UA123436C2 - Спосіб концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів - Google Patents
Спосіб концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів Download PDFInfo
- Publication number
- UA123436C2 UA123436C2 UAA201801047A UAA201801047A UA123436C2 UA 123436 C2 UA123436 C2 UA 123436C2 UA A201801047 A UAA201801047 A UA A201801047A UA A201801047 A UAA201801047 A UA A201801047A UA 123436 C2 UA123436 C2 UA 123436C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- cell suspension
- acid
- biomass
- yeast
- fatty
- Prior art date
Links
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 title claims abstract description 115
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 104
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 title claims abstract description 88
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 title claims abstract description 70
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 74
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 64
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 64
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 38
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 33
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 19
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 15
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 claims description 14
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 claims description 10
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 claims description 7
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 7
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 claims description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims description 6
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 claims description 6
- 239000002029 lignocellulosic biomass Substances 0.000 claims description 6
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 5
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000007848 Bronsted acid Substances 0.000 claims description 2
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 claims description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 claims description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 claims description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 8
- 230000007154 intracellular accumulation Effects 0.000 abstract description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 44
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 37
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 33
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 28
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 26
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 20
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 20
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 18
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 14
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 13
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 10
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 10
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 10
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 9
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 7
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 6
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 6
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 6
- NHTMVDHEPJAVLT-UHFFFAOYSA-N Isooctane Chemical compound CC(C)CC(C)(C)C NHTMVDHEPJAVLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000003225 biodiesel Substances 0.000 description 5
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 5
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 5
- JVSWJIKNEAIKJW-UHFFFAOYSA-N dimethyl-hexane Natural products CCCCCC(C)C JVSWJIKNEAIKJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 5
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 4
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 4
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 4
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 4
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 4
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 4
- -1 for example Substances 0.000 description 4
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006392 deoxygenation reaction Methods 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 3
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 3
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002444 Exopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000715 Mucilage Polymers 0.000 description 2
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 2
- OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N batilol Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCCOCC(O)CO OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000704 biodegradable plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000002551 biofuel Substances 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000008394 flocculating agent Substances 0.000 description 2
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 239000012978 lignocellulosic material Substances 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 2
- NUMQCACRALPSHD-UHFFFAOYSA-N tert-butyl ethyl ether Chemical compound CCOC(C)(C)C NUMQCACRALPSHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 229920002488 Hemicellulose Polymers 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 1
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RUVPEAOBARYHEY-ZUEOXWNTSA-N O[C@@H]1C(O[C@@H]([C@H]([C@@H]1O)O)C)OC(CC(=O)OCC)CCCCCCCCCCCCCCC Chemical compound O[C@@H]1C(O[C@@H]([C@H]([C@@H]1O)O)C)OC(CC(=O)OCC)CCCCCCCCCCCCCCC RUVPEAOBARYHEY-ZUEOXWNTSA-N 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 239000004164 Wax ester Substances 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001338 aliphatic hydrocarbons Chemical group 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 208000016063 arterial thoracic outlet syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000007956 bioemulsifier Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002283 diesel fuel Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 238000002036 drum drying Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000003869 genetically modified organism Nutrition 0.000 description 1
- 150000002314 glycerols Chemical class 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 1
- 229960004232 linoleic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000006372 lipid accumulation Effects 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 150000004668 long chain fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000006609 metabolic stress Effects 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011368 organic material Substances 0.000 description 1
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 description 1
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 239000005014 poly(hydroxyalkanoate) Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000903 polyhydroxyalkanoate Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000010349 pulsation Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 150000003408 sphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007738 vacuum evaporation Methods 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 235000019386 wax ester Nutrition 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/005—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor after treatment of microbial biomass not covered by C12N1/02 - C12N1/08
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/34—Sugars
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Botany (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
Винахід стосується способу концентрування клітинної суспензії, яка містить біомасу жирових дріжджів, отриманих в результаті бродіння у ферментаційному бульйоні в умовах, які дозволяють внутрішньоклітинне накопичення ліпідів; та вказаної біомаси, яка містить значні кількості слизового матеріалу.
Description
Цей винахід належить до біотехнологічної галузі та стосується способу концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів.
Більш докладно кажучи, винахід стосується способу концентрування, метою якого є полегшення наступного процесу екстракції внутрішньоклітинних ліпідів; клітинної суспензії, яка містить біомасу жирових дріжджів, отриману в результаті бродіння у ферментаційному бульйоні в умовах, які дозволяють відбуватися внутрішньоклітинному накопиченню ліпідів; зазначеної біомаси, яка відрізняється тим, що містить значні кількості слизового матеріалу.
Отримані мікробіологічним шляхом ліпіди може бути зручно застосовано для отримання біопластика або як проміжні сполуки для синтезу, зокрема у так званій галузі "зеленої хімії" або для отримання біопалив, як-то, наприклад, "біодизель" або "зелений дизель", які може бути застосовано як окремо, так і в суміші з іншими паливами для автомобілів.
Для цих типів застосувань, мікробіологічне вироблення ліпідів запропоновано, як корисна альтернатива існуючим способам їх отримання з поновлюваних джерел. Щодо застосування рослинних олій слід зазначити, що мікробіологічні процеси є незалежними від кліматичних або географічних факторів та не конкурують з сільськогосподарським застосуванням грунту для отримання джерел харчування. Іншою перевагою цих процесів є те, що вони полягають у застосуванні здатності мікроорганізмів швидко відтворюватися з допомогою не дуже дорогих субстратів, як-то, наприклад, похідних гідролізу лігноцелюлозних матеріалів.
В галузі мікробіологічного вироблення ліпідів особливо перспективними є жирові дріжджі, тобто дріжджі, які в особливих умовах культивування є здатними до накопичення ліпідів в кількостях, які дорівнюють або перевищують 25 95 від їх сухої маси.
Застосування жирових дріжджів для отримання ліпідів є частиною відомої галузі техніки.
У Міжнародній Патентній Публікації МО 2012/052368, наприклад, описано процес отримання ліпідів з жирових дріжджів, вибраних з роду КПодоїйогціа, І уроптусев, Тгідопорзі5, Сапаїаа,
Тогшорвзіє та Ріспіа з допомогою процесів бродіння у присутності розведених цукрових субстратів, отриманих в результаті гідролізу лігноцелюлозних біомас, які містять принаймні один полісахарид. Цей процес полягає у наступному: піддання цієї біомаси, яка містить принаймні один полісахарид кислотному гідролізу з отриманням першої суміші, яка містить першу тверду фазу та першу водну фазу; завантаження цієї першої водної фази у пристрій для бродіння у присутності принаймні одного штаму жирових дріжджів з отриманням першого ферментаційного бульйону, який містить першу жирову клітинну біомасу; застосування кислого або ферментативного гідролізу цієї першої твердої фази з отриманням другої суміші, яка містить другу тверду фазу та другу водну фазу; завантаження цієї другої водної фази до пристрою для бродіння в присутності першого ферментаційного бульйону з отриманням другого ферментаційного бульйону, який містить другу жирову клітинну біомасу з ліпідним вмістом; застосування мікрофільтрації до принаймні частини цього другого ферментаційного бульйону з отриманням ретентату та пермеату; завантаження цього ретентату до зазначеного пристрою для бродіння.
Отримані таким чином ліпіди може бути корисним чином застосовано для отримання біодизеля або "зеленого дизеля", які може бути застосовано або в чистому вигляді або в суміші з іншими автомобільними паливами.
Однак слід зазначити, що застосування ліпідів мікробіологічного походження, як для отримання біопалив, як-то, наприклад, біодизеля або "зеленого дизеля", так і також, як проміжних продуктів синтезу, зокрема у так званій галузі "зеленої хімії" конкурує із застосуванням палив та хімічних проміжних продуктів викопного походження, отриманих з допомогою процесів, які майже завжди є більш економічно зручнішими. Отже, зберігається велика зацікавленість у дослідженні процесів, спроможних скоротити витрати, потрібні для вироблення ліпідів біологічного та зокрема мікробіологічного походження, а також збільшити їх вихід.
Один з найважніших критичних аспектів стосується того, що об'ємна продуктивність (тобто кількість ліпідів, яку можна одержати на одиницю об'єму середовища для бродіння) у разі їх мікробіологічного вироблення є обмеженою та загальним чином меншою за 100 г / л, тому промислове застосування цих виробничих процесів передбачає вживання значних об'ємів бродіння цих жирових мікроорганізмів. Ці великі об'єми клітинної суспензії повинні бути обробленими природним шляхом для відновлення отриманої біомаси та відновлення вилучення ліпідів на обладнанні великого розміру та з високими витратами на його налаштування та технологічні процеси.
Способи екстракції ліпідів з жирових мікроорганізмів також є добре відомими в цій галузі.
У Міжнародній Патентній Публікації УУО 2012/078852, наприклад, описано процес екстракції (610) тригліцеридів з мікроводоростей шляхом теплової обробки клітинної біомаси у кислому середовищі та у присутності полярного розчинника, застосованого з метою підтримання належного стану клітинної стінки та сприяння наступній екстракції з неполярним розчинником.
Майже всі процеси екстракції ліпідного вмісту з біомасами жирових мікроорганізмів передбачають застосування попередньої операції вилучення цих біомас з культуральних середовищ наприкінці процесу бродіння, яку здійснюють з допомогою фізичних засобів, як-то, наприклад, фільтрації, флокуляції або центрифугування.
Зрозуміло, що існують певні виключення: одне з них, наприклад, наведено в Патентній
Заявці МО 2001/053512, в якій описано процес екстракції ліпідів з мікроорганізмів, яку може бути здійснено безпосередньо у культуральному середовищі у ферментері після лізису біомаси.
Як вже було зазначено, процес екстракції ліпідів з жирових мікроорганізмів звичайно полягає у застосуванні попереднього етапу вилучення клітинної біомаси з культурального середовища.
Наприклад, в Міжнародній Патентній Публікації УМО 2012/052368 після бродіння передбачено отримання біомаси, яка складається з клітин жирових дріжджів, із застосуванням тангенціальної мікрофільтрації.
Аналогічно, в Патентній Заявці Італії МІ2014А000761 описано процес отримання ліпідів з жирової біомаси з допомогою бродіння, після якого цю біомасу, яка містить ліпіди, вилучають шляхом центрифугування.
З іншого боку, у ОЗ 2001/0046691 жирову біомасу повністю зневоднюють, переміщуючи клітинну суспензію, яка надходить з ферментеру до нагрітої барабанної сушарки, що таким чином призводить до випарювання водного вмісту цієї суспензії.
Однак слід зазначити, що деякі жирові дріжджі, як-то, наприклад, дріжджі видів ВПодоїогиїа,
ЕПодозрогідішт, Стгуріососси5, Сапаїда, Тгіспобзрогоп тощо можуть виробляти біологічні емульгатори та поверхнево-активні речовини (як описано, наприклад, у роботі Б. Зперпега, 5.
ВосКеу, І.М. ЗцШтепапа апа 5. Воїег іп "Моме! Біоетиївйег їот тістоогдапібзтв ог иве іп Тоодв" ("Отриманий з мікроорганізмів новий біоемульгатор для харчового застосування") (1995), 5).
Віотесппої., мої. 40 раде5 207-217), які надають рідким культурам цих мікроорганізмів характерного слизового природного стану. Зокрема вироблення цих слизових субстанцій відбувається у разі досягнення великих концентрацій біомаси під час процесів бродіння в промисловому масштабі.
Також часто було спостережено, що поверхнево-активні властивості цих субстанцій роблять важким вилучення мікроорганізмів, які їх виробляють, з культурального середовища.
У деяких дослідженнях (наприклад, у роботах К. Раміома, Ї. КоІема, М. Кгаїснапома, І.
Рапспем "Ргодисібп апа спагасіегілайоп ої ап ехороїЇузасспагіде ру уєаб" ("Вироблення дріжджами екзополісахариду та його характеристика") (2004), Умопіа 9. ої Місгоріо!. 5 Віотесппо!ї.,
Мо. 20, раде5 435-439 та І.М.А. Мап Водаєеп, 9У. 2папд, МУ. Боєїаегі "МісгоБбіа! зупіпевів ої зорпогоїїріає" ("Мікробний синтез софороліпідів") (2011) Ргосе55 Віоспетізвігу, мої. 46, радез 821- 833) було виявлено, що біосинтез цих слизових субстанцій у частини жирових мікроорганізмів може бути стимульовано з допомогою тих саме умов культивування, яких було застосовано для сприяння накопичення ліпідів. Це означає, що часто можна виявити існування кореляції між накопиченням ліпідів та виробництвом слизових речовин до такої міри, що мікроорганізми, які виробляють більше ліпідів, також є такими, яких, завдяки утворенню цих речовин, буде більш складно вилучити з культурального середовища.
В цих випадках клітинна маса фактично може набувати щільності, яка відповідно буде дорівнювати щільності культуральної середовища, тим самим запобігаючи відокремленню рідкої та твердої фаз з допомогою таких способів, як-то, наприклад, седиментація або центрифугування, в основі яких застосовано існування різниці щільності між фазами, які необхідно відокремити.
Відповідно, вироблення слизових субстанцій мутантними мікроорганізмами, здатними до надлишкового вироблення ліпідів викликає утворення стійких емульсій, які усоеможливлюють вилучення мікробних клітин з ферментаційного бульйону із застосуванням відомих в цій галузі способів. Прикладом жирових дріжджів, які виробляють слизові субстанції є мутантний штам жирових дріжджів КПподозрогідіпт алогісит О5М 29495, описаний в Патентній Заявці
МІ2О14АО002292.
В інших випадках, отримання слизового матеріалу може супроводжуватися значним зростанням в'язкості ферментаційного бульйону в ферментері, як це може бути спостережено, наприклад, для певних високопродуктивних культур (які мають концентрацію біомаси, яка дорівнює або перевищує 80 г біомаси на літр культури) дріжджів видів Стуріососси5 або
Типспозрогоп, що може викликати труднощі не лише під час процесів концентрування, але навіть у фазі вилучення ферментаційного бульйону з ферментерів та перенесення його до (610) систем відокремлення або обробки для екстракції ліпідів.
Заявник розглянув проблему знаходження способу відновлення слизової біомаси жирових дріжджів з ферментаційного бульйону із застосуванням концентрування бактеріальної суспензії, яка містить цю слизову біомасу в суттєво зменшеному обсязі, вважаючи, що звичайно застосовані для цієї мети в промисловій практиці способи та технічні прийоми виявилися неефективними.
Як вже було зазначено, висока в'язкість ферментаційного бульйону та/"або зменшення різниці щільності між фазами ферментаційного бульйону може зробити застосування одного лише центрифугування взагалі неефективним для вилучення жирових біомас з культурального середовища.
Серед способів, застосованих для концентрування клітинних суспензій можна відзначити фільтрацію на плоских мембранах або на фільтрах, які обертаються, але отримані з допомогою жирових мікроорганізмів слизові субстанції можуть швидко перекрити пори цих фільтрів, таким чином унеможливлюючи проникнення до них водної фази. З іншого боку, застосування спеціальних добавок (так званих попередніх покриттів або допоміжних фільтруючих засобів), окрім слабкої корисності також може бути недоцільним, оскільки це негативно впливає на подальшу екстракційну обробку ліпідів. Ці добавки фактично є твердими матеріалами, наприклад, матеріалами на основі похідних целюлози або глини, які, залишаючись поглиненими в біомасі, можуть створити проблеми у наступній фазі екстракції ліпідів (наприклад, викликання непроникності фільтрів, утворення твердого осаду чи перешкод при застосуванні помп тощо).
Так само, додавання до ферментаційного бульйону флокулянтів або засобів, які сприяють седиментації біомаси може в цих випадках виявитися неефективним, оскільки вони є неспроможними сприяти відокремленню біомаси з рідкої фази ферментаційного бульйону. Крім того, природа певних флокулянтів може бути несумісною з наступним процесом екстракції ліпідів через високу афінність цих субстанцій з застосованими в екстракції розчинниками. На практиці ці продукти може бути екстраговано разом з внутрішньоклітинними ліпідами, отже вони є домішками, які треба усунути перед застосуванням самих ліпідів.
Тангенційна мікрофільтрація, зокрема у разі застосування системи стороннього пульсуючого протитиску для компенсації зменшення швидкості потоку через забруднення мембран може бути ефективним способом концентрації клітинних суспензій з великим вмістом слизових біомас; однак навіть цей спосіб не має реального промислового втілення через те, що потік, який проходить крізь фільтри після короткочасного їх застосування також починає раптово зменшуватися, що зрештою призводить до неприйнятного зростання часу обробки.
Нарешті слід зазначити, що хоча ефективного концентрування клітинних суспензій з високим вмістом слизу можна досягти з допомогою способів, які передбачають випарювання води з ферментаційного бульйону (як-то, наприклад, барабанне сушіння біомаси, ліофілізація або сушіння розпиленням), проте ці способи потребують великого споживання енергії та у будь- якому разі здійснення загального концентрування наявних у ферментаційному бульйоні компонентів може бути несумісним з наступним процесом екстракції або із застосуванням екстрагованих ліпідів.
Заявник розробив позбавлений від перелічених вище недоліків спосіб концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів.
Цей спосіб полягає у тепловій обробці клітинної суспензії жирових дріжджів у середовищі з кислим рН в умовах, які не викликають руйнування клітин з метою сприяння утворенню цієї клітинної суспензії у концентрованому вигляді із застосуванням відомих в цій галузі способів, наприклад, центрифугування.
Застосування способу за винаходом призводить до отримання численних переваг.
Цей спосіб, наприклад, дозволяє відокремити слизову біомасу, яка містить інтактні клітини жирових дріжджів, тобто здійснити це по суті без руйнування клітинних мембран цих дріжджів або феномену клітинного лізису, тим самим уникаючи розсіювання інтересуючи ендоклітинних ліпідів.
Для цілей винаходу, клітини жирових дріжджів клітинної суспензії вважаються інтактними до такої міри, допоки вміст ліпідів ферментаційного бульйону, відокремлений з клітинної суспензії наприкінці процесу відповідно до способу винаходу, як буде докладніше описано нижче (Приклад 5), буде суттєво дорівнювати нулю.
Інша важлива перевага полягає в тому, що концентрація отриманої за способом винаходу клітинної суспензії дозволяє вилучення з клітинної біомаси разом з водною фазою також сполук, які спочатку є наявними у ферментаційному бульйоні або які утворюються в результаті бродіння та можуть пошкодити або зменшити ефективність наступної екстракційної обробки ліпідів.
Додаткова важлива перевага цього способу полягає в тому, що об'єм клітинної суспензії (610) може бут значно зменшено, що тим самим дозволяє здійснити наступну екстракційну обробку ліпідів у зменшеному обсязі, з помітною економією щодо потрібного для цього обладнання та реагентів (наприклад, розчинників) та технологічних витрат.
Для цілей винаходу концентрацію біомаси у клітинній суспензії визначено, як суху масу біомаси по відношенню до одиниці об'єму суспензії. Зокрема, термін "суха маса" біомаси стосується маси клітин, які знаходяться у відомому об'ємі клітинної суспензії, визначеної шляхом зважування вищезазначених клітин після повного усунення вмісту води з допомогою теплової обробки у вентильованій сушильній шафі при 105 "С до отримання сталого значення маси (приблизно протягом 24 годин). Отже ця маса може мати відношення до 1 л клітинної суспензії та отримана таким чином концентрація є наведеною у г/л або вона може мати відношення до 100 г клітинної суспензії та в цьому разі концентрація біомаси є наведеною у відсотковому вигляді відносно загальної маси суспензії (95 "сухої маси" або 95 с. м.).
Додаткові характеристики та переваги винаходу будуть зрозумілими з наступного детального опису та прикладів втілення, які не є обмежуючими.
Для цілей цього опису та наступної Формули Винаходу, визначення числових діапазонів завжди включає граничні значення, якщо тільки не зазначено іншого.
Для цілей цього опису та наступної Формули Винаходу, наведені відсоткові значення стосуються масової частки, якщо тільки не зазначено іншого.
Для цілей цього опису та наступної Формули Винаходу, термін "містить" також включає терміни "суттєво складається з" або "складається з".
Для цілей винаходу, термін "ліпіди" стосується категорії субстанцій, молекули яких головним чином містять аліфатичний вуглеводневий ланцюг та які розчинюються у неполярних органічних розчинниках та погано розчинюються у воді. Ліпіди утворюють важливу групу молекул, існуючих у живих клітинах та охоплюють, наприклад, жири, олії, віски, ефіри воску, стерини, терпеноїди, ізопреноїди, каротиноїди, полігідроксиалканоати, жирні кислоти, жирні спирти, естери жирних кислот, фосфоліпіди, гліколіпіди, сфіноліпіди та ацилгліцерини, як-то моногліцериди, дигліцериди та тригліцериди.
Для цілей винаходу та з окремим посиланням на культури мікроорганізмів та зокрема на культури дріжджів, термін "слиз" стосується комплексу органічних субстанцій, подібних до гелю та здатних утримувати рідину, які відрізняються в'язкою та еластичною консистенцією. Слиз може, наприклад, складатися з сумішей полісахаридів, гліколіпідів, ліпопептидів, глікопептидів, полісахаридно-ліпідних комплексів та полісахаридно-білюювих комплексів. У деяких випадках дріжджові культури з високим вмістом слизу відрізняються великою в'язкістю, яка дорівнює або перевищує 15 мПа:с (К. Раміома, Ї. КоЇема, М. Кгаїспапома, І. Рапспем "Ргодисіп апа сНагасієгігайоп ої ап ехороїузасснагтіде ру уєавзі" ("Вироблення дріжджами екзополісахариду та його характеристика") (2004), УМопіа дошгпаї ої Місгобіо! 8. Віотесппої., мої! 20 радез 435-439).
Для цілей винаходу, термін "слизовий мікроорганізм" стосується мікроорганізму, який виробляє слиз у природних або у фізіологічних умовах або в умовах метаболічного стресу або у присутності специфічних субстратів та/або у певних умовах бродіння. Культивування слизових мікроорганізмів призводить до отримання "слизових біомас".
Для цілей винаходу, термін "біодизель" стосується палива для дизельних двигунів, яке містить алкільні естери (наприклад метилові, пропілові або етилові естери) довголанцюгових жирних кислот, які походять з біологічних джерел.
Для цілей винаходу, термін "зелений дизель" стосується палива для дизельних двигунів, яке містить продукти гідрування або деоксигенації ліпідів, отриманих з біологічних джерел у присутності водню та принаймні одного каталізатора.
Для цілей винаходу, термін "біопластик" стосується типу прийнятного для вторинної переробки пластика, поновлюваної сировини біологічного походження або який є біологічно розкладаним або має обидві властивості.
Для цілей винаходу, термін "поновлюваний сировинний матеріал" стосується композиції, яку принаймні частково отримано з джерела та/або внаслідок процесу, який через природні особливості або внаслідок діяльності людини вважається "невичерпаним", тобто поновлюється з часом, отже майже нескінченно може бути прийнятним для застосування.
Для цілей винаходу, вираз "жировий мікроорганізм" стосується мікроорганізму, здатного до накопичення ліпідів, масова частка яких дорівнює або перевищує 25 95 від клітинної сухої маси.
Жирові дріжджі також є жировими мікроорганізмами.
Певні варіанти жирових дріжджів можуть бути здатними до накопичення ліпідів, масова частка яких буде дорівнювати або перевищувати 40 95 від клітинної сухої маси. У певних умовах жирові дріжджі можуть накопичувати ліпіди, масова частка яких буде переважно дорівнювати або перевищувати 60 95 від клітинної сухої маси.
Для цілей винаходу, виразами "культивування" та "культура" позначено процеси, з допомогою яких клітини мікроорганізму зростають та відтворюються в умовах, контрольованих людиною. "Бродіння" жирових дріжджів, здійснене у певних втіленнях винаходу, належить до процесів, визначених вищезазначеними виразами.
Для цілей винаходу, виразами "ферментаційне (або культуральне) середовище (або бульйон)" позначено рідину або гель, отриманий для підтримання росту мікроорганізмів, наприклад, клітин жирових дріжджів.
Для цілей винаходу, термін "біомаса" стосується комбінації клітин та/або клітинного матеріалу, отриманого з рослин, тварин або мікроорганізмів. У переважному аспекті, біомасу може бути отримано з клітин та/або клітинного матеріалу, отриманого від грибків, бактерій, дріжджів, пліснявих грибів та мікроводоростей. Зазначені біомаси зазвичай можуть мати природне походження. У деяких втіленнях винаходу ці біомаси можуть складатися з природних мутантів, індукованих мутантів або генетично модифікованих організмів. Вказані біомаси переважно отримують з допомогою бродіння або інших режимів культивування.
Предметом винаходу є спосіб концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів та вищезазначений спосіб полягає у застосуванні наступних операцій: а) культивування цих жирових дріжджів у ферментаційному бульйоні, яке призводить до отримання клітинної суспензії, яка містить зазначену слизову біомасу;
Б) піддання отриманої у операції а) клітинної суспензії тепловій обробці з температурою 95- 120 "С та обробці кислотою, яка призводить до отримання обробленої клітинної суспензії, яка містить цю слизову біомасу з інтактними жировими дріжджовими клітинами; с) концентрування отриманої у операції р) обробленої клітинної суспензії, яке полягає у застосуванні операції відокремлення принаймні частини цього ферментаційного бульйону, яке призводить до отримання концентрованої клітинної суспензії.
Застосовані жирові дріжджі є переважно вибраними з групи, яка складається згодин
Матоміа, Сапаїда, Стуріососсив, Піспозрогоп, Тгідопорвіб5, Тогціорвіз, Ііротусев, Ріснпіа,
КПподоїогиіа, КПподозрогідішт та їх консорціум, переважно Тгіспозрогоп, Стгуріососсив,
КПодозрогідіит або їх консорціум.
Вищевказані дріжджі переважно накопичують ліпіди в кількості, яка дорівнює або перевищує 25595, переважно яка дорівнює або перевищує 4095, більш переважно яка дорівнює або перевищує 60 95, більш переважно яка дорівнює або перевищує 70 95 від їх сухої маси.
У переважному аспекті, ці жирові дріжджі може бути представлено клітинами дріжджів
АПодозрогіаіїйт агогісит ОМ 29495.
Цей мутантний штам жирових дріжджів Еподозрогідіпт агогісшт ЮЗМ 29495 було отримано з допомогою способів мутагенезу іп міго, як описано у заповненій Заявником Патентній Заявці
Італії МІ2014А002292 та від дикого штаму Кподозрогідіит аогісит він відрізняється значно підвищеним виходом отриманих внаслідок внутрішньоклітинного накопичення ліпідів у разі його культивування у збагаченому джерелами азоту ферментаційному бульйоні.
Бульйони для бродіння можуть охоплювати розчини цукрів, отримані з крохмалистих рослин або цукрових фруктів (цукри першої генерації). У іншому втіленні може бути застосовано бульйони, які містять цукри, отримані з допомогою гідролітичної та цукрифікаційної обробки неїстівних лігноцелюлозних біомас (цукри другої генерації).
У переважному аспекті винаходу, ферментаційний бульйон, в якому відбувається бродіння жирових дріжджів може бути отримано в результаті гідролізу лігноцелюлозних біомас.
Для цілей винаходу, терміни "лігноцелюлозний матеріал" та "лігноцелюлозна біомаса" стосуються складної структури рослинного походження, яка містить целюлозу, геміцелюлозу та лігнін. З цього матеріалу отримують цукри з допомогою відомих в цій галузі способів фізико- хімічної та ферментативної обробки та ці продукти може бути застосовано, як джерела вуглецю в процесах бродіння мікроорганізмів для виробництва спиртів та/або ліпідів.
У переважному аспекті винаходу, цукри, отримані з крохмалистих рослин або цукрових фруктів (цукри першої генерації) або цукри, отримані з допомогою гідролітичної та цукрифікаційної обробки неїстівних лігноцелюлозних біомас (цукри другої генерації) завантажують до ферментеру, інокульованого прекультурою жирових дріжджів. На додачу до цукрів, до ферментеру також може бути завантажено й інші поживні речовини, як-то вітаміни, солі або азотисті сполуки. Застосований у вищезазначеній операції а) ферментаційний бульйон, потрібний для способу за винаходом переважно отримують шляхом гідролізу лігноцелюлозних біомас.
Протягом вищезазначеної операції Б) під час якої клітинну суспензії піддають тепловій та (610) кислотній обробці, вищезазначену суспензію може бути підтримано без перемішування або її може бути піддано повільному, періодичному або безперервному перемішуванню. У переважному аспекті клітинну суспензію можна зберігати з повільним перемішуванням.
Теплову обробку переважно здійснюють протягом часу, який складає 3-12 годин, переважно протягом часу в межах 4-8 год.
Теплову обробку переважно здійснюють з температурою в межах 100-110 "С. Еквівалентну обробку може бути отримано із застосуванням різних комбінацій часу та температури. Чим вище буде температура термічної обробки, тим, наприклад, буде меншою необхідна кількість часу. Зокрема, у переважному аспекті винаходу, теплову обробку може бути здійснено при 100 "С протягом приблизно 8 годин. У додатковому переважному аспекті винаходу цю теплову обробку може бути здійснено при 110 "С протягом приблизно 4 години.
Слід зазначити, що вищезазначена теплова обробка відрізняється від інших відомих в цій галузі описаних теплових обробок та/або операцій попередніх обробок, як-то вказані операції попередньої обробки, метою яких є "пастеризація" біомас жирових мікроорганізмів, яка дозволяє їх зберігати протягом тривалих періодів часу перед екстракцією внутрішньоклітинних ліпідів. Ці операції попередньої обробки здійснюють протягом дуже зменшених періодів часу, виключаючи операції підкислення за стандартною схемою. Зазначені операції пастеризаційної обробки фактично виявилися абсолютно неефективними для концентрування клітинних суспензій, які містять слизові біомаси жирових дріжджів.
Спосіб винаходу, навпаки, відрізняється наявністю синергічної дії, пов'язаної з обробкою шляхом підкислення, поєднаної з тепловою обробкою протягом відповідно встановленого часу, що неочікувано дозволило здійснити концентрування зазначених клітинні суспензій без будь- яких труднощів.
Під час підкислювальної обробки за винаходом рнН клітинної суспензії може знаходитися в межах 1,5-6,0 та переважно в межах 2,0-4,5.
Обробку підкисленням може бути здійснено під час теплової обробки. У переважному аспекті, перед цією підкислювальною обробкою здійснюють теплову обробку.
Обробку підкисленням переважно здійснюють шляхом додавання органічної або неорганічної кислоти Бронстеда, переважно неорганічної кислоти.
Ця кислота є переважно вибраною з групи, яка містить оцтову кислоту, соляну кислоту, азотну кислоту, фосфорну кислоту, сірчану кислоту, борну кислоту, фтористоводневу кислоту, бромистоводневу кислоту, молочну кислоту, мурашину кислоту, пропіонову кислоту або їх суміші та більш переважно сірчану кислоту.
Слід зазначити, що застосована у способі за винаходом кислота може мати будь-яку концентрацію, отже вона може бути кислотою, розведеною у воді або концентрованою кислотою та переважно вона є концентрованою кислотою.
Кінцева концентрація цієї кислоти, тобто її концентрація у повному об'ємі клітинної суспензії наприкінці обробки підкисленням переважно може знаходитися в межах 0,05-0,5 95 (маса/об'єм) та переважно може знаходитися в межах 0,2-0,3 95 (маса/об'єм).
Фахівець в цій галузі може визначити найбільш прийнятну кінцеву концентрацію кислоти, маючи на увазі, що показник рН суспензії клітин в кінці додавання зазначеної кислоти повинен бути в зазначених вище межах.
Переважно вищезазначену операцію с) концентрування клітинної суспензії може бути здійснено з допомогою спонтанного осадження або під дією сил гравітації, з допомогою сифонування, випарювання у вакуумі, ліофілізації, флокуляції, мікрофільтрації або центрифугування та переважніше цю операцію здійснюють шляхом центрифугування. У окремому переважному аспекті, операцію с) може бути здійснено шляхом переривчастого або безперервного центрифугування. В останньому разі може бут застосовано декантерну центрифугу з переливним відокремленням рідини або планшетну центрифугу.
Якщо концентрацію клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів після теплової обробки та підкислювальної обробки за цим способом здійснюють шляхом центрифугування, то це центрифугування може бути здійснено з прискоренням в межах 1000- 6000 х 9, переважно в межах 2000-5000 х д та більш переважно в межах 3000-4000 х 9.
Після центрифугування, слизова біомаса, яка складається з жирових дріжджів може утворювати осад на дні контейнера для центрифугування або її може бути концентровано у шар, який плаває на поверхні культурального середовища. В цьому разі, прозорий нижній шар, який складається з ферментаційного бульйону може бути відокремлено від плаваючої біомаси з допомогою всмоктуючого сифону або шляхом усування цього прозорого нижнього шару з допомогою клапану, відповідно розташованого на дні контейнера.
Слід зазначити, що спосіб за винаходом дозволяє отримати концентровану клітинну 10) суспензію, яка містить інтактні клітини жирових дріжджів, тобто клітини, позбавлені будь-яких руйнувань. Як фактично було показано (див. наведений тут Приклад 5), у ферментаційному бульйоні, відокремленому з біомаси наприкінці процесу відповідно за зазначеним способом не може бути виявлено присутності ліпідів.
Без бажання бути пов'язаними з будь-якою конкретною теорією, передбачається, що спосіб за винаходом сприяє руйнуванню слизових субстанцій, наявних на поверхні дріжджових клітин, полегшуючи таким чином агрегацію тих самих клітин та сприяючи їх відокремленню від ферментативного бульйону. З уникненням руйнування клітинних стінок було досягнуто подвійної переваги, яка полягала у запобіганні розсіювання внутрішньоклітинних ліпідів через їх витік у культуральне середовище та у обмеженні вмісту біологічного та органічного матеріалу у водній фазі, що збільшило б індекс СОЮ (хімічного споживання кисню) та могло б вимагати особливої обробки відпрацьованого середовища перед його утилізацією.
Завдяки способу за винаходом, після відокремлення принаймні частини ферментаційного бульйону у операції с) цього способу, концентрація біомаси в отриманій клітинній суспензії може знаходитися в межах 19,0-35,0 956 та переважно в межах 21,0-30,0 956 (масова частка сухих речовин).
Після концентрування клітинної суспензії, яка містить біомасу жирових дріжджів під час процесу за способом винаходу, вищезазначену біомасу може бути піддано руйнації (лізису) з наступною екстракцією ліпідів з допомогою будь-якого з відомих в цій галузі способів.
Відповідно до способу, описаного, наприклад, у Патентній Заявці М/О 2012/052368, біомасу може бути перенесено у автоклав, в якому її може бути піддано додатковій 4-годинній тепловій обробці при 140 "С, таким чином викликаючи її лізис. Потім отриману суспензію може бути перенесено у реактор та піддано екстракції з принаймні одним полярним органічним розчинником, який не змішується з водою (наприклад етил-трет-бутиловий етер, метил-ізо- бутил-кетодин, етилацетат)у або з принаймні одним неполярним органічним розчинником (наприклад, ізооктан, гексан або суміші лінійних або розгалужених парафінів, число атомів карбону в яких складає 5-10, бензен, толуол або ксилен), чистим або в суміші з водорозчинними полярними розчинниками (наприклад, етанол, пропанол, ізопропанол).
Після екстракції в органічному розчиннику, отриману з клітин суміш тригліцеридів може бути виділено шляхом випарювання самого органічного розчинника.
Аналіз ліпідної фракції може бути здійснено з допомогою хроматографічних способів, наприклад, газової хроматографії або високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ) у відповідності з відомими у цій галузі процесами.
З допомогою цих аналітичних способів було виявлено, що принаймні 90 95 накопичених у клітинах жирових дріжджів ліпідів представлено тригліцеридами, переважно гліцериновими естерами жирних кислот, які мають 8-24 атомів карбону, як-то, наприклад, пальмітинової кислоти, стеаринової кислоти, олеїнової кислоти та а-лінолевої кислоти.
Іншими ліпідами, які також можуть бути наявними, є фосфоліпіди, моногліцериди, дигліцериди, вільні жирні кислоти або їх суміші.
Ліпіди, отримані відповідно до процесу, який є предметом винаходу може бути корисним чином застосовано, як похідні синтезу, зокрема у так званій галузі "зеленої хімії". Їх також може бути піддано переестерифікації в присутності принаймні одного спирту, який має 1-4 атомів карбону, переважно метанолу або етанолу та принаймні одного кислого або основного каталізатора з метою отримання гліцерину та алкілових естерів, зокрема метилових та етилових естерів (біодизель).
Як варіант, ці ліпіди може бути піддано гідруванню/деоксигенації у присутності водню та принаймні одного каталізатора з метою отримання "зеленого дизеля". Процеси гідрування/деоксигенації є відомими в цій галузі та їх описано, наприклад, у Патентній Заявці
ЄС ЕР 1 728 844.
Для кращої ілюстрації винаходу та для його практичного втілення нижче наведено деякі необмежуючі приклади.
Приклад 1: бродіння жирових дріжджів АНподозрогіаійт агогісит ОМ 29495
Нижче надано приклад отримання клітинної суспензії жирових дріжджів Кподозрогіадійт агогісит ОМ 29495. 200 мл середовища УЕРО (10 г/л дріжджового екстракту, 10 г/л пептодину, 20 г/л глюкози) попередньо стерилізували в автоклаві протягом 45 хв. при 80 "С та налили у колбу об'ємом 1 л.
Отриманий таким чином початковий ферментаційний бульйон було інокульовано зразком штаму жирових дріжджів Кподозрогіаїшт агогісит О5М 29495.
Цю прекультуру спочатку зберігали протягом доби при 30 "С з перемішуванням (200 об./хв.), а потім її перенесли у ферментер об'ємом 20 л, який містив 8 л середовища, яке містило (610) глюкозу (50 г/л), тверді частинки зерен кукурудзи (5 г/л), дріжджовий екстракт (2 г/л), КНгРО: (6 г/л), М95О:7Н2гО (0,3 г/л), Масі (0,06 г/л), СасСі»2Н2О (0,06 г/л) та було попередньо стерилізовано протягом 45 хв. при 80 "С.
Цю першу культуру у ферментері зберігали протягом 24 годин при 30 "С в аеробних умовах (продування стерильним повітрям зі швидкістю 1 л/хв) із застосуванням перемішування зі змінною швидкістю від 600 до 900 об./хв., яку змінювали з повітряним потоком для підтримання концентрації розчиненого кисню (0О») на межі 30 9о від значення насичення.
В кінці доби отриману клітинну суспензію з допомогою перистальтичної помпи перенесли у ферментер об'ємом 200 л, який містив 80 л середовища, яке містило глюкозу (80 г/л), тверді частинки зерен кукурудзи (8 г/л), дріжджовий екстракт (3,2 г/л), КНгРО: (6 г/л), МазО4:7НгО (0,3 г/л), Масі (0,06 г/л), СасСі»-2Н2О (0,06 г/л), (МНаА)250х (8 г/л) та було попередньо стерилізовано при 121 "С протягом 20 хв.
Цю другу культуру у ферментері також зберігали при 30 "С протягом 24 годин. в аеробних умовах (продування стерильним повітрям зі швидкістю 1 л/хв.) із застосуванням перемішування зі змінною швидкістю від 600 до 900 об./хв., яку змінювали з повітряним потоком для підтримання концентрації розчиненого кисню (0О2) на межі 30 9о від значення насичення та з показником рН, який дорівнював приблизно 5,0 та який у разі необхідності було доведено шляхом додавання кількох крапель розчину 5 М КОН або 10 95 Н25О»Х (об'єм/об'єм).
В кінці доби вміст залишкової глюкози було визначено відповідно до відомих в цій галузі процесів, наприклад із застосуванням ферментативного мембранного аналізатора, як-то біохімічного аналізатора У5І 2900, або з допомогою іонообмінної хроматографії (аніонообмінна хроматографія високої роздільної здатності з імпульсним амперометричним визначенням (НРАЕ-РАВБ) із застосуванням хроматографа біопех, обладнаного колонкою Сагрорас РА100 з градієнтом гідроксиду натрію та ацетатом натрію в якості протиіону.
Потім до ферментеру приєднали два резервуари та в один з них завантажили стерильний розчин глюкози (614 г/л), який подавали до ферментеру безперервно з середньою швидкістю потоку 1 л/год. відповідно до кінетики споживання мікроорганізму в культурі з метою підтримання в неї постійної концентрації глюкози на позначці 30 г/л. У другий резервуар налили стерильний розчин дріжджового екстракту (80 г/л) та (МНа)250О5 (200 г/л), який також подавали до ферментеру безперервно з середньою швидкістю потоку 400 мл/год.
Далі бродіння тривало у вищезазначених умовах ще 117 годин.
В кінці бродіння клітинну суспензію (загальною масою 187 кг) було вилучено з ферментеру та потім було піддано перевіркам на її концентрування. Отримана таким чином клітинна суспензія відрізнялася концентрацією біомаси, яка дорівнювала 112,3 г/л сухої маси клітин (йм/) або її суха масова частка складала 11,23 95. Масова частка загального вмісту ліпідів складала 51 95 клітинної сухої маси. Крім того, ця суспензія відрізнялася своєю в'язкістю, виміряною при 30" з допомогою мікровіскозиметру 5іаріпдег ЗМК 3000 від Апіоп Рааг (довжина імпульсу 1/1000), яка дорівнювала 4,1 мПаг»с, щільністю, яка складала 1,023 г/см3 при 30 "С та наявністю слизу.
Приклад 2 за винаходом: перевірка концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів КПподозрогідішт аогісчшт ЮЗМ 29495 з допомогою теплової обробки при 100 "С та підкислювальної обробки.
Цей приклад демонструє, що теплова обробка при 100 С разом з підкислювальною обробкою клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів є ефективною для досягнення адекватного концентрування цієї клітинної суспензії. 200 мл клітинної суспензії, отриманої відповідно із застосуванням процесу за попереднім
Прикладом 1, завантажили у автоклав об'ємом 500 мл та додали 0,4 г 96 95 Н25Ох (відповідно до концентрації кислоти, масова частка якої дорівнює 0,2 95 відносно об'єму суспензії)... рн отриманої суміші складав 3,2. Потім цю клітинну суспензію інкубували 8 годин при температурі 100 С зі слабким перемішуванням. В кінці цього процесу, після охолодження, було спостережено відокремлення прозорого нижнього шару та верхньої фази, яка складалася з відокремленої клітинної біомаси.
Після охолодження клітинну суспензію було вилучено з автоклаву та завантажено у контейнери для центрифугування з наступним центрифугуванням при 3000 х д протягом 10 хв. при температурі 20 "С із застосуванням центрифуги Тпепто-5сієпійіс ІЕС-СІ 318 Миїізреєа.
Наприкінці цього центрифугування, клітинну суспензію з багатими на ліпіди клітинами було піддано концентруванню у верхній "плаваючий" фазі, розташованої вище прозорого нижнього шару, який складався з ферментаційного бульйону. Після відокремлення цього прозорого нижнього шару було отримано 85,73 мл концентрованої клітинної суспензії, яка відрізнялася концентрацією біомаси, яка складала 26,2 95 сухої маси, що було адекватно для цілей (610) наступного процесу екстракції ліпідів.
Приклад З за винаходом: перевірка концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів Кподозрогідішт аогісит ЮО5М 29495 шляхом теплової обробки при температурі 110 "С та підкислювальної обробки.
Цей приклад демонструє, що теплова обробка при температурі 110 "С клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів разом з її підкислювальною обробкою також є ефективної для адекватного концентрування цієї клітинної суспензії. 200 мл клітинної суспензії, отриманої відповідно до процесу за попереднім Прикладом 1 завантажили у автоклав об'ємом 500 мл та додали 0,4 г 96 95 Н25Ох (відповідно до концентрації кислоти, масова частка якої дорівнює 0,2 95 відносно об'єму суспензії). РН отриманої суміші складав 3,2. Потім цю клітинну суспензію інкубували 8 годин при температурі 100 "С зі слабким перемішуванням. В кінці цього процесу, після охолодження, клітинну суспензію було вилучено з автоклаву та завантажено у контейнери для центрифугування з наступним центрифугуванням при 3000 х д протягом 10 хв. при температурі 20 7С із застосуванням центрифуги Тпегто-
Зсієпіййс ІЄС-СІ 318 Миїйізреєа.
Наприкінці центрифугування, клітинну суспензію з багатими на ліпіди клітинами було піддано концентруванню у верхній "плаваючий" фазі, розташованої вище прозорого нижнього шару, який складався з ферментаційного бульйону. Після відокремлення цього прозорого нижнього шару було отримано 80 мл концентрованої клітинної суспензії, яка відрізнялася концентрацією біомаси, яка складала 28,1 95 сухої маси, що було адекватно для цілей наступного процесу екстракції ліпідів.
Приклад 4 за винаходом: концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів ЕПодозрогідішт алогісит О5М 29495 шляхом теплової обробки при температурі 110 "С та підкислювальної обробки.
Цей приклад демонструє, що теплова обробка при температурі 110С разом з підкислювальною обробкою клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів, здійснена відповідно до попереднього Прикладу 3, є ефективною для адекватного концентрування цієї клітинної суспензії навіть у разі застосування у великому обсязі. 14,4 кг клітинної суспензії, отриманої відповідно до процесу за попереднім Прикладом 1 завантажили у автоклав об'ємом 20 л та додали 28,8 г 96 95 На5Ох (відповідно до концентрації кислоти, масова частка якої дорівнює 0,2 95 відносно об'єму суспензії). РН отриманої суміші складав 3.2. Потім цю клітинну суспензію інкубували 4 години при температурі 110 "С зі слабким перемішуванням. В кінці цього процесу, після охолодження, клітинну суспензію було повністю вилучено з автоклаву та завантажено у контейнери для центрифугування з наступним центрифугуванням при 3000 х д протягом 10 хв. при 20 "С на центрифузі ВесКтап Сошег Амапії /0-26ХР, яку було обладнано ротором з фіксованим кутом І А-8.1000.
Після центрифугування, клітинну суспензію з багатими на ліпіди клітинами було піддано концентруванню у верхній "плаваючий" фазі вищезазначеного прозорого нижнього шару, який складався з ферментаційного бульйону. Після відокремлення цього прозорого нижнього шару було отримано 7,7 кг концентрованої клітинної суспензії, яка відрізнялася концентрацією біомаси, яка складала 21,2 95 сухої маси, що було адекватно для цілей наступного процесу екстракції ліпідів.
Приклад 5 (визначення ліпідного вмісту нижнього шару, отриманого після теплової обробки при температурі 110 "С та підкислювальної обробки).
Цей приклад демонструє, що теплова обробка разом з підкислювальною обробкою дозволяє здійснити отримання клітинної суспензії, в якій клітини жирових дріжджів є інтактними, або, інакше кажучи, вона не викликає руйнування жирових клітин. 500 мл отриманого після центрифугування прозорого нижнього шару, отриманого відповідно до процесу за попереднім Прикладом 4 завантажили у покритий кожухом скляний реактор, обладнаний мішалкою та конденсатором. До зазначеного нижнього шару було додано 1 л чистого ізооктану (99,8 95) та температуру суміші довели до 80 "С, перемішуючи її, щоб досягти ідеального змішування цих двох незмішуваних рідких фаз. Потім цю суспензію інкубували ще протягом 2 годин. з цією ж саме температурою та таким саме перемішуванням. Далі її без перемішування охолодили до кімнатної температури з метою сприяння відокремленню нижньої водної фази від верхньої органічної фази, яку потім було відокремлено та зібрано у дистіляційну колбу, з якої потім вакуумним випарюванням було усунуто розчинник. Аналіз залишку, позосталого після випарювання розчинника підтвердив відсутність в ньому ліпідів.
Приклад 6 (порівняльний): перевірка концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів Кподозрогіаіїшт агогіснт ОМ 29495 з допомогою центрифугування.
Спосіб концентрування клітинної суспензії за винаходом було порівняно з технічними 10) прийомами, звичайно застосованими для практичного відновлення біомаси після бродіння з допомогою певних перевірок зразків клітинної суспензії, отриманих в результаті процесу за
Прикладом 1.
Цей приклад демонструє, що центрифугування є неефективним для адекватного концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів, якщо лише йому не передує обробка відповідно до способу за винаходом. 14 мл клітинної суспензії, отриманої як описано у Прикладі 1, завантажили у мірну центрифужну пробірку та піддали 5-хвилинному центрифугуванню у центрифузі Тпегпто-
Зсіепіййс ІЕС-СІ ЗК Мийізрееєа (3000 х 9, температура 20 "С). Наприкінці центрифугування було спостережено відокремлення 2 мл прозорого нижнього шару, тоді як позосталий об'єм (12 мл, який складав 85,7 95 у об'ємному відношенні) залишався непрозорим. Потім цю клітинну суспензію було піддано концентруванню, яке тривало 1,16 годин з досягненням концентрації біомаси, яка складала 13,195 сухої маси. Ця величина не була адекватною для цілей наступного процесу екстракції ліпідів.
Приклад 7 (порівняльний): перевірка концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів КПподозрогідішт аогісчшт ЮЗМ 29495 з допомогою теплової обробки та центрифугування.
Цей приклад демонструє, що застосування однієї лише звичайної теплової обробки ферментаційного бульйону перед центрифугуванням є неефективним для адекватного концентрування суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів. 200 мл клітинної суспензії, отриманої, як описано у Прикладі 1, завантажили в автоклав об'ємом 500 мл та інкубували при температурі 110 С протягом 4 годин зі слабким перемішуванням.
В кінці інкубування 14 мл підданої тепловій обробці клітинної суспензії завантажили у мірну центрифужну пробірку та піддали 5-хвилинному центрифугуванню на центрифузі Тпегпто-
Зсіепіййс ІЕС-СІ ЗК Мийізрееєа (3000 х 9, температура 20 "С). Наприкінці центрифугування було спостережено відокремлення 0,5 мл прозорого нижнього шару, тоді як позосталий об'єм (13,5 мл, який складав 96,4 95 у об'ємному відношенні) залишався непрозорим. Потім цю клітинну суспензію було піддано концентруванню, яке тривало 1,04 години з досягненням концентрації біомаси, яка складала 11,695 сухої маси. Ця величина не була адекватною для цілей наступного процесу екстракції ліпідів.
Приклад 8 (порівняльний): перевірка концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів ЕПпПодозрогідішт аогісит Ю5М 29495 шляхом додавання кислоти та центрифугування.
Цей приклад демонструє, що застосування однієї лише обробки кислотою без теплової обробки клітинної суспензії перед центрифугуванням є неефективним для адекватного концентрування цієї клітинної суспензії. 200 мл клітинної суспензії, отриманої, як описано у Прикладі 1, завантажили у колбу об'ємом 500 мл та додали 0,4 г 96 95 На25Ох (відповідно до концентрації кислоти, масова частка якої дорівнює 0,2 95 відносно об'єму суспензії). рН отриманої суміші складав 3,2. Потім цю колбу розташували у орбітальній мішалці (МРМ Іпвігитепів) з температурою, встановленій на позначці 30 "С та інкубували зі слабким перемішуванням протягом 8 годин.
В кінці інкубування 14 мл обробленої клітинної суспензії завантажили у мірну центрифужну пробірку та піддали 5-хвилинному центрифугуванню на центрифузі Тпегто-5сієпійіс ІЕС-СІ 31
Мийівреєй (3000 х 9, температура 20 7С). Наприкінці центрифугування жодної відокремленої фази не було спостережено, що свідчить про те, що здійснена обробка не є адекватною для отримання бажаного рівня концентрованої клітинної суспензії.
Приклад 9 (порівняльний): перевірка концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів Кподозрогідішт алогісшт ЮО5М 29495 з допомогою тангенціальної мікрофільтрації.
Цей приклад демонструє, що застосування тангенціальної мікрофільтрації, подібно до центрифугування, є неефективним для адекватного концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів, якщо лише вона не передує процесу обробки із застосуванням способу за винаходом. 93,6 кг клітинної суспензії, отриманої, як описано у Прикладі 1 було піддано тангенціальній мікрофільтрації із застосуванням мембранної роздільної установки Нуаго Аїг НАК Р119 в режимі "зворотної пульсації" та 0,2 мкм керамічних мембран.
Процес мікрофільтрації було здійснено протягом б годин при кімнатній температурі зі швидкістю потоку, яка складала 8000 л/год., внаслідок чого було отримано 40,5 кг ретентату (концентрованої клітинної суспензії) та 53,1 кг пермеату (позбавленого клітин бульйону для (610) бродіння). Отримана концентрована клітинна суспензія відрізнялася концентрацією біомаси, яка складала 195 г/л (суха масова частка складала 19,5 95). Це значення вже є практично адекватним для цілей подальшого процесу екстракції ліпідів.
Однак під час мікрофільтрації потік пермеату зменшився від початкового значення у 60 кггод. ом? до показника у приблизно 10 кггод.'-м?. Цей кінцевий потік пермеату є дуже повільним для зручного застосування у промисловому процесі.
Застосована клітинна суспензія містила слизову біомасу дріжджів Кподозрогідішт аогісит
ОМ 29495, яка імовірно й спричинила погіршення характеристик застосованої в процесі мікрофільтрації фільтрувальної мембрани. Навіть якщо фактично наприкінці процесу мікрофільтрації мембрани було відновлено відповідно за інструкціями виробника, промиваючи їх 150 л дистильованої води протягом приблизно 5 годин з наступним 5-годинним промиванням їх 60 л розчину МаоОН, масова частка якого складала 0,595 та кінцевим 5-годинним промиванням додатковими 150 л дистильованої води, потік пермеату не вдалося відновити до характеристичних значень для цієї мембрани.
Як висновок слід зазначити, що навіть якщо тангенціальна мікрофільтрація виявиться ефективною для концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів, цей спосіб практично не може бути застосовано у промисловому процесі через погіршення властивостей пристрою після одиничної обробки.
Приклад 10 (порівняльний): перевірка концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів КПодозрогідійт алогісит О5М 29495 з допомогою флокуляції.
Цей приклад демонструє, що флокуляція, подібно до центрифугування та тангенціальної мікрофільтрації, є неефективною для адекватного концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів, якщо лише вона не передує процесу обробки із застосуванням способу за винаходом. 200 мл клітинної суспензії, отриманої, як описано у Прикладі 1, завантажили у мірний циліндр об'ємом 500 мл та додали до неї катіонну флокуляційну суспензію на основі поліакриламіду (Вабхії 7еїадФф 9068Е5), причому це додавання було здійснено дуже повільно та з обережним перемішуванням при кімнатній температурі (20 "С); перебіг процесу флокуляції було спостережено після додавання 0,5 г флокулянту відповідно з дозуванням, яке складало приблизно 2.5 кг/м3 суспензії. Ця кількість вважалася надмірною для застосування у промислових процесах насамперед через те, що в будь-якому випадку ефективність обробки не була задовільною. Наприкінці додавання флокулянту було відокремлено фактично лише 50 мл прозорого ферментаційного бульйону з відповідним концентруванням біомаси у клітинній суспензії від початкової масової частки сухого матеріалу у 11,3 95 до 15,0 95. Ця величина також не була адекватною для цілей наступного процесу екстракції ліпідів.
Приклад 11: екстракція ліпідів з концентрованої клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів.
Цей приклад демонструє, що до отриманої з допомогою способу за винаходом концентрованої клітинної суспензії може бути корисним чином застосовано процес екстракції внутрішньоклітинних ліпідів. 5,9 кг концентрованої клітинної суспензії, отриманої у відповідності з попереднім Прикладом 4, що було відповідно 1,25 кг сухої клітинної маси, завантажили у автоклав об'ємом 20 л та інкубували 4 години. при 140 "С.
Наприкінці процесу обробки отриману суспензію завантажили у покритий кожухом скляний реактор об'ємом 30 л, обладнаний мішалкою та конденсатором.
Потім до суспензії було додано З л (що дорівнювало 2073 г) чистого ізооктану (99,8 Об), температуру було налаштовано до 80 "С та суміш перемішували таким чином, щоб гарантувати ідеальне перемішування цих двох незмішуваних фаз. Далі суміш інкубували ще протягом 2 год. в цих температурних умовах та умовах перемішування, після чого її охолодили до кімнатної температури (20 7"С) без перемішування з метою сприяння відокремленню підлеглої водної фази від верхньої органічної фази, яку було відокремлено та зібрано у відповідному контейнері.
Процес екстракції з ізооктаном, який тривав 2 год. з температурою 80 "С та перемішуванням потім було повторено ще два рази із застосуванням для кожного циклу тієї ж саме кількості нового ізооктану. Органічні фази всіх трьох процесів екстракції було об'єднано в одному контейнері з наступним випарюванням розчинника. Отриманий після усунення розчинника залишок було зважено та піддано аналізу з обчисленням ліпідного вмісту, який складав 620,3 г, що відповідало екстракційному виходу з масовою часткою 98 95 від загальної теоретичної кількості.
Приклад 12: бродіння жирових дріжджів Стуріососсив сигмайв АТОС 20509.
Цей наведений приклад стосується отримання клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів Стуріососси5 сигмай5 АТСС 20509. 200 мл середовища УЕРО (10 г/л дріжджового екстракту, 10 г/л пептодину, 20 г/л глюкози) попередньо стерилізували в автоклаві протягом 45 хв. при 80 С та завантажили у колбу об'ємом 1 л.
Отриманий таким чином початковий ферментаційний бульйон було інокульовано зразком штаму жирових дріжджів Стуріососси5 сигмайи5 АТСС 20509.
Потім культуру зберігали при одну добу при температурі 30 "С зі швидкістю перемішування 200 об./хв., після чого її завантажили у ферментер об'ємом 20 л, який містив б л середовища, яке містило 100 г/л глюкози, 5 г/л твердих частинок зерен кукурудзи, 2 г/л дріжджового екстракту, 5 г/л (МНа)»50О4, 6 г/л КНоРО»Х, 0,3 г/л М95О0:7Н2гО, 0,06 г/л Масі та 0,06 г/л
Сасі»"2НгО та було попередньо стерилізовано при 80 "С протягом 45 хв.
Цю культуру у ферментері зберігали при 30 "С протягом 24 год. в аеробних умовах (продування стерильним повітрям зі швидкістю 1 л/хв.) та перемішували зі змінною швидкістю від 600 до 900 об./хв., яку змінювали з повітряним потоком для підтримання концентрації розчиненого кисню (0О2) на межі 3090 від значення насичення та з показником рН, який дорівнював приблизно 5,0 та який у разі необхідності було доведено шляхом додавання кількох крапель розчину 5 М КОН або 10 95 Не5Ох (об'єм/об'єм).
В кінці доби до середовища у ферментері було додано ще 32,5 г (МН4а)2505 та 200 мл рідкого кукурудзяного екстракту. Потім до ферментеру було приєднано резервуар, який містив стерильний розчин глюкози з концентрацією 600 г/л та цей розчин почали безперервно подавати у ферментер зі змінною швидкістю потоку в межах 50-100 мл/год., відповідно до кінетики споживання мікроорганізму у культурі, підтримуючи таким чином постійну концентрацію глюкози в культурі на позначці 30 г/л.
Далі процес бродіння тривав у вищезазначених умовах протягом загального часу, який складав 140 годин.
Наприкінці цього процесу з ферментеру було вилучено клітинну суспензію загальною кількістю 8,6 л, яка відрізнялася концентрацією біомаси, яка складала 118 г/л сухої маси продукту або 11,8 95 сухої маси та загальним вмістом ліпідів, масова частка якого складала 66 95 відносно сухої маси клітин. Крім того, ця клітинна суспензія відрізнялася своєю в'язкістю, виміряною при 30 "С з допомогою мікровіскозиметру 5іаріпдег ЗМК 3000 від Апіоп Рааг (довжина імпульсу 1/1000), яка дорівнювала 160 мПа:с.
Приклад 13 за винаходом: концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів Стуріососси5 сигмаєи5 АТСС 20509 шляхом теплової обробки при температурі 110 "С та підкислювальної обробки.
Цей приклад демонструє, що теплова обробка при температурі 110С разом з підкислювальною обробкою за винаходом є також ефективною для адекватного концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів Стуріососсив ситмайв АТС 20509. 200 мл клітинної суспензії, отриманої відповідно до процесу за попереднім Прикладом 12 завантажили у автоклав об'ємом 500 мл та додали до неї 0,4 г 96 95 На25О»х (відповідно до концентрації кислоти, масова частка якої дорівнює 0,295 відносно об'єму суспензії). рн отриманої суміші складав 3. Потім цю клітинну суспензію інкубували 4 години при температурі 110 "С. В кінці цього процесу, після охолодження, було виміряно в'язкість обробленої суспензії при 30 "С з допомогою мікровіскозиметру Зіаріпдег ЗМК 3000 від Апіоп Рааг (довжина імпульсу 1/1000), яка дорівнювала 18 мПа:с.
Далі клітинну суспензію було вилучено з автоклаву, завантажено у центрифужні контейнери та піддано центрифугуванню при 3000 х д протягом 10 хв. при 20 "С на центрифузі ВесКтап
Соццег Амапії .-26ХР, яку було обладнано ротором з фіксованим кутом ЛІ А-8.1000.
Наприкінці процесу центрифугування та відокремлення прозорого нижнього шару було отримано 80 мл концентрованої клітинної суспензії, яка відрізнялася концентрацією біомаси, суха масова частка якої складала 29,5 95, що було адекватно для цілей наступного процесу екстракції ліпідів.
Визначення ліпідного вмісту було здійснено у прозорому нижньому шарі, як описано у попередньому Прикладі 5. Також в цьому разі, здійснений аналіз залишку виявив відсутність в цьому шарі ліпідів, підтверджуючи те, що спосіб концентрування за винаходом дозволяє здійснити отримання клітинної суспензії, в якій клітини жирових дріжджів є інтактними, тобто, інакше кажучи, цей спосіб не призводить до руйнування клітин. бо
Claims (12)
1. Спосіб концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів, який полягає у застосуванні наступних операцій: а) культивування цих жирових дріжджів у ферментаційному бульйоні, яке приводить до отримання клітинної суспензії, яка містить цю слизову біомасу; р) піддання отриманої на операції а) клітинної суспензії тепловій обробці з температурою 95- 120 С та кислотній обробці, що приводить до отримання обробленої клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу з інтактними клітинами жирових дріжджів; с) концентрування отриманої на операції Б) обробленої клітинної суспензії, яке полягає у застосуванні операції відокремлення принаймні частини цього ферментаційного бульйону з отриманням концентрованої клітинної суспензії.
2. Спосіб за п. 1, в якому у зазначеній операції р) вказана теплова обробка передує вказаній кислотній обробці.
3. Спосіб за п. 1 або п. 2, в якому вказані жирові дріжджі вибрано з групи, яка складається з Матоміа, Сапаїда, Стуріососсив, Тіісповрогоп, Тгідопорзіз, Тогціорзіз, Ііротусев, Рісніа, АПодоїюгціа, Аподозрогідінт ота їх консорціуму, переважно Тгіспозрогоп, Стуріососсив, ВПодозрогіаійт або їх консорціуму.
4. Спосіб за будь-яким з пп. 1-3, в якому ці дріжджі накопичують ліпіди з сухою масовою часткою, яка складає 25 95 або більше, переважно 40 95 або більше, більш переважно 60 95 або більше, ще більш переважно 70 95 або більше.
5. Спосіб за будь-яким з пп. 1-4, в якому вказаний ферментаційний бульйон отримано із застосуванням гідролізу лігноцелюлозних біомас.
6. Спосіб за будь-яким з пп. 1-5, в якому вказану теплову обробку здійснюють з температурою 100-110 76.
7. Спосіб за будь-яким з пп. 1-6, в якому вказану теплову обробку здійснюють протягом часу 3- 12 годин та переважно здійснюють протягом 4-8 годин.
8. Спосіб за будь-яким з пп. 1-7, в якому рН клітинної суспензії протягом вказаної кислотної обробки складає 1,5-6,0 та переважно складає 2,0-4,5.
9. Спосіб за будь-яким з пп. 1-84, в якому вказану кислотну обробку здійснюють шляхом додавання органічної або неорганічної кислоти Бронстеда, переважно неорганічної кислоти.
10. Спосіб за п. 9, в якому цю кислоту вибрано з групи, яка містить оцтову кислоту, соляну кислоту, азотну кислоту, фосфорну кислоту, сірчану кислоту, борну кислоту, фтористоводневу кислоту, бромистоводневу кислоту, молочну кислоту, мурашину кислоту, пропіонову кислоту або їх суміші, переважно сірчану кислоту.
11. Спосіб за будь-яким з пп. 1-10, в якому зазначену операцію с) концентрування клітинної суспензії здійснюють за допомогою спонтанного осадження або під дією сил гравітації, за допомогою сифонування, випарювання у вакуумі, ліофілізації, флокуляції, мікрофільтрації або центрифугування, переважно центрифугування.
12. Спосіб за будь-яким з пп. 1-11, в якому в операції с), під час операції відокремлення принаймні частини ферментаційного бульйону, суха масова частка біомаси у вказаній отриманій клітинній суспензії складає 19,0-35,0 956, переважно 21,0-30,0 Об.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ITUB2015A002958A ITUB20152958A1 (it) | 2015-08-06 | 2015-08-06 | Metodo per concentrare una sospensione cellulare comprendente una biomassa mucillaginosa di lieviti oleaginosi. |
| PCT/IB2016/054734 WO2017021931A1 (en) | 2015-08-06 | 2016-08-05 | Method for concentrating a cell suspension comprising a mucilaginous biomass of oleaginous yeasts |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA123436C2 true UA123436C2 (uk) | 2021-04-07 |
Family
ID=54843898
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201801047A UA123436C2 (uk) | 2015-08-06 | 2016-08-05 | Спосіб концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10961497B2 (uk) |
| EP (1) | EP3331985B1 (uk) |
| CN (1) | CN108026502B (uk) |
| BR (1) | BR112018002385A2 (uk) |
| ES (1) | ES2879988T3 (uk) |
| IT (1) | ITUB20152958A1 (uk) |
| PL (1) | PL3331985T3 (uk) |
| UA (1) | UA123436C2 (uk) |
| WO (1) | WO2017021931A1 (uk) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT201700071514A1 (it) | 2017-06-27 | 2018-12-27 | Versalis Spa | Procedimento per la produzione di lipidi da biomassa derivante da piante di guayule |
| IT201700081383A1 (it) * | 2017-07-18 | 2019-01-18 | Versalis Spa | Variante di lievito oleaginoso e suo utilizzo per la produzione di lipidi. |
| AU2020204967B2 (en) * | 2019-01-03 | 2022-10-27 | Corbion Biotech Inc. | Process for manufacturing lysed cell suspension |
| CN111690587B (zh) * | 2019-03-13 | 2022-10-25 | 上海凯赛生物技术股份有限公司 | 一种离心筛选具有高含油率油脂酵母菌株的方法及其应用 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2302065A1 (en) | 2000-01-19 | 2011-03-30 | Martek Biosciences Corporation | Solventless extraction process |
| EP2341127B1 (en) | 2000-01-28 | 2015-05-27 | DSM IP Assets B.V. | Enhanced production of lipids containing polyenoic fatty acids by high density cultures of eukaryotic microbes in fermentors |
| US20060264684A1 (en) | 2005-05-19 | 2006-11-23 | Petri John A | Production of diesel fuel from biorenewable feedstocks |
| IT1393929B1 (it) * | 2008-12-18 | 2012-05-17 | Eni Spa | Procedimento per la produzione di bio-olio da biomassa |
| US9296985B2 (en) | 2009-03-10 | 2016-03-29 | Valicor, Inc. | Algae biomass fractionation |
| IT1403244B1 (it) * | 2010-10-22 | 2013-10-17 | Eni Spa | Procedimento per la produzione di lipidi da biomassa. |
| CN104508113A (zh) * | 2012-06-29 | 2015-04-08 | Bp生物燃料英国有限公司 | 从微生物中分离可再生物质的方法 |
-
2015
- 2015-08-06 IT ITUB2015A002958A patent/ITUB20152958A1/it unknown
-
2016
- 2016-08-05 WO PCT/IB2016/054734 patent/WO2017021931A1/en active Application Filing
- 2016-08-05 UA UAA201801047A patent/UA123436C2/uk unknown
- 2016-08-05 ES ES16757968T patent/ES2879988T3/es active Active
- 2016-08-05 CN CN201680054505.3A patent/CN108026502B/zh active Active
- 2016-08-05 US US15/749,824 patent/US10961497B2/en active Active
- 2016-08-05 PL PL16757968T patent/PL3331985T3/pl unknown
- 2016-08-05 EP EP16757968.9A patent/EP3331985B1/en active Active
- 2016-08-05 BR BR112018002385A patent/BR112018002385A2/pt unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2879988T3 (es) | 2021-11-23 |
| US10961497B2 (en) | 2021-03-30 |
| BR112018002385A2 (pt) | 2018-09-11 |
| EP3331985A1 (en) | 2018-06-13 |
| ITUB20152958A1 (it) | 2017-02-06 |
| CN108026502B (zh) | 2021-10-01 |
| US20180223248A1 (en) | 2018-08-09 |
| WO2017021931A1 (en) | 2017-02-09 |
| CN108026502A (zh) | 2018-05-11 |
| PL3331985T3 (pl) | 2021-10-25 |
| EP3331985B1 (en) | 2021-04-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10336965B2 (en) | Process for the extraction of lipids and sugars from algal biomass | |
| UA123436C2 (uk) | Спосіб концентрування клітинної суспензії, яка містить слизову біомасу жирових дріжджів | |
| EP2630248B1 (en) | Process for the production of lipids from biomass | |
| US20130309757A1 (en) | Method and apparatus for producing cells and fat soluble materials by cell culture | |
| JP6265407B2 (ja) | 焼酎廃水を培地として使用するスクワレン産生藻類の培養方法 | |
| EP3080288B1 (en) | Method of processing lignocellulosic material using a cationic compound | |
| US9885069B2 (en) | Process for the production of lipids from biomass | |
| ES2719116T3 (es) | Método para producir aceite unicelular a partir de materiales lignocelulósicos | |
| EP3134535B1 (en) | Process for the production of lipids from biomass employing oleaginous microorganisms | |
| MX2014011979A (es) | Microorganismos bajos en polisacaridos para la produccion de biocombustibles y otros materiales renovables. | |
| RU2536973C1 (ru) | Способ получения бактериальной целлюлозы | |
| KR101251191B1 (ko) | 세포배양을 통한 세포 및 지용성물질의 생산 방법 및 장치 | |
| RU2440416C1 (ru) | Способ получения биодизельного топлива | |
| KR101446392B1 (ko) | 세포배양을 통한 세포 및 지용성물질의 생산 방법 | |
| JPH01174392A (ja) | 抗生物質の製造方法 | |
| WO2018193468A1 (en) | Extractive production of hydrophobic metabolites using oleaginous microbes | |
| KR20110138922A (ko) | 미세조류 배양을 통한 고밀도 미세조류 및 농축된 지용성물질 생산 방법 및 장치 | |
| BR112016024606B1 (pt) | Processo para a produção de lipídeos a partir de biomassa empregando levedura oleaginosa |