температурі протягом 90 хв. Потім реакційну суміш концентрували в умовах вакууму, і очищували неочищений залишок методом обернено-фазової препаративної НРІ С (Адіїепї Супатах 250х21,4 мм, 10 мкм, 15 мл/хв., 2-60 95 АСМ--0,1 96 ТЕА/АСМ) з отриманням трифторацетату вказаної в заголовку сполуки (14 мг, 19 95). (т/2): (МАНІ розрах. для СгоНгоМвО 397,25 виявл. 397,1.
Приклад 1: Порошкова рентгенівська дифрактометрія кристалічної Форми І
Рентгенівські порошкові дифрактограми, представлені на Фігурі 1, отримували за допомогою рентгенівського дифрактометра Вгикег О8-Адмапсе із застосуванням Си-Ка випромінювання (А-1,54051 А) з вихідною напругою 45 кВ і струмом 40 мА. Прилад працював в геометрії Брегга-
Брентано з падаючим пучком, що розходяться, і розсіюючими щілинами, встановленими для максимального збільшення інтенсивності на зразку. Для вимірювання невелику кількість
Зо порошку (5-25 мг) обережно ущільнювали на тримачі зразка для формування гладкої поверхні і піддавали впливу рентгенівського випромінювання. Зразки сканували в режимі 2909-29 зі значеннями 29 від 27 до 35" з розміром кроку 0,027 і швидкістю сканування 0,30" с на крок.
Збирання даних контролювали із застосуванням вимірювального програмного забезпечення
Вгикег рійтасб5ийе і аналізували за допомогою програмного забезпечення Чаде (версія 7.5.1).
Прилад калібрували із застосуванням корундового стандарту в межах ж0,02"7 від кута 28.
Спостережувані положення РХКО-піків 29 і а-відстаней для кристалічної Форми І представлені в
Таблиці 1.
Таблиця 1
Дані РХКО для кристалічної Форми І
Приклад 2: Аналіз Форми І
Диференційну скануючу калориметрію (050) проводили із застосуванням модуля ТА
Іпвіпитепів МодеІ О0-100 з контролером Тпегта! Апаїузі Дані збирали і аналізували із застосуванням програмного забезпечення ТА Іпвігитепіє ТПпегта! Апаїувзі5. Зразок кожної кристалічної форми ретельно зважували в закритій алюмінієвій чаші. Після 5-хвилинного періоду ізотермічного урівноважування при 5 "С зразок нагрівали із застосуванням лінійного градієнта нагрівання 10 "С/хв. від 07С до 300 "С. Характерна О5С-термограма кристалічної
Форми | представлена на Фігурі 2. На термограмі представлена ендотерма плавлення з початком приблизно при 248,5 "С і максимумом приблизно при 250,9 "С. При «40 "С і 4190 "С на ендотермі спостерігалися ознаки незначного передплавлення.
Термогравіметричний аналіз (ТА) проводили із застосуванням модуля ТА Іпзігитепів
Моде! 0-50 з високою роздільною здатністю. Дані збирали із застосуванням контролера ТА
Іпбігитепіє Тпепта! Апаїубі і аналізували із застосуванням програмного забезпечення ТА
Іпзігитепіє Опімегза! Апаїузіз. Зважений зразок вміщували на платинову чашу і сканували зі швидкістю нагрівання 10 "С від температури навколишнього середовища до 300 "С. У процесі застосування вагову і пічну камери продували потоком азоту. Характерна крива ТОА кристалічної Форми І згідно з даним винаходом представлена на Фігурі 3. Профіль ТОА виявляє втрату маси приблизно на 0,70 95 при 22 7"С-125 С при продуванні М» і розкладаня з вихідною температурою приблизно 250 "С.
Вимірювання динамічної сорбції вологи (0ОМ5) проводили із застосуванням мікровагів МТІ,
ЗИаА-100 5узіет (МТ! Согр., Ніаїеан, РІ 33016), які працюють при атмосферному тиску.
Використовували зважений зразок, і найменше з можливих значення вологості (близьке до 0 95
ЕН) спостерігалося на початку аналізу. Аналіз ОМ5 складався з вихідної стадії сушіння (0 95 АН) протягом 120 хв. із подальшими двома циклами сорбції і десорбції зі швидкістю сканування 5 95
КН/крок в діапазоні значень вологості від 5 96 КН до 90 95 КН. Вимірювання ОМ5 проводили ізотермічно при 25 "С. Характерна крива ОМ5 для Форми І! представлена на Фігурі 4. Загальне поглинання вологи в діапазоні від 5 до 90 956 КН становило 1,96 95. Аналіз Форми І по Карлу
Фішеру показав, що вона містить 1,6 95 мас./мас. води.
Отримання 20: Отримання Форми ЇЇ
У суміші 70 мл ЕН і 154 мл ТНЕ суспендували 28 г сполуки 2-6, а потім охолоджували до 5 "С. До цієї суспензії протягом 1 години додавали 82 мл ГГ іВНа (2,0 М в ТНЕ). Після додавання температуру підвищували до 10 "С, і перемішували протягом 2 годин, після чого не виявляли вихідну речовину методом НРІ С-аналізу. Потім реакційну суміш гасили додаванням суміші 16,8 г хлориду амонію, розчиненого в 77 мл води. Після нагрівання до 45 "С протягом З годин додавали 467 мл води. Після додавання 370 мл з цього об'єму води спостерігали формування кристалічної речовини. Після завершення додавання води завись витримували при 45" протягом 5 годин, а потім лінійно знижували до 15 "С протягом З годин. Після витримування зависі при 15 "С протягом 7,5 годин продукт фільтрували і промивали 140 мл ЕН, а потім двома змиваннями по 140 мл води. Тверду речовину сушили в умовах вакууму при 45 С із продуванням азотом протягом ночі з отриманням 22,6 г Форми І! (вихід 87 Фо, чистота 98,6 б). 21 г Форми ІІ сполуки (І) проміжного ступеня очищення, отриманої на попередній стадії, в 63 мл ОМ5О нагрівали до 90 "С. Протягом 40 хвилин додавали 420 мл п-РГгОН, підтримуючи температуру реакційної суміші вище 86 "С. У ході додавання останньої третини пРГОН спостерігали дуже дрібні променезаломлювальні кристали. Суміш перемішували протягом 4 годин при 92 7С. Суміш охолоджували до 20 "С протягом 8 годин і перемішували при 207 протягом ночі. Продукт фільтрували і промивали 52,5 мл пРГОН, а потім двічі 52,5 мл етанолу.
Тверду речовину сушили в умовах вакууму з продуванням азотом при 55 "С з отриманням 19,24 г Форми ІІ (вихід 92 Фо, чистота 99,6 б).
Зо Приклад 3: Порошкова рентгенівська дифрактометрія кристалічної Форми ЇЇ
Рентгенівські порошкові дифрактограми, представлені на Фігурі 5, отримували в тих же умовах, що й описані для Форми І. Спостережувані положення РХКО-піків 29 і а-відстаней для кристалічної Форми І представлені в наступній Таблиці.
Таблиця
Дані РХКО для кристалічної Форми ІІ пиши: пи а ГЕ я ПО Е ПОН ПО: Я: ЗО 71171259 | ...юрюрюр/ю34 | 7735768 | ....юЮюЮюЙ99 6щЖ
Продовження таблиці 12805 Ї777171717117129 771111 23740 | 66
Приклад 4: Аналіз Форми ЇЇ
Форму ІІ тестували в умовах, схожих з описаними для Форми І.
Характерна О5С-термограма кристалічної Форми ІІ представлена на Фігурі 6. Термограма характеризується піком ендотермічного теплового потоку, що ототожнюється з переходом у розплав, з максимумом ендотермічного теплового потоку при температурі 238,12Сж296.
Характерна крива ТОА кристалічної Форми ІІ згідно з даним винаходом представлена на
Фігурі 7. Профіль ТОА виявляє асоційовану з розкладаням втрату маси при температурі понад 22276.
Аналіз ОМ5 складався з вихідної стадії сушіння (0 95 КН) протягом 120 хв. з подальшими двома циклами сорбції і десорбції зі швидкістю сканування 5 95 КН/крок у діапазоні значень вологості від 595 КН до 9095 КН. Вимірювання ЮОМ5 проводили ізотермічно при 256.
Характерна крива ОМ5 для Форми ІІ представлена на Фігурі 8. Загальне поглинання вологи в діапазоні від 5 до 90 95 ЕН становило приблизно 0,02 95.
Приклад 5: Рентгенівська дифрактометрія монокристала Форми ІІ
Дані збирали на дифрактометрі Кідаки Охіога рійтасіоп Зирегпома Юша! боцгсе, Си аї 7его,
АМШЦаз ССО, оснащеному охолоджуючим пристроєм Охтога Сгуозузіет5 Собга. Дані збирали із застосуванням Си Ка випромінювання. Структуру розшифровували і допрацьовували із застосуванням пакету кристалографічного програмного забезпечення ВгиКег АХЗ ЗНЕЇ ХТІ. Всі подробиці можуть бути знайдені в СІБ. Якщо не вказано інше, то атоми водню, приєднані до атома вуглецю, розташовували геометрично і залишали для доопрацювання із запуском ізотропних параметрів переміщення. Атоми водню, приєднані до гетероатому, розташовували в різницевій карті Фур'є, залишали для вільного доопрацювання із застосуванням ізотропних параметрів переміщення.
Таблиця
Дані рентгенівського дифрактометричного аналізу монокристала Форми ІЇ нІ;6СНсссНИИИІИИИИИВВВЛОВВВВВВВВВВОВЛВОВО ЗЄС ЕТО ЗМИВ нІннИІТИТВВВВВВВВВВВВВВВ І ЕСЕ ОЗ ню; ши 11111111 в-ввв11сС1 ниюниннинше: жнншиншшшшшш -ї5«хпх15
Діапазон індексів -4-К 515 -18х1-518
Продовження таблиці
Кінцеві показники В (Р2 » 25ідта(Е2)
Біологічні методи аналізу
Метод аналізу 1: Біохімічний аналіз ЗАК і Тука2 кіназ
Панель з чотирьох біохімічних аналізів І апіпазсгееп ЧАК (ЗАКТ, 2, З і Тук2) проводили в звичайному буфері для кіназної реакції (520 мМ НЕРЕЗ, рН 7,5, 0,01 95 Вгі|Ї-35, 10 мМ Масіг і 1
ММ ЕСТА). Рекомбінантні з5Т-мічені ферменти УАК і СЕР-мічений пептидний субстрат ЗТАТ1 купували від І їїе Тесппоподіев5.
Серійно або роздільно розбавлені сполуки попередньо інкубували з кожним з чотирьох ферментів УАК і субстратом у білих 384-ямкових мікропланшетах (Согпіпд) при температурі навколишнього середовища протягом 1 години. Потім додавали АТФ для ініціювання кіназних реакцій в загальному об'ємі 10 мл з 1 95 ЮОМ5О. Кінцеві концентрації ферменту для ЗАКІ, 2, З і
Тук2 становили 4,2 НМ, 0,1 НМ, 1 нМ і 0,25 нМ, відповідно; відповідні використовувані концентрації Кт АТР становили 25 мкМ, З мкМ, 1,6 мкМ і 10 мкМ; тоді як концентрація субстрату становила 200 нМ для всіх чотирьох аналізів. Кіназні реакції залишали протікати протягом 1 години при температурі навколишнього середовища, після чого додавали 10 мкл отриманого розчину ЕЮТА (кінцева концентрація 10 мМ) і Тр-анти-р5ТАТІ (ртТуг/01) антитіло (І їе
Тесппоіодіє5, кінцева концентрація 2 нМ) в буфері для розбавлення для проведення ТКЕ-ЕНЕТ (іїе Тесппоіодіех). Планшети залишали інкубуватися при температурі навколишнього середовища протягом 1 години, після чого зчитували на зчитувальному пристрої Епмізіоп (Регкіп ЕІтег). Відношення сигналів випускання (520 нм/495 нм) реєстрували і використовували для розрахунку вираженого в процентах інгібування відносно контролю з ЮОМ5О і фонового контролю.
Для аналізу дозозалежної відповіді на графіку відкладали дані інгібування в процентах відносно концентрацій сполуки, і визначали значення ІСво з чотирипараметричної робастної моделі апроксимації із застосуванням програмного забезпечення Ргізт (СгарпРай Зоймаге).
Результати виражали у вигляді ріСво (негативний логарифм ІСво), а потім перетворювали до рКі (негативний логарифм константи дисоціації Кі) із застосуванням рівняння Ченга-Прусофа.
Таблиця 2
Значення рКі для сполуки (І) - 15154 оКкі рокі оКкі оКкі
І(Сполкайдї | 102 | 7102 | 9 | 98
Коо)
Метод аналізу 2: Клітинний аналіз активності відносно АК: Інгібування 1І--13-індукованого фосфорилування 5ТАТЄ в клітинах ВЕА5-2В
Клітинний аналіз інгібуючої активності відносно ЗАК проводили шляхом вимірювання індукованого інтерлейкіном-13 (1-13, КО БЗузіет5) фосфорилування 5ТАТб в епітеліальних клітинах легені людини ВЕА5-2В (АТСС). Анти-5ТАТб-антитіло (Сеї! бідпаійпуд Тесппоіодіе5) кон'югували з акцепторними гранулами АїІрпазЗсгеєп (РегКіп ЕІтег), тоді як анти-рОТАТб6 (ртугб41) антитіло (СеїЇ Зідпаїйпуд Тесппоіодіе5) біотинілювали із застосуванням Е2-ГіпК БийИПо-
МН5З-Віоїнп (Тпегто 5сіепійіс).
Клітини вирощували при 37 "С в кондиціонованому 5 95 СО» інкубаторі в середовищі 50 95
ОМЕМ/50 Фо Е-12 (Те ТесппоїІодієз), доповненому 10 95 ЕВ5 (Нусіопе), 100 Од/мл пеніциліну, 100 мкг/мл стрептоміцину (ГіїТе ТесппоЇодіев) і 2 мМ сСішамАХ (Гіїе Тесппоїодіе5). На 1-у доби аналізу клітини висівали з густиною 7500 клітин на ямку в покриті полі-ЮО-лізином білі 384-ямкові планшети (Согпіпду) 3 25 мкл середовища і залишали для прикріплення протягом ночі в інкубаторі. На 2-у добу аналізу середовище видаляли і замінювали 12 мл аналітичного буферу (збалансований сольовий розчин Хенка/НВЗ5, 25 ММ НЕРЕЗ і 1 мг/мл бичачого сироваткового альбуміну/ВЗА), що містить дозу тестованих сполук, що досліджується відносно відповіді.
Сполуки серійно розбавляли ОМ5О, а потім додатково 1000-кратно розбавляли середовищем до отримання кінцевої концентрації ОМ5О, що дорівнює 0,195. Клітини інкубували з тестованими сполуками при 37 "С протягом 1 год., з подальшим додаванням 12 мкл попереднього нагрітого 1-13 (80 нг/мл в аналітичному буфері) для стимуляції. Після інкубації при 37 "С протягом 30 хв. видаляли аналітичний буфер (що містить сполуку і ІІ-13) і додавали 10 мкл буферу для лізису клітин (25 мМ НЕРЕ5, 0,1 95 505, 1 95 МР-40, 5 мМ Масіг, 1,3 мМ
ЕОТА, 1 мм ЕСТА і доповнений коктейлем інгібіторів протеаз Сотрієїе ОКга тіпі і Рпо551Т7 ОР від
Коспе Оіадповійс5) Планшети струшували при температурі навколишнього середовища протягом 30 хв., після чого додавали реагенти для детекції. Спочатку додавали суміш біотин- анти-рЗТАТб і анти-ЗТАТб-кон'юЮгованих акцепторних гранул, і інкубували при температурі навколишнього середовища протягом 2 год., а потім додавали кон'юговані зі стрептавідином донорні гранули (РегкКіп ЕЇІтег). Після інкубації протягом 2 год. як мінімум, аналітичні планшети зчитували на пристрої для зчитування планшеті Епмізіоп. Реєстрували сигнали люмінесценції
АІрпазсгееп і використовували їх для розрахунку вираженого в процентах інгібування відносно контролю з ОМ5О і фонового контролю.
Для аналізу дозозалежної відповіді на графіку відкладали дані інгібування в процентах відносно концентрацій сполуки, і визначали значення ІСзо з чотирипараметричної робастної моделі апроксимації із застосуванням програмного забезпечення Ргізт. Результати також можуть бути виражені у вигляді негативного логарифму значення ІСво, рІСво. У даному методі аналізу значення ріСво для сполуки (І) становило 8,5.
Метод аналізу 3: Аналіз цитотоксичності
Люмінесцентний аналіз життєздатності/цитотоксичності клітин СейПТйетг-сіо проводили на епітеліальних клітинах легені людини ВЕА5-2В (АТСС) в умовах нормального росту.
Клітини вирощували при 37 "С в кондиціонованому 5 95 СО» інкубаторі в середовищі 50 95
ОМЕМ/50 Фо Е-12 (Те ТесппоїІодієз), доповненому 10 95 ЕВ5 (Нусіопе), 100 Од/мл пеніциліну, 100 мкг/мл стрептоміцину (Іїе Тесппоіодіеєб5) і 2 мМ сішамАХ (І їїе Тесппоїодіе5). На добу 1 аналізу клітини висівали з густиною 500 клітин/ямку в білі 384-ямкові культуральні планшети (Сопіпо) з 25 мкл середовища і залишали для прикріплення протягом ночі в інкубаторі. На добу 2 аналізу додавали 5 мкл середовища, що містить дозу тестованих сполук, що досліджується відносно відповіді, і інкубували при 37 "С протягом 48 годин. Потім додавали 30 мл розчину для детекції СеїПТйег-сіюо (Рготеда), змішували на орбітальному шейкері протягом 5 хвилин і інкубували ще протягом 10 хвилин, після чого зчитували на зчитувальному пристрої Епмівіоп.
Зо Реєстрували сигнали люмінесценції, і розраховували виражені в процентах відносно контролю з
ОМ5О значення.
Для аналізу дозозалежної відповіді на графіку відкладали виражені в процентах відносно контролю з ОМ5О значення відносно концентрацій сполуки з отриманням на графіку дозозалежних кривих після з'єднання лініями експериментальних точок. Концентрацію, при якій кожна крива перетинає поріг інгібування у 15 95, визначали як СС:і5. Результати виражали у вигляді негативного логарифму значення ССч5, рОС5.
Передбачається, що тестовані сполуки, що мають більш низьке значення роС:і5 в даному методі аналізу, будуть характеризуватися меншою імовірністю індукції цитотоксичності.
Значення росі» для сполуки (І) становило 5,36.
Метод аналізу 4: Аналіз Т5І Р-індукованого вивільнення ТАКС іп міго в РВМС людини
Зв'язування Т5І Р з його рецептором спричиняє конформаційну зміну, яку активують УАКІ і
ЧУАК2 для фосфорилування різних факторів транскрипції, включаючи 5ТАТЗ і ЗТАТЬ. В імунних клітинах, які постійно знаходяться в шкірі, це індукує каскад внутрішньоклітинних подій, які приводять до проліферації клітин, антиапоптозу, міграції дендритних клітин і продукції Тп2 цитокінів і хемокінів. Під час гострої фази атопічного дерматиту в шкіру проникають лімфоцити
Тп2. У первинних мононуклеарних клітинах периферичної крові (РВМС) Т5ІР надає прозапальну дію шляхом активації мієлоїдних дендритних клітин для залучення і стимуляції Т- клітин. Цей процес опосередкований хемокіном, регульованим тимусом і активацією (ТАКС/ССІ 17). ТАКС виявився перспективним клінічним біомаркером атопічного дерматиту, причому високий вміст у сироватці крові вказував на прискорений патогенез шкірного запалення.
У цьому методі аналізу було показано, що стимуляція Т5І Р індукує вивільнення ТАКС з
РВМС, ї що ця відповідь послаблюється залежно від дози при лікуванні сполукою (І). РВМС (раніше виділені з цільної крові і заморожені в аліквотах при -80"С) від З донорів розморожували, висівали і залишали при 37 "С на 1 годину. Клітини попередньо обробляли протягом 1 години серією 3,7-кратних розбавлень у діапазоні від 33,3 мкМ до 0,95 нМ сполуки (І). Потім клітини або стимулювали 10 нг/мл Т5ІР, або додавали еквівалентний об'єм середовища без добавок як фоновий контроль. Через 48 годин від клітин збирали супернатанти і вимірювали ТАКС із застосуванням набору для ЕГІЗА ОпцапійКкіпе для визначення ССІ 17/ТАКС
Гс10) людини.
Для аналізу дозозалежної відповіді на графіку відкладали дані інгібування в процентах відносно концентрацій сполуки, і визначали значення ІСзо з чотирипараметричної робастної моделі апроксимації із застосуванням програмного забезпечення СсСгарпРай Ргіхт. Результати також можуть бути виражені у вигляді негативного логарифму значення ІСво, ріСво. У даному методі аналізу значення ріСво для сполуки (І) становило 7,8.
Метод аналізу 5: Аналіз фармакокінетики на щурах
Метою даного дослідження було оцінити фармакокінетику сполуки (І) в плазмі крові після однократного перорального (РО, п-3) або внутрішньовенного (ІМ, п-2) введення самцям щурів
Зргадиє баулеу.
Трьом самцям щурів 5ргадие Юамліеу вводили однократну ІМ дозу сполуки (І) (1,0 мг/кг в 5 95
ДМСОч20 мМ цитратного буферу, рН 4) через катетер в яремній вені або однократну РО дозу 5 мг/кг через шлунковий зонд (5,0 мг/кг в 1 96 НРМС з 0,1 95 Тмееп 80). Через 0,25,0,5,1,2,4,61 24 години після введення дози, зразки крові відбирали через катетер в яремній вені в пробірки з
ЕОТА і підтримували охолодженими на льоду перед центрифугуванням (12000 об./хв., 4 хв., 4 "С). Аліквоти плазми переносили в касетні пробірки і зберігали в замороженому вигляді (- 80 "С) до проведення біоаналізу.
Зразки плазми перемішували струшуванням, після чого 50 мкл аліквоти зразка переносили в 9б-ямковий планшет і екстрагували 200 мкл ацетонітрилу, що містить внутрішній стандарт.
Після екстрагування зразки центрифугували протягом 10 хвилин при 3700 об./хв. (2809х9).
Супернатант переносили в новий 96-ямковий планшет, а потім розбавляли 0,2 95 мурашиною кислотою у воді (3З-кратне розбавлення). Для всіх зразків 10 мкл наносили на колонку Умаїеге
Хогідде (С18 30х2,1 мм) зі швидкістю потоку 0,80 мл/хв. Рухома фаза А складалася з 0,2 Фо мурашиної кислоти у воді, і рухома фаза В складалася з 0,295 мурашиної кислоти в ацетонітрилі. Значення вмісту сполуки (І) в плазмі крові визначали методом І СМ5/М5 аналізу.
Стандартні параметри фармакокінетики визначали із застосуванням Рпоепіх УміпМопіїп (Сепага
Іпс.).
Таблиця З
Параметри фармакокінетики 1111111 С1111111МмМамжу | 7 РОбмк)
МО, не визначено.
Метод аналізу 6: Фармакокінетика в шкірі міні-пігів Наптога
Зо Мета цього дослідження полягала в тому, щоб визначити фармакокінетику сполуки (І) в епідермісі, шкірі і плазмі крові після 24-годинного впливу на шкіру інтактних міні-пігів Наптога.
Сполуку (І) в кількості 0,5 95 (мас./мас.) включали до складу крему або мазі, описаних в Таблиці 4 як лікарська форма А і лікарська форма В, відповідно.
Таблиця 4
Лікарські форми сполуки (І) (крем) (мазь)
ВВІУЗ2(РЕС о стеариловийефір) | Т0895 | 77777711
ІВВІУЗ20(РЕСО20 стеариловийефір)| ба | .ьюЮКЙЮйл77777777777777777771 Її
Таблиця 4 (продовження) (крем) (мазь) оМ-метилпролідин. 77777771 Ї1ЛоЯ6 ЇЇ
РЕЄЯЮЮ ССС лов ї1 (Вода(очищ. зворот. осмос) | 55595 | 77777777 ЇЇ
За 24 години до введення дози зі спини міні-пігів Напіога масою 10-15 кг збривали волосся, оголяючи площу не менше 700 см? (близько 10 95 поверхні тіла). У нульовий момент часу на спину міні-пігів наносили сполуку (І) в дозі 25 мкл/см?. Шкіру покривали адгезивним покриттям для запобігання втраті сполуки в клітку або підстилку. Після 24-годинного впливу спини обережно промивали милом і водою для видалення неабсорбованого лікарського засобу і підсушували. Відразу після цього промивання за допомогою венопункції у міні-пігів відбирали кров. Потім шляхом різкого зняття липкої стрічки видаляли зовнішній шар шкіри (роговий шар).
Після впливу на епідерміс проводили щипкову 0,5 см біопсію. Епідерміс і дерму швидко відділяли, зважували і швидко заморожували. Подібні зразки відбирали через 94 години і через 168 годин (7 діб) після введення дози міні-пігам. Зразки епідермісу і дерми гомогенізували у воді в співвідношенні 1:10 (мас./об.) із застосуванням ультразвукового гомогенізатора Сомагів.
Зразки екстрагували З об'ємами ацетонітрилу і кількісно оцінювали відносно стандартної кривої методом І С-М5 аналізу. Як свідчать параметри фармакокінетики (Таблиця 5), в епідермісі і дермі сполука здійснювала значний вплив, тоді як вплив у плазмі крові був нижчим за межу кількісного визначення (0,001 мкг/мл), що вказує на дуже обмежене всмоктування сполуки в системний кровотік.
Таблиця 5
Параметри фармакокінетики, отримані для обох лікарських форм сполуки (І) 11111111 |ЛікарськаформаАй |ЛікарськаформаВ/б9/
Метод аналізу 7: Фармакодинамічний (РО) аналіз АК ех мімо із застосуванням свіжовирізаної шкіри людини
Фармакодинамічний (РО) аналіз УЗАК ех мімо проводили із застосуванням виділеної шкірної тканини людини. У РО аналізі використовували свіжовирізану шкіру людини (дерматом завтовшки 750 мкм), яку розміщували в статичних комірках Франца з площею поверхні «0,5 см.
Камеру-приймач комірок Франца заповнювали теплим (37 "С) середовищем для кератинізації і в інкубатор при 37 "С. На шкіру місцево наносили 10 мкл (418 мкл/см7) сполуки (І) або основи і залишали непорушною протягом ночі (24 години). На наступну добу, без повторної аплікації сполуки або основи, середовище замінювали ТпП1-спрямованим стимуляційним коктейлем, що складається з ТМЕа, ІЕМу ї 1-12. Шкіру залишали непорушною додатково протягом 16 годин, а потім брали для дослідження і проводили екстрагування ЕМА і ФдЗРСК біомаркерів: СХСІ 10,
ССІ2. Як внутрішній стандарт використовували ЗАРОН. Сполуку (І) включали до складу лікарської форми у вигляді мазі в кількості 0,5 96. Склад мазевої основи представлений в
Таблиці 6. Використовували суму від трьох донорів (обробки зразка тестували в чотирьох повторах). Ефект лікування розраховували як виражене в процентах збільшення або зниження стимуляції порівняно з групою з нанесенням основи.
Таблиця 6
Композиція мазевої основи
Результати РО аналізу ех мімо шкіри людини
Дані підсумовувані в Таблиці 7. Експресія гена СХСІ10, який кодує інтерферон-у- індукований білок 10 (ІР-10), інгібувалася сполукою (І) на 90,1 95 порівняно з контрольною групою з ТНІ/основою. Застосовно до гена ССІ2, який кодує моноцитарний хемоатрактантний білок 1 (МСОР-1), сполука (І) інгібувала відповідь на 61,3 95. Крім того, для обох лікарських форм високі концентрації сполуки виявляли в епідермальному і дермальному шарах шкіри.
Таблиця 7
Фармакодинамічний ефект і розподіл в епідермісі і дермі 0,5 95 лікарської форми сполуки (І) У вигляді мазі після приблизно 40 годин безперервного впливу на свіжовирізану шкіру людини
Сполука (І) середнєж5О)
Дані представлені у вигляді середнєхстанд. відхил., п-12 (З донори, 4 зразки на донора).
Метод аналізу 8: Аналіз проникності шкіри людини
Метою цього експерименту була оцінка черезшкірного всмоктування тестованих сполук через шкіру людини після місцевого нанесення. У моделі використовували вирізану шкіру людини, розташовану в спеціально сконструйованих дифузійних камерах (статичних або проточних), які дозволяють підтримувати шкіру при температурі і вологості, що відповідають реальним умовам застосування. Композицію наносили на поверхню шкіри, і вимірювали проникнення лікарського засобу шляхом моніторингу швидкості його появи в приймаючому розчині, що протікає під зразками шкіри. Ця система іп міго дозволяє точно регулювати багато можливих змінних, пов'язаних з місцевим нанесенням, таких як об'єми дозування, вологість, температура, стабільність лікарського засобу і товщина шкіри.
У цьому експерименті використовували проточну дифузійну комірку (Меагіих-НТТМ), що використовує ретельно спроектований проточний канал з невеликими об'ємами порожнин для оптимальних умов закладення, і було показано, що вона забезпечує локалізований зазор під отриманою на дерматомі шкірою для створення більш точних і детальних профілів потоку за допомогою автоматизованого збирання і оптимізованої флюїдики. Ця система була розроблена для мінімізації спеціальним чином ділянки дозування під час експериментів іп міїго, забезпечуючи тим самим більшу кількість повторень дозування в межах обмеженої площі поверхні шкіри людини ех мімо.
Зо Дифузійні комірки вміщували на опори, які підігрівають комірку, і нагрівали із застосуванням циркуляційний водяної бані для підтримання температури поверхні шкіри на рівні приблизно 32 С. Комірки підключали до багатоканальних перистальтичних насосів, і підтримували швидкість потоку приблизно 10 мкл/хв. (600 мкл/год.) для безперервного потоку приймальної рідини безпосередньо під шкірою. Після безперервного відбирання проб протягом 24 годин зразки аналізували на вміст тестованої сполуки методом І С-М5/М5 аналізу. Тестовану сполуку виявляли в приймальній рідині через 20-28 годин після нанесення тестованої лікарської форми у вигляді мазі (п-5). Мазь, що використовується, розкрита в методі аналізу 7. Приймальна рідина являла собою РВ5 з 0,1 95 Вії.
Таблиця 8
Потік сполуки (І), що проникає через 1 см? шкіри людини 11111111 Проникністьзгідноз МейРіших(нг/смеу.д /-/::/ З 111111011М11111111111Середнє// | ////// Стандовідхил./З
Сполука (І) (0,5 95 мазь)
Як представлено в Таблиці 8, сполука (І) виявляє адекватну проникність.
Метод аналізу 9: Аналіз ІІ -31-рРЗТАТЗ ДАК зв'язування з мішенню на мишах іп мімо
Для оцінки місцевого зв'язування з мішенню в шкірі мишей використовували модель 1--31- індукованої продукції фосфорилованого переносника сигналу і активатора транскрипції З (р5ТАТЗ) на мишах іп мімо.
Шлях передачі сигналів ЗУАК/5ТАТ (дапи5-кіназа/улереносник сигналу і активатор транскрипції) є ключовим елементом комунікації між клітинами імунної системи і активується, головним чином, через цитокінові рецептори. Зв'язування цитокіну 1--31 приводить до активації і фосфорилування тирозинкіназ ЧАК1/АК2, які, в свою чергу, приводять до фосфорилування
ЗТАТЗ (ро5ТАТЗ). Потім активований 5ТАТ переміщується в ядро і прямо регулює транскрипцію цитокін-чутливих генів. У даних дослідженнях мишам Ваїр/с вводили композицію сполуки (І) у вигляді мазі. Мазеву основу (Таблиця 9) або сполуку (І), приготовану в мазевій основі, наносили місцево на голену шкіру (25 мкл/см") за 30 хвилин до внутрішньошкірної ін'єкції (50 мкл на ділянку 1х1 см") ІЇ/-31 (1 мкг/мл) на голену ділянку шкіри 1х1 см? на спині між вухами. Через годину після введення 1-31 відбирали біоптати шкіри. Зразки тканини швидко заморожували і аналізували методом ЕГІЗА на вміст реТАТЗ і концентрацію сполуки. Сполука (І) інгібувала продукцію реТАТЗ на 80 95, а концентрація сполуки (І) в шкірній тканині становила 62 мкМ.
Таблиця 9
Композиція мазевої основи
Метод аналізу 10: Модель ТРА-індукованого гострого дерматиту на мишах іп мімо
Метою даного методу аналізу є оцінка протизапального ефекту сполуки (І) в моделі гострого дерматиту, який вивчають при шкірних запальних станах, таких як атопічний дерматит (Обопод еї а|., / Рпаптасої Ехр Тег, 2013, 344, 436).
Місцеве нанесення на шкіру складного форболового ефіру ТРА викликає запальну відповідь, яка характеризується набряком і міграцією нейтрофілів в ранній фазі (2-24 години) і проліферацією клітин епідермісу в пізній фазі (24-48 годин) (Сгінйн5 еї аї!., Адепі5 апа Асііопв, 1988, 25, 344-351). У даній моделі самицям мишей ВаїБр/с місцево на вухо наносили основу або
Зо ТРА (2,5 мкг) в дозі 20 мкл. Для приготування лікарської форми у вигляді розчину, основу (ОМ5О:ацетон 1:7) або тестовану сполуку наносили місцево за 30 хвилин до і через 15 хвилин після введення ТРА. Для лікарської форми у вигляді мазі основу або сполуку (І) (вміст 0,5 9) наносили за 30 хв. до ТРА. Склад мазевої основи наведений в Таблиці 10. Ступінь запалення оцінювали як зміну товщини вуха через 6 годин після нанесення ТРА.
Результати підсумовувані в Таблиці 11 ї 12. При дозованому нанесенні у вигляді розчину сполука (І) (3-1000 мкг на вухо) інгібувала ТРА-індуковане збільшення товщини вуха залежним від дози чином. Найвища протестована доза пригнічувала відповідь на ТРА на 54,8 95. При приготуванні мазевої лікарської форми з концентрацією 0,5 95 сполука (І) інгібувала відповідь на
ТРА на 34,9 95.
Таблиця 10
Композиція мазевої основи
Таблиця 11
Ефект місцевого нанесення лікарської форми сполуки (І) у вигляді розчину на ТРА-індуковане збільшення товщини вуха у мишей (мкг на вухо у вигляді розчину) (середнє інгібування (95)-5ЄЕМ (п))
Таблиця 12
Ефект місцевого нанесення лікарської форми сполуки (І) у вигляді мазі на ТРА-індуковане збільшення товщини вуха у мишей (20 мкг на вухо) (середнє інгібування (95)55ЕМ (п
Метод аналізу 11: Інгібування ІІ -2-стимульованого реТАТЬ в Т-клітинах ТаїЇІ-1
Здатність тестованих сполук інгібувати стимульоване інтерлейкіном-2 (ІІ -2) фосфорилування 5ТАТ5 вимірювали на лінії Т-клітин людини ТаїІ-1 (05М42) із застосуванням
АїІрпаї! іза. Оскільки 1ІІ-2 передає сигнали через УАК1/3, цей клітинний метод аналізу забезпечує вимірювання активності ЧАК1/3.
Фосфорилований 5ТАТ5 вимірювали за допомогою набору АїІрпа/ ІЗА ЗигерБіге Ойга реТАТ5 (Тугб94/699) (РегкіпЕЇІтег).
Лінію Т-клітин людини ТаїІ-1 культивували при 37 "С в кондиціонованому 5 95 СО» інкубаторі в КРМІ (Се ТесппоЇІодіе5) з додаванням 15 95 інактивованої нагріванням фетальної бичачої сироватки (ЕВ5, І Ше Тесппоодіеб5), 2 мМ Сішатах (Іїе Тесппоодіе5), 25 мМ НЕРЕБЗ (іїе
Тесппоодіе5) і їх пеніциліну/стрептоміцину (Ге Технології). Сполуки серійно розбавляли рМ5О і дозували акустичним способом по порожнім ямкам. Середовище для аналізу (ОМЕМ без фенолового червоного (Іїе Тесппоіодіе5), доповнене 1095 ЕВ5 (АТСС)) дозували (4 л/ямку), і перемішували планшети струшуванням при 900 об./хв. протягом 10 хвилин. Клітини висівали в кількості 45000 клітин на ямку в аналітичне середовище (4 мкл на ямку) і інкубували при 37 "С, 595 СО» протягом 1 години з подальшим додаванням 1-2 (50 Зувіетв5; кінцева концентрація 300 нг/мл) в попередньо нагрітому аналітичному середовищі (4 мкл) протягом 30 хвилин. Після стимуляції цитокінами клітини лізували б мкл Зх буферного розчину для лізису
АІрпагіза (РегкіпЕІтег), що містить їх таблетки РіПо55іор і Сотрієїе (Коспе). Лізат перемішували струшуванням при 900 об./хв. протягом 10 хвилин при кімнатній температурі (кт). Фосфорилований 5ТАТ5 вимірювали за допомогою набору ретТАТ5 АїЇрпПаї іза (РегкіпЕЇІтег). Свіжоприготовану суміш акцепторних гранул вносили в лізат (5 мкл) при впливі світла «100 люкс, яке пройшло через зелений світлофільтр. Планшети перемішували струшуванням при 900 об./хв. протягом 2 хвилин, швидко осаджували центрифугуванням і інкубували протягом 2 годин при кімнатній температурі в темряві. Донорні гранули (5 мкл)
Зо вносили при впливі світла «100 люкс, яке пройшло через зелений світлофільтр. Планшети перемішували струшуванням при 900 об./хв. протягом 2 хвилин, швидко осаджували центрифугуванням і інкубували протягом ночі при кімнатній температурі в темряві.
Люмінесценцію вимірювали при збудженні при 689 нм і випусканні при 570 нм із застосуванням пристрою для зчитування планшета Епмізіоп (РегКіпЕІтег) при впливі світла «100 люкс, що пройшло через зелений світлофільтр.
Для визначення інгібуючої активності тестованих сполук у відповідь на ІЇ-2 на лінії Т-клітин людини вимірювали середню інтенсивність випромінювання гранул, пов'язаних з ротТАТЬ.
Значення ІСво визначали з аналізу кривих інгібування інтенсивності сигналу залежно відносно концентрації сполуки. Дані виражали у вигляді значень ріСзхо (негативний десятерний логарифм
ІСво) (середнє значення х стандартне відхилення). У даному методі аналізу значення ріСзхо для сполуки (І) становило 8,4.
Метод аналізу 12: Інгібування ІІ -12-індукованого фосфорилування 5ТАТА в СОЗ-- Т-клітинах людини
Цей клітинний метод аналізу інгібування ЗАК проводили шляхом вимірювання індукованого інтерлейкіном-12 (11-12, КО Бувзіет5) фосфорилування 5ТАТ4 в СОЗ- Т-клітинах людини.
Антитіло до СОЗ (Весіоп ОісКіпзоп (ВО) Віозсіепсе5) кон'югували з К-фікоеритрином (К-РЕ).
Антитіло до роТАТА (ртТугб41, ВО Віозсіепсез) кон'югували з АЇеха Ріног 647.
Мононуклеарні клітини периферичної крові людини культивували при 37"С в кондиціонованому 5 95 СО:5 інкубаторі в середовищі ЕРМІ (І їе Тесппоіодіез5) з додаванням 10 95
ЕВ (Се Тесппоїодіеє5), 100 Од/мл пеніциліну, 100 мкг/мл стрептоміцину (І їе Тесппоїодіе5) 2
ММ сішамАХ (Гіїте Тесппоїіодіе5), зв'язаного з планшетом анти-СОЗ антитіла (5 мкг/мл, ОСНТІ1,
ВО Віозсієпсев) і розчинного анти-СО28 антитіла (1 мкг/мл, СО28.2, ВО Віозсіепсез) протягом З діб. Потім клітини ресуспендували в середовищі КРМІ (І їе Тесппоіодіе5) з додаванням 10 95
ЕВ (Сте ТесппоїІодіє5), 100 Од/мл пеніциліну, 100 мкг/мл стрептоміцину (Гіїте Тесппоіодіев5), 2
ММ сСішамАХ (Пе ТесппоїІодіе5) і 10 нг/мл інтерлейкіну-2 (1-2, КО Зуз(етв) додатково протягом З діб. У день проведення аналізу клітини промивали аналітичним буфером (ЕРМІ з додаванням 0,1 95 бичачого сироваткового альбуміну (ВЗА, Зідта), 100 Од/мл пеніциліну, 100 мкг/мл стрептоміцину (І їе Тесппоїіодіев5) і 2 мм сСішамАХ (Се Тесппоодіє5)) і ресуспендували до 1,25х105 клітин на мл в аналітичному буфері. Клітини висівали в кількості 250000 клітин в 100 мкл на ямку в поліпропіленовий 96-ямковий глибокий круглодонний планшет (Согпіпо) і залишали для культивування протягом 1 години. Середовище видаляли і замінювали 50 мкл
Зо аналітичного буферу, що містить дозе-гезроп5зе5 тестованих сполук. Сполуку готували у вигляді 10 мМ маточних розчинів в ЮМ5О. Виконували серійні розбавлення з отриманням 11 концентрацій тестованої сполуки в 100 55 ЮМ5О, 1000-кратних відносно кінцевої тестованої концентрації. Їх розбавляли в 25 разів, а потім в 20 разів аналітичним середовищем з отриманням концентрацій в 0,2 55 ЮМ50О, 2-кратних відносно кінцевої тестованої концентрації.
Клітини інкубували з тестованими сполуками при 37 "С протягом 1 години з подальшим додаванням 50 мкл попередньо нагрітого аналітичного буфера, що містить ІІ. -12 (20 нг/мл, КО
Зузіетв5). Кінцева концентрація 1-12 становила 10 нг/мл. Після інкубації при 37 "С протягом 30 хвилин клітини фіксували 100 мкл попередньо нагрітого буферу Суоїїх (ВО Віозсіепсев) і інкубували протягом 10 хвилин при 37 "С. Потім клітини центрифугували протягом 5 хвилин при 322х9, супернатант відкидали, і промивали клітини 500 мкл забарвлювального буфера (1 95
ВЗА в фосфатно-сольовому буфері (РВ5)). Потім клітини центрифугували протягом 5 хвилин при 322х9, супернатант відкидали, і інкубували клітини протягом 30 хвилин на льоду з 500 мкл попередньо охолодженого буфера Регпт ПП (ВО Віозсіепсе5) для пермеабілізації клітин. Потім клітини центрифугували протягом 5 хвилин при 322х9, супернатант відкидали, промивали 1 мл забарвлювального буферу, ще раз центрифугували, і ресуспендували кінцевий клітинний осад в 100 мкл забарвлювального буферу, що містить анти-СОЗ антитіло з К-РЕ (розбавлення 1:10) і анти-5ТАТА антитіло з АІехагРіцог 647 (розбавлення 1:50) для забарвлення клітинної поверхні і внутрішньоклітинних маркерів. Клітини інкубували протягом 45 хвилин при кімнатній температурі в темряві. Після забарвлення антитілами клітини центрифугували протягом 5 хвилин при 322х9, супернатант відкидали, і промивали клітини 500 мкл забарвлювального буфера. Клітини промивали ще один раз, після чого вміст ямки переносили з аналітичного планшета з глибокою ямку в 96-ямковий поліпропіленовий планшет з О-подібним дном в 200 мкл забарвлювального буферу для проточного цитометричного аналізу. Для аналізу дозозалежної відповіді на графіку відкладали середні значення інтенсивності флуоресценції відносно концентрацій сполуки, і визначали значення ІСзо з чотирипараметричної робастної моделі апроксимації із застосуванням програмного забезпечення Ргізт. У даному методі аналізу значення ріСво для сполуки (І) становило 7,2.
Метод аналізу 13: Інгібування І. -13-стимульованого фосфорилування роеТАТЄ в нормальних епідермальних кератиноцитах людини бо Здатність тестованих сполук інгібувати стимульоване інтерлейкіном-13 (І/-13)
фосфорилування ЗТАТб вимірювали на нормальних епідермальних кератиноцитах людини (АТСС) із застосуванням АїЇріаї іза. Фосфорилований 5ТАТб вимірювали за допомогою набору
АІрна! ІЗА 5!йгеРіге Опга ретТАТВ (Тугб41) (РегкіпЕЇІ тег).
Первинні епідермальні кератиноцити вирощували при 37 "С в кондиціонованому 5 95 СО» інкубаторі в мінімальному середовищі для клітин дерми (АТСС), доповненому набором для росту кератиноцитів (АТСС) і їх пеніциліном/стрептоміцином (Гїе Тесппоїіодіеєб5). Клітини висівали з густиною 20000 клітин на ямку в покриті полі-Ю-лізином білі 384-ямкові планшети (Сотіпо) з 50 мкл середовища і інкубували при 37 "С, 5595 СО» протягом ночі. На 2-у добу аналізу середовище видаляли і замінювали 15 мл середовища, що містить дозе-тезропзев5 тестованих сполук. Сполуки серійно розбавляли ЮОМ5О, а потім додатково 1000-кратно розбавляли середовищем до отримання кінцевої концентрації ОМ5О, що дорівнює 0,1 95.
Клітини інкубували з тестованими сполуками при 37 "С протягом 1 год., а потім додавали 1-13 (КО Зуз(етв; кінцева концентрація 50 нг/мл) в попередньо нагрітому аналітичному середовищі (5 мкл) протягом 30 хв.
Після стимуляції цитокіном клітини лізували 5 мкл 5х буфера АІрпаї іза (РегкіпЕІтег), що містить їх таблетки Рпоз5іор і Сотрієїе (Коспе). Лізат перемішували струшуванням при 900 об/хв. протягом 10 хвилин при кімнатній температурі (к.т.). Фосфорилований 5ТАТб6 вимірювали за допомогою набору роТАТб АЇрпаї іза (РегкіпЕІтег). Свіжоприготовану суміш акцепторних гранул вносили в лізат (10 мкл) при впливі світла «100 люкс, яке пройшло через зелений світлофільтр. Планшети перемішували струшуванням при 900 об./хв. протягом 2 хвилин, швидко осаджували центрифугуванням і інкубували протягом 2 годин при к.т. у темряві. Донорні гранули (10 мкл) вносили при впливі світла «100 люкс, яке пройшло через зелений світлофільтр. Планшети перемішували струшуванням при 900 об/хв. протягом 2 хвилин, швидко осаджували центрифугуванням і інкубували протягом ночі при к.т. у темряві. Люмінесценцію вимірювали при збудженні при 689 нм і випусканні при 570 нм із застосуванням пристрою для зчитування планшета Епмізіоп (РегКіпЕІтег) при впливі світла «100 люкс, яке пройшло через зелений світлофільтр.
Реєстрували значення люмінесценції, і використовували їх для розрахунку значень вираженого в процентах інгібування відносно ЮОМ5О і контролів. Для аналізу дозозалежної
Зо відповіді на графіку відкладали дані вираженого в процентах інгібування відносно концентрацій сполуки, і визначали значення ІСво з чотирипараметричної робастної моделі апроксимації із застосуванням програмного забезпечення Ргіз:т. У даному методі аналізу значення ріСво для сполуки (І) становило 8,3.
Метод аналізу 14: Інгібування І -22-стимульованого фосфорилування роТАТЗ в нормальних епідермальних кератиноцитах людини
Здатність тестованих сполук інгібувати стимульоване інтерлейкіном-22 (ІІ-22) фосфорилування ЗТАТЗ вимірювали на нормальних епідермальних кератиноцитах людини (АТСС) із застосуванням АїЇріаї іза. Фосфорилований 5ТАТЗ вимірювали за допомогою набору
АІрнагІЗА БигеРіге Ойга ретТАТЗ (Туг705) (РегкіпЕІ тег).
Первинні епідермальні кератиноцити вирощували при 37 "С в кондиціонованому 5 95 СО» інкубаторі в мінімальному середовищі для клітин дерми (АТСС), доповненому набором для росту кератиноцитів (АТСС) і їх пеніциліном/стрептоміцином (Гїе Тесппоїіодіеєб5). Клітини висівали з густиною 20000 клітин на ямку в покриті полі-Ю-лізином білі 384-ямкові планшети (Сотіпо) з 50 мкл середовища і інкубували при 37 "С, 5595 СО» протягом ночі. На 2-у добу аналізу середовище видаляли і замінювали 15 мл середовища, що містить дозу тестованих сполук, що досліджується відносно відповіді. Сполуки серійно розбавляли ЮОМ5О, а потім додатково 1000-кратно розбавляли середовищем до отримання кінцевої концентрації ОМ5О, що дорівнює 0,1 95. Клітини інкубували з тестованими сполуками при 37 "С протягом 1 год., а потім додавали 1-22 (К5О Зузіетв5; кінцева концентрація 50 нг/мл) в попередньо нагрітому аналітичному середовищі (5 мкл) протягом 30 хв.
Після стимуляції цитокіном клітини лізували 5 мкл 5х буфера АїЇрпаї іза (РегкіпЕЇІтег), що містить їх таблетки Рпоз5іор і Сотрієїе (Коспе). Лізат перемішували струшуванням при 900 об/хв. протягом 10 хвилин при кімнатній температурі (к.т.). Фосфорилований 5ТАТЗ вимірювали за допомогою набору роТАТЗ АЇрпаї іза (РегкіпЕІтег). Свіжоприготовану суміш акцепторних гранул вносили в лізат (10 мкл) при впливі світла «100 люкс, яке пройшло через зелений світлофільтр. Планшети перемішували струшуванням при 900 об./хв. протягом 2 хвилин, швидко осаджували центрифугуванням і інкубували протягом 2 годин при к.т. у темряві. Донорні гранули (10 мкл) вносили при впливі світла «100 люкс, яке пройшло через зелений світлофільтр. Планшети перемішували струшуванням при 900 об./хв. протягом 2 хвилин, бо швидко осаджували центрифугуванням і інкубували протягом ночі при кт. у темряві.
Люмінесценцію вимірювали при збудженні при 689 нм і випусканні при 570 нм із застосуванням пристрою для зчитування планшета Епмізіоп (РегКіпЕІтег) при впливі світла «100 люкс, яке пройшло через зелений світлофільтр.
Реєстрували значення люмінесценції, і використовували їх для розрахунку значень вираженого в процентах інгібування відносно ЮОМ5О і контролів. Для аналізу дозозалежної відповіді на графіку відкладали дані вираженого в процентах інгібування відносно концентрацій сполуки, і визначали значення ІСво з чотирипараметричної робастної моделі апроксимації із застосуванням програмного забезпечення Ргізт. У даному методі аналізу значення ріСзо для сполуки (І) становило 8,4.
Метод аналізу 15: Відновлення ІІ -22-супресованого філагрину в нормальних епідермальних кератиноцитах людини
Відомо, що 1-22 інгібує експресію генів кінцевого диференціювання, таких як ген філагрину.
Ступінь відновлення тестованою сполукою супресованої інтерлейкіном-22 (ІІ-22) експресії гена філагрину вимірювали в нормальних епідермальних кератиноцитах людини (АТСС) із застосуванням методу ПЛР в реальному часі.
Первинні епідермальні кератиноцити культивували при 37 "С в кондиціонованому 5 95 СО» інкубаторі в мінімальному середовищі для клітин дерми (АТСС), доповненому набором для росту кератиноцитів (АТСС) і їх пеніциліном/стрептоміцином (Ше Тесппоіодіе5). Клітини висівали з густиною 5000 клітин на ямку в 96-ямкові планшети ВіоСаоаї (Согпіпод) в об'ємі 100 мкл і інкубували при 37 "С, 5 95 СО» протягом 3-4 днів до конфлюентності 100 95. Потім середовище видаляли і замінювали 150 мкл середовища, що містить дозу тестованих сполук, що досліджується відносно відповіді. Сполуки серійно розбавляли ОМ5О, а потім додатково 1000- кратно розбавляли середовищем до отримання кінцевої концентрації ОМ5О, що дорівнює 0,1 95. На 1-у добу аналізу клітини інкубували з тестованими сполуками при 37 "С протягом 1 години, після чого додавали 1-22 (КО Зузіетв; кінцева концентрація 50 нг/мл) в попередньо нагрітому середовищі (50 мкл) протягом 4 днів. Середовище з тестованими сполуками і 1-22 міняли один раз на 3-ю добу. На 5-у добу клітини промивали їх РВ5 (бірсо) і лізували за допомогою 50 мкл лізуючого буферу, що містить 0,5 мкл ДНКази І з набору ТадМап? Сепе
Ехргезвіоп Сеїйв5-ю-СІМ (ІШе Тесппоіодіе5). Після інкубації при кімнатній температурі (к.т.)
Зо протягом 5 хвилин додавали 5 мкл стоп-розчину з набору, а потім інкубували при к.т. протягом 2 хвилин. Змішували 11,25 мкл лізату, 12,5 мкл 2х буферу КТ і 1,25 мкл 20х ЕТ суміші ферментів із набору. Реакцію зворотної транскрипції проводили шляхом інкубування суміші при 37 "С протягом 60 хвилин, а потім при 95 "С протягом 5 хвилин для отримання кКкДНК. Для формування коктейлю для ПЛР кожна реакційна суміш містила 10 мкл 2х ТадМапФб Сепе Ехргеззіоп Маїег
Міх, 1 мкл 2х ТадмМмапфФ Рійаддгіп бепе Ехргеззіоп Аззау (Ше Тесппоіодіе5), 1 мкл 2х ТааМапе
ОВС Сепе Ехргеззіоп Авзау (І Ше Тесппоіодіеє5), 4 мкл води без нуклеазної активності і 4 мкл
КДНК. Реакцію ПЛР проводили на 5іерОпеРіи5"М (Ше ТесппоЇодіебє) з циклічними умовами: 50 С протягом 2 хвилин, 95 "С протягом 10 хвилин, потім 40 циклів при 95"7С протягом 15 секунд і 60 "С протягом 1 хвилини. Після кожного циклу реєстрували сигнали флуоресценції.
Порівняльний метод Ст використовували для кількісної оцінки експресії генів у клітинах без ЇЇ - 22 і тестованих сполук як фонового контролю.
Відновлення сполуки (І) для супресованої інтерлейкіном-22 (ІІ -22) експресії гена філагрину спостерігали при концентрації «1 мкМ.
Метод аналізу 16: Аналіз проникності клітин Сасо-2
Аналіз проникності клітин Сасо-2 використовували як показник проникності шкіри. У даному методі аналізу вимірюється швидкість, з якою тестовані сполуки в розчині проникають у клітинний моношар (сконструйований для імітації щільного з'єднання моношарів тонкого кишечнику людини). 24-ямкові трансвел-планшети СасоКеаду купували від АОМЕсеї! (АІатеда, СА). Сполуки оцінювали при концентрації 5 мкл, отриманій з 10 мМ маточних розчинів в ОМ5О, у двох повторах (п-2). Пасивну проникність тестованих сполук оцінювали із застосуванням моношарів клітин Сасо-2 разом з верапамілом (25 мкл) для інгібування транспортних білків Р-др в напрямку від апікального до базолатерального (А-В). Експеримент проводили в інкубаторі при 37"С, 595 СО». Середовище для культивування Сасо-2 складалося зі стандартного відфільтрованого середовища ОМЕМ, 10 95 ЕС5, 1 95 І -глутаміну і 1 95 Репбїгер. Планшет для аналізу фону отримували шляхом додавання 750 мкл транспортного буферу в ямку А-В.
Планшет СасоКеаду отримували шляхом видалення середовища Сасо-2 з апікальних ямок і заміни його свіжим транспортним середовищем (повтор З промивань 200 мкл). Потім середовище холостої проби (200 мкл) замінювали розбавленою сполукою для ямку А-В. Для бо початку інкубації планшет для аналізу фону виймали з інкубатора, і додавали апікальну секцію зверху неї. Зразки (40 мкл) відбирали з апікального і базального відділів на нульовий момент часу (Ю). Зразки знову збирали через 120 хвилин (1120) з апікального і базального відділів. Всі зразки розбавляли і готували для біоаналізу методом ІС-М5/М5 аналізу. Коефіцієнт проникності (Кр, середнє значення від А до В'Рагараєт верапамілу) у см/с розраховували як дО (потік)/(а4ї х площа х концентрація).
У даному методі аналізі передбачається, що сполука зі значенням Кр приблизно менше 5х105 см/сек. має низьку проникність. Передбачається, що сполука зі значенням Кр приблизно більше 20х105 см/с має високу проникність.
Метод аналізу 17: Аналіз на мікросомах печінки людини
Мета даного аналізу полягала в оцінці метаболічної стабільності тестованих сполук у субфракції печінки людини іп міго. Мікросоми печінки людини, придбані від Віогесіатайіоп-ІМТ (Вакітоге, МО), розморожували на льоду і розбавляли 0,1 М калій-фосфатним буфером рн 7,4 для отримання кінцевих інкубаційних концентрацій білка 0,1 мг/мл. Випробовувані сполуки (10
ММ) розбавляли в кофакторі МАОРН з отриманням кінцевих інкубаційних концентрацій 0,1 мкМ для тестованої сполуки і 17 мМ для МАОРН. Інкубацію проводили при температурі 37 "С, і відбирали аліквоти для випробувань у моменти часу 0, 5, 8, 15, 30 і 45 хвилин. Кожну аліквоту додавали у воду з З 96 мурашиною кислотою і 1 мкМ внутрішнім стандартом. Отримані зразки вводили в ЇЇ С-М5/М5 систему для аналізу.
Для кожної інкубації площу піку аналітів у кожній аліквоті (0 приймали за 100 95, а площі піків аліквот у подальші моменти часу перетворювали у виражений в процентах вміст вихідної сполуки, що залишилася, відносно 10. Виражений в процентах вміст вихідної сполуки, що залишилося, перетворювали в натуральний логарифмічний масштаб і відкладали на графіку відносно часу в хвилинах. Проводили лінійний регресійний аналіз для оцінки вихідного нахилу профілю витрачання вихідної речовини і визначення формули для лінії найкращої відповідності.
Нахил отриманої лінії нормували до концентрації білка в мг/мл або кількості клітин/мл, і розраховували СІ для мікросом печінки таким чином:
СІ (мклохв.7 «мг )-(нахил х 1000)/ (білок, мг/млі
Значення Сі п від 0 до 8 мкл/хв./мг характеризують низький кліренс (тобто «30 95 кровотоку печінки людини). Значення Сі т від 9 до 49 мкл/хв./мг характеризують помірний кліренс (тобто
Зо 30-70 906 кровотоку печінки людини), і значення »50 мкл/хв./мг характеризують високий кліренс (тобто »70 95 кровотоку печінки людини).
Охарактеризація сполуки (І) і сполук порівняння
Таблиця 13
Охарактеризація сполук порівняння
Сполука Сасоуегар Кр НІМ Сі о
А / о-5
НМ
Ф
Мох (І) 42,3 136 нм вро
Ти
Е он
Таблиця 13 (продовження)
Сполука Сасо Кк НІМ СІ, у Структура сиегар р іп
Ей 105 см/с мкл/хв./мМг (в) (в) нм
ФВ
Мах б-1 3,55 нм М М
З а
М
(в) МН.
ЇЇ нм
ФА б-2 КК 5,5 12 нм М М
З Зк
М он
Сполуки порівняння С-1 ії С-2 розкриті заявником в кількох презентаціях, зроблених на конференціях у квітні, червні і серпні 2017 року.
Сполука (І) характеризується значно більш високою проникністю (значення Сасомуегар) і кліренсом у мікросомах печінки людини (значення НІМ Сіл), ніж С-1 ії С-2. Більш високий кліренс є сприятливим для прискорення системного кліренсу і попередження системного впливу, що може бути асоційовано з побічними ефектами. Більш висока проникність є сприятливою при показаннях до застосування на шкірі, оскільки вона, ймовірно, забезпечує краще проникнення в шкіру.
Хоча даний винахід був описаний з посиланням на його конкретні аспекти або варіанти здійснення, фахівцям у даній галузі техніки потрібно розуміти, що без відступу від суті й обсягу даного винаходу можуть бути внесені різні зміни або проведені заміни еквівалентів. Крім того, у випадках, встановлених чинними патентними законами і регулюючими документами, всі публікації, патенти і патентні заявки, процитовані в цьому документі, включені у всій своїй повноті в цей документ за допомогою посилання в однаковій мірі, як якби кожний документ був індивідуально включений в цей документ за допомогою посилання.

Claims (47)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Сполука формули (1): (о); М о-5 нм іх ек Нм з ко ще Е або її фармацевтично прийнятна сіль.
2. Сполука формули (1): о М о-5 Н / у ! ї М Нм з ко ще.
Е
3. Кристалічна форма сполуки формули (1): о М о-5 Н / у ! ї МАХ Нм - ко ще Е що (), де кристалічна форма характеризується порошковою рентгенівською дифрактограмою, що містить дифракційні піки при значеннях 26, які дорівнюють 11,450,2, 16,220,2, 16,6:0,2, 17,7-50,2 і 21,9-0,2.
4. Кристалічна форма за п. З, де порошкова рентгенівська дифрактограма додатково характеризується вмістом додаткових дифракційних піків при значеннях 28, що дорівнюють
8,920,2, 9,5:30,2 і 10,250,2.
5. Кристалічна форма за п. 4, де порошкова рентгенівська дифрактограма додатково характеризується вмістом двох або більше додаткових дифракційних піків при значеннях 28, вибраних з 14,4:5.0,2, 19,0-0,2, 19,2:0,2, 19,68:20,2, 20,1:30,2, 20,450,2, 20,650,2, 20,8:0,2, 21,350,2, 25,9:50,2, 30,1250,2, 30,5:20,2, 30,90,2, 32,6:0,2 і 33,8:0 2.
б. Кристалічна форма за п. 3, де кристалічна форма характеризується порошковою рентгенівською дифрактограмою, в якій положення піків по суті відповідають положенням піків дифрактограми, представленої на фігурі 5.
7. Кристалічна форма за п. 3, де кристалічна форма характеризується кривою диференційної скануючої калориметрії, записаною при швидкості нагрівання 10 "С на хвилину, з максимумом ендотермічного теплового потоку при температурі 238,12 76.
8. Кристалічна форма за п. 3, де кристалічна форма характеризується кривою диференційної скануючої калориметрії, яка по суті відповідає кривій, представленій на фігурі 6.
9. Фармацевтична композиція, яка містить сполуку за будь-яким із пп. 1 або 2 і фармацевтично прийнятний носій.
10. Фармацевтична композиція, яка містить кристалічну форму за будь-яким із пп. 3-8 і фармацевтично прийнятний носій.
11. Фармацевтична композиція за п. 9, яка додатково містить один або кілька додаткових терапевтичних засобів.
12. Фармацевтична композиція за п. У, де фармацевтична композиція являє собою мазь або крем.
13. Фармацевтична композиція за п. 9, де сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль присутня в діапазоні приблизно від 0,1 до 10 мас. 95.
14. Фармацевтична композиція за п. 9, де сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль присутня в діапазоні приблизно від 0,25 до 5 мас. 95.
15. Фармацевтична композиція за п. 9, де сполука (І) або її фармацевтично прийнятна сіль присутня в діапазоні приблизно від 0,05 до 0,5 мас. 9.
16. Сполука за п. 1 або 2 для застосування при лікуванні запального або аутоїмунного шкірного захворювання у ссавця. Зо
17. Сполука за п. 16 для застосування при лікуванні запального шкірного захворювання у ссавця.
18. Сполука за п. 17 для застосування при лікуванні атопічного дерматиту.
19. Сполука за п. 18, де атопічний дерматит являє собою атопічний дерматит з помірним і тяжким ступенями вираженості.
20. Сполука за п. 18, де атопічний дерматит являє собою атопічний дерматит з легким і помірним ступенями вираженості.
21. Сполука за п. 16 для застосування при лікуванні гніздової алопеції.
22. Сполука за п. 16 для застосування при лікуванні запального або аутоїмунного шкірного захворювання, вибраного з групи, що складається з вітиліго, вузлуватого свербця, червоного плоского лишаю, контактного дерматиту, шкірних виявів реакції "трансплантат проти хазяїна", пемфігоїду, дискоїдного вовчака, склерозивного лишаю, плоского фолікулярного лишаю, псоріазу і декальвіруючого фолікуліту.
23. Застосування сполуки за п. 1 або 2 при виробництві лікарського засобу для лікування запального або аутоїмунного шкірного захворювання у ссавця.
24. Застосування за п. 23 при виробництві лікарського засобу для лікування запального шкірного захворювання у ссавця.
25. Застосування за п. 24, де запальне шкірне захворювання являє собою атопічний дерматит.
26. Застосування за п. 25, де атопічний дерматит являє собою атопічний дерматит з помірним і тяжким ступенями вираженості.
27. Застосування за п. 25, де атопічний дерматит являє собою атопічний дерматит з легким і помірним ступенями вираженості.
28. Застосування за п. 23 при виробництві лікарського засобу для лікування аутоіїмунного шкірного захворювання у ссавця.
29. Застосування за п. 28, де шкірне захворювання являє собою гніздову алопецію.
30. Застосування за п. 23, де запальне або аутоїмунне шкірне захворювання вибирають із групи, що складається з вітиліго, вузлуватого свербця, червоного плоского лишаю, контактного дерматиту, шкірних виявів реакції "трансплантат проти хазяїна", пемфігоїду, дискоїдного вовчака, склерозивного лишаю, плоского фолікулярного лишаю, псоріазу і декальвіруючого фолікуліту. бо
31. Спосіб лікування запального шкірного захворювання у ссавця, який включає введення ссавцеві сполуки за п. 1 або 2.
32. Спосіб за п. 31, де сполуку вводять у шкіру ссавця у фармацевтичній композиції, яка містить сполуку і фармацевтично прийнятний носій.
33. Спосіб за п. 31, де запальне або аутоїмунне шкірне захворювання являє собою запальне шкірне захворювання.
34. Спосіб за п. 33, де запальне шкірне захворювання являє собою атопічний дерматит.
35. Спосіб за п. 34, де атопічний дерматит являє собою атопічний дерматит з помірним і тяжким ступенями вираженості.
36. Спосіб за п. 34, де атопічний дерматит являє собою атопічний дерматит з легким і помірним ступенями вираженості.
37. Спосіб за п. 31, де запальне або аутоімунне шкірне захворювання являє собою аутоіїмунне шкірне захворювання.
38. Спосіб за п. 37, де аутоїмунне шкірне захворювання являє собою гніздову алопецію.
39. Спосіб за п. 31, де запальне або аутоїмунне шкірне захворювання вибирають з групи, що складається з вітиліго, вузлуватого свербця, червоного плоского лишаю, контактного дерматиту, шкірних виявів реакції "трансплантат проти хазяїна", пемфігоїду, дискоїдного вовчака, склерозивного лишаю, плоского фолікулярного лишаю, псоріазу і декальвіруючого фолікуліту.
40. Спосіб отримання сполуки формули (1): (о); М о-5 Н г Мах НМ М З а ще Е он () або її фармацевтично прийнятної солі, який включає: (а) здійснення взаємодії сполуки формули (І): (о); М о-5 Н г М НМ М М а ще Е в й оо (в де К являє собою сС.-1галкільну групу, з відновником, і (5) необов'язкове формування фармацевтично прийнятної солі, з отриманням сполуки формули (І) або її фармацевтично прийнятної солі.
41. Спосіб за п. 40, де відновник вибирають з групи, що складається з І іАІНа, Мавна і І ІВНа.
42. Спосіб за п. 40, де Е являє собою етил.
43. Спосіб за п. 40, де сполуку формули (Ії) отримують шляхом поєднання сполуки формули
(ПВ): Н Г М нм М х ій Ах Е ве й ав) де Х являє собою галоген, зі сполукою формули 1-9 ої - нм 1-9,
44. Сполука формули (ІІ): (о); М о-5 Н ГО Мах нм - ьо ще Е в й (в) (в) (І) або її фармацевтично прийнятна сіль, де К являє собою С:-1галкільну групу.
45. Сполука за п. 44, де К являє собою етил.
46. Сполука формули (ПП):
Н ЦО М НМ М х З М Е Кк й о о (в або її фармацевтично прийнятна сіль, де ЕК являє собою С.-1галкільну групу, і Х являє собою галоген.
47. Сполука за п. 46, де К являє собою етипл, і Х являє собою хлор.
ча. - Є м В що Й с й шк ї ! ; чЯАЯ,, и М З 7 жо ч5 же З 97 З З5 заг
Фіг. 1 ек ШИ о Й піна ОН с шо Зо й Фо Я - Г-я ш Х та ЩО 110 153 мяз ша Температра СС
Фіг. 2
UAA202003146A 2017-10-27 2018-10-26 Піримідинова сполука як інгібітор jak кінази UA125130C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762577852P 2017-10-27 2017-10-27
PCT/US2018/057682 WO2019084383A1 (en) 2017-10-27 2018-10-26 PYRIMIDINE COMPOUNDS AS JAK KINASE INHIBITORS

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA125130C2 true UA125130C2 (uk) 2022-01-12

Family

ID=64277858

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA202003146A UA125130C2 (uk) 2017-10-27 2018-10-26 Піримідинова сполука як інгібітор jak кінази

Country Status (37)

Country Link
US (7) US10308646B2 (uk)
EP (1) EP3672965B1 (uk)
JP (1) JP7218364B2 (uk)
KR (1) KR102613503B1 (uk)
CN (1) CN111247142B (uk)
AR (1) AR113803A1 (uk)
AU (1) AU2018354370B2 (uk)
BR (1) BR112020008015A2 (uk)
CA (1) CA3074034A1 (uk)
CL (1) CL2020001090A1 (uk)
CR (1) CR20200180A (uk)
CU (1) CU24671B1 (uk)
DK (1) DK3672965T3 (uk)
DO (1) DOP2020000083A (uk)
EA (1) EA202091016A1 (uk)
EC (1) ECSP20023795A (uk)
ES (1) ES2932526T3 (uk)
GE (1) GEP20227344B (uk)
HR (1) HRP20221221T1 (uk)
HU (1) HUE060401T2 (uk)
IL (1) IL274037B2 (uk)
LT (1) LT3672965T (uk)
MA (1) MA49956B1 (uk)
MD (1) MD3672965T2 (uk)
MX (1) MX2020004255A (uk)
NI (1) NI202000032A (uk)
PE (1) PE20201495A1 (uk)
PH (1) PH12020500528A1 (uk)
PL (1) PL3672965T3 (uk)
PT (1) PT3672965T (uk)
RS (1) RS63608B1 (uk)
SG (1) SG11202001706RA (uk)
SI (1) SI3672965T1 (uk)
TW (1) TWI789446B (uk)
UA (1) UA125130C2 (uk)
WO (1) WO2019084383A1 (uk)
ZA (1) ZA202001641B (uk)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GEP20227344B (en) * 2017-10-27 2022-01-25 Theravance Biopharma R&D Ip Llc Pyrimidine compound as jak kinase inhibitor
EP3889152A4 (en) * 2018-11-30 2022-09-07 Jiangsu Hansoh Pharmaceutical Group Co., Ltd. HETEROAROMATIC DERIVATIVES FOR USE AS REGULATORS, PROCESS FOR THEIR PREPARATION AND THEIR USE
US11155549B2 (en) 2019-04-24 2021-10-26 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Ester and carbonate pyrimidine compounds as JAK kinase inhibitors
CA3135388A1 (en) 2019-04-24 2020-10-29 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Pyrimidine jak inhibitors for the treatment of skin diseases
KR20230054682A (ko) 2020-07-28 2023-04-25 아큐티스 바이오테라퓨틱스, 인크. Jak 저해제 및 라우레스-4를 함유하는 국소 제형
MX2023002378A (es) * 2020-08-26 2023-05-22 Nalo Therapeutics Moduladores de proteinas de la familia de protooncogenes myc.
US20230374124A1 (en) * 2020-10-08 2023-11-23 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Compositions for treatment alopecia areata, biomarkers for treatment success and, methods of use thereof
WO2023076161A1 (en) 2021-10-25 2023-05-04 Kymera Therapeutics, Inc. Tyk2 degraders and uses thereof
CN114246938A (zh) * 2022-01-25 2022-03-29 中山大学中山眼科中心 Il-4在制备用于治疗视网膜变性疾病药物中的应用
CN115487301B (zh) * 2022-11-08 2023-07-07 四川大学华西医院 Il-13抑制剂在制备延缓或治疗视网膜色素变性的药物中的用途

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4919934A (en) 1989-03-02 1990-04-24 Richardson-Vicks Inc. Cosmetic sticks
US6660731B2 (en) 2000-09-15 2003-12-09 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors
EP1318997B1 (en) 2000-09-15 2006-05-31 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors
US6653300B2 (en) 2000-12-21 2003-11-25 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors
WO2006067614A2 (en) 2004-12-23 2006-06-29 Pfizer Products Inc. Heteroaromatic derivatives useful as anticancer agents
CN101360740A (zh) 2005-11-16 2009-02-04 沃泰克斯药物股份有限公司 可用作激酶抑制剂的氨基嘧啶
EP2044063A1 (en) 2006-06-30 2009-04-08 Astra Zeneca AB Pyrimidine derivatives useful in the treatment of cancer
US8222256B2 (en) 2006-07-05 2012-07-17 Exelixis, Inc. Methods of using IGFIR and ABL kinase modulators
CN104011050A (zh) 2011-12-22 2014-08-27 霍夫曼-拉罗奇有限公司 作为丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂的2,4-二氨基-嘧啶衍生物
WO2015094803A1 (en) * 2013-12-16 2015-06-25 Calitor Sciences, Llc Substituted heteroaryl compounds and methods of use
NO2721710T3 (uk) * 2014-08-21 2018-03-31
JP2017535520A (ja) 2014-09-30 2017-11-30 ハンミ・ファイン・ケミカル・カンパニー・リミテッドＨａｎｍｉ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｌｔｄ． 高純度の（ｒ）−９−［２−（ホスホノメトキシ）プロピル］アデニンの製造方法
CA2983453A1 (en) 2015-05-28 2016-12-01 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Naphthyridine compounds as jak kinase inhibitors
EP3347097B1 (en) 2015-09-11 2021-02-24 Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. Substituted aminopyrimidine derivatives as modulators of the kinases jak, flt3 and aurora
EA035226B1 (ru) 2016-04-28 2020-05-19 ТЕРЕВАНС БАЙОФАРМА Ар энд Ди АйПи, ЭлЭлСи Пиримидиновые соединения в качестве ингибиторов jak киназы
GEP20227344B (en) * 2017-10-27 2022-01-25 Theravance Biopharma R&D Ip Llc Pyrimidine compound as jak kinase inhibitor
US11155549B2 (en) 2019-04-24 2021-10-26 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Ester and carbonate pyrimidine compounds as JAK kinase inhibitors
CA3135388A1 (en) 2019-04-24 2020-10-29 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Pyrimidine jak inhibitors for the treatment of skin diseases

Also Published As

Publication number Publication date
US10308646B2 (en) 2019-06-04
DOP2020000083A (es) 2020-08-15
DK3672965T3 (da) 2022-10-03
PE20201495A1 (es) 2020-12-29
HUE060401T2 (hu) 2023-02-28
CU20200053A7 (es) 2021-03-11
JP2021501151A (ja) 2021-01-14
EP3672965B1 (en) 2022-09-07
SG11202001706RA (en) 2020-03-30
PT3672965T (pt) 2022-09-29
US20210214349A1 (en) 2021-07-15
ES2932526T3 (es) 2023-01-20
US20190241555A1 (en) 2019-08-08
CN111247142A (zh) 2020-06-05
PL3672965T3 (pl) 2023-01-16
US11814377B2 (en) 2023-11-14
CN111247142B (zh) 2022-12-02
MA49956B1 (fr) 2022-11-30
EP3672965A1 (en) 2020-07-01
GEP20227344B (en) 2022-01-25
SI3672965T1 (sl) 2022-11-30
PH12020500528A1 (en) 2021-06-07
JP7218364B2 (ja) 2023-02-06
CA3074034A1 (en) 2019-05-02
NI202000032A (es) 2020-10-09
AU2018354370B2 (en) 2023-04-27
US11420965B2 (en) 2022-08-23
MX2020004255A (es) 2020-07-29
ECSP20023795A (es) 2020-06-30
RS63608B1 (sr) 2022-10-31
HRP20221221T1 (hr) 2022-12-09
MD3672965T2 (ro) 2022-12-31
TWI789446B (zh) 2023-01-11
KR20200078517A (ko) 2020-07-01
TW201930304A (zh) 2019-08-01
WO2019084383A1 (en) 2019-05-02
US10988470B2 (en) 2021-04-27
US20220396573A1 (en) 2022-12-15
CR20200180A (es) 2020-08-12
EA202091016A1 (ru) 2020-07-17
IL274037A (en) 2020-06-30
IL274037B2 (en) 2023-11-01
US20190127364A1 (en) 2019-05-02
AR113803A1 (es) 2020-06-10
US20200140430A1 (en) 2020-05-07
CL2020001090A1 (es) 2020-08-21
IL274037B1 (en) 2023-07-01
BR112020008015A2 (pt) 2020-10-27
CU24671B1 (es) 2023-07-12
US10562894B2 (en) 2020-02-18
US20200369660A1 (en) 2020-11-26
ZA202001641B (en) 2021-04-28
US20240158389A1 (en) 2024-05-16
US10774080B2 (en) 2020-09-15
AU2018354370A1 (en) 2020-04-09
LT3672965T (lt) 2022-10-10
MA49956A (fr) 2020-07-01
KR102613503B1 (ko) 2023-12-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA125130C2 (uk) Піримідинова сполука як інгібітор jak кінази
US10485803B2 (en) Pyrimidine compounds as JAK kinase inhibitors
UA121138C2 (uk) Нафтиридинові сполуки як інгібітори jak-кінази
EP3958969B1 (en) Ester and carbonate pyrimidine compounds as jak kinase inhibitors
EA041115B1 (ru) Пиримидиновое соединение в качестве ингибитора jak киназы