UA113838C2 - ANTIBODY Binding Mesothelin and Immunoconjugate - Google Patents

ANTIBODY Binding Mesothelin and Immunoconjugate Download PDF

Info

Publication number
UA113838C2
UA113838C2 UAA201309049A UAA201309049A UA113838C2 UA 113838 C2 UA113838 C2 UA 113838C2 UA A201309049 A UAA201309049 A UA A201309049A UA A201309049 A UAA201309049 A UA A201309049A UA 113838 C2 UA113838 C2 UA 113838C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antibody
mesothelin
shi
shk
still
Prior art date
Application number
UAA201309049A
Other languages
Ukrainian (uk)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=45498116&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA113838(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed filed Critical
Publication of UA113838C2 publication Critical patent/UA113838C2/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6869—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of the reproductive system: ovaria, uterus, testes, prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1027—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against receptors, cell-surface antigens or cell-surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57442—Specifically defined cancers of the uterus and endometrial
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57449—Specifically defined cancers of ovaries
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants

Abstract

Винахід стосується антитіла, яке зв’язує мезотелін, фармацевтичної композиції, що його містить, та імунокон'югата.The invention relates to an antibody that binds mesothelin, the pharmaceutical composition containing it and the immunoconjugate.

Description

' ' (54) АНТИТІЛО, ЯКЕ ЗВ'ЯЗУЄ МЕЗОТЕЛІН, ТА ІМУНОКОН'ЮГАТ (57) Реферат: - - : - - - щ д у «яке звязує мезотелиін, фармацевтичної Композиції, що ого - - '' ' (54) MESOTHELIN-BINDING ANTIBODY AND IMMUNOCUNAGATE (57) Abstract: - - : - - - mesothelin-binding compound of the pharmaceutical composition that - - '

МІСТИТЬ, та імунокоОн югата.CONTAINS, and immunocoOn yugata.

ВІКНА АЄ демноветреє вфектуманість в моделі коснотравсновнтата зечника ек седуілові ЕВ ЯКЕ В ІХАЖІ Ки зеWINDOWS AE demnovetrates the effectiveness in the model of ossification of the pupil ekseduilovi EV YAKE IN IHAJI Ky ze

НЕОКІЗ С мене СМ М, МКК Єва СакіхоїNEOKIZ S me SM M, MKK Eva Sakihoya

ЕІ ск фіаевссенне значень оо мих пуханиВEI sk fiaevssenne values oo myh pukhanyB

Ге зних зернові зніс тин и я еслокдеетютюх їх: ц ї ї х Її ш ТЕ ста Ка о Я ПЕ ХХ і : ! Я ; й п днина КА : ї ї СК ІВЕЗКМЕЇ В ВО сс «р шо пен пн нин ен Бонн Сккляннянннн Ех виI have been outlined by the grain and I eslodeetuyukh: this is a hundred and a half -ha:! I ; y p dnina KA : y y SK IVEZKMEI V VO ss «r sho pen pn nin en Bonn Skklyannnnn Eh you

Рі : і Не го КО мRi : and Ne ho KO m

ОК: і і Й ож ож Еко ве Ко оOK: i i Y oz oz Eko ve Ko o

Кк ло ванн св нн нн нн нн Ве КнKk lo vann sv nn nn nn nn Ve Kn

Е! ї ї І: ле гу а ВIS! и и I: le gu a V

КІ і і З С хі ВО КокKI i i Z S hi VO Kok

ЕН у Н бах жу ях 3 ОК НК я ЗБК ж пеучяріни фінти й ак ВВІВ ж : ІЗ 1 Н х Ж мк 3 їх В З КОПEN in N bah zhu yah 3 OK NK i ZBK z peucharyny feints and ac VVIV same: ИZ 1 N x Zh mk 3 ih V Z KOP

Ж КІ 1 ї ї й ЖІ: ГИ ІЧ ї г х я ї о р ооо ооЖ КИ 1 и и ЖИ: ГИ Чи г х я и о r ооо оо

ЛЕ Н хх: ї ї в Кі ни ІЗ МУ х ПИLE N xx: і і в Кі ни ИЗ MU х PI

ЖЕ они и нин нн ни нн не нн 3 5 В ї ї ЗІTHERE ARE THEY AND NN NN NN NN NN 3 5 В и и ЗИ

Я КЕ: і 1 Ї ви і ши ії Н і Ї і МОМ - хм ї ї КЕ Н т У ї х : я ППП АВ ш з рт В ун а; і НН. т В! Я я р Я НИ ЯН х 3 т каски В ї (й и БУ І м КУ х УК КК ЗВУ зу нн нн нн нн ЕЕ Б х 5I KE: i 1 Y y i shi yy N i Y i MOM - hmm y y KE N t U y y h: I PPP AV sh z rt V un a; and NN. t V! I I r I NI YAN x 3 t helmets V y (y i BU I m KU x UK KK ZVU zu nn nn nn nn EE B x 5

Е К: і Віки Ж РР: Х х яE K: and Vicky Z RR: X x i

Й ТІ ї К КУСЙ сит А ЕЕ Її : зх З оно вх мо ОВ нн нини ші нн нн нн М ше 05 ТО х ВОY TI i K KUSY sit A EE Her: zh Z ono ukh mo OV nn nny shi nn nn nn M she 05 TO x VO

Ж ті : КІ я і рр» ще шуй Ї ках ка о і ії Грерця дозThe same: KI i i rr» still shuy Yi kah ka o i ii Grerts doz

К- ЕК ння ша ок нн нн в в В В Мами КУ -е її ей є ОО ІЖ : кіK- EK nya sha ok nn nn v v V V Mami KU -e her ey is OO IZH : ki

КІ ще ай я ї її ці 5 схе кі ших ши ї Е К ї м пи аску й КК ЦКKI still ay i yi her these 5 sheke ki shih shi yi E K i m pi asku and KK CC

КЕ Б і ей фронті мак ЛЕНKE B i ey fronti mak LEN

ЗУ зх ния ие нн и п В НН пе ЕТ ДУХ МКК Во пиву ЕZU zkhnia ie nn i p V NN pe ET DUH MKK Vo pivu E

Її а Ум есводк я ре й ме Н 14 пеніс і З Ук к АМКУ КТ. хе ник ел, вав и п МО зей КК ТВ МЕТ, ВЕК ТВ КО їТ Шон ни нн а МВА х Ті ни и МК КИ ВХHer a Um esvodk i re y me H 14 penis and Z Uk k AMKU KT. he nik el, vav i p mo zey KK TV MET, VEK TV KO iT Sean ny nn a MBA x Ti ny i MK KY VH

Кі Н ее КО сид од вої сю 3 пом ік т ин ек сс З ВИВ СНВ ВСЯ АМКУ й І ди За Яд Ж еВ дуг, ВиТеКЕН КЕKi N ee KO sid od voi syu 3 pomik t in ekss Z VIV SNV VYA AMKU y I dy For YAD J eV dug, EXPOSED KE

День пу, 5 Увіку, ДИВPu Day, 5 In age, SEE

М ій : чук 7 яння ро кр назеанвинх ант мк а - Ж дою я КУMine: Chuk 7 year old nazeanvinkh ant mka - I'm waiting for KU

Чнг. яхChng. yah

Споріднені заявкиRelated applications

По даній заявці відповідно до 35 ОБС 119(е) заявляється пріоритет попередньої заявки Мо 61/459962, поданої 20 грудня 2010 року, повний опис якої включений в цей документ як посилання.This application, in accordance with 35 OBS 119(e), claims the priority of the previous application Mo 61/459962, filed on December 20, 2010, the full description of which is incorporated herein by reference.

Список послідовностейList of sequences

Дана заявка містить список послідовностей, який був поданий на розгляд в форматі АЗСІЇ за допомогою ЕР5-ММер і включений в повному обсязі як посилання в даний документ. Вказана копія АЗСІЇ, створена 29 листопада 2011 р., названа РА4А532К1-М/О Хі ії має розмір, який дорівнює 53169 байт.This application contains a sequence listing that was submitted for consideration in ASIA format using EP5-MMer and is incorporated in its entirety by reference herein. The specified copy of AZSIA, created on November 29, 2011, named РА4А532К1-М/О Хиии has a size equal to 53169 bytes.

Галузь винаходуField of invention

Даний винахід стосується антитіл проти мезотеліну і імунокон'югатів, і способів їх застосування.This invention relates to antibodies against mesothelin and immunoconjugates, and methods of their use.

Передумови створення винаходуPrerequisites for creating an invention

Мезотелін є глікопротеїном клітинної поверхні, який експресується в нормі в мезотелії (очеревині, перикарді і плеврі). Однак експресія мезотеліну значно підвищується в різних типах пухлин. Мезотелін взаємодіє із МИОС1б (який називається ще СА125), муциноподібним глікопротеїном, раніше ідентифікованим як антиген пухлини яєчника. МОС16 має позаклітинний домен, що містить принаймні 14000 залишків і характеризується тандемними повторами, розміром 156 амінокислот кожний, які називають муциновими повторами (див., наприклад,Mesothelin is a cell surface glycoprotein that is normally expressed in the mesothelium (peritoneum, pericardium, and pleura). However, mesothelin expression is significantly increased in various types of tumors. Mesothelin interacts with MYOS1b (also called CA125), a mucin-like glycoprotein previously identified as an ovarian tumor antigen. MOC16 has an extracellular domain containing at least 14,000 residues and is characterized by tandem repeats of 156 amino acids each, called mucin repeats (see, e.g.,

О'Віїєп еї а!., Титоиг Віо!. 22:348-366 (2001); Міп еї аї., у. Віої. Спет. 276:27371-27375 (2001).)O'Viiep ei a!., Titoig Vio!. 22:348-366 (2001); Mip ei ai., u. Vioi Spent 276:27371-27375 (2001).)

Передбачають, що взаємодія між мезотеліном і МОС16 грає роль в адгезії і метастазуванні гетеротипових клітин. (Див., наприклад, Китр еї аї., у. ВіоЇ. Снет. 279:9190-9198 (2004)).It is assumed that the interaction between mesothelin and MOS16 plays a role in the adhesion and metastasis of heterotypic cells. (See, for example, Kitr ei ai., y. BioYi. Snet. 279:9190-9198 (2004)).

Мезотелін синтезується у вигляді білкового попередника розміром 71 кДа, зріла частина якого експресується на клітинній поверхні. Цей білковий попередник протеолітично розщеплюється фурином на компонент, що від'єднується, розміром 31 кДа (який називається мегакаріоцитарним потенціюючим фактором, або МРЕ) і компонент мезотеліну розміром 40 кДа.Mesothelin is synthesized as a 71 kDa protein precursor, the mature part of which is expressed on the cell surface. This protein precursor is proteolytically cleaved by furin into a 31 kDa dissociable component (called megakaryocytic potentiating factor, or MPE) and a 40 kDa mesothelin component.

Останній компонент може залишатися пов'язаним із клітинною поверхнею через ОРІ-зв'язок, але також може бути відщеплений протеолітичним способом.The latter component can remain associated with the cell surface through an ORI bond, but can also be cleaved by a proteolytic method.

У даній галузі існує гостра необхідність в речовинах, дія яких націлена на мезотелін для діагностики і лікування пов'язаних із мезотеліном патологічних станів, таких як рак. Даний винахід заповнює цей пробіл і має інші переваги.There is an urgent need in the art for substances that target mesothelin for the diagnosis and treatment of mesothelin-related pathological conditions, such as cancer. The present invention fills this gap and has other advantages.

Суть винаходуThe essence of the invention

Даний винахід стосується антитіл проти мезотеліну і імунокон'югатів, і способів їх застосування.This invention relates to antibodies against mesothelin and immunoconjugates, and methods of their use.

У одному із аспектів представлено виділене антитіло, яке зв'язується з мезотеліном, де антитіло вибране із: (і) антитіла, яке зв'язує епітоп ЗЕО ІЮО МО:43, який містить Е153 і 0174, і яке в деяких випадках має одну або декілька наступних характеристик: (а) не виявляє зниженого зв'язування із глікозилованими формами мезотеліну; (Б) не блокує зв'язування мезотеліну ізIn one aspect, there is provided an isolated antibody that binds to mesothelin, wherein the antibody is selected from: (i) an antibody that binds an epitope of ZEO IUO MO:43, which contains E153 and 0174, and which in some cases has one or several of the following characteristics: (a) does not show reduced binding to glycosylated forms of mesothelin; (B) does not block the binding of mesothelin to

МИиСТ16 і (с) зв'язує мезотелін із афінністю «5 нМ; (ії) антитіла, яке зв'язує епітоп 5ЕО ІЮ МО:43, який містить Е211, і яке в деяких випадках має одну або декілька наступних характеристик: (а) не блокує зв'язування мезотеліну із МОС19; і (Б) зв'язує мезотелін із афінністю «5 нМ; і (іїї) антитіла, яке зв'язує епітоп в межах амінокислот 1-131 5ЕО ІЮ МО:43 і зв'язує мезотелін із афінністю х5 НМ. У певних варіантах здійснення винаходу антитіло є моноклональним антитілом. У певних варіантах здійснення винаходу антитіло є антитілом людини, гуманізованим або химерним антитілом. У певних варіантах здійснення винаходу антитіло є фрагментом антитіла, яке зв'язує мезотелін. У певних варіантах здійснення винаходу мезотелін є мезотеліном людини із послідовністю ЗЕО ІЮ МО:43.MyiST16 and (c) binds mesothelin with an affinity of 5 nM; (ii) an antibody that binds the epitope 5EO IU MO:43, which contains E211, and which in some cases has one or more of the following characteristics: (a) does not block the binding of mesothelin to MOC19; and (B) binds mesothelin with an affinity of 5 nM; and (iii) an antibody that binds an epitope within amino acids 1-131 of 5EO IU MO:43 and binds mesothelin with an affinity of x5 NM. In certain embodiments of the invention, the antibody is a monoclonal antibody. In certain embodiments of the invention, the antibody is a human, humanized, or chimeric antibody. In certain embodiments of the invention, the antibody is an antibody fragment that binds mesothelin. In certain embodiments of the invention, the mesothelin is human mesothelin with the sequence ZEO IU MO:43.

У певних варіантах здійснення винаходу антитіло містить: (а) () НМАК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:22, (ії) НМК-1І-3, що містить амінокислотну послідовністьIn certain variants of implementation of the invention, the antibody contains: (a) () NMAK-NZ containing the amino acid sequence BZEO IU MO:22, (iii) NMK-1I-3 containing the amino acid sequence

ЗЕО ІО МО:19, і (ії) НМАК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:21; (Б) (ї) НМК-ZEO IU MO:19, and (iii) NMAK-H2 containing the amino acid sequence ZEO IU MO:21; (B) (i) NMK-

НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЕС ОО МО:39, (ії) НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІО МО:35 і (ії) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:37; або (с) НМАК-НЗ, НМУВ-ІЇ3 ї НМК-Н2 антитіла, продукованого гібридомою 1923 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464. У певних варіантах здійснення винаходу антитіло містить (а) () НМАК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮНЗ, containing the amino acid sequence ES ОО MO:39, (ii) NMK-I3, containing the amino acid sequence ЗЕ ИО MO:35 and (ii) NMK-Н2, containing the amino acid sequence ZEO IЮ MO:37; or (c) NMAK-NZ, NMUV-II3 and NMK-H2 antibody produced by hybridoma 1923 with ATCC identification number PTA-11464. In certain embodiments of the invention, the antibody contains (a) () NMAC-NI containing the amino acid sequence ZEO IU

МО:20, (ії) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:21, і (ії) НМК-НЗ що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:22; (Б) (ї) НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО:З6, (ії) НМЕ-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО:37, і (ії) НМЕ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЖЕО ІЮ МО:39; або (с) НУВ-НІ, НУВ-Н2 і бо НУВ-НЗ антитіла, продукованого гібридомою 19С3 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-MO:20, (ii) NUV-H2 containing the amino acid sequence 5EO IYU MO:21, and (ii) NMK-NZ containing the amino acid sequence ХЕО IYU MO:22; (B) (i) NMA-NI, containing the amino acid sequence ZEO IJU MO:36, (ii) HME-H2, containing the amino acid sequence ZEO IJU MO:37, and (ii) NME-NZ, containing the amino acid sequence ZEO IU MO:39; or (c) NUV-NI, NUV-H2 and bo NUV-NZ antibody produced by hybridoma 19C3 with identification number ATCC PTA-

11464. У одному із таких варіантів здійснення винаходу антитіло містить (а) () НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБО ІЮ МО:20, (її) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:21, (ії) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ11464. In one of these variants of the invention, the antibody contains (a) () NME-NI, containing the amino acid sequence ZEBO IU MO:20, (its) NMK-H2, containing the amino acid sequence ZEO IU MO:21, (ii) NMK-NZ containing the amino acid sequence of ZEO IU

МО:22, (ім) НУВ-І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:17, (м) НМЕК-І2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІЮО МО:18, ї (м) НУВ-ІЗ3, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:19; (Б) () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕ ІЮMO:22, (im) NUV-I1, containing the amino acid sequence ZEO IU MO:17, (m) NMEK-I2, containing the amino acid sequence 5ES IYUO MO:18, and (m) NUV-IZ3, containing the amino acid sequence BEO IU MO:19; (B) () NMA-NI containing the amino acid sequence BE IU

МО:З6, (її) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:37, (ії) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:39, (ім) НУМВ-І1, що містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:33, (м) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО:34, і (м) НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:35; або (с) НМЕ-НІ, НУВ-Н2,MO:Z6, (its) NUV-H2, containing the amino acid sequence of ZEO IU MO:37, (ii) NMK-NZ, containing the amino acid sequence of ZEO IU MO:39, (im) NUMV-I1, containing the amino acid sequence of BZEO IU MO:33, (m) NMK-12, containing the amino acid sequence ZEO IUO MO:34, and (m) NMK-I3, containing the amino acid sequence ZEO IU MO:35; or (c) NME-NI, NUV-H2,

НМВ-НЗ, НМУВ-І1, НМУВ-І2 і НМВ-Ї3 антитіла, продукованого гібридомою 19023 |із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464. У додатковому варіанті здійснення винаходу антитіло містить (ї) НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:20, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:21, (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:22, (ім) НМК-І/1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮNMV-NZ, NMV-I1, NMV-I2 and NMV-I3 antibodies produced by hybridoma 19023 | with the identification number ATCC PTA-11464. In an additional embodiment of the invention, the antibody contains (i) NMA-NI, containing the amino acid sequence ZEO IU MO:20, (ii) NMA-H2, containing the amino acid sequence BEO IU MO:21, (ii) NMA-NZ, containing amino acid sequence of ZEO IU MO:22, (im) NMK-I/1, containing the amino acid sequence of ZEO IU

МО:17, (м) НУВ-І2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:18, і (мі) НМК-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО:19, і додатково, який містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить послідовність ЕК2 каркасної ділянки 5ЕО ІЮ МО:25 і ЕКЗ послідовність ЗЕО ІЮ МО:27.MO:17, (m) NUV-I2, containing the amino acid sequence 5EO IYU MO:18, and (mi) NMK-IZ, containing the amino acid sequence ZEO IYUO MO:19, and additionally, which contains the variable domain of the light chain, which contains the EK2 sequence of the framework section 5EO IU MO:25 and the ECZ sequence ZEO IU MO:27.

У певних варіантах здійснення винаходу антитіло містить (а) (|) НМВ-Ї1, що містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО:17, (ії) НМК-12, що містить амінокислотну послідовністьIn certain embodiments of the invention, the antibody contains (a) (|) NMV-Y1, containing the amino acid sequence BZEO IU MO:17, (ii) NMK-12, containing the amino acid sequence

ЗЕО ІО МО:18, і (ії) НМА-І-3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:19; (Б) (ї) НМА-ZEO IU MO:18, and (ii) NMA-I-3, containing the amino acid sequence ZEO IU MO:19; (B) (i) NMA-

ЇЇ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕСО 10 МО:33, (її) НМУВ-І2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО 10 МО:34, і (її) НМК-ІЇЗ3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:35; або (с) НМК-І1, НМВ-І2 ї НМАК-ІЗ антитіла, продукованого гіоридомою 19С3 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464. У одному із таких варіантів здійснення винаходу антитіло містить НМК-11, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮHer, containing the amino acid sequence ZESO 10 MO:33, (her) NMUV-I2, containing the amino acid sequence ZEO 10 MO:34, and (her) NMK-IIZ3, containing the amino acid sequence 5EO IYU MO:35; or (c) NMK-I1, NMV-I2 and NMAK-IZ antibody produced by hyoridoma 19C3 with ATCC identification number PTA-11464. In one of these variants of implementation of the invention, the antibody contains NMK-11 containing the amino acid sequence zEO IU

МО:17, НМВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:18, ії НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:19, і додатково містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить послідовність ЕК2 каркасної ділянки 5ЕО ІЮО МО: 25 і ЕКЗ послідовністьMO:17, NMV-12, containing the amino acid sequence of ZEO IU MO:18, and NMK-I3, containing the amino acid sequence of ZEO IU MO:19, and additionally containing the variable domain of the light chain, containing the sequence of EK2 of the framework region 5EO IUO MO : 25 and IVF sequence

ЗЕО ІЮ МО:27.ZEO IU MO:27.

У певних варіантах здійснення винаходу антитіло містить (а) послідовність МН, яка принаймні на 95 95 ідентична амінокислотній послідовності «ЕС ІЮ МО:8; (Б) послідовність МІ, яка принаймні на 95 95 ідентична амінокислотній послідовності «ЕО ІЮ МО:4; (с) послідовністьIn certain embodiments of the invention, the antibody contains (a) a MH sequence that is at least 95 to 95 identical to the amino acid sequence "EC IU MO:8; (B) the sequence of MI, which is at least 95 95 identical to the amino acid sequence "EO IU MO:4; (c) sequence

МН як в (а) і послідовність Мі як в (Б); послідовність МН, яка принаймні на 95 95 ідентична амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮ МО:16; (е) послідовність МІ, яка принаймні на 95 95 ідентична амінокислотній послідовності ЗЕСО І МО:12; (Ї) послідовність МН як в (9) і послідовність МІ як в (є); послідовність УН, яка принаймні на 95 95 ідентична амінокислотній послідовності МН антитіла, продукованого гібридомою 1923 із ідентифікаційним номером АТССМН as in (a) and the sequence Mi as in (B); the sequence of MH, which is at least 95 95 identical to the amino acid sequence of ZEO IU MO:16; (f) the sequence of MI, which is at least 95 95 identical to the amino acid sequence of ZESO I MO:12; (Y) sequence of MH as in (9) and sequence of MI as in (is); the sequence of the UN, which is at least 95 95 identical to the amino acid sequence of the MH antibody produced by hybridoma 1923 with the identification number ATCC

РТА-11464; (І) послідовність МІ, яка принаймні на 95 95 ідентична амінокислотній послідовностіPTA-11464; (I) an MI sequence that is at least 95 95 identical to the amino acid sequence

МІ. антитіла, продукованого гібридомою 19С3 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464; або (ї) послідовність МН як в (90) і послідовність Мі як в (п). У одному із таких варіантів здійснення винаходу антитіло містить послідовність МН ЗЕО ІЮ МО:8, послідовність МН 5ЕО ІЮE. antibodies produced by hybridoma 19C3 with identification number ATCC PTA-11464; or (i) sequence МН as in (90) and sequence Mi as in (p). In one of these variants of the invention, the antibody contains the sequence MN ZEO IU MO:8, the sequence MN 5EO IU

МО:16 або послідовність МН антитіла, продукованого гібридомою 19С3 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464. У іншому такому варіанті здійснення винаходу антитіло містить послідовність МІ. ЗЕО ІЮО МО:4, послідовність МІ ЗЕО ІО МО:12, або послідовність МІ. антитіла, продукованого гібридомою 193 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464.MO:16 or the MH sequence of the antibody produced by hybridoma 19C3 with the identification number ATCC PTA-11464. In another such embodiment of the invention, the antibody contains an MI sequence. ZEO IYUO MO:4, sequence MI ZEO IO MO:12, or sequence MI. antibody produced by hybridoma 193 with identification number ATCC PTA-11464.

У іншому аспекті винахід стосується антитіла, що містить (а) послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:8 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО:4; (Б) послідовність МН ЗЕО ІЮ МО:16 і послідовність МІ ЗЕО ІЮIn another aspect, the invention relates to an antibody containing (a) the sequence MH 5EO IYUO MO:8 and the sequence MI 5EO IYU MO:4; (B) sequence MN ZEO IU MO:16 and sequence MI ZEO IU

МО:12; (с) послідовність МН і послідовність МІ антитіла, продукованого гібридомою 19С3 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464; або (а) антитіло, продуковане гібридомою 1923 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464.MO: 12; (c) the MH sequence and the MI sequence of the antibody produced by hybridoma 19C3 with the ATCC identification number PTA-11464; or (a) an antibody produced by hybridoma 1923 with ATCC identification number PTA-11464.

У певних варіантах здійснення винаходу антитіло за будь-яким із вищеперерахованих варіантів здійснення являє собою антитіло ІдО1, І(до2а або Ідса26.In certain embodiments of the invention, the antibody according to any of the above-mentioned embodiments is an antibody IdO1, I(do2a or Idsa26.

У додатковому аспекті винахід являє виділену нуклеїнову кислоту, що кодує антитіло за будь-яким із вищеперерахованих варіантів здійснення винаходу. У одному із варіантів здійснення винахід стосується клітини-хазяїна, що містить нуклеїнову кислоту. У іншому варіанті здійснення винахід стосується способу отримання антитіла, способу, що містить культивування клітини-хазяїна так, що відбувається продукція антитіла. бо У іншому аспекті винахід стосується імунокон'югату формули АБ-(І-2)р, де:In an additional aspect, the invention provides an isolated nucleic acid encoding an antibody according to any of the above embodiments of the invention. In one embodiment, the invention relates to a host cell containing a nucleic acid. In another embodiment, the invention relates to a method of obtaining an antibody, a method containing the cultivation of a host cell so that the antibody is produced. because In another aspect, the invention relates to an immunoconjugate of the formula AB-(I-2)r, where:

(а) АБЬ є антитілом як в будь-якому із вищеперерахованих варіантів здійснення винаходу; (Б) І. являє собою лінкер; (с) О є лікарським засобом, що має формулу Оє во о в СНаз ве(a) AB is an antibody as in any of the above embodiments of the invention; (B) I. is a linker; (c) O is a medicinal product having the formula Oe ovo o in CHName ve

Я НI am N

- М М М М. де во АВ В во во О і де К2 і К9 кожна є метилом, КЗ і К" кожна є ізопропілом, ЕК? є Н, К" є втор-бутилом, кожна КЗ незалежно вибирається із СНз, О-СНз, ОН і Н; ЕЕ є Ні 8 є -С(К8)»-С(В8)»-арил; і (4) р приймає значення від 1 до 8.- M M M M. where AB is O and where K2 and K9 are each methyl, KZ and K" are each isopropyl, EC? is H, K" is sec-butyl, each KZ is independently selected from CH3, O -CH3, OH and H; EE is Ni 8 is -C(K8)»-C(B8)»-aryl; and (4) p takes values from 1 to 8.

У одному із варіантів здійснення винаходу лікарським засобом є ауристатин. У одному із таких варіантів здійснення винаходу лікарським засобом є ММАЕ. У іншому варіанті здійснення винаходу лінкер має сайт розщеплення протеазою. У одному із таких варіантів здійснення винаходу лінкер містить дипептид маї-сії.In one of the embodiments of the invention, the drug is auristatin. In one of these variants of implementation of the invention, the drug is MMAE. In another embodiment of the invention, the linker has a protease cleavage site. In one of these variants of the invention, the linker contains a may-sia dipeptide.

У іншому варіанті здійснення винаходу імунокон'югат має формулу:In another embodiment of the invention, the immunoconjugate has the formula:

АЬ-8 о Ф в о ок нон в) ду м ра М оAБ-8 o F v o ok non c) du m ra M o

Микити марсіМ о од 60 о Н В де 5 є атомом сірки. У одному із таких варіантів здійснення винаходу р приймає значення від 2 до 5. В іншому такому варіанті здійснення винаходу антитіло містить () НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБО ІЮ МО:20, (ії) НМВ8-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:21, (ії) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮNikit MarsiM about od 60 about N V where 5 is a sulfur atom. In one of these variants of the implementation of the invention, p takes a value from 2 to 5. In another such variant of the implementation of the invention, the antibody contains () NMK-NI, containing the amino acid sequence ZEBO IU MO:20, (iii) NMV8-H2, containing the amino acid sequence ZEO IU MO:21, (ii) NMK-NZ containing the amino acid sequence of ZEO IU

МО:22, (ім) НУВ-І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:17, (м) НМЕК-І2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІЮО МО:18, і (мі) НМК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:19. У іншому такому варіанті здійснення винаходу антитіло містить (Її)MO:22, (im) NUV-I1, containing the amino acid sequence ZEO IYU MO:17, (m) NMEK-I2, containing the amino acid sequence 5ES IYUO MO:18, and (mi) NMK-IIZ, containing the amino acid sequence 5EO IYUO MO:19. In another such embodiment of the invention, the antibody contains (Her)

НМВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБО ІЮ МО:36, (і) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО 10 МО:37, (ії) НМВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:39, (ім) НМК-І/1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮNMV-NI, containing the amino acid sequence ZEBO IU MO:36, (i) NMK-H2, containing the amino acid sequence ZEO 10 MO:37, (ii) NMV-NZ, containing the amino acid sequence ZEO IU MO:39, (im ) NMK-I/1, containing the amino acid sequence ZE IU

МО:33, (м) НУВ-І2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:4, їі (м) НМА-І3, що містить амінокислотну послідовність 5БЕО ІЮ МО:35. У іншому такому варіанті здійснення винаходу антитіло містить (а) послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:8 і послідовність МІ ЗЕО ІЮО МО:4. У іншому такому варіанті здійснення винаходу антитіло містить (б) послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:16 і послідовність МІ 5ЕО ІО МО:12.MO:33, (m) NUV-I2, containing the amino acid sequence ZEO IU MO:4, and (m) NMA-I3, containing the amino acid sequence 5BEO IU MO:35. In another such embodiment of the invention, the antibody contains (a) the sequence MH 5EO IYU MO:8 and the sequence MI ZEO IYUO MO:4. In another such embodiment of the invention, the antibody contains (b) the sequence MH 5EO IU MO:16 and the sequence MI 5EO IO MO:12.

У іншому аспекті винахід стосується фармацевтичної композиції, що містить імунокон'югат,In another aspect, the invention relates to a pharmaceutical composition containing an immunoconjugate,

Зо як в будь-якому із вищеперерахованих варіантів здійснення, і фармацевтично прийнятний носій.As in any of the above embodiments, and a pharmaceutically acceptable carrier.

У одному із варіантів здійснення винаходу фармацевтична композиція додатково містить додаткову терапевтичну речовину. У одному із таких варіантів здійснення винаходу терапевтичним засобом є гемцитабін. У іншому такому варіанті здійснення винаходу додатковим терапевтичним засобом є антитіла проти МОС16, кон'юговані із цитотоксичним агентом.In one of the embodiments of the invention, the pharmaceutical composition additionally contains an additional therapeutic substance. In one such embodiment of the invention, the therapeutic agent is gemcitabine. In another such variant of the invention, an additional therapeutic agent is antibodies against MOS16, conjugated with a cytotoxic agent.

У додатковому аспекті винахід стосується імунокон'югату, як в будь-якому |із вищеперерахованих варіантів здійснення винаходу для застосування як лікарського засобу. У певних варіантах здійснення винахід стосується імунокон'югату, як в будь-якому із вищеперерахованих варіантів здійснення винаходу для застосування в лікуванні позитивних по мезотеліну ракових пухлин. У одному із таких варіантів здійснення винаходу позитивне по мезотеліну злоякісне новоутворення вибране із раку підшлункової залози, раку яєчників, раку легені, раку ендометрія і мезотеліоми. У іншому такому варіанті здійснення винаходу позитивний по мезотеліну рак є раком, позитивним по двох антигенах.In an additional aspect, the invention relates to an immunoconjugate, as in any of the above embodiments of the invention for use as a medicinal product. In certain embodiments, the invention relates to an immunoconjugate, as in any of the above embodiments of the invention, for use in the treatment of mesothelin-positive cancers. In one such embodiment of the invention, a mesothelin-positive malignant neoplasm is selected from pancreatic cancer, ovarian cancer, lung cancer, endometrial cancer, and mesothelioma. In another such embodiment of the invention, a mesothelin-positive cancer is a bi-antigen-positive cancer.

У додатковому аспекті винахід стосується застосування імунокон'югатів, як в будь-якому із вищеперерахованих варіантів здійснення, для отримання лікарського препарату. У одному із варіантів здійснення винаходу лікарський препарат призначений для лікування позитивного по мезотеліну раку. У одному із таких варіантів здійснення винаходу позитивне по мезотеліну злоякісне новоутворення вибране із раку підшлункової залози, раку яєчників, раку легені, раку ендометрія і мезотеліоми. У іншому із таких варіантів здійснення винаходу позитивне по мезотеліну злоякісне новоутворення є раком, позитивним по двох антигенах.In an additional aspect, the invention relates to the use of immunoconjugates, as in any of the above embodiments, to obtain a medicinal product. In one of the embodiments of the invention, the drug is intended for the treatment of mesothelin-positive cancer. In one such embodiment of the invention, a mesothelin-positive malignant neoplasm is selected from pancreatic cancer, ovarian cancer, lung cancer, endometrial cancer, and mesothelioma. In another such embodiment of the invention, the mesothelin-positive malignancy is a bi-antigen-positive cancer.

У іншому аспекті винахід стосується способу лікування індивідуума із позитивним по мезотеліну злоякісним новоутворенням, спосіб, що містить призначення індивідууму ефективної кількості імунокон'югату, як в будь-якому із вищеперерахованих варіантів здійснення винаходу.In another aspect, the invention relates to a method of treating an individual with a mesothelin-positive malignancy, the method comprising administering to the individual an effective amount of an immunoconjugate, as in any of the above embodiments of the invention.

У одному із варіантів здійснення позитивне по мезотеліну злоякісне новоутворення вибране із раку підшлункової залози, раку яєчників, раку легені, раку ендометрія і мезотеліоми. У іншому варіанті здійснення винаходу позитивне по мезотеліну злоякісне новоутворення є раком, позитивним по двох антигенах. У іншому варіанті здійснення винаходу спосіб додатково містить призначення додаткового терапевтичного засобу індивідууму. У одному із таких варіантів здійснення винаходу додатковим терапевтичним засобом є гемцитабін. У іншому такому варіанті здійснення винаходу додатковим терапевтичним засобом є антитіло проти МОСІ16, кон'юговане із цитотоксичним агентом.In one embodiment, the mesothelin-positive malignancy is selected from pancreatic cancer, ovarian cancer, lung cancer, endometrial cancer, and mesothelioma. In another embodiment of the invention, a mesothelin-positive malignancy is a bi-antigen-positive cancer. In another embodiment of the invention, the method additionally includes prescribing an additional therapeutic agent to the individual. In one such embodiment of the invention, gemcitabine is an additional therapeutic agent. In another such variant of the invention, the additional therapeutic agent is an antibody against MOCI16, conjugated with a cytotoxic agent.

У іншому аспекті винахід стосується способу інгібування проліферації позитивної по мезотеліну клітини, спосіб, що містить вплив на клітину імунокон'югату, як в будь-якому із вищеперерахованих варіантів здійснення винаходу в умовах, придатних для зв'язування імунокон'югату із мезотеліном на поверхні клітини, тим самим інгібуючи проліферацію клітини. У одному із варіантів здійснення винаходу такою клітиною є клітина підшлункової залози, яєчника, легені, мезотеліоми і ендометрія. У іншому варіанті здійснення винаходу ця клітина є позитивною по двох антигенах клітиною.In another aspect, the invention relates to a method of inhibiting the proliferation of a mesothelin-positive cell, the method comprising exposing the cell to an immunoconjugate as in any of the above embodiments of the invention under conditions suitable for the binding of the immunoconjugate to mesothelin on the cell surface , thereby inhibiting cell proliferation. In one of the embodiments of the invention, such a cell is a cell of the pancreas, ovary, lung, mesothelioma, and endometrium. In another embodiment of the invention, this cell is a double-antigen positive cell.

У іншому аспекті винахід стосується антитіла, як в будь-якому із вищеперерахованих варіантів здійснення, де антитіло кон'юЮптоване із міткою. У одному із варіантів здійснення винаходу міткою є випромінювач позитронів. У одному із таких варіантів здійснення винаходу випромінювачем позитронів є 992.In another aspect, the invention relates to an antibody, as in any of the above embodiments, wherein the antibody is conjugated to a label. In one embodiment of the invention, the tag is a positron emitter. In one such embodiment of the invention, the positron emitter is 992.

У іншому аспекті винахід стосується способу виявлення мезотеліну людини в біологічному зразку, спосіб, що містить взаємодію біологічного зразка з антитілом проти мезотеліну, як в будь-якому із вищеперерахованих варіантів здійснення в умовах, відповідних для зв'язування антитіла проти мезотеліну із природним мезотеліном людини, і детекцію наявності або відсутності комплексу, утвореного антитілом проти мезотеліну і природним мезотеліном людини в біологічному зразку. У одному із варіантів здійснення винаходу антитіло проти мезотеліну містить (а) НМАК-НІ, НУВ-Н2, НУВ-НЗ, НМУВ-І1, НУВ-І2 ї НМК-ІЗ3 антитіла, продукованого гібридомою 1903 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464; (Б) послідовність МН і послідовність МІ. антитіла, продукованого гібридомою 193 із ідентифікаційним номером АТССIn another aspect, the invention relates to a method for detecting human mesothelin in a biological sample, the method comprising interacting the biological sample with an anti-mesothelin antibody, as in any of the above embodiments, under conditions suitable for binding of the anti-mesothelin antibody to natural human mesothelin, and detecting the presence or absence of a complex formed by an antibody against mesothelin and natural human mesothelin in a biological sample. In one embodiment of the invention, the antibody against mesothelin contains (a) NMAK-NI, NUV-H2, NUV-NZ, NMUV-I1, NUV-I2 and NMK-IZ3 antibodies produced by hybridoma 1903 with identification number ATCC PTA-11464; (B) MH sequence and MI sequence. antibody produced by hybridoma 193 with identification number ATCC

Зо РТА-11464; або (а) антитіло, продуковане гібридомою 1923 із ідентифікаційним номером АТССFrom RTA-11464; or (a) antibody produced by hybridoma 1923 with ATCC identification number

РТА-11464. У іншому варіанті здійснення винаходу біологічним зразком є зразок раку підшлункової залози, зразок раку яєчника, зразок раку легені, зразок раку ендометрія або зразок мезотеліоми. У іншому варіанті здійснення винаходу спосіб містить проведення імуногістохімічного аналізу зрізу тканини. У іншому варіанті здійснення винаходу біологічним зразком є сироватка.RTA-11464. In another embodiment of the invention, the biological sample is a pancreatic cancer sample, an ovarian cancer sample, a lung cancer sample, an endometrial cancer sample, or a mesothelioma sample. In another embodiment of the invention, the method includes immunohistochemical analysis of a tissue section. In another embodiment of the invention, the biological sample is serum.

У додатковому аспекті винахід стосується способу виявлення позитивного по мезотеліну злоякісного новоутворення, спосіб, що містить призначення міченого антитіла проти мезотеліну, де антитіло проти мезотеліну, як в будь-якому із вищеперерахованих варіантів здійснення, призначене для індивіда, що має або у якого передбачають наявність позитивного по мезотеліну злоякісного новоутворення, і виявлення міченого антитіла проти мезотеліну у індивіда, де виявлення міченого антитіла проти мезотеліну вказує на позитивне по мезотеліну злоякісне новоутворення у індивіда. У одному із варіантів здійснення винаходу мічене антитіло проти мезотеліну містить антитіло проти мезотеліну, кон'юговане із випромінювачем позитронів.In an additional aspect, the invention relates to a method for detecting a mesothelin-positive malignancy, the method comprising administering a labeled anti-mesothelin antibody, wherein the anti-mesothelin antibody, as in any of the above embodiments, is administered to an individual who has or is predicted to have a positive mesothelin-positive malignancy, and detecting a labeled antibody against mesothelin in the individual, wherein the detection of a labeled antibody against mesothelin indicates a mesothelin-positive malignancy in the individual. In one embodiment of the invention, the labeled antibody against mesothelin contains an antibody against mesothelin conjugated to a positron emitter.

У одному із таких варіантів здійснення винаходу випромінювачем позитронів є 8927у.In one of these variants of the invention, the positron emitter is 8927u.

Короткий опис фігурA brief description of the figures

На фігурі 1 показано, що мезотелін утвориться шляхом протеолітичного розщеплення білкового попередника із відділенням 31 кДа компонента (званого мегакаріоцитарним потенціюючим фактором, або МРРЕ) і 40 кДа компоненти мезотеліну. Останній компонент може залишатися зв'язаним із клітинною поверхнею, але може також бути відділений. "СНО" означає чотири сайти глікозилування, один - в МРЕ і три - в мезотеліні.Figure 1 shows that mesothelin is formed by proteolytic cleavage of a protein precursor with the separation of a 31 kDa component (called megakaryocytic potentiating factor, or MPRE) and a 40 kDa component of mesothelin. The latter component may remain bound to the cell surface, but may also be separated. "CHO" means four glycosylation sites, one in MRE and three in mesothelin.

На фігурі 2 показано графічне представлення рівнів експресії гена мезотеліну людини в різних тканинах, як описано в Прикладі А.Figure 2 shows a graphical representation of human mesothelin gene expression levels in various tissues as described in Example A.

На фігурі З показані властивості моноклональних антитіл проти мезотеліну, виділених, як описано в Прикладі В.Figure C shows the properties of anti-mesothelin monoclonal antibodies isolated as described in Example B.

На фігурі 4 показано поєднання мишачих послідовностей варіабельної області легкого ланцюга антитіла 709 (ти7059) і їх гуманізованих варіантів (709.м1 і 709.м3).Figure 4 shows the combination of murine sequences of the variable region of the light chain of antibody 709 (ti7059) and their humanized variants (709.m1 and 709.m3).

На фігурі 5 показано поєднання мишачих послідовностей варіабельної області важкого ланцюга антитіла 709 (ти708) і їх гуманізованих варіантів (709.м1 і 709.м3).Figure 5 shows a combination of murine sequences of the variable region of the heavy chain of antibody 709 (ti708) and their humanized variants (709.m1 and 709.m3).

На фігурі 6 показані властивості химерних і гуманізованих варіантів 709, як описано в 60 Прикладі С.Figure 6 shows the properties of the chimeric and humanized variants of 709 as described in Example C 60.

На фігурі 7 показано поєднання мишачих послідовностей варіабельної області легкого ланцюга антитіла 22А10 (22А10) і їх гуманізованих варіантів (пи22А10дгай і 22А10.м83).Figure 7 shows the combination of murine sequences of the variable region of the light chain of antibody 22A10 (22A10) and their humanized variants (py22A10dgay and 22A10.m83).

На фігурі 8 показано поєднання мишачих послідовностей варіабельної області важкого ланцюга антитіла 22А10 (22А10) і їх гуманізованих варіантів (пи22А10дгай і 22А10.м83).Figure 8 shows the combination of murine sequences of the variable region of the heavy chain of antibody 22A10 (22A10) and their humanized variants (py22A10dgay and 22A10.m83).

На фігурі 9А показаний аналіз Скетчарда гуманізованих варіантів 22А10 на стабільно трансфікованих мезотеліном клітинах ВАВ, як описано в Прикладі С.Figure 9A shows Scatchard analysis of humanized variants of 22A10 in mesothelin stably transfected BAV cells as described in Example C.

На фігурі 98 показана імунопреципітація мезотеліну під дією гуманізованих варіантів 22А10 із тих же самих стабільно трансфікованих клітин ВОАВ, як описано в Прикладі С.Figure 98 shows the immunoprecipitation of mesothelin under the action of humanized variants of 22A10 from the same stably transfected BOAB cells as described in Example C.

На фігурі 10А показані послідовності гіперваріабельних і каркасних областей гуманізованих варіантів 709.Figure 10A shows the sequences of the hypervariable and framework regions of humanized variants 709.

На фігурі 108 показані послідовності гіперваріабельних і каркасних областей гуманізованих варіантів 22А10.Figure 108 shows the sequences of hypervariable and framework regions of humanized variants of 22A10.

На фігурі 11 показана гомологія послідовностей мезотеліну із різних видів, як описано вFigure 11 shows the homology of mesothelin sequences from different species as described in

Прикладі 0. На фігурі 11 представлені 5ЕО ІЮ МО: 43 і 46-48, відповідно, в порядку трапляння.Examples 0. Figure 11 shows 5EO IU MO: 43 and 46-48, respectively, in the order of occurrence.

На фігурі 12 показана перехресна реактивність пП709.м3 і п22А10.м83 із мезотеліном із різних видів, як описано в Прикладі 0.Figure 12 shows the cross-reactivity of pP709.m3 and p22A10.m83 with mesothelin from different species as described in Example 0.

На фігурі 13 показана афінність зв'язування гуманізованих антитіл проти мезотеліну, як визначено аналізом Скетчарда трансфікованих клітинних ліній, стабільно експресуючих мезотелін, і клітинних ліній, експресуючих ендогенний мезотелін, як описано в Прикладі Е.Figure 13 shows the binding affinity of humanized anti-mesothelin antibodies as determined by Scatchard assay of transfected cell lines stably expressing mesothelin and cell lines expressing endogenous mesothelin as described in Example E.

На фігурі 14 показані результати конкурентного аналізу антитіла 709 або 22А10 і інших моноклональних антитіл, перерахованих на фігурі 3, як описано в Прикладі Р.Figure 14 shows the results of a competitive analysis of antibody 709 or 22A10 and other monoclonal antibodies listed in Figure 3, as described in Example P.

На фігурі 15 показані конструкти химерного мезотеліну, що використовуються для картування епітопу (накреслені в масштабі), як описано в Прикладі 5. На фігурі 15 показані "ЕМЕК", "ПАЕО" і "ОМЕК" у вигляді ЗЕО ІЮ МО:51-53, відповідно.Figure 15 shows the chimeric mesothelin constructs used for epitope mapping (drawn to scale) as described in Example 5. Figure 15 shows "EMEK", "PAEO" and "OMEK" as ZEO IU MO:51-53, in accordance.

На фігурі 16 показані результати РАСЗ за оцінкою зв'язування 709 і 22А10 із клітинами, які експресують химерний мезотелін, як описано в Прикладі 0.Figure 16 shows the results of TLC assays for the binding of 709 and 22A10 to cells expressing chimeric mesothelin as described in Example 0.

На фігурі 17 показана мутаційна стратегія для ідентифікації амінокислот, з якими зв'язуються П709.у3 і п22А10.м83, як описано в Прикладі 0... На фігурі 17 представлена "ЕМЕК" у вигляді БЕО ІЮ МО:51; "Нитап132-212", "Супо132-212", "ВН 32-212" і "Моизе132-212" у виглядіFigure 17 shows the mutational strategy for identifying amino acids to which P709.u3 and p22A10.m83 bind, as described in Example 0... Figure 17 shows "EMEK" in the form of BEO IU MO:51; "Nitap132-212", "Supo132-212", "VN 32-212" and "Moise132-212" in the form

Коо) ЗЕО ІЮ МО:54-57, відповідно; людські і мишачі "МОТ1", "МОТ3", "МОТв6", "МОТ7", "МОТО", "МОТ10", "МОТ13" ї "ШОТ15" у вигляді БЕО ІЮ МО:58-73, відповідно; і "ЗТКО" ії "ЗМКО" у виглядіCo., Ltd.) ZEO IU MO:54-57, respectively; human and mouse "MOT1", "MOT3", "MOTv6", "MOT7", "MOTO", "MOT10", "MOT13" and "SHOT15" in the form of BEO IU MO:58-73, respectively; and "ZTKO" and "ZMKO" in the form

ЗЕО ІЮ МО:73 і 74, відповідно.ZEO IU MO:73 and 74, respectively.

На фігурі 18А показані результати ЕАС5 за оцінкою зв'язування пП709.м3 і п22А10.у83 з клітинами, які експресують мутантні білки мезотеліну людини, як описано в Прикладі 0.Figure 18A shows the results of EAS5 as assessed by the binding of pP709.m3 and p22A10.u83 to cells expressing mutant human mesothelin proteins as described in Example 0.

На фігурі 188 показані результати РАС5 за оцінкою зв'язування пП709.у3 із клітинами, які експресують мутантні білки мезотеліну яванської макаки, як описано в Прикладі 0.Figure 188 shows the results of RAS5 as assessed by the binding of pP709.u3 to cells expressing mutant cynomolgus macaque mesothelin proteins as described in Example 0.

На фігурі 19 показані ключові амінокислотні залишки в межах епітопів, із якими зв'язуються 7109/п1709.у3 і 22А10/122А10.м83, як описано в Прикладі 5. На фігурі 19 представлені 5ЕО ІЮFigure 19 shows the key amino acid residues within the epitopes to which 7109/p1709.u3 and 22A10/122A10.m83 bind, as described in Example 5. Figure 19 shows 5EO IU

МО:54-57, відповідно, в порядку трапляння.MO:54-57, respectively, in the order of occurrence.

На фігурі 20 показано зв'язування пП709.м3 із глікозилованим мезотеліном, як описано вFigure 20 shows the binding of pP709.m3 to glycosylated mesothelin as described in

Прикладі Н.For example, N.

На фігурі 21 показані результати двох аналізів виявлення наявності або відсутності блокування зв'язування мезотеліну із МОС19 під дією антитіл 193, 709 їі 22А10 і навпаки, як описано в Прикладі І.Figure 21 shows the results of two assays for detecting the presence or absence of blocking the binding of mesothelin to MOS19 under the action of antibodies 193, 709 and 22A10 and vice versa, as described in Example I.

На фігурі 22 показана експресія мезотеліну в протоковій аденокарциномі підшлункової залози способом імуногістохімії (ІНС), як описано в Прикладі .).Figure 22 shows the expression of mesothelin in ductal adenocarcinoma of the pancreas by immunohistochemistry (INS), as described in Example .).

На фігурі 23 показана експресія мезотеліну в серозній аденокарциномі яєчників способом імуногістохімії (ІНС), як описано в Прикладі У.Figure 23 shows the expression of mesothelin in ovarian serous adenocarcinoma by immunohistochemistry (INS), as described in Example U.

На фігурі 24 показана експресія мезотеліну в аденокарциномі недрібноклітинного раку легені (М5СІ С) способом імуногістохімії (ІНС), як описано в Прикладі «).Figure 24 shows the expression of mesothelin in adenocarcinoma of non-small cell lung cancer (NSCLC) by immunohistochemistry (INS), as described in Example ").

На фігурі 25 показана експресія мезотеліну в тканинах яванської макаки (панелі праворуч) способом імуногістохімії (ІНС), як описано в Прикладі У.Figure 25 shows the expression of mesothelin in the tissues of the Javan macaque (right panel) by immunohistochemistry (INS), as described in Example U.

На фігурі 26 показано, що імунокон'югат п1709.м3-м-сСММАЄЕ демонструє ефективність дії в ксенотрансплантаті підшлункової залози НРАС, як описано в Прикладі І.Figure 26 shows that the immunoconjugate p1709.m3-m-cSMMAEE demonstrates the effectiveness of action in the xenograft of the pancreas of NRAS, as described in Example I.

На фігурі 27 показано, що імунокон'югат п1709.м3-мсСмММАЄЕ демонструє ефективність дії в вихідному ксенотрансплантаті підшлункової залози, як описано в Прикладі М.Figure 27 shows that the p1709.m3-msSmMMAEE immunoconjugate demonstrates efficacy in the original pancreas xenograft as described in Example M.

На фігурі 28 показано, що імунокон'югат п709.м3-м-сСММАЄЕ демонструє ефективність дії в моделі ксенотрансплантата пухлини яєчника, як описано в Прикладі М.Figure 28 shows that the p709.m3-m-cSMMAEE immunoconjugate demonstrates efficacy in an ovarian tumor xenograft model, as described in Example M.

На фігурі 29 показано, що імунокон'югат п1709.м3-м-сСММАЄЕ демонструє ефективність дії в бо моделі ксенотрансплантата плоскоклітинної карциноми легені, як описано в Прикладі 0.Figure 29 shows that the p1709.m3-m-cSMMAEE immunoconjugate demonstrates efficacy in the squamous cell lung carcinoma xenograft model as described in Example 0.

На фігурі 30 показано, що ефективність дії імунокон'югату. П1709.м3-мсММАЕ відносно мезотеліну людини подібно такому імунокон'югату п22А10.м83-мсММАЄЕ відносно мезотеліну яванської макаки в пухлинних моделях ксенотрансплантата трансфікованих клітин ВОАВ, як описано в Прикладі Р.Figure 30 shows that the effectiveness of the immunoconjugate. P1709.m3-msMMAE relative to human mesothelin is similar to this immunoconjugate p22A10.m83-msMMAEE relative to Javan macaque mesothelin in xenograft tumor models of transfected BOAB cells, as described in Example P.

На фігурі 31 показано, що ефективність дії імунокон'югату п709.и3-«сСММАЕ подібна такому імунокон'югату п22А10.м83-МсММАЄЕ в мезотеліомі і моделях пухлини яєчника, як описано вFigure 31 shows that the effectiveness of the immunoconjugate p709.y3-"cSMMAE is similar to this immunoconjugate p22A10.m83-MsMMAEE in mesothelioma and ovarian tumor models, as described in

Прикладі Р.Examples of R.

На фігурі 32 показано, що МОС16 утворить комплекс із мезотеліном, і два білки спільно відділяються від клітинних ліній, позитивних по двох антигенах, як описано в Прикладі с).Figure 32 shows that MOC16 will form a complex with mesothelin, and the two proteins are co-separated from dual-antigen-positive cell lines as described in Example c).

На фігурі 33 показано, що 1923, але не 709, витісняє заздалегідь зв'язаний МОС16 від мезотеліну.Figure 33 shows that 1923, but not 709, displaces prebound MOS16 from mesothelin.

Докладний опис варіантів здійснення винаходуDetailed description of variants of implementation of the invention

І. Визначення "Акцепторна каркасна ділянка людини" в рамках цього документа є каркасною ділянкою, що містить амінокислотну послідовність каркасної ділянки варіабельного домену легкого ланцюга (М) або каркасної ділянки варіабельного домену важкого ланцюга (МН) із каркасної ділянки імуноглобуліну людини або консенсусної каркасної ділянки людини, як вказано нижче.I. The definition of "Human acceptor framework region" within the framework of this document is a framework region containing the amino acid sequence of the framework region of the variable domain of the light chain (M) or the framework region of the variable domain of the heavy chain (MH) from the framework region of a human immunoglobulin or the consensus framework region of a human , as indicated below.

Акцепторна каркасна ділянка людини, "отримана із" каркасної ділянки імуноглобуліну людини або консенсусної каркасної ділянки людини, може містити ту ж саму амінокислотну послідовність вищезгаданого, або вона може містити зміни амінокислотної послідовності. У деяких варіантах здійснення винаходу число амінокислотних замін становить 10 або менше, 9 або менше, 8 або менше, 7 або менше, 6 або менше, 5 або менше, 4 або менше, З або менше, або 2 або менше. У деяких варіантах здійснення винаходу акцепторна каркасна ділянка людиниA human acceptor framework region "derived from" a human immunoglobulin framework region or a human consensus framework region may contain the same amino acid sequence as the above, or it may contain changes in the amino acid sequence. In some embodiments of the invention, the number of amino acid substitutions is 10 or less, 9 or less, 8 or less, 7 or less, 6 or less, 5 or less, 4 or less, C or less, or 2 or less. In some embodiments of the invention, the acceptor frame area of a person

МІ. ідентична послідовності каркасної ділянки МІ імуноглобуліну людини або послідовності консенсусної каркасної ділянки людини. "Афінність" стосується сили сумарних нековалентних взаємодій між одиничним сайтом зв'язування молекули (наприклад, антитіла) і його партнером зв'язування (наприклад, антигеном). Якщо не вказано інше, "афінність зв'язування" в тому значенні, в якому використовується в цьому документі, стосується властивої афінності зв'язування, якаE. is identical to the sequence of the MI human immunoglobulin framework or the sequence of the human consensus framework. "Affinity" refers to the strength of the total non-covalent interactions between a single binding site of a molecule (eg, an antibody) and its binding partner (eg, an antigen). Unless otherwise specified, "binding affinity" as used herein refers to an inherent binding affinity that

Зо відображає взаємодію 1:11 між членами пари зв'язування (наприклад, антитілом і антигеном).Zo reflects a 1:11 interaction between members of a binding pair (eg, antibody and antigen).

Афінність молекули Х для її партнера М може загалом бути охарактеризована константою дисоціації (Ка). Афінність може бути виміряна загальноприйнятими способами, відомими в даній галузі техніки, включаючи такі, описані в цьому документі. Конкретні ілюстративні і типові варіанти здійснення для вимірювання афінності зв'язування описані нижче.The affinity of the molecule X for its partner M can generally be characterized by the dissociation constant (Ka). Affinity can be measured by conventional methods known in the art, including those described herein. Specific illustrative and typical embodiments for measuring binding affinity are described below.

Антитіло із "дозрілою афінністю" стосується антитіла із однією або декількома змінами в одній або декількох гіперваріабельних ділянках (НУК) в порівнянні із вихідним антитілом, якому не властиві такі зміни, що приводять до поліпшення афінності зв'язування антитіла з антигеном.An "affinity matured" antibody refers to an antibody with one or more changes in one or more hypervariable regions (HIVs) compared to the original antibody, which does not have such changes that lead to improved binding affinity of the antibody to the antigen.

Терміни "антитіло проти мезотеліну" і "антитіло, яке зв'язується з мезотеліном" стосуються антитіла, яке здатне зв'язувати мезотелін із достатньою афінністю, завдяки чому антитіло може бути ефективним як діагностичний і/або терапевтичний засіб при направленому впливі на мезотелін. У одному із варіантів здійснення винаходу ступінь зв'язування антитіла проти мезотеліну із білком, відмінним від мезотеліну, складає приблизно менше 10 95 зв'язування даного антитіла із мезотеліном згідно із вимірюваннями, наприклад, радіоіїмуноаналізу (КІА). У певних варіантах здійснення винаходу антитіло, яке зв'язується з мезотеліном, має константу дисоціації (Ка) «1 мкМ, «100 нМ, «10 НМ, «1 НМ, «0,1 нМ, «0,01 нМ або х0,001 нМ (наприклад, 108 М або менше, наприклад, від 108 М до 10-33 М, наприклад, від 109 М до 10-73 М). У певних варіантах здійснення винаходу антитіло проти мезотеліну зв'язується з епітопом мезотеліну, який консервативний у мезотелінів із різних біологічних видів.The terms "anti-mesothelin antibody" and "mesothelin-binding antibody" refer to an antibody that is capable of binding mesothelin with sufficient affinity such that the antibody may be effective as a diagnostic and/or therapeutic agent when directed against mesothelin. In one embodiment of the invention, the degree of binding of an antibody against mesothelin to a protein other than mesothelin is approximately less than 10 95 of the binding of this antibody to mesothelin as measured by, for example, radioimmunoassay (RIA). In certain embodiments of the invention, an antibody that binds to mesothelin has a dissociation constant (Ka) of "1 μM, "100 nM, "10 nM, "1 nM, "0.1 nM, "0.01 nM or x0, 001 nM (e.g., 108 M or less, e.g., 108 M to 10-33 M, e.g., 109 M to 10-73 M). In certain embodiments of the invention, an antibody against mesothelin binds to an epitope of mesothelin that is conserved among mesothelins from different biological species.

Термін "антитіло" використовується в цьому документі в самому широкому значенні слова і охоплює різні структури антитіла, включаючи, крім іншого, моноклональні антитіла, поліклональні антитіла, мультиспецифічні антитіла (наприклад, біспецифічні антитіла) і фрагменти антитіла за умови, що вони виявляють необхідну антигензв'язувальну активність. "Фрагмент антитіла" стосується молекули, відмінної від інтактного антитіла, яка містить частину інтактного антитіла і зв'язує антиген, із яким зв'язується інтактне антитіло. Приклади фрагментів антитіла включають, крім іншого, Ем, Раб, Раб Раб-5Н, Е(аб)»; діатіла; лінійні антитіла; одноланцюжкові молекули антитіла (наприклад, 5сЕм); і мультиспецифічні антитіла, утворені із фрагментів антитіла. "Антитіло, яке зв'язується із тим же самим епітопом", що і контрольне антитіло, стосується антитіла, яке блокує зв'язування контрольного антитіла із його антигеном в конкурентному бо аналізі на 50 95 або більше, і навпаки, контрольне антитіло блокує зв'язування антитіла із його (с;The term "antibody" is used herein in its broadest sense and encompasses various antibody structures, including, but not limited to, monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, multispecific antibodies (eg, bispecific antibodies), and antibody fragments, provided that they detect the required antigen. causative activity. "Antibody fragment" refers to a molecule other than an intact antibody that contains a portion of an intact antibody and binds an antigen to which the intact antibody binds. Examples of antibody fragments include, but are not limited to, Em, Rab, Rab Rab-5H, E(ab)”; diatila; linear antibodies; single-chain antibody molecules (for example, 5cEm); and multispecific antibodies formed from antibody fragments. "An antibody that binds to the same epitope" as a control antibody refers to an antibody that blocks the binding of a control antibody to its antigen in a competitive assay by 50 95 or greater, and conversely, a control antibody blocks the binding of ligation of the antibody from its (c;

антигеном в конкурентному аналізі на 5095 або більше. Типовий конкурентний аналіз представлений в цьому документі.antigen in a competitive analysis by 5095 or more. A typical competitive analysis is presented in this document.

Терміни "злоякісне новоутворення" або "рак" стосуються фізіологічного стану або його описують у ссавців, що звичайно характеризується нерегульованим клітинним зростанням/проліферацією. Приклади раку включають, крім іншого, карциному, лімфому (наприклад, лімфому Ходжкіна і неходжкінську лімфому), бластому, саркому і лейкемію. Більш приватні приклади таких злоякісних пухлин включають плоскоклітинний рак, дрібноклітинний рак легені, недрібноклітинний рак легені, аденокарциному легені, плоскоклітинну карциному легені, рак очеревини, гепатоцелюлярний рак, рак шлунково-кишкового тракту, рак підшлункової залози, гліому, рак шийки матки, рак яєчника, рак печінки, рак сечового міхура, гепатому, рак молочної залози, рак товстої кишки, рак товстої і прямої кишок, карциному ендометрія або матки, карциному слинних залоз, рак нирки, рак печінки, рак простати, рак вульви, рак щитовидної залози, печінкову карциному, лейкемію і інші лімфопроліферативні порушення, і різні типи раку голови і шиї.The terms "malignancy" or "cancer" refer to or describe a physiological condition in mammals that is typically characterized by unregulated cellular growth/proliferation. Examples of cancer include, but are not limited to, carcinoma, lymphoma (eg, Hodgkin lymphoma and non-Hodgkin lymphoma), blastoma, sarcoma, and leukemia. More specific examples of such malignancies include squamous cell carcinoma, small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, lung adenocarcinoma, squamous cell carcinoma of the lung, peritoneal cancer, hepatocellular carcinoma, gastrointestinal cancer, pancreatic cancer, glioma, cervical cancer, ovarian cancer, liver cancer, bladder cancer, hepatoma, breast cancer, colon cancer, colon and rectal cancer, endometrial or uterine carcinoma, salivary gland carcinoma, kidney cancer, liver cancer, prostate cancer, vulva cancer, thyroid cancer, liver carcinoma , leukemia and other lymphoproliferative disorders, and various types of head and neck cancer.

Термін "химерне" антитіло стосується антитіла, в якому частина важкого і/або легкого ланцюга отримана із певного джерела або виду, в той час як частина важкого і/або легкого ланцюга, що залишилася, отримана із іншого джерела або виду. "Клас" антитіла стосується типу константного домену або константної області, що були у важкого ланцюга. Існує п'ять основних класів антитіл: ДА, ДО, ІДЕ, дос і ІДМ, ї деякі із них можуть бути додатково розділені на підкласи (ізотипи), наприклад, Іде, ІДС», ІДдСз, ІдСа, ДА: іThe term "chimeric" antibody refers to an antibody in which a portion of the heavy and/or light chain is derived from a particular source or species, while the remaining portion of the heavy and/or light chain is derived from another source or species. The "class" of an antibody refers to the type of constant domain or constant region present in the heavy chain. There are five main classes of antibodies: DA, DO, IDE, dos and IDM, and some of them can be further divided into subclasses (isotypes), for example, Ide, IDS", IddSz, IdSa, DA: and

ІдАг. Константні домени важкого ланцюга, які відповідають різним класам імуноглобулінів, називаються а, б, є, у і М, відповідно.IdAg The constant domains of the heavy chain, which correspond to different classes of immunoglobulins, are called a, b, is, y, and M, respectively.

Термін "цитотоксичний агент" в тому значенні, в якому він тут використовується, стосується речовини, яка інгібує або запобігає клітинній функції і/або викликає загибель або руйнування клітини. Цитотоксичні агенти включають, крім іншого, радіоактивні ізотопи (наприклад, Ай", 1181, 25, у8о, Ве"86, Ве 88, Зт!»з, Віг2!2, рзг, рр": і радіоактивні ізотопи Гц); хіміотерапевтичні засоби або лікарські препарати (наприклад, метотрексат, адріаміцин, алкалоїди барвінку (вінкристин, вінбластин, етопозид), доксорубіцин, мелфалан, мітоміцин С, хлорамбуцил, даунорубіцин або інші інтеркалуючі агенти); інгібітори росту; ферменти і їх фрагменти, такі як нуклеолітичні ферменти; антибіотики; токсини, такі як низькомолекулярні токсини або токсини, які мають ферментативну активність, бактеріального, грибкового, рослинного або тваринного походження, включаючи фрагменти і/або варіанти вищезазначеного; і різні протипухлинні або протиракові засоби, розглянуті нижче.The term "cytotoxic agent" as used herein refers to a substance that inhibits or prevents cellular function and/or causes cell death or destruction. Cytotoxic agents include, but are not limited to, radioactive isotopes (for example, Al", 1181, 25, y8o, Be"86, Be 88, Zt!z, Vig2!2, rzg, рр": and radioactive isotopes Hz); chemotherapeutic agents or drugs (eg, methotrexate, adriamycin, periwinkle alkaloids (vincristine, vinblastine, etoposide), doxorubicin, melphalan, mitomycin C, chlorambucil, daunorubicin, or other intercalating agents); growth inhibitors; enzymes and their fragments, such as nucleolytic enzymes; antibiotics ; toxins, such as low molecular weight toxins or toxins having enzymatic activity, of bacterial, fungal, plant or animal origin, including fragments and/or variants of the foregoing; and various antitumor or anticancer agents discussed below.

Термін "позитивне по двох антигенах злоякісне новоутворення" стосується злоякісної пухлини, що містить клітини, які позитивні як по мезотеліну, так і по МОС 16.The term "dual antigen-positive malignancy" refers to a malignancy containing cells that are both mesothelin and MOC 16 positive.

Термін "позитивна по двох антигенах клітина" стосується клітини, яка експресує як мезотелін, так і МОС16 на своїй поверхні. "Ефекторні функції" стосуються тієї біологічної активності, властивої області Ес антитіла, які варіюють залежно від ізотипу антитіла. Приклади ефекторних функцій антитіла включають: зв'язування С14д і комплемент-залежну цитотоксичність (СОС); зв'язування рецептора Ес; антитілозалежну клітинно-опосередковану цитотоксичність (АЮСС); фагоцитоз; зниження регуляції рецепторів клітинної поверхні (наприклад, В-клітинного рецептора); і В-клітинну активацію. "Ефективна кількість" речовини, наприклад, фармацевтичної композиції, стосується кількості, ефективної в дозуванні і протягом необхідних періодів часу для досягнення необхідного терапевтичного або профілактичного результату.The term "dual positive cell" refers to a cell that expresses both mesothelin and MOC16 on its surface. "Effector functions" refer to those biological activities characteristic of the Es region of an antibody, which vary depending on the isotype of the antibody. Examples of antibody effector functions include: C14d binding and complement-dependent cytotoxicity (CTO); Es receptor binding; antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (AICC); phagocytosis; downregulation of cell surface receptors (for example, B-cell receptor); and B-cell activation. "Effective amount" of a substance, for example, a pharmaceutical composition, refers to the amount effective in the dosage and for the necessary periods of time to achieve the desired therapeutic or prophylactic result.

Термін "епітоп" стосується певної ділянки на молекулі антигену, з якою зв'язується антитіло.The term "epitope" refers to a specific region on an antigen molecule to which an antibody binds.

Термін "Рс-область" в цьому документі використовується для визначення С-кінцевої області важкого ланцюга імуноглобуліну, яка містить принаймні частину константної області. Термін містить нативну послідовність Ес-областей і відмінні від неї Ес-області. У одному із варіантів здійснення винаходу Ес-область важкого ланцюга Ід людини простягається від Суз226, або відThe term "Pc region" is used in this document to define the C-terminal region of the immunoglobulin heavy chain, which contains at least part of the constant region. The term contains the native sequence of Es-regions and Es-regions different from it. In one of the variants of implementation of the invention, the Es-region of the human Id heavy chain extends from Suz226, or from

Рго230, до карбоксильного кінця важкого ланцюга. Однак С-кінцевий лізин (Гуз447) Ес-області може бути присутнім або відсутнім. Якщо інше не вказане в цьому документі, нумерацію амінокислотних залишків в Ес-області або константній області здійснюють відповідно до нумераційної системи БО, яка також називається індексом БО, як описано в Кабаї еї аї.,Rgo230, to the carboxyl end of the heavy chain. However, the C-terminal lysine (Guz447) of the E-region may or may not be present. Unless otherwise specified in this document, the numbering of amino acid residues in the Es-region or constant region is carried out according to the BO numbering system, also called the BO index, as described in Kabayi ei ai.,

Зедиеєпсез ої Ргоївіпв ої Іттипоіодіса! Іпіегеві, Бій Ей. Рибіїс Неанй 5егісе, Маїйопаї Іпвійшев оїZedieepsez oi Rgoivipv oi Ittipoiodis! Ipiegevi, Biy Ey. Rybiis Neany 5egise, Maiiopai Ipviyshev oi

Неайн, ВеїНезаа, МО, 1991. "Каркасна ділянка" або "РК" стосується залишків варіабельного домену, відмінних від залишків гіперваріабельної області (НУК). ЕЕ. варіабельного домену, в основному, складається із чотирьох доменів ЕК: ЕК, ЕК2, ЕКЗ і ЕК4. Відповідно, послідовності НМК і ЕК, як правило, з'являються в наступній послідовності в МН (або М): ЕК1-НІ1(11)-ЕН2-НА(І2)-ЕВЗ-НЗІ(І 3)-ЕНАУ.Neain, WeiNezaa, MO, 1991. "Framework region" or "RC" refers to the residues of the variable domain other than the residues of the hypervariable region (HIV). EE. variable domain mainly consists of four EC domains: EC, EC2, ECZ and EC4. Accordingly, the sequences of NMK and EK, as a rule, appear in the following sequence in MH (or M): EK1-NI1(11)-EN2-NA(I2)-EVZ-NZI(I 3)-ENAU.

Терміни "повнорозмірне антитіло", "іІнтактне антитіло" і "ціле антитіло" використовуються в цьому документі взаємозамінно відносно антитіла, що має структуру, значною мірою схожу із структурою нативного антитіла, або що має важкі ланцюги, які містять Ес-область, як указано в цьому документі.The terms "full-length antibody", "iIntact antibody" and "whole antibody" are used interchangeably herein to refer to an antibody having a structure substantially similar to that of a native antibody, or having heavy chains that contain an Es region as defined in this document.

Термін "глікозиловані форми мезотеліну" стосується природних форм мезотеліну, які модифікуються на пост-трансляційному рівні шляхом додавання вуглеводних залишків.The term "glycosylated forms of mesothelin" refers to natural forms of mesothelin that are modified at the post-translational level by adding carbohydrate residues.

Терміни "клітина-хазяїн", "клітинна лінія-хазяїн' і "клітинна /культура-хазяїн" використовуються взаємозамінно і стосуються клітин, в які була введена екзогенна нуклеїнова кислота, включаючи потомство таких клітин. Клітини-хазяїни включають "трансформанти" і "трансформовані клітини", які включають вихідну трансформовану клітину і потомство, отримане із неї без урахування числа пасажів. Потомство може не бути повністю ідентичним вихідній клітині за вмістом нуклеїнової кислоти, але може містити мутації. Мутантне потомство, яке має ті ж самі функції або біологічну активність, класифіковану або відібрану в спочатку трансформованій клітині, включене в цей документ. "Антитіло людини" являє собою антитіло, яке має амінокислотну послідовність, яка відповідає антитілу, продукованому людиною або клітиною людини або отримано із відмінного від людини джерела, яке використовує репертуар антитіл людини або інші кодуючі антитіло послідовності людини. Це визначення антитіла людини виключає гуманізоване антитіло, що містить антигензв'язуючі залишки, відмінні від таких людини. "Консенсусна каркасна область людини" є каркасною областю, яка є амінокислотними залишками, що найчастіше зустрічаються при відборі послідовностей каркасної області МІ. абоThe terms "host cell", "host cell line" and "host cell/culture" are used interchangeably and refer to cells into which exogenous nucleic acid has been introduced, including the progeny of such cells. Host cells include "transformants" and "transformed cells" that include the original transformed cell and the progeny derived from it regardless of the number of passages. The progeny may not be completely identical to the original cell in terms of nucleic acid content, but may contain mutations. Mutant progeny that have the same functions or biological activity, classified or selected in an originally transformed cell included herein. A "human antibody" is an antibody that has an amino acid sequence that corresponds to an antibody produced by a human or a human cell or obtained from a non-human source that uses a human antibody repertoire or other human antibody coding sequences This definition of human antibody excludes humanized is an antibody containing antigen-binding residues different from those of humans. "Human consensus framework region" is the framework region that is the amino acid residues most often found in the selection of sequences of the MI framework region. or

МН імуноглобуліну людини. Як правило, відбір послідовностей МІ або МН імуноглобуліну людини здійснюють із підгрупи послідовностей варіабельного домену. Як правило, підгрупа послідовностей є підгрупою, як в Кабаї єї аІ., хедоепсез ої Ргоїєїп5 ої Іттипоіодісаї! Іпіегеві, БійMN of human immunoglobulin. As a rule, the selection of MI or MN human immunoglobulin sequences is carried out from a subset of variable domain sequences. As a rule, a subgroup of sequences is a subgroup, as in Kabayi aI. Ipiegevi, Battle

Едйоп, МІН Рибіїсайоп 91-3242, Веїйезаа МО (1991), моїв5. 1-3. В одному із варіантів здійснення винаходу для М, підгрупа є підгрупою каппа І, як в Кабаї еї аї., див. вище. У одному із варіантів здійснення винаходу для УН, підгрупа є підгрупою ІП, як в Кабаї еї а!., див. вище.Edyop, MIN Rybiisayop 91-3242, Veyyezaa MO (1991), myov5. 1-3. In one embodiment of the invention for M, the subgroup is a subgroup of kappa I, as in Kabayi ei ai., see above. In one embodiment of the invention for UN, the subgroup is a subgroup of IP, as in Kabaya ei a!., see above.

Зо "Гуманізоване" антитіло стосується химерного антитіла, що містить амінокислотні залишки ізFrom "Humanized" antibody refers to a chimeric antibody containing amino acid residues from

НМК, відмінних від людських, і амінокислотні залишки із ЕК людини. У певних варіантах здійснення винаходу гуманізоване антитіло містить практично весь принаймні один, і звичайно два, варіабельні домени, де всі або практично всі НУК (наприклад, СОК) відповідають таким антитіла, відмінного від людського, і всі або практично всі ЕЕ відповідають таким антитілам людини. Гуманізоване антитіло в деяких випадках може включати принаймні частину константної області антитіла, отриманої із антитіла людини. "Гуманізована форма" антитіла, наприклад, відмінне від людини антитіло, стосується антитіла, яке піддавалось гуманізації.Non-human NMCs and amino acid residues from human ECs. In certain embodiments of the invention, the humanized antibody comprises substantially all of at least one, and typically two, variable domains, wherein all or substantially all of the NACs (eg, SOCs) correspond to such non-human antibodies, and all or substantially all of the EEs correspond to such human antibodies. A humanized antibody may in some cases include at least a portion of the antibody constant region derived from a human antibody. A "humanized form" of an antibody, eg, a non-human antibody, refers to an antibody that has been humanized.

Термін "гіперваріабельна ділянка" або "НМЕ" в тому значенні, в якому використовується в цьому документі, стосується кожної із ділянок варіабельного домену антитіла, які є гіперваріабельними по послідовності і/або утворюють задані структурою петлі ("тіперваріабельні петлі"). Як правило, нативі чотириланцюжкові антитіла включають шість НМЕ; три в МН (НІ, Н2,The term "hypervariable region" or "HME" as used herein refers to each of the regions of the variable domain of an antibody that are hypervariable in sequence and/or form structurally defined loops ("hypervariable loops"). Typically, native four-chain antibodies include six NMEs; three in MN (NI, H2,

НЗ) і три в МІ (11, 12, 13). НМК, як правило, включають амінокислотні залишки із гіперваріабельних петель і/або із "областей, які визначають комплементарність" (СОК), при цьому останні із згаданих мають найбільшу варіабельність послідовності і/або залучені до розпізнавання антигену. Типові гіперваріабельні петлі утворені амінокислотними залишками 26- 32 (11), 50-52 (12), 91-96 (І 3), 26-32 (НІ), 53-55 (Н2) і 96-101 (НЗ). (Споїніа апа І ез5К, У. Мої. Віо!. 196:901-917 (1987)). Типові СОК (СОБК-І1, СОВ-І2, СОВ-13, СОВ-НІ, СОВ-Н2 ії СОБ-НЗ) утворені амінокислотними залишками 24-34 області І 1, 50-56 області 12, 89-97 області І 3, 31-NZ) and three in MI (11, 12, 13). NMCs typically include amino acid residues from hypervariable loops and/or from "complementarity determining regions" (CDRs), the latter of which have the greatest sequence variability and/or are involved in antigen recognition. Typical hypervariable loops are formed by amino acid residues 26-32 (11), 50-52 (12), 91-96 (I 3), 26-32 (NI), 53-55 (H2) and 96-101 (NH). (Spoinia apa I ez5K, U. Moi. Vio!. 196:901-917 (1987)). Typical SOCs (SOBK-I1, SOB-I2, SOB-13, SOB-NI, SOB-H2 and SOB-NZ) are formed by amino acid residues 24-34 of region I 1, 50-56 of region 12, 89-97 of region I 3, 31-

З35В області НІ, 50-65 області Н2 і 95-102 області НЗ. (Кабаї єї аїЇ., ЗХедпепсе5 ої Ргоїеїп5 ої35B in the NI region, 50-65 in the H2 region and 95-102 in the NZ region. (Kabai eyi aiYi., Zhedpepse5 oi Rgoieip5 oi

Іттипоіодіса! Іпіегевзі, Бій Ей. Рибіїс Неайй 5егуісе, Маїйопаї! Іпзійшев ої Неайй, ВеШезаа, МО (1991)). За винятком СОКІ в МН, СОК, як правило, включають амінокислотні залишки, утворюючі гіперваріабельні петлі. СОЖК також включають "залишки, які визначають специфічність" або "БОМ", які є залишками, взаємодіючими із антигеном. 5БОК знаходяться всередині областей СОК, умовно названими-СОЕ, або а-СОК. Типові а-СОВ (а-СОВ-І1, а-СОВ-Ittypoiodis! Ipiegevzi, Biy Ey. Ribiis Neay 5eguise, Maiiopai! Ipziyshev oi Neay, VeShezaa, MO (1991)). With the exception of SOCI in MN, SOCs generally include amino acid residues forming hypervariable loops. LFAs also include "residues that determine specificity" or "BOMs", which are residues that interact with an antigen. 5BOKs are located inside the areas of SOK, conventionally named-SOE, or a-SOK. Typical a-SOV (a-SOV-I1, a-SOV-

І2, а-СОВ-І 3, а-СОВ-НІ, а-СОВ-Н2 ії а-СОВ-НЗ) утворені амінокислотними залишками 31-34 області 11, 50-55 області 12, 89-96 області І 3, 31-358 області НІ, 50-58 області Н2 і 95-102 області НЗ (див. АІтадго апі Егапе55оп, Егопі. Віозсі. 13:1619-1633 (2008)). Якщо не вказане інше, залишки НМК і інші залишки у варіабельному домені (наприклад, залишки ЕК) пронумеровані в цьому документі відповідно до КарБбаї еї а!., див. вище.I2, a-SOV-I 3, a-SOV-NI, a-SOV-H2 and a-SOV-NH) formed by amino acid residues 31-34 of region 11, 50-55 of region 12, 89-96 of region I 3, 31 -358 of the NI region, 50-58 of the H2 region and 95-102 of the NZ region (see AItadgo api Egape55op, Egopi. Viozsi. 13:1619-1633 (2008)). Unless otherwise indicated, NMC residues and other residues in the variable domain (eg, EC residues) are numbered in this document according to KarBbai ei a!., see above.

"Імунокон'югат" є антитілом, кон'югованим із однією або декількома гетерологічними молекулами, включаючи, крім іншого, цитотоксичний агент. "Індивідуум" або "індивід" є ссавцем. Ссавці включають, крім іншого, домашніх тварин (наприклад, корів, овець, кішок, собак і коней), приматів (наприклад, людей і відмінних від людини приматів, як, наприклад, мавп), кроликів і гризунів (наприклад, мишей і щурів). У певних варіантах здійснення, індивідуумом або індивідом є людина. "Виділене антитіло" являє собою антитіло, яке було відділене від домішки його природного оточення. У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло очищають до більше, ніж 95 95 або 99 95 ступеня чистоти, що визначається, наприклад, електрофоретичними (наприклад, 505-An "immunoconjugate" is an antibody conjugated to one or more heterologous molecules, including, but not limited to, a cytotoxic agent. An "individual" or "individual" is a mammal. Mammals include, but are not limited to, domestic animals (e.g., cows, sheep, cats, dogs, and horses), primates (e.g., humans and non-human primates such as monkeys), rabbits, and rodents (e.g., mice and rats). . In certain embodiments, the individual or individual is a human. An "isolated antibody" is an antibody that has been separated from impurities in its natural environment. In some embodiments of the invention, the antibody is purified to greater than 95 95 or 99 95 degrees of purity, as determined, for example, by electrophoretic (e.g., 505-

РАСЕ, ізоелектричне фокусування (ІЕЕ), капілярний електрофорез) або хроматографічними (наприклад, іонно-обмінна або зворотно-фазова НРІ С) способами. Для детального розгляду способів оцінки чистоти антитіл див., наприклад, Еіайтап еї аїЇ., У. Спготайодг. В 848:79-87 (2007). "Виділена нуклеїнова кислота" стосується молекули нуклеїнової кислоти, яка була відділена від домішки її природного оточення. Виділена нуклеїнова кислота містить молекулу нуклеїнової кислоти, що міститься в клітинах, які, як правило, містять молекулу нуклеїнової кислоти, але молекула нуклеїнової кислоти знаходиться поза хромосомою або має хромосомну локалізацію, відмінну від її природної хромосомної локалізації. "Виділена нуклеїнова кислота, яка кодує антитіло проти мезотеліну", стосується однієї або декількох молекул нуклеїнової кислоти, що кодують важкі і легкі ланцюги антитіла (або їх фрагменти), включаючи таку(ї) молекулу(и) нуклеїнової кислоти в складі одиничного вектора або окремих векторів, і таку(ї) молекулу(и) нуклеїнової кислоти, що має(ють) одну або декілька локалізацій в клітині-хазяїні.RACE, isoelectric focusing (IEE), capillary electrophoresis) or chromatographic (for example, ion-exchange or reverse-phase NRI C) methods. For a detailed consideration of methods for assessing the purity of antibodies, see, for example, Eyaitap ei aiYi., U. Spgotayodg. In 848:79-87 (2007). "Isolated nucleic acid" refers to a nucleic acid molecule that has been separated from impurities in its natural environment. The isolated nucleic acid contains a nucleic acid molecule contained in cells that normally contain a nucleic acid molecule, but the nucleic acid molecule is extrachromosomal or has a chromosomal localization different from its natural chromosomal localization. "Isolated nucleic acid encoding an anti-mesothelin antibody" refers to one or more nucleic acid molecules encoding the antibody heavy and light chains (or fragments thereof), including such nucleic acid molecule(s) as part of a unit vector or separate vectors, and such nucleic acid molecule(s) having one or more localizations in the host cell.

Термін "мезотелін" в тому значенні, в якому використовується в цьому документі, стосується будь-якого природного, зрілого мезотеліну, утвореного внаслідок процесингу білкового попередника мезотеліну в клітині. Термін містить мезотелін із будь-яких хребетних, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди і яванські макаки) і гризуни (наприклад, миші і щури), якщо не вказане інше. Термін також містить природні варіанти мезотеліну, наприклад, варіанти сплайсингу або алельні варіанти. Амінокислотна послідовність типового білковогоThe term "mesothelin" as used herein refers to any natural, mature mesothelin produced by the processing of a protein precursor of mesothelin in a cell. The term includes mesothelin from any vertebrate, including mammals such as primates (eg, humans and cynomolgus macaques) and rodents (eg, mice and rats), unless otherwise specified. The term also includes natural variants of mesothelin, such as splice variants or allelic variants. Amino acid sequence of a typical protein

Ко) попередника мезотеліну людини наведена в 5ЕО ІЮ МО:42, і типовий мезотелін людини наведена в 5ЕО ІО МО:43. Додаткові типові послідовності мезотеліну описані в цьому документі.Co) precursor of human mesothelin is given in 5EO IU MO:42, and typical human mesothelin is given in 5EO IO MO:43. Additional exemplary mesothelin sequences are described herein.

Термін "позитивне по мезотеліну злоякісне новоутворення" стосується злоякісної пухлини, що містить клітини, які експресують мезотелін на своїй поверхні.The term "mesothelin-positive malignancy" refers to a malignant tumor containing cells that express mesothelin on their surface.

Термін "позитивна по мезотеліну клітина" стосується клітини, якої експресує мезотелін на своїй поверхні.The term "mesothelin-positive cell" refers to a cell that expresses mesothelin on its surface.

Термін "моноклональне антитіло" в тому значенні, в якому використовується в цьому документі, стосується антитіла, отриманого із популяції значною мірою гомогенних антитіл, тобто, індивідуальні антитіла, що входять до складу популяції, ідентичні і/або зв'язують один і той же епітоп, за винятком можливих варіантних антитіл, наприклад, що містять мутації, що зустрічаються в природі або виникаючих під час виробництва препаратів моноклонального антитіла, при цьому такі варіанти антитіл в основному присутні в слідових кількостях. На відміну від препаратів поліклональних антитіл, які звичайно включають різні антитіла, направлені проти різних детермінант (епітопів), кожне моноклональне антитіло препарату моноклонального антитіла направлене проти однієї детермінанти антигену. Таким чином, визначення "моноклональне" вказує на властивість антитіла, отриманого із практично гомогенної популяції антитіл, і не повинно бути витлумачене як таке, що вимагає виробництва антитіла яким-небудь конкретним способом. Наприклад, моноклональні антитіла, що підлягають використанню відповідно до даного винаходу, можуть бути отримані різними методиками, включаючи, крім іншого, гібридомну технологію, біотехнологію на основі рекомбінантної ДНК, способи фагового дисплея і способи застосування трансгенних тварин, що містять всі або частину локусів імуноглобуліну людини, при цьому такі способи або інші типові способи створення моноклональних антитіл описані в цьому документі.The term "monoclonal antibody" as used herein refers to an antibody derived from a population of substantially homogeneous antibodies, i.e., individual antibodies within the population that are identical and/or bind the same epitope , with the exception of possible variant antibodies, for example, containing mutations that occur in nature or arise during the production of monoclonal antibody preparations, while such antibody variants are mainly present in trace amounts. Unlike polyclonal antibody preparations, which usually include different antibodies directed against different determinants (epitopes), each monoclonal antibody of a monoclonal antibody preparation is directed against a single antigen determinant. Thus, the definition of "monoclonal" indicates the property of an antibody derived from a substantially homogeneous population of antibodies, and should not be construed as requiring the antibody to be produced by any particular method. For example, monoclonal antibodies to be used in accordance with the present invention can be obtained by various techniques, including, but not limited to, hybridoma technology, recombinant DNA biotechnology, phage display methods, and methods using transgenic animals containing all or part of the human immunoglobulin loci. , while such methods or other typical methods of creating monoclonal antibodies are described in this document.

Термін "позитивне по МОС16 злоякісне новоутворення" стосується злоякісної пухлини, що містить клітини, які експресують МОС16 на своїй поверхні.The term "MOS16-positive malignancy" refers to a malignant tumor containing cells that express MOSC16 on their surface.

Термін "позитивна по МОС16 клітина" стосується клітини, яка експресує МОС16 на своїй поверхні. "Незахищене антитіло" стосується антитіла, яке не кон'юговане із гетерологічною молекулою (наприклад, цитотоксичним агентом) або радіоактивною міткою. Незахищене антитіло може входити до складу фармацевтичної композиції.The term "MOS16-positive cell" refers to a cell that expresses MOSC16 on its surface. "Unprotected antibody" refers to an antibody that is not conjugated to a heterologous molecule (eg, a cytotoxic agent) or a radioactive label. An unprotected antibody can be part of a pharmaceutical composition.

"Нативні антитіла" стосуються молекул природних імуноглобулінів із різною структурою."Native antibodies" refer to natural immunoglobulin molecules with different structures.

Наприклад, нативні антитіла С є гетеротетрамерними глікопротетїнами масою приблизно 150000 дальтон, що складаються із двох ідентичних легких ланцюгів і двох ідентичних важких ланцюгів, які зв'язані між собою дисульфідними містками. Від М- до С-кінця кожний важкий ланцюг має варіабельну ділянку (МН), яка також називається варіабельним доменом важкого ланцюга, за яким йдуть три константні домени (СНі, СН» і СНз). Подібним чином, від М- до С- кінця кожний легкий ланцюг має варіабельну ділянку (МІ), яка також називається варіабельним доменом легкого ланцюга, за яким йде константний легкий (СІ) домен. Легкий ланцюг антитіла може бути віднесений до одного із двох типів, званих каппа (к) і лямбда (АХ), на основі амінокислотної послідовності їх константного домену.For example, native C antibodies are heterotetrameric glycoproteins with a mass of approximately 150,000 daltons, consisting of two identical light chains and two identical heavy chains, which are connected by disulfide bridges. From the M- to the C-terminus, each heavy chain has a variable region (VR), also called the heavy chain variable domain, followed by three constant domains (CHNi, CH», and CH3). Similarly, from the M- to the C-terminus, each light chain has a variable region (MI), also called the variable light chain domain, followed by a constant light (CI) domain. The light chain of an antibody can be classified into one of two types, called kappa (k) and lambda (λ), based on the amino acid sequence of their constant domain.

Термін "вкладиш" використовується відносно інструкцій, звичайно вкладених в комерційні упаковки терапевтичних продуктів, які містять інформацію про свідчення до застосування, використання, дозування, способи застосування, комбінованої терапії, протипоказаннях і/або запобіжних засобах, що стосуються використання таких терапевтичних продуктів. "Процент (95) ідентичності амінокислотної послідовності" в порівнянні із контрольною послідовністю поліпептиду визначають як процент амінокислотних залишків в послідовності, яка представляє інтерес, які ідентичні амінокислотним залишкам в контрольній послідовності поліпептиду, після поєднання послідовностей і внесення пропусків, у випадку необхідності, для досягнення максимального процента ідентичності послідовності, і не розглядаючи будь-які консервативні заміни як частину ідентичності послідовності. Поєднання з метою визначення процента ідентичності амінокислотної послідовності може бути досягнуто різними шляхами, які знаходяться в рамках знань в даній галузі техніки, наприклад, використовуючи загальнодоступні комп'ютерні програми, такі як ВГАЗТ, ВГА5ЗТ-2, АГІОМ або Медаїїдп (ОМА5ТАК) програми.The term "package insert" is used to refer to the instructions, usually included in the commercial packages of therapeutic products, which contain information about the indications for use, use, dosage, methods of administration, combination therapy, contraindications and/or precautions related to the use of such therapeutic products. "Percent (95) amino acid sequence identity" compared to the control polypeptide sequence is defined as the percentage of amino acid residues in the sequence of interest that are identical to amino acid residues in the control polypeptide sequence, after combining the sequences and inserting gaps, if necessary, to achieve the maximum percent sequence identity, and disregarding any conservative substitutions as part of the sequence identity. Alignment to determine the percent identity of the amino acid sequence can be achieved in various ways that are within the scope of knowledge in this field of technology, for example, using publicly available computer programs such as VGAZT, VGA5ZT-2, AGIOM or Medaiydp (OMA5TAK) programs.

Фахівці в даній галузі техніки можуть визначити придатні параметри для поєднання послідовностей, включаючи будь-які алгоритми, необхідні для досягнення максимального поєднання по всій довжині послідовностей, що підлягають порівнянню. У рамках цього документа, однак, значення бо ідентичності амінокислотної послідовності отримують, використовуючи комп'ютерну програму порівняння послідовностей АГ ІСМ-2. Авторські права на комп'ютерну програму порівняння послідовностей АГІСМ-2 має Сепепіесн, Іпс., і текст програмиThose skilled in the art can determine suitable parameters for combining sequences, including any algorithms necessary to achieve maximum matching over the entire length of the sequences to be compared. For the purposes of this document, however, amino acid sequence identity values are obtained using the AG ISM-2 sequence comparison computer program. The copyright to the AGISM-2 sequence comparison computer program belongs to Sepepiesn, Ips., and the text of the program

Зо був поданий разом із документацією по використанню у відомство з охорони авторського праваZo was submitted together with the usage documentation to the copyright office

США, Умазпіпдюп 0.С., 20559, де він був зареєстрований під реєстраційним номером реєстрації авторського права США ТХИ510087. Програма АГІСМ-2 загальнодоступна в Сепепіесі, Іпс.,United States of America, Umazpipdyup 0.S., 20559, where it was registered under the registration number of the United States copyright registration TХХ510087. The AGISM-2 program is publicly available in Sepepies, Ips.,

Зоцій Зап Егапсіб5со, Саійогпіа або може бути скомпільована із тексту програми. ПрограмаZotius Zap Egapsib5so, Saiyogpia or can be compiled from the text of the program. Program

АПІСИМ-2 може бути скомпільована для використання в операційній системі ОМІХ, включаючи цифровий ОМІХ М4.00. Всі параметри порівняння послідовностей задані в програмі АГІС М-2 і не змінюються.APISIM-2 can be compiled for use in the OMIKH operating system, including the digital OMIKH M4.00. All sequence comparison parameters are set in the AGIS M-2 program and do not change.

У випадках, коли АГІСМ-2 застосовують для порівняння амінокислотних послідовностей, 90 ідентичності послідовності амінокислот даної амінокислотної послідовності А по відношенню, з або залежно від даної амінокислотної послідовності В (що альтернативно може бути сформульовано як дана амінокислотна послідовність А, яка має або містить певний 95 ідентичності послідовності амінокислот відносно, з або залежно від даної амінокислотної послідовності В) обчислюють таким чином: 100 помножити на частку Х/"У, де Х являє собою число амінокислотних залишків, розраховане як ідентичні пари програмою поєднання послідовностей АЇ ЇМ-2 при поєднанні А і В в даній програмі, і де М являє собою загальне число амінокислотних залишків в В. Слід розуміти, що у випадку, якщо довжина амінокислотної послідовності А не дорівнює довжині амінокислотної послідовності В, 90 ідентичності послідовності амінокислот А відносно В не буде дорівнювати 95 ідентичності послідовності амінокислот В відносно А. Якщо спеціально не указано інше, всі значення 95 ідентичності послідовності амінокислот, що використовуються в цьому документі, отримують, як описано в попередньому абзаці, використовуючи комп'ютерну програму АГІСМ-2.In cases where AGISM-2 is used to compare amino acid sequences, the 90 identity of the amino acid sequence of a given amino acid sequence A in relation to, with or depending on a given amino acid sequence B (which can alternatively be formulated as a given amino acid sequence A that has or contains a certain 95 amino acid sequence identity relative to, with, or depending on a given amino acid sequence B) is calculated as follows: multiply 100 by the fraction X/"U, where X represents the number of amino acid residues, calculated as identical pairs by the program for combining the sequences of АЙ ЮМ-2 when combining A and B in this program, and where M represents the total number of amino acid residues in B. It should be understood that if the length of the amino acid sequence A is not equal to the length of the amino acid sequence B, the 90 identity of the amino acid sequence A with respect to B will not be equal to the 95 identity of the amino acid sequence B is relative to A. Unless specifically not unless otherwise specified, all 95 amino acid sequence identity values used in this document are obtained as described in the previous paragraph using the AGISM-2 computer program.

Термін "фармацевтична композиція" стосується препарату, який знаходиться в такій лікарській формі, щоб біологічна активність активного інгредієнта, що міститься в ній, була ефективною, і який не містить додаткових компонентів, які є недопустимо токсичними для індивіда, якому призначають дану композицію. "Фармацевтично прийнятний носій" стосується інгредієнта в фармацевтичній композиції, відмінного від активного інгредієнта, який є нетоксичним для індивіда. Фармацевтично прийнятний носій містить, крім іншого, буфер, допоміжну речовину, стабілізатор або консервант. "Лікування" (і його граматичні варіації, такі як "лікувати" або "що лікує") в тому значенні, в бо якому використовується в цьому документі, стосується клінічного втручання в спробі змінити природний хід хвороби індивідуума, що підлягає лікуванню, і може бути виконано або в профілактичних цілях, або під час протікання клінічної патології. Бажані ефекти лікування включають, крім іншого, запобігання вияву або повторному вияву захворювання, часткове зняття симптомів, зменшення яких-небудь прямих або непрямих патологічних наслідків захворювання, запобігання метастазуванню, зниження швидкості прогресування захворювання, поліпшення або тимчасове полегшення стану захворювання, і ремісію або поліпшений прогноз.The term "pharmaceutical composition" refers to a preparation that is in such a dosage form that the biological activity of the active ingredient contained therein is effective and that does not contain additional components that are unacceptably toxic to the individual to whom the composition is prescribed. "Pharmaceutically acceptable carrier" refers to an ingredient in a pharmaceutical composition other than the active ingredient that is non-toxic to the individual. A pharmaceutically acceptable carrier contains, among other things, a buffer, excipient, stabilizer, or preservative. "Treatment" (and its grammatical variations, such as "treating" or "treating") as used herein refers to a clinical intervention in an attempt to alter the natural course of a disease in the individual being treated, and may be performed either for preventive purposes or during the course of clinical pathology. Desired effects of treatment include, but are not limited to, prevention of disease onset or recurrence, partial relief of symptoms, reduction of any direct or indirect pathological effects of the disease, prevention of metastasis, reduction of disease progression, improvement or temporary relief of disease status, and remission or improved prognosis .

У деяких варіантах здійснення винаходу антитіла за винаходом використовуються для затримки розвитку захворювання або для сповільнення прогресування захворювання.In some embodiments of the invention, the antibodies of the invention are used to delay the development of a disease or to slow the progression of a disease.

Термін "варіабельна ділянка" або "варіабельний домен" стосується домену важкого або легкого ланцюга антитіла, який залучений до зв'язування антитіла з антигеном. Варіабельні домени важкого ланцюга і легкого ланцюга (МН і МІ, відповідно) природного антитіла, в основному, мають схожі структури, де кожний домен містить чотири консервативні каркасні області (ЕК) і три гіперваріабельні ділянки (НУК). (Див., наприклад, Кіпаї єї аї. Кирі Іттипоіоду, біІп єйд., М.Н. Ргеетап апа Со., раде 91 (2007).) Одиничний домен МН або Мі може виявитися достатнім для придання антигензв'язуючої специфічності. Більш того антитіла, які зв'язують певний антиген, можуть бути виділені, використовуючи домен МН або Мі із антитіла, який зв'язує антиген для скринінгу бібліотеки комплементарних доменів Мі. або МН, відповідно. Див., наприклад, Ропоїапо еї аї., У. Іттипої. 150:880-887 (1993); СіаїКвоп еї аї!., Майте 352:624-628 (1991).The term "variable region" or "variable domain" refers to the domain of the heavy or light chain of an antibody that is involved in the binding of an antibody to an antigen. The variable domains of the heavy chain and the light chain (MH and MI, respectively) of the natural antibody basically have similar structures, where each domain contains four conserved framework regions (EC) and three hypervariable regions (HIV). (See, e.g., Kipai et al. Kiri Ittipoiou, biIp eid., MN Rgeetap apa So., rade 91 (2007).) A single MN or Mi domain may be sufficient to confer antigen-binding specificity. Moreover, antibodies that bind a particular antigen can be isolated using the MH or Mi domain of the antibody that binds the antigen to screen a library of complementary Mi domains. or MN, respectively. See, for example, Ropoiapo ei ai., U. Ittipoi. 150:880-887 (1993); SiaiKwop ei ai!., Mayte 352:624-628 (1991).

Термін "вектор" в тому значенні, в якому використовується в цьому документі, стосується молекули нуклеїнової кислоти, здатної розмножати іншу нуклеїнову кислоту, до якої вона приєднана. Термін містить вектор як структура нуклеїнової кислоти, яка самореплікується, а також вектор, вбудований в геном клітини-хазяїна, в яку він був введений. Певні вектори здатні керувати експресією нуклеїнової кислоти, із якою вони функціонально зв'язані. Такі вектори називаються в цьому документі "експресійними векторами".The term "vector" as used herein refers to a nucleic acid molecule capable of propagating another nucleic acid to which it is attached. The term includes a vector as a self-replicating nucleic acid structure as well as a vector integrated into the genome of the host cell into which it has been introduced. Certain vectors are capable of directing the expression of the nucleic acid to which they are functionally linked. Such vectors are called "expression vectors" in this document.

ІІ. Композиції і способиII. Compositions and methods

У одному із аспектів, винахід оснований, частково, на антитілах, які зв'язуються з мезотеліном, і імунокон'югатах, які містять такі антитіла. Антитіла і імунокон'югати за винаходом придатні, наприклад, для діагностики або лікування позитивних по мезотеліну злоякіснихIn one aspect, the invention is based, in part, on antibodies that bind to mesothelin and immunoconjugates that contain such antibodies. Antibodies and immunoconjugates according to the invention are suitable, for example, for the diagnosis or treatment of mesothelin-positive malignant

Зо пухлин.From tumors.

А. Типові антитіла проти мезотелінуA. Typical antibodies against mesothelin

У одному із аспектів, винахід являє виділені антитіла, які зв'язують мезотелін. Природний мезотелін з'являється внаслідок розщеплення білкового попередника мезотеліну в клітині, утворюючи мезотелін і мегакаріоцитарний потенціюючий фактор (МРЕ), як показано на фігурі 1.In one aspect, the invention provides isolated antibodies that bind mesothelin. Natural mesothelin arises from the cleavage of the mesothelin protein precursor in the cell to form mesothelin and megakaryocytic potentiating factor (MPE), as shown in Figure 1.

Мезотелін містить укорочення С-кінця відносно білка-попередника. Таке укорочення може зумовлювати зв'язування якоря СРІ. Мезотелін може залишатися пов'язаним із клітинною поверхнею, наприклад, через якір ОРІ, або мезотелін може від'єднувати від клітини (наприклад, якір ОРІ може розщеплюватися досі не ідентифікованим ферментом) із утворенням мезотеліну, який відщепився, в клітинній культурі або сироватці крові тварин.Mesothelin contains a truncation of the C-terminus relative to the precursor protein. Such a shortening may cause binding of the SRI anchor. Mesothelin may remain associated with the cell surface, e.g., via an ORI anchor, or mesothelin may dissociate from the cell (eg, the ORI anchor may be cleaved by an as-yet-unidentified enzyme) to produce cleaved mesothelin in cell culture or animal serum .

Типова послідовність білюового попередника природної мезотеліну людини представлена якA typical sequence of the bileu precursor of natural human mesothelin is presented as

ЗБЕО ІЮ МО:42, і відповідна послідовність мезотеліну представлена як 5ЕБЕО ІЮ МО:43 (відповідаючи амінокислотам 296-580 5ЕО ІЮ МО:42). Альтернативна послідовність мезотеліну відповідає амінокислотам 296-598 5БЕО ІЮ МО:42. 5ЕО ІЮ МО:44 являє собою природний варіантZBEO IU MO:42, and the corresponding mesothelin sequence is represented as 5EBEO IU MO:43 (corresponding to amino acids 296-580 of 5EO IU MO:42). The alternative sequence of mesothelin corresponds to amino acids 296-598 of 5BEO IU MO:42. 5EO IU MO:44 is a natural variant

ЗЕО І МО:42, результатом процесинга якого є мезотелін, що має послідовність ЗЕО ІЮ МО:45.ZEO I MO:42, the result of processing of which is mesothelin, which has the sequence ZEO IU MO:45.

ЗЕО ІЮО МО:45 містить вставку із восьми амінокислотних залишків в позиції 116 амінокислоти відносно 5ЕО ІЮО МО:43. Альтернативна форма мезотеліну, представлена в 5ЕО ІЮ МО:45, мабуть, становить «5 95 транскриптів мезотеліну в пухлинних клітинних лініях.ZEO IJU MO:45 contains an insertion of eight amino acid residues at amino acid position 116 relative to 5EO IJU MO:43. The alternative form of mesothelin presented in 5EO IU MO:45 appears to be “5 95 transcripts of mesothelin in tumor cell lines.

У певних варіантах здійснення винаходу антитіло проти мезотеліну має щонайменше одну або декілька наведених нижче властивостей в будь-якому поєднанні: (а) зв'язує епітоп 5ЕО ІЮО МО:43, який містить (ї) Е153 і 0174 або (ії) Е211; (Б) виявляє або не виявляє змінене або зменшене зв'язування із різними глікозилованими формами мезотеліну; (с) блокує або не блокує зв'язування мезотеліну із МОС16; (а) зв'язує мезотелін з афінністю «5 НМ, або альтернативно «1 нМ, або альтернативно х0,5In certain embodiments of the invention, an antibody against mesothelin has at least one or more of the following properties in any combination: (a) binds the epitope 5EO IYUO MO:43, which contains (i) E153 and 0174 or (ii) E211; (B) exhibits or does not exhibit altered or reduced binding to various glycosylated forms of mesothelin; (c) blocks or does not block the binding of mesothelin to MOS16; (a) binds mesothelin with an affinity of "5 nM, or alternatively "1 nM, or alternatively x0.5

НМ, або альтернативно х0,1 нМ, і в деяких випадках 20,0001 нМ. У будь-якому із вищенаведених варіантів здійснення винаходу антитіло, яке не блокує зв'язування мезотеліну ізNM, or alternatively x0.1 nM, and in some cases 20.0001 nM. In any of the above embodiments of the invention, an antibody that does not block the binding of mesothelin to

МИиИС16, являє собою антитіло, яке посилює зв'язування мезотеліну із МОС16.MIiIS16 is an antibody that enhances the binding of mesothelin to MOS16.

У іншому варіанті здійснення винаходу антитіло проти мезотеліну зв'язує епітоп ЗЕО ІЮIn another embodiment of the invention, an antibody against mesothelin binds the ZEO IU epitope

МО:43, який містить Е153 і 0174. У одному із таких варіантів здійснення винаходу антитіло проти мезотеліну додатково має одну або декілька нижченаведених властивостей в будь-якому поєднанні: (а) не виявляє зменшене зв'язування із глікозилованими формами мезотеліну; (Б) не блокує зв'язування мезотеліну з МОС16; (с) зв'язує мезотелін із афінністю «5 НМ, або альтернативно «1 нМ, або альтернативно х0,5MO:43, which contains E153 and 0174. In one such embodiment of the invention, the antibody against mesothelin additionally has one or more of the following properties in any combination: (a) does not show reduced binding to glycosylated forms of mesothelin; (B) does not block binding of mesothelin to MOS16; (c) binds mesothelin with an affinity of "5 nM, or alternatively "1 nM, or alternatively x0.5

НМ, і в деяких випадках 20,0001 нМ.NM, and in some cases 20.0001 nM.

У таких варіантах здійснення винаходу антитіло, яке не блокує зв'язування мезотеліну ізIn such embodiments of the invention, an antibody that does not block the binding of mesothelin to

МИС16, посилює зв'язування мезотеліну із МОС16 і/або антитіло зв'язується із афінністю «1 НМ.MIS16 enhances the binding of mesothelin to MOS16 and/or the antibody binds with an affinity of 1 nm.

Характерне антитіло, що має наведені вище властивості, є 709, і його гуманізовані варіанти, такі як п709.м3, розглянуті в цьому документі. У будь-якому із вищезазначених варіантів здійснення винаходу мезотелін, з яким зв'язується антитіло проти мезотеліну, є мезотеліном людини.A typical antibody having the above properties is 709, and its humanized variants, such as p709.m3, are discussed herein. In any of the above embodiments of the invention, the mesothelin to which the anti-mesothelin antibody binds is human mesothelin.

У іншому варіанті здійснення винаходу антитіло проти мезотеліну зв'язує епітоп ЗЕО ІЮIn another embodiment of the invention, an antibody against mesothelin binds the ZEO IU epitope

МО:43, який містить Е211. У одному із таких варіантів здійснення винаходу антитіло проти мезотеліну додатково має одну або декілька наведених нижче властивостей: (а) не блокує зв'язування мезотеліну із МОС16; (Б) зв'язує мезотелін з афінністю «5 НМ, або альтернативно «1 нМ, або альтернативно х0,5MO:43, which contains E211. In one of these variants of the implementation of the invention, the antibody against mesothelin additionally has one or more of the following properties: (a) does not block the binding of mesothelin to MOS16; (B) binds mesothelin with an affinity of "5 nM, or alternatively "1 nM, or alternatively x0.5

НМ, і в деяких випадках 20,0001 нМ.NM, and in some cases 20.0001 nM.

У таких варіантах здійснення винаходу антитіло, яке не блокує зв'язування мезотеліну ізIn such embodiments of the invention, an antibody that does not block the binding of mesothelin to

МИС16, посилює зв'язування мезотеліну із МОС16, і/або антитіло зв'язується із афінністю «1MIS16 enhances the binding of mesothelin to MOS16, and/or the antibody binds with affinity "1

НМ. Характерним антитілом, що має вищезгаданими властивостями, є 22А10, і його гуманізовані варіанти, такі як 22А10.м83, розглянуті в цьому документі. У будь-якому із вищенаведених варіантів здійснення винаходу мезотелін, з яким зв'язується антитіло проти мезотеліну, є мезотеліном людини, мезотеліном яванської макаки і/або мезотеліном щура.NM. A typical antibody having the aforementioned properties is 22A10, and its humanized variants, such as 22A10.m83, are discussed herein. In any of the above embodiments of the invention, the mesothelin to which the anti-mesothelin antibody binds is human mesothelin, Javanese macaque mesothelin, and/or rat mesothelin.

У іншому варіанті здійснення винаходу антитіло проти мезотеліну: (а) зв'язується з епітопом в межах амінокислот 1-131 5ЕО ІЮ МО:43; і (Б) зв'язує мезотелін із афінністю «5 НМ, або альтернативно «1 нМ, або альтернативно х0,5In another embodiment of the invention, an antibody against mesothelin: (a) binds to an epitope within amino acids 1-131 of 5EO IYU MO:43; and (B) binds mesothelin with an affinity of <5 nM, or alternatively <1 nM, or alternatively x0.5

НМ, або альтернативно «0,1 нМ, і в деяких випадках 20,0001 нМ.NM, or alternatively "0.1 nM, and in some cases 20.0001 nM.

У одному із таких варіантів здійснення винаходу антитіло блокує зв'язування мезотеліну ізIn one of these variants of the invention, the antibody blocks the binding of mesothelin to

Зо МИиСТ16 і/або зв'язується із епітопом в межах амінокислот 1-64 або 1-70 5ЕО ІЮ МО:43. У одному із таких варіантів здійснення винаходу антитіло витісняє МИОС16б із зв'язку з мезотеліном.From MIiST16 and/or binds to the epitope within amino acids 1-64 or 1-70 of 5EO IU MO:43. In one of these variants of the invention, the antibody displaces MYOS16b from binding to mesothelin.

Характерним антитілом, що має вищезазначеними властивостями, є 19С3, розглянуте в цьому документі. У будь-якому із вищенаведених варіантів здійснення винаходу мезотелін, з яким зв'язується антитіло проти мезотеліну, є мезотеліном людини.A typical antibody with the above-mentioned properties is 19C3, discussed in this document. In any of the above embodiments of the invention, the mesothelin to which the anti-mesothelin antibody binds is human mesothelin.

СпособиMethods

Щоб визначити, "чи зв'язується з епітопом ЗЕО ІЮ МО:43, що містить Е153 і 0174" або "чи зв'язується з епітопом 5ЕО ІЮ МО:43, що містить Е211" антитіло проти мезотеліну, ці залишки піддаються мутуванню в поліпептиді, що містить ЗЕО ІЮ МО:43, і аналізують зв'язування антитіла з мутованим поліпептидом, який експресується в клітинах 293, способом ЕАС5, як описано в Прикладі С, де значне зниження (270 95 зниження) або усунення зв'язування антитіла із мутантним поліпептидом вказує на те, що антитіло зв'язується з епітопом ЗЕО ІЮО МО:43, що містить Е153 і 0174 або Е211.To determine whether an anti-mesothelin antibody binds to the ZEO epitope of IU MO:43 containing E153 and 0174" or "whether an anti-mesothelin antibody binds to the 5EO epitope of IU MO:43 containing E211", these residues are mutated in the polypeptide , containing ZEO IU MO:43, and analyze the binding of the antibody to the mutated polypeptide, which is expressed in 293 cells, by the EAC5 method, as described in Example C, where a significant decrease (270 95 decrease) or elimination of binding of the antibody to the mutant polypeptide indicates that the antibody binds to the epitope ZEO IJU MO:43 containing E153 and O174 or E211.

Щоб визначити, чи дійсно антитіло проти мезотеліну "не виявляє ослабленої взаємодії із глікозилованими формами мезотеліну", міченого мезотелін людини експресується в клітинахTo determine whether the anti-mesothelin antibody does indeed "show a weakened interaction with glycosylated forms of mesothelin," labeled human mesothelin is expressed in cells

СНО, його очищають (за допомогою мітки) і додатково розділяють відповідно до заряду на колонці Мопо 5 на фракції з високою (фракція А11), середньою (А12), низькою (В1) і практично відсутнім (В5) ступенем глікозилування мезотеліну, як описано в Прикладі Н. Кожну фракцію наносять на чип із заздалегідь зв'язаним антитілом проти мезотеліну і вимірюють швидкість асоціації і швидкість дисоціації для кожної фракції. Якщо значення афінності для кожної фракції знаходиться в межах 25 95 один від одного, це вказує на те, що антитіло не виявляє ослабленої взаємодії з глікозилованими формами мезотеліну.CHO, it is purified (with the help of a label) and additionally separated according to the charge on the Mopo 5 column into fractions with a high (fraction A11), medium (A12), low (B1) and practically absent (B5) degree of glycosylation of mesothelin, as described in Examples H. Each fraction is applied to a chip with a pre-bound antibody against mesothelin and the rate of association and the rate of dissociation for each fraction are measured. If the affinity value for each fraction is within 25 95 of each other, this indicates that the antibody does not show a weakened interaction with the glycosylated forms of mesothelin.

Щоб визначити, чи дійсно антитіло проти мезотеліну "блокує зв'язування мезотеліну ізTo determine whether the anti-mesothelin antibody actually "blocks the binding of mesothelin to

МИиИС16", "не блокує зв'язування мезотеліну із МОС16" або "посилює зв'язування мезотеліну ізMIiIS16", "does not block the binding of mesothelin to MOS16" or "enhances the binding of mesothelin to

МИС16", виконують аналіз зв'язування МИОС16б таким чином. Зокрема, біотинільований фрагмент МОС16 (що містить три муцинові повтори) інкубують із клітинами А431, стабільно експресуючих мезотелін в присутності або відсутності антитіла проти мезотеліну, і рівень зв'язування біотинільованого МИОС16 із клітинами визначають БАС5 за допомогою стрептавідину-«РЕ. Сайт зв'язування МОС16б в молекулі мезотеліну був експериментальним чином локалізований в перших 64 амінокислотних залишках мезотеліну (КапекКо еї аї.,.). Віо! 60 Спет. 248:3739-49 (2009)). З іншого боку, клітини РОЗ, стабільно експресують МИС16,МИС16", perform a binding analysis of МИОС16b as follows. In particular, a biotinylated fragment of МОС16 (containing three mucin repeats) is incubated with A431 cells stably expressing mesothelin in the presence or absence of an antibody against mesothelin, and the level of binding of biotinylated МИОС16 to the cells is determined BAS5 with the help of streptavidin-"PE. The binding site of MOS16b in the mesothelin molecule was experimentally localized in the first 64 amino acid residues of mesothelin (KapekKo ei ai.,.). Vio! 60 Spet. 248:3739-49 (2009)). On the other hand, ROZ cells stably express MYS16,

інкубують в присутності очищеного мезотеліну-піз8 ("пі8" представлений у вигляді ЗЕО ІЮincubated in the presence of purified mesothelin-pis8 ("pi8" is presented in the form of ZEO IU

МО:49), заздалегідь інкубованого із антитілами проти мезотеліну, і зв'язування очищених комплексів мезотелін-пізв:антитіло із МОС1б-експресуючими клітинами визначають способомMO:49), previously incubated with antibodies against mesothelin, and the binding of purified mesothelin-pizv:antibody complexes to MOSC1b-expressing cells is determined by

ЕАС5, використовуючи анти-Нізб антитіло, кон'юЮговане з АІеха-647 ("Нізб" представлений у вигляді ЗЕО ІЮ МО:50). Якщо в будь-якому із вищезгаданих способів, сигнал ЕАСЗ на 250 95 нижче в присутності антитіла проти мезотеліну, ніж в його відсутність, тоді вважають, що антитіло блокує зв'язування мезотеліну із МОС16. Якщо в будь-якому із вищезгаданих способів, сигнал ЕАС5 не знижується 250 95 в присутності антитіла проти мезотеліну, тоді вважають, що антитіло не блокує зв'язування мезотеліну із МОС16. Якщо в останньому із згаданих вище способів аналізу сигнал ЕАС5 збільшується в присутності антитіла проти мезотеліну, ніж в його відсутність, тоді вважають, що антитіло збільшує зв'язування мезотеліну з МОС16. "Чи зв'язується антитіло проти мезотеліну із афінністю «5 нМ, або альтернативно «1 нМ, або альтернативно «0,5 НМ, або альтернативно «0,1 нМ" визначають згідно з аналізом Віасоге, як описано в цьому документі в розділі П.А.1. Зокрема, Ка вимірюють, використовуючи поверхневий плазмонний резонансний аналіз, використовуючи ВІАСОКЕФ-2000 абоEAS5, using an anti-Nisb antibody, conjugated with AIekha-647 ("Nisb" is presented in the form of ZEO IU MO:50). If, in any of the above-mentioned methods, the EACZ signal is 250 95 lower in the presence of an antibody against mesothelin than in its absence, then it is believed that the antibody blocks the binding of mesothelin to MOSC16. If, in any of the above-mentioned ways, the EAS5 signal is not reduced 250 95 in the presence of an antibody against mesothelin, then it is believed that the antibody does not block the binding of mesothelin to MOSC16. If in the last of the above-mentioned methods of analysis, the EAS5 signal increases in the presence of an antibody against mesothelin, than in its absence, then it is believed that the antibody increases the binding of mesothelin to MOSC16. "Whether an anti-mesothelin antibody binds with an affinity of "5 nM, or alternatively "1 nM, or alternatively "0.5 nM, or alternatively "0.1 nM" is determined according to the Viasogue assay as described herein in section P .A.1. In particular, Ka is measured using surface plasmon resonance analysis using VIASOKEF-2000 or

ВІАСОКЕФ-3000 (ВІАсоге, Іпс., Різсаїамжау, МУ) при 25 "С застосовуючи чипи із іммобілізованим антигеном СМ5 при «10 одиницях відповіді (КО). Коротко, карбоксиметиловані декстранові біосенсорні чипи (СМ5, ВІАСОМКЕ, Іпс.) активуються М-етил-М'-(З-диметиламінопропіл)- карбодііміду гідрохлоридом (ЕОС) і М-гідроксисукцинімідом (МН) відповідно до рекомендацій фірми-виробника. Антигеном, що підлягає дослідженню, є мезотелін, синтезований і виділений із Е.соЇї, як описано в Прикладі В. Антиген розводять 10 мМ ацетату натрію, рН 4,8 до концентрації 5 мкг/мл (х0,2 мкМ) до введення при швидкості потоку 5 мкл/хв. для досягнення приблизно 10 одиниць відповіді (КО) пов'язаного білка. Після ін'єкції антигену вводять 1М етаноламін для блокування груп, що не беруть участь в реакції. Для кінетичних вимірювань двократне серійне розведення Раб (від 0,78 нМ до 500 нМ) вводить в РВ5 із 0,05 95 полісорбат 20 (ТМ/ЕЕМ-207М) сурфактантом (РВБТ) при 25С при швидкості потоку, який дорівнює приблизно 25 мкл/хв. Швидкості асоціації (Кол) ії швидкості дисоціації (Ко обчислюють, використовуючи просту взаємно-однозначну модель зв'язування Ленгмюра (ВІАСОКЕФVIASOKEF-3000 (VIASOGE, Ips., Rizsaiamjau, MU) at 25 "C using chips with immobilized CM5 antigen at "10 response units (CO). Briefly, carboxymethylated dextran biosensor chips (CM5, VIASOMKE, Ips.) are activated by M-ethyl -M'-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimide hydrochloride (EOS) and M-hydroxysuccinimide (MH) in accordance with the manufacturer's recommendations. The antigen to be investigated is mesothelin, synthesized and isolated from E. soybean, as described in Example B. Antigen is diluted in 10 mM sodium acetate, pH 4.8 to a concentration of 5 μg/mL (x0.2 μM) prior to administration at a flow rate of 5 μL/min to achieve approximately 10 response units (RU) of bound protein.After injection of antigen, 1M ethanolamine is administered to block nonreactive groups.For kinetic measurements, a two-fold serial dilution of Rab (from 0.78 nM to 500 nM) is injected into RV5 with 0.05 95 polysorbate 20 (TM/EEM- 207M) surfactant (RBBT) at 25C at a flow rate of approximately 25 μl/min. Shv association rates (Kol) and dissociation rates (Ko) are calculated using a simple Langmuir mutual-unique binding model (VIASOKEF

Емаїнайоп Зоймаге мегзіоп 3.2) шляхом одночасного вирівнювання сенсограм асоціації і дисоціації. Рівноважну константу дисоціації (Ка) обчислюють за відношенням Кон/Коп. Див., наприклад, Спеп еї аї., У. Мої. ВіоІ. 293:865-881 (1999). Якщо швидкість асоціації перевищує 106Emainaiop Zoymage megsiop 3.2) by simultaneously aligning the sensograms of association and dissociation. The equilibrium constant of dissociation (Ka) is calculated from the ratio Kon/Kop. See, for example, Spep ei ai., U. Moi. VioI. 293:865-881 (1999). If the association speed exceeds 106

М" с", використовуючи вищезгаданий спосіб поверхневого плазмонного резонансного аналізу, тоді швидкість асоціації може бути визначена шляхом використання методики гасіння флуоресценції, яка вимірює збільшення або зменшення інтенсивності емісії флуоресценції (збудження-295 нм; емісія-340 нм, 16 нм смуга пропускання) при 25 "С 20 НМ антитіла (Бар форма) проти антигену в РВ5, рН 7,2, в присутності збільшуваних концентрацій антигену згідно із вимірюваннями спектрофотометра, такого як обладнаний зупинкою потоку спектрофотометр (Амім Іпзігитепіз) або розрахованого на 8000 зразків 5ІМ-АМІМСО"М спектрофотометр (Тептозресігопіс) із обертовою кюветою.M" s", using the aforementioned method of surface plasmon resonance analysis, then the rate of association can be determined by using the fluorescence quenching technique, which measures the increase or decrease in fluorescence emission intensity (excitation-295 nm; emission-340 nm, 16 nm bandwidth) at 25 "C 20 NM antibody (Bar form) against the antigen in РВ5, pH 7.2, in the presence of increasing concentrations of the antigen according to the measurements of a spectrophotometer, such as a spectrophotometer equipped with a stop flow (Amim Ipsigitepiz) or designed for 8000 samples 5IM-AMIMSO"M spectrophotometer (Teptozresigopis) with a rotating cuvette.

Антитіло 7059 і інші варіанти здійснення винаходуAntibody 7059 and other variants of the invention

У одному із аспектів винахід стосується антитіла проти мезотеліну, що містить принаймні один, два, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибрані із (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:20; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮIn one aspect, the invention relates to an antibody against mesothelin containing at least one, two, three, four, five or six NUCs selected from (a) HME-NI containing the amino acid sequence ZEO IU MO:20; (B) NMK-H2 containing the amino acid sequence ZE IU

МО:21; (с) НМЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:22; (4) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:17; (є) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:18; ї (3 НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮMO: 21; (c) NMEK-NZ containing the amino acid sequence 5EO IU MO:22; (4) NMK-I1, containing the amino acid sequence ZEO IU MO:17; (c) NMK-12, containing the amino acid sequence ZEO IU MO:18; (3 NMK-I3, containing the amino acid sequence of ZEO IU

МО:19.MO:19.

У одному із аспектів винахід стосується антитіла, що містить принаймні одну, принаймні дві, або всі три послідовності МН НМ, вибрані із (а) НМК-НІ, що містить амінокислотнуIn one aspect, the invention relates to an antibody containing at least one, at least two, or all three MH NM sequences selected from (a) NMK-NI containing an amino acid

БО послідовність ЗЕО ІЮ МО:20; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮBO sequence ZEO IU MO:20; (B) NMK-H2 containing the amino acid sequence ZE IU

МО:21; ї (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО:22. У одному із варіантів здійснення винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:22. У іншому варіанті здійснення винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІЮО МО:22, і НМАК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО:19. У додатковому варіанті здійснення винаходу антитіло містить НМА-MO: 21; and (c) NMA-NZ containing the amino acid sequence ZEO IYUO MO:22. In one of the embodiments of the invention, the antibody contains NMK-NZ containing the amino acid sequence 5EO IU MO:22. In another embodiment of the invention, the antibody contains NMK-NZ, containing the amino acid sequence 5ES IUO MO:22, and NMAK-IIZ, containing the amino acid sequence zEO IUO MO:19. In an additional embodiment of the invention, the antibody contains HMA-

НЗ, що містить амінокислотну послідовність «ЕЕ ІЮ МО:22, НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:19, ї НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮ МО:21. У додатковому варіанті здійснення винаходу антитіло містить (а) НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:20; (Б) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність 60 ЗЕО ІЮ МО:21; і (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:22.НZ, containing the amino acid sequence "ЕЕ ИЯ MO:22, NMK-I3, containing the amino acid sequence зEO ИЯ MO:19, and НМА-Н2, containing the amino acid sequence з"EO ИЯ MO:21. In an additional embodiment of the invention, the antibody contains (a) NMK-NI, which contains the amino acid sequence хEO ИЯ MO:20; (B) NMA-H2, containing amino acid sequence 60 ZEO IU MO:21; and (c) NMA-NZ containing the amino acid sequence zZEO IU MO:22.

У іншому аспекті, винахід стосується антитіла, що містить принаймні одну, принаймні дві, або всі три МІ НМ послідовності, вибрані із (а) НМА-Ї1, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:17; (Б) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:18; і (с) НМАК-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО:19. У одному із варіантів здійснення винаходу антитіло містить (а) НМАК-11, що містить амінокислотну послідовність хЕОIn another aspect, the invention relates to an antibody containing at least one, at least two, or all three MI NM sequences selected from (a) NMA-Y1 containing the amino acid sequence zZEO IJU MO:17; (B) NMK-12, containing the amino acid sequence zZEO IU MO:18; and (c) NMAK-I3 containing the amino acid sequence ZE IU MO:19. In one of the variants of implementation of the invention, the antibody contains (a) NMAK-11 containing the amino acid sequence хEO

ІО МО:17; (р) НУВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:18; і (с) НМЕ-І 3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:19.IO MO:17; (p) NUV-1I2, containing the amino acid sequence ZEO IU MO:18; and (c) NME-I 3 containing the amino acid sequence ZEO IU MO:19.

У іншому аспекті антитіло за винаходом містить (а) МН домен, що містить принаймні одну, принаймні дві, або всі три послідовності МН НМ, вибрані із () НМЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:20, (ії) НМА-На2г, що містить амінокислотну послідовністьIn another aspect, the antibody according to the invention contains (a) a MH domain containing at least one, at least two, or all three MH NM sequences selected from () NMEK-NI containing the amino acid sequence хEO ЮЮ MO:20, (ii) НМА -Na2g containing the amino acid sequence

ЗЕО ІЮ МО:21, і (ії) НМАК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану із БЕО ІЮ МО:22; і (Б) М. домен, що містить принаймні одну, принаймні дві, або всі три послідовності МІ НМК, вибрані із (ї) НМК-11, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:17, (ії) НМЕ-12, що містить амінокислотну послідовність ЕС ІЮ МО:18, ї (с) НМА-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:19.ZEO IU MO:21, and (iii) NMAK-NZ containing an amino acid sequence selected from BEO IU MO:22; and (B) M. domain containing at least one, at least two, or all three MI NMC sequences selected from (i) NMC-11 containing the amino acid sequence 5EO IU MO:17, (ii) NME-12, which contains the amino acid sequence ES IU MO:18, and (c) NMA-IZ containing the amino acid sequence ZEO IU MO:19.

У іншому аспекті винахід стосується антитіла, що містить (а) НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:20; (Б) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовністьIn another aspect, the invention relates to an antibody containing (a) NMK-NI containing the amino acid sequence хEO ЮЮ MO:20; (B) HMA-H2 containing the amino acid sequence

ЗЕО ІЮ МО:21; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:22; (94) НМА-І11, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:17; (є) НМАК-І2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:18; ї (3 НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮZEO IU MO:21; (c) NMA-NZ containing the amino acid sequence FEO IU MO:22; (94) NMA-I11, containing the amino acid sequence BEO IU MO:17; (c) NMAK-I2, containing the amino acid sequence ZEO IU MO:18; (3 NMK-I3, containing the amino acid sequence of ZEO IU

МО:19.MO:19.

У будь-якому із вищезазначених варіантів здійснення винаходу антитіло проти мезотеліну є гуманізованим. У одному із варіантів здійснення, антитіло проти мезотеліну містить НУК, як в будь-якому із вищезазначених варіантів здійснення, і додатково містить акцепторну каркасну ділянку людини, наприклад, каркасна ділянка імуноглобуліну людини або консенсусна каркасна ділянка людини. У певних варіантах здійснення акцепторною каркасною ділянкою людини є консенсусна каркасна ділянка МІ каппа | людини (Мікі) і/або каркасна ділянка МН (МНадта), яка відрізняється від консенсусної послідовності підгрупи Ш МН людини (МНії) по З положеннях:In any of the above embodiments of the invention, the antibody against mesothelin is humanized. In one embodiment, the anti-mesothelin antibody comprises a NUC, as in any of the above embodiments, and further comprises a human acceptor framework region, for example, a human immunoglobulin framework region or a human consensus framework region. In certain embodiments, the human acceptor framework region is an MI kappa | consensus framework region of a person (Miki) and/or the framework region of the MN (MNadta), which differs from the consensus sequence of the Ш subgroup of the MN of the human (MNii) in three positions:

ЕЛЛА, М7ЗТ і І78А (Сапег еї аї!., Ргос. Май). Асад. 5сі. ОБА 89:4285 (1992)). У іншому варіантіELLA, M7ZT and I78A (Sapeg ei ai!., Rgos. May). Asad 5 BOTH 89:4285 (1992)). In another version

Зо здійснення винаходу антитіло проти мезотеліну містить НМЕ, як в будь-якому із вищезазначених варіантів здійснення винаходу і додатково містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить послідовність каркасної ділянки ЕК2 5ЕО ІО МО:25, і послідовність ЕКЗ 5ЕО ІЮО МО:27. У одному із таких варіантів здійснення винаходу каркасною ділянкою варіабельного домену легкого ланцюга є модифікована консенсусна каркасна ділянка (Мі кі) МІ. каппа І, що має ЕК2 послідовність ЗЕО ІЮ МО:25 і ЕКЗ послідовність зЕО ІЮ МО:27.According to the implementation of the invention, the antibody against mesothelin contains NME, as in any of the above-mentioned variants of the implementation of the invention and additionally contains a variable domain of the light chain containing the sequence of the framework section EK2 5EO IO MO:25, and the sequence EKZ 5EO IUO MO:27. In one of these variants of the invention, the frame section of the variable domain of the light chain is a modified consensus frame section (Mi ki) of MI. kappa I, having EC2 sequence ZEO IU MO:25 and ECZ sequence zEO IU MO:27.

У іншому аспекті антитіло проти мезотеліну містить послідовність варіабельного домену (УН) важкого ланцюга, яка принаймні на 90 95, 91 9Уо, 92 У, 93 Уо, 94 95, 95 Фо, 96 Фо, 97 Фо, 98 о, 9995 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО:8. У певних варіантах здійснення винаходу послідовність УН, яка принаймні на 90 Фо, 91 У, 92 95, 93 95, 94 Уо, 95 Фо, 96 9», 97 Фо, 98 95 або 99 95 ідентична, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), вставки або делеції відносно контрольної послідовності, але антитіло проти мезотеліну, що містить таку послідовність, зберігає здатність зв'язувати мезотелін. У певних варіантах здійснення винаходу всього від 1 до 10 амінокислот були замінені, вставлені і/або делетовані в ЗЕО ІЮ МО:8. У певних варіантах здійснення винаходу заміни, вставки або делеції здійснюють в ділянках позаIn another aspect, the anti-mesothelin antibody comprises a heavy chain variable domain (VD) sequence that is at least 90 95, 91 9Uo, 92 U, 93 Uo, 94 95, 95 Fo, 96 Fo, 97 Fo, 98 o, 9995, or 100 95 identical to the amino acid sequence 5EO IU MO:8. In certain embodiments of the invention, the UN sequence that is at least 90 Fo, 91 U, 92 95, 93 95, 94 Uo, 95 Fo, 96 9", 97 Fo, 98 95 or 99 95 contains substitutions (for example, conservative substitutions ), insertions or deletions relative to the control sequence, but an antibody against mesothelin containing such a sequence retains the ability to bind mesothelin. In certain embodiments of the invention, a total of 1 to 10 amino acids were substituted, inserted and/or deleted in ZEO IU MO:8. In certain embodiments of the invention, substitutions, insertions, or deletions are made in regions outside

НМЕ (тобто, в ЕК). У деяких випадках, антитіло проти мезотеліну містить МН послідовність зЗЕОNME (ie, in EC). In some cases, the anti-mesothelin antibody contains the MN sequence of ZEO

ІЮ0 МО: 8, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У окремому варіанті здійснення винаходу УН містить один, два або три НУК, вибрані із: (а) НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:20, (Б) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовністьIU0 MO: 8, including post-translational modifications of this sequence. In a separate embodiment of the invention, the UN contains one, two or three NUCs selected from: (a) HMA-NI, containing the amino acid sequence хEO ИЯ МО:20, (B) HMA-H2, containing the amino acid sequence

ЗЕО ІЮ МО:21, і (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:22.ZEO IU MO:21, and (c) NMA-NZ containing the amino acid sequence of ZEO IU MO:22.

У іншому аспекті винахід стосується антитіла проти мезотеліну, де антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), який принаймні на 90 95, 91 95, 92 95, 93 У, 94 9, 95 95, 96 9, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентичний амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮ МО:4.In another aspect, the invention relates to an antibody against mesothelin, wherein the antibody comprises a variable light chain (MI) domain that is at least 90 95, 91 95, 92 95, 93 U, 94 9, 95 95, 96 9, 97 95, 98 95, 99 95 or 100 95 is identical to the amino acid sequence of ZEO IU MO:4.

У певних варіантах здійснення винаходу послідовність МІ, яка принаймні на 90 95, 91 95, 92 Об, 9395, 9495, 9596, 969, 9795, 9895 або 9995 ідентична, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), вставки або делеції відносно контрольної послідовності, але антитіло проти мезотеліну, що містить таку послідовність, зберігає здатність зв'язувати мезотелін. У певних варіантах здійснення винаходу всього від 1 до 10 амінокислот були замінені, вставлені і або делетовані в ЗЕО ІЮО МО:4. У певних варіантах здійснення винаходу заміни, вставки або делеції здійснюють в ділянках поза НМ (тобто, в ЕК). У деяких випадках, антитіло проти бо мезотеліну містить МІ. послідовність БЕО ІЮ МО:4, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У окремому варіанті здійснення винаходу МІ містить один, два або три НУВ, вибрані із: (а) НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:17, (Б) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність ЕС ІЮ МО:18, ї (с) НМК-ІЗ3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:19.In certain embodiments of the invention, an MI sequence that is at least 90 95, 91 95, 92 Ob, 9395, 9495, 9596, 969, 9795, 9895, or 9995 identical contains substitutions (eg, conservative substitutions), insertions, or deletions relative to the control sequence , but an antibody against mesothelin containing this sequence retains the ability to bind mesothelin. In certain embodiments of the invention, a total of 1 to 10 amino acids have been replaced, inserted, and/or deleted in the ZEO IJU MO:4. In certain embodiments of the invention, substitutions, insertions, or deletions are made in regions outside the NM (ie, in the EC). In some cases, the antibody against mesothelin contains MI. sequence of BEO IU MO:4, including post-translational modifications of this sequence. In a separate embodiment of the invention, the MI contains one, two or three NUVs selected from: (a) NMA-I1 containing the amino acid sequence ZEO IU MO:17, (B) NMK-12 containing the amino acid sequence ES IU MO:18 , and (c) NMK-IZ3 containing the amino acid sequence ZEO IU MO:19.

У іншому аспекті винахід стосується антитіла проти мезотеліну, де антитіло містить УН, як в будь-якому із вищеописаних варіантів здійснення винаходу і Мі, як в будь-якому із вищеописаних варіантів здійснення винаходу. У одному із варіантів здійснення винаходу антитіло містить послідовності МН і Мі в 5ЕО ІЮ МО:8 і 5ЕО ІЮО МО:4, відповідно, включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей.In another aspect, the invention relates to an antibody against mesothelin, wherein the antibody comprises UN, as in any of the above-described embodiments of the invention, and Mi, as in any of the above-described embodiments of the invention. In one of the embodiments of the invention, the antibody contains sequences of MH and Mi in 5EO IYU MO:8 and 5EO IYUO MO:4, respectively, including post-translational modifications of these sequences.

У додатковому аспекті винахід стосується антитіла, яке зв'язує той же самий епітоп, що і антитіло проти мезотеліну за даним винаходом. Наприклад, в певних варіантах здійснення винахід стосується антитіла, яке зв'язує той же самий епітоп, що і антитіло проти мезотеліну, що містить послідовність МН 5ЕО ІЮО МО:8 і послідовність МІ 5ЕО ІЮО МО:4. У певних варіантах здійснення винахід стосується антитіла, яке зв'язує епітоп ЗЕО ІО МО:43 із ділянки амінокислот 152-175, всередині нього або його охоплюючи. У певних варіантах здійснення винахід стосується антитіла, яке зв'язує епітоп 5ЕО ІЮ МО:43, який містить Е153 і 0174. У певних таких варіантах здійснення винаходу антитіло зв'язує амінокислотні залишки Е153 і 0174.In an additional aspect, the invention relates to an antibody that binds the same epitope as the anti-mesothelin antibody of the present invention. For example, in certain embodiments, the invention relates to an antibody that binds the same epitope as an antibody against mesothelin containing the sequence MH 5EO IJOO MO:8 and the sequence MI 5EO IJOO MO:4. In certain embodiments, the invention relates to an antibody that binds the epitope ZEO IO MO:43 from the region of amino acids 152-175, within or encompassing it. In certain embodiments, the invention relates to an antibody that binds the epitope 5EO IU MO:43, which contains E153 and 0174. In certain such embodiments of the invention, the antibody binds amino acid residues E153 and 0174.

У додатковому аспекті винаходу антитіло проти мезотеліну за будь-яким із вищеописаних варіантів здійснення винаходу є моноклональним антитілом, включаючи химерне, гуманізоване антитіло або антитіло людини. У одному із варіантів здійснення винаходу антитілом проти мезотеліну є фрагмент антитіла, наприклад, Ем, Раб, Раб", зсЕм, діатіло або Е(ар)г2 фрагмент. У іншому варіанті здійснення винаходу антитіло є практично повнорозмірним антитілом, наприклад, антитілом ЇдДС1 або іншим класом або ізотипом антитіл, як визначено в цьому документі.In an additional aspect of the invention, the anti-mesothelin antibody according to any of the above-described embodiments of the invention is a monoclonal antibody, including a chimeric, humanized, or human antibody. In one variant of the implementation of the invention, the antibody against mesothelin is an antibody fragment, for example, Em, Rab, Rab", csEm, diatilo, or E(ar)g2 fragment. In another variant of the invention, the antibody is a practically full-length antibody, for example, an antibody of YDS1 or another antibody class or isotype as defined herein.

У додатковому аспекті антитіло проти мезотеліну за будь-яким із вищеописаних варіантів здійснення винаходу може мати будь-яку характерну властивість, нарізно або в поєднанні, як описано в Розділах 1-7 нижче:In an additional aspect, the anti-mesothelin antibody of any of the above-described embodiments of the invention may have any characteristic property, individually or in combination, as described in Sections 1-7 below:

Антитіло 22А10 і інші варіанти здійснення винаходуAntibody 22A10 and other variants of the invention

У одному із аспектів винахід стосується антитіла проти мезотеліну, що містить принаймні один, два, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних із (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:36; (р) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮIn one aspect, the invention relates to an antibody against mesothelin containing at least one, two, three, four, five or six NUCs selected from (a) HME-NI containing the amino acid sequence ZEO IU MO:36; (p) NMK-H2 containing the amino acid sequence ZE IU

МО:37; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:38 або 39; (й) НМК-11, що містить амінокислотну послідовність БЕ ІЮ МО:33; (є) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:34; їі (3 НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮMO:37; (c) NMA-NZ containing the amino acid sequence 5EO IU MO:38 or 39; (j) NMK-11, containing the amino acid sequence BE IU MO:33; (c) NMK-I2, containing the amino acid sequence ZEO IU MO:34; ii (3 NMK-I3, containing the amino acid sequence of ZEO IU

МО:З35.MO: Z35.

У одному із аспектів винахід стосується антитіла, що містить принаймні одну, принаймні дві або всі три послідовності МН НМ, вибрані із (а) НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 36; (р) НМЕ-Н2, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 37; і (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 38 або 39. У одному із варіантів здійснення винаходу антитіло містить НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5БЕО ІЮ МО:38 або 39. У іншому варіанті здійснення винаходу антитіло міститьIn one aspect, the invention relates to an antibody containing at least one, at least two, or all three sequences of MH NM selected from (a) NMK-NI containing the amino acid sequence BEO IU MO: 36; (p) HME-H2, containing the amino acid sequence zEO IYUO MO: 37; and (c) NMA-NZ containing the amino acid sequence ZEO IU MO: 38 or 39. In one embodiment of the invention, the antibody contains NMA-NZ containing the amino acid sequence 5BEO IU MO: 38 or 39. In another embodiment of the invention, the antibody contains

НМУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:38 або 39, і НМА-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:35. У додатковому варіанті здійснення винаходу антитіло містить НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:38 або 39, НМЕ-NMUV-NZ containing the amino acid sequence 5EO IU MO:38 or 39, and NMA-I3 containing the amino acid sequence ZEO IU MO:35. In an additional embodiment of the invention, the antibody contains NMA-NZ containing the amino acid sequence 5EO IU MO:38 or 39, NME-

ІЗ, що містить амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ МО:35, і НМЕА-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:37. У додатковому варіанті здійснення винаходу антитіло містить (а)IZ containing the amino acid sequence "EO IU MO:35, and NMEA-H2 containing the amino acid sequence 5EO IU MO:37. In an additional embodiment of the invention, the antibody contains (a)

НМВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБЕО ІЮ МО:36; (5) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ 10 МО:37; і (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:38 або 39.NMV-NI, containing the amino acid sequence ZEBEO IU MO:36; (5) NMK-H2, containing the amino acid sequence Э 10 MO:37; and (c) NMK-NZ containing the amino acid sequence BEO IU MO:38 or 39.

У іншому аспекті винахід стосується антитіла, що містить принаймні одну, принаймні дві або всі три послідовності МІ. НУК, вибрані із (а) НМА-І1, що містить амінокислотну послідовністьIn another aspect, the invention relates to an antibody comprising at least one, at least two, or all three MI sequences. NUCs selected from (a) HMA-I1 containing the amino acid sequence

ЗЕО ІЮ МО:33; (р) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО:34; ї (с) НМА-І З, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:35. У одному із варіантів здійснення винаходу антитіло містить (а) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:33; (б) НМВ-12, що містить амінокислотну послідовність БЕ ІЮ МО:34; і (с) НМАК-І3, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:35.ZEO IU MO:33; (p) NUV-12, containing the amino acid sequence ZEO IYUO MO:34; and (c) NMA-I Z containing the amino acid sequence ZEO IU MO:35. In one of the variants of implementation of the invention, the antibody contains (a) NMK-I1, containing the amino acid sequence zEO IU MO:33; (b) NMV-12, containing the amino acid sequence BE IU MO:34; and (c) NMAK-I3, containing the amino acid sequence zHEO IU MO:35.

У іншому аспекті антитіло за винаходом містить (а) домен УН, що містить принаймні одну, принаймні дві або всі три послідовності МН НМК, вибрані із () НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:З6, (ії) НМК-На2, що містить амінокислотну послідовність 60 ЗЕО ІО МО:37, і (ії) НМАК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО:38 або 39; і (Б)In another aspect, the antibody according to the invention contains (a) a UN domain containing at least one, at least two or all three sequences of MN NMK, selected from () NMK-NI, containing the amino acid sequence zEO IU MO:Z6, (ii) NMK- Na2, containing the amino acid sequence 60 ZEO IU MO:37, and (iii) NMAK-NZ containing the amino acid sequence zKEO IU MO:38 or 39; and (B)

домен МІ, що містить принаймні одну, принаймні дві або всі три послідовності МІ. НУК, вибрані із () НМК-11, що містить амінокислотну послідовність 562 10 МО:33, (ії) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:34; і (с) НММК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:35.an MI domain containing at least one, at least two, or all three MI sequences. NUK selected from () NMK-11, containing the amino acid sequence 562 10 MO:33, (ii) NMK-12, containing the amino acid sequence ES 10 MO:34; and (c) NMMK-IIZ containing the amino acid sequence of ZEO IU MO:35.

У іншому аспекті винахід стосується антитіла, що містить (а) НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:З6; (Б) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовністьIn another aspect, the invention relates to an antibody containing (a) NMK-NI containing the amino acid sequence HEO IU MO:Z6; (B) HMA-H2 containing the amino acid sequence

ЗЕО ІЮ МО:37; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:38 або 39; (а)ZEO IU MO:37; (c) NMA-NZ containing the amino acid sequence ZEO IU MO:38 or 39; (and)

НМВ-Ї1, що містить амінокислотну послідовність ЗБ ІЮО МО:33; (е) НМАК-12, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО:34; їі () НМК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану із ФЕО ІЮ МО:З35.NMV-Y1, containing the amino acid sequence ЗB IЮО MO:33; (e) NMAK-12, containing the amino acid sequence 5EO 10 MO:34; ии () NMK-IIZ containing an amino acid sequence selected from the FEO IU MO:Z35.

У будь-якому із вищеописаних варіантів здійснення винаходу антитіло проти мезотеліну є гуманізованим. У одному із варіантів здійснення, антитіло проти мезотеліну містить НУК, як в будь-якому із вищеописаних варіантів здійснення, і додатково містить акцепторну каркасну ділянку людини, наприклад, каркасна ділянка імуноглобуліну людини або консенсусна каркасна ділянка людини. У певних варіантах здійснення винаходу акцепторною каркасною ділянкою людини є акцепторна каркасна ділянка М кі і/або МН.In any of the above-described embodiments of the invention, the antibody against mesothelin is humanized. In one embodiment, the anti-mesothelin antibody comprises an NUC, as in any of the above-described embodiments, and further comprises a human acceptor framework region, for example, a human immunoglobulin framework region or a human consensus framework region. In certain embodiments of the invention, the human acceptor framework site is the acceptor framework site of Mki and/or MN.

У іншому аспекті, антитіло проти мезотеліну містить послідовність варіабельного домену важкого ланцюга (МН), яка принаймні на 90 95, 91 9Уо, 92 У, 93 Уо, 94 95, 95 Фо, 96 Фо, 97 Фо, 98 о, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮ МО:16. У певних варіантах здійснення винаходу послідовність УН, яка принаймні на 90 Фо, 91 У, 92 95, 93 95, 94 Уо, 95 Фо, 96 9», 97 Фо, 98 95 або 99 95 ідентична, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), вставки або делеції відносно контрольної послідовності, але антитіло проти мезотеліну, що містить таку послідовність, зберігає здатність зв'язувати мезотелін. У певних варіантах здійснення винаходу всього від 1 до 10 амінокислот були замінені, вставлені і/або делетовані в 5ЕО ІЮ МО:16. У певних варіантах здійснення винаходу заміни, вставки або делеції здійснюють в ділянках позаIn another aspect, the anti-mesothelin antibody comprises a heavy chain variable domain (HCH) sequence that is at least 90 95 , 91 9Uo, 92 U, 93 Uo, 94 95, 95 Fo, 96 Fo, 97 Fo, 98 o, 99 95 or 100 95 is identical to the amino acid sequence of ZEO IU MO:16. In certain embodiments of the invention, the UN sequence that is at least 90 Fo, 91 U, 92 95, 93 95, 94 Uo, 95 Fo, 96 9", 97 Fo, 98 95 or 99 95 contains substitutions (for example, conservative substitutions ), insertions or deletions relative to the control sequence, but an antibody against mesothelin containing such a sequence retains the ability to bind mesothelin. In certain embodiments of the invention, a total of 1 to 10 amino acids have been replaced, inserted and/or deleted in 5EO IU MO:16. In certain embodiments of the invention, substitutions, insertions, or deletions are made in regions outside

НМЕ (тобто, в ЕК). У деяких випадках, антитіло проти мезотеліну містить МН послідовність ЗЕОNME (ie, in EC). In some cases, the anti-mesothelin antibody contains the MN sequence of ZEO

ІЮ0 МО:16, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У окремому варіанті здійснення винаходу УН містить один, два або три НУК, вибрані із: (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО 1Ю МО:З6, (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовністьIU0 MO:16, including post-translational modifications of this sequence. In a separate embodiment of the invention, the UN contains one, two or three NUCs selected from: (a) HME-NI, containing the amino acid sequence зEO 1Х МО:З6, (B) NMK-H2, containing the amino acid sequence

Зо ЗЕО ІЮ МО:37, і (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:38 або 39.From ZEO IU MO:37, and (c) NMA-NZ containing the amino acid sequence from ZEO IU MO:38 or 39.

У іншому аспекті, стосується антитіла проти мезотеліну, де антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), який принаймні на 90 95, 91 Фо, 92 95, 93 9о, 94 95, 95 Фо, 96 95, 97 Фо, 9895, 9995 або 10095 ідентичний амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮО МО:12. У певних варіантах здійснення винаходу послідовність МІ, яка принаймні на 90 95, 91 95, 92 95, 93 Фо, 94 965, 95 95, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95 ідентична, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), вставки або делеції відносно контрольної послідовності, але антитіло проти мезотеліну, що містить таку послідовність, зберігає здатність зв'язувати мезотелін. У певних варіантах здійснення винаходу всього від 1 до 10 амінокислот були замінені, вставлені і/або делетовані вIn another aspect, an anti-mesothelin antibody is provided, wherein the antibody comprises a light chain (MI) variable domain that is at least 90 95, 91 Fo, 92 95, 93 9o, 94 95, 95 Fo, 96 95, 97 Fo, 9895, 9995 or 10095 is identical to the amino acid sequence of ZEO IYUO MO:12. In certain embodiments of the invention, an MI sequence that is at least 90 95, 91 95, 92 95, 93 Fo, 94 965, 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, or 99 95 identical contains substitutions (eg, conservative substitutions) , insertions or deletions relative to the control sequence, but an antibody against mesothelin containing such a sequence retains the ability to bind mesothelin. In certain embodiments of the invention, only 1 to 10 amino acids have been replaced, inserted and/or deleted in

ЗЕО ІЮО МО:12. У певних варіантах здійснення винаходу заміни, вставки або делеції здійснюють в ділянках поза НМК (тобто, в ЕК). У деяких випадках, антитіло проти мезотеліну містить МІ. послідовність ЗЕ ІЮ МО:12, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У окремому варіанті здійснення винаходу МІ. містить один, два або три НУК, вибрані із: (а) НМА-ZEO IYUO MO:12. In certain embodiments of the invention, substitutions, insertions, or deletions are made in regions outside the NMC (ie, in the EC). In some cases, the anti-mesothelin antibody contains MI. sequence ZE IU MO:12, including post-translational modifications of this sequence. In a separate embodiment of the MI invention. contains one, two or three NUC selected from: (a) NMA-

ЇЇ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО ІО МО:33; (Б) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО:34; і (с) НММК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:35.HER containing the amino acid sequence 5EBEO IO MO:33; (B) NMK-12, containing the amino acid sequence ES 10 MO:34; and (c) NMMK-IIZ containing the amino acid sequence of ZEO IU MO:35.

У іншому аспекті винахід стосується антитіла проти мезотеліну, де антитіло містить МН, як в будь-якому із розглянутих вище варіантів здійснення винаходу і Мі, як в будь-якому із розглянутих вище варіантів здійснення винаходу. У одному із варіантів здійснення винаходу антитіло містить МН і МІ. послідовності в ЗЕО ІЮ МО:16 і 5ЕО ІЮ МО:12, відповідно, включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей.In another aspect, the invention relates to an antibody against mesothelin, wherein the antibody contains MH, as in any of the embodiments of the invention discussed above, and Mi, as in any of the embodiments of the invention discussed above. In one of the embodiments of the invention, the antibody contains MH and MI. sequences in ZEO IU MO:16 and 5EO IU MO:12, respectively, including post-translational modifications of these sequences.

У додатковому аспекті винахід стосується антитіла, яке зв'язує той же самий епітоп, як антитіло проти мезотеліну за даним винаходом. Наприклад, в певних варіантах здійснення винахід стосується антитіла, яке зв'язує той же самий епітоп, як антитіло проти мезотеліну, що містить МН послідовність ЗЕО ІЮ МО:16 і МІ. послідовність 5ЕО ІЮ МО:12. У певних варіантах здійснення винахід стосується антитіла, яке зв'язує епітоп 5ЕО ІЮ МО:43 із ділянки амінокислот 211-327, всередині нього або його охоплюючи. У певних варіантах здійснення винахід стосується антитіла, яке зв'язує епітоп 5ЕО ІЮ МО:43, який містить Е211. У певних таких варіантах здійснення винаходу антитіло зв'язує амінокислотний залишок Е211.In an additional aspect, the invention relates to an antibody that binds the same epitope as the anti-mesothelin antibody of the present invention. For example, in certain embodiments, the invention relates to an antibody that binds the same epitope as an antibody against mesothelin containing the MN sequence ZEO IU MO:16 and MI. sequence 5EO IU MO:12. In certain embodiments, the invention relates to an antibody that binds the epitope 5EO IU MO:43 from the region of amino acids 211-327, within or encompassing it. In certain embodiments, the invention relates to an antibody that binds the epitope 5EO IU MO:43, which contains E211. In certain such embodiments of the invention, the antibody binds the amino acid residue E211.

У додатковому аспекті винаходу антитіло проти мезотеліну за будь-яким із вищеописаних 60 варіантів здійснення винаходу є моноклональним антитілом, включаючи химерне, гуманізоване антитіло або антитіло людини. У одному із варіантів здійснення винаходу антитілом проти мезотеліну є фрагмент антитіла, наприклад, Ем, Раб, Раб", зсЕм, діатіло або Е(ар)г2 фрагмент. У іншому варіанті здійснення винаходу антитіло є практично повнорозмірним антитілом, наприклад, антитілом Ідсг2а або іншим класом або ізотипом антитіл, як визначено в цьому документі.In an additional aspect of the invention, the anti-mesothelin antibody according to any of the above-described 60 embodiments of the invention is a monoclonal antibody, including a chimeric, humanized, or human antibody. In one variant of the implementation of the invention, the antibody against mesothelin is an antibody fragment, for example, Em, Rab, Rab", csEm, diatilo or E(ar)g2 fragment. In another variant of the invention, the antibody is a practically full-length antibody, for example, an antibody Idsg2a or another antibody class or isotype as defined herein.

У додатковому аспекті антитіло проти мезотеліну за будь-яким із вищеописаних варіантів здійснення винаходу може мати будь-яку характерну властивість, нарізно або в поєднанні, як описано в Розділах 1-7 нижче:In an additional aspect, the anti-mesothelin antibody of any of the above-described embodiments of the invention may have any characteristic property, individually or in combination, as described in Sections 1-7 below:

Антитіло 19С3 і інші варіанти здійснення винаходуAntibody 19C3 and other variants of implementation of the invention

У одному із аспектів винахід стосується антитіла проти мезотеліну, що містить принаймні один, два, три, чотири, п'ять або шість НМК антитіла, продукованого гібридомою 19С3 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464. У контексті даного розділу НУЄ. обведені контуром у вигляді набору амінокислот, відповідних СОК, як визначено в цьому документі.In one aspect, the invention relates to an antibody against mesothelin containing at least one, two, three, four, five or six NMC antibodies produced by hybridoma 19C3 with ATCC identification number PTA-11464. In the context of this section of the NUE. are outlined as a set of amino acids corresponding to SOC as defined herein.

У одному із аспектів винахід стосується антитіла, що містить принаймні одну, принаймні дві або всі три послідовності МН НУР антитіла, продукованого гібридомою 1923 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464. У одному із варіантів здійснення винаходу антитіло містить НМК-НЗ антитіла, продукованого гібридомою 193 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464. У іншому варіанті здійснення винаходу антитіло містить НМАК-НЗ ї НМК-І З антитіла, продукованого гібридомою 19С3 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464. У додатковому варіанті здійснення винаходу антитіло містить НМК-НЗ, НМУВ-Ї3 ії НМК-Н2 антитіла, продукованого гібридомою 19С3 із ідентифікаційним номером АТС РТА-11464. У додатковому варіанті здійснення винаходу антитіло містить НМК-НІ, НУМВ-Н2 ії НМК-НЗ антитіла, продукованого гіоридомою 1923 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464.In one of the aspects, the invention relates to an antibody containing at least one, at least two, or all three sequences of the MN NUR antibody produced by hybridoma 1923 with ATCC ID number PTA-11464. In one of the embodiments of the invention, the antibody contains NMK-NZ antibody produced by hybridoma 193 with ATCC identification number PTA-11464. In another embodiment of the invention, the antibody contains NMAK-NZ and NMK-I of the antibody produced by hybridoma 19C3 with the identification number ATCC PTA-11464. In an additional embodiment of the invention, the antibody contains NMK-NZ, NMUV-Y3 and NMK-H2 antibodies produced by the 19C3 hybridoma with the ATS identification number PTA-11464. In an additional embodiment of the invention, the antibody contains NMK-NI, NUMV-H2 and NMK-NZ antibodies produced by hyoridoma 1923 with the ATCC identification number PTA-11464.

У іншому аспекті винахід стосується антитіла, що містить принаймні одну, принаймні дві або всі три послідовності МІ НМР антитіла, продукованого гібридомою 19С3 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464. У одному із варіантів здійснення винаходу антитіло містить НМЕ-1 1,In another aspect, the invention relates to an antibody containing at least one, at least two, or all three MI NMR sequences of an antibody produced by hybridoma 19C3 with ATCC identification number PTA-11464. In one of the embodiments of the invention, the antibody contains HME-1 1,

НМВ-12 і НМК-Ї3 антитіла, продукованого гібридомою 1943 із ідентифікаційним номером АТОСNMV-12 and NMK-Y3 antibodies produced by hybridoma 1943 with the ATOS identification number

РТА-11464. У іншому аспекті антитіло по винаходу містить (а) МН домен, що містить принаймні одну, принаймні дві або всі три МН НУК послідовності антитіла, продукованого гібридомою 1903RTA-11464. In another aspect, the antibody according to the invention contains (a) an MN domain containing at least one, at least two or all three MN NUC sequences of an antibody produced by hybridoma 1903

Зо із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464; і (Б) МІ. домен, що містить принаймні одну, як мінімум дві або всі три МІ НМК послідовності антитіла, продукованого гібридомою 193 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464.Zo with the identification number of ATSS PTA-11464; and (B) MI. a domain containing at least one, at least two or all three MI NMC sequences of an antibody produced by hybridoma 193 with ATCC identification number PTA-11464.

У іншому аспекті винахід стосується антитіла, що містить НМК-НІ, НУВ-Н2, НУВ-НЗ, НУВ- 1, НМВ-1І2 ї НМК-Ї3 антитіла, продукованого гібридомою 1923 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464.In another aspect, the invention relates to an antibody containing NMK-NI, NUV-H2, NUV-NZ, NUV-1, NMV-1I2 and NMK-Y3 antibodies produced by hybridoma 1923 with ATCC identification number PTA-11464.

У будь-якому із розглянутих вище варіантів здійснення винаходу антитіла проти мезотеліну є гуманізованими. У одному із таких варіантів здійснення, антитіло є гуманізованою формою антитіла, продукованого гібридомою 193 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464. У додатковому варіанті здійснення винаходу антитіло проти мезотеліну містить НМК, як в будь- якому із розглянутих вище варіантів здійснення винаходу і додатково містить акцепторну каркасну ділянку людини, наприклад, каркасна ділянка імуноглобуліну людини або консенсусна каркасна ділянка людини.In any of the embodiments of the invention discussed above, antibodies against mesothelin are humanized. In one such embodiment, the antibody is a humanized form of the antibody produced by hybridoma 193 with ATCC identification number PTA-11464. In an additional embodiment of the invention, the antibody against mesothelin contains NMC, as in any of the above embodiments of the invention, and additionally contains a human acceptor framework region, for example, a human immunoglobulin framework region or a human consensus framework region.

У іншому аспекті антитіло проти мезотеліну містить послідовність варіабельного домену важкого ланцюга (МН), що має принаймні 90 95, 91 9, 92 У, 93 Уо, 94 95, 95 95, 96 Фо, 97 95, 98 9о, 99 95 або 100 95 ідентичність МН антитіла, продукованого гібридомою 1923 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464. У певних варіантах здійснення винаходу послідовність МН містить заміни (наприклад, консервативні заміни), вставки або делеції відносно контрольної послідовності, але антитіло проти мезотеліну, що містить таку послідовність, зберігає здатність зв'язувати мезотелін. У певних варіантах здійснення винаходу всього від 1 до 10 амінокислотIn another aspect, the anti-mesothelin antibody comprises a heavy chain variable domain (HCH) sequence having at least 90 95, 91 9, 92 U, 93 Uo, 94 95, 95 95, 96 Fo, 97 95, 98 9o, 99 95, or 100 95 identity of the MH antibody produced by hybridoma 1923 with the ATCC identification number PTA-11464. In certain embodiments of the invention, the MH sequence contains substitutions (eg, conservative substitutions), insertions, or deletions relative to the control sequence, but an anti-mesothelin antibody containing such a sequence retains the ability to bind mesothelin. In certain embodiments of the invention, only 1 to 10 amino acids

БО були замінені, вставлені і/або делетовані в МН антитіла, продукованого гібридомою 19С3 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464. У певних варіантах здійснення винаходу заміни, вставки або делеції здійснюють в ділянках поза НУ. (тобто, в ЕК). У деяких випадках, антитіло проти мезотеліну містить МН послідовність антитіла, продукованого гібридомою 19023 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У окремому варіанті здійснення винаходу МН містить один, два або три НМК, вибрані із НМК-НІ, НМУВ-Н2 ії НМК-НЗ антитіла, продукованого гібридомою 19023 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464.BOs were replaced, inserted and/or deleted in the MH of the antibody produced by hybridoma 19C3 with the identification number ATCC PTA-11464. In certain embodiments of the invention, substitutions, insertions or deletions are carried out in regions outside the NU. (ie, in EC). In some cases, the antibody against mesothelin contains the MN sequence of the antibody produced by hybridoma 19023 with ATCC identification number PTA-11464, including post-translational modifications of this sequence. In a separate embodiment of the invention, the MN contains one, two or three NMKs selected from NMK-NI, NMUV-H2 and NMK-NZ antibodies produced by hybridoma 19023 with ATCC identification number PTA-11464.

У іншому аспекті винахід стосується антитіла проти мезотеліну, де антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), який принаймні на 90 95, 91 95, 92 95, 93 У, 94 9, 60 9596, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентичний МІ. антитіла, продукованого гібридомоюIn another aspect, the invention relates to an antibody against mesothelin, wherein the antibody comprises a variable light chain (MI) domain that is at least 90 95, 91 95, 92 95, 93 U, 94 9, 60 9596, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 or 100 95 is identical to MI. antibody produced by the hybridoma

1923 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464. У певних варіантах здійснення винаходу послідовність МІ, яка принаймні на 90 95, 91 95, 92 9», 93 о, 94 95, 95 90, 96 Фо, 97 У», 98 96 або 99 95 ідентична, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), вставки або делеції відносно контрольної послідовності, але антитіло проти мезотеліну, що містить таку послідовність, зберігає здатність зв'язувати мезотелін. У певних варіантах здійснення винаходу всього від 1 до амінокислот були замінені, вставлені і/або делетовані в Мі антитіла, продукованого гібридомою 1923 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464. У певних варіантах здійснення винаходу заміни, вставки або делеції здійснюють в ділянках поза НМЕ (тобто, в ЕК). У деяких випадках, антитіло проти мезотеліну містить МІ послідовність антитіла, продукованого 10 гіоридомою 1923 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У окремому варіанті здійснення винаходу МІ. містить один, два або три НУК, вибрані із НМК-1І 1, НМУВ-1І2 ї НМА-І3 антитіла, продукованого гібридомою 1923 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464.1923 with identification number ATSS RTA-11464. In certain embodiments of the invention, the MI sequence, which is at least 90 95, 91 95, 92 9", 93 o, 94 95, 95 90, 96 Fo, 97 U", 98 96 or 99 95, contains substitutions (for example, conservative substitutions), insertions or deletions relative to the control sequence, but an anti-mesothelin antibody containing such a sequence retains the ability to bind mesothelin. In certain embodiments of the invention, only 1 to amino acids were replaced, inserted and/or deleted in Mi antibodies produced by hybridoma 1923 with the identification number ATCC PTA-11464. In certain embodiments of the invention, substitutions, insertions, or deletions are made in regions outside the NME (ie, in the EC). In some cases, the antibody against mesothelin contains the MI sequence of the antibody produced by Hyoridoma 1923 with the identification number ATCC PTA-11464, including post-translational modifications of this sequence. In a separate embodiment of the MI invention. contains one, two or three NUK, selected from NMK-1I 1, NMUV-1I2 and НМА-I3 of the antibody produced by hybridoma 1923 with identification number ATCC PTA-11464.

У іншому аспекті винахід стосується антитіла проти мезотеліну, де антитіло містить МН, як в будь-якому із розглянутих вище варіантів здійснення винаходу і Мі, як в будь-якому із розглянутих вище варіантів здійснення винаходу. У одному із варіантів здійснення винаходу антитіло містить послідовності МН і Мі антитіла, продукованого гібридомою 19023 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464, відповідно, включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей.In another aspect, the invention relates to an antibody against mesothelin, wherein the antibody contains MH, as in any of the embodiments of the invention discussed above, and Mi, as in any of the embodiments of the invention discussed above. In one of the variants of implementation of the invention, the antibody contains sequences of MH and Mi antibody produced by hybridoma 19023 with identification number ATCC PTA-11464, respectively, including post-translational modifications of these sequences.

У додатковому аспекті винахід стосується антитіла, яке зв'язує той же самий епітоп, як антитіло проти мезотеліну за даним винаходом. Наприклад, в певних варіантах здійснення винахід стосується антитіла, яке зв'язує той же самий епітоп, як антитіло, продуковане гіоридомою 1923 із ідентифікаційним номером АТСС РТА-11464.In an additional aspect, the invention relates to an antibody that binds the same epitope as the anti-mesothelin antibody of the present invention. For example, in certain embodiments, the invention relates to an antibody that binds the same epitope as an antibody produced by hyoridoma 1923 with ATCC identification number PTA-11464.

У додатковому аспекті винаходу антитіло проти мезотеліну за будь-яким із розглянутих вище варіантів здійснення винаходу є моноклональним антитілом, включаючи химерне, гуманізоване антитіло або антитіло людини. У одному із варіантів здійснення винаходу антитілом проти мезотеліну є фрагментом антитіла, наприклад, Ем, Раб, Раб", 5сЕм, діатіло абоIn an additional aspect of the invention, the anti-mesothelin antibody according to any of the embodiments discussed above is a monoclonal antibody, including a chimeric, humanized or human antibody. In one embodiment of the invention, the antibody against mesothelin is an antibody fragment, for example, Em, Rab, Rab", 5cEm, diatyl or

Каб)» фрагмент. У іншому варіанті здійснення винаходу антитіло є практично повнорозмірним антитілом, наприклад, антитілом Ід5265 або іншим класом або ізотипом антитіл, як визначено вKab)" fragment. In another embodiment of the invention, the antibody is a substantially full-length antibody, for example, antibody Id5265 or another class or isotype of antibody as defined in

Зо цьому документі.From this document.

У додатковому аспекті, антитіло проти мезотеліну за будь-яким із вищеописаних варіантів здійснення винаходу може мати будь-яку характерну властивість, нарізно або в поєднанні, як описано в Розділах 1-7 нижче: 1. Афінність антитілаIn an additional aspect, the anti-mesothelin antibody of any of the above-described embodiments of the invention may have any characteristic property, individually or in combination, as described in Sections 1-7 below: 1. Antibody Affinity

У певних варіантах здійснення винаходу константа дисоціації (Ка) антитіла за даним винаходом дорівнює (Ка) «1 мкМ, «100 НМ, «10 НМ, «1 НМ, «0,1 нМ, «0,01 нМ або «0,001 НМ, і в деяких випадках 21073 М (наприклад, 108 М або менше, наприклад, від 108 М до 10-73 М, наприклад, від 1079 М до 10-73 М).In certain embodiments of the invention, the dissociation constant (Ka) of the antibody of the present invention is (Ka) "1 μM, "100 nm, "10 nm, "1 nm, "0.1 nM, "0.01 nM, or "0.001 nm, and in some cases 21073 M (e.g., 108 M or less, e.g., 108 M to 10-73 M, e.g., 1079 M to 10-73 M).

У одному із варіантів здійснення винаходи Ка вимірюють способом аналізу зв'язування радіоактивно міченого антигену (КІА), що виконується із використанням Раб фрагмента антитіла, яке представляє інтерес, і його антигену, як описано представленим нижче способом.In one embodiment of the invention, Ka is measured by a radiolabeled antigen binding assay (RAB) using a Rab fragment of an antibody of interest and its antigen as described below.

Афінність зв'язування Рарзх для антигену в розчині вимірюють урівноваженням ЕРар мінімальною концентрацією (125І)-міченого антигену в присутності серій розведення неміченого антигену, потім виявляючи зв'язаний антиген за допомогою покритого антитілами до Раб планшета (див., наприклад, Спеп еї аї., У. Мої. Віої. 293:865-881 (1999)). Для визначення умов проведення аналізу, багатоямкові планшети МІСКОТІТЕКФ (Тпегто Зсіепійіс) покривають протягом ночі 5 мкг/мл антитілами до Раб (Сарреї І арх) по виявленню зв'язаного антигену в 50 мМ карбонаті натрію (рН 9,6) і потім блокують 2 95 (вага/об'єм) бичачим сироватковим альбуміном в РВ5 протягом від двох до п'яти годин при кімнатній температурі (приблизно 23 "С). У планшетах без адсорбенту (Мипс 2269620) 100 пкМ або 26 пкмМ Г2І|-антиген змішують із серійним розведеннямThe binding affinity of Rabx for antigen in solution is measured by equilibrating EPar with a minimum concentration of (125I)-labeled antigen in the presence of serial dilutions of unlabeled antigen, then detecting the bound antigen using a Rab antibody-coated plate (see, e.g., Spec. , U. Moi. Vioi. 293:865-881 (1999)). To determine the conditions of the analysis, multi-well tablets MISCOTITEKF (Tpegto Zsiepiyis) are coated overnight with 5 μg/ml antibodies to Rab (Surrey I arch) to detect the bound antigen in 50 mM sodium carbonate (pH 9.6) and then blocked with 2 95 (weight/volume) bovine serum albumin in RV5 for two to five hours at room temperature (approximately 23 °C). In plates without adsorbent (Mips 2269620) 100 pM or 26 pM G2I|-antigen is mixed with serial breeding

Еар, який представляє інтерес (наприклад, у випадку оцінки антитіл до МЕСЕ, Рар-12, в Ргезіа еї аІ., Сапсег Вев. 57:4593-4599 (1997)). Раб, який представляє інтерес, потім інкубують протягом ночі; однак, інкубація може продовжуватися більш тривалий період (наприклад, приблизно 65 годин) для забезпечення досягнення рівноважного стану. Потім суміші переносять в фіксуючий планшет для інкубації при кімнатній температурі (наприклад, протягом однієї години). Розчин потім видаляють і планшет промивають вісім разів 0,1 95 полісорбатом 20 (ТМУЕЕМ-20Ф)) в РВ5.Ear that is of interest (for example, in the case of evaluation of antibodies to MESE, Rar-12, in Rhezia ei aI., Sapseg Vev. 57:4593-4599 (1997)). The slave of interest is then incubated overnight; however, the incubation may be continued for a longer period (eg, about 65 hours) to ensure that equilibrium is reached. The mixtures are then transferred to a fixing plate for incubation at room temperature (for example, for one hour). The solution is then removed and the tablet is washed eight times with 0.1 95 polysorbate 20 (TMUEEM-20F)) in RV5.

Як тільки планшети висихають, додають 150 мкл/ямка сцинтилятора (МІСКО5СІМТ-2ОМ;As soon as the plates dry, add 150 μl/well of the scintillator (MISKO5SIMT-2OM;

Раскага), і планшети обраховують в лічильнику гамма-випромінювання ТОРСОШМТ"М (РаскКага) протягом 10 хвилин. Концентрації кожного Раб, які демонструють 20 95 або меншу величину від бо максимального зв'язування, вибирають для використання в конкурентному аналізі зв'язування.Raskaga), and the tablets are counted in a TORSOSHMT"M (RaskKaga) gamma radiation counter for 10 minutes. Concentrations of each Rab that show 20 95 or less of maximum binding are selected for use in the competitive binding assay.

Відповідно до іншого варіанта здійснення винаходи Ка вимірюють шляхом використання поверхневого плазмонного резонансного аналізу, використовуючи ВІАСОКЕФ-2000 абоAccording to another embodiment of the invention, Ka is measured using surface plasmon resonance analysis using VIASOKEF-2000 or

ВІАСОКЕФ-3000 (ВІАсоге, Іпс., Різсагамжау, МУ) при 25 "С, застосовуючи чипи із іммобілізованим антигеном СМ5 при «10 одиницях відповіді (КО). Коротко, карбоксиметиловані декстранові біосенсорні чипи (СМ5, ВІАСОКЕ, Іпс.) активуються М-етил-М'-(3- диметиламінопропіл)карбодіїміду гідрохлоридом (ЕЮБС) і М-гідроксисукцинімідом /(МНБ) відповідно до рекомендацій фірми-виробника. Антиген розводять 10 мМ ацетатом натрію, рн 4,8, до концентрації 5 мкг/мл (70,2 мкМ) до введення при швидкості потоку 5 мкл/хвилина для досягнення приблизно 10 одиниць відповіді (КО) зв'язаного білка. Після ін'єкції антигену вводять 1М етаноламін для блокування груп, що не беруть участь в реакції. Для кінетичних вимірювань двократне серійне розведення Раб (від 0,78 нМ до 500 нМ) вводить в РВ5 з 0,05 95 полісорбат 20 (ТМ/ЕЕМ-20"М) сурфактантом (РВЗ5Т) при 25 "С при швидкості потоку, рівному приблизно 25 мкл/хв. Швидкості асоціації (Коп) і швидкості дисоціації (Коб) обчислюють, використовуючи просту взаємно-однозначну модель зв'язування Ленгмюра (ВІАСОКЕФ Емаїцчайоп Зопймаге мегвіоп 3.2) шляхом одночасного вирівнювання сенсограм асоціації і дисоціації. Рівноважну константу дисоціації (Ка) обчислюють по відношенню Кой/Коп. Див., наприклад, Спеп еї аї., У. Мої. Віої. 293:865-881 (1999). Якщо швидкість асоціації перевищує 105 М' с", використовуючи вищезгаданий спосіб поверхневого плазмонного резонансного аналізу, тоді швидкість асоціації може бути визначена шляхом використання методики гасіння флуоресценції, яка вимірює збільшення або зменшення інтенсивності емісії флуоресценції (збудження-295 нм; емісія-340 нм, 16 нм смуга пропускання) при 25 "С 20 нМ антитіла (Габ форма) проти антигену в РВ5, рн 7,2, в присутності концентрацій антигену, які збільшуються згідно із вимірюваннями спектрофотометра, такого як обладнаний зупинкою потоку спектрофотометр (Амім Іпбігитепів) або розрахованого на 8000 зразків ЗІ М-АМІМСО"М спектрофотометр (Тпептозресігопіс) із обертовою кюветою. 2. Фрагменти антитілаVIASOKEF-3000 (VIASOGE, Ips., Rizzagamzhau, MU) at 25 "C, using chips with immobilized CM5 antigen at "10 response units (CO). Briefly, carboxymethylated dextran biosensor chips (SM5, VIASOKE, Ips.) are activated by M- ethyl-M'-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride (EUBS) and M-hydroxysuccinimide /(МНБ) in accordance with the manufacturer's recommendations. The antigen is diluted with 10 mM sodium acetate, pH 4.8, to a concentration of 5 μg/ml (70 .2 μM) prior to injection at a flow rate of 5 μl/min to achieve approximately 10 response units (RU) of bound protein. After antigen injection, 1 M ethanolamine is administered to block non-reactive groups. For kinetic measurements, twofold serial dilution of Rab (from 0.78 nM to 500 nM) is introduced into RB5 with 0.05 95 polysorbate 20 (TM/EEM-20"M) surfactant (RBZ5T) at 25 "C at a flow rate equal to approximately 25 μl/min Association rates (Kop) and dissociation rates (Kob) are calculated using a simple reciprocal-unique m Langmuir binding model (VIASOKEF Emaitschaiop Zopymage megviop 3.2) by simultaneous alignment of association and dissociation sensograms. The equilibrium dissociation constant (Ka) is calculated based on the Koi/Kop ratio. See, for example, Spep ei ai., U. Moi. Vioi 293:865-881 (1999). If the rate of association exceeds 105 M' s" using the aforementioned surface plasmon resonance analysis method, then the rate of association can be determined by using the fluorescence quenching technique, which measures the increase or decrease in fluorescence emission intensity (excitation-295 nm; emission-340 nm, 16 nm bandwidth) at 25 "C 20 nM antibody (Gab form) against the antigen in РВ5, pH 7.2, in the presence of antigen concentrations that increase according to the measurements of a spectrophotometer, such as a spectrophotometer equipped with a stop flow (Amim Ipbigitepov) or calculated on 8000 samples ZI M-AMIMSO"M spectrophotometer (Tpeptozresigopis) with a rotating cuvette. 2. Antibody fragments

У певних варіантах здійснення винаходу антитіло за даним винаходом є фрагментом антитіла. Фрагменти антитіла включають, крім іншого, Раб, Раб, Раб-ЗН, К(ар)г, Ем і зсЕм фрагменти, і інші фрагменти, розглянуті нижче. Для огляду певних Фрагментів антитіла див.In certain embodiments, an antibody of the present invention is an antibody fragment. Antibody fragments include, but are not limited to, Rab, Rab, Rab-ZN, K(ar)g, Em and zsEm fragments, and other fragments discussed below. For an overview of specific Antibody Fragments, see

Зо Нидзоп еї аї., Маї. Мей. 9:129-134 (2003). Для огляду фрагментів 5сЕм див., наприклад,From Nidzop ei ai., Mai. May 9:129-134 (2003). For an overview of the 5sem fragments, see, for example,

Рінскіййп, іп Те РПагтасоїоду ої Мопосіопа! Апііродієв, мої. 113, Нозепригу апа Мооге еав., (5ргіпдег/-Мепад, Мем Могк), рр. 269-315 (1994); див. також УМО 93/16185; і патенти США МоМо 5571894 і 5587458. Для обговорення фрагментів Раб і Е(аб)», що містять залишки зв'язування епітопу рецептора реутилізації і, що мають підвищений час життя іп мімо, див. патент США Мо 5869046.Rinskyip, ip Te RPagtasoiodo oi Moposiopa! Apiirodiev, my 113, Noseprigu apa Mooge et al., (5rgipdeg/-Mepad, Mem Mogk), pp. 269-315 (1994); see also UMO 93/16185; and US Patent Nos. 5,571,894 and 5,587,458. For a discussion of Rab and E(ab)' fragments containing reutilization receptor epitope binding residues and having increased Ip mimo lifetimes, see US patent Mo 5869046.

Діатіла є фрагментами антитіла з двома антигензв'язуючими сайтами, які можуть бути бівалентними або біспецифічними. Див., наприклад, ЕР 404097; УМО 1993/01161; Нидзоп еї аї.,Diatyles are antibody fragments with two antigen-binding sites, which can be bivalent or bispecific. See, for example, EP 404097; UMO 1993/01161; Nidzop ei ai.,

Маї. Меа. 9:129-134 (2003); і НоїПпдег еї аІ., Ргос. Майї). Асай. сі. ОБА 90: 6444-6448 (1993).May Mea. 9:129-134 (2003); and NoiPpdeg ei aI., Rgos. Maya). Asai. si. BOTH 90: 6444-6448 (1993).

Триатіла і тетратіла також описані в Нидзоп еї а!., Маї. Меа. 9:129-134 (2003).Triatila and tetratila are also described in Nidzop ei a!., Mai. Mea. 9:129-134 (2003).

Однодоменні антитіла є фрагментами антитіла, що містять весь варіабельний домен важкого ланцюга антитіла або його частину або весь варіабельний домен легкого ланцюга антитіла або його частину. У певних варіантах здійснення винаходу однодоменне антитіло є однодоменним антитілом людини (ботапії5, Іпс., Уумайпат, МА; див., наприклад, патент США Мо 6248516 ВІ).Single-domain antibodies are antibody fragments containing all or part of the variable domain of the antibody heavy chain or all or part of the variable domain of the light chain of the antibody. In certain embodiments of the invention, the single-domain antibody is a human single-domain antibody (Botapii5, Ips., Wumaipat, MA; see, for example, US Patent No. 6,248,516 VI).

Фрагменти антитіла можуть бути отримані різними способами, включаючи, крім іншого, протеолітичне розщеплення інтактного антитіла, а також продукцію рекомбінантними клітинами- хазяїнами (наприклад, Е. соїї або фагами), як описано в цьому документі. 3. Химерні і гуманізовані антитілаAntibody fragments can be obtained in a variety of ways, including, but not limited to, proteolytic cleavage of an intact antibody, as well as production by recombinant host cells (eg, E. soy or phages), as described herein. 3. Chimeric and humanized antibodies

У певних варіантах здійснення винаходу антитіло за даним винаходом є химерним антитілом. Певні химерні антитіла описані, наприклад, в патенті США Мо4816567; і Моїтізоп еї аІ,, Рос. Май. Асад. осі. ОБА, 81:6851-6855 (1984)). В одному прикладі, химерне антитіло містить відмінний від варіабельної ділянки людини (наприклад, варіабельна ділянка, отримана із миші, щура, хом'яка, кролика або відмінного від людини примата, такого як мавпа) і константна ділянка людини. У додатковому прикладі, химерне антитіло є антитілом із "переключеним синтезом класу" в якому клас або підклас був змінений при порівнянні із вихідним антитілом. Химерні антитіла включають їх антигензв'язуючі фрагменти.In certain embodiments, the antibody of the present invention is a chimeric antibody. Certain chimeric antibodies are described, for example, in US patent Mo4816567; and Moitizop ei aI,, Russia. May Asad axis OBA, 81:6851-6855 (1984)). In one example, the chimeric antibody contains a non-human variable region (eg, a variable region derived from a mouse, rat, hamster, rabbit, or non-human primate such as a monkey) and a human constant region. In an additional example, a chimeric antibody is an antibody with "switched class synthesis" in which the class or subclass has been changed when compared to the original antibody. Chimeric antibodies include their antigen-binding fragments.

У певних варіантах здійснення винаходу химерне антитіло є гуманізованим антитілом. Як правило, відмінне від людини антитіло гуманізують для зниження імуногенності для людини, при цьому зберігаючи специфічність і афінність вихідної відмінної від антитіла людини. У 60 основному, гуманізоване антитіло містить один або декілька варіабельних доменів, в яких НУК,In certain embodiments of the invention, the chimeric antibody is a humanized antibody. As a rule, a non-human antibody is humanized to reduce immunogenicity for humans, while maintaining the specificity and affinity of the original non-human antibody. In 60 main, the humanized antibody contains one or more variable domains in which the NUC,

наприклад, СОЕ (або їх частини) отримані із відмінної від антитіла людини, і ЕК (або їх частини) отримані із послідовностей антитіла людини. Гуманізоване антитіло, в деяких випадках, також містить принаймні частину константної ділянки людини. У деяких варіантах здійснення винаходу деякі залишки ЕК в гуманізованому антитілі замінені відповідними залишками із відмінної від антитіла людини (наприклад, антитіло, із якого отримані залишки НУК), наприклад, із метою відновлення або поліпшення специфічності або афінності антитіла.for example, ESRs (or parts thereof) are derived from a non-human antibody, and ECs (or parts thereof) are derived from human antibody sequences. A humanized antibody, in some cases, also contains at least a portion of a human constant region. In some embodiments of the invention, some EC residues in the humanized antibody are replaced by corresponding residues from a different human antibody (for example, an antibody from which NUK residues are obtained), for example, in order to restore or improve the specificity or affinity of the antibody.

Гуманізовані антитіла і способи їх отримання розглянуті, наприклад, в АІтадго апа Егапе5оп,Humanized antibodies and methods of obtaining them are considered, for example, in AItadgo apa Egape5op,

Егопі. Віовзсі. 13:1619-1633 (2008) і додатково описані, наприклад, в Кіесптапп еї аї!., Маїшге 332:323-329 (1988); Оцееп еї а!., Ргос. Маї). Асад. 5сі. ОБА 86:10029-10033 (1989); патенті СШАEgopi All the same. 13:1619-1633 (2008) and further described, for example, in Kiesptapp et al., Maishge 332:323-329 (1988); Oceep eyi a!., Rgos. Mai). Asad 5 BOTH 86:10029-10033 (1989); US patents

МоМо 5821337, 7527791, 6982321 і 7087409; Казптітгі еї аІ., Мешоа» 36:25-34 (2005) (що описує пересадку 5ОК (асок); Райдіап, Мої. Іттипої. 28:489-498 (1991) (що описує "відновлення поверхні"); БаІгАсдпа еї аї., Меїпоаз 36:43-60 (2005) (що описує "перестановку ЕК"); ії О5Боцгп еї аІ,, Меїнод5 36:61-68 (2005) і Кіїтка еї аї., Вг. У. Сапсег, 83:252-260 (2000) (описуючий спосіб "направленої селекції" відносно перестановки ЕК).MoMo 5821337, 7527791, 6982321 and 7087409; Kazptitgi ei aI., Meshoa" 36:25-34 (2005) (describing 5OK (asok) transplantation); Raidiap, Moi. Ittipoi. 28:489-498 (1991) (describing "resurfacing"); BaIgAsdpa ei ai ., Meipoaz 36:43-60 (2005) (which describes the "rearrangement of EC"); -260 (2000) (describing a method of "directed selection" relative to EC permutation).

Каркасні області людини, які можуть бути використані для гуманізації, включають, крім іншого: каркасні області, вибрані, використовуючи спосіб "найкращої відповідності" (див., наприклад, 5ітз аї аї., у. Іттипої. 151:2296 (1993)); каркасні області, отримані із консенсусної послідовності антитіл людини певної підгрупи варіабельних ділянок легкого або важкого ланцюга (див., наприклад, Сагег еї аї., Ргос. Ма!й!. Асайд. 5сі. ОБА, 89:4285 (1992); і Ргезіа еї аї. ..Human framework regions that can be used for humanization include, but are not limited to: framework regions selected using a "best fit" method (see, e.g., 5itz et al., U. Ittipoi. 151:2296 (1993)); framework regions derived from the human antibody consensus sequence of a certain subset of the variable regions of the light or heavy chain (see, for example, Sageg et al., Rgos. Ma!y!. Asaid. 5si. OBA, 89:4285 (1992); and Rgezia hey hey...

Ітітипої., 151:2623 (1993)); зрілі (соматично мутовані) каркасні ділянки людини або каркасні ділянки зародкової лінії людини (див., наприклад, АІтадго апа Егап5зоп, Егопі. Віозсі. 13:1619- 1633 (2008)); і каркасні ділянки, отримані із бібліотек скринінгу ЕК (див., наприклад, Васа еї аї.,Ititipoi., 151:2623 (1993)); mature (somatically mutated) human scaffolds or human germline scaffolds (see, e.g., AItadgo apa Egap5zop, Egopi. Viozsi. 13:1619-1633 (2008)); and framework regions obtained from EC screening libraries (see, e.g., Vasa et al.,

У. ВіоІ. Спет. 272:10678-10684 (1997) і Козок еї аї., 9. Віо!. Спет. 271:22611-22618 (1996)). 4. Антитіла людиниU. VioI. Spent 272:10678-10684 (1997) and Kozok ei ai., 9. Vio!. Spent 271:22611-22618 (1996)). 4. Human antibodies

У певних варіантах здійснення винаходу антитіло за даним винаходом є антитілом людини.In certain embodiments of the invention, the antibody of the present invention is a human antibody.

Антитіла людини можуть бути отримані, використовуючи різні методики, відому в даній галузі техніку. Антитіла людини описані в загальних рисах в статтях мап ріїк апа мап де Уміпкеї, Сиїт.Human antibodies can be obtained using various techniques known in the field. Human antibodies are described in general terms in the articles map riik apa map de Umipkei, Siit.

Оріп. Рнаптасої. 5: 368-74 (2001) і Гопбрего, Ситгт. Оріп. Іттипої. 20:450-459 (2008).Orip. Rnaptasoi 5: 368-74 (2001) and Hopbrego, Sitgt. Orip. And so on. 20:450-459 (2008).

Антитіла людини можуть бути отримані введенням імуногена трансгенній тварині, яка булаHuman antibodies can be obtained by administering an immunogen to a transgenic animal that has been

Зо модифікована з метою продукування інтактних антитіл людини або інтактних антитіл із варіабельними ділянками людини у відповідь на антигенний стимул. Такі тварини звичайно містять всі імуноглобулінові локуси людини або їх частину, які заміняють ендогенні імуноглобулінові локуси, або які знаходяться поза хромосомою або випадковим чином інтегровані в хромосоми тварин. У таких трансгенних мишах ендогенні імуноглобулінові локуси, в основному, інактивовані. Для огляду способів отримання антитіл людини із трансгенних тварин див. ІГопрего, Маї. Віоїесп. 23:1117-1125 (2005). Див. також, наприклад, патенти СШАZo is modified to produce intact human antibodies or intact antibodies with human variable regions in response to an antigenic stimulus. Such animals usually contain all or part of human immunoglobulin loci, which replace endogenous immunoglobulin loci, or which are extrachromosomally or randomly integrated into animal chromosomes. In such transgenic mice, endogenous immunoglobulin loci are mostly inactivated. For an overview of methods for obtaining human antibodies from transgenic animals, see IGoprego, Mai. Vioyesp. 23:1117-1125 (2005). See also, for example, US patents

МоМо 6075181 і 6150584, що описують технологію ХЕМОМОИШ5БЕ "М; патент США Мо 5770429, що описує технологію НиМарфт; патент США Мо 7041870, що описує технологію К-М МООЗЕЄ, і публікацію патентної заявки США Мо 5 2007/0061900, що описує технологію Меіосімоизеф)).MoMo 6075181 and 6150584, describing the KHEMOMOISH5BE "M technology; US patent Mo 5770429, describing the NiMarft technology; US patent Mo 7041870, describing the K-M MOOSEE technology, and the publication of US patent application Mo 5 2007/0061900, describing the Meiosimoisef technology )).

Варіабельні ділянки людини із інтактних антитіл, продуковані такими тваринами, можуть бути додатково модифіковані, наприклад, шляхом поєднання із іншою константною ділянкою людини.Human variable regions from intact antibodies produced by such animals can be further modified, for example, by combining with another human constant region.

Антитіла людини можуть бути також отримані основаними на гібридомній технології способами. Були описані мієломні і мишаче-людські гетеромієломні клітинні лінії людини для продукування моноклональних антитіл людини. (Див., наприклад, Ко?брог .. Іттипої., 133:3001 (1984); Вгодеийг єї аїЇ., Мопосіопа! Апіїбоду Ргодисіоп Тесппідиез апа Арріїсаїйоп5, рр. 51-63 (Магсе! ОекКег, Іпс., Мем/ МогКк, 1987); і Воегпег еї аї., У. Іттипої., 147:86 (1991).) Людські антитіла, отримані за допомогою технології використання В-клітинної гібридоми людини, також описані в І і еї аї., Ргос. Маї. Асад. 5сі. ОБА, 103:3557-3562 (2006). Додаткові способи включають такі, описані, наприклад, в патенті США Мо 7189826 (що описує продуковання моноклональних антитіл ІДМ людини гібридомними клітинними лініями) і в статті Мі, Хіапдаї Міапуїхиє, 26(4):265- 268 (2006) (яка описує гібридоми людина-людина). Технологія застосування гібридоми людини (технологія Тгіота) також описана в статті МоїІтегв апа Вгапаїєїп, Нівіоїоду апа Нівіораїпооду, 29(3):927-937 (2005) і МоПтег5 апа Вгапаїєїп, Мемйоаз апа Ріпаїпд5 іп Ехрегітепаї апа СііпісаїHuman antibodies can also be obtained by methods based on hybridoma technology. Human myeloma and murine-human heteromyeloma cell lines have been described for the production of human monoclonal antibodies. (See, for example, Ko?brog .. Ittipoi., 133:3001 (1984); Vgodeig eyi aiYi., Moposiopa! Apiibodu Rgodisiop Thesppidiez apa Arriisaiiop5, pp. 51-63 (Magse! OekKeg, Ips., Mem/ MogKk , 1987); and Voegpeg ei ai., U. Ittipoi., 147:86 (1991).) Human antibodies obtained using the technology of using human B-cell hybridoma are also described in I and ei ai., Rhos. May Asad 5 OBA, 103:3557-3562 (2006). Additional methods include those described, for example, in US Patent No. 7,189,826 (which describes the production of human IDM monoclonal antibodies by hybridoma cell lines) and in Mi, Hiapdai Miapuihie, 26(4):265-268 (2006) (which describes hybridoma human -man). The technology of using human hybridoma (Tgiot technology) is also described in the article MoiItegv apa Vgapaieip, Nivioiodu apa Nivioraipoodu, 29(3):927-937 (2005) and MoPteg5 apa Vgapaieip, Memyoaz apa Ripaipd5 ip Ehregitepai apa Siipisai

Рпаптасоіоду, 27(3):185-91 (2005).Rpaptasiodu, 27(3):185-91 (2005).

Антитіла людини можуть бути також отримані шляхом виділення послідовностей варіабельного домену клону Ес, вибраних із бібліотек фагового дисплея людського походження.Human antibodies can also be obtained by isolating sequences of the variable domain of the Es clone selected from phage display libraries of human origin.

Такі послідовності варіабельного домену можуть потім бути комбіновані з необхідним константним доменом людини. Технології відбору антитіл людини із бібліотек антитіл описані (516) нижче.Such variable domain sequences can then be combined with the required human constant domain. Technologies for selecting human antibodies from antibody libraries are described (516) below.

5. Антитіла, отримані із бібліотек5. Antibodies obtained from libraries

Антитіла за винаходом можуть бути виділені шляхом скринінгу комбінаторних бібліотек для антитіл із необхідною активністю або активностями. Наприклад, цілий ряд способів відомі в даній галузі техніки для отримання бібліотек фагового дисплея і скринінгу таких бібліотек по виявленню антитіл, що мають необхідні характеристикам зв'язування. Такі способи розглянуті, наприклад, в Ноодепроот еї аї., Мейподз іп МоїІесшаг Віоіоду 178:1-37 (О'"Віїєп еї а!., ед., НитапAntibodies of the invention can be isolated by screening combinatorial libraries for antibodies with the desired activity or activities. For example, a number of methods are known in the field of technology for obtaining phage display libraries and screening such libraries to detect antibodies that have the necessary binding characteristics. Such methods are considered, for example, in Noodeproot ei ai., Meipodz ip MoiIesshag Vioidodu 178:1-37 (O'"Viipe ei a!., ed., Nytap

Ргеб55, Тоїоула, МУ, 2001) ї додатково конкретизовані, наприклад, в МоСайепу еї аї., Майшге 348:552-554; СІасКкзоп еї аї., Майте 352: 624-628 (1991); Магкз еї аї., 9. Мої. Віо! 222: 581-597 (1992); МаїК5 апа Вгадригу, іп Меїпод5 іп МоїІесшаг Віоїоду 248:161-175 (Іо, ед., Нитап Ргевв,Rgeb55, Toioula, MU, 2001) and are additionally specified, for example, in MoSayepu ei ai., Maishge 348:552-554; SiasKkzop ei ai., Mayte 352: 624-628 (1991); Magkz ei ai., 9. My. Vio! 222: 581-597 (1992); MaiK5 apa Vgadrigu, ip Meipod5 ip MoiIesshag Vioiodu 248:161-175 (Io, ed., Nytap Rgevv,

Тоїоуа, М, 2003); Бідни еї аї., У. Мої. Віо!ї 338(2): 299-310 (2004); І ее еї аї., У. Мої. Віої. 340(5): 1073-1093 (2004); РеїІоизе, Ргос. Маї!. Асад. сі. ОБА 101(34): 12467-12472 (2004); ії ее еї аї,..Toyoua, M, 2003); Poor women, U. Moi. Bio!y 338(2): 299-310 (2004); And ee ei ai., U. Moi. Vioi 340(5): 1073-1093 (2004); ReyIoise, Rhos. Mai! Asad si. BOTH 101(34): 12467-12472 (2004); hey hey hey hey,..

Іттипої. Меїйоавз 284(1-2): 119-132(2004).And so on. Meijoavs 284(1-2): 119-132(2004).

У певних способах фагового дисплея, репертуари генів МН і МІ. окремо клонують способом полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) і рекомбінують випадковим чином в фагових бібліотеках із подальшим їх скринінгом по виявленню антигензв'язуючого фагу, як описано в статті УмМіпіег еї., Апп. Нем. Іттипої., 12:433-455 (1994). В фазі, як правило, представлені фрагменти антитіла або у вигляді одноланцюжкових фрагментів Ем (5сЕм), або у вигляді фрагментів Раб. Бібліотеки із імунізованих джерел представляють високо афінні антитіла відносно імуногену без необхідності створення гібридом. Альтернативно, може бути клонований інтактний репертуар (наприклад, із людини) для забезпечення єдиним джерелом антитіл до широкого набору відмінних від власних і також власних антигенів без якої-небудь імунізації, як описано стій еї аІ.,, ЕМВО У, 12:725-734 (1993). І нарешті, інтактні бібліотеки можуть бути також отримані штучно шляхом клонування не перегрупованих М-генних сегментів із стовбурових клітин і використанняIn certain phage display methods, repertoires of MN and MI genes. separately cloned by the polymerase chain reaction (PCR) method and randomly recombined in phage libraries followed by their screening for the detection of antigen-binding phage, as described in the article UmMipieg ei., App. German Ittipoi., 12:433-455 (1994). In the phase, as a rule, antibody fragments are presented either in the form of single-chain Em fragments (5cEm) or in the form of Rab fragments. Libraries from immunized sources represent high-affinity antibodies to the immunogen without the need for hybridoma generation. Alternatively, an intact repertoire (e.g., from a human) can be cloned to provide a single source of antibodies to a wide array of non-self and self-antigens without any immunization, as described in St. A.I., EMVO U, 12:725-734 (1993). Finally, intact libraries can also be obtained artificially by cloning unrearranged M gene segments from stem cells and using

ПЛР-праймерів, що містять випадкову послідовність, для кодування високо варіабельних ділянок СОКЗ і виконання перегрупування іп міїго, як описано в статті Ноодепроот апа М/іпіег, у.PCR primers containing a random sequence to encode the highly variable regions of the SOCZ and perform rearrangement of the ip myigo, as described in the article Noodeproot apa M/ipieg, u.

МОЇ. ВіоїІ., 227:381-388 (1992). Патентні публікації, що розглядають фагові бібліотеки антитіл людини, включають, наприклад: патент США Мо 5750373 і патентні публікації США МоМо 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237 764, 2007/0292936 і 2009/0002360.MY. VioiI., 227:381-388 (1992). Patent publications addressing human antibody phage libraries include, for example: US Patent Mo. 5750373 and US Patent Publications Mo. 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/023720764, 0292936 and 2009/0002360.

Антитіла або фрагменти антитіл, виділені із бібліотек антитіл людини, вважаються в цьому документі антитілами людини або фрагментами антитіл людини. 6. Мультиспецифічні антитілаAntibodies or antibody fragments isolated from human antibody libraries are referred to herein as human antibodies or human antibody fragments. 6. Multispecific antibodies

У певних варіантах здійснення винаходу антитіло за даним винаходом є мультиспецифічним антитілом, наприклад, біспецифічним антитілом. Мультиспецифічні антитіла "є моноклональними антитілами, які мають специфічність зв'язування принаймні для двох різних сайтів. У певних варіантах здійснення винаходу одна із специфічностей зв'язування призначена для мезотеліну і інша - для будь-якого іншого антигену. У певних варіантах здійснення винаходу біспецифічні антитіла можуть зв'язуватися із двома різними епітопами мезотеліну. Біспецифічні антитіла можуть також бути використані для локалізації цитотоксичних агентів на клітинах, яких експресують мезотелін. Біспецифічні антитіла можуть бути приготовані у вигляді повнорозмірних антитіл або фрагментів антитіл.In certain embodiments of the invention, the antibody of the present invention is a multispecific antibody, for example, a bispecific antibody. Multispecific antibodies "are monoclonal antibodies that have binding specificity for at least two different sites. In certain embodiments of the invention, one of the binding specificities is for mesothelin and the other is for any other antigen. In certain embodiments of the invention, bispecific antibodies can bind to two different epitopes of mesothelin. Bispecific antibodies can also be used to localize cytotoxic agents to cells expressing mesothelin. Bispecific antibodies can be prepared as full-length antibodies or antibody fragments.

Методики створення мультиспецифічних антитіл включають, крім іншого, рекомбінантну спільну експресію двох пар важкого ланцюга-легкого ланцюга імуноглобуліну, що мають різні специфічності (див. Міїбієїп апа Сицеїо, Маїиге 305:537 (1983)), УМО 93/08829 і ТгаипескКег еї аї.,Techniques for generating multispecific antibodies include, but are not limited to, the recombinant co-expression of two immunoglobulin heavy chain-light chain pairs having different specificities (see Miibieip apa Siceio, Maighe 305:537 (1983)), UMO 93/08829 and TgaipeskKeg ei ai. ,

ЕМВО 3. 10:3655 (1991) і техніку "виступ-у-заглиблення" (див., наприклад, патент США Мо 5731168). Мультиспецифічні антитіла можуть бути також отримані шляхом створення електростатичних ефектів регулювання для отримання Ес-гетеродимерних молекул антитіла (УМО 2009/089004А1); перехресного зв'язування двох або більше антитіл або фрагменти (див., наприклад, патент США Мо 4676980 і Вгеппап еї аї., 5сіепсе, 229: 81 (1985)); використання лейцинових блискавок для отримання біспецифічних антитіл (див., наприклад, КовзіеїІпу еї аї.,..EMVO 3. 10:3655 (1991) and the protrusion-in-recess technique (see, for example, US Pat. No. 5,731,168). Multispecific antibodies can also be obtained by creating electrostatic regulation effects to obtain Es-heterodimeric antibody molecules (UMO 2009/089004A1); cross-linking of two or more antibodies or fragments (see, for example, US Patent No. 4,676,980 and Vgeppap et al., 5siepse, 229: 81 (1985)); the use of leucine zippers to obtain bispecific antibodies (see, for example, KovzieiIpu ei ai.,..

Іттипої!., 148(5):1547-1553 (1992)); використання технології "діатіло" для створення фрагментів біспецифічного антитіла (див., наприклад, НоїЇйпдег еї аї., Ргос. Маї). Асай. 5сі. ОБА, 90:6444- 6448 (1993)); і використання димерів одноланцюжкових Ем (5Ем) (див., наприклад, Огибег еї аї.,Ittipoi!., 148(5):1547-1553 (1992)); use of "diatylo" technology to create fragments of bispecific antibodies (see, for example, NoiYipdeg ei ai., Rgos. Mai). Asai. 5 OBA, 90:6444-6448 (1993)); and the use of dimers of single-chain Em (5Em) (see, for example, Ogybeg ei ai.,

У. Іттипої., 152:5368 (1994)); і приготування триспецифічних антитіл, як описано, наприклад, в Тий еїаї..). Іттипої. 147:60 (1991).U. Ittipoi., 152:5368 (1994)); and the preparation of trispecific antibodies, as described, for example, in Tiy eiai..). And so on. 147:60 (1991).

Сконструйовані антитіла з трьома або більше функціональними сайтами зв'язування антигену, включаючи "антитіла, що нагадують восьминога", також включені в цей документ (див., наприклад, О5 2006/0025576А1).Engineered antibodies with three or more functional antigen binding sites, including "octopus-like antibodies", are also included in this document (see, for example, O5 2006/0025576A1).

Антитіло або фрагмент в цьому документі також містить "РАБ подвійної дії" або "САЕ", що містить сайт зв'язування антигену, який зв'язується з мезотеліном, а також із іншим, відмінним від нього антигеном (див., 05 2008/0069820, наприклад). 7. Варіанти антитілAn antibody or fragment herein also contains a "dual-acting RAB" or "SAE" containing an antigen binding site that binds to mesothelin as well as to an antigen other than mesothelin (see, 05 2008/0069820 , example). 7. Variants of antibodies

У певних варіантах здійснення винаходу розглядаються варіанти амінокислотної послідовності антитіл, представлених в цьому документі. Наприклад, бажано поліпшити афінність зв'язування і/або інші біологічні властивості антитіла. Варіанти амінокислотної послідовності антитіла можуть бути отримані шляхом внесення придатних модифікацій в нуклеотидну послідовність, яка кодує антитіло, або шляхом пептидного синтезу. Такі модифікації включають, наприклад, делеції і/або вставки, і/або заміни залишків всередині амінокислотних послідовностей антитіла. Будь-яка комбінація делеції, вставки або заміни може бути здійснена для отримання остаточного конструкта за умови, що остаточний конструкт має необхідні характеристики, наприклад, антигензв'язувальні. а) Варіанти заміни, вставки і делеціїIn certain embodiments of the invention, variants of the amino acid sequence of the antibodies presented in this document are considered. For example, it is desirable to improve the binding affinity and/or other biological properties of the antibody. Variants of the amino acid sequence of the antibody can be obtained by making suitable modifications in the nucleotide sequence that encodes the antibody, or by peptide synthesis. Such modifications include, for example, deletions and/or insertions and/or substitutions of residues within the amino acid sequences of the antibody. Any combination of deletion, insertion or replacement can be made to obtain the final construct, provided that the final construct has the required characteristics, for example, antigen binding. a) Replacement, insertion and deletion options

У певних варіантах здійснення винаходу представлені варіанти антитіл, які мають одну або декілька амінокислотних замін. Сайти, що представляють інтерес для заміщувального мутагенезу включають НУК і ЕК. Консервативні заміни представлені в Таблиці 1 під заголовком "переважні заміни". Більш істотні зміни представлені в Таблиці 1 під заголовком "типові заміни" і, як додатково описано нижче, відносно класів бічних ланцюгів амінокислот. Амінокислотні заміни можуть бути внесені в антитіло, що представляє інтерес, і продукти піддають скринінгу на предмет необхідної активності, наприклад, збереженого/поліпшеного зв'язування антигену, зниженої імуногенності або поліпшеної АОСС або СОС.Certain embodiments of the invention provide antibody variants that have one or more amino acid substitutions. Sites of interest for substitutional mutagenesis include NUC and EC. Conservative substitutions are presented in Table 1 under the heading "preferred substitutions". More significant changes are presented in Table 1 under the heading "typical substitutions" and, as further described below, relative to classes of amino acid side chains. Amino acid substitutions can be introduced into the antibody of interest and the products screened for the desired activity, such as preserved/improved antigen binding, reduced immunogenicity, or improved AOSS or SOC.

Таблиця 1 77 Ме(фф | Сеш:МасМекАа;Рпеснорлейцин./ | ви 77711 щцец(9 | Норлейцин;Пе; Ма; МерАіРЛЄ.ЇД//З | оїе 797Table 1 77 Me(ff | Sesh:MasMekAa;Rpesnorleucin./ | you 77711 shcets(9 | Norleucin;Pe; Ma; MerAiRLE.YID//Z | oie 797

Амінокислоти можуть бути об'єднані в групи відповідно до загальних властивостей бічних ланцюгів: (1) гідрофобні: норлейцин, Меї, Аа, Маї, Гей, Пе; (2) нейтральні гідрофільні: Сувз, Зег, ТНг, Авп, Сп; (3) кислі: Авр, Си;Amino acids can be grouped according to the general properties of the side chains: (1) hydrophobic: norleucine, Mei, Aa, Mai, Hei, Pe; (2) neutral hydrophilic: Suvz, Zeg, TNg, Avp, Sp; (3) acidic: Avr, Si;

Зо (4) основні: Нів, Гуз, Аго; (5) залишки, що впливають на орієнтацію ланцюга: су, Рго; (6) ароматичні: Тгр, Туг, Ріє.Zo (4) main: Niv, Guz, Ago; (5) residues affecting the orientation of the chain: су, Рго; (6) aromatic: Tgr, Tug, Rie.

Неконсервативні заміни можуть спричинити зміну членства в одному класі на таке в іншому класі.Non-conservative substitutions can cause membership in one class to change to membership in another class.

Один тип замісного варіанта містить заміну одного або декількох залишків гіперваріабельної ділянки вихідного антитіла (наприклад, гуманізованного або антитіла людини). Як правило,One type of substitution involves replacing one or more residues of the hypervariable region of the original antibody (eg, a humanized or human antibody). Usually,

варіант(и), які отримується(ються) в результаті, вибраний(ї) для подальшого дослідження, мають модифікації (наприклад, поліпшення) певних біологічних властивостей (наприклад, підвищену афінність, знижену імуногенність) відносно вихідного антитіла і/або практично зберігають певні біологічні властивості вихідного антитіла. Типовим замісним варіантом є антитіло із дозрілою афінністю, яке може бути успішно отримане, наприклад, використовуючи оснований на фаговому дисплеї спосіб дозрівання афінності, як такий, описаний в цьому документі. Коротко, вносять мутації в один або декілька залишків НМР. і варіантні антитіла клонують в фаговому векторі і відбирають за певною біологічною активністю (наприклад, афінності зв'язування).The resulting variant(s) selected for further investigation have modifications (e.g., improvement) of certain biological properties (e.g., increased affinity, decreased immunogenicity) relative to the parent antibody and/or substantially retain certain biological properties. properties of the original antibody. A typical alternative is an affinity matured antibody that can be successfully produced, for example, using a phage display-based affinity maturation method such as that described herein. Briefly, mutations are made in one or more HMP residues. and variant antibodies are cloned in a phage vector and selected for certain biological activity (for example, binding affinity).

Зміни (наприклад, заміни) можуть бути внесені в НУК, наприклад, для поліпшення афінності антитіл. Такі зміни можуть бути внесені в "гарячі точки" НМЕ, тобто залишки, що кодуються кодонами, які зазнають мутування із високою частотою під час соматичного процесу дозрівання (див., наприклад, Спомжапигу, Меїйод5 Мої. ВіоЇ. 207:179-196 (2008)), і/або ОК (а-СОВ), внаслідок чого отримують варіантну МН або МІ, що піддається тестуванню на предмет афінності зв'язування. Дозрівання афінності шляхом конструювання і повторного відбору із повторних бібліотек вже було описано, наприклад, в Ноодепроот еї аї., Меїйоаз5 іп МоїІесшіагChanges (for example, substitutions) can be made to the NUC, for example, to improve the affinity of the antibodies. Such changes can be introduced to NME "hotspots", i.e., residues encoded by codons that undergo mutation at a high frequency during the somatic maturation process (see, e.g., Spomzhapigu, Meijod5 Moi. BioY. 207:179-196 (2008 )), and/or OK (a-SOV), resulting in a variant MH or MI that can be tested for binding affinity. Affinity maturation by construction and repeated selection from replicate libraries has already been described, for example, in Noodeproot et al.

Віоїоду 178:1-37 (О'Вгіеп еї аїЇ., ед., Нитап Ргез5з, Тоїоула, МУ (2001)). У деяких варіантах здійснення дозрівання афінності вносять різноманітність у варіабельні гени, вибрані для дозрівання, будь-якими різними способами (наприклад, ПЛР із внесенням помилок, перестановка ланцюгів або олігонуклеотид-направлений мутагенез). Потім створюють повторну бібліотеку. Потім проводять скринінг бібліотеки для ідентифікації якого-небудь варіанта антитіла із необхідною афінністю. Інший спосіб внесення варіабельності містить НМВА-направлені підходи, в яких декілька залишків НУК (наприклад, 4-6 залишків за один раз) розташовують у випадковому порядку. Залишки НУК, залучені до зв'язування антигену, можуть бути специфічно ідентифіковані, наприклад, використовуючи аланін-скануючий мутагенез або моделювання.Journal 178:1-37 (O'Vgiep et al., ed., Nytap Rgez5z, Toioula, MU (2001)). In some embodiments, affinity maturation is performed by varying the variable genes selected for maturation by any of a variety of methods (eg, error-prone PCR, strand shuffling, or oligonucleotide-directed mutagenesis). Then they create a duplicate library. The library is then screened to identify any antibody variant with the required affinity. Another way to introduce variability involves NMBA-directed approaches, in which multiple NAC residues (eg, 4-6 residues at a time) are arranged in a random order. The NUC residues involved in antigen binding can be specifically identified, for example, using alanine-scanning mutagenesis or modeling.

Зокрема, звичайно мішенями є СОК-НЗ ії СОК-Ї 3.In particular, usually the targets are SOC-NZ and SOC-Y 3.

У певних варіантах здійснення винаходу заміни, вставки або делеції можуть мати місце в одному або декількох НМЕК за умови, що такі зміни істотно не знижують здатність антитіла зв'язувати антиген. Наприклад, консервативні зміни (наприклад, консервативні заміни,In certain embodiments of the invention, substitutions, insertions or deletions may occur in one or more NMECs, provided that such changes do not significantly reduce the ability of the antibody to bind the antigen. For example, conservative changes (such as conservative substitutions,

Зо передбачені в цьому документі), які істотно не знижують афінність зв'язування, можуть бути зроблені в НМА. Такі зміни можуть бути поза "гарячими точками" НМА або 5ОК. У певних варіантах здійснення варіантних послідовностей МН і МІ, розглянутих вище, кожний НУК або незмінений, або містить не більше однієї, двох або трьох амінокислотних замін.zo provided in this document), which do not significantly reduce the binding affinity, can be made in NMA. Such changes may be outside the "hot spots" of NMA or 5OK. In certain embodiments of the MN and MI variant sequences discussed above, each NUC is either unchanged or contains no more than one, two, or three amino acid substitutions.

Придатним способом ідентифікації залишків або ділянок антитіла, що є мішенню мутагенезу, є "аланін-скануючий мутагенез", як описано Сиппіпдпат апа ууеїї5 (1989) з5сієпсе, 244:1081-1085. В цьому способі залишок або група цільових залишків (наприклад, заряджені залишки, такі як аго, азр, Пів, Іу5 і дій) ідентифікують і замінюють нейтральною або негативно зарядженою амінокислотою (наприклад, аланіном або поліаланіном), щоб визначити чи змінилася взаємодія антитіла із антигеном. Додаткові заміни можуть бути внесені в місцях розташування амінокислот, демонструючи функціональну чутливість до первинних замін.A suitable method for identifying the residues or regions of the antibody that is the target of mutagenesis is "alanine-scanning mutagenesis", as described in Sippipdpat apa uvii5 (1989) z5siepse, 244:1081-1085. In this method, a target residue or group of residues (e.g., charged residues such as Ago, Azr, Piv, Iu5, and Actin) is identified and replaced with a neutral or negatively charged amino acid (e.g., alanine or polyalanine) to determine whether the interaction of the antibody with the antigen is altered. . Additional substitutions can be made at amino acid locations, demonstrating functional sensitivity to primary substitutions.

Альтернативно, або додатково, кристалічна структура комплексу антиген-антитіло використовується для ідентифікації точок контакту між антитілом і антигеном. Такі контактуючі залишки і сусідні залишки можуть виступати як мішень або бути видалені як кандидати для заміни. Варіанти можуть бути піддані скринінгу з метою визначення можливої наявності у них необхідних властивостей.Alternatively, or additionally, the crystal structure of the antigen-antibody complex is used to identify the points of contact between the antibody and the antigen. Such contacting residues and neighboring residues can act as targets or be deleted as candidates for replacement. Variants can be screened to determine whether they have the necessary properties.

Вставки амінокислотної послідовності включають аміно- і/або карбокси-кінцеві зчеплення, що варіюють по довжині від одного залишку до поліпептидів, що містять сотню або більше залишки, а також вставки всередині послідовності, що складаються із одного або множини амінокислотних залишків. Приклади кінцевих вставок включають антитіло з М-кінцевим метіоніловим залишком. Інші інсерційні варіанти молекули антитіла включають зчеплення М- або С-кінця антитіла з ферментом (наприклад, для АОЕРТ) або поліпептидом, який збільшує час життя антитіла в сироватці. р) Глікозиловані варіантиAmino acid sequence insertions include amino- and/or carboxy-terminal linkages, varying in length from one residue to polypeptides containing a hundred or more residues, as well as insertions within the sequence consisting of one or more amino acid residues. Examples of terminal insertions include an antibody with an M-terminal methionyl residue. Other insertion variants of the antibody molecule include linking the M- or C-terminus of the antibody with an enzyme (for example, for AOERT) or a polypeptide that increases the lifetime of the antibody in serum. p) Glycosylated variants

У певних варіантах здійснення винаходу антитіло за даним винаходом, змінено для збільшення або зменшення ступеня глікозилування даного антитіла. Внесення або делеція сайтів глікозилування в рамках антитіла можуть бути успішно виконані шляхом зміни амінокислотної послідовності таким чином, що один або більше сайтів глікозилування створюється або видаляється.In certain embodiments of the invention, the antibody of the present invention is modified to increase or decrease the degree of glycosylation of the antibody. Introduction or deletion of glycosylation sites within an antibody can be successfully performed by altering the amino acid sequence such that one or more glycosylation sites are created or deleted.

У випадку, коли антитіло містить ділянку Ес, карбогідрат, до нього приєднаний, може бути бо змінений. Нативні антитіла, продуковані клітинами ссавців, звичайно включають розгалужений,In the case when the antibody contains the Es region, the carbohydrate attached to it may be changed. Native antibodies produced by mammalian cells usually include branched,

2-антенарний олігосахарид, який, як правило, приєднаний за допомогою М-зв'язку з А5п297 домену СНО ділянки Ес. Див., наприклад, УмМгідйі еї ані. ТІВТЕСН 15:26-32 (1997). Олігосахарид може включати різні карбогідрати, наприклад, манозу, М-ацетилглюкозамін (СіІсМАс), галактозу і сіалову кислоту, а також фукозу, приєднану до СіІсМАс у "стеблі" 2-антенарної олігосахаридної структури. У деяких варіантах здійснення винаходу модифікації олігосахариду антитіла за винаходом можуть бути створені з метою створення варіантів антитіла із певними поліпшеними властивостями.2-antennary oligosaccharide, which, as a rule, is attached by means of an M bond to A5p297 of the CHO domain of the Es. See, for example, UmMgidyi ei ani. TIVTESN 15:26-32 (1997). Oligosaccharide can include various carbohydrates, for example, mannose, M-acetylglucosamine (SiCMAs), galactose and sialic acid, as well as fucose attached to CisMAs in the "stem" of the 2-antennary oligosaccharide structure. In some embodiments of the invention, modifications of the oligosaccharide antibodies of the invention may be made to create antibody variants with certain improved properties.

У одному із варіантів здійснення винаходу представлені варіанти антитіла, що мають карбогідратну структуру, в якій відсутня фукоза, приєднана (напряму або опосередковано) до ділянки Ес. Наприклад, кількість фукози в такому антитілі може складати від 1 95 до 80 95, від 1 95 до 65 905, від 5 95 до 65 95 або від 20 95 до 40 95. Кількість фукози визначають обчисленням середньої кількості фукози в сахаридному ланцюгу в положенні А5п297 відносно суми всіх глікоструктур, прикріплених до А5п297 (наприклад, комплексних, гібридних і високоманозних структур) згідно із вимірюваннями способом мас-спектрометрії МАСОІ-ТОЕ, як описано в УМО 2008/077546, наприклад Азп297 стосується аспарагінового залишку, розташованого приблизно в позиції 297 ділянки Ес (нумерація ЄЮ залишків ділянки Ес); однак А5п297 може бути також розташований приблизно -3 амінокислоти вище або нижче позиції 297, тобто між позиціями 294 і 300, внаслідок незначних варіацій послідовності антитіла. Такі фукозиловані варіанти можуть мати поліпшену функцію АЮСС. Див., наприклад, публікацію патенту США МоМо 05 2003/0157108 (Ргезіа, І); О5 2004/0093621 (Куосула Накко Кодуо Со., ЦЯ). Приклади публікацій, що стосуються "дефукозилованих" або "позбавлених фукози" варіантів антитіла, включають: О5 2003/0157108; УМО 2000/61739; МО 2001/29246; 05 2003/0115614; 005 2002/0164328; 05 2004/0093621; 005 2004/0132140; 005 2004/0110704; 005 2004/0110282; 005 2004/0109865; МО 2003/085119; МО 2003/084570; УМО 2005/035586; МО 2005/035778; УМ/О2005/053742;In one of the variants of implementation of the invention, there are variants of the antibody having a carbohydrate structure, in which there is no fucose, attached (directly or indirectly) to the section Es. For example, the amount of fucose in such an antibody can be from 1 95 to 80 95, from 1 95 to 65 905, from 5 95 to 65 95 or from 20 95 to 40 95. The amount of fucose is determined by calculating the average amount of fucose in the saccharide chain at position A5p297 relative to the sum of all glycostructures attached to A5p297 (for example, complex, hybrid and high-mannose structures) according to measurements by the mass spectrometry method of MASOI-TOE, as described in UMO 2008/077546, for example Azp297 refers to an asparagine residue located approximately at position 297 of the Es region (EU numbering of the remains of the Es plot); however, A5p297 can also be located approximately -3 amino acids above or below position 297, ie between positions 294 and 300, due to slight variations in the antibody sequence. Such fucosylated variants may have an improved function of AYUSS. See, for example, US Patent Publication MoMo 05 2003/0157108 (Rgezia, I); О5 2004/0093621 (Kuosula Nakko Koduo So., TSY). Examples of publications relating to "defucosylated" or "deprived of fucose" antibody variants include: O5 2003/0157108; UMO 2000/61739; MO 2001/29246; 05 2003/0115614; 005 2002/0164328; 05 2004/0093621; 005 2004/0132140; 005 2004/0110704; 005 2004/0110282; 005 2004/0109865; MO 2003/085119; MO 2003/084570; UMO 2005/035586; MO 2005/035778; UM/O2005/053742;

МО2002/031140; ОКалакі еї аї. У. Мої. Віої. 33671 239-1249 (2004); Матапе-ОНпикі еї аї. Віоїеси.MO2002/031140; Okalaki ei ai. U. Moi. Vioi 33671 239-1249 (2004); Matape-ONpiki ei ai. Vioyes

Віоепо. 87: 614 (2004). Приклади клітинних ліній, здатних продукувати дефукозиловані антитіла, включають Гес13 СНО клітини, позбавлені фукозилування білків (Рірка еї аї., Агсп. Віоспет.Vioepo. 87: 614 (2004). Examples of cell lines capable of producing defucosylated antibodies include Hes13 CHO cells devoid of fucosylation of proteins (Rirka ei ai., Agsp. Viospet.

Віорпув. 249:533-545 (1986); патентна заявка США Мо 05 2003/0157108 А1, Ргевіа, Ї., ії УМО 2004/056312 А1, Адатз еї аї., зокрема в Прикладі 11), і нокаутні клітинні лінії, такі як нокаутні поViorpuv. 249:533-545 (1986); US Patent Application Mo. 05 2003/0157108 A1, Rgevia, Y., and UMO 2004/056312 A1, Adatz et al., particularly in Example 11), and knockout cell lines, such as knockout

Зо гену альфа-1,6-фукозилтрансферази, ГОТ8, клітини СНО (див., наприклад, Хатапе-ОНпикі еї а!., Віоїесп. Віоепо. 87: 614 (2004); Капаа, У. еї а!., Віотесппої. Віоєпо., 94(4):680-688 (2006); іFrom the alpha-1,6-fucosyltransferase gene, GOT8, CHO cells (see, for example, Hatape-ONpiki ei a!., Vioyesp. Vioepo. 87: 614 (2004); Kapaa, U. ei a!., Viotesppoi. Bioepo., 94(4):680-688 (2006); and

МО2003/085107).MO2003/085107).

Додатково представлені варіанти антитіл із розрізаними пополам олігосахаридами, наприклад, в яких 2-антенарний олігосахарид, приєднаний до ділянки Ес антитіла, розрізаний пополам на сСІСМАс. Такі варіанти антитіла можуть мати знижене фукозилування і/або поліпшену функцію АОСС. Приклади таких варіантів антитіл описані, наприклад, в УМО 2003/011878 (еап-Маїгеї еї аІ.); патенті США Мо 6602684 (тапа еї аІ.); ії 05 2005/0123546 (Штапа еї аї.). Варіанти антитіл принаймні із одним залишком галактози в олігосахариді, приєднаному до ділянки Ес, також розглянуті. Такі варіанти антитіл можуть мати поліпшену функцію СОС. Такі варіанти антитіл описані, наприклад, в УМО 1997/30087 (Рагїеї еї а); УМО 1998/58964 (Каїсч, 5.); і УМО 1999/22764 (Раї)и!, 5.). с) Варіанти ділянки ЕсAdditionally, variants of antibodies with bisected oligosaccharides are presented, for example, in which the 2-antennary oligosaccharide, attached to the Es region of the antibody, is bisected by cSISMAc. Such antibody variants may have reduced fucosylation and/or improved AOSS function. Examples of such variants of antibodies are described, for example, in UMO 2003/011878 (eap-Maigei ei aI.); US patent No. 6602684 (tapa ei AI.); iii 05 2005/0123546 (Shtapa ii ai.). Antibody variants with at least one galactose residue in the oligosaccharide attached to the Es region are also contemplated. Such antibody variants may have improved SOC function. Such variants of antibodies are described, for example, in UMO 1997/30087 (Ragiei ei a); UMO 1998/58964 (Kaisch, 5.); and UMO 1999/22764 (Rai)y!, 5.). c) Variants of the site Es

У певних варіантах здійснення винаходу одна або декілька амінокислотних модифікацій можуть бути внесені в ділянку Ес антитіла, розглянутого в цьому документі, тим самим утворюючи варіант ділянки Ес. Варіант ділянки Ес може включати послідовність ділянки Ес людини (наприклад, ділянка Ес ІдС1, Ідс2, ІдДЗ3 або Ідс4 людини), що містить амінокислотну модифікацію (наприклад, заміну) в одній або декількох амінокислотних позиціях.In certain embodiments of the invention, one or more amino acid modifications may be introduced into the Es region of the antibody discussed herein, thereby creating a variant of the Es region. A variant of the Es site may include a human Es site sequence (for example, a human Es1, Ids2, IdDZ3 or Ids4 site) containing an amino acid modification (eg, a replacement) at one or more amino acid positions.

У певних варіантах здійснення винахід розглядає варіант антитіла, який має деякі, але не всі ефекторні функції, що робить його цільовим кандидатом для застосування, де час життя антитіла іп мімо важливий, незважаючи на те, що певні ефекторні функції (такі як комплемент іIn certain embodiments, the invention contemplates an antibody variant that has some but not all of the effector functions, making it a target candidate for applications where the lifetime of the ip mimo antibody is important, even though certain effector functions (such as complement and

АОСС) не є необхідними або шкідливо впливають. Аналізи цитотоксичності іп міго і іп мімо можуть бути виконані для підтвердження зменшення/падіння активності СОС і/або АОС.AOSS) are unnecessary or harmful. Cytotoxicity assays of ip migo and ip mimo can be performed to confirm a decrease/fall in SOC and/or AOS activity.

Наприклад, аналізи зв'язування Ес рецептора (ЕСЕ) можуть бути виконані, щоб пересвідчитися в тому, що у антитіла відсутня зв'язуюча ЕсукК активність (тим самим, мабуть, відсутня активність АЮБСС), але зберігається здатність зв'язування ЕсКп. Первинні клітини для опосередковування АЮСС, клітини МК, експресують тільки ЕсСКІїЇ, в той час як моноцити експресують ЕСКІ, ЕСКІІ ії ЕСКІП. Дані по експресії ЕСК у гематопоетичних клітинах зведені вFor example, Es receptor binding assays (ESE) can be performed to verify that the antibody lacks EsukK binding activity (thereby apparently lacking AYUBSS activity), but retains the ability to bind EsCp. The primary cells to mediate AUCS, MK cells, express only ESKII, while monocytes express ESKII, ESKII, and ESKIP. Data on ESC expression in hematopoietic cells are summarized in

Таблицю З на сторінці 464 статті Камеїспй і Кіпеї, Аппи. Кем. Іттипої. 9:457-492 (1991).Table C on page 464 of the article by Kameispy and Kipei, Appy. Chem. And so on. 9:457-492 (1991).

Необмежені приклади аналізів іп міго за оцінкою активності АОСС являючої інтерес молекули 60 описані в патенті США Мо 5500362 (див., наприклад, Неїї5ігоп, І. еї аІ. Ргос. Маг! Асад. Зсі. ОБАNon-limiting examples of ip migo assays for assessing the AOSS activity of a molecule of interest 60 are described in US Patent No. 5,500,362 (see, for example, Neiyi5igop, I. eyi aI. Rgos. Mag! Asad. Zsi. OBA

83:7059-7063 (1986)) і НеїІ5ігот, І. еї аІ. Ргос. Маг! Асад. сі. ОБА 82:1499-1502 (1985); 5821337 (див. Вгиддетапп, М. еї аї., у. Ехр. Мед. 166:1351-1361 (1987)). Альтернативно можуть бути застосовані нерадіоактивні способи аналізу (див., наприклад, АСТІ"М нерадіоактивний аналіз цитотоксичності для проточної цитометрії (Сеї! Тесппооду, Іпс. Мошипіаїп Міему, СА; і СуютТох 96Ф нерадіоактивний аналіз цитотоксичності (Рготеда, Мадізоп, УМ). Придатні ефекторні клітини для таких аналізів включають мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМС) і клітини натуральних кілерів (МК). Альтернативно, або додатково, активність АОСС являючої інтерес молекули може бути оцінена іп мімо, наприклад, в тваринній моделі, такій як описано в Сіупез еї аІ. Ргос. Маг! Асад. 5сі. ОБА 95:652-656 (1998). Аналізи зв'язування С14 можуть бути також виконані для підтвердження того, що антитіло не здатне зв'язувати С14 і, отже, у нього відсутня активність СОС. Див., наприклад, ЕГІЗА зв'язування Сід і СЗс в М/О 2006/029879 і УМО 2005/100402. Для оцінки активації комплемента може бути виконаний аналіз СОС (див., наприклад, Салапо-Запіого еї аї., у). Іттипої. Меїноде 202:163 (1996); Стадо, М.5. єї аї., Віоса 101:1045-1052 (2003); і Стадд, М.5. і М.У. СІеппіє, Віоса 103:2738-2743 (2004)). Зв'язування БсКп і визначення кліренсу/час життя іп мімо можуть бути також виконані, використовуючи способи, відому в даній галузі техніки (див., наприклад, РеїКома, 5.В. єї аї., Ти. Іттипої. 18(12):1759- 1769 (2006)).83:7059-7063 (1986)) and NeiI5igot, I. ei aI. Rgos. Magician! Asad si. BOTH 82:1499-1502 (1985); 5821337 (see Vgiddetapp, M. ei ai., y. Ehr. Med. 166:1351-1361 (1987)). Alternatively, non-radioactive methods of analysis can be used (see, for example, ASTI"M non-radioactive cytotoxicity assay for flow cytometry (Sei! Tesppoodu, Ips. Moshipiaip Miemu, SA; and SuyutTokh 96F non-radioactive cytotoxicity assay (Rgoteda, Madizop, UM). Suitable effectors cells for such assays include peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and natural killer cells (NK).Alternatively, or in addition, the AOSS activity of a molecule of interest can be evaluated in vivo, for example, in an animal model such as that described in Appendix A. Rhos Mag Asad 5c OBA 95:652-656 (1998). C14 binding assays can also be performed to confirm that the antibody is unable to bind C14 and therefore lacks SOC activity. See ., for example, EGISA binding of SID and SZs in M/O 2006/029879 and UMO 2005/100402. To assess complement activation, a SOS analysis can be performed (see, for example, Salapo-Zapiogo et al., y). Etc. Meinode 202:163 (199 6); Stado, M.5. Physiol., Viosa 101:1045-1052 (2003); and Studd, M.5. and M.U. Siepie, Viosa 103:2738-2743 (2004)). Binding of BsKp and determination of clearance/lifetime of ip mimo can also be performed using methods known in the art (see, e.g., ReiKoma, 5.V. eyi ai., Ty. Ittipoi. 18(12): 1759-1769 (2006)).

Антитіла із зниженою ефекторною функцією включають такі із заміною одного або декількох залишків ділянки Ес 238, 265, 269, 270, 297, 327 і 329 (патент США Мо 6737056). Такі мутанти Ес включають мутантів Ес із замінами в двох або більше амінокислотних позиціях 265, 269, 270, 297 і 327, включаючи так званий мутант Ес "ОАМА" із заміною залишків 265 і 297 на аланін (патент США Мо 7332581).Antibodies with reduced effector function include those with replacement of one or more residues of the ES region 238, 265, 269, 270, 297, 327 and 329 (US patent Mo 6737056). Such Es mutants include Es mutants with substitutions in two or more amino acid positions 265, 269, 270, 297 and 327, including the so-called "OAMA" Es mutant with replacement of residues 265 and 297 with alanine (US patent Mo 7332581).

Описані певні варіанти антитіла з поліпшеною або зниженою активністю зв'язування Ес (див., наприклад, патент США Мо 6737056; УМО 2004/056312, і ЗПпіеїд5 еї аї., 9. ВіоЇ. Спет. 9(2):6591-6604 (2001)).Certain variants of antibodies with improved or reduced Es binding activity have been described (see, for example, US Patent No. 6,737,056; UMO 2004/056312, and ZPPieid5 ei ai., 9. Viol. Speth. 9(2):6591-6604 ( 2001)).

У певних варіантах здійснення винаходу варіант антитіла містить ділянку Ес із однією або декількома амінокислотними замінами, які поліпшують АОСС, наприклад, заміни в позиціях 298, 333 і/або 334 ділянки Ес (нумерація Є залишків).In certain embodiments of the invention, the antibody variant contains an Es region with one or more amino acid substitutions that improve AOSS, for example, substitutions at positions 298, 333 and/or 334 of the Es region (numbering E residues).

У деяких варіантах здійснення винаходу зміни внесені в ділянку Ес, що приводить доIn some embodiments of the invention, changes are made to the section Es, leading to

Зо зміненого (тобто або поліпшеного, або зниженого) зв'язування С14д і/або комплемент-залежної цитотоксичності (СОС), наприклад, як описано в патенті США Мо 6194551, УМО 99/51642 іFrom altered (ie, either improved or reduced) C14d binding and/or complement-dependent cytotoxicity (CTO), for example, as described in US Pat. No. 6,194,551, UMO 99/51642 and

Ідиводіє еї аї. У. Іттипої. 164:4178-4184 (2000).It identifies her. U. Ittipoi. 164:4178-4184 (2000).

Антитіла з підвищеними годинами життя і поліпшеним зв'язуванням із неонатальним рецептором Ес (РсКп), який відповідає за перенесення материнських дос ембріону (сСиуег еї аї.,Antibodies with increased hours of life and improved binding to the neonatal receptor Es (RsKp), which is responsible for the transfer of maternal cells to the embryo (cSiueg ei ai.,

У. Іттипої. 117:587 (1976) і Кіт еї аї., 9У. Іттипої. 24:249 (1994)) описані в О52005/0014934А1 (Ніпогп еї а/!.). Ці антитіла включають ділянку Ес із однією або декількома замінами в ньому, що поліпшує зв'язування ділянки Ес з ЕсКп. Такі варіанти Ес включають такі із замінами в одному або декількох залишках ділянки Ес: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 або 434, наприклад, заміна залишку 434 ділянки Ес (патент США Мо 7371826).U. Ittipoi. 117:587 (1976) and Kit et al., 9U. And so on. 24:249 (1994)) are described in О52005/0014934А1 (Nipogp ei a/!.). These antibodies include an Es region with one or more substitutions in it, which improves the binding of the Es region to EsKp. Such Es variants include those with substitutions in one or more residues of the Es site: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380 , 382, 413, 424 or 434, for example, replacing residue 434 of the Es site (US patent Mo 7371826).

Див. також ЮОипсап 5 Уміптег, Майиге 322:738-40 (1988); патент США Мо 5648260; патент СШАSee also YuOipsap 5 Umipteg, Mayige 322:738-40 (1988); US patent Mo 5648260; US patent

Мо 5624821; ії УМО 94/29351 відносно інших прикладів варіантів ділянки Ес. а) Цистеїнові сконструйовані варіанти антитілаMO 5624821; ii UMO 94/29351 regarding other examples of variants of the Es plot. a) Cysteine engineered antibody variants

У певних варіантах здійснення потрібно створити цистеїнові сконструйовані антитіла, наприклад, "(піомМАбБ»", в яких один або декілька залишків антитіла замінені залишками цистеїну.In certain embodiments, it is desired to create cysteine-engineered antibodies, for example, "(piomMAbB"), in which one or more residues of the antibody are replaced by cysteine residues.

У приватних варіантах здійснення винаходу заміщені залишки знаходяться в доступних ділянках антитіла. Шляхом заміни цих залишків цистеїном реактивні тіолові групи, тим самим, розташовані в доступних ділянках антитіла і можуть бути використані для кон'югування антитіла з іншими молекулами, такими як молекули лікарських препаратів або зв'язаними із лінкером молекулами лікарських препаратів, для створення імунокон'югату, як описано далі в цьому документі. У певних варіантах здійснення винаходу будь-якого або декілька із нижченаведених залишків можуть бути замінені на цистеїн: М205 (нумерація Кара) легкого ланцюга; А118 (нумерація Е)У) важкого ланцюга; і 5400 (нумерація Е)) ділянки Ес важкого ланцюга. Цистеїнові сконструйовані антитіла можуть бути створені, як описано, наприклад, в патенті США Мо 7521541. е) Похідні антитілIn particular embodiments of the invention, the substituted residues are located in the accessible regions of the antibody. By replacing these residues with cysteine, the reactive thiol groups are thus located in accessible regions of the antibody and can be used to conjugate the antibody to other molecules, such as drug molecules or linker-linked drug molecules, to create an immunoconjugate , as described later in this document. In certain embodiments of the invention, any or more of the following residues may be replaced by cysteine: M205 (Kara numbering) of the light chain; A118 (numbering E)U) heavy chain; and 5400 (numbering E)) of section Es of the heavy chain. Cysteine-engineered antibodies can be made as described, for example, in US Pat. No. 7,521,541. e) Antibody Derivatives

У певних варіантах здійснення винаходу представлене в цьому документі антитіло може бути додатково модифіковане з метою вмісту небілковоподібних молекул, відомих в даній галузі техніки і загальнодоступних. Молекули, придатні для отримання похідних антитіла, включають, бо крім іншого, водорозчинні полімери. Необмежені приклади водорозчиннних полімерів включають, крім іншого, поліетиленгліколь (РЕС), співполімери етиленгліколю/пропіленгліколю, карбоксиметилцелюлозу, декстран, полівініловий спирт, полівінілпіролідон, полі-1,3-діоксолан, полі-1,3,6-триоксан, співполімер етилену/малеїнового ангідриду, поліамінокислоти (або гомополімери, або випадкові співполімери), і декстран або полі(М- вінілпіролідон)поліетиленгліколь, гомополімери пропропіленгліколю, співполімери поліпропіленоксиду/етиленоксиду, поліоксіетилування поліоли (наприклад, гліцерол), полівініловий спирт і суміші вищепереліченого. Пропіональдегід поліетиленгліколю може мати переваги у виробництві внаслідок його стабільності у воді. Полімер може бути будь-якої молекулярної маси і може бути розгалуженим або нерозгалуженим. Число полімерів, прикріплених до антитіла, може варіювати, і якщо більше одного полімера приєднано, вони можуть бути однаковими або різними молекулами. У основному, число і/або тип полімерів, що використовуються для отримання похідних, можуть бути визначені, керуючись факторами, включаючи, крім іншого, певні властивості або функції антитіла, що підлягають удосконаленню, чи буде похідне антитіла використовуватися в терапії при певних умовах і т. п.In certain embodiments of the invention, the antibody presented in this document may be further modified to contain non-proteinaceous molecules known in the art and publicly available. Molecules suitable for obtaining antibody derivatives include, but are not limited to, water-soluble polymers. Non-limiting examples of water-soluble polymers include, but are not limited to, polyethylene glycol (PES), ethylene glycol/propylene glycol copolymers, carboxymethyl cellulose, dextran, polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, poly-1,3-dioxolane, poly-1,3,6-trioxane, ethylene/maleic acid copolymer anhydride, polyamino acids (or homopolymers, or random copolymers), and dextran or poly(M-vinylpyrrolidone) polyethylene glycol, propylene glycol homopolymers, polypropylene oxide/ethylene oxide copolymers, polyoxyethylated polyols (eg, glycerol), polyvinyl alcohol, and mixtures of the above. Polyethylene glycol propionaldehyde may have manufacturing advantages due to its stability in water. The polymer can be of any molecular weight and can be branched or unbranched. The number of polymers attached to the antibody can vary, and if more than one polymer is attached, they can be the same or different molecules. In general, the number and/or type of polymers used for derivatization can be determined based on factors including, but not limited to, certain properties or functions of the antibody to be improved, whether the antibody derivative will be used in therapy under certain conditions, etc. p.

У іншому варіанті здійснення винаходу розглянуті кон'югати антитіла і небілковоподібні молекули, які можуть бути селективно нагріті під дією радіаційного опромінення. У одному із варіантів здійснення винаходу небілюковоподібною молекулою є вуглецева нанотрубка (Кат єї а|., Ргос. Маї). Асад. 5сі. ОБА 102:11600-11605 (2005)). Радіоактивне випромінювання може бути будь-якої довжини хвилі і містить, крім іншого, довжини хвиль, які не ушкоджують нормальні клітини, але які нагрівають небілковоподібні молекули до температури, при якій гинуть клітини, близькорозташовані до комплексу антитіло-небілковоподібна молекула.In another embodiment of the invention, conjugates of antibodies and non-proteinaceous molecules, which can be selectively heated under the action of radiation exposure, are considered. In one of the variants of implementation of the invention, the non-proteinaceous molecule is a carbon nanotube (Cat. Asad 5 BOTH 102:11600-11605 (2005)). Radioactive radiation can be of any wavelength and contains, among other things, wavelengths that do not damage normal cells, but which heat non-proteinaceous molecules to a temperature at which cells close to the antibody-non-proteinaceous molecule complex die.

В. Рекомбінантні способи і композиціїB. Recombinant methods and compositions

Антитіла можуть бути продуковані, використовуючи рекомбінантні способи і композиції, наприклад, як описано в патенті США Мо 4816567. У одному із варіантів здійснення винаходу представлена виділена нуклеїнова кислота, яка кодує антитіло проти мезотеліну, описане в цьому документі. Така нуклеїнова кислота може кодувати амінокислотну послідовність, що містить МІ. і/або амінокислотну послідовність, що містить УН антитіла (наприклад, легкий і/або важкий ланцюг антитіла). У додатковому варіанті здійснення винаходу представлений один або декілька векторів (наприклад, експресійні вектори), що містять таку нуклеїнову кислоту. У додатковому варіанті здійснення винаходу представлена клітина-хазяїн, що містить таку нуклеїнову кислоту. У одному із таких варіантів здійснення винаходу клітина-хазяїн містить (наприклад, була трансформована): (1) вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, що містить Мі. антитіла і амінокислотну послідовність, що міститьAntibodies can be produced using recombinant methods and compositions, for example, as described in US Pat. No. 4,816,567. One embodiment of the invention provides an isolated nucleic acid that encodes an antibody against mesothelin described herein. Such a nucleic acid can encode an amino acid sequence containing MI. and/or the amino acid sequence containing the UN antibody (for example, the light and/or heavy chain of the antibody). In an additional embodiment of the invention, one or more vectors (for example, expression vectors) containing such a nucleic acid are presented. In an additional embodiment of the invention, a host cell containing such a nucleic acid is provided. In one such embodiment of the invention, the host cell contains (for example, has been transformed): (1) a vector containing a nucleic acid that encodes an amino acid sequence containing Mi. antibodies and amino acid sequence containing

МН антитіла, або (2) перший вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, що містить У. антитіла, і другий вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, що містить МН антитіла. У одному із варіантів здійснення винаходу клітина-хазяїн є еукаріотичною, наприклад, клітиною яєчника китайського хом'ячка (СНО) або лімфоїдною клітиною (наприклад, МО, М5О, р20 клітиною). У одному із варіантів здійснення винаходу представлений спосіб створення антитіла проти мезотеліну, де спосіб містить культивування клітини-хазяїна, що містить нуклеїнову кислоту, що кодує антитіло, як розглянуто вище, в умовах, придатних для експресії антитіла, і в деяких випадках виділення антитіла із клітини-хазяїна (або із середовища культивування клітини-хазяїна).MH antibodies, or (2) a first vector containing a nucleic acid that encodes an amino acid sequence containing a U. antibody, and a second vector containing a nucleic acid that encodes an amino acid sequence containing an MH antibody. In one embodiment of the invention, the host cell is eukaryotic, for example, a Chinese hamster ovary cell (CHO) or a lymphoid cell (eg, MO, M5O, p20 cell). In one embodiment, the invention provides a method of generating an antibody against mesothelin, wherein the method comprises culturing a host cell containing nucleic acid encoding the antibody as discussed above under conditions suitable for expression of the antibody, and in some cases isolating the antibody from the cell - the host (or from the culture medium of the host cell).

Для рекомбінантного продукування антитіла проти мезотеліну нуклеїнову кислоту, що кодує антитіло, наприклад, як описано вище, виділяють і вставляють в один або декілька векторів для подальшого клонування і/або експресії в клітині-хазяїні. Такі нуклеїнові кислоти можуть бути без особливих зусиль виділені і секвеновані, використовуючи загальноприйняті методики (наприклад, шляхом використання олігонуклеотидних зондів, які мають здатність специфічно зв'язуватися з генами, що кодують важкий і легкий ланцюг антитіла).For recombinant production of antibodies against mesothelin, the nucleic acid encoding the antibody, for example, as described above, is isolated and inserted into one or more vectors for subsequent cloning and/or expression in the host cell. Such nucleic acids can be easily isolated and sequenced using generally accepted techniques (for example, by using oligonucleotide probes that have the ability to specifically bind to the genes encoding the heavy and light chains of antibodies).

Придатні клітини-хазяїни для клонування або експресії кодуючих антитіло векторів включають прокаріотичні або еукаріотичні клітини, описані вище. Наприклад, антитіла можуть бути продуковані в бактеріях, зокрема, коли немає необхідності в глікозилуванні і ефекторних функціях Ес. Для експресії фрагментів антитіла і поліпептидів в бактеріях див., наприклад, патенти США МоМо 5648237, 5789199 і 5840523. (Див. також Спапшоп, МеїШтоаз іп МоїІесшагSuitable host cells for cloning or expression of antibody-encoding vectors include the prokaryotic or eukaryotic cells described above. For example, antibodies can be produced in bacteria, in particular, when there is no need for glycosylation and effector functions of ES. For expression of antibody fragments and polypeptides in bacteria, see, e.g., US Patent Nos. 5,648,237, 5,789,199, and 5,840,523.

Віоіоду, Мої. 248 (В.К.б. Го, єд., Нитапа Ргев5, Тоїоула, М), 2003), рр. 245-254, описуючі експресію фрагментів антитіла в Е. соїї.-) Після експресії антитіло може бути виділене із бактеріальної клітинної суспензії в розчинній фракції і може бути додатково очищено.Vioiodu, Moi. 248 (V.K.b. Go, ed., Nytapa Rgev5, Toioula, M), 2003), pp. 245-254, describing the expression of antibody fragments in E. soii.-) After expression, the antibody can be isolated from the bacterial cell suspension in the soluble fraction and can be further purified.

Крім прокаріот еукаріотичні мікроби, такі як міцеліальні гриби або дріжджі, є придатними хазяїнами з точки зору клонування або експресії для кодуючих антитіло векторів, включаючи штами грибів і дріжджів, у яких шляхи глікозилування були "гуманізовані", зумовлюючи продукування антитіла із частково або повністю патерном глікозилування людини. Див.In addition to prokaryotes, eukaryotic microbes, such as mycelial fungi or yeast, are suitable cloning or expression hosts for antibody-encoding vectors, including fungal and yeast strains in which the glycosylation pathways have been "humanized", allowing the production of an antibody with a partial or complete glycosylation pattern. a person See

Сегпдгов5в, Маї. Віоїесн. 22:1409-1414 (2004), і | ї еї а!., Маї. Віоїтесі. 24:210-215 (2006).Segpdgov5v, Mai. Vioyesn. 22:1409-1414 (2004), and | oh oh!., Mai. Vioitesi 24:210-215 (2006).

Придатні клітини-хазяїни для експресії глікозилованого антитіла також отримують із багатоклітинних організмів (безхребетних і хребетних). Приклади клітин безхребетних включають клітини рослин і комах. Були ідентифіковані численні бакуловірусні штами, які можуть бути використані спільно з клітинами комах, зокрема, для трансфекції клітин 5родорієегаSuitable host cells for expression of the glycosylated antibody are also obtained from multicellular organisms (invertebrates and vertebrates). Examples of invertebrate cells include plant and insect cells. Numerous baculovirus strains have been identified that can be used in conjunction with insect cells, in particular, for transfection of Rhodoria cells.

Тгидірегаа.Tgidiregaa.

Культури клітин рослин можуть також бути використані як хазяїни. Див., наприклад, патентиPlant cell cultures can also be used as hosts. See, for example, patents

США МоМо 5959177, 6040498, 6420548, 7125978 і 6417429 (що описують технологіюUS MoMo 5959177, 6040498, 6420548, 7125978 and 6417429 (describing the technology

РІГАМТІВООІЕ5"М для продукування антитіл в трансгенних рослинах).RIGAMTIVOOIE5"M for the production of antibodies in transgenic plants).

Клітини хребетних можуть бути також використані як хазяїни. Наприклад, клітинні лінії ссавців, адаптовані для росту в суспензії, можуть бути придатними. Іншими прикладами придатних клітинних ліній-хазяїнів ссавців є трансформована 5М40 лінія СМІ нирок мавпи (СО05-7); лінія ембріональних нирок людини (293 або 293 клітини, як описано, наприклад, вVertebrate cells can also be used as hosts. For example, mammalian cell lines adapted for growth in suspension may be suitable. Other examples of suitable mammalian host cell lines are the transformed 5M40 monkey kidney SMI line (СО05-7); human embryonic kidney line (293 or 293 cells, as described, for example, in

Сгапат еї аї., 9. еп Мігої. 36:59 (1977)); клітини нирок хом'ячків (ВНК); мишачі клітини Сертолі (ТМА клітини, як описано, наприклад, в Маїнпег, Віої. Кергод. 23:243-251 (1980)); клітини нирок мавпи (СМ); клітини нирок африканської зеленої мавпи (МЕКО-76); клітини карциноми шийки матки людини (НЕГА); клітини нирок собаки (МОСК); клітини печінки сірого щура (ВК. ЗА); клітини легені людини (М/138); клітини печінки людини (Неросг2); пухлина молочної залози миші (ММТ 060562); клітини ТК, як описано, наприклад, в Маїнег еї аї!., Аппа!5 М.У. Асай. 5сі. 383:44- 68 (1982); клітини МКС 5; і клітини Е54. Інші придатні клітинні лінії-хазяїни ссавців включають клітини яєчника китайського хом'ячка (СНО), включаючи клітини ОНЕКСНО (паб еї аї!., Ргос.Sgapat ei ai., 9. ep Migoi. 36:59 (1977)); hamster kidney cells (HNK); mouse Sertoli cells (TMA cells, as described, for example, in Mainpeg, Wioi. Kergod. 23:243-251 (1980)); monkey kidney cells (CM); African green monkey kidney cells (MEKO-76); human cervical carcinoma cells (HCC); dog kidney cells (MSC); gray rat liver cells (VK. ZA); human lung cells (M/138); human liver cells (Nerosg2); mouse mammary tumor (MMT 060562); TC cells, as described, for example, in Maineg ei ai!., Appa!5 M.U. Asai. 5 383:44-68 (1982); cells of the ISS 5; and E54 cells. Other suitable mammalian host cell lines include Chinese hamster ovary (CHO) cells, including ONEXNO cells (pub.

Майн. Асай. сі. ОБА 77:4216 (1980)); і клітинна лінія мієломи, така як МО, М5О і 5Бр2/0. Для оглядового розгляду певних клітинних ліній-хазяїнів ссавців, придатних для продукування антитіл, див., наприклад, Хаакі апа Ууи, МеїШтоаз іп МоїІесшаг Віоіоду, Мої. 248 (В.К.С. 10, єдй.,Property Asai. si. OBA 77:4216 (1980)); and a myeloma cell line such as MO, M5O and 5Br2/0. For a review of certain mammalian host cell lines suitable for antibody production, see, e.g., Haaki apa Uui, MeiStoaz ip MoiIesshag Vioiodu, Moi. 248 (V.K.S. 10, unit,

Нитапа Ргез5, Тоїожа, МУ), рр. 255-268 (2003).Nytapa Rgez5, Toiozha, Moscow State University), pp. 255-268 (2003).

С. СпособиS. Ways

Антитіла проти мезотеліну, представлені в цьому документі, можуть бути ідентифіковані, відібрані або охарактеризовані за їх фізичними/хімічними властивостях і/або біологічними активностями за допомогою різних способів, відомих в даній галузі техніки.Antibodies against mesothelin presented herein can be identified, selected or characterized for their physical/chemical properties and/or biological activities using various methods known in the art.

У одному із аспектів, антитіло за винаходом тестують на предмет його активності зв'язування антигену, наприклад, відомими способами, такими як ЕГІЗА, РАС5 або Вестерн- блот.In one aspect, the antibody of the invention is tested for its antigen binding activity, for example, by known methods such as EHIZA, RAS5 or Western blotting.

У іншому аспекті, конкурентний аналіз може бути використаний для ідентифікації антитіла, яке конкурує із будь-яким із антитіл, описаних в цьому документі, за зв'язуванням із мезотеліном. У певних варіантах здійснення винаходу таке конкуруюче антитіло зв'язується із тим же самим епітопом (наприклад, лінійним або конформаційним епітопом), з яким зв'язується антитіло, описане в цьому документі. Докладні ілюстративні способи картування епітопу, з яким зв'язується антитіло, представлені в статті Моїті5 (1996) "Ерйоре Марріпдо Ргоїосоїв5" Мейоз іпIn another aspect, a competition assay can be used to identify an antibody that competes with any of the antibodies described herein for binding to mesothelin. In certain embodiments of the invention, such a competing antibody binds to the same epitope (eg, a linear or conformational epitope) as an antibody described herein. Detailed illustrative methods for mapping the epitope to which the antibody binds are presented in the article by Moiti5 (1996) "Eryore Marripdo Rgoiosoiv5" Meiosis ip

Моїесшіаг Віоіоду мої. 66 (Нитапа Ргев5, Тома, М).Moiesshiag Vioiodu my. 66 (Nytapa Rhev5, Toma, M).

У типовому конкурентному аналізі іммобілізований мезотелін інкубують в розчині, що містить перше мічене антитіло, яке зв'язується із мезотеліном (наприклад, будь-яке із антитіл, описаних в цьому документі), і друге немічене антитіло, яке підлягає тестуванню на предмет його здатності конкурувати із першим антитілом за зв'язування з мезотеліном. Друге антитіло може знаходитися в супернатанті гібридоми. Як контроль іммобілізований мезотелін інкубують в розчині, що містить перше мічене антитіло, але не друге немічене антитіло. Після інкубації в умовах, що допускають зв'язування першого антитіла з мезотеліном, надлишок незв'язаного антитіла видаляють, і вимірюють кількість мітки, зв'язаної із іммобілізованим мезотеліном. Якщо кількість мітки, зв'язаної з іммобілізованим мезотеліном, істотно знижена в тестованому зразку відносно контрольного зразка, тоді це означає, що друге антитіло конкурує з першим антитілом за зв'язування з мезотеліном. Див. Нагіож/ апа І апе (1988) Апіїродієв5: А Гарогаїгу Мапиаї сп.14 (Соїа 5ргіпд Наботг І арогаїогу, Соїа 5рііпда Натбог, МУ).In a typical competition assay, immobilized mesothelin is incubated in a solution containing a first labeled antibody that binds to mesothelin (eg, any of the antibodies described herein) and a second unlabeled antibody to be tested for its ability to compete with the first antibody for binding to mesothelin. The second antibody may be present in the supernatant of the hybridoma. As a control, immobilized mesothelin is incubated in a solution containing the first labeled antibody, but not the second unlabeled antibody. After incubation under conditions that allow binding of the first antibody to mesothelin, excess unbound antibody is removed, and the amount of label bound to immobilized mesothelin is measured. If the amount of label bound to immobilized mesothelin is significantly reduced in the test sample relative to the control sample, then this means that the second antibody competes with the first antibody for binding to mesothelin. See Nagiozh/ apa I ape (1988) Apiirodiev5: A Garogaigu Mapiai sp. 14 (Soia 5rgipd Nabotg I aroghaiogu, Soia 5riipda Natbog, MU).

О. Імунокон'югатиO. Immunoconjugates

Винахід також являє імунокон'югати, що містять антитіло проти мезотеліну кон'юговане відповідно до цього документа із одним або декількома цитотоксичними агентами, такими як хіміотерапевтичні засоби або лікарські препарати, інгібітори росту, токсини (наприклад, білкові токсини, ферментативно активні токсини бактеріального, грибкового, рослинного або тваринного походження або їх фрагменти) або радіоактивні ізотопи.The invention also provides immunoconjugates containing an antibody against mesothelin conjugated in accordance with this document with one or more cytotoxic agents, such as chemotherapeutic agents or drugs, growth inhibitors, toxins (for example, protein toxins, enzymatically active toxins of bacterial, fungal , plant or animal origin or their fragments) or radioactive isotopes.

У одному із варіантів здійснення винаходу імунокон'югат являє собою кон'югат антитіла- бо лікарського препарату (АОС), в якому антитіло кон'юговане із одним або декількома лікарськими препаратами, включаючи, крім іншого, майтанзиноїд (див. патенти США МоМо 5208020, 5416064 і Європейський патент ЕР 0 425 235 В1); ауристатин, такий як Оє і Оє групи лікарського препарату монометилауристатину (ММАЕ і ММАБЕ) (див. патенти США МоМо 5635483 і 5780588 і 7498298); доластатин; каліхеаміцин або його похідне (див. патенти США МоМо 5712374, 5714586, 5739116, 5767285, 5770701, 5770710, 5773001 ії 5877296; Ніптап еї аї!., Сапсег Ке5. 53:3336- 3342 (1993); і І оде еї аІ., Сапсег Ке5. 58:2925-2928 (1998)); антрациклін, такий як дауноміцин або доксорубіцин (див., Кгаї; еї аіЇ., Сцтепі Мей. Спет. 13:477-523 (2006); Уентеу єї аї.,In one embodiment of the invention, the immunoconjugate is an antibody-drug conjugate (AOD) in which the antibody is conjugated to one or more drugs, including, but not limited to, maytansinoid (see US patents MoMo 5208020, 5416064 and European patent EP 0 425 235 B1); auristatin, such as Oe and Oe of the monomethylauristatin (MMAE and MMABE) drug group (see US Patent Nos. 5,635,483 and 5,780,588 and 7,498,298); dolastatin; calicheamicin or a derivative thereof (see US patents MoMo 5712374, 5714586, 5739116, 5767285, 5770701, 5770710, 5773001 and 5877296; Niptap et al., Sapseg Ke5. 53:3336- 3342 (1993); and II et al. , Sapseg Ke5. 58:2925-2928 (1998)); an anthracycline such as daunomycin or doxorubicin (see Kgai; et al., Science Mej. Supet. 13:477-523 (2006); Uenteu et al.,

Віоогдапіс 5 Мей. Спет. І ейеге 16:358-362 (2006); Тогдом еї аї., Віосопі Спет. 16:717-721 (2005); Мааду єї а!., Ргос. Маї). Асад. бсі. ОБА 97:829-834 (2000); Биромснік еї аї!., Віоога. 6 Мед.Viogdapis May 5. Spent I eige 16:358-362 (2006); Togdom ei ai., Viosopi Spet. 16:717-721 (2005); Maadu yei a!., Rgos. Mai). Asad bsi BOTH 97:829-834 (2000); Byromsnik ei ai!., Viooga. 6 Med.

Спет. І енегз 12:1529-1532 (2002); Кіпо еї а!., У. Мед. Снет. 45:4336-4343 (2002); і патент О.5.Spent I Enegs 12:1529-1532 (2002); Kipo eyi a!., U. Med. Snet 45:4336-4343 (2002); and patent O.5.

Мо 6630579); метотрексат; віндезин; таксан, такий як доцетаксел, паклітаксел, ларотаксел, тезетаксел і ортатаксел; трихотецен і СС1065.Mo 6630579); methotrexate; vindesine; a taxane such as docetaxel, paclitaxel, larotaxel, tezetaxel and ortataxel; trichothecene and CC1065.

У іншому варіанті здійснення винаходу імунокон'югат включає антитіло, як описано в цьому документі, кон'юговане із ферментативно активним токсином або його фрагментом, включаючи, крім іншого, А-ланцюг дифтерійного токсину, які незв'язують активні фрагменти дифтерійного токсину, А-ланцюг екзотоксину (із Рхепдотопаб5 аегидіпоза), А-ланцюг рицини, А-ланцюг абрину, А-ланцюг модецину, альфа-сарцин, білки АїІецшгіез гогаї, білки діантини, білки лаконосу американського (РАРІ, РАРІЇ і РАР-5), інгібітор момордики харантської, курцин, кротин, інгібіторIn another embodiment of the invention, the immunoconjugate includes an antibody, as described herein, conjugated to an enzymatically active toxin or fragment thereof, including, but not limited to, the diphtheria toxin A chain, which do not bind active diphtheria toxin fragments, A- exotoxin (from Rhepdotopab5 aegidipose), A-chain of ricin, A-chain of abrin, A-chain of modecin, alpha-sarcin, proteins of AiIecshgiez gogai, diantin proteins, proteins of American lacunos (RARI, RARII and PAR-5), inhibitor of Momordica haranta , curcin, crotin, inhibitor

Мильнянки лікарської, гелонін, мітогелін, рестриктоцин, феноміцин, еноміцин і трикотецени.Medicinal soapworts, gelonin, mitogelin, restrictocin, phenomycin, enomycin and trichothecenes.

У іншому варіанті здійснення винаходу імунокон'югат містить антитіло, як описано в цьому документі, кон'юговане із радіоактивним атомом з утворенням радіоактивного кон'югату. Цілий ряд радіоактивних ізотопів загальнодоступний для синтезу радіоактивних кон'югатів. Приклади включають Аг, 191, (125, уз0 ВДе!86, Де"88, 5пзз, Віг212, рзг, рре"2 і радіоактивні ізотопи и. Коли радіоактивний кон'югат використовується для детекції, він може включати радіоактивний атом для сцинтіографічних досліджень, наприклад, їс99т або 123, або спінову мітку для ядерної магнітно-резонансної томографії (ММЕ) (також відомої як магнітно-резонансна томографія, тгі), таку як йод-123, йод-131, індій-111, фтор-19, вуглець-13, азот-15, кисень-17, гадоліній, марганець або залізо.In another embodiment of the invention, the immunoconjugate contains an antibody, as described herein, conjugated to a radioactive atom to form a radioactive conjugate. A number of radioactive isotopes are publicly available for the synthesis of radioactive conjugates. Examples include Ag, 191, (125, uz0 BDe!86, De"88, 5pzz, Vig212, rzg, pre"2 and radioactive isotopes and. When the radioactive conjugate is used for detection, it may include a radioactive atom for scintiographic studies, for example, is99t or 123, or a nuclear magnetic resonance imaging (NMR) (also known as magnetic resonance imaging, tgi) spin label such as iodine-123, iodine-131, indium-111, fluorine-19, carbon- 13, nitrogen-15, oxygen-17, gadolinium, manganese or iron.

Кон'югати антитіла і цитотоксичного агента можуть бути створені, використовуючиAntibody and cytotoxic agent conjugates can be created using

Зо біфункціональні білок-зшиваючі агенти, такі як М-сукцинімідил 3-(2-піридилдитіо)пропіонат (ЗРОР), сукцинімідил-4-(М-малеімідометил)циклогексан-1-карбоксилат (5МСС), імінотіолан (ІТ), біфункціональні похідні імідоефірів (такі як диметиладипімідат НС), активні складні ефіри (такі як дисукцинімідилсуберат), альдегіди (такі як глутаральдегід), біс-азидо сполуки (такі як біс-(п- азидобензоїл)гександіамін), похідні біс-діазонію (такі як біс-(п-діазонійбензоїл)етилендіамін), діззоціанати (такі як толуол-2,6б-діїзоціанат) і біс-сполуки активного фтору (такі як 1,5-дифтор-2,4- динітробензол). Наприклад, рициновий імунотоксин можна отримувати, як описано в Мпеца єї аІ.,, Зсіепсе 238:1098 (1987). Ілюстративним хелатуючим агентом для кон'югації радіонукліда із антитілом є мічена по вуглецю-14 1-ізотіоціанатбензил-З-метилдіетилен триамінпентаоцтова кислота (МХ-ОТРА). Див. УМО94/11026. Лінкер може бути "розщеплюваний лінкер", що полегшує вивільнення цитотоксичного лікарського препарату в клітину. Наприклад, кислотний лабільний лінкер, пептидаза-чутливий лінкер, фотолабільний лінкер, диметильний лінкер або дисульфідвмісний лінкер (СпПагі єї аЇ., Сапсег Ке5. 52:127-131 (1992); патент США Ме 5208020) можуть бути використані.Bifunctional protein-crosslinking agents, such as M-succinimidyl 3-(2-pyridyldithio)propionate (ZPOP), succinimidyl-4-(M-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate (5MCS), iminothiolane (IT), bifunctional derivatives of imidoesters (such as dimethyl adipimidate NS), active esters (such as disuccinimidyl suberate), aldehydes (such as glutaraldehyde), bis-azido compounds (such as bis-(p-azidobenzoyl)hexanediamine), bis-diazonium derivatives (such as bis-( p-diazoniumbenzoyl)ethylenediamine), diisocyanates (such as toluene-2,6b-diisocyanate) and active fluorine bis compounds (such as 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene). For example, ricin immunotoxin can be prepared as described in Mpetsa et al.,, Science 238:1098 (1987). An illustrative chelating agent for conjugation of a radionuclide with an antibody is carbon-14 labeled 1-isothiocyanatebenzyl-3-methyldiethylene triaminepentaacetic acid (MX-OTRA). See UMO94/11026. The linker can be a "cleavable linker" that facilitates the release of the cytotoxic drug into the cell. For example, an acid-labile linker, a peptidase-sensitive linker, a photolabile linker, a dimethyl linker, or a disulfide-containing linker (SpPagi et al., Sapseg Ke5. 52:127-131 (1992); US Patent Me 5208020) can be used.

Імунокон'югати або АОС в цьому документі спеціально розглянуті, не обмежуючись такими кон'югатами, приготованими за допомогою перехресно-зшиваючих реагентів, включаючи, крім іншого, ВМР5, ЕМО5, ЗМВ5, НВУБ5, І 0-5МС0С, МВ5, МРВН, 5ВАР, 5ІА, БІАВ, 5МОС, ЗМРВ,Immunoconjugates or AOS herein specifically contemplate, but are not limited to, such conjugates prepared using cross-linking reagents, including, but not limited to, BMR5, EMO5, ZMV5, NVUB5, I 0-5MS0C, MV5, MRVN, 5VAR, 5IA, BIAV, 5MOS, ZMRV,

ЗМРН, сульфо-ЕМСОС5, сульфо-СМВ5, сульфо-КМИО5, сульфо-МВ5, сульфо-5ІАВ, сульфо-ЗМРН, sulfo-EMSOS5, sulfo-СМВ5, sulfo-КМИО5, sulfo-МВ5, sulfo-5IAB, sulfo-

ЗМСОСС і сульфо-ЗМРВ і 5М5ЗВ (сукцинімідил-(4-вінілсульфон)бензоат), які є комерційно доступними (наприклад, в Ріегсе Віоїесппоіоду, Іпс., Восітога, І, ШО.5.А).ZMSOSS and sulfo-ZMRV and 5M5ZV (succinimidyl-(4-vinylsulfone)benzoate), which are commercially available (for example, in Riegse Wioiespoiodu, Ips., Vositoga, I, SHO.5.A).

Імунокон'югати, які містять ауристатини і доластатиниImmunoconjugates containing auristatins and dolastatins

У деяких варіантах здійснення винаходу імунокон'югат містить антитіло за винаходом, кон'юговане з доластатином або пептидним аналогом або похідним доластатину, наприклад, ауристатином (патенти США МоМо 5635483; 5780588). Показано, що доластатини і ауристатини перешкоджають динамічній активності мікротрубочок, гідролізу ГТФ і поділу ядра і клітини (М/оуке еї аї. (2001) Апіітістор. Адепів апа СпетоїНег. 45(12):3580-3584) і мають протипухлинну (патент США Мо 5663149)і протигрибкову активність (Ренії еї аї., (1998) Апійтпісгоб. АдепівбIn some embodiments of the invention, the immunoconjugate contains an antibody of the invention conjugated to dolastatin or a peptide analog or derivative of dolastatin, for example, auristatin (US patents MoMo 5635483; 5780588). It has been shown that dolastatins and auristatins interfere with the dynamic activity of microtubules, GTP hydrolysis, and nuclear and cell division (M/ouke ei ai. (2001) Apiitistor. Adepiv apa SpetoiNeg. 45(12):3580-3584) and have antitumor (US patent Mo 5663149) and antifungal activity (Renii ei ai., (1998) Apiitpisgob. Adepivb

Спетоїнег. 42:2961-2965). Молекула лікарського засобу доластатину або ауристатину може бути приєднана до антитіла через М(аміно)кінець або С(карбоксильний)кінець пептидної групи лікарського засобу (ММО 02/088172).Spetoineg. 42:2961-2965). A drug molecule of dolastatin or auristatin can be attached to the antibody through the M (amino) end or C (carboxyl) end of the peptide group of the drug (ММО 02/088172).

Ілюстративні варіанти здійснення ауристатину включають приєднані по М-кінцю групи ОЕ іIllustrative variants of implementation of auristatin include attached to the M-end of the group OE and

ОРЕ лікарського препарату монометилауристатину. (Див. патенти США МоМо 7659241, 7498298 і 7745394).ORE of the drug monomethylauristatin. (See MoMo US Patents 7,659,241, 7,498,298, and 7,745,394).

Пептидна група лікарського препарату може бути вибрана із нижченаведених Формул Оє іThe peptide group of the drug can be selected from the following Formulas Oye and

Ок: в о в СНУ в?Ok: in o in SNU in?

Я Н м М ї М М. рив в о «Р в во в 0 Ок в о) в/ сн в оI N m M i M M. riv v o "R v vo v 0 Ok v o) v/ sn v o

Я М М / в" ї і К по тв о по йI M M / v" i i K po tv o po y

Кк ОБ де хвиляста лінія ЮОє і Ює вказує на ділянку ковалентного приєднання до антитіла або антитіла-лінкерного компонента, і незалежно, в кожному положенні:Кк ОБ where the wavy line ЮОе and Юе indicates the area of covalent attachment to the antibody or antibody-linker component, and independently, in each position:

В: вибраний із Н і Сі-Св-алкілу;B: selected from H and Ci-Cv-alkyl;

ВЗ вибраний із Н, Сі-Св-алкілу, Сз-Св-карбоциклу, арилу, Сі-Св-алкілурилу, Сі-Св-алкіл-(Сз-BZ is selected from H, Ci-Cv-alkyl, C3-Cv-carbocycle, aryl, Ci-Cv-alkyluril, Ci-Cv-alkyl-(Cz-

Св-карбоциклу), Сз-Св-гетероциклу і Сі1-Св-алкіл-(Сз-Св-гетероциклу);C3-carbocycle), C3-C8-heterocycle and C1-C8-alkyl-(C3-C8-heterocycle);

В" вибраний із Н, Сі-Св-алкілу, Сз-Св-карбоциклу, арилу, Сі-Св-алкілурилу, Сі-Св-алкіл-(Сз-B" selected from H, Ci-Cv-alkyl, C3-Cv-carbocycle, aryl, Ci-Cv-alkyluril, Ci-Cv-alkyl-(C3-

Св-карбоциклу), Сз-Св-гетероциклу і Сі1-Св-алкіл-(Сз-Св-гетероциклу);C3-carbocycle), C3-C8-heterocycle and C1-C8-alkyl-(C3-C8-heterocycle);

В? вибраний із Н і метилу; або В" і 25 спільно утворюють карбоциклічну кільцеву систему і мають формулу -(СВ2РЕ) -, де 2 і ІБ? незалежно вибрані із Н, С1-Св-алкілу і Сз-Св-карбоциклу, і п вибраний із 2, 3,4, 51 6;IN? selected from H and methyl; or B" and 25 together form a carbocyclic ring system and have the formula -(CB2PE) -, where 2 and 1B? are independently selected from H, C1-C6-alkyl and C3-C6-carbocycle, and n is selected from 2, 3,4 , 51 6;

В2 вибраний із Н і Сі-Св-алкілу;B2 is selected from H and Ci-Cv-alkyl;

В" вибраний із Н, Сі-Св-алкілу, Сз-Св-карбоциклу, арилу, Сі-Св-алкілурилу, Сі-Св-алкіл-(Сз-B" selected from H, Ci-Cv-alkyl, C3-Cv-carbocycle, aryl, Ci-Cv-alkyluril, Ci-Cv-alkyl-(C3-

Св-карбоциклу), Сз-Св-гетероциклу і Сі1-Св-алкіл-(Сз-Св-гетероциклу); кожний КУ незалежно вибраний із Н, ОН, С1-Св-алкілу, Сз-Св-карбоциклу їі О-(С1-Св-алкілу);C3-carbocycle), C3-C8-heterocycle and C1-C8-alkyl-(C3-C8-heterocycle); each KU is independently selected from H, OH, C1-Cv-alkyl, C3-Cv-carbocycle and O-(C1-Cv-alkyl);

ВЕ? вибраний із Н і Сі-Св-алкілу;VE? selected from H and Ci-Cv-alkyl;

В'Є вибраний із арилу або Сз-Св-гетероциклу; 7 являє собою О, 5, МН, або МА"2, де К!2 являє собою С:-Св-алкіл;B is selected from aryl or C3-C6 heterocycle; 7 is O, 5, MH, or MA"2, where K12 is C:-C6-alkyl;

А" вибраний із Н, С1-Сго-алкілу, арилу, Сз-Св-гетероциклу, -(В'ЗО)т-А"", або -(В'ЗО)т-A" is selected from H, C1-C6-alkyl, aryl, C3-C6-heterocycle, -(B'ZO)t-A"", or -(B'ZO)t-

СН(В"5)»; т являє собою ціле число в діапазоні 1-1000;CH(B"5)"; t is an integer in the range 1-1000;

В"З являє собою Се2-Св-алкіл;B"Z is Ce2-Cv-alkyl;

В'"" являє собою Н або Сз-Св-алкіл; кожна поява КЗ» незалежно являє собою Н, СООН, -(СНг)п-М(В'9)», -«СНг)п-50ОзН або -(СНг)п-B'"" represents H or C3-C6-alkyl; each occurrence of KZ" independently represents H, COOH, -(CHg)p-M(B'9)", -"CHg)p-50OzH or -(CHg)p-

Зо 5О3-С1-Св-алкіл; кожна поява К!5 незалежно являє собою Н, С1-Св-алкіл або -«"СНг)-СООН;Zo 5O3-C1-Cv-alkyl; each occurrence of K!5 independently represents H, C1-Cv-alkyl or -«"CHg)-COOH;

В'Є вибраний із -С(Н8З)»-С(НВ)»-арилу, -С(Н8З)»-С(Н8)2-(Сз-Св-гетероциклу) і. -С(Н8)»-С(АВ)2-(Сз-B is selected from -C(H8Z)»-C(HB)»-aryl, -C(H8Z)»-C(H8)2-(C3-Cv-heterocycle) and. -С(Н8)»-С(АВ)2-(Сз-

Св-карбоциклу); і п являє собою ціле число в діапазоні від 0 до 6.St-carbocycle); and n is an integer in the range 0 to 6.

У одному із варіантів здійснення винаходу КЗ, В" і КЕ" незалежно являють собою ізопропіл або втор-бутил, і КЕ» являє собою Н або метил. У ілюстративному варіанті здійснення винаходу кожний із КЗ і Е" являє собою ізопропіл, 2? являє собою -Н, і КЕ" являє собою втор-бутил.In one of the embodiments of the invention KZ, B" and KE" independently represent isopropyl or sec-butyl, and KE" represents H or methyl. In an illustrative embodiment of the invention, each of KZ and E" represents isopropyl, 2? represents -H, and KE" represents sec-butyl.

У ще іншому варіанті здійснення винаходу кожний із Р? і КУ являє собою метил, і КЕ? являє собою -Н.In yet another embodiment of the invention, each of P? and KU is methyl, and KE? is -N.

У іншому варіанті здійснення винаходу кожна поява КЗ являє собою -ОСН»з.In another embodiment of the invention, each occurrence of a short-circuit is a -OSN»z.

У ілюстративному варіанті здійснення винаходу кожний із З і Б" являє собою ізопропіл, кожний із К? і БУ являє собою метил, КЕ? являє собою -Н, В" являє собою втор-бутил, кожна поява КЗ являє собою -ОСН»5, і 2? являє собою -Н.In an illustrative embodiment of the invention, each of C and B" represents isopropyl, each of K? and BU represents methyl, KE? represents -H, B" represents sec-butyl, each occurrence of KZ represents -OSH»5, and 2? is -N.

У одному із варіантів здійснення винаходу 2 являє собою -О- або -МН-.In one of the variants of implementation of the invention, 2 represents -O- or -MH-.

У одному із варіантів здійснення винаходу К': являє собою арил.In one of the embodiments of the invention, K': is aryl.

У ілюстративному варіанті здійснення КЗ являє собою феніл.In an illustrative embodiment, KZ is phenyl.

У ілюстративному варіанті здійснення, коли 7 являє собою -О-, В'" являє собою -Н, метил або трет-бутил.In an illustrative embodiment, when 7 is -O-, B'" is -H, methyl or tert-butyl.

У одному із варіантів здійснення винаходу, коли 7 являє собою -МН, В" являє собою -In one of the variants of implementation of the invention, when 7 represents -MH, B" represents -

СН(В"5)», де К"» являє собою -(СНг)п-М(В'5)», і В'Є являє собою -С1-Св-алкіл або -«"СНг)п-СООН.CH(B"5)", where K"" is -(CHg)p-M(B'5)", and B'E is -C1-Cv-alkyl or -"CHg)p-COOH.

У іншому варіанті здійснення, коли 7 являє собою -МН, В" являє собою -СН(В'5)», де В" являє собою -(СНг)п-5ОзН.In another embodiment, when 7 is -MH, B" is -CH(B'5)", where B" is -(CHg)n-5OzH.

Ілюстративний варіант здійснення ауристатину формули ОО являє собою ММАЕ (монометилауристатин Е), де хвиляста лінія вказує на ковалентний зв'язок із лінкером кон'югата антитіло-лікарський препарат:An illustrative embodiment of auristatin of the formula OO is MMAE (monomethylauristatin E), where the wavy line indicates a covalent bond with the linker of the antibody-drug conjugate:

Он я ної М М ке М,,, їїHe i noi M M ke M,,, her

Од. о о од. о - ММА.Unit o o o. o - MMA.

Ілюстративний варіант здійснення ауристатину формули ОЮгв являє собою ММАБЕ (монометилауристатин Е, варіант ауристатину Е (ММАЕ) із фенілаланіном на С-кінці лікарського препарату), де хвиляста лінія вказує на ковалентний зв'язок із лінкером кон'югата антитіло- лікарський препарат (див. О5 2005/0238649 і Богопіпа єї аї. (2006) Віосопіцдаге Спет. 17:114- 124):An illustrative variant of the implementation of auristatin of the formula Oyugv is MMABE (monomethylauristatin E, variant of auristatin E (MMAE) with phenylalanine at the C-terminus of the drug), where the wavy line indicates a covalent bond with the linker of the antibody-drug conjugate (see O5 2005/0238649 and Bogopipa et al. (2006) Viosopitsdage Spet. 17:114-124):

Я но М М ке М,I no M M ke M,

Ї у (в) (в) о о о -щ7ой тон ММА.І у (c) (c) о о о -sh7oy tone of MMA.

У одному із аспектів до молекули лікарського препарату по КЕ" можна приєднати гідрофільні групи, включаючи, крім іншого, складні ефіри триетиленгліколю (ТЕС), як показано вище. Без зв'язку з якою-небудь конкретною теорією гідрофільні групи допомагають в інтерналізації і перешкоджають агломерації молекули лікарського препарату.In one aspect, hydrophilic groups can be attached to the CE drug molecule, including but not limited to triethylene glycol esters (TES) as shown above. Without being bound by any particular theory, the hydrophilic groups aid in internalization and inhibit agglomeration drug molecules.

Ілюстративні варіанти здійснення АЮС, що містять ауристатин/доластатин або їх похідні, описані в 05 2005/0238649 АТ і ЮБогопіпа еї аїІ. (2006) Віосопіпдагєе Спет. 17:114-124, які спеціально включені в цей документ як посилання. Ілюстративні варіанти здійснення АОС, що містять ММАЕ або ММА і різні лінкерні компоненти, мають наступні структури і абревіатури (де "Ар" являє собою антитіло; р являє собою навантаження лікарським препаратом (середнє число молекул лікарського препарату на одне антитіло) і варіює приблизно від 1 до приблизно 8; "мс" являє собою "маї1-сії", тобто дипептид валін-цитрулін; і "5" являє собою атом сірки:Illustrative variants of implementation of AYUS containing auristatin/dolastatin or their derivatives are described in 05 2005/0238649 JSC and YuBogopipa ei aiI. (2006) Viosopipdagee Spet. 17:114-124, which are specifically incorporated herein by reference. Illustrative variants of AOS containing MMAE or MMA and various linker components have the following structures and abbreviations (where "Ar" is an antibody; p is the drug load (the average number of drug molecules per one antibody) and varies from approximately 1 to about 8; "ms" represents "ma1-si", i.e. valine-citrulline dipeptide; and "5" represents a sulfur atom:

ЗоZo

АьЬ-5 (о) ноAlb-5 (o) no

Н о о с еруN o o s eru

Микити змагсім о оо аMikyty as much as possible

НN

Ге) рGe) r

АрБ-МС-ус-РАВ-ММАЄЕArB-MS-us-RAV-MMAEE

АЬ-5 (в) но ОНАБ-5 (c) but ОН

НN

М. их уві сім о бо оо о Н рM. ikh in sim o bo oo o N r

АБ-МС-мс-РАВ-ММАЕAB-MS-ms-RAV-MMAE

Ар-5 о (о) (Ф)Ar-5 o (o) (F)

НN

Молю ик. ща м м М жо о (Ф) од. о о. о рPlease shcha m m M zho o (F) unit. oh oh about r

АрБ-МСО-ММАЕArB-MSO-MMAE

Ар-5 о (6) но Н 7 о. о уон рAr-5 o (6) but H 7 o. about uon r

АрБ-МС-ММАЕArB-MS-MMAE

Ілюстративні варіанти здійснення АЮС, що містять ММАБЕ їі різні лінкерні компоненти, додатково включають А6-МО-РАВ-ММАЕ ії АБ6-РАВ-ММАРЕ. Цікаво, що імунокон'югати, що містятьIllustrative variants of AYUS containing MMABE and various linker components additionally include A6-MO-RAV-MMAE and AB6-RAV-MMARE. Interestingly, immunoconjugates containing

ММАРЕ, приєднаний до антитіла за допомогою лінкера, який протеолітично не розщеплюється, мають активністю, порівнянною із імунокон'югатами, що містять ММАЕ, приєднаний до антитіла за допомогою лінкера, який протеолітично розщеплюється. Див., Юогопіпа еї аї. (2006)MMARE attached to the antibody using a linker that is not proteolytically cleaved have activity comparable to immunoconjugates containing MMAE attached to the antibody using a linker that is proteolytically cleaved. See, Yuogopipa ei ai. (2006)

Віосопішдаїє Спет. 17:114-124. В таких випадках вважають, що вивільнення лікарського препарату діє за допомогою руйнування антитіла в клітині. Іа.Viosopishdaiye Spet. 17:114-124. In such cases, it is believed that the release of the drug works by destroying the antibody in the cell. Ia.

Як правило, основані на пептидах молекули лікарських препаратів можуть бути приготовані шляхом утворення пептидного зв'язку між двома або більше амінокислотами і/або пептидними фрагментами. Такі пептидні зв'язки можуть бути отримані, наприклад, керуючись способом рідкофазного синтезу (див. Е. Зспгодег апа К. ГибКе, ""пе Реріідев", моїште 1, рр.76-136, 1965,As a rule, peptide-based drug molecules can be prepared by forming a peptide bond between two or more amino acids and/or peptide fragments. Such peptide bonds can be obtained, for example, guided by the method of liquid phase synthesis (see E. Zspgodeg apa K. HybKe, ""pe Reriidev", moishte 1, pp. 76-136, 1965,

Асадетіс Ргев55), який добре відомий в галузі хімії пептидів. Молекули лікарського препарату ауристатину/доластатину можуть бути отримані відповідно до способів: 5 2005/0238649 А1; патент ОЗ Мо 5635483; патент З Мо 5780588; Реції еї а! (1989) У. Ат. Спет. 5ос. 111:5463- 5465; Рецйі єї а! (1998) Апіі-Сапсег Огиа Оевзідп 13:243-277; Ренії, С.В., єї аІ. Зупіпезів, 1996, 719-725; Рейції єї а (1996) У. Спет. бос. РеїКкіп Ттапе. 1 5:859-863; і ЮБогопіпа (2003) Маї.Asadetis Rhev55), who is well known in the field of peptide chemistry. Molecules of the drug auristatin/dolastatin can be obtained according to the following methods: 5 2005/0238649 A1; patent OZ Mo 5635483; patent Z Mo 5780588; Retzi ey a! (1989) U. At. Spent 5 people 111:5463-5465; What are you saying? (1998) Apii-Sapseg Ogia Oevzidp 13:243-277; Renii, S.V., her AI. Zupipeziv, 1996, 719-725; Her broadcasts (1996) U. Spet. boss. ReiKkip Ttape. 1 5:859-863; and YuBogopipa (2003) Maya.

Віоїтеснпої. 21(7):778-784.Vioitesnpoi. 21(7):778-784.

Зокрема молекули лікарського препарату ауристатину/удоластатину формули Ов, такі якIn particular, molecules of the drug auristatin/udolastatin of the formula Ov, such as

МІМАБ і його похідні, можуть бути отримані, використовуючи способи, описані в 5 2005/0238649 А1 і Рогопіпа єї аї. (2006) Віосопіидагє Спет. 17:114-124. Молекули лікарського препарату ауристатину/доластатину формули Оє, такі як ММАЕ і його похідні, можуть бути отримані, використовуючи способи, описані в статті Юогопіпа еї аї. (2003) Маї. Віоїеснп. 21:778- 784. Молекули зв'язаного з лінкером лікарського препарату МС-ММАЕ, МО-ММАЕ, МО-мс-РАВ-MIMAB and its derivatives can be obtained using the methods described in 5 2005/0238649 A1 and Rogopipa et al. (2006) Viosopiidage Speth. 17:114-124. Auristatin/dolastatin drug molecules of the formula Oe, such as MMAE and its derivatives, can be obtained using the methods described in the article by Yugopipa et al. (2003) Mai. Vioyesnp 21:778- 784. Molecules of the linker-bound drug MS-MMAE, MO-MMAE, MO-ms-RAV-

ММАБЕ ії МОС-мс-РАВ-ММАЄЕ можуть бути успішно синтезовані загальноприйнятими способами, наприклад, як описано в статті Юогопіпа еї аї. (2003) Маї. Віоїєсн. 21:778-784 і в публікації патентної заявки Ме 05 2005/0238649 А1, і потім кон'юговані із антитілом, що представляє інтерес.MMABE and MOS-ms-RAV-MMAEE can be successfully synthesized by conventional methods, for example, as described in Jugopipa's article. (2003) Mai. Vioyesn. 21:778-784 and in patent application publication Me 05 2005/0238649 A1, and then conjugated with the antibody of interest.

Е. Способи і композиції для діагностики і детекціїE. Methods and compositions for diagnosis and detection

У певних варіантах здійснення винаходу будь-яке із антитіл проти мезотеліну, представлених в цьому документі, придатне для детекції наявності мезотеліну в біологічному зразку. Термін "детекція" в тому значенні, в якому використовується в цьому документі, охоплює поняття кількісної або якісної детекції. "Біологічний зразок" містить в собі, наприклад, клітину або тканину (наприклад, матеріал біопсії включаючи злоякісну або потенційно злоякісну тканину підшлункової залози, яєчника, легені або ендометрія, або мезотеліому) або сироватку.In certain embodiments of the invention, any of the anti-mesothelin antibodies presented herein are suitable for detecting the presence of mesothelin in a biological sample. The term "detection" as used herein includes the concept of quantitative or qualitative detection. A "biological sample" includes, for example, a cell or tissue (eg, biopsy material including malignant or potentially malignant tissue of the pancreas, ovary, lung or endometrium, or mesothelioma) or serum.

У одному із варіантів здійснення винахід стосується антитіла проти мезотеліну для використання в способі діагностики або детекції. У додатковому аспекті представлений спосіб детекції наявності мезотеліну в біологічному зразку. У певних варіантах здійснення винаходу спосіб містить взаємодію біологічного зразка із антитілом проти мезотеліну, як описано в цьому документі, в умовах, що допускають зв'язування антитіла проти мезотеліну з мезотеліном, і детекцію наявності або відсутності утворення комплексу між антитілом проти мезотеліну і мезотеліном в біологічному зразку. Такий спосіб може бути способом іп міго або іп мімо. У одному із варіантів здійснення винаходу антитіло проти мезотеліну використовується для відбору індивідів, відповідних для терапевтичного лікування з використанням антитіла проти мезотеліну, наприклад, де мезотелін є біомаркером для відбору пацієнтів. У додатковому варіанті здійснення винаходу біологічним зразком є сироватка, наприклад, де детектують мезотелін, який був виділений раковими клітинами в сироватку.In one embodiment, the invention relates to an antibody against mesothelin for use in a method of diagnosis or detection. In an additional aspect, a method of detecting the presence of mesothelin in a biological sample is presented. In certain embodiments of the invention, the method comprises interacting a biological sample with an anti-mesothelin antibody, as described herein, under conditions that allow binding of the anti-mesothelin antibody to mesothelin, and detecting the presence or absence of complex formation between the anti-mesothelin antibody and mesothelin in the biological sample This method can be the ip migo or ip mimo method. In one embodiment of the invention, an anti-mesothelin antibody is used to select individuals suitable for therapeutic treatment using an anti-mesothelin antibody, for example, where mesothelin is a biomarker for patient selection. In an additional embodiment of the invention, the biological sample is serum, for example, where mesothelin, which was secreted by cancer cells in the serum, is detected.

У додатковому варіанті здійснення винаходу іп мімо використовується антитіло проти мезотеліну для детекції, наприклад, шляхом візуалізації іп мімо, позитивної по мезотеліну злоякісної пухлини у індивіда, наприклад, з метою діагностики, прогнозування або визначення стадії злоякісного новоутворення, визначення відповідного курсу терапії або моніторингу відповіді злоякісної пухлини на терапію. Одним із способів, відомих в даній галузі техніки, для детекції іп мімо є імунно-позитронна емісійна томографія (імуно-РЕТ), як описано, наприклад, в статті мап Юопдеп еї аї., Те Опсоїодівії 12:1379-1389 (2007) і Мегеї еї аї., У. Мисі. Мед. 44:1271- 1281 (2003). В таких варіантах здійснення винаходу представлений спосіб для детекції позитивної по мезотеліну злоякісної пухлини у індивіда, спосіб, що містить введення міченого антитіла проти мезотеліну індивіду, що має або потенційно має позитивну по мезотеліну злоякісну пухлину, і детекцію міченого антитіла проти мезотеліну у індивіда, де детекціяIn an additional embodiment of the invention, ip mimo uses an antibody against mesothelin to detect, for example, by ip mimo imaging, a mesothelin-positive malignant tumor in an individual, for example, for the purpose of diagnosing, prognosticating or determining the stage of a malignant neoplasm, determining an appropriate course of therapy, or monitoring the response of a malignant tumor tumors for therapy. One of the methods known in the art for the detection of ip mimo is immuno-positron emission tomography (immuno-PET), as described, for example, in the article map Yuopdep ei ai., Te Opsoiodivii 12:1379-1389 (2007) and Megei ei ai., U. Mysi. Honey. 44:1271-1281 (2003). In such embodiments, the invention provides a method for detecting a mesothelin-positive malignant tumor in an individual, a method comprising administering a labeled anti-mesothelin antibody to an individual having or potentially having a mesothelin-positive malignant tumor, and detecting a labeled anti-mesothelin antibody in an individual, where the detection

Зо міченого антитіла проти мезотеліну вказує на позитивну по мезотеліну злоякісну пухлину у індивіда. У деяких таких варіантах здійснення винаходу мічене антитіло проти мезотеліну містить антитіло проти мезотеліну, кон'юговане із випромінювачем позитронів, таких як 98Са, твер, 640бу, 86у, 76Вг, 892г їі 1244. У окремому варіанті здійснення винаходу випромінювачем позитронів є 892т:The presence of a labeled antibody against mesothelin indicates a mesothelin-positive malignant tumor in an individual. In some such embodiments of the invention, the labeled anti-mesothelin antibody comprises an anti-mesothelin antibody conjugated to a positron emitter, such as 98Ca, Tver, 640bu, 86y, 76Vg, 892g, and 1244. In a separate embodiment of the invention, the positron emitter is 892t:

У додатковому варіанті здійснення винаходу спосіб діагностики або детекції містить взаємодію першого антитіла проти мезотеліну, іммобілізованого на субстрат, із біологічним зразком, що підлягає тестуванню на предмет наявності мезотеліну, вплив на субстрат другого антитіла проти мезотеліну і детекцію наявності або відсутності зв'язку другого антитіла проти мезотеліну із комплексом між першим антитілом проти мезотеліну і мезотеліном в біологічному зразку. Як субстрат може виступати будь-яке підтримуюче середовище, наприклад, скло, метал, кераміка, полімерні кульки, предметні стекла, чипи і інші субстрати. У певних варіантах здійснення винаходу біологічний зразок містить клітину або тканину (наприклад, матеріал біопсії, включаючи злоякісну або потенційно злоякісну тканину підшлункової залози, яєчника, легені або ендометрія, або мезотеліому) або сироватку, тобто сироватку, в яку був виділений мезотелін. У певних варіантах здійснення винаходу перше або друге антитіло проти мезотеліну є будь-яким антитілом, розглянутим в цьому документі. У таких варіантах здійснення винаходу другим антитілом проти мезотеліну може бути 1923 або можуть бути антитіла, отримані із 1923, як описано в цьому документі.In an additional embodiment of the invention, the method of diagnosis or detection includes the interaction of the first antibody against mesothelin, immobilized on the substrate, with a biological sample to be tested for the presence of mesothelin, the effect on the substrate of the second antibody against mesothelin, and the detection of the presence or absence of a connection of the second antibody against of mesothelin with a complex between the first antibody against mesothelin and mesothelin in a biological sample. Any supporting medium can act as a substrate, for example, glass, metal, ceramics, polymer balls, glass slides, chips and other substrates. In certain embodiments of the invention, the biological sample comprises a cell or tissue (eg, biopsy material, including malignant or potentially malignant pancreatic, ovarian, lung, or endometrial tissue, or mesothelioma) or serum, i.e., serum into which mesothelin has been isolated. In certain embodiments of the invention, the first or second antibody against mesothelin is any antibody discussed herein. In such embodiments of the invention, the second antibody against mesothelin may be 1923 or may be antibodies derived from 1923 as described herein.

Ілюстративні порушення, які можуть бути діагностовані або детектовані за будь-яким із вищеперерахованих варіантів здійснення винаходу включають позитивні по мезотеліну злоякісні пухлини, такі як позитивне по мезотеліну злоякісне новоутворення підшлункової (включаючи протокову аденокарциному підшлункової залози), позитивний по мезотеліну рак легені (включаючи недрібноклітинну карциному легені (М5СІС)), мезотеліому і позитивне по мезотеліну злоякісне новоутворення ендометрія. У одному із варіантів здійснення винаходу позитивне по мезотеліну злоякісне новоутворення є злоякісною пухлиною, якій привласнюють антимезотеліновий імуногістохімічний (НС) бал більше "0", який відповідає дуже слабкому фарбуванню або його відсутності у »90 95 пухлинних клітин, в умовах, описаних в цьому документі в Прикладі У. У іншому варіанті здійснення винаходу в позитивній по мезотеліну злоякісній пухлині експресується мезотелін на рівні їж, 2-4 або Зж, як визначено в умовах, бо описаних в цьому документі в Прикладі .). Позитивна по мезотеліну злоякісна пухлина за будь-Illustrative disorders that may be diagnosed or detected by any of the above embodiments of the invention include mesothelin-positive malignancies, such as mesothelin-positive pancreatic malignancy (including pancreatic ductal adenocarcinoma), mesothelin-positive lung cancer (including non-small cell carcinoma lung (M5SIS)), mesothelioma and mesothelin-positive malignant neoplasm of the endometrium. In one embodiment of the invention, a mesothelin-positive malignancy is a malignant tumor that is assigned an anti-mesothelin immunohistochemical (HC) score greater than "0", which corresponds to very weak or no staining in »90 95 tumor cells, under the conditions described herein in Example U. In another embodiment of the invention, in a mesothelin-positive malignant tumor, mesothelin is expressed at the level of Ih, 2-4 or 3h, as determined under the conditions described in this document in Example .). Mesothelin-positive malignant tumor for any

яким із вищезгаданих варіантів здійснення винаходу може бути позитивною по двох антигенах злоякісною пухлиною.which of the above-mentioned embodiments of the invention can be a positive for two antigens malignant tumor.

У певних варіантах здійснення винаходу представлені мічені антитіла проти мезотеліну.In certain embodiments of the invention, labeled antibodies against mesothelin are provided.

Мітки включають, крім іншого, мітки або молекули, детекція яких відбувається напряму (такі як флуоресцентні, хромофорні, електронощільні, хемілюмінесцентні і радіоактивні мітки), а також молекули, такі як ферменти або ліганди, детекція яких відбувається опосередковано, наприклад, за допомогою ферментативної реакції або молекулярної взаємодії. Типові мітки включають, крім іншого, радіоіїзотопи З2Р, 190, 125І, ЗН Її І, флуорофори, такі як хелати рідкісноземельних елементів або флуоресцеїн і їх похідні, родамін і його похідні, дансил, умбеліферон, люциферази, наприклад, люциферазу світляка і бактеріальну люциферазу (патент США Мо 4737456), люциферин, 2,3-дигідрофталазиндіони, пероксидазу хрону (НКР), лужну фосфатазу, В-галактозидазу, глюкоамілазу, лізоцим, оксидазу сахаридів, наприклад, оксидаза глюкози, оксидаза галактози і глюкозо-б6-фосфатдегідрогеназа, гетероциклічні оксидази, такі як уриказа і ксантиноксидаза, в поєднанні із ферментами, які використовують перекис водню для окислення вихідного барвника, такими як НЕР, лактопероксидазу, або мікропероксидазу, біотин/авідин, спінові мітки, стабільні вільні радикали і т. п. В іншому варіанті здійснення винаходу міткою є випромінювач позитронів. Випромінювачі позитронів включають, крім іншого, б8С3а, 8Е, бу, 86, 76Ву, 892г і 1244, У окремому варіанті здійснення винаходу випромінювачем позитронів є 9977.Labels include, but are not limited to, labels or molecules that are detected directly (such as fluorescent, chromophoric, electron-dense, chemiluminescent, and radioactive labels), as well as molecules, such as enzymes or ligands, that are detected indirectly, such as by an enzymatic reaction or molecular interaction. Typical labels include, but are not limited to, the radioisotopes Z2P, 190, 125I, ZN Her I, fluorophores such as rare earth chelates or fluorescein and their derivatives, rhodamine and its derivatives, dansyl, umbelliferone, luciferases such as firefly luciferase and bacterial luciferase ( US patent Mo 4737456), luciferin, 2,3-dihydrophthalazinediones, horseradish peroxidase (HPR), alkaline phosphatase, β-galactosidase, glucoamylase, lysozyme, saccharide oxidase, for example, glucose oxidase, galactose oxidase and glucose-β6-phosphate dehydrogenase, heterocyclic oxidases , such as uricase and xanthine oxidase, in combination with enzymes that use hydrogen peroxide to oxidize the original dye, such as HER, lactoperoxidase, or microperoxidase, biotin/avidin, spin labels, stable free radicals, etc. In another embodiment of the invention the label is a positron emitter. Positron emitters include, but are not limited to, b8C3a, 8E, bu, 86, 76Vu, 892g, and 1244. In a separate embodiment of the invention, the positron emitter is 9977.

Е. Фармацевтичні композиціїE. Pharmaceutical compositions

Фармацевтичні композиції антитіла проти мезотеліну або імунокон'югату, як описано в цьому документі, готують змішуванням такого антитіла або імунокон'югату, що має необхідний ступінь чистоти з одним або декількома додатковими фармацевтично прийнятними носіями (Кетіпдіоп'є Рпаптасешіса! Зсіепсез5 161їп ейййоп, О5ої, А. Ед. (1980)), в формі ліофілізованих композицій або водних розчинів. Фармацевтично прийнятні носії, в основному, нетоксичні для реципієнтів в дозах, що застосовуються і концентраціях, і включають, крім іншого: буфери, такі як фосфатний, цитратний, і інші органічні кислоти; антиоксиданти, включаючи аскорбінову кислоту і метіонін; консерванти (такі як октадецилдиметилбензил хлорид амоній; хлорид гексаметонію, хлорид бензалконію; хлорид бензетонію; фенол, бутил або бензиловий спирт;Anti-mesothelin antibody or immunoconjugate pharmaceutical compositions, as described herein, are prepared by mixing such an antibody or immunoconjugate of the required degree of purity with one or more additional pharmaceutically acceptable carriers ( A. Ed. (1980)), in the form of lyophilized compositions or aqueous solutions. Pharmaceutically acceptable carriers are generally non-toxic to recipients at the doses and concentrations used and include, but are not limited to: buffers such as phosphate, citrate, and other organic acids; antioxidants, including ascorbic acid and methionine; preservatives (such as octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride; hexamethonium chloride, benzalkonium chloride; benzethonium chloride; phenol, butyl or benzyl alcohol;

Зо алкіл-парабени, такі як метил- або пропіл-парабен; катехол; резорцинол; циклогексанол; 3- пентанол; і т-крезол); низькомолекулярні поліпептиди (приблизно менше 10 амінокислотних залишків); білки, такі як сироватковий альбумін, желатин або імуноглобуліни; гідрофільні полімери, такі як полівінілпіролідон; амінокислоти, такі як гліцин, глутамін, аспарагін, гістидин, аргінін або лізин; моносахариди, дисахариди і інші вуглеводи, в тому числі глюкоза, маноза або декстрини; хелатуючі агенти, такі як ЕОТА; цукри, такі як сахароза, маніт, трегалоза або сорбіт; утворюючі солі протиіони, такі як натрій; комплекси металів (наприклад, 2п-білкові комплекси); іабо неіїонні сурфактанти, такі як поліетиленгліколь (РЕС). Ілюстративні фармацевтично прийнятні носії в цьому документі додатково включають засоби диспергування лікарських засобів в міжклітинному просторі, такі як розчинні нейтрально-активні глікопротеїни гіалуронідази (ЗНАБЕСР), наприклад, розчинні глікопротеїни гіалуронідази людини РН-20, такі як ГНиИРН2гО (НУТ ЕМЕХФ, Вахіег Іпіегпайіопаї, Іпс.). Певні ілюстративні ХЗНАБЕОР і способи застосування, включаючи гНиРН2О, описані в публікаціях патентів США МоМо 2005/0260186 і 2006/0104968. У одному із аспектів, -"НАЗЕСР комбінують із одним або декількома додатковими глікозаміногліканазами, такими як хондроїтиназами.From alkyl parabens, such as methyl or propyl paraben; catechol; resorcinol; cyclohexanol; 3- pentanol; and t-cresol); low molecular weight polypeptides (approximately less than 10 amino acid residues); proteins such as serum albumin, gelatin or immunoglobulins; hydrophilic polymers such as polyvinylpyrrolidone; amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, histidine, arginine or lysine; monosaccharides, disaccharides and other carbohydrates, including glucose, mannose or dextrins; chelating agents such as EOTA; sugars such as sucrose, mannitol, trehalose or sorbitol; salt-forming counterions such as sodium; metal complexes (for example, 2p-protein complexes); or nonionic surfactants such as polyethylene glycol (PES). Illustrative pharmaceutically acceptable carriers herein additionally include agents for dispersing drugs in the intercellular space, such as soluble neutrally active glycoproteins of hyaluronidase (ZNABESR), for example, soluble glycoproteins of human hyaluronidase pH-20, such as GNiIRN2gO (NUT EMEHF, Vahieg Ipiegpaiiopai, Ips .). Certain illustrative HZNABEOR and methods of use, including hNiRH2O, are described in US Patent Publications MoMo 2005/0260186 and 2006/0104968. In one aspect, the NASESR is combined with one or more additional glycosaminoglycanases, such as chondroitinases.

Ілюстративні композиції ліофілізованого антитіла або імунокон'югату описані в патенті СШАIllustrative compositions of lyophilized antibody or immunoconjugate are described in US Pat

Мо 6267958. Водні композиції антитіла або імунокон'югату включають такі, описані в патентіMO 6267958. Aqueous compositions of the antibody or immunoconjugate include those described in the patent

США Мо 6171586 і УУО2006/044908, де останні із згаданих композицій включають гістидин- ацетатний буфер.US Mo. 6171586 and UUO2006/044908, where the latter of the mentioned compositions include a histidine-acetate buffer.

Композиція в цьому документі може також містити більше одного активного інгредієнта по мірі необхідності лікування певного симптому захворювання, переважно такі із взаємодоповнюючими активностями, які не впливають негативним чином один на одного.The composition herein may also contain more than one active ingredient as needed to treat a particular disease symptom, preferably those with complementary activities that do not adversely affect each other.

Наприклад, може додатково вимагати забезпечення гемцитабіном, наприклад, для лікування позитивної по мезотеліну злоякісної пухлини, такої як позитивне по мезотеліну злоякісне новоутворення підшлункової залози(аденокарцинома підшлункової залози). У іншому прикладі, може додатково бути потрібне антитіло проти МОС16, кон'юговане із цитотоксичним агентом, наприклад, для лікування позитивного по мезотеліну злоякісного новоутворення або позитивного по двох антигенах злоякісного новоутворення, такого як позитивний по мезотеліну раку яєчника (серозна аденокарцинома яєчника) або позитивний по двох антигенах раку яєчника. Такі активні інгредієнти переважно присутні в комбінації в кількостях, ефективних для 60 цільового використання.For example, gemcitabine may additionally be required, for example, for the treatment of a mesothelin-positive malignancy, such as a mesothelin-positive pancreatic malignancy (pancreatic adenocarcinoma). In another example, an anti-MOS16 antibody conjugated to a cytotoxic agent may be additionally required, for example, to treat a mesothelin-positive malignancy or a dual-antigen-positive malignancy, such as mesothelin-positive ovarian cancer (ovarian serous adenocarcinoma) or positive on two ovarian cancer antigens. Such active ingredients are preferably present in combination in amounts effective for the intended use.

Активні інгредієнти можуть бути укладені в мікрокапсули, приготовані, наприклад, способом коацервації або полімеризацією на межі розділу фаз, наприклад, гідроксиметилцелюлозні або желатинові мікрокапсули і мікрокапсули із полі(метилметацилат)у, відповідно, в колоїдних системах доставки лікарського препарату (наприклад, ліпосомах, альбумінових мікросферах, мікроемульсіях, наночастинках і нанокапсулах) або в макроемульсіях. Такі способи розглянуті вActive ingredients can be encapsulated in microcapsules prepared, for example, by coacervation or interfacial polymerization, for example, hydroxymethylcellulose or gelatin microcapsules and poly(methyl methacylate) microcapsules, respectively, in colloidal drug delivery systems (for example, liposomes, albumin microspheres, microemulsions, nanoparticles and nanocapsules) or in macroemulsions. Such methods are considered in

Ветіпдюп'5 РНаптасецшіїйса! Зсієпсез 161й едйіоп, Озої, А. Еа. (1980).Vetipdyup'5 Rnaptasetschiysa! Zsiepsez 161st Ediiop, Ozoi, A. Ea. (1980).

Можуть бути отримані препарати уповільненого вивільнення. Придатні приклади препаратів уповільненого вивільнення включають напівпроникні матриці із твердих гідрофобних полімерів, що містять антитіло або імунокон'югат, матриці яких представлені у вигляді профільованих виробів, наприклад, плівок або мікрокапсул.Sustained-release preparations may be obtained. Suitable examples of sustained-release preparations include semipermeable matrices of solid hydrophobic polymers containing an antibody or immunoconjugate, which matrices are presented in the form of profiled products, for example, films or microcapsules.

Композиції, що підлягають використанню для введення іп мімо, як правило, стерильні.Compositions to be used for the introduction of ip mimo are, as a rule, sterile.

Стерильність може бути успішно досягнута, наприклад, шляхом фільтрації через стерильні мембрани для фільтрації. б. Терапевтичні способи і композиціїSterility can be successfully achieved, for example, by filtration through sterile filtration membranes. b. Therapeutic methods and compositions

Будь-які із антитіл проти мезотеліну або імунокон'югатів, представлених в цьому документі, можуть бути використані в способах, наприклад, терапевтичних способах.Any of the anti-mesothelin antibodies or immunoconjugates presented herein can be used in methods, for example, therapeutic methods.

У одному із аспектів антитіло проти мезотеліну або імунокон'югат, представлені в цьому документі, використовуються в способі інгібування проліферації позитивних по мезотеліну клітин, способі, що містить вплив на клітину антитілом проти мезотеліну або імунокон'югатом в умовах, що допускають зв'язування антитіла проти мезотеліну або імунокон'югату із мезотеліном на поверхні клітини, тим самим інгібуючи проліферацію клітини. У певних варіантах здійснення винаходу спосіб є способом іп міго або іп мімо. У додаткових варіантах здійснення винаходу клітина є клітиною підшлункової залози, яєчника, легені, мезотеліоми або ендометрія.In one aspect, the anti-mesothelin antibody or immunoconjugate provided herein is used in a method of inhibiting the proliferation of mesothelin-positive cells, the method comprising exposing the cell to the anti-mesothelin antibody or immunoconjugate under conditions that allow binding of the antibody against mesothelin or an immunoconjugate with mesothelin on the cell surface, thereby inhibiting cell proliferation. In certain embodiments of the invention, the method is an ip migo or ip mimo method. In additional embodiments of the invention, the cell is a pancreatic, ovarian, lung, mesothelioma, or endometrial cell.

У додаткових варіантах здійснення винаходу клітина є позитивною по двох антигенах клітиною.In additional embodiments of the invention, the cell is a double-antigen positive cell.

Інгібування клітинної проліферації іп міго може бути проаналізовано, використовуючи набір реактивів для люмінесцентного аналізу життєздатності клітин СейПТйег-Сіо"М, комерційно доступного на фірмі Рготеда (Мадізоп, УМІ). Цей аналіз визначає число живих клітин в культурі на базі оцінки кількості присутнього АТФ, який є ознакою метаболічно активних клітин. Див.Inhibition of cell proliferation by migo can be assayed using the SePTyeg-SioM fluorescent cell viability assay kit, commercially available from Rgoteda (Madizop, UMI). This assay determines the number of viable cells in the culture based on the estimation of the amount of ATP present, which is a sign of metabolically active cells. See

Стос еї аї. (1993) 9). Іттипої. Меїй. 160:81-88, патент США Мо 6602677. Аналіз може бутиA pile of things. (1993) 9). And so on. My 160:81-88, US patent Mo 6602677. Analysis can be

Зо виконаний в 96- або 384-ямковому форматі, забезпечуючи можливість автомазованого скринінгу високої продуктивності (НТ5). Див. Стгее еї аїІ. (1995) АпіїСапсег Огид5 6:398-404.Zo is made in 96- or 384-well format, providing the possibility of automated screening of high productivity (HT5). See Stgee ey aiI. (1995) ApiiSapseg Ogyd5 6:398-404.

Процедура аналізу містить додавання єдиного реагенту (СейПТйег-сСіоФ Кеадепі) безпосередньо в клітини, які культивуються. Це приводить до лізису клітин і генеруванню люмінесцентного сигналу, що породжується люциферазною реакцією. Люмінесцентний сигнал пропорційний кількості присутнього АТФ, який напряму пропорційний числу живих клітин, присутніх в культурі.The assay procedure involves the addition of a single reagent (SePTyeg-cSiOF Keadepi) directly into the cultured cells. This leads to cell lysis and the generation of a luminescent signal generated by the luciferase reaction. The fluorescent signal is proportional to the amount of ATP present, which is directly proportional to the number of living cells present in the culture.

Дані можуть бути зареєстровані люмінометром або формуючим зображення пристроєм, оснащеним камерою із зарядовим зв'язком ССО. Люмінесценція на виході виражається у відносних світлових одиницях (КІ 0).The data can be recorded by a luminometer or imaging device equipped with a charge-coupled device (SCO). Luminescence at the output is expressed in relative light units (CI 0).

У іншому аспекті винахід стосується антитіла проти мезотеліну або імунокон'югату для використання як лікарського засобу. У додаткових аспектах винахід стосується антитіла проти мезотеліну або імунокон'югату для використання в способі лікування. У певних варіантах здійснення винахід стосується антитіла проти мезотеліну або імунокон'югату для використання в лікуванні позитивного по мезотеліну злоякісного новоутворення. У певних варіантах здійснення винахід стосується антитіла проти мезотеліну або імунокон'югату для використання в способі лікування індивідуума, що має позитивне по мезотеліну злоякісне новоутворення, способі, що містить призначення індивідууму ефективної кількості антитіла проти мезотеліну або імунокон'югату. У одному із таких варіантів здійснення винаходу спосіб додатково містить призначення індивідууму ефективної кількості принаймні одного додаткового терапевтичного засобу, наприклад, як описано нижче.In another aspect, the invention relates to an antibody against mesothelin or an immunoconjugate for use as a medicinal product. In additional aspects, the invention relates to an antibody against mesothelin or an immunoconjugate for use in a method of treatment. In certain embodiments, the invention relates to an antibody against mesothelin or an immunoconjugate for use in the treatment of a mesothelin-positive malignant neoplasm. In certain embodiments, the invention relates to an anti-mesothelin antibody or immunoconjugate for use in a method of treating an individual having a mesothelin-positive malignancy, a method comprising administering to the individual an effective amount of an anti-mesothelin antibody or immunoconjugate. In one such embodiment of the invention, the method further comprises administering to the individual an effective amount of at least one additional therapeutic agent, for example as described below.

У додатковому аспекті винахід стосується антитіла проти мезотеліну або імунокон'югату для використання у виробництві або приготуванні лікарського препарату. У одному із варіантів здійснення винаходу лікарський препарат призначений для лікування позитивного по мезотеліну злоякісного новоутворення. У додатковому варіанті здійснення винаходу лікарський препарат призначений для використання в способі лікування позитивного по мезотеліну злоякісного новоутворення, способі, що містить призначення індивідууму, що має позитивне по мезотеліну злоякісне новоутворення, ефективної кількості лікарського препарату. У одному із таких варіантів здійснення винаходу спосіб додатково містить призначення індивідууму ефективної кількості принаймні одного додаткового терапевтичного засобу, наприклад, як описано нижче.In an additional aspect, the invention relates to an antibody against mesothelin or an immunoconjugate for use in the manufacture or preparation of a medicinal product. In one of the variants of implementation of the invention, the drug is intended for the treatment of mesothelin-positive malignant neoplasm. In an additional embodiment of the invention, the medicinal product is intended for use in a method of treating a mesothelin-positive malignant neoplasm, a method comprising administering to an individual with a mesothelin-positive malignant neoplasm an effective amount of the medicinal product. In one such embodiment of the invention, the method further comprises administering to the individual an effective amount of at least one additional therapeutic agent, for example as described below.

У додатковому аспекті винахід являє собою спосіб лікування позитивного по мезотеліну злоякісного новоутворення. У одному із варіантів здійснення винаходу спосіб містить призначення індивідууму, що має таке позитивне по мезотеліну злоякісне новоутворення, ефективної кількості антитіла проти мезотеліну або імунокон'югату. У одному із таких варіантів здійснення винаходу спосіб додатково містить призначення індивідууму ефективної кількості принаймні одного додаткового терапевтичного засобу, як описано нижче.In an additional aspect, the invention is a method of treating a mesothelin-positive malignant neoplasm. In one of the embodiments of the invention, the method includes the administration of an effective amount of an antibody against mesothelin or an immunoconjugate to an individual having such a mesothelin-positive malignant neoplasm. In one such embodiment of the invention, the method further comprises administering to the individual an effective amount of at least one additional therapeutic agent, as described below.

Позитивне по мезотеліну злоякісне новоутворення за будь-яким із вищезгаданих варіантів здійснення винаходу можливо, наприклад, позитивним по мезотеліну раком підшлункової (включаючи протокову аденокарциному підшлункової залози), позитивним по мезотеліну раком яєчника (включаючи серозну аденокарциному яєчника), позитивним по мезотеліну раком легені (включаючи недрібноклітинну карциному легені (МЗСІС)), мезотеліомою і позитивним по мезотеліну раком ендометрія. У одному із варіантів здійснення винаходу позитивне по мезотеліну злоякісне новоутворення є злоякісною пухлиною, якій привласнюють антимезотеліновий імуногістохімічний (ІНС) бал більше "0", який відповідає дуже слабкому фарбуванню або його відсутності у 29095 пухлинних клітин, в умовах, описаних в цьому документі в Прикладі У. У іншому варіанті здійснення винаходу в позитивній по мезотеліну злоякісній пухлині експресується мезотелін на рівні їж, 2- або Зж, як визначено в умовах, описаних в цьому документі в Прикладі У. Позитивна по мезотеліну злоякісна пухлина за будь- яким із вищезгаданих варіантів здійснення винаходу може бути позитивною по двох антигенах злоякісною пухлиною. "Індивідуумом" відповідно до будь-якого вищезгаданого варіанта здійснення винаходу може бути людина.A mesothelin-positive malignant neoplasm according to any of the above-mentioned embodiments of the invention is possible, for example, mesothelin-positive pancreatic cancer (including ductal adenocarcinoma of the pancreas), mesothelin-positive ovarian cancer (including serous ovarian adenocarcinoma), mesothelin-positive lung cancer (including non-small cell lung carcinoma (NSCLC), mesothelioma and mesothelin-positive endometrial cancer. In one embodiment of the invention, a mesothelin-positive malignancy is a malignancy assigned an anti-mesothelin immunohistochemical (INS) score greater than "0", which corresponds to very weak or no staining in 29095 tumor cells, under the conditions described herein in Example U. In another embodiment of the invention, in a mesothelin-positive malignant tumor, mesothelin is expressed at the level of Х, 2- or ЖХ, as determined under the conditions described in this document in Example U. A mesothelin-positive malignant tumor according to any of the above-mentioned embodiments of the invention can be a malignant tumor positive for two antigens. An "individual" according to any of the aforementioned embodiments of the invention may be a human being.

У додатковому аспекті винахід являє фармацевтичні композиції, що містять будь-які антитіла проти мезотеліну і імунокон'югати, представлені в цьому документі, наприклад, для використання в будь-якому із вищезгаданих терапевтичних способів. У одному із варіантів здійснення винаходу фармацевтична композиція містить будь-яке із представлених в цьому документі антитіл проти мезотеліну або імунокон'югатів і фармацевтично прийнятний носій. У іншому варіанті здійснення винаходу фармацевтична композиція містить будь-яке із представлених в цьому документі антитіл проти мезотеліну або імунокон'югатів і принаймні один додатковий терапевтичний засіб, наприклад, як описано нижче.In an additional aspect, the invention provides pharmaceutical compositions containing any of the anti-mesothelin antibodies and immunoconjugates presented herein, for example, for use in any of the above-mentioned therapeutic methods. In one embodiment of the invention, the pharmaceutical composition contains any of the anti-mesothelin antibodies or immunoconjugates presented herein and a pharmaceutically acceptable carrier. In another embodiment of the invention, the pharmaceutical composition contains any of the anti-mesothelin antibodies or immunoconjugates presented herein and at least one additional therapeutic agent, for example, as described below.

Антитіла або імунокон'югати за винаходом можуть бути використані або окремо, або в комбінації із іншими засобами, що застосовуються в терапії. Наприклад, антитіло або імунокон'югат за винаходом можуть бути спільно призначені принаймні із одним додатковим терапевтичним засобом. У певних варіантах здійснення винаходу додатковим терапевтичним засобом є гемцитабін. У певних варіантах здійснення винаходу додатковим терапевтичним засобом є анти-МОС16 антитіло, кон'юговане із цитотоксичним агентом.Antibodies or immunoconjugates according to the invention can be used either alone or in combination with other agents used in therapy. For example, an antibody or immunoconjugate of the invention may be co-administered with at least one additional therapeutic agent. In certain embodiments of the invention, the additional therapeutic agent is gemcitabine. In certain embodiments of the invention, the additional therapeutic agent is an anti-MOS16 antibody conjugated with a cytotoxic agent.

Така комбінована терапія, вказана вище, полягає в комбінованому застосуванні (де два або більше терапевтичних засобів включені в одну і ту ж або окремі композиції) і роздільному застосуванні, при цьому застосування антитіла або імунокон'югату за винаходом може мати місце до, одночасно з і/або після застосування додаткового терапевтичного засобу і/або ад'юванту. Антитіла або імунокон'юЮгтати за винаходом можуть також бути використані в комбінації із променевою терапією.Such combination therapy as indicated above consists of combined use (where two or more therapeutic agents are included in the same or separate compositions) and separate use, whereby the use of an antibody or immunoconjugate of the invention may occur before, simultaneously with, and /or after the use of an additional therapeutic agent and/or adjuvant. Antibodies or immunoconjugates of the invention may also be used in combination with radiation therapy.

Антитіло або імунокон'югат за винаходом (і будь-який додатковий терапевтичний засіб) можуть бути застосовані будь-яким придатним способом, включаючи парентеральний, внутрішньолегеневий і інтраназальний, і, по мірі необхідності у випадку локального лікування - що вводиться всередину уражених тканин спосіб застосування. Парентеральні інфузії включають внутрішньом'язове, внутрішньовенне, внутрішньоартеріальне, інтраперитоніальне або підшкірне введення. Дозування може здійснюватися будь-яким придатним способом, наприклад, за допомогою ін'єкцій, таких як внутрішньовенні або підшкірні ін'єкції, частково залежно від того, чи є застосування постійним або короткочасним. Різні схеми дозування, включаючи, крім іншого, одноразові або багаторазові застосування протягом різних часових періодів, болюсне введення і імпульсна інфузія розглянуті в цьому документі.The antibody or immunoconjugate according to the invention (and any additional therapeutic agent) can be applied by any suitable method, including parenteral, intrapulmonary and intranasal, and, as necessary in the case of local treatment - which is introduced into the affected tissues method of application. Parenteral infusions include intramuscular, intravenous, intraarterial, intraperitoneal, or subcutaneous administration. Dosage may be by any suitable method, for example, by injection, such as intravenous or subcutaneous injection, depending in part on whether the application is permanent or short-term. Various dosage regimens, including, but not limited to, single or multiple administrations over various time periods, bolus administration, and pulsed infusion are discussed herein.

Антитіла або імунокон'югати за винаходом утворять лікарську суміш, дозують і призначають способом відповідно до належної медичної практики. Факторами для розгляду в даному контексті включають певне порушення, що підлягає лікуванню, певний ссавець, що підлягає лікуванню, клінічний стан індивідуального пацієнта, причина порушення, місце доставки засобу, спосіб призначення, схема призначення і інші фактори, відомий медичним працівникам.Antibodies or immunoconjugates according to the invention will form a medicinal mixture, dosed and prescribed by a method in accordance with good medical practice. Factors to be considered in this context include the particular disorder to be treated, the particular mammal to be treated, the clinical condition of the individual patient, the cause of the disorder, the site of delivery of the agent, the method of administration, the regimen of administration, and other factors known to the medical practitioner.

Антитіло або імунокон'югат не обов'язково повинен бути, але в деяких випадках утворить суміш із одним або декількома засобами, в цей час, що використовуються для запобігання або бо лікуванню порушення, яке досліджується. Ефективна кількість таких інших засобів залежить від кількості антитіла або імунокон'югату, присутнього в композиції, типу порушення або лікування і інших факторів, обговореної вище. Вони звичайно використовуються в одних і тих же дозах і із застосуванням способів введення, як описано в цьому документі, або в кількості приблизно від 1 до 9995 доз, описаних в цьому документі, або в будь-якій дозі і будь-яким способом, які емпірично/клінічно визначають для цільового використання.The antibody or immunoconjugate does not necessarily have to be, but in some cases will form a mixture with one or more agents currently used to prevent or treat the disorder being investigated. The effective amount of such other agents depends on the amount of antibody or immunoconjugate present in the composition, the type of disorder or treatment, and other factors discussed above. They are typically used in the same doses and administration methods as described herein, or in amounts from about 1 to 9,995 doses described herein, or in any dose and by any method that is empirically /clinically determined for intended use.

Для профілактики або лікування захворювання відповідна доза антитіла або імунокон'югату за винаходом (при використанні окремо або в комбінації з одним або декількома іншими додатковими терапевтичними засобами) залежить від типу захворювання, що підлягає лікуванню, типу антитіла або імунокон'югату, тяжкості і протікання захворювання, чи призначають антитіло або імунокон'югат для профілактичних або терапевтичних цілей, попередньої терапії, анамнезу пацієнта і відповіді на антитіло або імунокон'югат, і розсуду лікуючого лікаря. Антитіло або імунокон'югат належним чином призначають пацієнту в один час або протягом курсів лікування. Залежно від типу і тяжкості захворювання приблизно від 1 мкг/кг до 15 мг/кг (наприклад, 0,1 мг/кг - 10 мг/кг) антитіла або імунокон'югату може бути початковою відповідною дозою для призначення пацієнту, або, наприклад, у вигляді одного або декількох окремих застосувань, або у вигляді безперервної інфузії. Одна стандартна щоденна доза може знаходитися в діапазоні приблизно від 1 мкг/кг до 100 мг/кг або більше, залежно від факторів, згаданих вище. Для повторних застосувань протягом декількох днів або більше тривало залежно від стану пацієнта, лікування як правило підтримують до настання необхідного пригнічення симптомів захворювання. Одна ілюстративна доза антитіла або імунокон'югату знаходиться в діапазоні приблизно від 0,05 мг/кг до приблизно 10 мг/кг. Таким чином, одна або декілька доз величиною приблизно 0,5 мг/кг, 2,0 мг/кг, 4,0 мг/кг або 10 мг/кг (або будь-яка їх комбінація) можуть бути призначені пацієнту. Такі дози можуть бути призначені періодично, наприклад, кожний тиждень або кожні три тижні (наприклад, таким чином, що пацієнт отримує приблизно від двох до приблизно двадцяти, або, наприклад, приблизно шість доз антитіла).For the prevention or treatment of a disease, the appropriate dose of an antibody or immunoconjugate according to the invention (when used alone or in combination with one or more other additional therapeutic agents) depends on the type of disease to be treated, the type of antibody or immunoconjugate, the severity and course of the disease , whether the antibody or immunoconjugate is prescribed for prophylactic or therapeutic purposes, previous therapy, the patient's history and response to the antibody or immunoconjugate, and the discretion of the treating physician. The antibody or immunoconjugate is appropriately administered to the patient at the same time or during courses of treatment. Depending on the type and severity of the disease, about 1 mcg/kg to 15 mg/kg (e.g., 0.1 mg/kg to 10 mg/kg) of the antibody or immunoconjugate may be an appropriate initial dose to administer to the patient, or, for example, in the form of one or more separate applications, or in the form of a continuous infusion. A single standard daily dose may range from about 1 mcg/kg to 100 mg/kg or more, depending on the factors mentioned above. For repeated applications for several days or longer depending on the patient's condition, the treatment is usually maintained until the necessary suppression of the symptoms of the disease occurs. One illustrative dose of antibody or immunoconjugate ranges from about 0.05 mg/kg to about 10 mg/kg. Thus, one or more doses of about 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg, or 10 mg/kg (or any combination thereof) may be administered to a patient. Such doses may be administered periodically, for example, every week or every three weeks (eg, such that the patient receives from about two to about twenty, or, for example, about six doses of the antibody).

Може бути призначена початкова більш висока навантажувальна доза із подальшим призначенням однієї або декількох більш низьких доз. Однак можуть бути придатні інші схеми дозування. Можна без великих зусиль здійснювати моніторинг ефективності цієї терапії стандартними методиками і способами аналізу.An initial higher loading dose may be prescribed followed by one or more lower doses. However, other dosage regimens may be suitable. It is possible to monitor the effectiveness of this therapy with standard techniques and methods of analysis without much effort.

Зо Зрозуміло, що будь-яка із вищезгаданих композицій або будь-який із терапевтичних способів можуть бути здійснені, використовуючи як імунокон'югат за винаходом, так і антитіло проти мезотеліну.It is understood that any of the above compositions or any of the therapeutic methods can be carried out using both the immunoconjugate of the invention and the antibody against mesothelin.

Н. Вироби промислового виробництваN. Products of industrial production

У іншому аспекті винаходу представлений виріб промислового виробництва, що містить матеріали, придатні для лікування, профілактики і/або діагностики порушень, описаних вище.In another aspect of the invention, a product of industrial production containing materials suitable for the treatment, prevention and/or diagnosis of the disorders described above is presented.

Виріб промислового виробництва містить контейнер і етикетку або вкладиш на контейнері або в одній упаковці із ним. Придатні контейнери включають, наприклад, пляшки, ампули, шприци, мішки для інфузійних розчинів. Контейнери можуть бути зроблені із різного матеріалу, такого як скло або пластик. Контейнер вміщує композицію, яка сама по собі або в комбінації з іншою композицією ефективна для лікування, профілактики і/або діагностики порушення і може мати стерильний доступ через порт (наприклад, контейнером може бути мішок для внутрішньовенного розчину або ампула, що має пробку, що піддається проколюванню голкою для підшкірних ін'єкцій). Принаймні однією активною речовиною в композиції є антитіло або імунокон'югат за винаходом. Етикетка або вкладиш вказують на те, що композиція використовується для лікування вибраного патологічного стану. Більше того виріб промислового виробництва може включати (а) перший контейнер із композицією, що міститься всередині, де композиція містить антитіло або імунокон'югат за винаходом, і (Б) другий контейнер із композицією, що міститься всередині, де композиція містить додатковий цитотоксичний або навпаки терапевтичний засіб. Виріб промислового виробництва в цьому варіанті здійснення винаходу може додатково включати вкладиш, вказуючий на те, що композиції можуть бути використані для лікування певного патологічного стану. Альтернативно або додатково, виріб промислового виробництва може додатково включати другий (або третій) контейнер, що містить фармацевтично прийнятний буфер, такий як бактеріостатична вода для ін'єкцій (ВУУРІ), фосфатно-сольовий буферний розчин, розчин Рінгера або розчин декстрози.A manufactured product contains a container and a label or insert on the container or in the same package with it. Suitable containers include, for example, bottles, ampoules, syringes, bags for infusion solutions. Containers can be made of different materials such as glass or plastic. The container contains a composition that alone or in combination with another composition is effective for the treatment, prevention, and/or diagnosis of the disorder and may have sterile access through a port (eg, the container may be an IV bag or ampoule having a tamper-evident stopper puncture with a needle for subcutaneous injections). At least one active substance in the composition is an antibody or immunoconjugate according to the invention. The label or insert indicates that the composition is used to treat a selected medical condition. Moreover, the article of manufacture may include (a) a first container with a composition contained within, wherein the composition contains an antibody or immunoconjugate of the invention, and (B) a second container with a composition contained within, wherein the composition contains an additional cytotoxic or vice versa therapeutic agent. The product of industrial production in this variant of the implementation of the invention may additionally include an insert indicating that the compositions can be used to treat a certain pathological condition. Alternatively or additionally, the product of industrial production may additionally include a second (or third) container containing a pharmaceutically acceptable buffer, such as bacteriostatic water for injection (WUI), phosphate-buffered saline, Ringer's solution, or dextrose solution.

Воно може додатково включати інші матеріали, необхідні з комерційної і споживчої точки зору, включаючи інші буфери, розчинники, фільтри, голки і шприци.It may additionally include other materials required from a commercial and consumer point of view, including other buffers, solvents, filters, needles and syringes.

І. Депонування біологічного матеріалуI. Deposit of biological material

Наведений нижче біологічний матеріал був відданий на зберігання в Американську колекцію типових культур, 10801 Опімегейу Вошемага, Мапаззав, МА 20110-2209, ОБА (АТО):The following biological material has been deposited with the American Type Culture Collection, 10801 Opimegeiu Voshemaga, Mapazzaw, MA 20110-2209, OBA (ATO):

Позначення гібридоми Мо АТОС Дата реєстраціїDesignation of Mo ATOS hybridoma Date of registration

МРЕ:3542 (1903.1.2) РТА-11464 9 листопада 2010 р.MRE:3542 (1903.1.2) PTA-11464 November 9, 2010

Віддана на зберігання гібридома, згадана вище, продукує антитіло 1923, на яку посилаються в цьому документі.The deposited hybridoma mentioned above produces antibody 1923, which is referred to in this document.

Це депонування було зроблене відповідно до положень Будапештського договору про міжнародне визнання депонування мікроорганізмів для цілей патентної процедури і його нормативним документам (Будапештського договору). Це гарантує підтримку життєздатної культури депонованого зразка протягом 30 років із моменту дати депонування і принаймні п'яти (5) років після самого останнього звертання за наданням депонованого зразка. Цей депонований зразок стане доступним в АТСС згідно з умовами Будапештського договору і предметом угоди між між Сепепіесі, Іпс. ії АТСС, яке гарантує, що всі обмеження, накладені депозитором, на доступність депонованого матеріалу необмеженому колу осіб будуть остаточно зняті після видачі відповідного патенту США, гарантує постійну і необмежену доступність потомства клітинної культури необмеженому колу осіб після видачі відповідного патенту США або після публікації будь-якої патентної заявки США або іншої країни, залежно від того, що станеться раніше, і гарантує доступність потомства клітинної культури особі, визначеній комісаром США по патентах і торгових знаках, для діставання прав на нього відповідно до 35 О.5.С 5 122 і правилами для комісарів згідно з ним (включаючи 37 СЕК 5 1.14 з конкретним посиланням на 886 ОС 638).This deposit was made in accordance with the provisions of the Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the Purposes of Patent Procedure and its Regulations (Budapest Treaty). This ensures that a viable culture of the deposited specimen is maintained for 30 years from the date of deposit and at least five (5) years after the most recent request for the deposited specimen. This deposited sample will become available in the ATCC under the terms of the Budapest Treaty and the subject of an agreement between Sepepiesi, Ips. ii of the ATCC, which guarantees that all restrictions imposed by the depositor on the availability of the deposited material to an unlimited number of persons will be finally removed after the issuance of the corresponding US patent, guarantees the continuous and unlimited availability of the cell culture progeny to an unlimited number of persons after the issuance of the corresponding US patent or after the publication of any of which US or other country patent application, whichever comes first, and guarantees the availability of the cell culture progeny to a person designated by the US Patent and Trademark Commissioner to obtain rights thereto in accordance with 35 O.5.C 5 122 and regulations for commissioners thereunder (including 37 SEC 5 1.14 with specific reference to 886 OS 638).

І. ПрикладиI. Examples

Нижче представлені приклади способів і композицій за винаходом. Відомо, що різні інші варіанти здійснення винаходу можуть бути використані на практиці, беручи до уваги загальний опис, наведений вище.Examples of methods and compositions according to the invention are presented below. It is known that various other variants of the invention can be used in practice, taking into account the general description given above.

А. Експресія гена мезотеліну людиниA. Human mesothelin gene expression

Експресія гена мезотеліну людини була проаналізована, використовуючи відповідну базу даних, що містить інформацію про експресію генів (зепеЕхрге55Ф), Зепе І! одіс іпс., сзайпегериго,Human mesothelin gene expression was analyzed using the appropriate gene expression database (zepeEhrge55F), Zepe I! odyssey ips., szaipegerigo,

МО). Графічний аналіз бази даних СепеЕхрге55Ф був виконаний, використовуючи пристрій візуалізації профілю мікроматриці. Фігура 2 є графічним представленням даних по експресії гена мезотеліну людини в різних тканинах, які перераховані зліва. Шкала у верхній частині графіка означає рівні експресії гена на основі інтенсивності сигналу гібридизації. Точки з'являються як вище, так і нижче за лінію, прилеглу до кожної перерахованої тканини. Точки, щоMO). Graphical analysis of the SepeEhrge55F database was performed using a microarray profile visualization device. Figure 2 is a graphical representation of human mesothelin gene expression data in the various tissues listed on the left. The scale at the top of the graph represents gene expression levels based on hybridization signal intensity. Points appear both above and below the line adjacent to each tissue listed. Points that

Зо з'являються вище за лінію, представляють експресію гена в нормальній тканині, і точки, що з'являються нижче лінії, представляють експресію гена в пухлині і ураженій тканині. Фігура 2 демонструє підвищену експресію гена мезотеліну в певній пухлині або уражених тканинах відносно відповідних для них норм. Зокрема, мезотелін демонструє значну підвищену експресію в пухлинах яєчника, підшлункової залози, ендометрія і легені, включаючи аденокарциному і мезотеліому. Експресія мезотеліну людини практично відсутня в нормальних тканинах, за винятком нормального мезотелію (очеревини, перикарда і плеври).Dots appearing above the line represent gene expression in normal tissue, and dots appearing below the line represent gene expression in tumor and diseased tissue. Figure 2 shows increased expression of the mesothelin gene in a particular tumor or affected tissue relative to their respective norms. In particular, mesothelin shows significant increased expression in ovarian, pancreatic, endometrial, and lung tumors, including adenocarcinoma and mesothelioma. The expression of human mesothelin is almost absent in normal tissues, with the exception of normal mesothelium (peritoneum, pericardium, and pleura).

В. Синтез антитілаB. Antibody synthesis

Моноклональні антитіла проти мезотеліну людини були отримані, використовуючи наступні методики. Або МРЕ:мезотелін людини (амінокислоти 34-580 5ЕО ІЮО МО:42), або мезотелін людини (5ЕО ІЮО МО:43, відповідна амінокислотам 296-580 5ЕО ІЮО МО:42), кожний приєднаний до М-кінцевому ипігуте Ні (НО)-іад, був експресований в Е.соїї 58Е3 і очищений на колонці Мі-Monoclonal antibodies against human mesothelin were obtained using the following techniques. Either MPE:human mesothelin (amino acids 34-580 5EO IUO MO:42) or human mesothelin (5EO IUO MO:43, corresponding to amino acids 296-580 5EO IUO MO:42), each attached to the M-terminal ipigute Ni (HO) -iad, was expressed in E. soybean 58E3 and purified on a Mi column

МТА (Сіадеп) з подальшою гель-фільтрацією на колонці Зирегаех 200 в 20 мМ МЕЗ рН 6,0, 6М сапнсі, як описано раніше (Кігспрпоїег еї аіІ., 2003) і подальшим діалізом в 1 мМ НСІ для зберігання при -80С.MTA (Siadep) followed by gel filtration on a Zyregaech 200 column in 20 mM MEZ pH 6.0, 6M sodium chloride as previously described (Kigsprpoieg et al., 2003) and further dialysis in 1 mM HCl for storage at -80C.

П'ять мишей ВаїБ/с (Спагіє5 Кімег І абогафогіев5, Ноїетег, СА) були гіперімунізовані шість разів 2 мкг суміші двох антигенів в ад'юванті Кібі (Кірі Іттипоспет Кезеагсі, Іпс., Натійоп, МО). Дві самі кращі миші були відібрані на основі високих титрів антитіл за допомогою прямого ЕГІ5А, і їхFive VaiB/s mice (Spagie5 Kimeg I abogafogiev5, Noieteg, CA) were hyperimmunized six times with 2 μg of a mixture of the two antigens in Kibi adjuvant (Kiri Ittipospet Kezeagsi, Ips., Natiop, MO). The two best mice were selected based on high antibody titers by direct EHI5A, and their

В-клітини були пуловані і злиті з мишачими мієломними клітинами. (Х63.А98.653; Американська колекція типових культур, Мапабхбза5х, МА), використовуючи модифікований протокол, аналогічний раніше описаному (Коепіег апа Міїв(еіп, 1975; Нопдо еї аї., 1995). Через 10-12 днів були зібрані супернатанти від гібридом і проведений скринінг на предмет зв'язування з обома антигенами (окремо), використовуючи прямий ЕГІЗБА. Для перевірки пізнавання правильно укладеного, глікозилованого, який експресується на клітинній поверхні мезотеліну, позитивні вB cells were pooled and fused with murine myeloma cells. (X63.A98.653; American Type Culture Collection, Mapabhbza5x, MA), using a modified protocol similar to that previously described (Koepieg apa Miiv(eip, 1975; Nopdo eyi ai., 1995). After 10-12 days, supernatants were collected from hybridoma and screened for binding to both antigens (separately) using direct EHIZBA.To verify recognition of correctly folded, glycosylated, cell-surface-expressed mesothelin, positive in

ЕГІЗА супернатанти були додатково піддані скринінгу способом ГАС5 на трансфікованих 90- мезотеліном клітинах 5МТ2 (90 являє собою М-кінцеву епітопну мітку, що використовується як позитивний контроль з анти-д90О0 антитілами). Позитивні гібридоми були субклоновані двічі способом граничного розведення, і одинадцять були розмножати, і антитіла були очищені способом хроматографії з протеїном А.EHIZA supernatants were additionally screened by the GAS5 method on 90-mesothelin-transfected 5MT2 cells (90 is an M-terminal epitope tag used as a positive control with anti-d90O0 antibodies). Positive hybridomas were subcloned twice by limiting dilution, and eleven were propagated, and antibodies were purified by protein A chromatography.

На фігурі З представлені виділені моноклональні антитіла нарівні з певними властивостями, описаними більш детально нижче.Figure C shows selected monoclonal antibodies along with certain properties described in more detail below.

С. Гуманізація 709 і 22А10S. Humanization 709 and 22A10

Моноклональні антитіла 709 ї 22А10 були гуманізовані, як описано нижче. Нумерація амінокислотних залишків відповідала КарБбаї єї аїЇ., Зедоепсез ої Ргоїеїп5 ої Іттипої|одісаї Іпіегеві,Monoclonal antibodies 709 and 22A10 were humanized as described below. The numbering of amino acid residues corresponded to KarBbaya and AiYi.

БП Еа., Рибіїс Неайй 5егмісе, Маїйопаї! Іпзійшез ої Неайй, Веїйезаа, МО, 1991. 1. Гуманізація 709 а) Клонування варіабельних доменів мишачого 709BP Ea., Rybiis Neay 5egmise, Maiiopai! Ипзишез ой Найй, Veijezaa, MO, 1991. 1. Humanization of 709 a) Cloning of variable domains of mouse 709

Сумарна РНК була виділена із клітин гібридоми, які продукують мишаче 709, використовуючи стандартні способи. Варіабельні легкі (МІ) і варіабельні важкі (УН) домени були ампліфіковані, використовуючи ЗТ-ПЛР із вирожденими праймерами до важкого і легкого ланцюгів. Прямі праймери були специфічні для М-кінцевої амінокислотної послідовності ділянокTotal RNA was isolated from mouse 709-producing hybridoma cells using standard methods. The variable light (MI) and variable heavy (UN) domains were amplified using RT-PCR with degenerate primers to the heavy and light chains. Forward primers were specific for the M-terminal amino acid sequence of the sites

МІ. ї МН. Відповідно, зворотні праймери / С їі НС були сконструйовані для відпалу із ділянкою в константному легкому (СІ) і константному важкому домені 1 (СНІ), які високо консервативні серед видів. Полінуклеотидна послідовність вставок була визначена, використовуючи звичайні способи секвенування. Амінокислотні послідовності 709 МІ ї МН показані на фігурах 4 і 5, відповідно. р) Прямі пересадки гіперваріабельної ділянки в акцепторну, консенсусну каркасну ділянку людиниE. and MN. Accordingly, reverse primers / C and NS were designed to anneal to a region in the constant light (CI) and constant heavy domain 1 (HDI), which are highly conserved among species. The polynucleotide sequence of the inserts was determined using conventional sequencing methods. The amino acid sequences of 709 MI and MH are shown in Figures 4 and 5, respectively. r) Direct transplants of a hypervariable site into an accepting, consensual skeletal site of a person

Варіанти, сконструйовані при гуманізації 709, були проаналізовані у вигляді (ДО. Домени МІ. і МН із мишачого 709 були суміщені із консенсусними послідовностями МІ. каппа І людини (Мі кі) людини і підгрупи І МН (МНії) людини. Гіперваріабельні ділянки із мишачого 709 (ти709) антитіла були вставлені в акцепторні каркасні ділянки Мі кі і МНадата з утворенням 709м1.Variants constructed by humanizing 709 were analyzed as (DO. The MI and MN domains from murine 709 were aligned with the consensus sequences of human MI kappa I (Mi k) and human MN subgroup I (MNii). Hypervariable regions from murine 709 (ti709) antibodies were inserted into the acceptor framework sites of Mickey and MNadata to form 709m1.

Акцепторний МН каркасна ділянка УНата відрізняється від МНії по З позиціях: К/1А, М7ЗТ і Г7вА (Сапег еї аї., Ргос. Май. Асайд. Зсі. ОБА 89:4285 (1992)). ІЗ домену ти709 МІ в Мі.кі були пересаджені позиції 24-34 (І 1), 50-56 (І 2) і 89-97 (І 3). Із домену ти709 МН були пересаджені вThe acceptor MN framework site of UNat differs from MNia in three positions: K/1A, M7ZT and G7vA (Sapeg ei ai., Rgos. May. Asaid. Zsi. OBA 89:4285 (1992)). Positions 24-34 (I 1), 50-56 (I 2) and 89-97 (I 3) were transplanted from the ti709 MI domain to Mi.ki. From the ty709 MN domain, they were transplanted into

МНата позиції 26-35 (НІ), 49-65 (Н2) і 95-102 (НЗ) (Фігури 1 і 2). Ці визначення СОК включали позиції, що визначаються гіперваріабельністю їх послідовності (Ми, Т.Т. 5 Кабаї Е.А. (1970), їх структурним розташуванням (Сіоїпіа, С. 8. І е5К, і їх залученням у взаємодію антигену-антитілаMNata positions 26-35 (NI), 49-65 (Н2) and 95-102 (НЗ) (Figures 1 and 2). These definitions of SOC included the positions determined by the hypervariability of their sequence (My, T.T. 5 Kabai E.A. (1970), their structural arrangement (Sioipia, S. 8. I e5K), and their involvement in the antigen-antibody interaction

Коо) (МасСаїЇшт еї а). У. Мої. Віої. 262:732-745 (1996)). 709.41 прямого пересаджування був отриманий шляхом мутагенезу по Кункелю, використовуючи окремий олігонуклеотид для кожної "гіперваріабельної області. Три фосфорилованих олігонуклеотиди або для важкого ланцюга, або для легкого ланцюга були додані до 571 нг матриці КипКе! в 50 мМ Тті5 рН 7,5, 10 мМ Мосі» в кінцевому об'ємі 40 мкл.Koo) (MasSaiYisht ei a). U. Moi. Vioi 262:732-745 (1996)). 709.41 direct grafting was generated by Kunkel mutagenesis using a separate oligonucleotide for each "hypervariable region. Three phosphorylated oligonucleotides for either the heavy chain or the light chain were added to 571 ng of KypKe! template in 50 mM Tti5 pH 7.5, 10 mM Mosi" in the final volume of 40 μl.

Суміш випалювали при 90 "С протягом 2 хв., 50 "С протягом 5 хв. і потім охолоджували на льоду. До 10 мкл випаленої матриці були додані 0,5 мкл 100 мМ АТФ, 0,5 мкл 25 мМ дНтТФ (25The mixture was fired at 90 "C for 2 min., 50 "C for 5 min. and then cooled on ice. 0.5 μl of 100 mM ATP, 0.5 μl of 25 mM dHtTF (25

ММ кожний із дАТФ, дЦТФ, дТФ і дТТФ), 1 мкл 100 мм ДТТ, 1 мкл Т0Х ТМ буфера (0,5 М Ттгі5 рН 7,5, 01 М Мас»), 80 Од. лігази ТА і 4 Од. Т7-полімерази із утворенням кінцевого об'єму, який дорівнює 13,6 мкл, із інкубацією протягом 2 годин при кімнатній температурі. 10 мкл лігованого продукту було потім трансформовано в Хі 1-сині клітини (Згаїадепе). Придатні клони були ідентифіковані секвенуванням ДНК і експресовані у вигляді дО. с) Оцінка варіантівMM each of dATP, dCTP, dTF and dTTP), 1 μl of 100 mm DTT, 1 μl of T0X TM buffer (0.5 M Ttgi5 pH 7.5, 01 M Mass"), 80 Units. ligase TA and 4 Units. T7-polymerase with the formation of a final volume equal to 13.6 μl, with incubation for 2 hours at room temperature. 10 μl of the ligated product was then transformed into Xi 1-blue cells (Zgaiadepe). Suitable clones were identified by DNA sequencing and expressed as dO. c) Evaluation of options

Варіанти 709 були експресовані у вигляді | шляхом тимчасової трансфекції СНО. Ід був очищений шляхом афінної хроматографії із протеїном о. Афінність кожного варіанта 709 ІдО для мезотеліну людини була визначена способом поверхневого плазмонного резонансу, використовуючи ВіАсоге"М-2000. На чипах Віасоге дослідницького класу СМ5 були іммобілізовані приблизно 110 КО рекомбінантного мезотеліну людини, отриманого із Е. соїї, використовуючи набір реактивів Віасоге для з'єднання амінів. Серійні 2-кратні розведення кожного варіанта 709 (від 0,488 до 1000 нМ в РВ5, що містить 0,05 95 Гуееп-20) було ін'єктовані із швидкістю потоку 30 мкл/хв. Кожний зразок був проаналізований із 5-хвилинною асоціацією іVariants 709 were expressed as | by transient transfection of CHO. Id was purified by affinity chromatography with protein o. The affinity of each 709 IdO variant for human mesothelin was determined by surface plasmon resonance using the Viasoge M-2000. Approximately 110 KO of recombinant human mesothelin derived from E. soii was immobilized on Viasoge research grade CM5 chips using the Viasoge reagent kit for amine coupling Serial 2-fold dilutions of each variant 709 (from 0.488 to 1000 nM in PB5 containing 0.05 95 Gueep-20) were injected at a flow rate of 30 μL/min Each sample was analyzed with a 5-min association and

З,5-хвилинною дисоціацією. Після кожної ін'єкції чип був відновлений, використовуючи 10 мМ гліцин рН 1,7. Відповідь зв'язування була відкоректована шляхом віднімання КИ із проточної кювети з використанням, яке не стосується даного специфічного зв'язування Ідс, іммобілізованого з аналогічною щільністю. Модель Ленгмюра 1:1 одночасної обробки Коп і Кок була використана для кінетичного аналізу. а) РезультатиWith a 5-minute dissociation. After each injection, the chip was reconstituted using 10 mM glycine pH 1.7. The binding response was corrected by subtracting the CI from the flow cell using non-specific binding Ids immobilized at a similar density. A 1:1 Langmuir model of co-treatment of Cope and Coke was used for kinetic analysis. a) Results

Людська акцепторна каркасна ділянка, яка використовується для гуманізації 709, основана на МІ каппа людини | консенсусному (Мі кі) і акцепторному МН каркасної ділянки МНата, яка відрізняється від консенсусного УН людини підгрупи ЇЇ (МНімї) по З позиціях: К71А, М7ЗТ і 1 78А 60 (Сапег єї аї., Ргос. Маї!. Асад. сі. ОБА 89:4285 (1992)). Домени МІ ї МН мишачого 709 були суміщені із доменами Мік і МНії людини; гіперваріабельні ділянки були ідентифіковані і пересаджені в акцепторну каркасну ділянку людини із утворенням 709.м1 (Фігури 4 і 5). Як Ід, афінність 709.м1 падала в -2 рази відносно ти709 (відформатованого як химерне 709), що було визначено способом Віасоге (фігура 6).The human acceptor framework site used to humanize 709 is based on human MI kappa | consensus (Miki) and acceptor MN of the frame section of the MNat, which differs from the consensus UN of a person of the EII subgroup (MNima) in 3 positions: K71A, M7ZT and 1 78A 60 (Sapeg yei ai., Rgos. Mai!. Asad. si. OBA 89:4285 (1992)). The MI and MN domains of mouse 709 were combined with the Myc and MNii domains of humans; hypervariable sites were identified and transplanted into a human acceptor framework site to form 709.m1 (Figures 4 and 5). As Id, the affinity of 709.m1 fell by -2 times relative to ti709 (formatted as chimeric 709), which was determined by the Viasogue method (Figure 6).

Для поліпшення афінності зв'язування 709.м1 позиції 36 і 87 в легкому ланцюгу і позиції 48, 67, 69, 71, 73, 75, 76, 78 і 80 у важкому ланцюгу були замінені залишками, виявленими в цих позиціях в ти709. Комбінації цих змінених легких і важких ланцюгів з ланцюгами із 709.м1 були трансфіковані в СНО, експресовані у вигляді до і очищені, і оцінені на предмет зв'язування з мезотеліном людини способом Віасоге (фігура 6).To improve the binding affinity of 709.m1, positions 36 and 87 in the light chain and positions 48, 67, 69, 71, 73, 75, 76, 78 and 80 in the heavy chain were replaced by residues found in these positions in ti709. Combinations of these altered light and heavy chains with chains from 709.m1 were transfected into CHO, expressed as k and purified, and assessed for binding to human mesothelin by the Viasogue method (Figure 6).

Варіанти 709.м2 і 709.м3, кожний із яких містить змінений легкий ланцюг, мають афінність, порівнянну із химерним 709. Варіант 709.м3 відрізняє від 709.м1 по 2 позиціях в легкому ланцюгу. Ніякої зміни окремо не було достатньо для поліпшення зв'язування, порівнянного з таким ти709 (фігура 6).Variants 709.m2 and 709.m3, each containing an altered light chain, have affinities comparable to chimeric 709. Variant 709.m3 differs from 709.m1 at 2 positions in the light chain. Neither change alone was sufficient to improve binding comparable to that of ti709 (Figure 6).

Висновки по змінах для гуманізованого 709.3: 6 мишачих 709 СОК (визначені як позиції 24- 34 (11), 50-56 (12) і 89-97 (13), 26-35 (НІ), 49-65 (Н2) ії 93-102 (НЗ)) були пересаджені в консенсусні акцепторні домени Мі кі і МНаті людини. Два додаткових амінокислотних залишки каркасної ділянки, 36 і 87 легких ланцюги, були замінені назад на мишачі амінокислотні залишки, приводячи до утворення 709.3 із зіставною афінністю ти709. 2. Гуманізація 22А10 а) Клонування варіабельних доменів мишачого 22А10Conclusions on changes for humanized 709.3: 6 murine 709 SOC (defined as positions 24-34 (11), 50-56 (12) and 89-97 (13), 26-35 (NI), 49-65 (H2) and 93-102 (NZ)) were transplanted into the consensus acceptor domains of human Myki and MNati. Two additional amino acid residues of the framework region, light chains 36 and 87, were swapped back to murine amino acid residues, resulting in 709.3 with comparable affinity to 709. 2. Humanization of 22A10 a) Cloning of variable domains of murine 22A10

Сумарна РНК була виділена із клітин гібридоми, продукуючих мишаче 22А10, використовуючи стандартні способи. Варіабельні легкі (МІ) і варіабельні важкі (МН) домени були ампліфіковані, використовуючи ЗТ-ПЛР із виродженими праймерами до важкого ланцюга (НС) і легкого ланцюга (С). Прямі праймери були специфічні для М-кінцевої амінокислотної послідовності ділянок МІ. ії МН. Відповідно, зворотні праймери І С і НС були сконструйовані для відпалу із ділянкою в константному легкому (СІ) і константному важкому домені 1 (СНІ), які високо консервативні серед видів. Полінуклеотидна послідовність вставок була визначена, використовуючи звичайні способи секвенування. Амінокислотні послідовності 22А10 МІ ї МН показані на фігурах 7 і 8, відповідно.Total RNA was isolated from hybridoma cells producing murine 22A10 using standard methods. The variable light (MI) and variable heavy (MH) domains were amplified using RT-PCR with degenerate primers to the heavy chain (HC) and light chain (C). Forward primers were specific for the M-terminal amino acid sequence of MI sites. of MN. Accordingly, reverse primers IC and HC were designed to anneal to a region in the constant light (CI) and constant heavy domain 1 (CHD), which are highly conserved among species. The polynucleotide sequence of the inserts was determined using conventional sequencing methods. The amino acid sequences of 22A10 MI and MH are shown in Figures 7 and 8, respectively.

Зо Б) Прямі пересадки гіперваріабельної ділянки в акцепторну, консенсусну каркасну ділянку людиниFrom B) Direct transplantation of a hypervariable site into an acceptor, consensus frame site of a person

Варіанти, сконструйовані при гуманізації 22А10, були проаналізовані у вигляді до і відображені моновалентно у вигляді аб на фазі. Фагміда, яка використовується для даної роботи, була моновалентним дисплейним вектором ЕРар-93, який складається із двох відкритих рамок зчитування під контролем одного промотору рпоА. Перша відкрита рамка зчитування складається із сигнальної послідовності 51ІЇ, з'єднаної із доменами МІ і СНІ акцепторного легкого ланцюга, і друга складається із сигнальної послідовності 5ЦІЇ, з'єднаної із доменами МІ іVariants constructed in the humanization of 22A10 were analyzed as do and displayed monovalently as ab on the phase. The phagemid used for this work was the monovalent display vector EPar-93, which consists of two open reading frames under the control of a single rpoA promoter. The first open reading frame consists of the 51II signal sequence connected to the MI and SNI domains of the acceptor light chain, and the second consists of the 5CII signal sequence connected to the MI and SNI domains

СНІ акцепторного важкого ланцюга, за якими слідує мінорний фаговий білок оболонки Р3З.SNIs of the acceptor heavy chain followed by the minor phage coat protein P3Z.

Домени МІ їі МН із мишачого 22А10 були суміщені із консенсусними послідовностями Мі. каппа І людини (Мік) людини і підгрупи Ш МН (МНії) людини. Гіперваріабельні ділянки із мишачого 22А10 (ти22А10) антитіла були вставлені в акцепторні каркасні ділянки Мі кі Її МНі! з утворенням 22А10 трансплантата. Із домену МІ. ти22А10 в Міккі були пересаджені позиції 24-34 (11), 50-56 (12) і 89-97 (І 3). Із домену МН ти22А10 були пересаджені в МНі позиції 26-35 (НІ), 49-65 (Н2) і 95-102 (НЗ) (Фігури 7 і 8). Ці визначення СОК включали позиції, що визначаються гіперваріабельністю їх послідовності (УМи, Т.Т. й Караї Е.А. (1970), їх структурним розташуванням (Сіоїпіа, С. 8. І е5К, і їх залученням у взаємодію антигена-антитіла (МасСайПит еї а. 9. Мої. Вісі. 262:732-745 (1996)). 22А10 трансплантат був отриманий шляхом мутагенезу за Кункелем, використовуючи окремий олігонуклеотид для кожної гіперваріабельної області Три фосфориловані олігонуклеотиди або для важкого ланцюга, або для легкого ланцюга були додані до 571 нг матриці Кипкеї в 50 мМ Тті5 рН 7,5, 10 мМ Масі?» в кінцевому об'ємі 40 мкл. Суміш випалювали при 90 С протягом 2 хв., 50 "С протягом 5 хв. і потім охолоджували на льоду. До 10 мкл випаленої матриці були додані 0,5 мкл 100 мМ АТФ, 0,5 мкл 25 мМ днтФ (25 мМ кожний із дДАТФ, дЦІФ, дГТФ і дТТФ), 1 мкл 100 мМ ДТТ, 1 мкл 10Х ТМ буфери (0,5 М Тті5 рН 7,5,0,1 МThe MI and MN domains from murine 22A10 were aligned with consensus Mi sequences. kappa I of man (Mik) of man and subgroup of Sh MN (MNii) of man. Hypervariable regions from the murine 22A10 (ty22A10) antibody were inserted into the acceptor framework regions of Mi ki Her MNi! with the formation of a 22A10 graft. From the MI domain. ty22A10 positions 24-34 (11), 50-56 (12) and 89-97 (I 3) were transplanted to Mickey. Positions 26-35 (NI), 49-65 (H2) and 95-102 (НЖ) were transplanted from the МН domain of ty22A10 into МН (Figures 7 and 8). These definitions of SOC included positions determined by the hypervariability of their sequence (UMy, T.T. and Karai E.A. (1970), their structural arrangement (Sioipia, S. 8. I e5K), and their involvement in the antigen-antibody interaction ( Mass. Phyt. 9. Moi. Visi. 262:732-745 (1996)). The 22A10 graft was prepared by Kunkel mutagenesis using a separate oligonucleotide for each hypervariable region. Three phosphorylated oligonucleotides for either the heavy chain or the light chain were added to 571 ng of Kypkei's matrix in 50 mM Tti5 pH 7.5, 10 mM Masi? in a final volume of 40 μl. The mixture was fired at 90 °C for 2 min., 50 °C for 5 min. and then cooled on ice. To 10 μl of the burned matrix were added 0.5 μl of 100 mM ATP, 0.5 μl of 25 mM dntF (25 mM each of dDATP, dCIF, dGTP, and dTTP), 1 μl of 100 mM DTT, 1 μl of 10X TM buffers (0, 5 M Tti5 pH 7.5, 0.1 M

Масіг), 80 Од. лігази ТА і 4 Од. Т7-полімерази з утворенням кінцевого об'єму, який дорівнює 13,6 мкл, із інкубацією протягом 2 годин при кімнатній температурі. 10 мкл лігованого продукту було потім трансформовано в Хі 1-сині клітини (Згаїадепе). Придатні клони були ідентифіковані секвенуванням ДНК і експресовані у вигляді дз. с) Помірна рандомізація гіперваріабельних ділянокMasig), 80 Units. ligase TA and 4 Units. T7-polymerase with the formation of a final volume equal to 13.6 μl, with incubation for 2 hours at room temperature. 10 μl of the ligated product was then transformed into Xi 1-blue cells (Zgaiadepe). Suitable clones were identified by DNA sequencing and expressed as dz. c) Moderate randomization of hypervariable plots

Дозрівання афінності трансплантата 22А10 здійснювали, використовуючи стратегію помірної рандомізації. Варіабельність послідовності була внесена окремо в кожну гіперваріабельну ділянку таким чином, що перевагу на користь мишачої послідовності гіперваріабельної ділянки підтримували, використовуючи стратегію олігонуклеотидного синтезу із пошкодженнями (саїор еї аі,, У Мей Спет 37:1233-51 (1994)). Для кожної диверсифікованої позиції кодон, що кодує амінокислоту дикого типу, ушкоджується сумішшю 70-10-10-140 нуклеотидів, приводячи в середньому до 50 процентів мутацій в кожній позиції. Варіабельність послідовності була внесена в гіперваріабельні ділянки 22А10-трансплантат, використовуючи мутагенез Кункеля з утворенням шести в легкому ступені рандомізованих фагових бібліотек, які були відсортовані окремо. Було зроблено шість бібліотек, кожна із яких містила одну рандомізовану в легкому ступені гіперваріабельну ділянку. а) Отримання фагових бібліотек22A10 graft affinity maturation was performed using a moderate randomization strategy. Sequence variability was introduced individually into each hypervariable region such that a preference for the murine sequence of the hypervariable region was maintained using a damage-prone oligonucleotide synthesis strategy. For each diversified position, the codon encoding the wild-type amino acid is damaged by a mixture of 70-10-10-140 nucleotides, resulting in an average of 50 percent mutations at each position. Sequence variability was introduced into hypervariable regions of 22A10 grafts using Kunkel mutagenesis to generate six mildly randomized phage libraries that were sorted separately. Six libraries were made, each containing one randomized mildly hypervariable site. a) Obtaining phage libraries

Олігонуклеотиди, сконструйовані для забезпечення різноманітності кожній гіперваріабельній ділянці, були фосфориловані окремо в 20 мкл реакційній суміші, що містить 660 нг олігонуклеотиду, 50 мМ Тіз рН 7,5, 10 мМ МосСіІ», 1 ММ АТФ, 20 мМ ДТ і 5 Од. полінуклеотидкінази, протягом 1 години при 37 "С.Oligonucleotides designed to provide diversity to each hypervariable region were phosphorylated separately in a 20 μl reaction mixture containing 660 ng of oligonucleotide, 50 mM Tiz pH 7.5, 10 mM MoSiI, 1 mM ATP, 20 mM DT, and 5 U. polynucleotide kinase, for 1 hour at 37 "С.

Для кожної бібліотеки, 2 мкл фосфорилованого олігонуклеотиду було додано до 300 нг матриці Кункеля в 50 мМ Тті5 рН 7,5, 10 мМ Маосі» в кінцевому об'ємі 10 мкл. Відпал суміші проводили при 90 "С протягом 2 хв., 50 "С протягом 5 хв. із подальшим охолоджуванням на льоду. До матриці після відпалу додавали 0,5 мкл 10 мМ АТФ, 0,5 мкл 10 мМ днтФ (10 мМFor each library, 2 μl of phosphorylated oligonucleotide was added to 300 ng of Kunkel's matrix in 50 mM Tti5 pH 7.5, 10 mM Maosi" in a final volume of 10 μl. Annealing of the mixture was carried out at 90 "C for 2 min., 50 "C for 5 min. followed by cooling on ice. After annealing, 0.5 μl of 10 mM ATP, 0.5 μl of 10 mM dntF (10 mM

ДАТФ, дЦТФ, дГТФ і дТТФ кожний), 1 мкл 100 мМ ДТТ, 1 мкл 10х ТМ-буфера (0,5 М Тті5 рН 7,5, 01 М Мас»), 80 Од. Т4-лігази і 4 Од. Т7-полімерази в кінцевому об'ємі 20 мкл протягом 2 годин при кімнатній температурі. Потім кожним лігованим продуктом були трансформовані Хі 1- блакитні клітини, що культивуються в 0,5 мл 2УТ, що містить 5 мкг/мл тетрацикліну і М13/КО7 хелперний фаг (МОЇ 10), протягом 2 годин при 37 "С і потім пуловані і перенесені в 500 мл 2УТ, що містить 50 мкг/мл карбенациліну і культивовані 16 годин при 37 "С. е) Селекція фагівDATF, dCTF, dGTF and dTTF each), 1 μl of 100 mM DTT, 1 μl of 10x TM-buffer (0.5 M Tti5 pH 7.5, 01 M Mass"), 80 Units. T4-ligase and 4 Units. T7-polymerase in a final volume of 20 μl for 2 hours at room temperature. Then each ligated product was transformed into Xi 1 blue cells cultured in 0.5 ml of 2UT containing 5 μg/ml of tetracycline and M13/KO7 helper phage (MY 10) for 2 hours at 37 "С and then pooled and transferred to 500 ml of 2UT containing 50 μg/ml carbenacilin and cultured for 16 hours at 37 "С. f) Selection of phages

Для твердофазної селекції фагів 293 мезотеліну людського походження або із яванської макаки було іммобілізовано в 50 мМ бікарбонату натрію рН 9,6 на планшетах дляFor solid-phase phage selection, mesothelin 293 of human or Javan macaque origin was immobilized in 50 mM sodium bicarbonate pH 9.6 on plates for

Зо мікротитрування МахізЗогр (Мипс, Коспевіег, МУ) за ніч при 4 "С. Планшети були блоковані принаймні 1 годину, використовуючи казеїновий інгібітор Сазеїп ВіосКег (Ріегсе, Косктога, І).From the microtiter of MahizZogr (Mips, Kospewieg, MU) overnight at 4 "C. Plates were blocked for at least 1 hour using the casein inhibitor Saseip ViosKeg (Riegse, Kosktoga, I).

Фаги були зібрані із клітинного супернатанта і суспендовані в РВ5З, що містить 5 95 порошкове молоко і 0,05 95 Гуееп-20 (РВЗВТ). Після додавання фагової бібліотеки і 1-годинної інкубації ямки планшета для мікротитрування були ретельно промиті РВ5, що містить 0,05 95Phages were collected from the cell supernatant and suspended in RV5Z containing 5 95 powdered milk and 0.05 95 Gueep-20 (RVZVT). After adding the phage library and 1-hour incubation, the wells of the microtiter plate were thoroughly washed with PB5 containing 0.05 95

Тмееп-20 (РВ5Т) і зв'язані фаги були елюйовані шляхом інкубації ямок в 20 мМ НОСІ, 500 мМ КСІ протягом 30 хвилин. Елюйовані фаги були нейтралізовані 1М Тгі5, рН 8 ї розмножені, використовуючи ХІ 1-блакитні клітини і М13/КО7 хелперні фаги, і культивовані протягом ночі при 37 "С в 2УТ, 50 мкг/мл карбенциліну. Титри фагу, елюйованого із мішеневмісної ямки, були порівняні із титрами фагу, витягнутого із ямки, яка не містить мішень, для оцінки збагачення.Tmeep-20 (RV5T) and bound phages were eluted by incubating the wells in 20 mM NOSI, 500 mM KSI for 30 minutes. Eluted phages were neutralized with 1M Tgi5, pH 8, propagated using XI 1-blue cells and M13/KO7 helper phages, and cultured overnight at 37 °C in 2UT, 50 μg/ml carbencillin. Titers of phage eluted from the target-containing well, were compared with titers of phage extracted from a well containing no target to assess enrichment.

Для селекції фагів 293 в рідкій фазі біотинільований мезотелін людського походження або із яванської макаки був доданий до фагів, суспендованим в РВ5, що містить 5 95 порошкове молоко і 0,0595 Тмжеєп-20 (РВБЗВТ). Після інкубації фаг, зв'язаний із біотинільованим мезотеліном, фіксувався на планшеті для мікротитрування, покритої стрептавідином, протягом 5 хвилин. Ямки планшета для мікротитрування були ретельно промиті РВ5, що містить 0,05 95For the selection of phage 293 in the liquid phase, biotinylated mesothelin of human origin or from the Javan macaque was added to the phages suspended in РВ5 containing 5 95 powdered milk and 0.0595 Tmzheep-20 (RVBZVT). After incubation, phage bound to biotinylated mesothelin was fixed on a streptavidin-coated microtiter plate for 5 minutes. The wells of the microtitre plate were thoroughly washed with PB5 containing 0.05 95

Тмжееп-20 (РВ5Т), і фаги, які зв'язалися, були елюйовані шляхом інкубації ямок в 20 мМ НС, 500Tmzheep-20 (RV5T), and the phages that bound were eluted by incubating the wells in 20 mM NS, 500

ММ КСІ протягом 30 хвилин. Елюйовані фаги були нейтралізовані 1М Тгі5, рН 8, і розмножені, використовуючи ХІ 1-блакитні клітини і М13/КО7 хелперні фаги, і культивовані протягом ночі при 37 "С в 2УТ, 50 мкг/мл карбенциліну. Титри фагу, елюйованого із мішеневмісної ямки, були порівняні із титрами фагу, витягнутого із ямки, яка не містить мішень, для оцінки збагачення.MM KSI within 30 minutes. Eluted phages were neutralized with 1M Tgi5, pH 8, and propagated using XI 1-blue cells and M13/KO7 helper phages and cultured overnight at 37°C in 2UT, 50 μg/ml carbencillin. Titers of phage eluted from the target-containing well , were compared with titers of phage extracted from a well containing no target to assess enrichment.

Для селекції фагів в рідкій фазі точність селекції була поетапно підвищена як шляхом захоплення фагу, який зв'язувався із концентраціями біотинільованого мезотеліну, які знижуються, в розчині з подальшим захопленням нейтравідином протягом 10 хвилин (селекція по швидкості асоціації), так і шляхом збільшення часу промивання і температури, зумовлюючи дисоціацію фагу, що слабко зв'язався (селекція по швидкості дисоціації) (Бий еї аї., 9. Мої. Віо|. 340:1073-1093 (2004)).For liquid-phase phage selection, selection accuracy was stepwise increased both by capturing phage that bound to decreasing concentrations of biotinylated mesothelin in solution followed by neutravidin capture for 10 min (association rate selection) and by increasing wash time and temperature, causing the dissociation of weakly bound phage (dissociation rate selection) (Biy ei ai., 9. Moi. Vio|. 340:1073-1093 (2004)).

У Виробництво дОIn Production dO

З метою скринінгу варіанти (ДС спочатку були продуковані в клітинах 293. Векторами, що кодують МІ. і МН (25 мкг), були трансфіковані клітини 293, використовуючи систему РОСЕМЕ (Коспе, Вазеї, Зм/йгегіапа). 500 мкл Рибепе змішували із 4,5 мл середовища ОМЕМ, яка не бо містить ЕВ5, і інкубували при кімнатній температурі протягом 5 хвилин. Кожний ланцюг (25 мкг)For the purpose of screening, variants (DS) were first produced in 293 cells. Vectors encoding MI and MH (25 μg) were transfected into 293 cells using the ROSEME system (Cospe, Vazei, Zm/ygegiapa). 500 μl of Ribepe was mixed with 4 .5 ml of OMEM medium, possibly containing EB5, and incubated at room temperature for 5 minutes.Each strand (25 μg)

додавали до цієї суміші і інкубували при кімнатній температурі протягом 20 хвилин і потім переносили в п'ять флаконів Т-150 для трансфекції протягом ночі при 37 "С в 595 СО». На наступний день, середовища, що містять суміш для трансфекції, видаляли і замінювали на 23 мл середовища РБЗО4, що містить 0,1 мл/л мікроелементів (АО934) і 10 мг/л інсуліну (А0940).was added to this mixture and incubated at room temperature for 20 minutes and then transferred to five vials of T-150 for transfection overnight at 37 "C in 595 CO". The next day, the medium containing the transfection mixture was removed and was replaced by 23 ml of RBZO4 medium containing 0.1 ml/l of trace elements (АО934) and 10 mg/l of insulin (А0940).

Клітини інкубували протягом додаткових 5 днів, після чого середовище відбирали при 1000 об./хв. протягом 5 хвилин і фільтрували в стерильних умовах, використовуючи 0,22 мкм фільтр із низьким зв'язуванням білка. Зразки могли зберігатися при 4 "С після додавання 2,5 мл 0,1 95Cells were incubated for an additional 5 days, after which the medium was collected at 1000 rpm. for 5 minutes and filtered under sterile conditions using a 0.22 μm low protein binding filter. Samples could be stored at 4 °C after addition of 2.5 ml of 0.1 95

РМ5Е на кожні 125 мл середовища. Ід очищали афінною хроматографією з протеїном 0. 9) Визначення афінностіPM5E for every 125 ml of medium. Id was purified by affinity chromatography with protein 0. 9) Determination of affinity

Афінність варіантів 22А10 ІдО для мезотеліну людини або яванської макаки була визначена способом поверхневого плазмонного резонансу, використовуючи ВіАсогетМ-2000. На чипахThe affinity of 22A10 IdO variants for human or Javan macaque mesothelin was determined by surface plasmon resonance using ViAsogetM-2000. On chips

Віасоге дослідницького класу СМ5 були іммобілізовані приблизно 110 КО отриманого із Е. соїї рекомбінантного мезотеліну людини або яванської макаки, використовуючи набір реактивівApproximately 110 CU of E. soy-derived recombinant human or cynomolgus macaque mesothelin were immobilized on CM5 research grade vials using a reagent kit

Віасоге для з'єднання амінів. Серійне 2-кратне розведення кожного варіанта 22А10 (від 0,488 до 1000 нМ в РВ5, що містить 0,05 95 Гмиееп-20) були ін'єктовані із швидкістю потоку 30 мкл/хв.Viasoge for connection of amines. Serial 2-fold dilutions of each variant of 22A10 (from 0.488 to 1000 nM in PB5 containing 0.05 95 Hmyeep-20) were injected at a flow rate of 30 μl/min.

Кожний зразок був проаналізований з 5-хвилинною асоціацією і 3,5-хвилинною дисоціацією.Each sample was analyzed with 5 min association and 3.5 min dissociation.

Після кожної ін'єкції чип був відновлений, використовуючи 10 мМ гліцин рН 1,7. Відповідь зв'язування була відкоректована шляхом віднімання КИ із проточної кювети з використанням дб, що не стосується до даного специфічного зв'язування, іммобілізованого із аналогічною щільністю. Модель Ленгмюра 1:1 одночасної обробки Коп і Когн була використана для кінетичного аналізу.After each injection, the chip was reconstituted using 10 mM glycine pH 1.7. The binding response was corrected by subtracting the CI from the flow cell using db, which does not apply to a given specific binding immobilized at a similar density. A 1:1 Langmuir model of Copp and Cogn simultaneous treatment was used for kinetic analysis.

І) РезультатиI) Results

У основі акцепторної каркасної ділянки людини, яка використовується для гуманізації 22А10, лежав консенсусний домен Мі. каппа І людини і консенсусний домен МН підгрупи ІП людини.The human acceptor framework region used to humanize 22A10 was based on the Mi consensus domain. human kappa I and the MN consensus domain of the human IP subgroup.

Домени МІ ї МН ти22А10 були суміщені із доменами каппа І людини і підгрупи ПШ; кожна область, що визначає компліментарність (СОК), була ідентифікована і пересаджена в акцепторну каркасну ділянку людини з утворенням СОК-трансплантата, яка могла бути експресована у вигляді Ід або представлена як Раб на фазі (Фігури 7 і 8).The MI and MN domains of ty22A10 were combined with human kappa I domains and the PS subgroup; each complementarity-determining region (CDR) was identified and transplanted into an acceptor human scaffold to form a CRC graft that could be expressed as Id or presented as Rab in phase (Figures 7 and 8).

Були отримані шість бібліотек із рандомізацією в незначному ступені, в яких варіабельністьSix libraries were obtained with randomization to a minor degree, in which the variability

Зо була внесена окремо в кожну СОК трансплантата 22А10 СОН. Бібліотеки були відсортовані по взаємодії із мезотеліном людини і яванської макаки (отримані із клітин 293, з метою поліпшення зв'язування 3 глікозилованими формами мезотеліну яванської макаки або людини), використовуючи методичні підходи сортування в твердій фазі і в розчині. Спосіб сортування в розчині дозволяє відібрати високо афінні клони за допомогою маніпуляції концентрацією біотинільованої мішені і часом захоплення фагу, в той час як додавання неміченої мішені може бути використано для елімінації клонів із більш швидкими швидкостями дисоціації (Рий еї аї.,..Zo was introduced separately into each SOC of the 22A10 SON transplant. The libraries were sorted by interactions with human and cynomolgus macaque mesothelin (derived from 293 cells, in order to improve binding of 3 glycosylated forms of cynomolgus or human mesothelin), using methodical approaches of sorting in solid phase and in solution. The method of sorting in solution allows to select high-affinity clones by manipulating the concentration of the biotinylated target and the capture time of the phage, while the addition of an unlabeled target can be used to eliminate clones with faster dissociation rates (Rij ei ai.,...

МОЇ. Вісі. 340:1073-1093 (2004)). Клони із останнього раунду для кожної бібліотеки були відібрані для аналізу послідовності ДНК, і були виявлені зміни послідовності, заплановані для кожноїMY. Axes 340:1073-1093 (2004)). Clones from the final round for each library were selected for DNA sequencing, and the sequence changes planned for each

СОК, за винятком СОК-12 і СОК-Н2, передбачаючи багато можливих варіацій для поліпшення зв'язування антигену. Декілька клонів, вибраних або по мезотеліну людину, або мезотеліну яванської макаки, мали зміни в СОБ-НЗ, при цьому найбільш високо представлені мали заміну тирозину на ізолейцин в позиції 99. Цей варіант, нарівні із деякими іншими, експресувався у вигляді до і був охарактеризований на предмет зв'язування із мезотеліном способом Віасоге і аналізом Скетчарда (фігура 9А). У декількох клонів афінність перевищувала таку трансплантата 22А10.SOC, with the exception of SOC-12 and SOC-H2, providing many possible variations to improve antigen binding. Several clones selected for either human mesothelin or cynomolgus macaque mesothelin had changes in SOB-NZ, with the most highly represented having a tyrosine to isoleucine substitution at position 99. This variant, along with several others, was expressed as a to and characterized for binding to mesothelin by the Viasogue method and the Scatchard assay (Figure 9A). In several clones, the affinity exceeded that of the 22A10 graft.

Гуманізовані варіанти 22А10 були використані для імунопреципітації мезотеліну із клітинної лінії, стабільно експресуючої мезотелін. Клітини ВАВ, стабільно експресуючі дО-мічений мезотелін різних видів, були імунопреципітовані гуманізованими варіантами 22А10, як показано на фігурі 9В (Сг, трансплантат; мі (1), м17 (17) і м83 (83)) або п709.у3, п586 анти-940 або негативний контроль під для порівняння. Імунопреципітати були промиті і проаналізованіHumanized variants of 22A10 were used to immunoprecipitate mesothelin from a cell line stably expressing mesothelin. BAV cells stably expressing dO-labeled mesothelin of various species were immunoprecipitated with humanized variants of 22A10 as shown in Figure 9B (Cg, graft; mi (1), m17 (17), and m83 (83)) or p709.u3, p586 anti -940 or negative control under for comparison. Immunoprecipitates were washed and analyzed

Вестерн-блотингом із використанням мишачих анти-д90 антитіл для визначення дО-мезотеліну. п2210.м83 було найкращим із варіантів пП22А10 по його здатності викликати імунопреципітацію всіх трьох видів мезотеліну (яванської макаки, верхній блот; людини, середнього блот; і щурячого, нижній блот). У самій правій ямці показано 2095 нанесеного лізату (без імунопреципітації) для порівняння рівнів загальної експресії. Маркери молекулярної ваги (кДа) вказані зліва.Western blotting using mouse anti-d90 antibodies to determine dO-mesothelin. p2210.m83 was the best of the pP22A10 variants in its ability to induce immunoprecipitation of all three types of mesothelin (Java macaque, upper blot; human, middle blot; and rat, lower blot). The rightmost well shows 2095 applied lysates (without immunoprecipitation) for comparison of total expression levels. Molecular weight markers (kDa) are indicated on the left.

Висновки по змінах для гуманізованого 22А10.м83: Починаючи з пересадки шести мишачих 22А10 СОК (визначено як позиції 24-34 (І 1), 50-56 (12), 89-97 (І 3), 26-35 (НІ), 49-65 (Н2) і 95- 102 (НЗ)) в консенсусну МІ. людину каппа І і МН підгрупи І, була використана рандомізація СОК бо легкого ступеня для ідентифікації зміни в СОК НЗ (У99І), що поліпшувало зв'язування із мезотеліном людини і яванської макаки. У 22А10.м83 виявлена висока афінність зв'язування і також здатність дізнаватися більше сайтів зв'язування відносно інших гуманізованих варіантів.Conclusions on changes for humanized 22A10.m83: Starting with the transplantation of six murine 22A10 SOC (defined as positions 24-34 (I 1), 50-56 (12), 89-97 (I 3), 26-35 (NI), 49-65 (H2) and 95-102 (NZ)) into consensus MI. human kappa I and MH subgroup I, randomization of SOC of mild degree was used to identify a change in SOC of NZ (U99I) that improved binding to mesothelin in humans and Javan macaques. 22A10.m83 showed high binding affinity and also the ability to learn more binding sites relative to other humanized variants.

У даній заявці мишачі моноклональні антитіла 709 і 22А10 альтернативно називають 709, т709 або ти709; і 22А10, т22А10 або ти22А10, відповідно. Гуманізовані моноклональні антитіла 709.43 і 22А10.м83 альтернативно називають 709.43, п709.м3 або пи709.м3; і 22А10.м83, п22А10.м83 або пи22А10.м83, відповідно, якщо не вказане інше.In this application, murine monoclonal antibodies 709 and 22A10 are alternatively referred to as 709, t709 or ty709; and 22A10, t22A10 or ty22A10, respectively. Humanized monoclonal antibodies 709.43 and 22A10.m83 are alternatively called 709.43, p709.m3 or p709.m3; and 22A10.m83, p22A10.m83 or p22A10.m83, respectively, unless otherwise specified.

Ор. Видова перехресна реактивністьOr. Species cross-reactivity

Моноклональні антитіла були протестовані з метою визначення можливої перехресної реактивності з мезотеліном із інших видів, відмінних від людини. На фігурі 11 показані гомологія послідовності між мезотеліном людини (ЗЕО ІЮО МО:43), яванської макаки (ЗЕО І МО:46), щури (ЗЕБЕО ІЮ МО:47) і миші (5ЕО І МО:48). Затемнені залишки ідентичні принаймні між двома видами. Незатемнені залишки відрізняються принаймні між двома із чотирьох видів. На фігурі 12 показані результати аналізу ГАСЗ клітин 293, стабільно трансфікованих міченим по епітопу 90 мезотеліном (мезотеліном людини, яванської макаки, щури або миші); забарвлених 10 мкг/мл п709.у3, п22А10.ум83 або анти-д00 п5В6б; і що виявляються анти-людським антитіломThe monoclonal antibodies were tested for possible cross-reactivity with mesothelin from non-human species. Figure 11 shows the sequence homology between human mesothelin (ZEO IJU MO:43), Javan macaque (ZEO IJU MO:46), rat (ZEBEO IJU MO:47) and mouse (5EO IJU MO:48). The shaded residues are identical between at least two species. Undarkened residues differ between at least two of the four species. Figure 12 shows the results of GASZ analysis of 293 cells stably transfected with epitope 90-tagged mesothelin (human, macaque, rat, or mouse mesothelin); stained 10 μg/ml p709.u3, p22A10.um83 or anti-d00 p5B6b; and detected by an anti-human antibody

АІеха 647. Нетрансфіковані клітини 293 не експресували нормально мезотелін ("М/1"). п709.му3 є специфічним для мезотеліну людини, в той час як п22А10.м83 зв'язується з мезотеліном людини, яванської макаки і щура, але не з мезотеліном миші. Фарбування анти-дою підтверджувало, що мишачий мезотелін дійсно експресується.AIekha 647. Non-transfected 293 cells did not normally express mesothelin ("M/1"). p709.mu3 is specific for human mesothelin, while p22A10.m83 binds to human, cynomolgus macaque, and rat mesothelin, but not to mouse mesothelin. Anti-Dow staining confirmed that mouse mesothelin was indeed expressed.

Е. Афінності антитілE. Affinities of antibodies

Для визначення відносних афінностей зв'язування п709.м3 і п22А10.м83 був виконаний аналіз Скетчарда, слідуючи стандартній методиці (Ноїтез еї аї!., Зсіепсе 256:1205-1210 (1992)), коротко шляхом інкубації неприкріплених клітин міченими 29) антитілами п709.м3 або п22А10.м83 протягом 2 годин при кімнатній температурі в присутності збільшуваних концентрацій неміченого антитіла, промивання і кількісного визначення зв'язаної з клітинами радіоактивністю, вимірюючи активність сцинтиляційним способом. Дані були проаналізовані апроксимацією нелінійної кривої регресії в програмі Мем ІГідапіа (Сепеїеси, Іпс., Зошй ЗапTo determine the relative binding affinities of p709.m3 and p22A10.m83, a Scatchard assay was performed following the standard method (Noitez et al., Zsiepse 256:1205-1210 (1992)), briefly by incubating unattached cells with labeled 29) p709 antibodies .m3 or p22A10.m83 for 2 hours at room temperature in the presence of increasing concentrations of unlabeled antibody, washing and quantification of cell-bound radioactivity by measuring activity by scintillation method. The data were analyzed by approximation of the nonlinear regression curve in the Mem IGidapia program (Sepeyesi, Ips., Zoshy Zap

Егапсізсо, СА) для визначення значень Ка (Мипзоп еї а!., Апаї. Віоспет., 107:220-239 (1980)).Egapsizso, SA) to determine Ka values (Mipzop eyi a!., Apai. Viospet., 107:220-239 (1980)).

Як показано на фігурі 13, 709.3 зв'язувало дО0-мічений мезотелін людини, експресований вAs shown in Figure 13, 709.3 bound dO0-labeled human mesothelin expressed in

Зо стабільно трансфікованих клітинних лініях 293, ВУАВ і НТ1Т080 (всі з яких не експресують ендогенний мезотелін), з афінністю 0,2, 0,25 і 0,97 нМ, відповідно. Ці значення Ка охоплювали діапазон, виявлений для ендогенного мезотеліну в чотирьох клітинних лініях підшлункової залози і двох клітинних лініях яєчника (0,41-14 нМ). Значення афінностей п22А10.м83 для мезотеліну людини, експресованого в тих же самих стабільних клітинних лініях, становили 2,7, 1,8 ї 6,2 нМ, відповідно, згідно їх афінностей для ендогенного мезотеліну людини (59-10 нМ). п22А10.му83 зв'язувало щурячий мезотелін, експресований в стабільно трансфікованих клітинах 293 і клітинах ВОАВ, із афінностями 7,3 нМ і 2,7 нМ, відповідно, що узгоджується з Ка, яка дорівнює 6,2 НМ, що спостерігається для ендогенного щурячого мезотеліну із нормальної плевральної клітинної лінії, 4/4-АМ (Агопзоп вї аї., ІПМ ко 1 7:61-70 (1981)).From the stably transfected cell lines 293, VUAV, and HT1T080 (all of which do not express endogenous mesothelin), with affinities of 0.2, 0.25, and 0.97 nM, respectively. These Ka values covered the range found for endogenous mesothelin in four pancreatic cell lines and two ovarian cell lines (0.41-14 nM). The affinities of p22A10.m83 for human mesothelin expressed in the same stable cell lines were 2.7, 1.8, and 6.2 nM, respectively, according to their affinities for endogenous human mesothelin (59-10 nM). p22A10.mu83 bound rat mesothelin expressed in stably transfected 293 cells and BOAB cells with affinities of 7.3 nM and 2.7 nM, respectively, consistent with the K of 6.2 nM observed for endogenous rat of mesothelin from a normal pleural cell line, 4/4-AM (Agopzop vy ai., IPM ko 1 7:61-70 (1981)).

Е. Групи епітопівE. Groups of epitopes

Щоб визначити, чи розділяють ті ж самі епітопи 709 і 22А10, як і інші антитіла проти мезотеліну, перераховані на фігурі 3, картування епітопів моноклональних антитіла було виконано стандартним перехресним конкурентним ЕГІЗА. Дев'яностошести-ямкові планшетиTo determine whether 709 and 22A10 share the same epitopes as the other anti-mesothelin antibodies listed in Figure 3, epitope mapping of the monoclonal antibodies was performed by standard cross-competitive EHIZA. Ninety-six-well tablets

Мипс Іттипозогр (Маїде Мипс, ЮБА) були покриті протягом ночі при 4 "С 100 мкл 1 мкг/мл позаклітинним доменом мезотеліну людини в буфері для іммобілізації (50 мМ карбонат натрію, рН 9,5). Всі подальші етапи були виконані при кімнатній температурі. Після промивання три рази в 200 мкл промивального буфера (РВ5, що містить 0,05 95 Гмуееп-20, рН 7,4) планшета були блоковані буфером ЕГІ5А (РВ5, що містить 0,5 95 бичачий сироватковий альбумін (ВЗА) і 0,05 95 Гмуееп-20, рН 7,4) протягом 60 хвилин. Мишачі моноклональні антитіла 709 і 22А10 були потім додані в концентрації 20 мкг/мл в буфері ЕГІ5А протягом 2 годин (100 мкл на ямку). Без промивання були також додані біотинільовані варіанти всіх тестованих антитіл проти мезотеліну (100 мкл 2 мкг/мкл) до кінцевої концентрації 1 мкг/мл протягом 30 хвилин. Після відмивання три рази в 200 мкл промивального буфера, зв'язування будь-якого біотинільованого антитіла було виявлене шляхом додавання стрептавідину-пероксидази хрону (НРЕ) (7утеай; Сагізрай, СА) в розведенні 1:5000 протягом 30 хвилин. Після трьох промивань, як указано вище, 100 мкл хромогенного субстрату 3,3", 5,5'-т-етраметилбензидину (ТМВ) було додано (ВіоЕгхХ І арогайогієв;Myps Ittypozogr (Maide Myps, Yuba) were coated overnight at 4 °C with 100 μl of 1 μg/ml extracellular domain of human mesothelin in immobilization buffer (50 mM sodium carbonate, pH 9.5). All subsequent steps were performed at room temperature After washing three times in 200 μl of washing buffer (PB5 containing 0.05 95 Hmueep-20, pH 7.4), the plates were blocked with EGI5A buffer (PB5 containing 0.5 95 bovine serum albumin (BZA) and 0 ,05 95 Hmueep-20, pH 7.4) for 60 minutes. Mouse monoclonal antibodies 709 and 22A10 were then added at a concentration of 20 μg/ml in EGI5A buffer for 2 hours (100 μl per well). Biotinylated antibodies were also added without washing variants of all anti-mesothelin antibodies tested (100 μl 2 μg/μl) to a final concentration of 1 μg/ml for 30 min After washing three times in 200 μl wash buffer, binding of any biotinylated antibody was detected by addition of streptavidin-peroxidase horseradish (HRE) (7uteay; Sagizrai, SA ) in a dilution of 1:5000 for 30 minutes. After three washes, as indicated above, 100 μl of the chromogenic substrate 3,3", 5,5'-t-etramethylbenzidine (TMB) was added (VioEghX I arogayogiev;

Оміподз Міїв, МО) протягом 5 хвилин. Хромогенна реакція була зупинена шляхом додавання 100 мкл стоп-реагенту (ВіОЕХ І абогайогіє5), і показник поглинання був реєстрований при 620 нм на приладі ОКгатісгоріаФе Кеадег (Віоїек Іпбігитепів; УмМіпоо5Кі, МТ). Максимальна ступінь можливого зв'язування кожного із біотинільованих антитіл була визначена паралельно шляхом їх інкубації із мезотеліном за відсутності небіотинільованих антитіл 709 і 22А10.Omipodz Miiv, Moscow State) within 5 minutes. The chromogenic reaction was stopped by adding 100 μl of stop reagent (ViOEX I abogaiogie5), and the absorbance was recorded at 620 nm on an OKgatisgoriaFe Keadeg instrument (Vioiek Ipbigitepiv; UmMipoo5Ki, MT). The maximum degree of possible binding of each of the biotinylated antibodies was determined in parallel by incubating them with mesothelin in the absence of non-biotinylated antibodies 709 and 22A10.

Результати представлені на фігурі 14. Сигнал будь-якого із дев'яти біотинільованих антитіл проти мезотеліну () вказує на відсутність конкуренції за перше антитіло (максимальне зв'язування кожним біотинільованим антитілом за відсутності першого антитіла для порівняння також показано в правій групі). 709 (яке називається 709.5.2 на фігурі 14) є єдиним антитілом, яке не може зв'язатися, коли 709 присутній (тобто, воно конкурує само з собою, другий стовпець зліва), в той час як 22А10 (яке називається 22А10.1.2 на фігурі 14) зв'язується стандартно (чорний стовпець в лівій групі). У свою чергу, коли 22А10 заздалегідь зв'язаний, 22А10 не може зв'язатися (останній стовпець середньої групи), в той час як 709 і інші антитіла можуть. Таким чином, не тільки 709 їі 22А10 не конкурують один з одним, але також кожний зв'язує епітоп, відмінний від інших семи антитіл. 709 конкурував сам із собою, але не із будь- яким іншим антитілом (порівняй кожний стовпець із максимальним сигналом для кожного антитіла, зв'язуючого мезотелін на планшеті за відсутності ЕГІЗА покритого антитіла 709 або 22А10). Подібним чином, 22А10 тільки конкурувало само з собою і не із іншими антитілами, включаючи 709. Таким чином, 709 ії 22А10 мають різні епітопи відносно один одного і інших виділених моноклональних антитіл. б. Картування епітопів, використовуючи химери мезотеліну людина:гмиша і яванська макака:людина, і мутаційний аналізThe results are presented in Figure 14. The signal of any of the nine biotinylated antibodies against mesothelin ( ) indicates no competition for the first antibody (maximum binding by each biotinylated antibody in the absence of the first antibody is also shown in the right panel for comparison). 709 (called 709.5.2 in Figure 14) is the only antibody that cannot bind when 709 is present (ie, it competes with itself, second column from the left), while 22A10 (called 22A10.1.2 in figure 14) is connected as standard (black column in the left group). In turn, when 22A10 is prebound, 22A10 cannot bind (last column of the middle group), while 709 and other antibodies can. Thus, not only do 709 and 22A10 not compete with each other, but also each binds an epitope different from the other seven antibodies. 709 competed with itself but not with any other antibody (compare each column with the maximum signal for each mesothelin-binding antibody on the plate in the absence of EHIZA-coated antibody 709 or 22A10). Similarly, 22A10 only competed with itself and not with other antibodies, including 709. Thus, 709 and 22A10 have different epitopes relative to each other and other isolated monoclonal antibodies. b. Epitope mapping using human:bovine and Javan macaque:human mesothelin chimeras and mutational analysis

Були виконані експерименти по пептидному картуванню трипсином, в яких П709.у3 було зв'язано з іммобілізованим мезотеліном людини, який потім інкубували з трипсином, і захищені антитілом пептиди, що залишилися були елюйовані і ідентифіковані мас-спектрометрією. Ці експерименти залучали амінокислоти 133-183 5ЕО ІО МО:43 як сайту зв'язування пП709.м3. Для підтвердження цієї ділянки, ми скористалися 709, реагуючим із людським (конструкт 2387, показаний на фігурі 15), але не з мишачим (конструкт 2385) або яванської макаки (конструкт й383) мезотеліном, щоб отримати химеру, яка за нашими припущеннями повинна укладатися краще укорочених мутантів. Ми сконструювали химеру мезотеліну людина:миша (2398 і Ж399), використовуючи сайт Міеї, що мовчить (який кодує ОЇ), в позиції амінокислоти 131 і сайт ВО, що мовчить (який кодує 0), в позиції амінокислоти 213 для вбудування послідовностей людиниTrypsin peptide mapping experiments were performed in which P709.u3 was bound to immobilized human mesothelin, which was then incubated with trypsin, and the remaining antibody-protected peptides were eluted and identified by mass spectrometry. These experiments involved amino acids 133-183 of 5EO IO MO:43 as the pP709.m3 binding site. To validate this site, we used 709 reacting with human (construct 2387, shown in Figure 15) but not mouse (construct 2385) or cynomolgus macaque (construct y383) mesothelin to obtain a chimera that we hypothesized should fit better. truncated mutants. We constructed a human:mouse mesothelin chimera (2398 and Z399) using a silent Mie site (which encodes OH) at amino acid 131 and a silent WO site (which encodes 0) at amino acid 213 to insert human sequences

Зо в мишачий конструкт. Крім того, був створений конструкт яванської макаки (2400), в якому амінокислоти 131-178 були замінені такими мезотеліну людини за допомогою сайтів М"еї.From a mouse construct. In addition, a construct of the Javan macaque (2400) was created in which amino acids 131-178 were replaced with those of human mesothelin using M'ei sites.

Кожний конструкт мав М-кінцеву 90-мітку (не показано) для перевірки експресії. 9О-мічені, СРІ-заякорені конструкти мезотеліну, показані на фігурі 15, були тимчасово експресовані в клітинах 293 і забарвлені 0,02 мкг/мл мишачим 709, 1 мкг/мл мишачим 22А10 або 1 мкг/мл антитілом проти д9О0-мітки (для нормування диференціальних рівнів експресії).Each construct was M-terminally 90-tagged (not shown) to verify expression. The 9O-labeled, CPI-anchored mesothelin constructs shown in Figure 15 were transiently expressed in 293 cells and stained with 0.02 μg/ml mouse 709, 1 μg/ml mouse 22A10, or 1 μg/ml anti-d9O0-labeled antibody (for normalization of differential expression levels).

Після детекції антимишачим антитілом Аїеха 488, зразки були промиті і проаналізовані ЕАСЗ, і дана інтенсивність флуоресценції була нормована на сигнал анти-д40О0 після віднімання будь- якого фонового фарбування на клітинах 293 дикого типу, що служать як негативний контроль.After detection with anti-mouse Aieha 488 antibody, samples were washed and analyzed by EASA, and this fluorescence intensity was normalized to the anti-d40O0 signal after subtraction of any background staining on wild-type 293 cells serving as a negative control.

Як показано на фігурі 16, 709 зв'язується з химерою 2399 людина:миша (що має амінокислоти людини 1-213), але ні з повнорозмірним мишачим мезотеліном ЖЗ385, ні з Ж398 (що має амінокислоти людини тільки з 1 по 131), вказуючи на те, що 709 зв'язує епітоп між 131 і 213.As shown in Figure 16, 709 binds to the human:mouse 2399 chimera (having human amino acids 1-213) but not to full-length murine mesothelin ZH385 nor to ZH398 (having only human amino acids 1 to 131), indicating that 709 binds the epitope between 131 and 213.

Його здатність зв'язувати химеру 400 яванська макака:людина (що має амінокислоти людини 131-176), але не повнорозмірну яванської макаки (5383), звузила межі епітопу між амінокислотами 131 і 178. (Відмітно, що відносно більш низький 95 зв'язування видний за участю 7109, ніж 22А10, внаслідок використання в 50 разів більш низької концентрації антитіла для 709).Its ability to bind the 400 cynomolgus:human chimera (having human amino acids 131-176), but not the full-length cynomolgus macaque (5383), narrowed the boundaries of the epitope between amino acids 131 and 178. (Notably, the relatively lower 95 binding visible with 7109 than 22A10, due to the use of a 50-fold lower concentration of antibody for 709).

Та ж сама химера була використана для картування щурячого, яванської макаки і людського (але не мишачого) реактивного епітопу 22А10. Зв'язування спостерігали на клітинах, експресуючих химеру ЖЗ399, але не Ж398. Таким чином, 22А10 зв'язується з епітопом з амінокислотним залишком, який має ключове значення, між амінокислотами 131-213 (фігура 16).The same chimera was used to map the rat, cynomolgus macaque, and human (but not mouse) reactive epitope 22A10. Binding was observed in cells expressing chimera Zh399, but not Zh398. Thus, 22A10 binds to an epitope with a key amino acid residue between amino acids 131-213 (Figure 16).

Оскільки 709 ї 22А10 не конкурують один з одним (фігура 13), вони імовірно зв'язують різні епітопи в межах амінокислот 131-213. Для ідентифікації цих різних епітопів 2-4 амінокислотних ділянки мезотеліну людини були мутовані з утворенням відповідних мишачих амінокислот в фоновій області химери 2399. Поєднання амінокислот 132-212 серед чотирьох видів показано на фігурі 17 із пронумерованими прямокутниками, які вказують позицію 15 мутантів. Для кожного із 15 мутантів, перерахованих в таблиці внизу фігури 17, показані послідовності людини (зверху), які були мутовані в мишачі послідовності (внизу). (Відмітно: отримання мутанта 411 не було успішно виконане).Since 709 and 22A10 do not compete with each other (Figure 13), they presumably bind different epitopes within amino acids 131-213. To identify these different epitopes, 2-4 amino acid regions of human mesothelin were mutated to form the corresponding murine amino acids in the background region of chimera 2399. The alignment of amino acids 132-212 among the four species is shown in Figure 17 with numbered rectangles indicating the position of the 15 mutants. For each of the 15 mutants listed in the table at the bottom of Figure 17, human sequences (top) that were mutated into mouse sequences (bottom) are shown. (Notable: Mutant 411 was not successfully obtained).

Всі мутанти, за винятком мутанта 411 із фігури 17, були експресовані в клітинах 293 і піддані аналізу ЕАС5, як на фігурі 16, за винятком того, що 5 мкг/мл гуманізованих версій кожного антитіла (тобто, пП709.м3, п22А10.м83 і п586 антитіло проти 90-мітки (позитивний контроль)) були використані, із використанням антиантитіл людини АїЇеха488 для детекції. Результати показані на фігурі 18А з даними флуоресценції, представлені як процент сигналу анти-дО для нормування рівнів експресії. (Відмітно: мутант Ж1!7 не експресувався в клітинах 293 і таким чином був виключений із набору даних). пП709.у3 зв'язувалося з усіма мутантами за винятком б і 29, в той час як пП22А10.му83 зв'язувало всі мутанти, за винятком мутанта Я15 (стрілки).All mutants, except mutant 411 of Figure 17, were expressed in 293 cells and subjected to EAC5 analysis as in Figure 16, except that 5 μg/ml of humanized versions of each antibody (ie, pP709.m3, p22A10.m83 and p586 antibody against the 90-tag (positive control)) were used, using human anti-antibodies AlIekha488 for detection. The results are shown in Figure 18A with fluorescence data presented as a percentage of the anti-dO signal to normalize expression levels. (Notably: mutant Zh1!7 was not expressed in 293 cells and thus was excluded from the data set). pP709.y3 bound all mutants except b and 29, while pP22A10.mu83 bound all mutants except mutant Y15 (arrows).

Шляхом поєднання різних видів мезотеліну ключові залишки в епітопі П709.м3 були точно визначені у вигляді двох одиничних амінокислотних залишків, які відрізнялися між послідовністю людини і послідовністю яванської макаки, що не є перехресно-реактивною: Е153 в мутанті 56 і р174 в мутанті 29. Важливість цих залишків для зв'язування антитіла була підтверджена за допомогою мутування еквівалентних залишків в мезотеліні яванської макаки на придатні амінокислотні залишки людини (наприклад, К1І53 до Е і 5174 до 0). п709.м3, яке в іншому випадку не зв'язується з мезотеліном яванської макаки, було здатне зв'язувати мутанти мезотеліну яванської макаки (фігура 188). Додаткові дослідження, в яких залишок Е152 послідовності мезотеліну людини був мутований до О, привели до інгібування зв'язування п709.у3, передбачаючи, що залишок Е152 також відіграє роль в зв'язуванні антитіла.By combining different species of mesothelin, key residues in the P709.m3 epitope were pinpointed as two single amino acid residues that differed between the human sequence and the non-cross-reactive cynomolgus macaque sequence: E153 in mutant 56 and p174 in mutant 29. Significance of these residues for antibody binding was confirmed by mutating the equivalent residues in mesothelin of the Javan macaque to suitable human amino acid residues (for example, K1I53 to E and 5174 to 0). p709.m3, which otherwise does not bind to cynomolgus macaque mesothelin, was able to bind cynomolgus macaque mesothelin mutants (Figure 188). Additional studies in which residue E152 of the human mesothelin sequence was mutated to O resulted in inhibition of p709.u3 binding, suggesting that residue E152 also plays a role in antibody binding.

На основі нещодавно передбаченої армадило-подібної повторюваної структури мезотеліну (Заішуапагауапа єї аїІ,, ВМС БігисішКа! Віоіоду 9:1 (2009)), антитіло 709, ймовірно, утворює містки між внутрішнім стеблом 4 і зовнішнім стеблом 5 мезотеліну. Аналогічно, оскільки п22А10.м83 перехресно реагує із щурячою, але не з мишачою послідовністю, залишок Е211 в мутантові 415 (у зовнішньому стеблі 6, див. ЗаїШуапакКауапа еї аї. вище), мабуть, є критичною детермінантою його епітопу. Фігура 19 відображає залишки, зв'язані 709.3 і п22А10.м83.Based on the recently predicted armadillo-like repeat structure of mesothelin (Zaishuapaguapa yei aiI,, VMS BigisishKa! Viiodu 9:1 (2009)), antibody 709 likely forms bridges between the inner stem 4 and the outer stem 5 of mesothelin. Similarly, because p22A10.m83 cross-reacts with the rat but not the mouse sequence, residue E211 in mutant 415 (in outer stem 6, see ZaiShuapakKauapa ei ai. above) appears to be a critical determinant of its epitope. Figure 19 shows the residues bound by 709.3 and p22A10.m83.

Н. Зв'язування п709.у3 не інгібується глікозилуваннямN. Binding of p709.u3 is not inhibited by glycosylation

Щоб визначити, чи зв'язується пП709.у3 із глікозилованим мезотеліном, пПіб-мічений по С- кінцю мезотелін людини був експресований в клітинах СНО, очищений і додатково відділений відповідно до заряду на колонці Мопо 5 у вигляді фракцій з підвищеним (фракція А11), середнім (А12), низьким (В1) практично відсутнім (В5) рівнем глікозилування мезотеліну, як показаноTo determine whether pP709.u3 binds to glycosylated mesothelin, pPib C-terminally labeled human mesothelin was expressed in CHO cells, purified and further separated according to charge on a Mopo 5 column in the form of fractions with increased (fraction A11), medium (A12), low (B1) almost absent (B5) glycosylation level of mesothelin, as shown

Зо фарбуванням кумасі брильянтовим блакитним в 5О05-РАСЕ-гелі. (фігура 20, вгорі зліва). Кожна фракція була нанесена на чип із заздалегідь зв'язаним п709.м3, і швидкості асоціації і швидкості дисоціації були виміряні для виявлення ідентичних афінностей (1,5 нМ) для кожної фракції (фігура 20, знизу зліва), вказуючи на те, що зв'язування П709.у3 не інгібується глікозилуванням.With coomassie staining with diamond blue in 5O05-RACE gel. (figure 20, top left). Each fraction was loaded onto a chip with prebound p709.m3, and association rates and dissociation rates were measured to reveal identical affinities (1.5 nM) for each fraction (Figure 20, bottom left), indicating that the P709.u3 binding is not inhibited by glycosylation.

Ці дані були підтверджені, демонструючи, що п709.у3 може імунопреципітувати всі ті ж самі смуги, як гуманізоване анти-дО 586 антитіло із клітин НТ1080, стабільно експресуючих д40- мезотелін людини (в епітопній мітці 90 якого відсутні сайти глікозилування), вказуючи на те, що п709.м3 може імунопреципітувати мезотелін людини незалежно від стану глікозилування.These data were confirmed by demonstrating that p709.u3 could immunoprecipitate all the same bands as the humanized anti-dO 586 antibody from HT1080 cells stably expressing human d40-mesothelin (which lacks glycosylation sites in epitope tag 90), indicating that , that p709.m3 can immunoprecipitate human mesothelin regardless of the glycosylation state.

Навпаки, гуманізоване 22А10 переважно імунопреципітує більше низькомолекулярні види (з нікчемним глікозилуванням), вказуючи на те, що на зв'язування 22А10 впливає глікозилування. (фігура 20, праворуч).In contrast, humanized 22A10 preferentially immunoprecipitates more low-molecular-weight species (with negligible glycosylation), indicating that glycosylation affects 22A10 binding. (figure 20, right).

Щоб оцінити здатність контрольного антитіла зв'язувати глікозилований мезотелін в порівнянні із п709.у3, був виконаний аналіз ЕАС5, в якому зв'язування контрольного антитіла із клітинами ОМСАКЗ порівнюється зі зв'язуванням пП709.м3 з клітинами ОМСАКЗ. Придатні повторні антитіла використовуються для визначення зв'язування пП709.м3 і контрольного антитіла з клітинами ОМСАКЗ (наприклад, анти-людські антитіла АІеха 647 використовуються для визначення зв'язування пП709.м3).To assess the ability of the control antibody to bind glycosylated mesothelin in comparison to p709.y3, an EAS5 assay was performed, in which the binding of the control antibody to OMSAKZ cells is compared with the binding of pP709.m3 to OMSAKZ cells. Suitable repeat antibodies are used to determine the binding of pP709.m3 and a control antibody to the cells of OMSAKZ (for example, anti-human antibodies AIekha 647 are used to determine the binding of pP709.m3).

Ї. Моноклональне антитіло 1923 блокує взаємодію МОС16 з мезотеліномY. Monoclonal antibody 1923 blocks the interaction of MOS16 with mesothelin

Моноклональні антитіла були протестовані з метою визначити, чи здатні вони блокувати зв'язування МОС16 з мезотеліном. Зв'язування очищеного біотинільованого фрагмента МОС16б (Мис16-ВІ, що має три муцинові повтори) з мезотеліном, який стабільно експресується в клітинах А431 (які в нормі не експресують мезотелін) показано на фігурі 21 ("без АБ"), ліва панель. Попередня інкубація клітин з 5-кратним молярним відношенням 1923, але не 709, інгібувала зв'язування МОС16-ВІ з мезотеліном, що було визначено ЕАСЗ5 із стрептавідином-РЕ, як показано на фігурі 21, ліва панель. Навпаки, зв'язування рекомбінантного пізв8-міченого по С- кінцю мезотеліну (очищений з клітин 293) з клітинами РОЗ, які стабільно експресують МОС16 було оцінено за відсутності і у присутності 5-кратного молярного надлишку вказаних антитіл проти мезотеліну (фігура 21 права панель), які були детектовані способом ЕАС5 з антитіламиMonoclonal antibodies were tested to determine whether they are able to block the binding of MOS16 to mesothelin. Binding of a purified biotinylated fragment of MOS16b (Mys16-VI, which has three mucin repeats) to mesothelin stably expressed in A431 cells (which do not normally express mesothelin) is shown in Figure 21 ("without AB"), left panel. Preincubation of cells with a 5-fold molar ratio of 1923, but not 709, inhibited the binding of MOS16-VI to mesothelin, as determined by EASZ5 with streptavidin-PE, as shown in Figure 21, left panel. In contrast, the binding of recombinant pizv8-labeled at the C-end of mesothelin (purified from 293 cells) to ROZ cells stably expressing MOS16 was evaluated in the absence and presence of a 5-fold molar excess of the specified antibodies against mesothelin (Figure 21 right panel) , which were detected by the EAS5 method with antibodies

АІехаб47-анти-пізб. Попередня інкубація мезотеліну з 1923, але не 709 або 22А10, інгібувала зв'язування мезотеліну із експресуючими МОС16 клітинами (фігура 21, права панель). Дійсно, бо 7109 і 22А10, мабуть, посилюють зв'язування мезотеліну з МОС16 в даному аналізі.AIehab47-anti-pizb. Pre-incubation of mesothelin with 1923, but not 709 or 22A10, inhibited mesothelin binding to MOS16-expressing cells (Figure 21, right panel). Indeed, because 7109 and 22A10 apparently enhance the binding of mesothelin to MOS16 in this assay.

У. Переважання мезотеліну людини в різних типах злоякісного новоутворенняU. Predominance of human mesothelin in different types of malignant neoplasm

Експресія мезотеліну людини в різних злоякісних пухлинах була проаналізована, використовуючи імуногістохімію. Фіксовані в формаліні, взяті в парафін (БЕРЕ) пухлинні мікроматриці (із одним 1 мм ядром на пухлину) проточної аденокарциноми підшлункової залози (фігура 22), серозної аденокарциноми яєчника (фігура 23) і аденокарциноми недрібноклітинного раку легені (фігура 24) були нарізані на предметне скло мікроскопа, депарафінізовані і регідратували за допомогою використання серії розведеного спирту. Зрізи на предметному склі були заздалегідь оброблені для виявлення антигену, використовуючи Тагаєї Неїгієма! боіІшіоп (ОЮОако, СіІовзігир, ЮОептагк), екрановані, блоковані і забарвлені 10 мкг/мл мишачим моноклональним антитілом проти мезотеліну людини 1923 протягом 60 хвилин в приладі автоматичного фарбування Оако ашіобвіаійпег Після промивання, 19С3 детектували біотинільованим антимишачим антитілом із подальшим застосуванням комплексу АВС (МЕСТА5ТАЇІМ АВС ЕїЇйе Кії, Месіог І арогашгіє5, Вигііпдате, СА) і візуалізували, використовуючи рАВ (Рієгсе І арогайгіє5) як хромоген. Потім зрізи були дофарбовані гематоксиліном Майера і зневоднені серією спиртів і ксилолів із подальшим покриттям покривними стеклами із застосуванням органічного заливного середовища (Рептамоипі, Різпег Зсіепійіс, РІНбБриго, РА).The expression of human mesothelin in various malignant tumors was analyzed using immunohistochemistry. Formalin-fixed, paraffin-embedded (BERE) tumor microarrays (one 1 mm core per tumor) of pancreatic ductal adenocarcinoma (Figure 22), ovarian serous adenocarcinoma (Figure 23), and non-small cell lung adenocarcinoma (Figure 24) were sectioned. microscope glass, deparaffinized and rehydrated using a series of diluted alcohol. Slide sections were preprocessed for antigen detection using Tagayei Neihiyama! boIhiop (OyuOako, SiIovzigir, YuOeptagk), shielded, blocked and stained with 10 μg/ml mouse monoclonal antibody against human mesothelin 1923 for 60 minutes in the Oako automatic staining device. Eijie Kiyi, Mesiog I arogashgie5, Vigiipdate, SA) and visualized using pAV (Riegse I arogashige5) as a chromogen. Then the sections were stained with Mayer's hematoxylin and dehydrated with a series of alcohols and xylenes, followed by covering with coverslips using an organic mounting medium (Reptamoipi, Rizpeg Zsiepiyis, RINbBrygo, RA).

Фарбування мезотеліну (коричневе) було виражене в балах досвідченим патоморфологом відповідно до наведеної нижче схеми, враховуючи інтенсивність (темний відтінок коричневого фарбування), а також об'єм фарбування. Репрезентативний приклад кожного бала фарбування мезотеліну показаний на фігурах 22-24 для кожного типу пухлини.Mesothelin staining (brown) was scored by an experienced pathologist according to the scheme below, taking into account the intensity (dark shade of brown staining) as well as the volume of staining. A representative example of each mesothelin staining score is shown in Figures 22-24 for each tumor type.

О (негативний): дуже слабке або ніякого фарбування в »90 95 пухлинних клітин; 1-- (слабке): переважаючий патерн фарбування є слабо вираженим; 2 (помірне): переважаючий патерн фарбування є помірно вираженим в більшості (250 95) неопластичних клітин;O (negative): very weak or no staining in »90 95 tumor cells; 1-- (weak): the predominant staining pattern is weakly expressed; 2 (moderate): the predominant staining pattern is moderately expressed in the majority (250 95) of neoplastic cells;

З (сильне): переважаючий патерн фарбування є понадміру вираженим в більшості (250 95) неопластичних клітин.C (strong): the predominant staining pattern is overexpressed in the majority (250 95) of neoplastic cells.

Фігура 22 показує, що 70 95 проточних аденокарцином підшлункові залози були позитивними по мезотеліну, демонструючи фарбування на рівні 1, 2-- або З, причому 33 95 демонстрували фарбування 2 або Зк. На фігурі 23 показано, що 98 95 серозних аденокарцином яєчники булиFigure 22 shows that 70 of 95 pancreatic ductal adenocarcinomas were mesothelin-positive, showing 1, 2, or 3 staining, with 33 of 95 showing 2 or 3 staining. Figure 23 shows that 98 95 serous ovarian adenocarcinomas were

Зо позитивними по мезотеліну, причому 74 95 демонстрували фарбування на рівні 2-- або Зк. Крім того, всі вісім проаналізованих метастазів із серозної аденокарциноми яєчника були позитивними по мезотеліну, передбачаючи, що первинні пухлини яєчника не втрачають експресію мезотеліну після метастазування. На фігурі 24 показано, що 44 95 недрібноклітинної карциноми легені (М5СІ С, підтип - аденокарцинома) є позитивними по мезотеліну, причому 2695 демонструють фарбування на рівні 2-4 або Зк. Крім того, три із восьми (38 95) проаналізованих відповідних метастазів із позитивних по мезотеліну первинних пухлин МЗС С у пацієнта зберігали позитивне по мезотеліну фарбування.With positive for mesothelin, and 74 95 demonstrated staining at the level of 2-- or Zk. In addition, all eight metastases from ovarian serous adenocarcinoma analyzed were mesothelin positive, suggesting that primary ovarian tumors do not lose mesothelin expression after metastasis. Figure 24 shows that 44 95 non-small cell lung carcinomas (M5CI C, subtype - adenocarcinoma) are positive for mesothelin, and 2695 demonstrate staining at the level of 2-4 or Zk. In addition, three out of eight (38 95) analyzed corresponding metastases from mesothelin-positive primary tumors of MZS C in the patient retained mesothelin-positive staining.

Мезотелін також експресується в мезотеліомах і раку ендометрія, як визначено ІНС, використовуючи антитіло 19С3.Mesothelin is also expressed in mesothelioma and endometrial cancer as determined by ANN using the 19C3 antibody.

Експресія мезотеліну у яванської макаки також була вивчена. Зрізи мезотелію плеври легені і перикардія серця із людини (фіксовані в формаліні, укладені в парафін зрізи) і із яванської макаки (заморожені зрізи) були нарізані і забарвлені моноклональним антитілом 1923 або моноклональним антитілом 22А10, відповідно. Мезотелій людини специфічно забарвлювався антитілом 1923 (фігура 25, зліва), і мезотелій яванської макаки специфічно забарвлювався антитілом 22А10 (фігура 25, праворуч). Ці результати демонструють, що 22А10 може розпізнавати ендогенний мезотелін яванської макаки, який має розподіл, подібний такому у людини.The expression of mesothelin in the Javan macaque was also studied. Sections of lung pleural mesothelium and heart pericardium from humans (formalin-fixed, paraffin-embedded sections) and from Javan macaque (frozen sections) were cut and stained with monoclonal antibody 1923 or monoclonal antibody 22A10, respectively. Human mesothelium was specifically stained with antibody 1923 (Figure 25, left), and cynomolgus macaque mesothelium was specifically stained with antibody 22A10 (Figure 25, right). These results demonstrate that 22A10 can recognize endogenous cynomolgus mesothelin, which has a distribution similar to that in humans.

К. Виробництво кон'югатів антитіла проти мезотеліну-лікарського препаратуK. Production of anti-mesothelin-drug conjugates

Кон'югати антитіло проти мезотеліну-лікарський препарат (АС) були отримані шляхом ковалентного зв'язування п709.у3 і п22А10.м83 із молекулою лікарського препарату МС -мо-РАВ-Anti-mesothelin antibody-drug conjugates (AC) were obtained by covalently binding p709.u3 and p22A10.m83 to the molecule of the drug MS -mo-RAV-

МІМАЕ, що містить лінкер, яка представлена вище в Розділі І.О. Для зручності, молекулу лікарського препарату МОС-мо-ГРАВ-ММАЕ, що містить лінкер, по-іншому називають в цихMIMAE containing a linker, which is presented above in Section I.O. For convenience, the drug molecule MOS-mo-GRAV-MMAE containing a linker is called differently in these

Прикладах і на фігурах ""СММАЕ" або "МСЕ". (Наприклад, п709.и3-МО-мс-РАВ-ММАЕ називають в цих Прикладах і на фігурах як п709.м3-хсСММАЄЕ або п709.м3-МСЕ). До ковалентного зв'язування антитіла були частково відновлені за допомогою ТСЕР, використовуючи стандартні способи відповідно до методології, описаної в У/О 2004/010957 А2. Частково відновлені антитіла утворювали ковалентний зв'язок із лінкервмісною молекулою лікарського препарату, використовуючи стандартні способи відповідно до методології, описаної в статті Юогопіпа еї аї. (2003) Маї. Віоїтесппої. 21:778-784 ії 005 2005/0238649 А1. Коротко, частково відновлені антитіла бо були об'єднані із лінксервмісною молекулою лікарського препарату для забезпечення можливості утворення ковалентного зв'язку молекули із цистеїновими залишками. Реакції утворення ковалентного зв'язку були зупинені, ії АОС були очищені. Навантаження лікарським препаратом (середнє число молекул лікарського препарату на одне антитіло) для кожного АЮС була визначена і її значення знаходилися в діапазоні від 3,33 до 4,0 у всіх випадках.In the examples and in the figures ""СММАЕ" or "МСЕ". (For example, p709.y3-МО-ms-RAV-MMAE is called in these Examples and in the figures as p709.m3-хсСМАЕЕ or p709.m3-МСЕ). To the covalent binding antibodies were partially reconstituted by TSER using standard methods according to the methodology described in U/O 2004/010957 A2. The partially reconstituted antibodies formed a covalent bond with the linker-containing drug molecule using standard methods according to the methodology described in the article Yugopipa ei ai. (2003) Mai. Vioitesppoi. 21:778-784 ii 005 2005/0238649 A1. Briefly, partially reconstituted antibodies were combined with a linker-containing drug molecule to ensure the possibility of formation of a covalent bond of the drug molecule with by cysteine residues. The covalent bond formation reactions were stopped, and the AOCs were purified. The drug loading (average number of drug molecules per one antibody) for each AUC was determined and its values ranged from 3.33 to 4.0 in all cases.

Г. Ефективність п709.м3-мсММАЕ в іп мімо моделі НРАСD. Effectiveness of p709.m3-msMMAE in IP by the NRAS model

Ефективність пП709.у3-мсММАЕ була досліджена, використовуючи модель ксенотрансплантата аденокарциноми підшлункової залози. П'ять мільйонів клітин НРАС (позитивних по мезотеліну (2) згідно із ІНС з використанням 1923) в НВЗ5 були ін'єктовані підшкірно у мишей ЗСІО з природженою відсутністю клітин-кілерів, і в пухлині були введені дози п709.у3-хсММАЕ в концентрації 1,1, 2,7, 5,5, 11 і 16,4 мг/кг (при 3,5 ММАЕ/антитіло) або п586 анти-400-мсММАЕ в концентрації 5, 10 ії 15 мг/кг (з 3,3 ММАЕ на антитіло) або 15 мг/кг незахищеного пП709.м3 (без ММАЕ). Як показано на фігурі 26 значне інгібування пухлинного зростання було досягнуто при 5,5 мг/кг П709.м3-мсММАЕ, і регресія пухлини була досягнута при 11-16 мг/кг п709.м3-мсММАЕ, але ніяких значущих ефектів не спостерігали при введенні незахищеного антитіла або контрольного 90-МсММАЕ в дозі 15 мг/кг. Показаний змоделювати підбір кривих, основаних на загальній швидкості зростання. На нижній правій панелі фігури 26 представлений аналіз ЕАСЗ і інтерналізація п709.у3 в клітинах НРАС і НС.The efficacy of pP709.u3-msMMAE was investigated using a pancreatic adenocarcinoma xenograft model. Five million NRAS cells (positive for mesothelin (2) according to INS using 1923) in NVZ5 were injected subcutaneously in ZSIO mice with a congenital absence of killer cells, and the tumor was injected with doses of p709.u3-xsMMAE at a concn. 1.1, 2.7, 5.5, 11 and 16.4 mg/kg (at 3.5 MMAE/antibody) or p586 anti-400-msMMAE at a concentration of 5, 10 and 15 mg/kg (with 3, 3 MMAE per antibody) or 15 mg/kg of unprotected pP709.m3 (without MMAE). As shown in Figure 26, significant inhibition of tumor growth was achieved at 5.5 mg/kg P709.m3-msMMAE, and tumor regression was achieved at 11-16 mg/kg p709.m3-msMMAE, but no significant effects were observed when unprotected antibody or control 90-MsMMAE at a dose of 15 mg/kg. It is shown to simulate the selection of curves based on the overall growth rate. The lower right panel of Figure 26 shows the analysis of EASZ and internalization of p709.u3 in NRAS and NS cells.

М. Ефективність П709.у3-мсСММАЕ в моделі первинної аденокарциноми підшлункової залозиM. Effectiveness of P709.u3-msSMMAE in a model of primary adenocarcinoma of the pancreas

Ефективність п709.м3-мсСММАЕ була досліджена в моделі первинної аденокарциноми підшлункової залози(Опсоїезі, ЗМВН, Септапу). Шматки позитивних по мезотеліну первинних пухлин підшлункової залози людини (експресуючих мезотелін на рівні 1-2-- згідно з ІНС) були імплантовані підшкірно у самиць безтимусних мишей ММА, яким вводили дози п709.м3-The effectiveness of p709.m3-msSMMAE was studied in a model of primary adenocarcinoma of the pancreas (Opsoiesis, ZMVN, Septapu). Pieces of mesothelin-positive primary tumors of the human pancreas (expressing mesothelin at the level of 1-2-- according to INS) were implanted subcutaneously in female athymic MMA mice, which were injected with doses of p709.m3-

МСММАЕ в концентрації 5, 10 ї 20 мг/кг (3,р5 ММАЕ/антитіло). На фігурі 27 відкладені середні значення об'єму пухлини х стандартне відхилення. Значне інгібування пухлинного зростання було виявлено при всіх дозах п1709.и3-мсММАЕ. ІНС первинної пухлини підшлункової залози показана праворуч.MSMMAE in a concentration of 5, 10, and 20 mg/kg (3.p5 MMAE/antibody). Figure 27 shows the average values of tumor volume x standard deviation. Significant inhibition of tumor growth was detected at all doses of p1709.y3-msMMAE. The ANS of the primary tumor of the pancreas is shown on the right.

М. Ефективність пП709.м3-мсММАЕ в моделі раку яєчникаM. Efficacy of pP709.m3-msMMAE in ovarian cancer model

Ефективність п709.у3-мЖсММАЕ була досліджена, використовуючи модель ксенотрансплантата раку яєчника. Мільйон клітин ОуСагзЗ х 2.1 (позитивних по мезотеліну (2-3-)The efficacy of p709.u3-mZhsMMAE was investigated using an ovarian cancer xenograft model. A million cells of OuSagzZ x 2.1 (positive for mesothelin (2-3-)

Зо згідно з ІНС з використанням 19С3) були ін'єктовані в скупчення жирової тканини молочної залози мишей СВ17 5СІО із природженою відсутністю клітин-кілерів, якою послідовно вводили дози 1, 2,5, 5, 10 ї 15 мг/кг П709.м3-мсММАЕ (3,5 ММАЕ/антитіло) або п586 анти-90-у«СММАЕ (3,3Zo according to INS using 19C3) were injected into the accumulation of adipose tissue of the mammary gland of SV17 5SIO mice with a congenital absence of killer cells, which were successively injected with doses of 1, 2.5, 5, 10, and 15 mg/kg P709.m3- msMMAE (3.5 MMAE/antibody) or p586 anti-90-u"SMMAE (3.3

ММАЄЕ/антитіло). Як показано на фігурі 28, помірну активність спостерігали при 2,5 мг/кг п709.у3-мсММАЕ і регресію пухлини - при 5 мг/кг і вище, в той час як анти-д0-мсСММАЕ не виявляло активність в дозі нижче за 5 мг/кг (тільки помірна активність - при 10 мг/кг і зупинка зростання пухлини - при 15 мг/кг). Показаний змоделювати підбір кривих, основаних на загальній швидкості зростання. На правій панелі фігури 28 представлений аналіз ЕАСЗ5 і інтерналізація пП709.у3 в клітинах ОмУСагЗ х 2.1 і ІНС.MMAEE/antibody). As shown in Figure 28, moderate activity was observed at 2.5 mg/kg p709.u3-msMMAE and tumor regression at 5 mg/kg and above, while anti-d0-msMMAE did not show activity at a dose below 5 mg/kg (only moderate activity - at 10 mg/kg and tumor growth arrest - at 15 mg/kg). It is shown to simulate the selection of curves based on the overall growth rate. The right panel of Figure 28 shows the analysis of EASZ5 and internalization of pP709.u3 in OmUSagZ x 2.1 and INS cells.

О. Ефективність п709.м3-МсСММАЕ в моделі раку легеніO. Effectiveness of p709.m3-MsSMMAE in a lung cancer model

Ефективність пП709.м3-УсММАєЕ була досліджена, використовуючи модель ксенотрансплантата раку легені (плоскоклітинної карциноми). П'ять мільйонів клітин Н226 х 2 (позитивних по мезотеліну (Зк) згідно 53 ІНС) були ін'єктовані в суміші 50:50 Маїйгіде:НВЗ5 в здухвинну ділянку мишей СВ17 5СІЮ. На фігурі 29 відкладені середні значення об'єму пухлини х стандартне відхилення. Виявлена помірна активність П709.м3-мсСММАЕ (3,5 ММАЕ/антитіло) в дозі 5 мг/кг і зупинка пухлинного зростання при 10 мг/кг, в той час як не було виявлено ніякої значущій активності контрольного кон'югата анти-д0-«сММАЕ (3,97 ММАЕ/антитіло) в будь-якій дозі. На правій панелі фігури 29 представлений аналіз ЕАСЗ і інтерналізація пП709.у3 в клітинахThe efficacy of pP709.m3-UsMMAeE was investigated using a xenograft model of lung cancer (squamous cell carcinoma). Five million H226 x 2 cells (positive for mesothelin (Zk) according to 53 INS) were injected in a mixture of 50:50 Mayigide:NVZ5 into the trachea area of SV17 5SIU mice. Figure 29 shows the average values of tumor volume x standard deviation. Moderate activity of P709.m3-msSMMAE (3.5 MMAE/antibody) was detected at a dose of 5 mg/kg and tumor growth arrest at 10 mg/kg, while no significant activity of the control conjugate anti-d0- "cMMAE (3.97 MMAE/antibody) in any dose. The right panel of Figure 29 shows the analysis of EASZ and internalization of pP709.u3 in cells

Н2г26 х 2 і ІНС.H2g26 x 2 and INS.

Р. п709.м3-мсММАЕ і п22А10.и83-мУсСММАЕ мають схожу ефективністьR. p709.m3-msMMAE and p22A10.y83-mUsMMAE have similar effectiveness

Була досліджена ефективність п709.м3-мсММАЄЕ в порівнянні із п22А10.м83-"УсММАЕ.The effectiveness of p709.m3-msMMAEE was investigated in comparison with p22A10.m83-"UsMMAE.

Двадцять мільйонів клітин ВАВ, які стабільно експресують або дО-мезотелін людини (зліва) або дО-мезотелін яванської макаки (праворуч), були інокульовані підшкірно мишам СВ17 5СІО в буфері НВ55. Мишам вводили дози 0,5 або 2 мг/кг п709.м3-мсСММАЄЕ (мишам, якому інокулювали ВЛАВ-4О-мезотелін людини) або п22А10.и83-УСММАЕ (мишам, якому інокулювалиTwenty million BAV cells stably expressing either human dO-mesothelin (left) or Javan macaque dO-mesothelin (right) were inoculated subcutaneously into CB17 5SIO mice in HB55 buffer. Mice were injected with doses of 0.5 or 2 mg/kg p709.m3-msSMMAE (mice inoculated with VLAV-4O-human mesothelin) or p22A10.y83-USMMAE (mice inoculated with

ВОАВ-4О-мезотелін яванської макаки) або 2 мг/кг анти-40-мсММАЕ, що використовується як позитивний контроль і для нормування будь-яких відмінностей в експресії між двома видами клітинної лінії. На фігурі 30 відкладені середні значення об'єму пухлини ж стандартне відхилення. Як пП709.и3-мсММАЕ, так і п22А10.«83-мсСММАЕ виявляли кращу активність в дозі 2 мг/кг в порівнянні із контролем 90-мсММАЕ відносно дії на В'"АВ-д0-мезотелінової пухлини 60 людини і ВУАВ-40-мезотелінової пухлини яванської макаки, відповідно. Негативним контролем в цьому експерименті було антитіло, яке не має до даного впливу, кон'юговане із мУсСмММАЕ, яке не виявляло ніякої значущої активності.cynomolgus macaque BOAB-4O-mesothelin) or 2 mg/kg anti-40-msMMAE, used as a positive control and to normalize for any differences in expression between the two cell line species. Figure 30 shows the average values of the tumor volume and the standard deviation. Both pP709.y3-msMMAE and p22A10.83-msMMAE showed better activity at a dose of 2 mg/kg compared to the control 90-msMMAE in relation to the effect on B'"AB-d0-mesothelial tumor 60 human and VUAV-40- Javan macaque mesothelin tumor, respectively.The negative control in this experiment was a neutral antibody conjugated to mUsSmMMAE, which showed no significant activity.

Для подальшої оцінки активності П22А10.м83-мМсММАЕ, в пухлині Н226 х 2 фігури 29 і в пухлини ОмСагЗ х 2.1, вирощені як описано на фігурі 28, вводили дози із вказаними концентраціями п709.м3-х«сММАЕ і п22А10.м83-"СММАЕ (3,53 ММАЕ)/антитіло), або апіі-40-To further evaluate the activity of P22A10.m83-mMsMMAE, doses with the indicated concentrations of p709.m3-x"cMMAE and p22A10.m83-"SMMAE were administered to the H226 x 2 tumor of figure 29 and to the OmSagZ x 2.1 tumor, grown as described in figure 28 (3.53 MMAE)/antibody), or apii-40-

МСММАЕ як негативний контроль. На фігурі 31 відкладені середні значення об'єму пухлини ж стандартне відхилення. Незважаючи на значно більш слабке зв'язування незахищеного п22А10.м83 в порівнянні із П709.му3 із обома цими клітинними лініями згідно із ЕАС5 аналізом, п2г2А10 м83-мсСММАЕ мало схожу із п709.м3-мМсСММАЕ ефективність в моделі Н226х2 (верхня ліва панель) і лише трохи меншою активністю в моделі ОмСагЗ х 2.1 (верхня права панель), на що вказує більш швидка регресія пухлин після введення дози 6 мг/кг.MSMMAE as a negative control. Figure 31 shows the average values of the tumor volume and the standard deviation. Despite significantly weaker binding of unprotected p22A10.m83 compared to P709.mu3 to both of these cell lines according to EAC5 analysis, p2g2A10 m83-msSMMAE had similar efficacy to p709.m3-mMsSMMAE in the H226x2 model (upper left panel) and with only slightly less activity in the OmSagZ x 2.1 model (upper right panel), as indicated by faster regression of tumors after administration of a dose of 6 mg/kg.

ОО. МОС16 і мезотелін утворюють комплекс на "позитивних по двох антигенах" клітинних лініяхOO. MOSC16 and mesothelin form a complex on "positive for two antigens" cell lines

Була досліджена взаємодія МОС16 і мезотеліну на клітинних лініях. Клітини ОмСагЗ, які експресують мезотелін і МОС16, були лізовані в 1 95 буфері МР40. Як показано на фігурі 32, лівої панелі, лізати були імунопреципітовані під дією т709 або ізотипним контрольним Ідс і проаналізовані Вестерн-блотингом із використанням антитіл проти МОС16 (верхній блот) або 709 (нижній блот) для виявлення комплексів мезотелін:МОС16б або загального мезотеліну, відповідно. (20 95 неімунопреципітованого нанесеного лізату показано в лівій ямці). т/09 було здатне спільно імунопреципітувати МОС16б із мезотеліном із лізатів клітин ОмСаг3. Ці дані демонструють, що МОС16 утворить комплекс із мезотеліном в клітинних лініях, які експресують як мезотелін, так і МОС16 (тобто є "позитивними по двох антигенах" клітинними лініями).The interaction of MOS16 and mesothelin on cell lines was investigated. OmSagZ cells, which express mesothelin and MOC16, were lysed in 1 95 MP40 buffer. As shown in Figure 32, left panel, lysates were immunoprecipitated with t709 or isotype control Ids and analyzed by Western blotting using antibodies against MOS16 (upper blot) or 709 (lower blot) to detect mesothelin:MOS16b complexes or total mesothelin, respectively. . (20 95 non-immunoprecipitated applied lysate is shown in the left well). t/09 was able to co-immunoprecipitate MOSC16b with mesothelin from lysates of OmSag3 cells. These data demonstrate that MOS16 will form a complex with mesothelin in cell lines that express both mesothelin and MOS16 (ie, are "dual antigen positive" cell lines).

Як показано на фігурі 32, правої панелі, антитіла або до мезотеліну, або до МОС16 були використані для імунопреципітації (ІР) цих білків із кондиціонованих середовищ, в яких культивували вказані клітинні лінії. Клітинні лінії експресували тільки мезотелін (НРАС), тількиAs shown in figure 32, right panel, antibodies to either mesothelin or MOS16 were used to immunoprecipitate (IR) these proteins from the conditioned media in which the indicated cell lines were cultured. Cell lines expressed only mesothelin (NPAS), only

МИиИСІ16 (А431), жоден із даних антигенів (Н520) або обидва даних антигени (ОмуСаг3, САРАМ-2,МииИСИ16 (А431), none of these antigens (Н520) or both of these antigens (ОмуСаг3, САРАМ-2,

ЕКУХ ї ОуСаг429 клітини). Або химерне антитіло проти мезотеліну Сп709 (верхня і нижня панелі), або антитіла проти МОС16 (середня панель) були використані для імунопреципітації.EKUH and OuSag429 cells). Either chimeric antibody against mesothelin Sp709 (upper and lower panels) or antibodies against MOS16 (middle panel) were used for immunoprecipitation.

Промиті імунопреципітати були проаналізовані способом Вестерн-блотингу (МВ) ізWashed immunoprecipitates were analyzed by Western blotting (WB) with

Зо використанням мишачого антитіла проти мезотеліну 2Е5 (верхня панель) або мишачим антитілом 1.8.823 проти В-домену МОС16б6 (М11-подібного) (05 ВіоіодісаІЇ, Зулатресой, МА; середня і нижня панелі). Відповідно, на верхній панелі продемонстрований імунопреципітований мезотелін із клітинних ліній, які експресують мезотелін, на середній панелі продемонстрований імунопреципітованний МОС16 із клітинних ліній, які експресують МОС16, і на нижній панелі продемонстровані спільно імунопреципітовані комплекси мезотелін:МОС16, які специфічні для клітинних ліній, експресуючих обидва білки, (позитивних по двох антигенах клітинних ліній). Ці результати вказують на те, що мезотелін може виділятися в середовище в пов'язаному ізUsing mouse antibody against mesothelin 2E5 (upper panel) or mouse antibody 1.8.823 against B-domain of MOS16b6 (M11-like) (05 BioiodisaII, Zulatresoy, MA; middle and lower panels). Accordingly, the top panel shows immunoprecipitated mesothelin from cell lines that express mesothelin, the middle panel shows immunoprecipitated MOS16 from cell lines that express MOS16, and the bottom panel shows co-immunoprecipitated mesothelin:MOS16 complexes that are specific for cell lines expressing both proteins (positive for two antigen cell lines). These results indicate that mesothelin may be released into the environment in association with

МИС16 вигляді. Відповідно, антитіла і імунокон'югати за винаходом придатні для лікування позитивного по мезотеліну злоякісного новоутворення, включаючи позитивні по двох антигенах злоякісні пухлини.MIS16 form. Accordingly, antibodies and immunoconjugates according to the invention are suitable for the treatment of mesothelin-positive malignant neoplasms, including two antigen-positive malignant tumors.

К. 1923, але не 709, витісняє попередньо зв'язаний із мезотеліном МОС16бK. 1923, but not 709, displaces previously bound to mesothelin MOS16b

Було досліджено зв'язування 1923 із мезотеліном в присутності МОС16. МОС16-біотин (1 мкг/мл, або 9,2 нМ) був попередньо зв'язаний із клітинами НТ1080, експресуючими мезотелін. 1923 (5 мкг/мл) було додано, щоб визначити чи може воно витіснити попередньо зв'язанийThe binding of 1923 to mesothelin in the presence of MOS16 was investigated. MOS16-biotin (1 μg/ml, or 9.2 nM) was pre-bound to HT1080 cells expressing mesothelin. 1923 (5 μg/ml) was added to determine whether it could displace the previously bound

МиИС16. МОС16-біотин виявляли за допомогою реагенту детекції ЗАРЕ, і зв'язане антитіло виявляли за допомогою антимишачого антитіла АІеха488. На фігурі 33 показано, що 1923 дійсно здатне витіснити МИОС16б і зв'язатися із мезотеліном. Антитіло 709 (33 нМ), яке зв'язується із ділянкою мезотеліну поза сайтом зв'язуванням МОС16, було використано як негативний контроль і, як і очікувалося, не було здатне витіснити заздалегідь зв'язаний МОС16.MyIS16. MOSC16-biotin was detected using the ZARE detection reagent, and the bound antibody was detected using the anti-mouse antibody AIekha488. Figure 33 shows that 1923 is indeed able to displace MYOS16b and bind to mesothelin. Antibody 709 (33 nM), which binds to the region of mesothelin outside the MOS16 binding site, was used as a negative control and, as expected, was unable to displace prebound MOS16.

Додаткові експерименти показали, що 19023 також витісняє МОС16 в концентрації 0,1 мкг/мл, в той час як антитіло 2Е5 може витісняти МОС16 тільки при концентрації 25 мкг/мл (дані не представлені).Additional experiments showed that 19023 also displaces MOS16 at a concentration of 0.1 μg/ml, while the 2E5 antibody can displace MOS16 only at a concentration of 25 μg/ml (data not shown).

Хоч вищевикладений винахід був описано досить детально за допомогою ілюстрацій і прикладів із метою виключення двозначного тлумачення, описи і приклади не треба тлумачити як обмеження об'єму даного винаходу. Опубліковані дані про всі патенти і наукова пеклі пенеп тло пЕВЕЦІК ПОСЛІД ВНОСТЕК рен теки ее Я г яшма вич щи Ма Я ТВІТИ ук м Ж ИСут ях «1105 ПЕВ ЕСК, ІМС. Б. НОБЕМАММОА ВОСВЕ Алі: Мак БЕММІВ; фуоахайийв ос. ЗСАМБЕХ - ші Ух пу круту хи УЖЕ УТІХAlthough the above invention has been described in sufficient detail with the help of illustrations and examples in order to eliminate ambiguous interpretation, the descriptions and examples should not be interpreted as limiting the scope of this invention. Published data on all patents and scientific hell penet tlo PEVETSIK POSLID VNOSTEK renteki ee Yah yashma vych shchi Ma Ya TWIT uk m Z YSut yah "1105 PEV ESK, IMS. B. NOBEMAMMOA VOSWE Ali: Mak BEMMIV; fuoahaiyyv os. ZSAMBEH - shi Uh pu cool hi ALREADY COMFORT

Жрпачи б. ЖЕВМС ему ха МИ лозу то пх мя мому ти т тритуч ут Ума «РИМ АНТИТІЛА ПЕОТИ МЕЗОТЕЛЕНУ Її ХМУНОКОЮ ЮГСАТИ го З ОК о «ІіЗим Рів ре «140 «14 «ЗВ» БіУа в, че І як зу М тутHarvesters b. ЖЕВМС ему ха Мы лозу то ф мя мому т тритуч ut Uma "ROM ANTIBODIES OF PEOTI MESOTHELEN HER HMUNOKOYU YUGSATI ho Z OK o "Iizim Riv re "140 "14 "ZV" BiUa in, che And how zu M here

Фу кое Не ки «1505 14Fu koe Ne ki "1505 14

КЕШ Бук где куди вк я о кітах все іВ укіс о еп у х кам «231 108 шк Фі пу «тій» Біпох рути сет діжу х . «Дій» Нових верлаел в «аг У нь Ще ак касу тер У Ху Деми Ск ри боку бік Мов и ЖАЛО КАCASH Buk where where vk I about cats all iV ukis about ep u h kam "231 108 shk Fi pu "that" Bipoh ruti set dizhu x . "Action" of New Verlaels in "ag U ny Still ak kasu ter U Hu Demy Sk ry side side Language and ZALO KA

ВЕК А ів б Мек Ж слів Зевс Бх Беж бек бец Зек Азія ак Уа ку й и -к ЩЕ 4. З кл Кч ро Джчу Ліва би тк у чи Щку 8 б ОгА мі шию Тк жа жи пика вза овАхц Уа їпХх ха їй Му Же аа ех шк же А МЖК МОУ Е сих ук зв ж кА У тах АС я У її Тео ШХНає Лух 1; Туру т я Ж ож тов о їди Ат М УК їх осів ПЕЖО КЕ ТАМ лу Віа вка зеУшо ки МБ МеCENTURY A iv b Mek Z sliv Zeus Bh Bezh bek bec Zek Asia ak Ua ku y i -k MORE 4. Z kl Kch ro Jchu Liva bi tk u chi Shku 8 b OgA mi shyu Tk zha zhi pika vza ovAhcs Ua ypHh ha ila Mu Zhe aa eh shk zhe A MZHK MOU E sih uk zv zh kA U tah AS i U her Teo ShKhNaye Lukh 1; Turu t ia Zhozhtov o ydi At M UK of their axes PEJO KE TAM lu Via vka zeUshok ky MB Me

З 45 ау Др 15 сг Тед Те Ку. буд кл у ха У ЖЕ вчи бує йон ХУ ах є ехFrom 45 au Dr 15 sg Ted Te Ku. bud kl u ha U ZHE teaches buye yon HU ah is eh

ТУК Аїз Аів вк дес Бебв їьо Вес о ліу Уві Еко пек Вже Баж Чек сах що щщ що ай УМ 2HERE Aiz Aiv vk des Bebv iyo Ves o liu Uvi Eko pek Already Bazh Chek sah what shsh what ay UM 2

Сл й ки сх (ху ме ху яті. вузу Мія тк В ни НН Ух хе лекозму вас ші жил Аве еп о тияє цем о тах 1 Зіе бек бек Бей Біб ВеSl y ky sh (hu me hu yati. vuzu Mia tk V ny NN Uh he lekozmu vas shi lived Ave ep o tiaye cem o tah 1 Zie bek bek Bey Bib Ve

В Що ту во т Ми КО М - прє бажух зл ут ся ж их де т я В 4 А НН Жид сам вар Ба вія ТЕЖ ТУук БУЄ Фу сій ів бУю ДЕ Бек баб ско ТЕЖ па т па мл Зм МЕ про пн тк пін стю лук хг он ни ши на чн вх вна спіу 51 жу ЖЖ Був х Зі Сію Тіє лу ка за 195 «еп є лм пл кві 113 не а хо ж ЛККWhat is it? styu luk hg on ny shi na chn vh vna spiu 51 zhu ЖЖ Buv x Zi Siu Thie luka za 195 "ep e lm pl kvi 113 ne a ho zh LKK

Оу Н ода ж, «им Миа Ек «40рх З бе тт Ма ер бі КТ ши ких бух бок ток пе для бод що умиOh N odazh, "im Mia Ek "40rh Z be tt Ma er bi KT shi kikh buh bok tok pe for bod what umi

АвЕ Ї1еє Меї Ме ТЕ ік БЕК Рка йек щаК Ле вів ві Бах дів ау 1 У то 15AvE Yi1ee Mei Me TE ik BEK Rka yek shchaK Le viv vi Bach div au 1 U to 15

Ста Тир ху буки бух Леви сту тожижу самих сум сх о Ше АНІ Ше ут Кр піш о був чаї Теж Меб бек Су цу де? бех о бЗіп бек У Бео Тут бах я ко мк «х З зе -тк м іш Боже х тає Ж В з МУ шує сану ЖК де ях Би ТА х ши вх оди щій пу Ваза Тух еп діб ЖЕ Сп сі Біб Бу шо шАж шхй ем й 5Sta Tyr hu buki buh Lions stu tzozhizu most sum skh o She ANI She ut Kr pish o was chai Also Meb bek Su tsu de? beh o bZip bek U Beo Tut bah i komk «x Z ze -tk mish Bozhe h taye ZH V z MU shuye sanu ZK de yah Bi TA h shi kh ody shchiy pu Vaza Tuh ep dib ZHE Sp si Bib Bu sho shaAzh shhy em and 5

КУ ак я шKU ak i sh

Ж нзске лях т хе жовшуут ХМ буку мих бою ім спід жу Її з Бу я Зак ххZh nzske liakh t he zhovshuut HM buku mih boju im spid zhu Her with Bu i Zak xx

Пежо рха був ес бею Ті Тук їХЮ йіз бек ТЕ Аре іч щех пу тіPejo rha was es beyu Ti Tuk yHYU yiz bek TE Are ich scheh pu ti

Зо 35 що їх Того Фен БО прю й зе Жди я Кк Й щу их о рами іх се Ж нуля ЖFrom 35 that they Togo Fen BO pru and ze Wait I Kk And schu ih o rami ih se Ж zero Ж

Ко Ав) оба бе Тс оЗіє ЗБЕ йББу Бас паж ТВву Аве Бве ТМ бем Трх шк нщ тре Зх 55 їй 5 ВОKo Av) oba be Ts oZie ZBE yBBu Bas page TVvu Ave Bve TM bem Trh shk nsch tre Zh 55 her 5 VO

Де Ток ьо т КЕ Поч Жуежже Ху 7 хх Знне Бу: їх рі я їі Бак беж Уді біб дів пів дЕвБоцви Вів УВЬ ТУ Бе суд Вів діва дого г еоя ноу ЗО ЗDe Tok yo t KE Poch Zhuezhje Hu 7 xx Znne Bu: ih ri i ii Bak bej Udi bib div piv dEvBotsvy Viv UVV TU Be sud Viv diva dogo g eoya nou ZO Z

Тк. ож че ШК Пк ха ПИ ак кох саму б у тре то КеЖеНІ т хх Т токTk. ож че SHK Pk ha PI ak koh samu b u tre to KeZeNI t xx T tok

ТУ бе) Бек дес ТеЄ ТВ БЖ дм слу сльу Тв пух в о сіз Ті був ) у; жо у Х а «ве з 1 МУ 319TU be) Bek des TeE TV BZh dm slu slu Tv puh v o siz Ti was ) u; zho in X a "ve from 1 MU 319

ЕЗ гій «Ам «мл ля ке Ай 315 ну. ї шEZ gii "Am "ml la ke Ai 315 nu. her sh

Фея Білок саше ши Я во Я «еїйз Штучна послідовне сть «вк ду пусту поро НН ках ко ктфх міт же ОВ ВУчНОМ ОСИ ЛюВНИННа І МИСТ щНИМХ о дю «Ні х 3 ех тУ5 ху 3 ух пре кує Фах Жкшчуї сйзахме Жож Ж суд. ДЗ соку хз ух дво» ї1е БЗіз Ме Те Біб ех Бу пе баб ем век бів дек Уггі 15 4 я з В 4 й 1 ІВThe fairy protein is white and white. Artificial sequence "into the void of falsehoods, the meaning of the student of the axis of Lyuvnyna and the world of science. DZ soku khz uh dvo" i1e BZiz Me Te Bib eh Bu pe bab em vek biv dec Uggy 15 4 i z B 4 y 1 IV

Ки и ее ШИ фл ву брус ча Ким я о ож Ло ше ЖЖ шкух МК М зKy i ee SHY fl vu brus cha Kim i o oz Lo she ЖЖ shkuh MK M z

Ав дка Уві Тих Ті Те Сук бух щах Чех піп веж Уві Їже Ток бе вв КУ щоAv dka Uvi Tyh Ti Te Suk bukh shchah Cheh peep tower Uvi Eat Tok be vv KU what

А РУ БAnd RU B

НН НС Фсук пес фак . ЖЖ ше Теж жи г уд Ж ою му 7 кжех сви о двпосбІ8З ЗзчЕ АВ Її жк Ммещ ма ЗЕ Буд жаром ву ЮК 5 У ув -к р рNN NS Fsuk pes fac. ЖЖ ше Теж жи г уд Ж ою му 7 kzheh svi o dvposbI8Z Zzche AV Her zhk Mmesch ma ZE Bud zharom vu JUK 5 U uv -k r r

Я я яса піч ох с дя тові Ж м Мармур хів Сак ям йому КУТІ слу хх АI I yasa oven oh s dya tovi Zh m Marble khiv I love him KUTI slu xx A

Ага Бже Буш дяка Бем а Ту ЇХ НУ Алз Зех Тах дхч шва зх Б Ж хв 50 БЕ ВО тіл ббуву Вот Же бак б хх бах зр гук іже Дж Тех сіє то гер;Aha Bzhe Bush thank you Bem a Tu ХХ NU Alz Zeh Tah dhch shwa zhh B Жh min 50 BE VO til bbuvu Vot Zhe bak b xx bach zr guk izhe J Teh sie to ger;

Рео беж Ак Бе Бек Бі ек сіу бех піу Тахо Але вна ТнЕж Пе ТНу ще Ва: ех ЩОReo bej Ak Be Bek Bi ek siu beh piu Taho Ale vna TneEzh Pe TNu still Wa: eh WHAT

З КВ СН ке тод ЖЕ дк ож м роя закю 1 га ше да пі ув Му сх. Я є тюZ KV SN ke tod ZHE dk och m roya zakyu 1 ha she da pi uv Mu sh. I am a tyu

Пе пек ває сец сі Ж щі во Бе Азіз Та ТУХ ТУух Су нія бл за 5 ах ж Сх бу кан М лк З же Ка сі х ру Тож ЖК сх о Хо пу без дах пе Ту ТИЖ бе Біт зі ЗіУ ТВх бЗуУуз Ві блю їі буш кт ти тАPe pek vaye sec si Ж shchi vo Be Aziz Ta TUH TUuh Sunia bl za 5 ah zh Sh bu kan Mlk Z zhe Ka si h ru So ZK sh o Hopu bez dah pe Tu TJH be Bit z ZiU TVh bZuUuz Vi blu iii bush kt ti tA

МНН 105 ІК:INN 105 IC:

ско еВ ОЯ штир віч й «ЕТ 7 а «З Я ккд 17 З ке кок на «ие Бикsko eV OYA styr vich y "ET 7 a "Z I kkd 17 Z ke kok na "ie Byk

Ві ЩШЩисума гелі вови ех чн штучна пПЕНСНІДОВИ УКIn ШШШШЩыsuma gel vovy эх чн artificial pPENSIDOVY UK

МО ие ше т АНУ /ЮМЕИ ЗІСНЕЕОХНЧНОТ М К ООЗН В ЕСК ККУ поилАпеплтИаК есдіим А «апИх 4MO ie she t ANU /UMEI ZISNEEOHNCHNOT M K OOZN V ESC KKU poilApeplTiaK esdiim A «apYh 4

Я як м с се, чт (5 х що сЄ Ар (т Фе - я м нема чан Мак вх ле дк уки дж ші Ж єтух Же А ма ТЕ пф даю ів сіп о МеЄ ТвВх бів беж ро ет Беж єм век Аза жає Узі су: і З 10 15 хом Й жи КОТ Ж ох аю Мр ує каф Со ки р де а МВ Ж гу дв о Ажа Уаї Тв Т312е ТБе був Був ех Маю осів йеж Май їм Текобеє : за сх ие жо Кк в дух й т ї ек ВЕ тпікж одіж Іру Жах І а о жржм СЕК р зак ап озЗАВ МУХ Ей Уж ве діз ож Ве а шаАМ ву КК І Оу хх и дж 35 8 же хї хи Кук ії «Ж т Мсузю МУж КОиу руук еи х бли дра ЖI like m s se, th (5 x what sEE Ar (t Fe - I m nema chan Mak vh le dk uky j shi Ж jetuh Jhe A ma TE pf give iv sip o MeE TvVh biv bezh ro et Bezh em vek Aza zhae Uzi su: i Z 10 15 hom Y zhi KOT Zh oh ayu Mr uye kaf So ky r de a MV Zh gu dv o Azha Uai Tv T312e TBe was Buv eh Mayu osiv yezh May im Tekobye: for sh ie zho Kk v duh y t i ek VE tpikzh clothes Iru Zahh I a o zhrzhm SEC r zak ap ozzav Mukh Ei Uzh ve diz ozh Ve a shaAM vu KK I Ou khkh i zh 35 zhe khih khy Kuk ii "Zh t Msuzyu MUH KOiu ruk ey kh bly dear Zh

Аха вхо Зув Мем оьво їі ТУуК о ТКе Абв Бах їх Аж ЗА ек й Е чаAha vho Zuv Mem ovvo ii TUuK o TKe Abv Bach ih Azh ZA ek y E cha

БУ Кк КОBU Kk KO

ЗУ адм: ЩОZU adm.: WHAT

ЖТіачия Шах Му ке буку жи фар Ми жи МК лук Во са ЛК м змі мужZhTiachiya Shah Mu ke buku zhi far Mi zhi MK luk Vo sa LK m zmi husband

Бо бек Ага бе беж біУу ек біт» Бес БЕе ТвЕ дзе се Тве Гео тТвЕ нд Б Й ту УкBo bek Aga be bej biUu ek bit" Bes BEe TveE dze se Tve Geo tTveE nd B Y tu Uk

ЩЕ 15 БО15 more BO

Жов ин и ХХ дух ех а Те Ук Мн кож я Мкжах МН ка Ск укZhov yn i XX duh eh a Te Uk Mn kozh i Mkzhah MN ka Sk uk

Ті ше Беж Со шіВв Кхо бів АзЗв о Вде вій ТЕ ТУк БНе Сувій іп 5 З З тФіме пт од Буда Мік жу р ою а ох кі ТЕ аю ор, тує їжа Беж веж Тух ТВ пе Бі сів Бі тТвЕ БУВ УЖ жа і Був тт УтЕ І КЗ йTishe Bezh So shiVv Kho biv AzZv o Wde viy TE Tuk BNe Scroll ip 5 Z Z tFime pt od Buda Mik zhur roy a oh ki TE ayu or, tuye food Bezh vej Tukh TV pe Bi siv Bi tTveE BUV UZH zha i Buv tt UTE I KZ and

АНУ ММ ща гочичх кан «10 ЗANU MM shcha gochichh kan "10 Z

Котис протя «Ех 3 УKotys against "Ex 3 U

Хм Я греки ож МАО т тд іс у пий ока жк ВО ВАК «05 5Hmm, I'm the Greeks, I'm MAO t td is u piy oka zhk VO VAK "05 5

Кк скит т. В ня КМ БО пої а ху Ж У Ка. МАМО жо фран КУ Теж х піз Уві сі сео УЗ БІ ах пу У шіу ва їв МАЕ ЦІВ БЕО слу У жк п зх, МЕKk skit t. V nya KM BO poi a hu Zh U Ka. MOM zho fran KU Tezh x piz Uvi si seo UZ BI ah pu U shiu wa yiv MAE TsIV BEO slu U zhk p zhh, ME

Ж Х КК В бух що Же Ху Ж КК Кл А «ди ТИ Ух ем МУ Ж ке ук пах демо лює сти веж ств вів Аївз де ОБУ Не ТвЕ ОБЖ беж беж ТеЖ Х КК В buh that Же Же Же Ж КК Кл A «di TI Uh em MU Ж ke uk pah demolish sti towers st viv Aivz de OBU Ne TvE OBJ bej bej Te

КК СК жкKK SK zhk

Ж 3 УК ле МЖК ; УДЕНЬ ки А до тро жк ше Я і то пк пулу жюF 3 UC le MZHK; During the day, I live until three o'clock

МІ о меноах ЖКЕК Ул же ом аж Ко су Був сту Бей оса сЕр Ув жеMI o menoah ZHKEK Ul je om azh Ko su Buv stu Bei osa sEr Uv je

КВ: 45KV: 45

Шіхує ЗЕ ТЕ ча ЕЕ ох ж ЕК я сх ую хи му тан я ре ам шлю коShihuye ZE TE cha EE oh z EK I hide hy mutan I ream shlyu ko

Зако омаї Те веж сі У вавврозІм зу Бех спи тую тую мій МЕюЮ еко ах и В ді ж Ам вза вч ж ж мож ту соус ТК УЖ лк на а НЯ ТЕХ Укр же яZako omai Te vezh si U vavvrozIm zu Beh sp tuyu tuyu my MEyuU eko ah i V di zh Am vza zh zh zh zh mozh tu sauce TK UZH lk na a NYA TECH Ukr zheh i

ПУБ пі Ака опе ївкК їі бас КЕЗ Ав дя Бек оБУз ВВ Жах мец ОУх пе то ТО щаPUB pi Aka ope yivkK ii bas KEZ Av dya Bek oBUz VV Zah mets OUh pe to TO shcha

Тоах У Мк пог ока окт аю Ж тя т ссання ме сів мес зви СК се Аж Ада ом йшюЮ ТЕ бі У уче Ту хо ТУToah U Mk poh oka okta ayu Z tya t ssannia mes siv mes svy SK se Azh Ada om yshyuYU TE bi U uche Tu ho TU

Не с ще мо око и и Лі у су мови и жу пк Уж ее я діа вжч піу Ві о Аві ТУК ТЇКВ Ту ах м ТВж ої Уві Тви Уку щаNot yet my eye and i Li u su movi i zhu pk Uzh ee i dia vzhch piu Vi o Avi TUK TIKV Tu ah m TVzh oi Uvi Tvy Uku shcha

Аг туї ККAg tui KK

КЕ що й пк «ха В ее их сії 115 колу лк ТЯ же «10» БілокKE what and pk "ha In ee ikh sii 115 kolu lk TYA same "10" Protein

Сон, сх ши «ій Мах яр.Sleep, sh shi «iy Mah yar.

Уж СК й рок а ой дж с Ж ж и ж хижа ух Ох Кок Том Жозе Там, ку зуUzh SK y rok a oy j s Z zh zh zhya uh Oh Kok Tom Jose There, ku zu

Біб уаї За ім от Ат вшк джу махати Б ВУ ОО МУ КЕ ї УС со 5 я ї Ну ї М М тла ХЕзу Ж ти Мах божі ик тов ко ву хх буку руту ер шк мкBib uai In the name of At vshk ju wave B VU OO MU KE i US so 5 i i Nu i M M tla HEzu Zh ti Mah bozhi ik tov ko vu xx buku rutu er shk mk

Зах Узі Муз Меї бек Су бул дій век ооо тТУК ТВЕ вВе тТВК ТвЕ ТУЄZah Uzi Muz Mei bek Su was acting age ooo tTUK TVE vVe tTVK TVE TUYE

Кк ко ру но її Бай ще -7 З тт Ма Ще рух ї. тах доми фев арт яю я сни ЯКKk koru no her Bai still -7 Z tt Ma Still movement. tah domy fev art yayu i dreams HOW

ТЕО Мак бів о Ткор Уві Су і да бо БУ Бі Бі БО ша Тхро є 35 т п щц ж ке ж тт тк бах СУ Б 0 дою ах о ко уж Кк Прокуи ЦИ ж та п жк МЕ У НК су Тукх зів Аку хо ех сп Се ре тТпх бла о уук Ні бів бу ЕВе а А щи то ся Тони до ї зр іо у о ек дж а ферм АК вих їтУуа Бор о БУХ Азія ТОК Мей Тв АБв АВ Пущо маю йеж Беж ТЖНЕ дів Ух я угх теж стуTEO Mak biv o Tkor Uvi Su i da bo BU Bi Bi BO sha Thro is 35 t p shchz zh ke zh tt tk bah SU B 0 doyu ah o ko uz kh Kk Prokuy CY zh ta p zhk ME U NK su Tukh ziv Aku ho eh sp Se re tTph bla o uuk Ni biv bu EVe a A shchi to sia Tony do i zr io u o ek j a farm AK vyh itUua Bor o BUH Asia TOK Mei Tv ABv AV Puscho have yezh Bej TZHNE div Uh I ugh too st

А Б Її ММ кох они ау не НИ в ви Нео НН Х Ху ки ж мук ТК лк мес сійз Мей; пех Бе шо щи ша сОд вврочеюх їпк ув ую ук ом ту: 5 ск: за З рн нн НН ННЯ Жоехьу. Кох Меч Сх Мн ЕМО дк мим ух юю шу ук Ку ді люк ек ЛК АХ З мех ме МЖК ОКХ МЖК маку ма юю ЗЕ щеи ЕМ пл я щк герA B Her MM koh they au ne NI v you Neo NN X Hu ki jh muk TK lk mes seiz Mei; peh Be sho shchi sha sod vrocheyuh ypk uv uyu uk om tu: 5 sk: za Z rn nn NN NNYA Joehyu. Koh Mech Shh Mn EMO dk mym uh yuyu shu uk Ku di luk ek LK AH Z meh me MZHK OKH MZHK maku ma yuyu ZE schei EM pl ya shk ger

Ван що ТО тжуво а о ужVan, that's so bad, but oh well

ЗХ хв вх еліта що «ТОВ в о чн кіш ВЕНОеК сло не Ах су м тики кажи. «Вій М Шетчна пеосдудовність суХХ вх вх елита that "TOV in o chn kish VENOEK slo ne Ah sum m tiki say. "Vii M. Shetchna's peosudovnost su

КТКCPC

СЕЛ Киремих про вве о крену ве прак дахах ви се ВБИВ штучне мом иоют і КВ ЕХ чит: пОолапелптимSEL Kyremykh about vve o krenu ve prak dakhah you killed artificial mom ioyut and KV EH chit: pOolapelptim

Сни няDon't dream

Я х : 2 хг в зір їз її кис хи жи ха т зи юю м піц Уаї біб Бей Уві сто бек ств бір ву бе Узі БУ Вже Яку мох ї С -I x: 2 hg v zir iz her kis hi zhi ha t zi yuyu m pizza Uai bib Bey Uvi sto bek stv bir vu be Uzi BU Already What moss y S -

Її 5 що їх ни Но нь я ож мує фи му яку ну Кк ук фр он Те р ПИHer 5 that their ni But ny i oz muye fi mu yak nu Kk uk fr on Te r PY

Хек без Аз їм Зах Су Вів вів дек сім ух ТЕХ ОВВе ТЕ ТВЕ ОТуХ т ях Ве я «Іа дя спек Вища ше я оди и о ему ду ти Фі Кам туту ти Меї Вів Тк Уві бра ЗІБ Аа ЕЖО су Був Сіу фени іє Тр УЗHek bez Az im Zah Su Viv viv dec sim uh TEH OVVe TE TVE OTuH tyah Ve i "Ia dya spek Higher I odi i o emu du ti Fi Kam tutu ti Mei Viv Tk Uvi bra ZIB Aa EZHO su Buv Siu fenyie Tr UZ

ЩЕ Б ку тку т Му Шум Жук паж КК мах тру КУ я Уа доші ХЛ Тов кохMORE B ku tku t Mu Shum Zhuk page KK mah tru KU i Ua doshi HL Tov koh

Сі теж ЗБ оАкУу Бк о щес те Базу же тТвЕ са КУЖ Я ав Бу ве г тла х - тА не ж се дк ТО Св ПВ трах ТТдк Фк Тов Пд Тс ТК, шеSi also ЗB oAkUu Bk o scheste te Bazu same tTVE sa KUZH I av Bu ve g tla h - tA not se dk TO Sv PV trah TTdk Fk Tov Pd Ts TK, she

Муз дав АкЗ Бе ТА їівз яви БВ АвО ТЕ вах Бу дЕпожЖих АЗя ухMusic gave AkZ Be TA iivz yavy BV AVO TE vah Bu depojZih AZya uh

ГУ) НЕ їх п- мк р, во жі сухи їщ екю жо ту ше лив КЕ че божу уGU) NOT their p- mk r, zhy dry still ekyu zho tu she liv KE che bozhuj u

Пес бій Меб дай дек ва Атз іа Бі йво ТВЕР УВІ Ту ТУХ СУPes bij Meb dai dek wa Atz ia Bi yvo TVER UVI Tu TUH SU

КОше Фу сжко учух т ук Хе т ТА ки в ха ах кра сію кі щоїKoshe Fu szhko uchuh tuk He t TA ki v ha ah krasiu ki shoi

Кіз ка бек дк Тхв ово без Зав оту ТЕ пе Зіп о зАжЖ Тв Бей тах те г тавКиз ка бек дк Тхв ово без Завоту ТЕ пе Зип о заЖЖ TV Бей тах те г тав

У ї0п5 ЗК решения ка се тя їж о Уві бах еру сяIn 10p5 of the ZK, decisions are made about Ubi bah eru sia

ТУ Та х г --: и. киш вно «Ка Щетучна тизолі денсTU Ta x g --: i. kish vno "Ka Shchetuchna tizoli dance

Аве о НА НН суч ризи скит сХAve o NA NN such riza skit sX

УЗИ їх шпис шУчнНСТЛ.О пси дСнамомУути їх см тичниИ попіпептийдUZI their spear shUchNSTL.O psi dSnamomUut their smtychI popipeptidyd

Кона гі ками м тех за жк ст ; уд я ке ГИ ее ни о ин п КО що НК ме стій УЮ пів себ охазі січ Веб бі бу ще Беца і Еш У ОКУ. ї З 15 ще ку юку жи тю с дк ик ХУ и ТМ Фк ру рю вну рн Мр ук у еко очмй йхш зви осеж су ага діа шак бу мк НХ Ббе жнжЕ Тв ТжХ не -Е ісKonagi kami m tekh zkh st ; ud ya ke GI ee ni o in p KO that NK mesti UYU half seb ohazi sich Web bi bu still Betsa and Esh U OKU. и Z 15 still ku yuku zhi tyu s dk ik ХУ i TM Fk ru ryu vnu rn Mruk u eco ochmy yhsh zvy osezh su aga dia shak bu mk НХ Bbe жнжE Tv TzhH ne -E is

Ку не «їхKu not "them

НЧечумо ва ро пня АВ жа ЗУ зо дю и п на нн я хлхNChechumo var ro pnya AV zha ZU zo du i p na nn i hlkh

ЖК Мао БСК ММ ЖАХ па ско Мо Був су Бе лах ТЕЖ КА за щ 15ZK Mao BSK MM HORROR pa sko Mo Buv su Bel lah TOO KA for sh 15

Ж у пн нн Но су ПИ м дк кв у у Мою т я шк Ж мам їшЕ же ле ЕКО шви жВк ву тую щак Зв пут вви ув СУБ це що ОБ шоЖ u mon nn No su PI m dk kv u u My t ia shk Ж mam eat zhele le ECO svy zhVk vu tuyu shhak Zv put vvy uv SUB is what OB what

Жоккх тТхе му жлнодо Ім фу сх ну У у дну ом у я пох -х КУН чь куJokkkh tThe mu zhlnodo Im fu sh nu U u dnu om u i poh -h KUN ch ku

Му и вка пе ТЕ сі сек вій ав отах шек був ло тах пів СтТУх де Я що вок и з Гу ре тодом м Дак, щк рН НН поаги т. р С НН хіх Мід жа ІК уд ях хи їм бів Меб дав обагосею Ага АЗа іо Авроїве Абв о ХЗаї тую тує духMuy vka pe TE si sek viy av otah shek was lotah half StTUh de I that vok i with Guretod m Dak, shk рн NN poagi t. r S NN hih Mija IC udyah hi im biv Meb gave obagosey Aha AZa io Avroive Abv o KhZai tuyu tuyu spirit

85 ЗО З85 ZO Z

ТУ зх у: ОЗ жу Тен Уго душу их ян о ук я Ши ою а о лу,TU zh y: OZ zhu Ten Ugo shower ih yan o uk ya Shi oyu a o lu,

Ака йха бек вч тов бео Бей во кує тхЕв жу ЗМ ооУ ик Сей о чаю в ТЕ що жкижо лік бухAka yha bek uch tov beo Bey vo kuye thEv zhu ZM ooU ik Sey o tea in TE that zhkijo lik buh

ТМ ові ву 115 суду «й З ееялк леду «сеї ОВ ду кож «вій Біпсех ек ен ОН са ут и х лж и Кен) ване сах З йо Ж сх ри жу в сс ую у фу буку бак фот сах ж Фк ху ря де її бій Мекочдфзьк бій ат БЕ Щек дае сво шах ака вас Уві БеTM ovi vu 115 sudu "y Z eejalk ledu "sei OV du kozh "viy Bipseh ek en ON sa ut ikh lzh y Ken) vane sah Z yo Zh skhry zhu v ss uyu u fu buku bak fot sah z Fk khur rya where her fight Mekochdfzk fight at BE Chek dae svo shah aka vas Uvi Be

Н Вч Ущ з 4 І ха клN Vch Usch with 4 I ha cl

Мою Ми ди расу СТ гри дно Но ЗО ФУ ОО Фе ах ск о Зк вар ВЗкчЧ Уві ТВкогіє їВхоСув М Аа Уж с МеК Х іа вах дав я У пл ж МІХMy My race ST gri dno No ZO FU OO Fe ah sk o Zk var VZkchCh Uvi TVkogie yVhoSuv M Aa Uzh s MeK X ia wah dav I U pl z MIH

М же ЖИI'm still alive

У щодо сих Уха они нн с о и о ко НО НН и їв Віа ТкбБ Тук дат? о ші Буш би ші ва вів Вр цу ов бе тів пря ку «й я МЕ; ж бок віщо ідо ше дно їдиі Б Кв як ка оку ру вч ушу а аю гук Аза йіз бек ех Без Зі пе бу таз жо ех Аж еВе ек су що 55 «-In regard to these Ears they nn s o i o ko NO NN i yiv Via TkbB Tuk dat? o shi Bush would shi wa viv Vr tsu ov be tiv pria ku "y I ME; zh bok vycho ido she dno yidii B Kv yak ka oku ru vch ushu a ayu huk Aza yiz bek eh Bez Z pe bu taz zho eh Azh eVe eksu that 55 "-

Фах схе мл сп ве Те Же кам ми Ка У бе б тр гу бЗакобБіт двк Біб тв вве Бе ТУ Бех Тк оті дв Як бе сб) КК ще я жк шеFah shhe ml sp ve The same kam we Ka U be b tr gu bZakobBit dvk Bib tv vve Be TU Beh Tk oti dv How be sb) KK still I zhk she

У та тв БО я су Зфуух А У сту уд ПВ у уд ти нау біуушо фею ду ух Же жу іа АЮ ВБе Аіа тВх тує ТУЄ Су сій пів БУХ йзп ех Бо Бе ТхрU ta tv BO I su Zfuuh A U stu ud PV u ud ti nau biuusho feyu du uh Zhe zhu ia AYU WBe Aia tVh tuye TUYE Su siy piv BUH yzp eh Bo Be Thr

Зк с сZk with p

Зо З нн но ШК ни и хі ру Уа жо у їпЕоБе ЗУ Ов БІУ ТЕ бух УВК ОЗ ТІ У ВК по каеZo Z nn no SHK ni i hi ru Ua zho u ypEoBe ZU Ov BIU TE buh UVK OZ TI U VK po kae

Б КЕ де не НЯ «ша ки ре е «ев мере Но «ій Біло ке Ма ще, шодо ик Ср кацхоки тиж пат ДПЕ Кхлода т ек о уж У ОВ Ло бак жи юку ЩІ уж и ех їм Бій ЗБЕ шоу АВК ОХ ОО ЕТ ху ошВК УЖ ТК Ума ех и д х сх теB KE de ne NYA "sha ky re e "ev mere No "iy Bilo ke Ma still, shodo yk Wed kachoky tyzh pat DPE Khloda t ek o uzh U OV Lo bak zhi yuku SCHI uzih i eh imm Biy ZBE show AVK OH OO ET hu oshVK UZH TK Uma eh i d x skh te

У ко То БеIn ko To Be

Па г тр Ки тех У ННЯ зов пвх трохи у З ток усу фу ду вPa g tr Ky teh U NNYA call pvh a little in Z tok usu fu du in

ТЕВКЕ как ше ЛАТ Кук веацо ем ХЕ ту Кк бий ші Буш КК вико АХ іх кт Б кі сх ва хе ше о тівжаж тиж леоюрує МК Фо мух у Су у ха б Му тай Був їшм ти дів ТУЮ ТУЮ ТВЖ ШаК дк ЗВО нія бек обуУ ув ЕКО ве 4 ща в о Ту учи се 1 щук КМ. паху 3 Ну Мод юну МЕ ув дах Лко вва» вк Ама Зк су Бех бі Тахо аю отбую хек о їн) Тахо Ав й шухTEVKE kak she LAT Kuk veatso em HE tu Kk biy shi Bush KK vyko AH ih kt B ki shh wa hehe she o tivzhazh tyzh leoyruye MK Fo muh u Su u ha b Mu tai Buv ishm ti div TUYU TUYU TVZ ShaK dk ZVO niya bek obuU uv ECO ve 4 scha v o Tu uchi se 1 pike KM. pahu 3 Nu Mod young ME uv dah Lko vva" vk Ama Zk su Beh bi Taho ayu otbuyu hek o yin) Taho Av y shukh

За а БЕ т в. х н ск за ожчя Мих КАК сах по ую Крах с ие чо Ор Ек пл луку т у р х лук ств тів ів І ех Фа Бе ла 5 со са Кк ЖК ЛКК УК ВК ЕКО ах й хуFor a BE t v. khnsk za ozhcha Myh KAK sah po uyu Krah sie cho Or Ek pl luku t r h luk st tiv iv I eh Fa Be la 5 so sa Kk ZK LKK UK VK ECO ah y hu

Є век ук о: с; Ж ТТ ТИ ї Я т м ще м сг ої х тя од ж куThere is a century uk o: s; Ж ТТ І І І т м ше м sгой х тя од ж ку

Я те тазі; боку Пор вк опи ро пі Еш В бо тим М Рі ТиI am the one; side Por vk opy ro pi Ash V bo tim M Ri Ty

Ав ТБЕ це жо ТУЮ ТЕ Вп су віт АЖ ТК був Цей бів іє БУВ й СОЯ Зх ож М ТИ яAv TBE ze zho TUYU TE Vp su vit AJ TK was This biv ie BUV and SOYA Zh osh M TI i

КІCI

КлеоCleo

Лише ю то мох меня їз хе ю шию М уч тк ММК «оту яко хе пі пружин жк ЖУК НА ОПОВ З КК КВ: кокО» скх ТЕ г ож. Я хм « ще З туш щини у унія чаша спис цирУчнНаХ после доВНнОСх сини чНи ти с т пюЮНУПапйтни я іа ве тека ваше окя - о у Є пи, її Сех та кю М у Сем о щу М хв ряOnly yu to moh menya iz he yu shiyu M uch tk MMK "otu jako he pi spring zhk ZHUK NA OPOV Z KK KV: koko" skkh TE g ozh. I hmm « still From carcasses in the union cup list of surgeons after doVNnOSh sons chNi you st pyuYUNUPapytny I ia veteka your okya - o u Ye pi, her Seh ta kyu M u Sem o schu M hvr rya

Ав Ті сій Мет тп бів шк оБсо ак БЕЖ їмо бек Вів ех Узі шу 3 5 КВ 5Av Ti siy Met tp biv shk oBso ak BEZH imo bek Viv eh Uzi shu 3 5 KV 5

К З де х шеф ся ФС. ож о птуіщ а хро зал гів твх сов дит вій беж ій дай Ті бак де ти азе дк чаї ТпЕолі ТВ Су Ка Вій шчЕ ій авВО ле шаЕ ОН МK Z de x chief sia FS. ож о птуища хро лаг гів твх сов ді вий бей ій да Ті бак да те азе дк чай Тпеоли ТВ Зу Ка Вій шчЕ ій авVO ле шаЕ ОН M

Й й Й пу жк хх ще Зк во а 38 ї ї. тк тів З тих х ї х о ях ок до тре Чер у Ії ток Ди ко тож З ут ха отод и ме АКТ то Її ях шт муЕ М АК ЖІ віз ККЗ му ши с МY y Y pu zhk xx still Zk vo a 38 th th. tk tiv From those h o y ok to tre Cher u Ii tok Di ko toch Z utha otad y me AKT to Her yah sht muE M AK ŽI visa KKZ mu shy s M

Я длI dl

КЗ Я. У М щі е У -х ЗК ТЯ ау їх. їїхеи Фк ач их суд Кр ту тТук Твх дек дкЗз БМ нів Бе Кона ГоБеО ВВЕ ОАЄ ФЕМ мкА у щи ЗУ ДІ мА; ТУ М 5 кот и на ну песо жк баз пе її має пе ев х г у лак су зх сі ТБ ваЄсвле твк о сепсупе вів Бас юю ех КЕKZ Ya. U M schi e U -x ZK TYA au ikh. yeshey Fk ach ih sud Kr tu tTuk Tvh dec dkZz BM niv Be Kona GoBeO VVE OAE FEM mKA u shchi ZU DI mA; TU M 5 cat i na nu peso zhk baz pe her has peev h g u lak su zhh si TB vaEsvle tvk o sepsupe viv Bas yuyu eh KE

Ех ТЕ От 5 НВ; ТЕ З . . . що Кх Он х оо ня шо іш В Що Вк Чек пеож схею 1 у а Доох ВК ри вик піс бю ВО Аїв тих щук БУ сумо важ осв перу мн Тл ОБеМ Ех ГУ щи 3 КяEx TE Ot 5 HB; TE Z . . . that Kh On h oo nya sho ish V What Vk Chek peoj shheyu 1 u a Dooh VK ry vyk pis byu VO Aiv tih schuk BU sumo vaj osv peru mn Tl OBeM Eh GU shchi 3 Kya

МЕ ші : - Хр ух с конк МИ Із Ж рах тах дкME shi: - Hruh s konk MY From Zh rah tah dk

ТК Мр ие МОХ АТЬ ОКУ СЛОВУ О У ак жів КЕ ув АКЗ 1200 КО рук тух, оту кВ Ко ик МА ик Ло еру ем ВТК. кум Каву ет пи м сао ЩеУчна поспідевнеть поту тую туфTK Mrie MOH AT OKU SLOVU O U akzhiv KE u AKZ 1200 KO ruk tuh, otu KV Ko ik MA ik Lo eru em VTK. kum Kavu et pi m sao ShcheUchna will speed up the sweat tuyu tuff

Сх сх ї ТИ иАЯ зош пові смутні «же шими штучне пошле синте тихНиХ пек реж т «ОМ я Е Я - т ко їх у пех бор ик ее коків ки АН НЯShh shhi TI iAYA zosh povi sad "we will artificially send the sinte of their pain"

Азо бів до Мас тре Сі бек оБре БВ оБає пер хат ів ее У У і 5 у 15 не чнв ше Ш н н кн Но о в о ННЯ дяю Вк Уа ТКж Ті Тв су дк піз ву ів ав гі Бак Ак ТУЄ се в ту КаAzo biv to Mas tre C bek obre BV obae per hat iv ee U U i 5 u 15 ne chnve she Sh n n kn No o o o o NNYA dyau Vk Ua TKzh Ti Tv sudk piz vu iv av gi Bak Ak TUIE se in Tu Ka

Еш Я ЯAsh Ya Ya

Хоми фо Мою Мб КУ ву ж ву Козик Мах М ді жди цу ну душ то я ве х й мух др . Н 1 хо ди Ка м СЛШНИКЯ, Є дах Пи ПЕ НН їх 3.Homy fo Moyu Mb KU vu zh vu Kozik Mah M di zhdy tsu nu dus to I ve h y muh dr . H 1 ho dy Ka m SLSHNYKYA, E dach Pi PE NN them 3.

Ісмі дай мо КУЖ сб еВ щу Кеш опу шок віч Ка МУ дам ОВIsmi dai mo KUZH sb eV schu Kesh opu shock vich Ka MU dam OV

ЩЕ І 55 ЗANOTHER 55 Z

З З жWith With the same

Кбашує уж іже Шеудею Сд; б ощая Яку м ЛЕ жо КУ бу ди Ме М Ер ххKbashue already Sheudeyu Sd; b oschaya Yaku m LE zho KU bu di Me M Er xx

КЕ ГУК КЕ о -еК Мр ож пово ЗВ Ам УВА МЕ сш ВЕ АВ МаК ААУKE HUK KE o -eK Mr oj povo ZV Am UVA ME ssh VE AV MaK AAU

Рея ше шк пе Ш ГУ пе ко Ба Не го У їх тп. ке т ж У Б ше М пт суко їжReya she shk pe Sh GU pe ko Ba Ne go In their tp. ke t j U B she M pt suko eat

ЗОН БО - 3 Н де ж Же я т. я Я ї хх Б лют Я «ЕХ Хе У я дшкт З1іу Бех сі ТВЕ Адювоклпе ТпЖж еВ Тв жів бек бах ей сі Ко щ ще де що яв т ІБ щоZON BO - 3 N where is it?

Я «Ек, . : го дит Ж пух шк ня : я ї дпа: пока о Я х те У ню сббхюмх Па икшк рд, Я СЯЄ Ум хе Ще пе Якккоя ух. і Аво ге Аїа Ти ТУЮ ТОЖ Су сій саю ЗІб дав ТВЕ Бека Тех «Бу ЗБ їх Фе 5 Вк о ах А КОЖ же Ж ху КоI "Eck, . : ho dit Z puh shk nya : I yi dpa: poka o Ya h te U nyu sbbhyumh Pa ikshk rd, I SHINE Um he She still pe Yakkkoya uh. and Avo ge Aia Ti TUYU TOJ Su siy sayu ZIB gave TVE Beka Teh "Bu ЗB ih Fe 5 Vk o ah A KOJZ same Z hu Ko

Тк Ба пе пай сі їв бує Зак ан А БУ ДЕЗ з ххх: яТек НTk Ba pe pai si yiv buye Zak an A BU DEZ z xxx: yaTek N

Не Ге, що ЖАКО мен ен й Б Бе хе 15 крою «а ТЕЗ лу сх МА их кеша Білок лу, их ки хх кю х БовОо варуєпе жк з ОО «Ощй хх зна за тину ЗЕД ЗУ ба ЖУК ті ви том З Ех хе ру» ЕК са ха ев т ма Уа зола ше хх ОД и НВ На КТ ХК рх соку я куNot Ge, that ZHAKO men en and B Be he 15 cut "a TEZ lu sh MA ih kesha Belok lu, ih ki xx kyu x BovOo varuepe zhk with OO "Oschy xx zna za tynu ZED ZU ba ZHUK ti you tom Z Eh he ru» EK sa ha ev t ma Ua zola she xx OD i НВ Na KT ХК рх соку я ку

У ш У: Зк 4 в; у МихIn w In: Zk 4 in; in Mich

Сон т дух фолучижо ду ен и Но нн НН НИ Но Не їх що жа о дек без Акхч Бей бек був Але дів век Зі ве тйпх 5Бе Бах бек ТУЮSon t duh foluchijo du en i No nn NN NI No No ih what zha o dec without Akhch Bey bek was But div vek Zi ve typh 5Be Bach bek TUYU

Та Ба лих о й в з р хашк о ти ТР фкхя ж см о че ие не ек у Кх ох ух пл ре їїTa Balyh o y v z r hashk o ty TR fkhya zh sm o che ie ne ek u Kh oh uh pl re her

Аїв Ме дпеж ТК оУВі душ пів овхв вВКкоОо озе бе ші ее св кю УВ де С БAiv Me dpezh TK oUVi dush piv ovhv vVKkoOo oze be shi ee sv kyu UV de SB

З А їй п и и Он Но хх анвнн и нь ННКУЯ лу ку. Пух я Жим у ож жщ КА ЗМ А КУ А мофу лишу сш МЛ ЕУлОоМукх ки ек Зк ОО МВ ца 55 я я. у мох сему я м Су Кл сут Ве оку тт Млату Жов т сих ее пі Ак Бе Тв їх ее Аа вроди Зек бу АБО КВК ро тує яв 7а 75 а тон їх ду Мох С ка а МО я. фея Ук КТ ЗК ба хх джу зе) Біб Ме зп обек ім вч пів Зі Аво Тпх ва во КУ КуУХ ШУ по акZ A her p i i On No xx anvnn i n NNKUYA lu ku. Pukh I Live in ож жщ KA ZMA A KU A mofu lishu ssh ML EUlOoMukh ky ek Zk OO MV tsa 55 i i. in moh semu i m Su Kl sut Ve oku tt Mlatu Jov t sih ee pi Ak Be Tv ih ee Aa vrody Zek bu OR KVK ro tuye yav 7a 75 a ton ih du Moh S ka a MO i. fairy Uk KT ZK ba xx ju ze) Bib Me zp obek im vch piv Z Avo Tph va vo KU KuUH ШУ po ak

ОЗ що код шо АЛ ярі є нужду дк СИ Уа я хи шу жу Сех від йкч БіУу спе дви Жух МЕ ОБУ ЗАЙ сі жа Себ хві ТЕ Уві ех ща дом жк 1 ВИ м сек щаOZ what code sho AL yari there is a need dk SY Ua i hi shu zhu Seh vid ykch BiUu spe dvy Zhuh ME OBU Zay zha Seb hvi TE Uvi eh shcha dom zhk 1 YOU m sec shcha

ЛЕ м зх шк Ам АВ ча екз «КЕ ЦПLE m zhh shk Am AV cha ekz "KE CP

УЖ ОУЮ їх ке «шк ВиМпОК «кА МЕ щр.ALREADY OUYU them ke "shk VyMpOK "kA ME shr.

ОСИ ЯWASPS I

«поз їй но Бере Ж а ШНЬЯ тов т гу х жу ел Не аа Її я Ж ж ах Ти ут ТИ хх То сіла тва фе Ме Уі Фа ек Сі СіУ аб безпо УВА УЖ ВО о БАш Ку"poz her no Bere Zh a SHNYA tov t gu x zhu el Ne aa Her i Zh z ah Ti ut TI xx To sila tva fe Me Ui Fa ek Si SiU ab bezpo UVA UZH VO o BAsh Ku

Й хх ярих я к це КкХх сархан I k це Кк

У З м ее схуд же вд У їжа дай Се Аіа ді беж біт Ва ТтТвкЕ ри дек ва ЕЕ зах ме) був Бей ож СУ Ки ла ож бує Спа ХВХх виб сек ваза О Кух з же заU Z m ee shud same vd U food give Se Aia di bej bit Va TtTvkE ry dek va EE zah me) was Bey oj SU Ky la oj buye Spa ХВХх vyb sek waza O Kuh z ze za

Ку шо І щі» Ма Мак о бку би акт Кл ня лає дян (у Тр уже тех (Ся тв жа ТЕ це Мет ек ТЕ МОм АБО хе Су ве жк ох жа АЖ ЕХ ОККО цк кеKu sho I shchi" Ma Mak o bku would act Kl nya laye dyan (u Tr already teh (Sya tv zha TE ze Met ek TE MOm OR he Su ve zhk ohh zha AJH EH OKKO tsk ke

Б ях о ті Ж рон зе ху 21 дк ПИ т ТИЛ Ха тер жк жк, ща ЗЕByakh o ti Zhron ze hu 21 dk PI t TIL Ha ter zhk zhk, scha ZE

Віа ТВЕ Ке дех Ав ові щЩіу ТЕ ТУЮ Те о тТУЄ Тег хо лаз пек УаVia TVE Ke deh Av ovi shSchiu TE TUYU Te o tTUYE Teg ho laz pek Ua

ЗО зе щоZO ze what

Тіз ЕЛ уко дж Укуди У ЖІ ща Жака бу от Ві шо бок Мах Може тех вияTiz EL uko d Ukudy U ZHI shcha Zhaka bu ot Vi sho bok Mach Moze teh vya

Бу злу Акт Ме ТК о їхе Бе був Ав демо олія їгуя Аа аа Кам ТУ я ху ме ЕЕ щі Ти її 50 к. «и «х код с плюве ста Ку их тео Ді Ми тю лиха ГТАЖЖ їжі ща зе Бек дек о ево БМув'сек 10 во БЖ ві Мас тує тую КУ « сх Ко а За Ку реЕкУ ле і: пе 1 ї і; би о ху іх дж сраку 1 У ру Я кю МОри М врих іш дз ре дво» о піу ТУЮ СТУК Пе ВВ Тук ТЕюЮ За вай му ТЕ ТИ я лях ке жаBu evil Akt Me TK o ihe Be was Av demo oil yiguya Aa aa Kam TU i hum me EE shchi You her 50 k. "y "x code s plyuve hundred Ku ih theo Di My tyu likha GTAZHZ food shza ze Bek dec o evo BMuv'sek 10 in BZh vi Mas tuye tuyu KU « shh Ko a Za Ku reEkU le i: pe 1 i i; by o hu ih j sraku 1 U ru Ya kyu MOry M mryh ish dz re dvo" o piu TUYU STUK Pe VV Tuk TEyuYU Za wai mu TE YOU I lyakh ke zha

НЯ КУ шкNYA KU school

Жоюку ве У соза пдхе їжи ТМВЖ чаї шех цех 1358 «шк їх нхкі я кт во їз ХА ел ту ЗЕ ту «Кіа відо са іМюхтви чих тя тиху Уж «ай шрУчна песплІдОовнІйеВ «ЕП ш яЄхрійтт гів ура туихух туї туру ки ж хв куме «иа» сОпРЮ ШеУчНІ ПООСПіШОоВвнОостіІ: синтежичниЙ попіпентидZhoyuku ve U soza pdhe eat TMVZh tea sheh shop 1358 "shk ih nhki i kt vo iz HA el tu ZE tu "Kia vidosa iMyukhtvy chih tia tihu Uzh "ai shrUchna pesplIdOovnIieV "EP sh yaEhriytt giv ura tuihuh tui turu ki zh hv kume "ia" with anti-inflammatory properties: synthetic popipentide

СЕН їжSEN eat

Аа.Ah

Бі бах ій їжа; Удар ще тю їз Ще Бберо ба ів бут ри Во пла Уаї щі Бе УДі бла Бек МУ Ба БУ Мем УВІ біб бкс Зі У Ку : її чкBi bah iy food; Hit still ty yz Still Bbero ba iv butry Vo pla Uai shchi Be UDi bla Bek MU Ba BU Mem UVI bib bks Zi U Ku : her chk

Б х її зB x her with

Ка Ж КМ до щу о о таджика тую МОЖ ом сяк ЖЛовуУ ЖІ СИЛух ЕН; по ж уз хх зер оса Бе Бер ЕЕ Су йов ха шах Бу пе каб гля Беж вав о беХ х й с» кихKa Zh KM do schu o o Tajik tuyu MOZH om syak ZhlovuU ZHI SILukh EN; po z uz xx zero osa Be Ber EE Su yov ha shah Bu pe kab glya Bezh wav o beH h y s» kih

Ек «к диEk "k di

СЯ ну кущWell, a bush

КМ щас) ке я я ко я «т чо Ко хи Тов вю ЕТ жу и пуху иKM shkas) ke I I ko I «t cho Ko hi Tov vyu ET zhuh i puhu i

ЯобтЕх Мік о Ж пику Ж жі лат іду жук У Ти ТОМ дк хх Зі пгт Мі вне Ме: Вес Теж чаї Ах бів вів ха біу дув сі без ЗІ Тк Ул тк, й отYaobtEh Mik o Z piku Z zhi lat idu bug U Ti TOM dk xx Z pgt Mi vne Me: Ves Tezh chai Ah biv viv ha biu duv si without ZI Tk Ul tk, y ot

З в 5 ща ин жа ба Кк ТЕО ху єю СТЕ по ек обро вх ех ді віч їпвІ бі бек вапосу шоу ЇХ Тух СПЕ Кук ту ВЕС ВЕ щеЖ Уа.Z v 5 scha inzha ba Kk TEO huye STE po ek obrovh eh di vich ipvI bi bek vaposu show IH Tuh SPE Kuk tu VES VE scheZ Ua.

З 5 ща хів ду о му пвожо ст Я сук жи ж Ма бу в оон о пу сі Ас Ме Тв її зву Аж Ав о бзпощеХ Був дв ота без тує шк во ТХ гоFrom the 5th day of my life, I was a wife, and I was in the middle of the night.

КЗ 7 З м Аа тод: ж нн НН Нв я а Ко НІ ушу сиву З у І плям бує тут цей сій Ме: ап оек сей птоз із си ав ЯйЕ віз ові ТУЮ ТУХ СУВ и З пох гук м Ів ог тех тре скажи БИК М тк пк ки чик ЕЙ ха Шу ЕТ юю вк токуKZ 7 Z m Aa tod: zh nn NN Nv i a Ko NI ushu sivu Z u I spots are here this siy Me: ap oek sei ptosis si av YaiE viz ovi TUYU TUH SUV y Z poh huk m Iv og teh tre say BULL M tk pk ki chik EY ha Shu ET yuyu vk toku

Віз Аха ге АБЕ чіу Тух Теж БО ВЕЮ ТУЮ ТЕ ОБІЮ ЗАМ ОБУ ТВИ МВВ. 105 ТЕ НЕК хг пт ве би похWiz Aha ge ABE chiu Tuh Tez BO VEYU TUYA TE BOTH FOR BOTH OF YOU MVV. 105 TE NEK hg pt ve by poh

Ууді Ких Уві ше ве зчк ом ся у АК «Ен АВ су дя хе 117 мечеея я дик, «еф - Біт си Штучна поспіпопвахижеUudi Kih Uvishe ve zchk om sia in AK "En AV su dya he 117 mecheeya i dyk, "ef - Bit si Stuchna pospipopvahyzhe

КАМ ХМ КОСТІ АКЕУМ А Ж шу т «ик х те - ехо бруут гту дух жи «ки СХ щу чих соспІлавБностві: дина тичНимх поліпептив «5 15 хр хто Ех Жосща ЗЕ у ую их Ах Кока жи с хжжи Ек Втр, змо УВА пап пи що Сім беж ба шу шу Бем ув а вхо Уж оку т щ- КУ 1 в 10 їх пох ХК не Фо ик В КК бр тк и Якою су ук ТуKAM HM KOSTI AKEUM A J shu t "ik h te - echo bruut gtu duh zhi "ki SH schu chich society: dyna tychNymh polypeptiv "5 15 hr who Eh Zhoscha ZE u uyu ih Ah Koka zhi s khzhzhi Ek Wtr, zmo UVA pap pi what Sim bej ba shu shu Bem uv a ear Uzh oku t sh- KU 1 in 10 their poh HC ne Fo ik V KK br tk y Which su uk Tu

Зак сей йхя Ма Бас Су лів апа зек зе пе тех ве бек мар ТУХ ту зх их ЙZak sei yhya Ma Bas Su liv apa zek ze pe teh ve bek mar TUH tu zhh ih Y

КУ КУ І ті Мао се іт др Уа І В т Тк Я Тех у щаKU KU I ti Mao se it dr Ua I V t Tk Ya Teh u shcha

Ве о Меб дах ТЕХ Уві дж бій ді о хе бі був Зі Бевз жив яв - пох -кVe o Meb dah TECH Uvi j bij di o he bi was Zi Bevs lived yav - poh -k

За й ай щу ек ту со ви її т тери пк ую Нр ли кум ки в шіхує хаFor y ay schu ek tu so vy her ttery pk uyu Nr ly kum ky v shihuye ha

Вів ТВу ї3в'схек Аявп о ЗІУ БІО ТЕ ее ОотТВвЕ тек ТУЮ БЕО МИХ зви ВЕViv TVu i3v'shek Ayavp o ZIU BIO TE ee OotTVveE tek TUYU BEO MYH zvy VE

ЗИ 5 поZY 5 po

Жов Ж ку ка фі ну ва у Кок Жди в у х Шоада тою о Щшан ПИ Х уя Мкх цеУз Б1У Ажсо ВБПе ТВ» бі дек бу ляро овал вх Бу аят тМНЕ ем ЖЖ -к пря ней неХов Ж ku ka fi nu va у Kok Хды в у х Shoada tou o Shshan PI H huya Mkh tseUz B1U Azhso VBPe TV» bi dec bu lyaro oval vh Bu ayat tMNE em ЖЖ -k pri nei ne

ВУ вв: НУ йо жо хі каз Фк ж пе КО М я шк ПИ 3 км их ке ку: ура ноя і-й БІВ Мес вав Зак ач та Аза Бій як Тих ді Ма отеє ТУук о пув мое пд доVU vv: NU yo joh hi kaz Fk zh pe COM M i shk PI 3 km ih ke ku: ura noya i-y BIV Mes wav Zak ach ta Aza Biy yak Tih di Ma otee TUuk o puv moe pd do

ЗХ а МОZH and MO

ОБ мух рому щока ик ьже зУфхну М бік бути ПИ Кк Жак ук ва ку ЕН Кому ТЕ В ЕВ У КН оре сани ко а В и КЕ Ма Вежі ман пу яOB muh romu cheek ik že zUfhnu M bik be PI Kk Jacques uk va ku EN Komu TE V EV U KN oresany ko a V y KE Ma Towers man pu i

МО ЕС М хх Яном ої С туюMO ES M xx Yanom oi S tuyu

Уві тик о Ущ пе ВЕ че З 135 дя ж «вій суч пох кі доли ли Я зшоне жи и ЗУМИТИХ кову тю 1 Ух ую УК ком пк «и УЧИ ОСЛО АСОМUvi tyk o Usch pe VE che Z 135 dya z "vii such poh ki doly li I zshone zhi i ZUMYTYKH kovu tyu 1 Uh uyu UK com pk "y UCHI OSLO ASOM

ЛКК ху кеех сон петля іхо о сої теме "худими і «их ХНИ Ще Ухил меси Ех сирими кіш КК «а 7LKK hu keeh dream loop iho about soi teme "skinny and "their ХНЙ More Slope of mesa Eh raw kish KK "a 7

Кен а б об га Ж бази ак о Мем о Ве ЛА Коко о ее ді був Бек йвЕж піз Звх Узі Сен о Тук Явке бег йжня Ос мув вва ТМ їв ї 5 їж іще кп щ дів кит гу В ву их МО КЕ я -їKen a b ob ha Z bazi ak o Mem o Ve LA Koko o ee di was Bek yveEzh piz Zvh Uzi Sen o Tuk Yavke beg yzhna Os muv vva TM yiv yi 5 eat still kp sh div kit gu V vu ih MO KE i - eat

Емо сен чн чеки вБаПЛОоЕEmo sen chn checks vBaPLoE

У тот я її г Її» мх сь кій» штУчнАа ПОСЛІДСВНІі стьIn the same way, it is artificial CONSEQUENCES

Кона вия см буцлух праву сон мовне ситим хв МИЩщИ МмхжчВаМ сс мБовнюмІ сити НММ дегемх ще тУуИ я щх «ПО івKona vya cm bukluh right sleep speech satim hv MISHSHCHI MmkhzhchVaM ss mBovnyumI sati NMM degemh still tUuY i shkh "PO iv

Зав КУ деку ма доуєну Мая УIn charge of the KU deku is Maya U

ТУ Вій Жак Те деко сю ВЕ 1 5TU Vii Jacques Te deco seu VE 1 5

СУ й В каш В ик В сеї Х «їй» Білож лаку Мт кет рими в ви ЕН хижа шжиУчнВ ПОСЛА ДОоВНисТВSU and V kash V ik V sei X "her" Belozh laku Mt ket rimi v you EN predatory shzhiUchnV AMBASSADOR REPORTS

ТУ жу «МУ злутуть пхжуфиу а не я софту ну шкфв у сук ютичиИ сеї «ТЕ сис шичнох послав кіІ Мне ІЄНМНИи пептиВ «о ІЗ це їм сх КА Стеж у Ку Му КбTU zhu "MU zlutut phzhufiu and not I softu well shkfv in suk yutychiI sei "TE sis chicnoh sent kiI Mne IENMNYi peptiV "o IZ this to them shh KA Stezh u Ku Mu Kb

Вл ск СХ УК оче Зак шах КО МЕVl sk Х У оче Хак шах KO ME

У БУIn BU

Ка ШИЯ киш вне НН жит КА АЙ шле В нтуу «ее ВАЛИК хх п дети хз вк Ка о, кві» цпвеучна посилено шу гуя кр полу ух уд шю пре вими рому у НИ я хо ше СИ штучних ККЗ КВЧ НТ УМЕ БУХ ЕХKa SHIA kish vne NN zhit KA AY shle V ntuu "ee VALIK xx p deti khz wk Ka o, kvi" cpveuchna intensified shu guya kr pollu uhd shu pre vimy romu in NI I want she SY artificial KKZ KVCH NT UME BUH EH

МЕТ Е са ло мер смт тири ко КК дк ТТ ж ЖИ Ко «о їх сі теж Тв Бве ТВ Те тую Тк Ме пів их. Ах 1 у М сет т тя «живих и шу. її «і» 15MET E sa lo mer smt tyri ko KK dk TT z ZHY Ko "o ih si too Tv Bve TV Te tuyu Tk Me half ih. Ah 1 in M set t tya "living and shu." her "and" is 15

ЯI

«иа БІлЛеЕЕ«ia BIlLeEE

КТ, Тему хтя и усу с жрие мет «я Нітучна пеЗиК ом ер ие суку «МОЩІCT, Temu htia i usu s zhrye met "i Nituchna peZyK om er ie suku "MOSHKI

Си нь ие зем БУ Моя ідея тує КУТИ «Ж НВ ЕЕ Уха Гм КНа ВНИХ ЗУ ЮХ замThis is the earth BU My idea is in the corners "Zh NV EE Uha Hm KNa VNYH ZU YUH zam

ІЕСIES

«ах 21 лу, ІЗ сне ь ше 7 я СЛ вхо Кх. пк Ки прю ке дОСЕУ я пу ж ит тех т ху Тух Ті Акз Бе5 ве Те сті бе Тео БІіЧ Ух дв о Бу СВе ї 5 при ох 1 5 16 їх сих оку"ah 21 lu, IZ sne e she 7 i SL vho Kh. pk Ky pryu ke dOSEU i pu z it teh t hu Tukh Ti Akz Be5 ve Te sti be Theo BIiCH Uh dv o Bu SVe i 5 pri oh 1 5 16 ih sih oku

Був Ав «ях Ку «іїThere was Av "yah Ku "ii

ХХ гоже саме йІЛОоВ еру Гру стригх скиту гії чи «і ШтуУучзнВОЇ ПОСпоудОоВнЕЬсТЬь сх поклик укра Я чу сухих ко сим я «дви шк кл «вк опис ШТУЧНОЇ ПОоОСсліцСВвОСеЕ ОМ НУ пайтий «4» й ооо пу мулу пк Кі пох мож ра ва ж Зк вхо їхрв очей М Мао КУх ї УХХ is exactly the ILOOV era Gru strigh of the asceticism or "and the artificial post-modernity of the thief's call I hear dry braids I "two shk cl "vk description of the ARTIFICIAL POoOSslicsSVVOSEE OM NU paidy "4" and ooo pu mulu pk Ki poh mozh ra va zh Zk ear and eye M Mao KUh and U

Вон туту «Ох иOver here "Oh and

Коль тут хо и со ше боки «кій Білок «і» Щтучна посли «ОО туту и АНЯ у ск писок сх. скуууха мк ух хи ОМС штУчВОХ пос дОвЕохх ОМ Уч пепТиК «4005 23 оси очі яю сх и У пт ОМ ум й пив С аж Жан ко Я ник ЖЕ - вв Ті ша Мет ТЕ і сек РКО зако оБеК Бер Бек За йеж Ухі 515Kol here ho and so she sides "kiy Bilok" and" Shtuchna ambassadors "OO tutu and ANYA in sc psik shh. skuuuha mk uh khy OMS shtuchVOH pos dOvEohh OM Uch pepTyK «4005 23 os eyes yayu shy i U pt OM um y pyv S azh Zhan ko I nyk ZHE - vv Ti sha Met TE i sec RKO zako oBeK Ber BeK Za yezh Uhi 515

Щі ря з ряLiver with rya

КЕ Я І З КЗ зе В КАТ ую я вп у пули лев 'яйсч Уа бТох лав ТвпХ ду в я о лк З ча я сеї1ї: 15KE I I Z KZ ze V KAT uy i vp u puli lev 'yaysch Ua bToh lav TvpH du v i o lk Z cha i sei1i: 15

Сина Янко Я ткезох тема МАЕYanko's son I am the subject of the MAE

Со ень жі их Я кекси «ша шШтУЧчНаА ПОоПЛУдДОВВЕсСТЬ вчSo enzhi ih I cupcakes

СОЯ по о кое и Не век УА підтлгтхВ се спис шЕУчнНИХ песдійсвнокиніІ срочно папи «а ЯїSOYA po o koe i Ne vek UA podtlgthV se spis shEUChNYH pesdiysvnokiniI urgently papa "a Yai

ЧИ кі ил тюю їди яку. у ен гук Ор Не ж ач їж тУЖ ав ощІвовУВ БЕ ем БУВ Вів Бо о БУуЗ Бей озеа пів ТУЄCHI ki il tyuyu eat yaku. u eng huk Or Ne zh ach izh TÜZh av oschIvovUV BE em BUV Viv Bo o BUuZ Bey ozea half TUYE

ЖЕ Техи о їо-о-ї х оо о ШИ що ї Уа хів з еВ ІДУ -р ів УЖ ї В 1 15 оо як же КТ «вії БілокTHE SAME Techs o io-o-y h oo o SHY what y Uahiv with eV IDU -r iv UZH y V 1 15 oo what about CT «vii Belok

АН Тем ж хв кеди В иа шо Шеечна поспбловнгсть ну и сшAN Tem same hv kedy V ia sho Sheechna posblovngst nu and ssh

Ук іх о ох реак с пихи ІКі зтектутуи и схуд ккал ки кри «най» бпис штучної посліноввосеих ситеичниЙ пептидUk ih oh oh reak s pyhi IKi tekttutuy khud kkal ki kri "nay" bpis artificial poslinovoseih syteic peptide

КК є кацшиж шеCC is better

Ірее Ко п а Ж аж бук Зо ТІ о Жир Хм тв іх їсв вве біп бів Буз тко Бі бе лій Брюс сви ше цево СЕ Тех я « зх мIree Ko p a Z azh buk Zo TI o Zhir Hm tvy ih ysv vve bib biv Buz tko Bi be liy Bruce higher tsevo SE Teh i « zhm

КУ Я М. Я коти «З» ов ж ло «Кз о ших КО ну «Ешіж вІдех шли джу. и ще лики ван ги «фам Штучна тиЗоліваВнНисУюь кутя «а ик мч ркулюю:. м ттуич М махи яри кети сіре вти хек й ПКС ШТУЧНО ПюСЛеМОВа Ех. сениKU I M. I cats "Z" ov zhl lo "Kz o shih KO well "Eshizh in Ideh shli ju. And there are still faces of the "fam" Artificial tiZolivaVnNisUyu kutya "and ik mch rkulyuu:. m ttuich M mahy yary kety gray tuy hek and PKS ARTIFICIAL PUYSLEMOVa Eh. you

УЗА реа Не «ЗО хе їх «хо да сту аю ом Мах пи тую Кр Фоахує у ПУ до Ша Я х оіУу Уві вже важ веч вМмаеа Беж зу ве ща у Зак УМ ве Авр о БОпа ТИЖ 3 Е ча АхUZA rea Ne "ZO he ih "ho da stu ayu om Mah py tuyu Kr Foakhue in PU to Sha I h oiUu Uvi already vaj vech vMmaea Bej zu scha u Zak UM ve Avr o BOpa TJH 3 E cha Ah

Ух Ко КИ ха - пе З бю Пі уле Жошшуй ТИ ус Кпеунн ок Ж ше діа З, - ооо уу мо уж. ех ухих їшйео ТБ іє беж бек бем сб Беос сіз Люю Се Віз їве о їУк ТУук о щув ту че тЖх «о ди не «ше яю м хх ОХ ЗЕ ме ху ху ж геч кеш Блок саке чні; жа омекочтьуєн к Х жуу юю УА муж.Uh Ko KY ha - pe Z byu Pi ule Zhoshshuy TI us Kpeunn ok Zh she dia Z, - ooo uu mo uzh. eh uhikh yishyeo TB ie bez bek bem sb Beos siz Lyyu Se Viz yive o yUk TUuk o šchuv tu che tЖh "o dy ne "she yayu m xx OH ZE me hu hu zh hech kesh Blok sake chni; жа омекочтюен к X жу юю UA husband.

Же ШУМИ КОС МОВИ УКУКЕ хх КрThe same NOISES KOS LANGUAGE UKUKE xx Cr

КМKM

Секік а чи уиулуткану ри а НН пили «иа Поло втУчнОЇ поспьпавеентві: питати пеліпептияSekik a or uyulutkanu ry a NN pila "ia Polo tUchNOI posppaveentvi: ask pelipeptia

Сн кт «ВО шо гл ки хг фени бух брате Жид Єр (бе ре аю ба Ер у м веду ру тру пі ві БЕЗ дек ЛУК Біжи ут ме му МЕ шу ТВ во кп пах - ї я т 7 тк ї о а НАУSn kt «VO sho gl ky hg feny buh brother Jew Yer (be re ayu ba Er um m vedu ru tru pi vi BEZ dec LUK Bizhi ut me mu ME shu TV vo kp pah - yi i t 7 tk yi o a NAU

Же те т Бриз бод кує токм УР у бруд ка ВО дух пух Мк ОхSame te t Breeze bod kuye tokm UR u mud ka VO duh puh Mk Oh

Мен отви їв век бек Щек біб ко сід аеро Ді тю ТК пе ухMen otvy yiv vek bek Chek bib ko sid aero Di tyu TK pe uh

СК Кк км схSK Kk km east

Коса «кіш БЕЛЛBraid «kish BELL

Же ШЕ КОС УутавнУстеSame SHE KOS UutavnUste

КияCane

Коко ер о А ск к ЩО кірум мм куки куМн т Кк: шеф гУіут «ЕОМ цях невручноик слави пивуKoko er o A sk k WHAT kirum mm kuki kuMn t Kk: chef gUiut "EOM these nevruchnoik of the glory of beer

ПЛИТКИTILES

«апп 28"App 28

ПМ їх юю жа КУ юку хи ля жожоба сю вка пі сів су хв Куй узі сі гі Був ака і х та дк ж «1 З тк ТК «ак до ню ух - суки свій БЕЛОЖPM their yuyu zha KU yuku hi la jojoba syu vka pi siv su hv Kui uzi si gi Buv aka i kh ta dk zh "1 Z tk TK "ak do nyu uh - bitches own BELOZH

МТС а охадя о михех и и мік «шлам щечнаА ВИС лОВиЕю слоMTS and ohadya o mihekh and i mik "cheek mud" I catch the word

ЖахHorror

СТУК у пути хуй ую сія учи ТКУ вуса ичи в кв кет зх «жи см ще МОЛІ синтажичНниМ пватидKNOCKING in the mouth, cock, siya, uchi, TKU, mustache, ichi, khv, ket, zh, "zhi, see, more MOLI syntazhichNnyM pvatid

Тк З в жа ек с: а і кн у - 1 КУ Гак Я с о 5 в певен КУ Гн се Мк ї я СУ МО ля. Ух ко КелУ жи є ЛЕ х щпІй Уві БІ зе) чаї зом Бек Збу зіу су вата с Ка шу щу і хх ку ххTk Z v zha ek s: a i kn u - 1 KU Gak I s o 5 in certain KU Gn se Mk i i SU MO la. Uh ko KelU zhi is LE x shhpIi Uvi BI ze) chai zom Bek Zbu ziu su vata s Ka shu schu i xx ku xx

Х Я їЕ ЕВ преX I iE EV pre

Бе том Б Ж т ож ФО ж. М у М веж мецожкч пцшо зек о су о іш ка се за оBe tom B Z t same FO same. M u M vezh metsozhkch ptsho zek o su o ish ka se za o

КЕ КЕ срок яром кю ВО ЗИ ее я х СДН ВН «й Білок и ря джина згфеакі парка синю ЩтУчнНя ДІЛІ ЛОвНауКЕ «ЗО» туя гри, мкл кий сет ий азам г рі «па З длиМма ше УЧИ ТОНІВ СМР ин пеки й тічА ЗKE KE term yarom kyu VO ZY ee i x SDN VN «y Protein and rya gina zgfeaki parka snyu ЩТУчня ДИЛИ lovNaУКE "ZO" tuya games, soft set y azam gri "pa Z dlyMma she LEARNING TONES SMR in peki and tichA Z

Ки ту 475 дусниви Я Я з биту ЖЖ Козу і я чиї їкр Уві яку Зій ваза хо Беу душ си Мей БО ТЕв Ух 1 5 19 «із З «как За сонна че Ко «вії Білак бут ех що схтхууі дек чтKy tu 475 dusnyvy I I from the bat ZZH Kozu and I whose egg Uvi what Ziy waza ho Beu dush si Mei BO Tev Uh 1 5 19 "iz Z "kak Za sonna che Ko "vii Bilak but eh that shhthuui dec th

СЯ Щемчна пев вь вит пкіх меч ке хSYA Shchemchna pev v vyt pkih mech ke h

ПтКЛЕ дк, біта іп спеку правду укл й «ик СКМ МКУ мВО после давнвиОостве шен чниИ поліпаотид дек в «асо З фран фік Маю Сл шк йо Мк СрЕХ ж срктио лк Мф ВОЮ ре тка.PtKLE dk, bita ip speku pradu ukl y "ik SCM MKU mVO posle davnoOostve shen chni Polypaotid dec v "aso Z fran fik Mayu Sl shk yo Mk SreH z srktio lk Mf VOYU retka.

Аку пе тТпжх щі чек Аза де ЇВ зах був вал о жвх Вів тує Бен М х щх жо якAku pe tTpzhh schi chek Aza de YIV zah was val o zhvh Viv tuye Ben M kh shkhh zho how

А о А як хх пох Су щує ор ШХр здму МВ де р в Ю ие и аA o A how xx poh Exists or ShKhr zdmu MV de r v Yu ie i a

Меє дав бек їм пут Віа сх дю бл АК Уві Тух Тух бух тудх КК чтMee gave back to them put Via sh du bl AK Uvi Tuh Tuh buh tudh KK th

КУ ко як;KU ko as;

Коль лих «10» иKol lih "10" and

Са ШеSa She

УЖ кої х щи «тую ШЕ ти «кішУ БілоОхUZH koi x shchi «tuyu SHE ti «kishU BiloOh

АСК ми Піхмхсжруи стик ур и, хх М ЩЕ жчнНЕ КІОЛІ ОВНА ТУК «Чех отиту Ух. Поу ки жу м спор ВХ и А пз жісл юна ик ВИ ОД РУЧНУ ЗБУТУ МИМИ КО КБУ КТ УРН УНЯ пацтМл см Оу пулу «850» де пет Я Ку КА. що то ск жу КО їжюр зі бі СУ Тих зе Уві Вк оУВА БЕХ 1 дез 18 «Ки а «Я 1ASK mi Pihmhszhruy stik ur y, xx M SCHE zhchnne KIOLI OVAN TUK "Cheh otitu Uh. Pou ky zhu m spor VH i A pz zhisl yuna ik YOU OD MANUAL SALE BY MY CO KBU KT URN UNYA patsMl cm Ou pool "850" de pet I Ku KA. What do you say?

ТЕ СЕTHESE

Коха «і ВЕДЕKoha "and LEADS

Ул Мазі ких У т и «Ех шЕнчна пасли лОвНске хх уЯ З ж ну Фея пирзламиую педілновениві хх ревом «ик бмпрР Чцеручнаю песліІдовнНОосЕІ СИНУ. пептидUl Mazi kih U t i "Eh shenchna pasli lovNske xx uYA Z zh nu Feya pirzlamyyu pedilnovenivi xx roar "ik bmprR Chcheruchnayu pesliIdovnNOoseI SON. peptide

«й» 33 а: тк що Я м кі "у: л Моз дух"y" 33 a: tk that I m ki "y: l Moz duh

В ів о пеж сь йще Бе шах аа КУЄ рем о АяВ вка вів пе са йо пе к Я ХV iv o pej s ysche Be shah aa KUYE rem o AyaV vka viv pesa yo pe k I X

Н ся х «хаткаN sia x "hut".

ХЕ 34XE 34

КаринаKarina

Хе З ки» ВЕЛО ух, Думу пікові нтв ків Штучна послідовні йте шт гу ж І терм Й п Ве ТДКАне ни їх он пис ЛУ 5 ЯМ МКУ «ших мит штУуЧНОЇ ПОСНІДОВНеСИХ пегптий «капОх лаHe Z ki" VELO uh, Dumu peak ntv kiv Artificial successive ite sht gu zh and term Y p Ve TDKAne ny them he wrote LU 5 YAM MKU "shih mitStuUCHN sDVNESYH pegptiy "kaPoh la

А т У одо фх 7 Тк бах ву бе; Нів Вву тек Тк нет ак і Бів ЗA t U odo fx 7 Tk bah vu be; Niv Vvu tek Tk net ak and Biv Z

Й к ре я яри ТУ як й ко ОуAnd kre i yari TU as and ko Ou

СОН : : «Ді З ке МАТНУК ще 133 Шечучна месслігзамі ст «ІА» Штучна псоолідею се о Й штам . . опи УЧ їі уки ж сина тиннця : й чнаї послідовно: синтетична «иа» СНчисє преУчНЕеїЙ ПОЛО ДеВнОЕЯ г пет «НІ» 35 сп ослівн лу дес Таж їв: Вжее тую тТВхSON : : "Di Z ke MATNUK more 133 Shechuchna messligzami st "IA" Artificial psoolideyu se o Y stam . . opy UCH ii uki z son tynnets: y chnai consecutively: synthetic "ia" SNchisye preUchNEeiY POLO DeVnOEIA g pet "NO" 35 sp oslivn lu des Tazh ate: Vzhee tuyu tTVh

БУК АХ Ху УВК МЖК хBUK AH Hu UVK MZHK h

Би т «ер: ЗВ кла ВуBy t "er: ZV kla Vu

Туди Ко З «йішх Білок п тучю В з - перур т усу янв «вій» Прррчма послідовніTudy Ko Z "yishkh Protein p tuchyu V z - perur t usu yanv "eyelash" Prrrchma consecutive

Ор .Or.

Баня й ї х да у ще авос шуй голов: дими чНих «Ва сниех інфФуєноУї посі леоВвОмО: пептид «а ле і с ца с На три аж ер ож вка мак ше ії ква Ти бе Беж ТУШ ОШжУЖ КВ В те ау 5 в 3 їх в-яBanya and ih da u still avos shuy heads: dymy chNyh "Vsnyeh infFuenoUi posileoVvoMO: peptide "a le and s tsa s Na three azher och vka mak she ii kva Ty be Bej TUSH OSHzhUZH KV V te au 5 v 3 I have them

Соч ЯКьке ря «кі сі ІВ оч ро че «кіш Біла у. ЕЕ. сх ХЕ грижа сю гук «ж Б НКУ ня: пен КЛОН СЮSoch YAKke rya "ki si IV och ro che "kish Bila u. EE. сх ХЭ гриня syu huk "zh B NKU nya: pen KLON SYU

МТУ ІMTU I

ЗДА ї пед пет сива нн. ї ; ї. ї СЕ ПІЦИ ІМЯ ГУКZDA i ped pet siva nn. her eat i SE PICI NAME SOUND

Не й шт уцної ТОСТІВ КМ о «си» опУє штумноОог поси пелуми «ап 37 ще че руб дае Чвхи щіNot even a piece of TOASTIV KM about "sy" opUye stumnoOog posy pelumi "ap 37 che rub dae Chvhy shchi

А СК яні, Бан Уся ле к ще ї- Ко т уЯ Буту авЕ шах щA SK Yani, Ban Usya le k sche yi- Ko t uYa Butu avE shah shch

Її Ефес ІМ ВЕ те КО Уу: Хо й : ї ОмжЕЖ ми ХУ ЗИМА й ща тв Гі пе Аж су у Ук їй хх Я ї З хів Ех му у ту жем - їх МА З ВHer Ephesus IM VE te KO Uu: Ho y : y OmzhEZH mi HU ZIMA y shcha tv Gi pe Azh su u Uk her xx I i Z hiv Eh mu u tu zhem - ih MA Z V

ІкруCaviar

Хек ря Ж. х ке я ж г чок ВИЛО КHek rya Zh. kh ke i zh g chok VILO K

Кур нумзттуу о пжкчеу В як З селу ж БІ МУКУ МНВ ПОС ВОВНУ те. отут «сих ил пору чном с рек нки до - сус хишаМ лих штУуч ваї стюолідеЕНИЧЬт пили МЙ пе Хх ш й рю «Оз ЗВ йно жиє ду тро уІіч слихуро Пк ах ожKur numztttu o pzhkcheu In how From the village same BI FLOUR MNV POS VOVNU te. from here "sikh il paruchnom s rek nki do - sus kyshaM lyh stUuch vai styulideENYCHt pili MY pe Хх ш ы рю "Oz ZV yno lives du tro uIich slyhuro Pk ah oz

Між Акс обве дво ЗУ тес Ток вне АВ ЖУКBetween Aks obve two ZU tes Tok vne AV ZUK

І 38 1 а ТО чи я од Я тю я тх «піл 41I 38 1 a TO or I od I tyu i th "pil 41

УЮ ТЕ тї-2 киш ВПО «ва Дрручивз послідовні сгюкх яUYU TE those 2 kish VPO "va Drruchivz consecutive sgyukh i

КОКОCOCO

«Ав Сули чої послів сивини"Av Sula whose ambassadors have gray hair

МТ юХ.MT YuX.

ПЕМТЕМХ яті ЕЕ «ре ЗPEMTEMH yati EE "re Z

М й ва ен (Як бурею жк паю ротM y wa en (Like a storm my mouth burns

Аївз вхо бне дя о сіу ТуК Ті рив двв о отТух во ря їхAivz vho bne dya o siu TuK Ti riv dvv o otTuh vo rya them

М ш їс ол їз ке о рр чі чі ЗM sh is ol iz ke o rr chi chi Z

Со ее кти ша т ЩЕЛОКSo ee kti sha t SHELOK

Беж ання Ні Фкав т тки гір ст «вах Щтучна лпослідсвнаісвь о я «РА «ху ект ЗЕІк у. спеку стиків я пул кед хи се уча УБИВ шимиRunning Ni Fkav t tki mountain st "vah Shtuchna lposlidsvnaisv o i "RA "hu ect ZEIk u. I faced the heat when I was studying the KILLED ones

ЕЕ ПЕЧЕ дод ух г ж З М З о ік Укра р ме Же п нутує йожи коша шт ди Ток рі М дк мк ку ж ож пс жна ЇДдх А О5шЕ крою тиж мах ву ОК лих ї ЗО КВН дих : З їх ї а їх Б МЕЕ ПЕЧе do дух h ж Z M Z o ik Ukra rme Жe pnutue yozhy kosha sht dy Tokri M dk mk ku zh osh ps zhna YIDdh A O5shE cut tyzh mah vu OK lyh yi ZO KVN dih : Z ih ih a ih B M

Ак щу Ку те Же Ж що У шо мли яви токах ТИ КакAk schu Ku te Zhe Z that U sho mly yavi tokah TI Kak

Мек Аа бек дез йха дів зЗіс вщю тйх вів ве стую УК Су жо зи лиMek Aa bek dez yha div zZis vshyu tyh viv styu UC Su zho zi ly

Ктуя гру й жи калі ВЕKtuya game and zhi kali VE

ПЕК, Б ур у в и ее яр тео НУ ч сиди ми я мч ЛИ ЛЬОН Мех я я ТУ пе хви с моих їх зу пити НВ тучних ОО СМТ тиИниМ пептид код люту ж й «ВПО а божу ЗА хх МВ кю ж он ж о у ру У ух сю ові Пів спіу Типова Уаї с тТве Уві ек зе т їх Б 4 М їмPEK, Buru v i ee yar teo NU h sit we I mch LI LON Meh I I TU pehvy s my their zupy НV tuchnykh OO SMT tiYinyM peptide code rutu same y "VPO oh god ZA xx MV kyu zh zh zh o u ru U uh syu ovi Piv spiu Typical Uai s tTve Uvi ek ze t them B 4 M them

Кран до «ЕЛ й «иі БЕ ачноя ИЙ: «дяки ВІЛОЕ не у ау ци «ри оо варив ги: -Е «ах 5Faucet to "EL" and "ii BE achnoya IY: "thanks to VILOE not in au cy "ry oo boiled gy: -E "ah 5

Мк: ЩІ ие ша Ша НК Шк о НЯ ША Ш ток их бук ха КК ах у ТиMk: SHCI ie sha Sha NK Shk o NYA SHA Sh tok ih buk ha KK ah u Ti

Мек Дів без Роз Тк Але вка Вко бевБ ве сдіу ек осСув ШЕУ Те БЕЗ і ко сх Ек 1 З 1 їхMek Div without Roz Tk But vka Vko bevB ve sdiu ek osSuv SHEU Te BEZ and kosh Ek 1 Z 1 ih

Зх СОУ є ба Ж іх ке Хо Зах КЖйхає о ткач Тож хж МЛZh SOU is ba Zh ih ke Ho Zah KZhyihaye o tachch Sohzh ML

Віа їж діє йех дес їхні КБе рез пеб бе вк обем су Тк ом сій що ша заVia food works yeh des their KBe rez peb be vk obem su Tk om siy what sha for

Єіднию До брумо тох З оау тах ра ек тра; вд ті уз в дим то ок Ах вх їжц Віа Зі МО ЕАЙХ ОХ вк ошЕ У іже САМ опа А КЕ МОХ се щей М ї5 жа УYeidniyu Do brumo toh Z oau tah ra ektra; vd ti uz v dim to ok Ah vh ihcs Via Z MO EAYH OH vk oshE U izhe SAM opa A KE MOH se scheche M i5 zha U

ДИ лі туя ж тан УЖ тих ск х Око НШья їх Ву їх фоDY li tuya z tan UZH those sk x Oko NShya ih Vu ih fo

Зврозіу Уаї їем Аза дво Бу» Бо дей фе дех Бех без дВх Бко Вед т су щиZvroziu Uai iem Aza dvo Bu" Bo dey fe deh Beh bez dVh Bko Ved t su shchi

ВУ но оVU but o

Аж дощ ух мк давня Сг Мн АСК с Олю ХХ ща Сл у ую тт іо їм 0во осі Ре бко Сув Зув Спів бі Бек шу Сеа ех ТвЕ пр «к --д ек щеUntil the rain uh mk old Sg Mn ASK s Olyu XX shcha Sl u uyu ttio im 0vo osi Re bko Suv Zuv Spiv bi Bek shu Sea eh TvE pr «k --d ek more

БО Це ЇВ о пу: хлнї Ел 13 тм хі г сне шк Тс М согж сту ЗИ Жогуєу ЕЕ вка УЗ АкЗ ба ев Аза УВА АТ їжи Вів шхп Му з Аши УА Муш Бе ях зо З дя прю з ЗІ с й тут Жоух ув нач я ж уч са йуєих Же дет ТВж біб са їв Ак Суз без Ах із Ак бо де ло вка ВКо сх тик ах 100 105 її т дев ті й оо Жомує ТК ї В ЕД с її Вк ема Ве Ши ів Ашю цеЗ лю дів ей Бжо Без ше оїве Бер цеб вва їмі3 Двво Вже с й х м їх их х с 115 їі їх й шу З я щМ-ез її ж іст Же У ку Аля ра о Жоуєих: Ся що ТУ м сб цу КІBECAUSE This is YIV o pu: hlni El 13 tm hi g sne shk Ts M sogzh stu ZY Zhogueu EE vka UZ AkZ ba ev Aza UVA AT eat Viv shhp Mu z Asha UA Mush Beyah zo Z dya pryu z ZI s y tut Zhouh uv How do you study? ey Bjo Bez she oive Ber tseb vva imimi3 Dvvo Already s y h m ih ih kh s 115 ii ih y shu Z i shM-ez her zh ist Zhe U ku Alya ra o Zhouyeih: Sya that TU m sb tsu KI

Авр дів не бек С1уУ БЕБІ Аа Суз ТМ о Аха Бе Бе Хву Ас її я олря я 7 чих що 155 145 пз ї що ше тля й тозвут о бок Муки у УКВ їх Шк 1 чат ХХAvr div ne bek S1uU BABY Aa Suz TM o Aha Be Be Hvu As her I olrya I 7 chih that 155 145 pz and that she tlya and tozvut o side Mukya in UKV their Shk 1 chat XX

Те гув Аїва дво Уді Ав бен їж ко хо піт Аква Бк Бій Ах п тА "а " ув зда 445 Кл ай кає плити окт Ж Ук я вчу - Ж как ТО же Зо сит ту уки с бик тмTe guv Aiva dvo Udi Av ben eat ko ho pit Akva Bk Biy Ah p tA "a " uv zda 445 Kla ay kaye plates oct Z Uk I study - Z kak TO same Zo sit tu uky s bik tm

Ака бес Їх Еко Аза Аїз Бей Віа Суб Тжкробі Уді Вк 51 бах Гео ів5 ї170 15 тихі Ж КТ Ки дю ДЕ ен в нь и АН о а Я ШН З й бує То іжма чек щі дід ав о Маї Ах дів їх 51У Біб БО бів Сув Аврь їнуц їй 185 їз ух. КУ ско рути бі Ж Ід кіля лах МІ г ож ши - ле» Тих неAka bes Their Eco Aza Aiz Bey Via Sub Tzhkrobi Udi Vk 51 bach Geo iv5 i170 15 quiet Z KT Ky du DE en v n y AN o a I SHN Z y buye To zhma chek shchi dad av o Mai Ah div ih 51U Bib BO beat Suv Avr yinuts her 185 iz uh. KU skruty bi Z Id kia lah MI g ozh shi - le» Those are not

Бгто Зі Аку пе ві АЛЬ таз шк бів Біб УА ев ем бко дкЯ Бех ану І лекBgto Zi Aku pe vi AL taz shk biv Bib UA ev em bko dkYA Beh anu I lek

ГО У «АКА їх, ше оо ложки Ер чи жи Жука Лук ЩО Му Тут ХА ія щі що у ча сек Муз ка ж Ж ЕКО мем ле сов АЯЗО саАпоБАТ ль мів а ВЕУGO U "AKA them, she oo spoons Er chi zhi Zhuka Luk WHAT Mu Tut HA iya shchi what u cha sec Muz ka zh Ж ECO mem les sov AYAZO saApoBAT l miv a VEU

За п Я вень и ек . яко чн лк т Ухі дю т Тудня тв бу 1 ях ТУ Тк Мои вом ту»For p Ya ven and ek . as chn lk t Uhi du t Tudnya tv bu 1 yah TU Tk My vom tu»

РКАЖЮ КЕ НИЗ «КУХЕ МОМ АЮ КВК. КО та т Мк ау БубБ о ЕжО Бех ТНК т ше м зп зх зайRKAZJU KE NIZ "KUHE MOM AYU KVK. KO and t Mk au BubB o EzhO Beh TNK t she m zp zh zay

ЕХ реЗшНа «ї во ОК ач те 2 ах чую АХ я Кч РАК Ж Ту МАШІ ФМ: Чех щук хг чиї уЕХ reZshNa «i vo OK ach te 2 ah hear AH I Kch RAK J Tu MASHI FM: Cheh pike hg whose y

Хвк уві Ват ТКЕ Мей де вшвіьжи виш сху і«зц пев ВЖЕ УВА ть ЛУ в'я ж НУ й Бе В; ш їх ТУ г в т- ще дк ЖК и и ск СИ ну ние вел шроти бів рІЗ тів Тіє Бкоп ек фі Бр ШЕ ру КІВ 'УЖІ ВІВ АВ ТК КУ ек ей ня ; еще жо ОЙ ут оух Води Сех Зеухм Аж ви філе ну ве ж Ж ми лі и А ж ше ву охHvk in Vat TKE Mei de vshvizhi vish shu i«zts pev ZHE UVA t LU vya same NU and Be V; sh ih TU g v t- even dk ZHK i i sk SY nu nie vel shroty biv rIZ tiv Tiie Bkop ek fi Br SHE ru KIV 'UZHI VIV AV TK KU ek ey nya ; еще жо ОЙ ut оух Води Шех Зеухм Аж вы филену ве ж Ж мы ли и А ж ше ву ох

Зіз вс бек бек Аху аз оБко сек Кр дк ПІВ оБхаЇ 1 АБУ ТВ ТіZiz vs bek bek Ahu az oBko sec Kr dk PIV oBhaY 1 ABU TV Ti

В ше КК то в, що - ЗЕ Же Ту у аа я но м лу рака пох ес во вто Вк Ве вої бл пів Ве ал Бу ТК ВАВ Су ЕС щеХWshe KK is in that - ZE Zhe Tu u aa i no m lu raka poh es vo tu Vk Ve voi bl piv Ve al Bu TK VAV Su ES sceH

У ЗИ и. Фо Жорж ЩО жо о пуп жук о пт а по ов зи їжу му Буш як СюЄф мМАх Ті йж Комо Хек мех МОЖ ОЖІНИ МК МУ ли у ст до туї піц ру гі зп зі Зї5 За й Кая ж ож С аж жо АС В ЩО М МК ощ Мощі Мр КВ о да тр іч іже пів віза су Мі БО Аза Ав Бе зле ій ТЕ ЗіБ мех зва БЕ ЗВ и же їж у, МІ. ж Ге т нео молю юк Кз у : То ст ХЕ зу от, дао Ак Хаї яв Вів лі БК вве Тих Теж Оїч бій ев ане УВО Бе ча 5 ще аю маш ЗIn ZY and Fo Georges, what is the navel, the bug, the fri, the oat, the food, the bush, how is it, how is it, how is it? M MK still Moshchi Mr KV o da triche half visa su Mi BO Aza Av Be zle iy TE ZiB meh zva BE ZV i same izh u, MI. same Ge t neo molyu yuk Kz u: To st KHE zu ot, dao Ak Khai yav Viv li BK vve Tikh Tej Oich bij ev ane UVO Be cha 5 still ayu mash Z

Же Тоєхука СТ круг пух ую щу Муки КК кА но НК Я ж уж Щі ув зем АВросів бай тує БЕЗ шій ЗКУ ТЕ БКЗ бі бек Уву зак не шик ла ла ЗThe same Toehuka ST circle puh uyu schu Muky KK kaA no NK I already Schi uv zem AVrosiv bay tuye BES shii ZKU TE BKZ bi bek Uvu zak ne shik la la Z

В мк Ж х КИ Лю б жов ЖХрує ту я ше до пу векуй САН іму ПИ ухВ мк Жх КИ Лю b жов ЖХРует ту я ше до пу векуй SAN иму ПИ ух

Те бів Ніз їево пі» ТУ МКео о ббеобец БУВ МеВ ех ко Б: аеро т УЖ іх ХХTe biv Niz ievo pi» TU MKeo o bbeobets BUV MeV eh ko B: aero t UZH ikh ХХ

КУ) 375 БУ суне інн "ж. то та Маю ою То С ЯК НКЯ пф шу Жовква дже був ТК Али Ме ТОЖ пеж дими ів лВЕ Бех дея й кн ММ ТИХ шоку Е й. пре: зх Фу, ду 85 35 75 яп ож ня їх Уь рану о х по жи жу о Ми хх І Тай бли ка бом чаї Али мув ЗКУ Ні Зі1о Мес оБек ро бів ' УВ БЕ тає емо обів ля я ше я 315 415 зKU) 375 BU sune inn "zh. to ta My oyu To S JAK NKYA pf shu Zhovkva je was TK Ali Me TOZ pej dimy iv lVE Beh deya and kn MM TIKH shoku E y. pre: zh Fu, du 85 35 75 yap marry them U ranu o x po zhi zhu o Mi xx I Tai bly ka bom chai Ali muv ZKU No Zi1o Mes oBek ro biv ' UV BE taye emo obiv la i she i 315 415 z

Прут вх их чеше Стук ую плоюю хх тону жош ояу М що спжкю рак ув у уRod uh ih cheshe Knock uu ployu xx tone josh oyau M that I will eat cancer uv uv uv

Хка яБбе УББ омузв пу АК щу ша ва вшЮ мух а» Так рей ав ТВHka yaBbe UBB omuzv pu AK schu sha va shYu muh a" So rey av TV

Кн й Сея йKn and Seya and

СК БЖ 435 со ск о тм Ффеужжео о Жужчу А у тоді тиха кдд ка при, КУSK BZH 435 so sk o tm Ffeuzzheo o Zhuzhchu And at that time quiet kdd ka pri, KU

Іямі бик дів вве жує Бо щі Тук без Сужовак беб Звк ко Зо и пл х в а 448 445 кое оц шк кт ж у но нн Шк НН Не НН ан без деж бек Уві хо БОЇ сем ошек Ів Тр Вл Уві вез БКо Би же щи щі й І що ЛЯ А жо Ту ха Усю КК пад їх кл рек Її їх лк ха: Жим, Ух же ух шк. з тез Вав те су Ав о СеЗ лю сп оце лев Уді пе тую рко бух ЛІВ сок ПОТ за Бо зах І СД: ЗкIyami bik div vveze z Bo shchi Tuk bez Suzhovak beb Zvk ko Zo i pl x v a a 448 445 koe ots shk kt zh u no nn Shk NN Ne NN an bez dej bek Uvi ho BOI sem oshek Iv Tr Vl Uvi vez BKo By same shchi shchi y And that LYA A zho Tu ha Usyu KK pad ikh kl rek Her ikh lk ha: Zhim, Uh same uh shk. from these Vav te su Av o SeZ lyu sp oce lev Udi pe tuyu rko buh LIV sok POT za Bo zach I SD: Zk

Мк жо у рю и в АН НО о Нв НН Ша їха бе діа бе сі ваз Мек Ази СУ ах піз тую бме УБЕ Су отв и се кеMk jo u ryu i v AN NO o Nv NN Sha iha be dia be si vaz Mek Azy SU ah piz tuyu bme UBE Su otv i se ke

В АМО ВIn AMO V

Аня Фк одні КАЛ ее ная СУ уки МУ Тк Хе її я ни жи лк шій жа вМае о с Мід М КХК ОК МИ О МЕ ш у жк Ж М ОО Х розм дено евAnya Fk one KAL ee naya SU uky MU Tk He her i ni zhi lk shii zha vMae o s Mid M KHK OK MY O ME sh u zhk Z M OO H rozm deno ev

Я ХК КОI'm HK KO

Коня Зк дя лу баку Кік ох Тож пром Ж кл ко ох Жду дю мя біп піз Зво Уа бек Мес вве зем вів Тв бе ме без Бей Аго БЕKonya Zk dy lu baku Kik oh So prom Zh kl ko oh I am waiting du du me beep piz Zvo Ua bek Mes vve zem viv Tv be me bez Bey Ago BE

Вів ЩО тутLed WHAT here

КЕНЕ веж су бе доба лу т вуха. у м а І АН ША НИШАНН ни ин аKENE towers sube add lu t ears. u m a I AN SHA NISHANN ni in a

ІЗ дів Ук без бко Бех ТЕ бі діва блю Ма о вче Без цер жу ця Ек ориIZ diva Uk bez bko Beh TE bi diva blu Ma o uche Bez cerzhu this Ek ory

Зо Ух Вже теку М до ле 233 13 233» Тем їли хи Ви ді ія юс Мі що жи Мих Хр ЖК усех т МАВ о УяЯх АЮ А У МЕМ МУХА лм ж мпрч опІвВ ов» БЕОб ся ву З пах ВО аа ВИ п їрх уєом У тону Сх хх Же Бо КЗ ом пок ошкжу ТЛ їх ач як дви Тк» осів ої Ака пів душ лав аво вве Бео даю Те ії бБіФ ев по доти - хо - 55 о 78 я ємі ХМ ОчИ он а Му ух ож шо ния ЯН ток то поки рояZo Uh Vzhe teku M do le 233 13 233» Tem ate ky Vi di iya yus Mi chy zhi Myh Hr ZK useh t MAV o UyaYah AYU A U MEM MUHA lm zh mprch opIvV ov" BEOb sya vu Z pakh VO aa VI p irh uyeom In the tone of Sh xx Zhe Bo KZ om pok oshkzhu TL their ach as two Tk" osiv oy Aka half soul lav avo vve Beo give Te ii bBiF ev po doty - ho - 55 o 78 I eat HM OchY on a Mu uh oz sho Niya YAN tok tok roya

Зам Її За Бі БУ дів Во мат чу Хухк Б УВІ ей вв се ек кт Ом поеFor Her For Bi BU div Vo mat chu Huhk B UVI ey vv se ek kt Om poe

ЗВО Зх в х ша що т а т вах ху Я и ру ун бі Жов Ж УМ ху ККУ гак; уЗВО Зх в х ша что та т вах ху Я и ru un bi Хов Ж UM х ККУ гак; in

Мес зах БІВ діз сей сек ее Тахо ово Су бо їн Бі свкш шу виMes zach BIV diz sei sec ee Taho ovo Su bo yin Bi svksh shu vi

Щи а, теThat's it

З вай ВІWith wai VI

ЗІ -- шк. ке жи Ш Ще жук Ж хіх Тих М Жах От Ку мZI -- shk. ke zhi Ш More bug Ж хих Тих M Жах От Ку m

Уа цес тн Усі ви бів бе їн ев вів Бест ТЕ ев лав шт шк деул с Ок бе оо НОМ «10 45 ся тк «іїз ца жо ШЕ ккд ЛИЖ кору отух Баче я. порок чн «Вій ово завівUa ces tn All of you biv be yin ev viv Best TE ev lav sht shk deul s Ok be oo NOM "10 45 sia tk "iiz tsa jo SHE kkd LIZH koru otuh Bache i. "He started this

Кана доліKana of fate

Я ЕН Б: г. кції т - сок нам Во жк жує сну Ж ки Ж кім с ох яр ох ит у Мох км УВА са Буш ТНЖ Віа Су жа ше зу Буж же АВ жа сам КІВ з га їй (зЕ х ха 3 що а их са ому пло ЖУК Чака Доу и мух жен в т а ве ве жоня аАвВви оЗЧів шт за Кі Бе тую Бу зу Укр зів Бей ей Кя сСуво Уч сртх зх з о Бе ЕВ: бат під і ст в'я ть і Кв поз пн Мо Фото ре пу ях дів Аза їм Бпей авів тТАаАх ід Ме їх лак тк ох аа каш ВАШ КОЮ ща Я» я; не СП М ка ння на На жк Жов оХ хоми Яд Єоюуу ух Момему Й вкI EN B: g. ktions t - sok nam Vozhk zhu sleep Zh ki Zh kim s oh yar oh it u Moh km UVA sa Bush TNJ Via Su zha she zu Buzh ze AV zha sam KIV z ha ila (zE x ha 3 What is the most common cause of Chaka Dow and his wife? Kv poz pn Mo Photo re pu yah div Aza im Bpey aviv tTAaAh id Me ih lak tk oh aa kash YOUR KOYU shcha I" i; not SP M ka nnya na zhk Jov oH homy Yad Yeoyuuu uh Momemu Y vk

ЖтнВ ЛЕ бух зале чн ве оювук Ух ЖеЯ Оу ЖО КК Же Тури Ж НК пал ОЕМZhtnV LE bukh zale chn ve oyuvuk Uh ZheYa Ou Zho KK Zhe Tury Zh NK pal OEM

ВО Ба КО; бурею Дуже ГК ху би МУ ВЖЕ са Ко жду ці 7огух КУ: бик тVO Ba KO; storm Very GK hu would MU ALREADY sa Ko zdu these 7oguh KU: bik t

Тшк о Бхо щі Зб тую Бу аа ек уві її спів НІіЗ ва дію тую бе як Не ск щ-к ще С ; щеTshk about Bho shchi Zb tuyu Bu aa ek in her song NIiZ va action tuyu be as Ne sk sh-k still S ; more

СУ що ко реж турах Така про лаку ги Тр шу я у усиж то ую ою Ха ЖК с КуSU that correj tura Such pro laku gy Tr shu i all syzy th u oy Ha ZhK s Ku

Бе цем» пу Ме декорує іч АВ їів ка пуз ТЕ ба) УВІ ТБУ бехBe cem» pu Me decorates ich AV iiv ka puz TE ba) UVI TBU beh

ОА за щу т о«Уї па сУююж сбоджях ок У тиву я і под «УК пу т ажик о гл ах дн 3355 МУК зевозаию ле ер Був Вів їі ше ошаь УВІ яв Ба БІ Я з3О ме сут ях я ра ех ЯК роя Ж. ян, пе МЕ, хх ЕЕ и Жтня З Бе Т5 Хек туї Ья ич У у пжор і ЕчжЯ Кк є і Яке бр ТЕХ є хе с е том » с их т: : дак РКО сіб Уа ха їв ем сі аво Аж вве суєь цу сім ви ВІУ як жом, прю 115 ХК КохOA za shtu t o"Ui pa sUyuyuzh sbodzhyah ok U tivu i under "UK put t azhik o glah dn 3355 MUK zevozaiyu le er Buv Viv iii she osha UVI yav Ba BI I z3O me sut yah i ra eh JAK roya Z jan, pe ME, xx EE i Zhtnya Z Be T5 Hek tui Я ich U u pzhor i EchzhYA Kk is i Yake br TEH is he s e tom » s ih t: : dak RKO sib Ua ha yiv em si avo Azh vve suye tsu sim you VIU as a jom, pryu 115 HK Koch

ВАВ їв х К, Фк рт Фо Чефруамо т дк же чн АН пів м; Аве був Ар Тв во беротву со Таях Дів оБне уко Вхе ці що дув цеж кю 135 ія гру Хі жк уж То ХО ка СТАЖ Ба У я жи не Стани У Ж їх с їж Бей Суд ех мо Зек ву бе смс змі Бек зе Уві ко Бге ех з ів 5 мк ї55 Мяю УЗ 5 се ЖК де ую лето що хек о Куе пл щожак даухаМ ож Мушу я же дек о їіє ТЕ Ві Уві вх ско бів Ази они АяроЇпкЕ Сув Да БУКІО КО шо яти тк 185 ТО ТУ р Ж йди дії за ко шк оз юн м 51 ту и 1 пе У ше се Аво Уві пев тує БЕЗ Бу Ва лю Мен дія ВР ій ДНЮ МЕ;VAV ate x K, Fk rt Fo Chefruamo t dk same chn AN piv m; Ave was Ar Tv vo berotvu with Tayakh Div obne uko Vhe tsi that duv cezh kyu 135 iya gru Hi zhk uzh To HO ka STAGE Ba U i zhi ne Stand U Z ih s iz Bey Sud eh mo Zek vu be sms smi Bek ze Uvi ko Bge eh z iv 5 mk i55 Myayu UZ 5 se ZK de uyu leto what hek o Kue pl shtozhak dauhaM oj Mushu i same dec o iiye TE Vi Uvi vh skobiv Azy they AyaroYipkE Suv Da BUKIO KO sho yati tk 185 TO TU r Wait for the action for the cat oz yun m 51 tu i 1 pe U she se Avo Uvi peut tuye BEZ Bu Valu Men deia VRi DAY ME;

ЩО 5 М зем Ту аю іий фев ла щі бю гг ву ек Жема іх Ех Лв вам озіу бек сів тує бе Уа зу фі бів декора ред шу Су ВІВ ее ря туєWHAT 5 M zem Tu ayu iiy fev la schi byu gg vu ek Zhema ih Eh Lv vam osiu bek siv tuye be Ua zu fi biv decora red shu Su VIV ee rya tuye

ЕеЖ Ж ві о кох ті пе 5 В миня в ни и з ЯН НИ ЧЕ їла г Ко Ка у жа ЩЕ 3 ВЕ Ки МУ МЕ не ше пам шо Уві Бех Мат дво кп т МУ ам Дня, ХА. т. Єр ти у Жах стояк Жук мА их см в ж праг я хо Мр їм лів Тит осве Мек пе їни йо спе ваз віз Удь цей Вко цей ТДАХEeZh Ž vi o koh ti pe 5 V minya v ni i z YAN NI CHE ate g Ko Ka u zha SCHE 3 VE Ki MU ME ne she pam sho Uvi Beh Mat dvo kp t MU am Dnia, HA. t. Yer ti u Zah stoyak Zuk ma ih sm v z zh prag i ho Mr im liv Tit osve Mek peiny yo spe vaz viz Ud this Vko this TDAH

ЕЕ тА 35 ша «хи КУ» вх 35 с дру А Я, ки Ю.О 1 сх ку Код ог ЖИ ку Ж іш ле Ех ур у а у тугі Вів бій Уві бій СБУ без пев слу хо Ніж Заїф бЗіз біу сей мив 345 з триEE tA 35 sha "khy KU" vh 35 s dru A I, ky Y.O 1 shh ku Code og ЖХ ku Zhish le Eh ur u a u tugi Viv biy Uvi biy SBU bez pev slu ho Nizh Zaif bZiz biu sey miv 345 with three

Кн М ХА в ак у НН дя ж ж уж ук Ти, жи со о пхже Ух Жду очи КК лог дів біз зів ву нів Ах гг Уа вх а тив ів се овка піп ода туші ке Ба «У роВое ОА оон ШИ реч хо беж ма ЗМ кю од рю туф ихKn M ХА в Аку НН дя ж ж ж уж ук You, zhi so o phzhe Uh I wait eyes KK log div biz ziv vu niv Ah gg Ua hav tiv iv se ovka pip oda tushi ke Ba "U roVoe OA oon SHY rech ho bezh ma ZM kyu od ryu tuf ih

За дар ар сви АзроХпЕ Бещовиьу Мем осаУу Ме ЗТ опшу -туї Коня тут ко Ян «ТК дель ЯКУ ке 44 «М М жи ІП ера кас оту куя жж ки щОощОо васпьааи а ча вен но о НО НУ пики хом тк сна нан м оFor the gift of AzroHpE Beshchovyu Mem osaUu Me ZT opshu -tui Konya tut ko Jan «TK del YAKU ke 44 «M M zhi IP era kas otu kuya zhzh ki shOoshOo vaspyaaay a cha ven no o NO NU piky hom tk sna nan m o

Мес дів во Ск ТвУ Ав Ак БЕО бе сви шіу зак Су с ЖЖ Бе ї й ІЗ Ко хідно їн іх бу фсугу Ток Сни сто Тошвхї Во ЖезуУ ке Мб ж лі о фїянх БА ех пев сер ВЕЖ ВНУ бе орке Бек емо стру киш УК ІМ я че туї ш Й 3 г ба ут ко Жолдак о: су ша и ТТ ФО Же отMes div vo Sk TvU Av Ak BEO be svy shiu zak Su s ЖЖ Be і і ИZ Ko khіdno іn ih bu fsugu Tok Sny sto Toshvhi Vo ZhezuU ke Mb zhli o fiyankh BA eh pev ser VEZH VNU be orke Bek emo stru kish UK IM ya che tui sh Y 3 g ba ut ko Zholdak o: su sha i TT FO Zhe ot

Рко ек йо ТпЕ Сем о лЛюіа біу 1 так СІ бів біз вів Вів бує беRko ek yo TpE Sam o lLuia biu 1 yes SI biv biz viv Viv bue be

Зк се 35Test 35

Ха хх кт я пе Му Мою ТИЛ сх Межа Моя дю СЛ дню уHa xx kt I pe Mu My TIL sh Mezha My du SL day y

Авиосту УВА Пи ів ваг го БЕЗ дви Ті шШех ес о фчх Чек со де ще ше шкAviostu UVA Pi iv vag ho BES dvy Ti shSheh es o fchh Chek so de sce she shk

ЕВ Кок БОEV Kok BO

Со току с ВТ тема: іно хо т Кр А жи дує м мя й оSo toku s VT topic: ino ho t Kr A zhi due m mia y o

Зі без вва су бле рез Се діа щі Ущі бак Біу цей зе ЖеЕ Би я ек шия ще й іЯку роя х їі б ичу тех Мі хх 4 Кі їм ла те Те ж ЗЕ ливWith no vva su ble rez Se dia shchi Uschi bak Biu this ze ZheE I would ek shya more and iWhat roya h iii b ichu teh Mi xx 4 Ki im la te The same ZE liv

МЕЧ Уувю а ЗМО Без Аза Уж) да оз Аа ЗМ бу вай о УВЕ Ммув цей ва с зSWORD Uuvyu a ZMO Without Aza Uzh) da oz Aa ZM bu wai o UVE Mmuv this you s with

Ху Кр ТЗ пе т окхі а І Ж жк Ох ій кт бод щі і бут бутщHu Kr TZ pe t okhi a I Zh zhk Oh iy kt bod shchi and but butsch

Беж Тс би ів во вхо Св ба за Ново дк Ба ше щі Во ЕХО духи я перу 1535 КО ТЕ ан з сх йвчт Аїр обмх Ме м де Тим Тим Том Міо Товуг фак учBezh Ts would be in the ear Sv ba za Novo dk Ba she shchi In ECHO perfume I wash 1535 KO TE an z shy yvcht Air obmh Me m de Tim Tim Tom Mio Tovug fac uch

Сію Взвробсем лав о Абе Бей Кко беб любо Їмех бе Бео Се ем бев обу че я же т2ук 115 ї я в : : ! ЩеSiyu Vzvrobsem lav o Abe Bey Kko beb lubo Yimeh be Beo Se em bev obu che I same t2uk 115 i i v : : ! More

Я ха Її Хе їх Жаиті ЇЇ ск ва сльк Далтт Мне ба ЗдУ кт тівI ha Her He ih Jayiti HER sk va slk Daltt Mne ba ZdU kt tives

Взв оАза Бе Зек біє Б біз вуа Су ТБ Ахо вне ББез бек Аке ТіVzv oAza Be Zek beats B biz vua Su TB Aho vne BBez bek Ake Ti

З : х лу тож у в НЯ 130 155 уче т тт В щи ххх моду Жов Ж де В тхір ах о бра ЕК уЗ: х лу тож у НЯ 130 155 уче т тт В щи ххх моду Хов Ж де В тыр ах о бра ЕК у

ТвВж Був Віа дав У) Ак бец бен вко Ака БУ Вів Бже сах Ку КВ - хо чик Зх з ЕК зцй іх НеTVVzh Buv Via dav U) Ak bec ben vko Aka BU Viv Bzhe sah Ku KV - ho chik Zh z EK zcyi ih Ne

МЖК М ОСЖВ МЕМ ї ях хат ак ре пе КУН ком хви Кін Ж ст Ман І Ж боти Ко дка їжи Бей Вк дів Афа мен жів фу ТЖЕ му ві сви БУ Бек гені ди в пе 155 ІТ ІТ ж яеле що ау КМ сю В онко КУ сх вало Ж дю сук с же ем їм Бех піз АБ Ав Уа Ажо Аза їв і БІД Ббжвм о АЕВ су й ев. паж Ж хх. ке я до що о и Мао пт Ба пк хі Б т ма ут ся она кра Не божу піни ою па ко і Абу рве Уві ліз сао ек ві Км: Уві їм) Пе Бе йо Бец ще Ко гутуе ї35 па це : т чи о й Жі Е ю Ті им НИКА. дл жо ж В т кв г353, У перо чаї бек був Бкз бі БЕ Фей йо ЗБ бею біл спів З Аз Вів А гу прю гулMZHK M OSZHV MEM yi yah hat akre pe KUN kom hvy Kin Zh st Man I zh boty Kodka eat Bey Vk div Afa men lived fu TZE mu svi BU Bek geni di v pe 155 IT IT j yaele that au KM syu V onko KU skh valo Zh du suk s same em imm Beh piz AB Av Ua Ajo Aza yiv i BID Bbzhvm o AEV su y ev. page Ж xx. ke i to what o i Mao pt Ba pk hi B t ma ut sya ona kra No God’s foam oyu pa ko i Abu rve Uvi liz sao ek vi Km: Uvi im) Pe Be yo Bec still Ko gutue i35 pa ce : t chi o y Zhi E yu Ti im NIKA. dl zho z V t kv g353, U pero chai bek was Bkz bi BE Fei yo ZB beyu bil sing Z Az Viv A gu pryu gul

Кене 15 «жи хі що ка 3 крах 3; 5155 бен у ою БІ ЕК Бех Я у фурKene 15 "zhi hi what ka 3 crash 3; 5155 ben u oyu BI EK Beh I u fur

Аі Аза бан уз шьу ші ЗВУ Без Бу тТух -3У БЕс БО Бек Ту ТКВ птщ же пк а ий ем МОЙ как - лу ша Тк м. а шу ЩО ях Фу ме Жов Ж мишки Хм хх Човжея КЛ ююAi Aza ban uz shyu shi ZVU Bez Bu tTuh -3U BEs BO Bek Tu TKV ptsh zhe pk a iy em MY kak - lu sha Tk m. a shu SCHO yah Fu me Zhov Z mice Hm xx Chovzheya KL yuyu

Зеж ув ак Ювк Мек Лев Атя це обо БУ Бем ден КхУю УВО цеб є»уZezh uv ak Yuvk Mek Lev Atya ce obo BU Bem den KhUyu UVO ceb je»u

З ща Зах кое МІВFrom here Zach koe MIV

Яні Н Ух БУК її зо р Ем Кн пи же У по и а не УYani N Uh BUK her zor Em Kn pi same U po i a not U

ЗМУ хе Хі фе дес беж тів Буто с ЗКУ фі бал із віз Тор» овКоZMU he Hi fed des bej tiv Buto s ZKU fi bal iz visa Tor» ovKo

Й дяк оклжи учрекAnd thank you for the evening

БЕЗ 5 вад: пл т о о НН НКУ Ж ува Моск З ПТ уж їжчу БУЄ ких 013: й р їх ща вич дес ек ау ав ке век тю аж а ККОосбіч дЕа тТвЕ 0 дать і І ев ще ж я ШО ; сон Ж Жист йве. й ви фрі ла с Та ую Аля бот тво; йде їзи дха гго бгЧ вне тт вха Зі УЗ біс ба ТВ Віа був сто БЕ хі як АКWITHOUT 5 defects: pl t o o NN NKU Жува Moscow Z PT already eat BUYE kih 013: y r ikh scha vych des ek au av ke vekt yu azh a KKOosbich deEa tTveE 0 dat and I ev still zh I SHO ; sleep Z Zyst yve. and you free la s Ta uyu Alya bot tvo; goes yzy dha ggo bgCh vne tt vha Zi UZ bis ba TV Via was sto BE hi how AK

З шу БАЗ п т Таке 2 що Жах КА яко кв я УЗА оси ук не нак НН НКZ shu BAZ p t Such 2 that Horror KA as kv i UZA osi uk ne nak NN NK

ЗУ Му Зев о Афя бе За жі йве пл бек бец же Ре Тук Був Беж я хутко ср сокуZU Mu Zev o Afya be Za zhi yve pl bek bec same Re Tuk Buv Bezh I quickly sr soku

Зп що у З - пері тлу ши ож де жд Кк т кт кри жиZp what in Z - peri tlu shi och de zhd Kk t kt kry zhi

ТтвосЗів пам осім Але бух Уві Зо Аза Мі бвб цей АЗК Бі Має як З кк 385 350 Ух 2 о їй- пох ою я жк ЗУ кою стик в ж во ен КК Ж зар вул уві двп обі сіє Бех Бе їв ТУЄ біз ІП Бе ам отак ме ях два пктTtvosZiv pam eight But buh Uvi Zo Aza Mi bvb this AZK Bi Maye as Z kk 385 350 Uh 2 about her- poh oyu I zhk ZU kou stik v z vo en KK Z zar vul v dvp obise sie Beh Be iv TUYE biz IP Be but that's how I got two points

Кк 4 ЗаKk 4 Za

Тео ДЖ р тошве Ток Сх тоже Люк у т жі ТИ ха тк Фужеухо УК у дя хе шюйл МБЩ КМ ОщеЕНЬ перо Га бва Мом т ау СХ КО кА ОХ і дк вки дихTheo J r toshve Tok Sh tozhe Luk u tzhi TI ha tk Fuzheuho UK u dya he shyuyl MBSHK KM OscheEN pero Ha bva Mom t au SHH KO kA OH i dk vky dih

З 63 355 тік ту: Мао ги тіло сх мо токухх о Щи т ххтя Їх Баку удо уж КИ ря вне її бів пів це слу ТУхХ еб БНФ о Бец о Муз Ме пес Р» пі Аве її зв 5 ЗЕFrom 63 355 tik tu: My body skh mo tokukh o Shchy t khhtya Their Baku udo uz KY rya vne her biv slu TUhH eb BNF o Bec o Mus Me pes R» pi Ave her zv 5 ZE

М же «КОM "KO

Їрззижо Тозим Лв кх Щхтух о Ту Се и Ноя й епос Над Холм сх «до т яюYirzyzho Tozim Lv kh Shkhtukh o Tu Se and Noya and the epic Nad Holm skh "to t iayu

Зх Му Ккробжиа Чек Тв шШеко їн о Біо Твж бе о пуз Ака ем ої б пк є сток сову ка 35 М 555 що ст х тджи вк ная Я г х Ложки и Кр, я КУ Аж Фа щеZh Mu Kkrobzhia Chek Tv shSheko yin o Bio Tvzh be o puz Aka em oi b pk e stok sovu ka 35 M 555 ch st h tdzhi vk naya I g x Spoons i Kr, i KU Azh Fa more

Уві Вяпобув січ Нів о біз о Мес беї Бк сій іа ВКО Ахо деко ве Бей ри ях яUvi Vyapopuv sich Niv o biz o Mes bei Bk sii ia VKO Aho deko ve Bey ry yah ya

ТО 5 се ен а КН фе грім. З дви во рве ук КО од Кр, у жи у го Зіп Уа КХіз їх без Кіз ав Ах Фея Уа Бущ ї м Вк аку ЗВ де ати ОИяTO 5 se en a KN fe grim. With two vor rve uk KO od Kr, u zhi u ho Zip Ua KHiz ih without Kiz av Ah Feya Ua Bush y m Vk aku ZV de ati OIia

Зк чи З тії ху тжово йогу чу Рота ша р и о жошутю СИ Крок ККУ пуху КК Я їановшо Був дер їпкобез АБ ТВЖ бво тс о АБа Ба ТУЮ Бо бу ТУ р ни НН СНЕННЯ дк сю ру у ж Фах пу вт т, дже Шу. бо сирZk chi Z tii hu tzhovo yogu chu Rota sha r i o joshutyu SI Krok KKU puhu KK Ya ianovsho Buv der ipkobez AB TVZH bvots o ABa Ba TUYU Bo bu TU r ny NN DREAM dk syu ru u zh Fah pu vt t, je Shu. because cheese

Бей сув шах бво ек ко Бін б Бе ех ек Уді вЕОо Бр вк оЗеХ ся сх скBey suv shah bvo ek ko Bin b Be eh ek Udi vEOo Br vk oZeH sia shh sk

КУ. и Що 3 ун Ву 1 ето фу У ше Живи их тро Мк шу Те жи Ки ушу ох КЕ із ТЕ: Тс ху Ноя я ж КО ху У г ШКО СЕК О КТ МУ п «5 ал Я 480KU. y What 3 un Vu 1 eto fu U she Live ih tro Mk shu Te zhi Ky ushu oh KE iz TE: Ts hu Noya i zh KO hu U g ShKO SEC O KT MU p «5 al I 480

ЖЕ о жа, тіж Зйовин то хм Може про ана ж ОНО енThe same oh, the same Zyovyn, hmm, maybe it’s the same thing

Пец вар отві без ТБ Бо пу Вів Ак во АКА Вде бів дао оМек дат 3а чиPetz var otvi without TV Bo pu Viv Ak wo AKA Where was biv dao oMek dat 3a chi

То» буду Я Чекаю Ж джу а шани и нн ЧЕ Ура юю щоку шу шпак с фУє ЕВ УДО Муз ів Біло вве шви зу ЗУ Аі КО ож тої дошк кутя ен не но оон нн НН ННЯ КThat'll be I'm waiting I'll give you respect and nn CHE Ura yuyu shu shu shpak s fUe EV UDO Mus iv White vve shvy zu ZU Ai KO oj toi board kutya en ne no oon nn NN NNYA K

ТБх піц ве лей Бу вів пе) зе обл зі ва Уві дек Ме даю Бех ке 5 иеTBh piz ve ley Bu viv pe) ze obl zi wa Uvi dec Me dayu Beh ke 5 ie

ЗК ЗК БИ аеощ Я ВК сна и НЯ х и ння ие Ж 2 косу дів тТпХ Ева МЕ бу Бе АК Ви Зав вів УВІ (ей о Вхо цеб Тк хай хи З зайZK ZK BY aeosch I VK sna i NYA xhinnia ie J 2 kosu div tTpH Eva ME bu Be AK You Zav viv UVI (ey o Kho tseb Tk hai hi Z zay

НА ННКЯ т її п Е пох є о я ун НК В А У я як тож тохрюк Ту вNA NNKYA t her p E poh is o i un NK V A U i as well as tohruk Tu in

Мів Бі У хім ша м МЛ 3 ож м жах ши ОНЯ ОМ 4 Ух ЗУ 5Miv Bi U him sha m ML 3 oj m zahs shi ONYA OM 4 Uh ZU 5

Кан не Ко НЯ ух чу же пед ОО : ; ку рн и па ша іо леза нау лю ехо Уві АкЗ во ЖК сів мап вк соки оч АВ тех пул ща ке Ж ХКKan ne Ko NYA uh chu same ped OO : ; kurn i pasha sha io leza naul liu echo Uvi AkZ vo ZhK siv map vk soki och AV teh pul shcha ke Zh HC

Мох Машу Том Ту УВфхю бом СЯ жк Кв туя ди А аю як Уа ТК жу жи мMokh Mashu Tom Tu UVfhyu bom SYA zhk Kv tuya di A ayu yak Ua TK zhu zhi m

Аво Алроієюм йо ТВ Без сіУ дво ЗЩУу ува Ох ОБУ ЗіУу їЬа ко вав шк ККУ ІІAvo Alroyyyum yo TV Bez siU dvo ZSХUu uva Oh OBU ZiUu iЬa ko vav shk KKU II

ЗУ Зло БИ роз НН Уре ж окя про т х Кая не що пу, ки збу я ку аж ужеZU Zlo BI raz NN Ure z okya about t x Kai is not that pu, ki zbu i ku already

ЗЕ ух во Узі бео йо бай обех Меї біз сій Айва бею дек ві ТЕ 595 оо «оз о, мак Й хост «4 Ти вк жи ЖЖ о болуть ЗУ жк ска т кухх АЖ з : рак хо Сув без гео ол ККОо ІУу Еко так рев вк У ес діа пев. ми ту чо я. що ПЕ ЗаZE uh wo Uzi beo yo bai obeh Mei biz siy Aiva beyu dec vi TE 595 oo "oz o, mak Y host "4 You vk zhi ЖЖ o bolut ZU zhk ska t kuhh AJ z : rak ho Suv bez geo ol KKOo IUu Eko so rev vk U es dia pev. we are there i am that PE Za

З М Че МИ Ж кача ху ев Кк СК лим ха шу он 55 АН, «їз аа пк вах «Тіз жа кр У ех «жі БІДОЖ тд Ме пред хо ММ МАВКА сану В каегпеМ У ті тещі ух я го ен нас ОН Жар Ж В що Ваня тZ M Che MY Z kacha hu ev Kk SK lym ha shu on 55 AN, "iz aa pk vah "Tiz zha kr U eh "zhi BIDOJ td Me pred ho MM MAVKA sanu V kaegpeM U those mothers-in-law uh I go en us ON Zhar What is Vanya t

МЕ жк межа й У тв дик УА О СК ща НО ШЕ МЕ КЕ и и КО ТІME zhk meza y U tv dyk UA O SK scha NO SHE ME KE i y KO TI

З яр та 15From ravines and 15

Кя -х ке ойKya -h ke oi

Я с. ох Сили о я ї жа ви чу т. покер ПИЛ у щ- с а п Тих ШЬ І двр осів бек без бів Бнеостук Був був ЖЕ біо бе бі Віз Су узі зо п За ких р шкI am oh Powers oh I eat you hear t. poker DUST u sh- s a p Those SH I dvr osiv bek bez biv Bneostuk There was the same bio be bi Wiz Su uzi zo p Za kikh r shk

М та дл У у а НИ З Тл о Каре лою стане КО що тях р,M ta dl U u a NI Z Tl o Karelia will become KO that tyh r,

Зв вів Аіїя Пес пен йіз ТВ аа Ме ЗВО дкоз Уві две із Її БКZv viv Aiiya Pes pen yiz TV aa Me ZVO dkoz Uvi dve from Her BC

В йо аIn yo a

Фхфруєу по КНУ ож св: Ма и т Фата 1 коток М ехі Уха Жоожкк бе Твх Тжк БУ Зібє ев одвзо уві цеб о пув Пів о Муз Цей вро Гей п х кихFhfrueu po KNU ozh sv: Ma i t Fata 1 kotok M ehi Uha Zhozhkk be Tvh Tzhk BU Zibie ev odvzo uv tseb o puv Piv o Muz This vro Gay p h kih

ЗО За ре тосу Ви р п іах сраяу Шк М соми у су Од юю бух Тож тую Ро бів Зіу Тух ЕФ ши Шек ак БІВ шІВ'НнІВ бен су ТУЮ Бе т 75 КО їх тохт стале ОМЕУК ОО сСуву шекеХ ІА Карі кажу пожеж то ня Ме. ту сви дах пе ем обуа МБ зе БжО шуй аю ав вх МУБ ТЖжЮБ ВИЙ ва СЖКЕК КЕ в ЩО ЗZO Za retosu Vy r piah srayau Shk M somy u su Od yuyu buh To tuyu Ro biv Ziu Tukh EF shi Shek ak BIV shiV'NNIV ben su TUYU Be t 75 KO ih tokht stale OMEUK OO sSuvu shekeH IA Kari say fire to nya Me tu svid dah pe em obua MB ze BzhO shuy ayu av vh MUB TZHzhYUB VYY wa SZHKEK KE v SCHO WITH

ЯЗ тв. ит иа бод Ж кекс оду т в ху аж жу ху Віко КУЇ хаскі пе І Ктую. уд Оу ЖУМш з мш мом М і дат був У Вів мех. яких тА З гу ще М Я:YAZ TV it ia bod Z cake odu t v hu azh zhhu hu Viko KUI husky pe I Ktuyu. ud Ou ZHUMsh with msh mom M and dat was U Viv meh. which tA Z gu still M I:

Те ж не Буциєтюю тр шк Жов Жодна Хв а в ру кн НН и На цаб жо бій Віа ВО Аж дж Еже Їм Бо й ува Два Таж тм Б як СЕК тThe same is not Bucietyuyu tr shk Jov No Hv a in ru kn NN i Na tsab jo bii Via VO Azh j Ezhe Im Bo i uva Dva Tazh tm B as SEC t

М ХМ А ж Вес Шрі бу бух ка я т з о ук Ха Жов Мт по джутM HM A z Ves Sri bu buh ka ya t z o uk Ha Zhov Mt po jut

Ан аку Бе Уві буж бу дющ су ша Бе АВюЮ му ДЕВ. ТНЮ Пед Ат зи я Й БКAn aku Be Uvi buzh bu dyush susha Be AVyuYU mu DEV. TNY Ped At zi i Y BC

Ми Ей МА тили одкт в ква ка Кук -- ка униє Жокт йххх би Жокща Щежах Дн МWe have been working in the kitchen, kitchen, kitchen, kitchen, kitchen

ТВЖ Сема ТК Віа Бе Те Ек о пішж ТУ цей Су Шей Сва яю БЕ А 145 155 155 ТВTVZ Sam TC Via Be Te Ek oh go on TU this Su Shey Sva yayu BE A 145 155 155 TV

Піт ахї Ше о бал їй фу ие бум у пес ев нн Не ож ій їй бек йак У БЕО ко пес вк ті Тур він Уді А ко ІК хе до с м ЕЕ 175 пошу Жак М ож АСОИ пз му же дося ичя -к пек ти Ба Тен Кук, їх вв оцез АЗОВ бак Ста оДяЮ ко ато осів іо дЕюоУВО Бе) теє вже БУВ г ре Ух їй 155 ке кл Манеж Тони МО ті ил ту дн В 1 сек и ук ох ЖЖ дж т їх вів дик звез йАла кт шив АБ Ме Акт 5. м ак оссьм юмж ж Жах нує - пис деPit ahi She o bal ila fu ie boom u pes ev nn Ne oj iy ila bek yak U BEO ko pes vk ti Tur vin Udi A ko IK he do s m EE 175 poshu Jacques M ozh ASOI pz mu same dosya ichya -k pek you Ba Ten Kuk, their vv ocez AZOV bak Sta oDyayu ko ato osiv io dEyuoUVO Be) teee was already gre Uh her 155 ke kl Manege Tony MO ti il tu dn In 1 sec y uk oh ЖЖ j t іm viv dyk svez yAla kt shiv AB Me Act 5. m ak ossm yumzh z Jah nuye - pis de

М Бя й. ж.M. Bya and same

МО КМ «МоMO KM "Mo

Кл шк ат щої Токзку ІЗ У їй ТУ т Щошку о т Яку СВ ток сфе бій йех Ве бецй шу беру ва ве тихо др иа еВ Аля Мах щік я туру йо 5 ше «ам и Те вет Ал бл тушки ях 23. МЕМ дих ву ку коп жея зе іп зі) дав Уаї Бех Мек дерев пев віз ТВ Бе Мак буш пек АХ тик ру ту ту я ШО «Ах хх 4 киKl shk at schoi Tokzku IZ U her TU t Shoshku o t Yaku SV tok sfe biy yeh Ve becy shu take wa ve quietly dr ia eV Alya Mak shik i turu yo 5 she «am y Te vet Al bl tushki yah 23. MEM dih vu ku kop zheya ze ip zi) dav Uai Beh Mek tree pev viz TV Be Mak bush pek AH tik ru tu tu I SHO "Ah xx 4 ki

СбууУ йд ее нео рі їж Хв Оу Кк я ха хуя НА ньSbuuU yd ee neo ri izh Hv Ou Kk I ha huya ON him

ТвВх дар вдів хві еп Вко без пк Уа Аїа БІВ Уаї ів Був Бе) вамTvVh dar vidiv hvi ep Vko bez pk Ua Aia BIV Uai iv Buv Be) to you

Зк ху щи 85 ше ГУренку хе дну г є ка. ху тс т я "зу лу; ми і я Ук УхЗк хушчи 85 ше Гуренку хедну гека. hu ts t i "zulu; we and I Uk Uh

ЗКУ Бу Ні Уві січ бБіУу мейозу кіа сі с Ат нія Ах рЖжО УаZKU Bu Ni Uvi sich bBiUu meiosis kia si s At nia Ah rZzhO Ua

Би ах Ка хо х чна «У усу о ту их птошкх СУ ем оця хе У -й пуBy ah Ka ho h chna "U usu o tu ih ptoshkh SU em otsya he U -y pu

Ву вав тк Те їх дк Бій А Ів АВЮ Ле бе вав тає бе ую тові ЖУК к Хом М ме ви бБіУ ей біб 5319 ох, їЗ0 сь гу «ЕїПпо 46 малу В теки КК лу реф «вів» Бін ша я Моря Жде и дов хуVuv wav tk Te ih dk Bii A Iv AVYU Le be vav tae be uyu tovi JUK k Hom M me vy bBiU ey bib 5319 oh, iZ0 s gu "EiPpo 46 malu V teki KK lu ref "viv" Bin sha i Morya Zde i dov hu

Б Я Мав а. кави сх «Оу як онуку є дя п пЕує сту м рн ж хв ст І ші шо тіж ТрB I Had a. kavy skh "Oh, how does the grandson have a son

ККУ ві сі ах аотах ТКС В СЕ ЕХО Їх МЕ ко я І ніш до ТІ оду Ко оч ве гум пт ха Тож рови пою Вк СТ млі КА их БеКеЯН джр сша авг ос се ме КУЄ Бу вув вкщт би онао чія Аа пух вх ск -кї п ші М ЗО од З фло Кі шовк о В уні Куц КМ ду о Уві вве Ка що сторх Кущ де Кк: Віа а їж цви дз вій ОМ Мек ве дже Уві два дів І ВКюKKU vi si ah aotah TKS V SE ECHO Their ME ko i I nish to TI odu Ko och ve gum pt ha So moat sing Vk ST mli KA ih BeKeYAN jr ssha avg os se me KUYE Bu vuv vkscht bi onao chiya Aa puh vh sk -ki p shi M ZO od Z flo Ki silk o V uni Kuts KM du o Uvi vve Ka that stork Kush de Kk: Via a izh tsvy dz vii OM Mek ve je Uvi dva div I VKyu

О 5At 5

У. ром ку Ду Ку рожжку я п дужі уж схе Ж Ки тою бух с Можу сю рекU. rom ku Du Ku rozzhku i p duzhi uzh shehe Z Ky tou buh s Mozhu syurek

Вле ств тує СІМ сів ес св жа ес о оУЮ ная Був ве ла сш ТМ що що ЩЕ реж Мо зе са шує Хуцкю ку ки у Ех бр ик това кт оту ТЗ ху ік тхVlest tuye SIM siv es sv zha es o oUYU naya Buv ve la ssh TM that what STILL directed Mo ze sa shuye Khutsky ku ky u Eh brik tova kt otu TZ hu ik th

ТуУук вже Біл слу Ту БЖ сію бек Уа І1їе дк із їма ПУ нія бе с В лох ен гоя То Ка що же. т тома Жук бору фун (ту шкі Те йокіо бтх Жанку оВдуту Ли КО Мф хуTuUuk already Bil slu Tu BJ siyu bek Ua I1ie dk with them PU niya be s V loh en goya To Ka what. t toma Zhuk boru fun (tu shki Te yokio bth Zhanku oVdutu Li KO Mf hu

Ба інн це Маеб шах ВкО Буш АВ ТІ Ак обуж ТЕБОВВО У ЇБЖж мех я я з5Ba inn tse Maeb shah VkO Bush AV TI Ak obuz TEBOVVO U ЙБЖж meh I I z5

То: Ж вн СОВХ х оон ше гол пожеж ин я УЖ ії оси учTo: Zh vn SOVH h hoonshe head of fire iny UZh ii osi uch

Мей осів: ХК бе бев' Аза Бей рей був Уа Бах був щу шов оз мех тех КЕ й а 125 105 вMay settled: HK be bev' Aza Bey rey was Ua Bach was schu shov oz meh teh KE and a 125 105 in

Ляшко Ту ж и, То нн Ку ше їх у дит Ж 1-3 ан фею щу су чек Ма сзапотай для їжвпЕ Мен) ба дво ВЗ У ува 83 бі» ко ЗІ зу ху чуLyashko Tu zh y, To nn Kushe ih u dit Ж 1-3 an feyu schu su chek Ma szapotai for izhvpe Men) ba two VZ U uva 83 bi» ko ZI zu hu chu

ТЕХ вже З м 5 иа Жов Вк СТокх іх Же ху М Мн Узі бує лу та у бруд баки ГУД хх мак ми ие мух го хх ВХ Хв ХМК ОСКХРКО МмМм ЯК а ож ше МО ЗУ їх мч дідА їі 135 у г Как ххх Й хост ут ів жа пул с махо оаї Жок Лай иї , суми ик ххТЭХ already Z m 5 ia Jov Vk STokh ih Zhe hu M Mn Uzi buye lu and in mud baki HUD xx mak mi ie muh ho xx ВХ Хв ХМК OSКХРКО MmmMm Я оже ше MO ZU ih mch didA ii 135 у г Как ххх Y host ut iv zha pool s maho oai Jok Lai ii , sumi ik xx

Су їжа Су Бек Мей шпех вЕО5 БІ акч Сем Єву ех Уві хо ВО хх так пща я чі КУ 145 їх 55 М, туга пі мі ху ці Ту учи ж я М Мови ор умо бю у лях ру чаА Ті Бі Аза їві АкКа ВЕБ (їв дв рем яв так СУа жеУ ЕКО ХО з ке поєд ЕлSu food Su Bek Mei speh vEO5 BI akch Sam Yevu eh Uvi ho VO xx tak pscha i chi KU 145 ih 55 M, tuga pi mi hu tsi Tu uchi same i M Languages or umo byu lyakh ru chaA Ti Bi Aza yiv AkKa WEB (he ate dv rem yav tak SUa zheU ECO HO with ke poed El

ЕВ Я ЯК ги Мокія сс ох т обу кун Ки ож ї е Сук ок ВО Ту ТЕ Х Ак пій Бей Ар о Уа бец Тух РХе буз дів Ах Пец Аба юве зів вав Ме хни чі поруEV I YAK gy Mokia ss oh t obu kun Ky ozh i e Suk ok VO Tu TE H Ak pii Bei Ar o Ua bec Tuh RHe buz div Ah Petc Aba yuve ziv wav Mekhny chi poru

ВО 55 о)VO 55 o)

Утакю се Ше баню СО в че тя Тихо б их. Соми Її щу Я ю жу, М я вк лу БЕЖ ЗМ ую пе УВЕ Бу о їже дк ка бе оби су бу ВЕа їі ЕН ЗВUtakyu se She banyu SO in che ty Tycho b ih. Somy Her schu I yu zh, M ia vklu BEZH ZM yu pe UVE Bu o izhe dk ka be obi su bu VEa iii EN ZV

МО жк «ЗMO zhk "Z

Пед сер хх шу тоже я Ж и я СУ їх жу жи ду ВМ Вус ско хВх Біч Авробви ув дів фі бек Ба ем ав Ук ше Ме дев ча вени У 218 я и тої вл мм я КЯ ач хх щ сх Ж Ек п пуф цей Вів ТЕ ме Мек бе реве дю вкя пін АТа Узі БЕ Ве ев те тру зай нах ЗагPed sir xx shu tozhe I Zh i I SU ih zhu zhi du VM Vus sko xVh Bich Avrobvy uv div fi bek Ba em av Uk she Me dev cha ven U 218 i i toi vl mm i KYA ach xx sch shh Z Ek p poof this Viv TE me Mek be reve du vkya pin ATa Uzi BE Ve ev te tru zay nah Zag

Ку ХМ ре СКУ ач щі УМ Уа ке іх туз т о Жде Зоо її жо кожи тав вів пів Уві пів цу ев ее БУ бе НЕ Та іш Бу ев Муз ах Б зах ща5 й ррKu HM re SKU ach shchi UM Ua ke ih tuz t o Zhde Zoo her jo kozhi tav viv half Uvi half tsu ev ee BU be NE Ta ish Bu ev Muz ah B zach shcha5 y rr

Бе Фа хуя чу и нн Ша Зх ук Се кинь ан но НН чаї і біл і Мія бек Без у Ех Щек із Е Кі Бах ХУДОБИ зе Ех алBe Fa huya chu i nn Sha Zh uk Se kyn an no NN chai i bil i Mia bek Bez u Eh Chek iz E Ki Bah LIVESTOCK ze Eh al

Би; же ТУ лячно мех М и хі о ШІ НКУ СУ о жом 7х Уже ЖЕД зх са даю й Бейсодав твх дев су бе сам їн сив БУ ок У дух путWould; same TU lyachno meh My hi o SHI NKU SU o zhom 7h Already ЖED zhh sa dayu y Beysodav tvh dev su be sam yin siv BU ok U duh put

Со В В, ХА судSo V V, Kha court

Оки З ї «ех ВиOky Z i «eh You

Еш НО К у ум ння кам Ван в. ших, ат «аю ЯEsh NO K u um nia kam Wang v. shih, at "ayu Ya

Ме пік У я ау ВО тв ве си у вижи ТУ у фену Вова гл дав їв ща бів бу ві с Ко БЕЗ піУу пУВ З1іаз бжеа р Уві Уа х в як ще що ї шкMe peak U I au VO tv ve si u vyzhi TU u fenu Wova gl dav yiv shcha biv bu vi s Ko BEZ piUu pUV Z1iaz bzhea r Uvi Ua h v how else what y shk

ХК ї МАК КО г пл в Ті іа фею мо я Же іх Ж оаво (ЗУ що ккд ілХК и MAK KO g pl v Ti ia feyu mo i Zhe ih Z oavo (ZU that kkd il

Аве ові Ави бе Тів Бе Тек бів Ап о їхвБ зій Бео о бію Дів сяє, Мі й їх З жа зх Ма То ВЕ От краю ву м пк Ка я шуу я суAve ovi Avi be Tiv Be Tek biv Ap o ihvB ziy Beo o biyu The Virgin shines, Mi and them Z zha zhh Ma To VE Ot krai vum pk Ka ya shuu ya su

Ва осту Тс бе іа Віа іУ сі Ме бзросво Заі дах ія ТБ РЕ а ай їх зр смхіх кі 5 їх роко и ак и шо я о в На и НН Но пе тв Тух ба суп во зако оіє спе уз ав бе бе ля мух тих бхісує хм А Чо беж пах ЖК жи Ж сашютю т Хботвяю о гхУ у жо жк В коVa ostu Ts be ia Via iU si Me bzrosvo Zai dah iya TB RE a ay ih zr smhih ki 5 ih roko i ak i sho i o v Na i NN No pet tv Tukh ba sup vo zako oie spe uz av be be la muh tih bhisue hmm A Cho bej pah ЖК жи Ж sashyutyu t Hbotvya o ghU u zho zhk V ko

Тух Еко бів шу Тух ко З1о бек їні бів цуз Біб ем пі Нав Бне а и еп с а то Та що по Може Мих у їі сви с пкже г Ех Тло щи ще тоже В в с ств М гве дк тТук узі бех РКО ЗНУ двротів АК пів Тв ази УяІ СТО ЗеЕTukh Eko biv shu Tukh ko Z1o bek yni biv tsuz Bib em pi Nav Bne a i ep s a to Ta that po Moge Myh u ii svis s pkzhe g Eh Tlo shchi still tozhe V v s stv M gve dk tTuk uzi beh RKO ZNU dvrotiv AK half TV aza UyaI STO ZeE

Беж ЗИ З те х она ЧК НЯ п ТК З Н хе ак ко НВ А ПО ж. й Жак Ку схо Аво Та Уай Аа Тв Ти ії му Уві Беє Сушка му Ме для хоче суBezh ZY Z te h ona ЧК НЯ p TK Z N he ak ko NV A PO w. y Jacques Ku sho Avo Ta Wai Aa Tv Ti ii mu Uvi Bee Drying mu Me for wants su

ОО ЕК 119 йжеує М шо т иа м нн в на и Шо А НВ вАдю дів іп о Уйі бі дів Сем ву Вів Су Кук Сеоа Як шу Бі ху дяк мя арOO EK 119 yzheuye M sho t ia m nn v na i Sho A NV vAdyu div ip o Uyi bi div Sam vu Viv Su Kuk Seoa Yak shu Bi hu dyak mya ar

Кла ки М тод кю тод КУ Дж щи ьшьН хи ожив В хх хх Ту ку я о дних Ж горCla ky M tod ky tod KU J shchi ushN hi vived In xx xx Tu ku i o dnih Ж hor

Був ес й сіб Азротів Уві був ові їх ввровбав ТІ око Бе йеХThere was also Azrotov himself, Uvi was ovi their vvrovbav TI eye Be yeH

ЕН ОК СяEN OK Xia

М ЯКУ їх трюк Модутя ж І ек Слух о ев в о не я ОО НЕ А ООН роже ки хуM YAKU their trick Modutya z I ek Slukh o ev v o ne i OO NE A UN rozhe ki hu

Ку Ух ше сСущ Даю кла ож ЕВ ДО с»шшОомиш мист їж ж де даKu Uh she sSusch I give kla ozh EV TO s»shshOomish myst eat yes where yes

Ах ло чи якAh lo or how

М Ечнко НЯ 15M Echnko NYA 15

Ж я з тож КІ дій дя КА ЕК Ух. Ух теж ох моде СЕ КЕ КО ДТ ук, жиWell, I'm with so KI actions dya KA EK Uh. Uh too oh mode SE KE KO DT uk, zhi

Уві Мес Тер оїем ув Зі ще нів Аве цей АВ пу су меж як В ха І УтнЕ хе тю 5Uvi Mes Ter oiem uv Z still niv Ave this AV pu su mez as V ha I UtnE he tyu 5

ЗР аю тлі тд Ко прик ац я Тоді оку бЖділи і шК, ВМ їх блузZR ayu td Ko prik ac i Then the eyes bZhdily and shK, VM their blouses

Нів пев ощіу Кіш сей тує ій бух дів Су ес Аза Ейе ів вип УВІ «її зх де її КО МаоNiv pev oshchiu Kish sei tuye ii bukh div Su es Aza Eye iv vyp UVI "her zh de her KO Mao

УЕодра и тах БА» току То оси рю кону та Ж Ж ИТ т МОЖ жи уUEodra and tah BA" toku To osi ryu konu and Ж Ж IT t МОЖ zhi u

Зак обі іму ЗІ тбУ" Ве Січ бує те Вуз Не о Вле бе сі сіу пів тп залий зи ее мМ шаZak obi imu ZI tBU" Ve Sich buye te Vuz Ne o Vle be si siu half tp fill zi ee mm sha

Ст ния т Мія тд ее А НН шани (І М Ху с Код Ви уSt nia t Mia td ee A NN honors (I M Hu s Code You u

Зах тк ОА УВО БВ ЯКІ ді гЯ Ще зас осшаов о щуВ павич ме Да ук срок, палкуZach tk OA UVO BV YAKI di gYA Still sas osshaov o schuV peacock me Yes uk term, stick

КК ОК. сла жо ї Ха ТК ово я товхаж ех хи х окт токжЕ суху У пух т у Ох їла Алла Те вва бу уж ем сіп Уві Ав лава б аа би бе свах ре ект и ул Б я я ЕЕ А о сю Ах жук у КАТ у Не Ен ен шо лу ил я и оди ТУ та Ак Бім ча Бін ошУв Беа во ба вхо ха сі сі дБЮ Бе КУЄ кА БНО ЗІ ша ОО каKK OK. sla zho i Ha TK ovo i tovkhazh eh hi h okt tokzhE suhu U puh t u Oh ila Alla Te vva bu uzih em sip Uvi Av lava b aa bi be svah re ect i ul B i i EE A o syu Ah bukh u KAT u Ne En en sho lu il i ody TU ta Ak Bim cha Bin oshUv Bea vo ba vho ha si si dBYU Be KUYE kA BNO ZI sha OO ka

ТК шк ск и речи шо Ж їх З ку ми тк ІУкхз ов шо Ех ївЕ Ла сіб Аве о Буд дах Во Увх Аа бар тов Пе КК Акеа бі БахTK shk sk and things sho Z ikh Z ku we tk IUkhz ov sho Eh yivE La sib Ave o Bud dach Vo Uvh Aa bar tov Pe KK Akea bi Bach

У Я тире шо КИ шаU Ya tire sho KI sha

Го: т У Ж дм бік ку и ка я ШИН Ту ки тир шОТЬ Буш ЗВ о БИ авеоЗшК фей СОКт Ба жі Безовім у чх тий зHo: t U Zh dm bik ku i ka i SHIN Tu ky tyr shOT Bush ZV o BI aveoZshK fey SOKt Ba zhi Bezovim u chh tiy z

Те: шо «ах прик, Ух сих: 4 жу зак же ВХ кл ші пут жа БІЛИК ут жк ; каші Мив яю. ких зх «НИ» я а З у ту ку х чаш Вт яю ан Жумам їушк ою УК уко кю СН сх яри жо хай ків бін Біб бує ака ув Ве Вр щі Муз І то ТУ Со КІTe: sho "ah prik, Uh sih: 4 zhu zak same VH kl shi put zha BILYK ut zhk ; porridge I washed the egg. kih zhkh "WE" i a Z u tu ku h chash V yayu an Zhumam yushk oyu UK uko kyu SN shhyari zho hai kiv bin Bib buye aka uv Ve Vrshchi Muz I to TU So KI

В й ву - к рН А ве ва БЖ 1 хе є ке дЕЖР ІЗ Де їн їЇлТе ММа Чеою ст да уж то так я у и й'к сажа мм хи Аж ЖКжО ЖК о ВМ АК мя АНА М мила УВО їх т ЗV y vuk - рН A ve va BЖ 1 he e ke ДЕЖР ІZ De yn iYilTe MMa Cheoyu st yes already that so I u y y'k soot mm kh Azh ХКжО ХК o ВМ AK mya ANA M myla UVO ich t Z

У хх ЗІIn XXIII

Ж у сок Я ке Хі хо вк п Хе М ша тд у жу ит КуляZh u sok Ya ke Hi ho vk p He M sha td u zhu it Kulya

Аве злу Киж Має цео Аїв уз сіб Меб аз сви Уві ва ши сів коAve zlu Kizh Maye tseo Aiv uz sib Meb az svi Uvi va shi siv ko

ЗЕ їх й, я 35 С та пт і ЕТ у туя ж Ж ВЕ ХА БЕК. ода я Федру Ходи,ZE them and, I 35 C and Fri and ET in the same ZH VE HA BEK. ode to Phaedra Go,

Бе Тих тує бі біп о беш мес їх Ве був йів бук Без вух бух ТуBe Tikh tuye bi bip o besh mes ih Ve was yiv buk Bez vuh bukh Tu

ГУ шохо ох ке ве во бурю Жахи БИ бах у дено Ес М ск М Ноя коду км рух Що КК ук жо зів Бі тує БЕОо шій бек це кує шив ща оеш ву Ви КО и за бух КК»GU shoho oh ke ve in the storm Horrors BY bah in deno Es M sk M Noya kodu km rukh What KK uk jo ziv Bit tuye BEOo shiy bek it kuye shiv shcha oesh vu You KO and for bukh KK"

Еш ти Гоа щаAre you from Goa?

Зк Жити о ус сб Ми Ж я Мкха Хтраї Ел (Зв хо Вошуу ум ЖZk Live o us sb Mi Zh i Mkha Khtrai El (Zv ho Voshuu um Zh

Ре дка Ту Уві ех вка біл о Взв ів Ні сі ТЕр лев УЗ ТМ оВеЕ щЕ т кеRare Tu Uvi eh vka bil o Vzv iv Ni si TER lev UZ TM oVeE shChE tke

Ж 5 паж Тк я ин Ж мо бір Ту ге Жов, ке Дедал т ох хк ААууЖ 5 page Tk i in Z mo bir Tu ge Zov, ke Daedalus t oh hk ААуу

Еко дво тТВх УК обую Тк беа Бей су уві щас Бу ПІУ Сі омпуя мех й зу ху яEko dvo tTVh UK obuyu Tk bea Bei su uv schas Bu PIU Si ompuya meh y zu hu i

КК Но МАЕ т Мои Кая т я с 7 ХВ кукі жк М жи 7 М ху ху авип вдів ща Аза Ікеа аз мес Уві із ст тую Бео Вк зу віУ ЗКУKK No MAE t My Kaya t ya s 7 ХВ kuki zhk M zhi 7 M hu hu avip widow sh Aza Ikea az mes Uvi iz st tuyu Beo Vk zu viU ZKU

ТІВ 1 5 о с Мо ЖЖ ох ду те тою Ж гу Тужи томи зма дк піл ім) Бер зів вви Мет Уві Муз Ві сей шу бю щі ко соОжи беє ли лах, то і 135 155 т в ому тк сов ту а а о КН ННЯ бак КК джу Фуко КвTIV 1 5 o s Mo ЖЖ ох du te той Ж гу Tuzhy tomy zmadk pil im) Ber ziv vvy Met Uvi Mus Vi sei shu bu schi ko soOzhi beye ly lah, then i 135 155 t v om tk sov tu a a o KN NNYA bak KK ju Foucault Square

ТУук Без був Ар Ве сяк ско бій даБв'ови ія бе оУВК ЖІ шк ЗЕ ук ак пе жк аа В ї55 16 же сажу ох жо ут ри у вн НЯ їз шк пи іх си ТЕ дея чек мет То ве УВУ ші ехо бів Аж Мав лев Му куд век епоху ком во сякTUuk Bez was Ar Ve syak sko bij daBv'ovy iya be oUVK ŽI shk ZE uk ak pe zhk aa V і55 16 same sat oh zho utry u vn YA iz shk pi ih sy TE deya check met To ve UVU shi echo biv Azh Had a lion Mu kud vek era kom v syak

Ух 175 КУUh 175 KU

ГЕ товуєь 14 52 вус мад сбкжу К о ях Ту ак я Яни в я ах у: ж ККGE tovye 14 52 vus mad sbkzhu K o yah Tu ak ya Yany v i ah u: z KK

У уви зі Бев оц бик БІБ сов вів Сун ою Аа те Ай ве Ві тва І8О и кі хау ТО люк ВКА пори нин нн а ин бат ту рей бій о тук ква січ Бу ке пу ТВ ге се осоу сік Аа 1 ОБО 5 ду як Ж кв тоиши ко кн Кожух ик З шу М дже Мк ву йпеї чвІ Уя ази о се дк ав бно бе са Чі Джи Уві де МЕ одаU uvy zi Bev ots bik BIB sov viv Sun oyu Aa te Ai ve Vitva I8O i ki hau TO luk VKA pory nin nn a in bat tu rey bij o tuk kva sich Bu ke pu TV ge se osou sik Aa 1 OBO 5 du how Zh kv toyshi ko kn Kozhuh yk Z shu M je Mk vu ypei chvI Uya azy o se dk av bno be sa Chi Ji Uvi de ME oda

Ед порох пай ї ж із х : я асо льш Фе Ту БЖ Ж Мк шу Я, ет на шво чн И ен о чи Хр ів ві Тв иш По вх шо ме ше ВО АБ МжХх Там) У шу МіО КЕ пи селу кА важ Ка ТЕТ К, Ед «кю Ж К в ння я ї 3; їі М що ту и оду бору Ж ХК фа б ня Хв Ж Ста ЖовEd powder pai i z h: I aso lsh Fe Tu BZ Z Mk shu Ya, et na shvochn I en o chi Hriv vi Tv ish Po vh sho meshe VO AB MzhHx Tam) U shu MiO KE py selu kA vaj Ka TET K, Ed "kyu Zh K vnnya i yi 3; ii M scho tu i odu boru F ХK fa b nya Hv F Sta Хов

Вих де сам жа Ат муюшо аним ме шо ВВ ХВО ВО вМЕО С МУВ уко опр ух сх ж Й а ащИ а фія Ша у рих Її зх Фуули жує Ед ому са дак, од в ди ве рю КуVyh de sam zha At muyusho anim me sho VV HVO VO vMEO S MUV uko opruh shh zh J a aschI a fiya Sha u ryh Her zh Fuuli chews Ed omu sadak, od v v ryu ryu Ku

БЕ щі Був АкроБуУуж ВЕ РКО Ук ВЕ леж ж Шев кпе дгеа й НЕBE shchi Was AkroBuUuzh VE RKO Uk VE lezh same Shev kpe dgea y NE

Ех ТУ хуткіOh, you are fast

ЯЗ; КОХА М со Ж дж Завіт їм СУ шк Хода бю окр Кт ку М хи пай мух дар Би аЗе АкУ без Бі сви бу Бей сімя слуI'M FROM; KOHA M so Zh j Covenant to them SU shk Hoda byu okr Kt ku M hi pay muh dar By aZe AkU without Bi svi bu Bey family slu

ТЕ ЖЕК ех сік шо КЛ ХХ нер руху ку «яв 4 «Ак бюро а оон ЩА УЗ «вих ВЕДУ мохи ве хіти ах ку фуги У «ех Шручив ПОЛКИ «ЛК ка ж ше ло на ни НН а НН «и сНЦиИС чех ПЕНЮ ИМЕНИ яTE ZHEK eh sik sho KL XX ner movement ku "jav 4 "Ak bureau a oon SCHA UZ "vyh VEDU mohi ve hits ah ku fugi U "eh Shruchyv POLKI "LK ka zh shelo na ni NN a NN "y sNCiIS cheh PENYU NAMES i

Метка хх ж ух. я каша ці ш мів міг ші ма ше Я фр що зу кЗж Ні бів НЕ Ні неш ша ОВУ і 5 4 Ко ух. Кок ск що «Ем в и НЯ сек БІЛО шт Пісковик ме ке же и ЮК ЖЯВА СПО СВХ МОВНУ УКЕ. кити юн жиMark xx and uh. I kasha tsi sh miv mig shi mashe I fr that zu kZzh Ni biv NE Ni nesh sha OVU i 5 4 Ko uh. Kok sk that "Em v i Nya sec BILO sht Piscovik me ke same and YUK ZHYAVA SPO SVH MOVNU UKE. young whales

Ко нох их дк сажа меооум де ди, секкуї хкдіх ік скол дв «Че ПИКо тус гра дОВеОМОУКа сивая ук од Я шх мета пила ап їх «а БО по тр а їрі о ро а із ів Ніж Бі Вів ів « Кк х У тай й ве Ок лАНЯ ру - А «їх ее чх п едкх кине БЕНПОСКKonoh ih dk zazh meooum de dy, sekkui hkdih ik skol dv "Che PIKo tus gra doVEOMOUKa gray uk od I shh meta pila ap ih "a BO po tr yri o ro a iz iv Nizh Bi Viv iv " Kk h U tay y ve Ok laNYa ru - A «ih ee chh p edkh kyne BENPOSK

Ел Нюмпро ар юе с жи Хо кайо» 51 піл сти Ек Ж зма Уві пів о пеЕ і шо шу «Іс» «ші 8 «ТИВ Біпск. роту УНЧчиЯ ше «Ед Мов. вх дод А ОКEl Nyumpro ar yue s zhi Ho kayo" 51 pil sty Ek Zh zma Uvi piv o peE i sho shu "Is" "shi 8 "TIV Bipsk. company UNChchiYa "Ed Mov. add add A OK

АЖ це яю я Ки жThat's what I eat

ЕК АХ і ів «тІб» УЗ перен кі «ЕК ОВ сире. В куEK AH and iv "tIb" UZ peren ki "EK OV raw. In ku

Енея виплеКк я Ж пруиощуец Жито як ке Масзси зве енізківEneya vypleKk i J pruioschuets Rye as ke Masszsy zve enizkiv

ОМ я капи Ві о. хв у ки пак Уа. їх РІЖН хOM I kapy Vi o. hv ky pak Ua. their RIZHN x

КУ шах А ра ку ше ЖК коза ЧО отих кода МАЛЕKU shah A ra ku she ЖК koza ЧО отих кода MALE

Саки Мох допухх ккує «Іа» Неще вари «ді В «ам ЩА тиск М сах Кшед Х пф ом Чіа хи ТУ угує Ху очне я на в НН са мух ще ох Бе їн ЗА Тйх Баеаб ТБс Аїа ЕКО ТУух шЖО зу УЖЕ мМ ув ї Я Ка 15 дя Удачи М я Би Жду юю ЗЕ Шк пут ско ую а укSaki Moh dopukhh kkuye "Ia" Neshche vari "di V "am SHHA pressure M sah Kshed X pf om Chia hi TU uguye Hu ochne i na in NN sa mukh still oh Be yin ZA Tyh Baeab TBs Aia ECO TUuh shЖО zu ЖЭ mm uv І Я Ka 15 дя Good luck M я Б I Wait ую ЗЕ Shk put sko ую a uk

Зеї їешж Звк ро Бій біз Бей пек дек ча ВКе Ву дек се Ще БЕ ща МВ. ЗО іч ХМ слюди ух я Тука З дж Лоу дк их ШУ дя а год ІZeyi yeeshzh Zvk ro Biy biz Bey pek dec cha VKe Vu dec se Sche BE shcha MV. ZO ich HM mica uh i Tuka Z j Low dk ih SHU dya a hd I

Зла Уві мщжч Бжо зів Бас Зео жероікЕ Сув ав ко Або Ба Бей аа а ях якщо. Ха фу дя Жак го ун : хо но ви КУ В пишу Му. оZla Uvi mshzhch Bjo ziv Bas Zeo zheroikE Suv av ko Abo Ba Bei aa a yah if. Ha fu dya Jacques go un : ho no you KU V pisu Mu. at

Май інею ТМЕ Бк бум Ві Ак цев'вАін бе сів ВвпаоМмеє Ак ся у шеMay ineyu TME Bk boom Vi Ak tsev'vAin be siv VvpaoMmeye Ak sia u she

ЗО т БО ія пож бла Ма їв ті тм бра ВІ Ті 1 3 Альо бем ше і пів тТеЕ вве Зі Був Блв сію веж Бе це бфу спау Аа о Бе ТВ БУ м -й5 як ще ва т 15 ва й шу ем стр й ЩЕ «іх 55ZO t BO ia pozh bla Ma ate ti tm bra VI Ti 1 3 Alobo bem she and half tTeE vve Zi Buv Blv siu vej Be ce bfu spau Aa o Be TV BU m -y5 how else wa t t 15 va y shu em str y There are still 55 of them

Ко еЬ шо «ії І «вій Біпок сі З дл вух Кук З жу «ІЗ» МасСасв ЄвисісніаКІв ср сам УхKo eB sho "ii I "vii Bipok si Z dl vuh Kuk Z zhu "IZ" MassSasv EvysisniaKIv sr sam Uh

Хоувх мех не Ма ве се то спін ща о шу фбУікщ діам СХ бу. тод стіHouvh meh ne Ma ve se to spin shcha o shu fbUikshch diam СХ bu. tod hundred

Муз Ява тн Уаї Аве оївХ без ТБ дія Бе Су сбко сут Сув са сСтує ш тий КЗ ї Ко ще БMusic Java tn Uai Ave oivH without TV action Be Su sbko sut Suv sa sStuye th KZ i Ko still B

Фіклє бути біде Стхеая Бак мниюню сода їжу вушних бін с т ОК ехFiklje be bide Stheaya Bak mniyunyu soda food ear bin s t OK eh

Веж пев ек бе бащ о вюу мед ше ее Уві ко бо беж Зві ЇХе ЩУThe tower is the tower, the tower, the med, the house, the house, the house, the house, the house, the house, the house, the house.

Ж 5 3 ща. г М о Не ШО одух Ж рум дн як о гл Ух ху Шк жи Жити Жук ваішю же ЕТ ока шт ер Бе сю ях из Ку ЕХО АМФ спо щиZh 5 3 scha. h M o Ne SHO oduh Z rum dn as o gl Uh hu Shk zhi Live Zhuk waishyu same ET oka sh er Be syu yah iz Ku ECHO AMP sposhch

Б х їB h i

ЛЕ о 35 о Еш трах сте Кох М кожух с фак М що ОЇ Тука б Ми дум Зх ну чах Бе) ТУ БЕ Буш Мой дк Беца Бе Біб дви меж ех шу щехLE o 35 o Esh trakh ste Koch M kozhukh s fak M that ОЙ Tuka b My dum Zh nu chah Be) TU BE Bush Moy dk Betsa Be Bib dvy mezh eh shu scheh

Фе шко пFeshko p

Зо ХХ иSince the 20th century

Фк мае ДІМ ОХ жд Ком лем ху, ЖтТням Хуг ЇХ бу І юю МЛ до хан Мих КУ ЖІFk mae DIM OH zhd Kom lem hu, ZhtTnyam Hug IH bu I yuyu ML to khan Myh KU ZHI

МАХ СУ вва Бу жа впкч кКОо ЕПе о Бі БауУ Від ж» улАХ ДХ дах «ут «Ж ухMAH SU vva Bu zha vpkch kKOo EPe o Bi BauU Wid zh" ulAH DH dah "ut "Zh uh

ВЕ НІ НЕ ЗО дея воно Ка хи ЛЕ жур чі В чн ї ру ВХ жди вики ЖІ дО бБово пт ши КМ ОММ ст ЩЕ «Я» хе сни Мох БУК; її ЖЖ Ди тах шля шк м Хюню Ову Ху жи М оду ик -АвовЕюЮ да ом МУ йха ом яю МАМ аж ЖИ ов зе АММК ва СУ і КЕ лк тк х НУ що ря сок тах А Тен Аж Жуан КА юю хо рез Сб куди код див по дат Бра вак Бо щі баров Ні Бі Гів Ко бае паст удо МеБОотко як т ср м «я БЕVE NI NE ZO deya it Kahi LE zhur chi V chni ru WH zhdy viky JI dO bBovo pt shi KM OMM st SCHE "I" hes sny Moh BUK; her ЖЖ Dy tah shlya shk m Hyunyu Ovu Huzhi M moduik -AvoVEyuyu da om MU yha om yayu MAM azh ZHHI ovze AMMK wa SU i KE lk tk x NU cho rya sok tah A Ten Azh Juan KA yuyu horez Sat kudi code see date Bra vak Bo shchi barov Ni Bi Giv Ko bae past udo MeBOotko as t sr m «ya BE

Ж сх сту от тТохую фі що фу Мт Вк оку ск Фуко у буки і Кк МЖ шх сту от тТохюю фи что фу Mt Vk oku sk Foucault u buki and Kk M

Бей ова А У їн нів АВЕ МЕНЯ Б ЗАЖЕ ВАТИ ВАЖКО КК Ж її тк щжЖМОоМмМу кв, Ку Ах ах 45 СBey ova A U yin niv AVE ME B HARD TO KEEP ME KK Ж her tk щжЖMOoMmMu kv, Ku Ah ah 45 C

Фі їм Ми ТУ го ХК що с дю Ти м по ази на не НК и НИFi them We TU go ХК that s du Ty m po azy na ne NK i NI

КНУ Тух кп о шу Маха зу зви ви ЕКЯ ай МН Уч ЕК ЗКУ За шо шк ре ее ух щі пе ЗХ ївО г Зі ЩИХ Ім ДІ подих токах би ПИ вро Лу ХУ помане ннк Н НН па о гтж спе б ії ЖЖ ДА В БЕ СЮ СМ їУ -У бій ше Ку пайKNU Tuh kp o shu Maha zu zvy vi EKYA ay MN Uch EK ZKU Za sho sh re ee uh shchi pe ZH yivO g Z SCHHIH Im DI breath currents would PI vro Lu HU pomane nnk N NN pa o ghtj spe b ii ЖЖ DA V BE SYU SM iU -U biy she Ku pai

Зао яти гу ЩІ ока и ек мене Я гуI opened my eyes and opened my eyes

Ех У и Ж от ЩО уся хо ко ЛУК ке Ше Ір че Ми яв. нів я как й. дух Моз схуд СХ ую Мод су В УЗИ рака Ж ру ву рю Куті их лим вар оМеї Узі пу Абая бев шБіУ вве ла Во Бей ек ек вано су ї х Зк жкEh U i Zh ot SCHO usya ho ko LUK ke She Ir che My yav. I don't know how. spirit Moz shud SH uyu Mod su V UZI raka Zru vu ryu Kuti ih lym var oMei Uzi pu Abaya bev shBiU vve la Vo Bey ek ek vano su y x Zk zhk

Х Ян ву А чн АН БЖ с Аж М Ж шу КК КУ ш ЖЖ У ще Ск хи дк ж ккдX Yan wu A chn AN BJ s Aj M J shu KK KU w ЖЖ U still Sk hy dk w kkd

Алю Важ Бак око сій лю о їмо) Ні жвВЕ ТВі хо беж ак і Ме ТЕ ху; ле, тих щі пий иAlyu Vazh Bak oko sij liu o imomo) Ni zhvVE TVi ho bezh ak i Me TE hu; let's drink those things

Жодзіз с ше КИ ж рух не НН їх жк соми У поваж щЕЯ от два (рю -зероУВ їх ЖЖ ЕМ о Кт ОВ КВ) ес дав муж а ЖК АК КО Ва можу 4о 15Zhodziz s she KI same movement not NN their zhk somy In respect shHEYA ot two (ryu -zeroUV their ЖЖЖ EM o Kt OV KV) es gave husband a ZHK AK KO Va can 4o 15

Жов Ж вих бі п та що фо мастик воша хв шен ко я мем нам АК ша ВУ УА Я су жи ам ки е Я й мам ха ек кА У ЖИ пз БЕ ГОХов Ж вых би п та что фо мастик воша хв шен ко я мем нам АК ша ВУ UA Я su zhi am ki e Я и mam ha ek kA У Жи pz BE GO

Ек ях «ж ши Кз Тож Ж Жди ММ до ЖК ок Бо жу и ин и ьниEk yah «zh shi Kz So J Wait MM to ZK ok Bo zhu i ini iin

МЕДОКЬ У шо ЕХ А а ше дух ГЕ Та ав х ам мае Ех УА ї Ко ши ку Бе срех їх Ка 2 йо екз дви сш» 5 ее ШК «ко йHONEY U sho EH A a she duh GE Ta av h am mae Eh UA yi Ko shi ku Be sreh ikh Ka 2 yo eks dvy ssh" 5 ee SHK "ko y

Кутя й оку и «жів Білих дО і; Е що , «135 ново завізна «НК» ЗЕ ож ТК у Уа У их му ев ЯТЬ іх «и аKutya and Oku and "lived by the Whites and; What, "135 newly imported "NK" ZE och TK in Ua U ih mu ev YAT ih "y a

ТАС й ши яTAS and I

Сееени 7 Фхух «стека іпак оче, дк дика кеій» Мов ов. «а». За іх р Ми жо пів авО Ме Уві х сту туя аа у м ї ЕВ. о срSeeeny 7 Fkhuh "stack and eye, dk dika keii" Mov ov. "and". For them r Mi zho piv avO Me Uvi x stu tuya aa u m y EV. at Wed

КОХ 4 коки В ил лу і пух мя и ВиЛИХKOH 4 koki V il lu and puh mya i VyLYH

У уки ші ех кві» Кошщо вавісчлх «а» во сх ел Ух . з сU uki shi eh kvi" Koshscho vavischlh "a" vo sh el Uh . from the village

ТвжоАка Бе тує і ких шо «СО Б у я «ші а чих БілОоКTvjoAka Be tuye and kih sho "SO B u i "shi a chih BilOoK

М сю Мих ше ж» Мцасврх «ант» В хх. п чья Тгх, біж а тів вка ; 1 сшійв'неM syu Mykh she zh" Mtsasvrkh "ant" In the xx. p chya Tgh, bizh a tiv vka ; 1 sshiiv'ne

ТК я х ох 1. ве пф ДО ту «Еш поле «їй ноОшто запмовааТК я х ох 1. ve pf TO tu "Esh field "her noOshto zampovaa

Са НВ ших ве за шіш сей вв ї ї ван доу хом ма не ее КУ «ВРХ 4 ж яSa NV shih ve za shi sei vvy i yi van dou hom ma ne ee KU "BRKH 4 zh i

КЕ БО шок ТЕ ву з 5 ша М о. і сова ох «ас ЯKE BO shock TE vu with 5 sha M o. and owl oh "as Ya

І шо Ті МО д шати им ше хв 1 щих ки «Ел жа яю :And what can you say to them in a minute, "El zha yayu:

Ж 4 обр їмо ва кіш МАЛО Х я м Мате пліт еш и Мой ЗарьепаЖ 4 obrymo va kish MALO H i m Mate plit esh i Moi Zaryepa

Ко Жили к «кап са гЕЗ Бех сдежє іа їKo Zhyly k "kap sa gez Beh sdezhye ia yi

Ся служу «102 55 «ії мкл лу ТІЇ ми «ші Білок дика Си суч. «ва» Ми ше. «800 85 сблула Мир хх Уннни пат ов ува мехSya serve "102 55 "ii mkl lu TII we "shi Wild squirrel Si such. "va" We she. "800 85 sblula Mir xx Unnny pat ov uva meh

З ел од «шій вFrom el od "shey v

Кіт»Cat"

Хкжу ко ОО лу 4 туту «вій БІЛИК шк лиху Дфііном уч мож «лій» Нео ває «ИН» ще оо Ге ях я у Мішки же аж о сСув пею жКОо х 4 яти я кеш а: чи ї «жі а преорхєнии «Вій щідоОоЖК «війх Мих зр. «аоОпУ в7Hkzhu ko OO lu 4 tutu "vii BILYK shk lihu Dfiinom uch mozh "lii" Neo vaye "IN" more oo Ge yah I have Mishki same as o sSuv peyu zhKOo x 4 yat i kesh a a: ki yi "zhi a preorkheniai "Vii ShchidoOoZhK "Viykh Mykh zr. "aoOpU v7

Ж су хе реч НеNo, that's not the case

МУ КУМ Ко кА сзаятх ки «шериж ВMU KUM Ko kA szayath ki "series V

Со ль «я їх, чилі рах ни ск ВЕК «в» Ношо хврівоа «002 5 у Ж же ЕС аж їх ем ли ща мамSo l "i them, chili rak ny sk VEK "in" Nosho hvrivoa "002 5 in Zhe ES even their em li shcha mam

З а чия, рон «ВМ» п ет КкZ a chia, ron "VM" p et Kk

КА КОKA KO

Сі жу ЖАХ зу «жим МАЛИК ка кох ій» Миш в. сли ДО «Я» БийSi zhu ZAHH zu "zhim MALIK ka koh iy" Mysh v. sly TO "I" Beat

Се нь ем ось яд пів о Ббеш пеуУ ви о Сех ї БІ ни ух Сх тео ЗО ря хижі 4 «шій БілоюSe ny em here yad half o Bbesh peuU you o Seh yi BI ni uh Shh teo ZO rya predatory 4 "shey White

УЖ тя г я шоу «кі наво ав вла джу «капотаALREADY the weight of the show "ki navo av vla ju" hood

Хе пом ж а КукCome on Cook

Ме ол ші пе й «иа Ту «її а «із Білок «аа Мох во же Кк Ов. «тMe ol shi pe y "ia Tu "yi a "iz Belok "aa Moh vo same Kk Ov. "t

Уаі бек біб бе ї ев а в ЕК теж М Ж; «кі а хо З ї Зх Мет - Я оо то ХВ Заря «4005 75 бто ТВЕ бів дер «кі» 73 «їз а сеї Відак «813» Ми в. «ОО» 3 зек ТВ Був йхо «ВІійж 74 сеї й «їй» Вілок «іа» Моз зр. ках таUai bek bib be i ev a in EK also M F; "ki a ho Z i Zh Met - Ya oo to KhV Zarya "4005 75 bto TVE biv der "ki" 73 "iz a sei Vidak "813" We v. "OO" 3 zek TV Was yho "VIiyzh 74 sei and "her" Vilok "ia" Moz zr. kah and

Claims (31)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУFORMULA OF THE INVENTION 1. Виділене антитіло, яке зв'язує мезотелін, де антитіло містить () НМАК-НІ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО:20, (ії) НМА-На2г, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:21, (ії) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО:22, (ім) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:17, (м) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:18, їі (мі) НМК-І 3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:19.1. An isolated antibody that binds mesothelin, where the antibody contains () NMAK-NI, containing the amino acid sequence ЭО ИЯ MO:20, (ии) НМА-На2г, containing the amino acid sequence ZEO ИЯ MO:21, (ии) NUV-NZ, containing the amino acid sequence ZEO IU MO:22, (im) NMK-I1, containing the amino acid sequence 5EO IU MO:17, (m) NMK-12, containing the amino acid sequence ZEO IU MO:18, ii ( mi) NMK-I 3, containing the amino acid sequence 5EO IU MO:19. 2. Антитіло за п. 1, яке є моноклональним антитілом.2. The antibody according to claim 1, which is a monoclonal antibody. 3. Антитіло за п. 1, яке є людським, гуманізованим або химерним антитілом людини.3. The antibody according to claim 1, which is a human, humanized or chimeric human antibody. 4. Антитіло за п. 1, яке є фрагментом антитіла, який зв'язує мезотелін.4. The antibody according to claim 1, which is an antibody fragment that binds mesothelin. 5. Антитіло за п. 1, де мезотелін є мезотеліном людини 5ЕО ІЮО МО:43.5. Antibody according to claim 1, where mesothelin is human mesothelin 5EO IYUO MO:43. 6. Антитіло за п. 1, де антитіло зв'язує епітоп ЗЕО ІЮ МО:43, де епітоп містить Е153 і 0174 відповідно до нумерації ЗЕО ІЮО МО:43, і яке в деяких випадках має одну або декілька наведених нижче характерних властивостей: (а) не проявляє зниженого зв'язування з глікозилованими формами мезотеліну в порівнянні з неглікозилованими формами мезотеліну; (Б) не блокує зв'язування мезотеліну з муцином 16 (МОС16); і/або (с) зв'язує мезотелін з афінністю, що дорівнює х5 НМ.6. The antibody according to claim 1, wherein the antibody binds the epitope of ZEO IU MO:43, where the epitope contains E153 and 0174 according to the numbering of ZEO IUO MO:43, and which in some cases has one or more of the following characteristic properties: (a ) does not show reduced binding to glycosylated forms of mesothelin compared to non-glycosylated forms of mesothelin; (B) does not block binding of mesothelin to mucin 16 (MOS16); and/or (c) binds mesothelin with an affinity equal to x5 NM. 7. Антитіло за п. 6, де антитіло не блокує зв'язування мезотеліну з МОС16.7. The antibody according to claim 6, where the antibody does not block the binding of mesothelin to MOS16. 8. Антитіло за п. 7, де антитіло не блокує зв'язування глікозилованих форм мезотеліну з МОС16 в порівнянні з неглікозилованими формами мезотеліну.8. The antibody according to claim 7, where the antibody does not block the binding of glycosylated forms of mesothelin to MOS16 in comparison with non-glycosylated forms of mesothelin. 9. Антитіло за п. б, де антитіло не виявляє зниженого зв'язування з глікозилованими формами мезотеліну в порівнянні з неглікозилованими формами мезотеліну.9. The antibody according to item b, where the antibody does not show reduced binding to glycosylated forms of mesothelin compared to non-glycosylated forms of mesothelin. 10. Антитіло за п. 1, яке додатково містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить послідовність ЕК2 каркасної ділянки ЗЕО ІЮО МО:25 і послідовність ЕКЗ 5ЕО ІЮ МО:27.10. Antibody according to claim 1, which additionally contains a variable domain of a light chain containing the EC2 sequence of the ZEO IYUO MO:25 framework and the ECZ 5EO IYU MO:27 sequence. 11. Антитіло за п. 1, де антитіло містить: (а) послідовність УН, яка принаймні на 95 95 ідентична амінокислотній послідовності зЕО ІЮ МО:8; (Б) послідовність МІ, яка принаймні на 95 95 ідентична амінокислотній послідовності зЕО ІЮ11. The antibody according to claim 1, where the antibody contains: (a) a UN sequence that is at least 95 to 95 identical to the amino acid sequence of the EO IU MO:8; (B) the sequence of MI, which is at least 95 95 identical to the amino acid sequence of zEO IU МО.:4; (с) послідовність МН, як в (а), і послідовність МІ, як в (Б).MO.: 4; (c) MH sequence as in (a) and MI sequence as in (B). 12. Антитіло за п. 1, що містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:8.12. The antibody according to claim 1, containing the sequence MH 5EO IU MO:8. 13. Антитіло за п. 1, що містить послідовність МІ ЗЕО ІЮ МО:4.13. Antibody according to claim 1, containing the sequence MI ZEO IU MO:4. 14. Антитіло, що містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО:8 і послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО 4. Зо 14. An antibody containing the sequence MH 5EO IU MO:8 and the sequence MI 5EO IU MO 4. Zo 15. Антитіло за п. 1, яке є ІДО1, І(д2а або Ідс25 антитілом.15. The antibody according to claim 1, which is an IDO1, I(d2a or Ids25 antibody. 16. Антитіло за п. 1, кон'юговане з міткою.16. Antibody according to claim 1, conjugated with a label. 17. Антитіло за п. 16, де міткою є випромінювач позитронів.17. The antibody according to claim 16, where the label is a positron emitter. 18. Антитіло за п. 17, де випромінювачем позитронів є 892г.18. Antibody according to claim 17, where the positron emitter is 892g. 19. Імунокон'югат з формулою АБ-(І-О)р, де: (а) АБ є антитілом за п. 1; (Б) Г. є лінкером; (с) О є лікарським засобом з формулою Оє в о в СНУ в? Я Н м М ї М М. рив в о «А в во во О і де К2 і КУ кожний є метилом, КЗ ії К7 кожний є ізопропілом, В» є Н, К" є втор-бутилом, кожний В? незалежно вибраний із СНз, О-СН»з, ОН і Н; Е- є Н; і 8 являє собою -С(К8)2-С(В8)»-арил; і (8) р приймає значення від 1 до 8.19. Immunoconjugate with the formula AB-(I-O)r, where: (a) AB is an antibody according to claim 1; (B) G. is a linker; (c) O is a medicinal product with the formula Oye in o in SNU in? I N m M i M M. riv v o "A v v v o O and where K2 and KU are each methyl, KZ and K7 are each isopropyl, B" is H, K" is sec-butyl, each B? is independently chosen of CH3, O-CH»3, OH and H; E- is H; and 8 is -C(K8)2-C(B8)"-aryl; and (8) p takes the value from 1 to 8. 20. Імунокон'югат за п. 19, де лікарським засобом є ауристатин.20. Immunoconjugate according to claim 19, where the drug is auristatin. 21. Імунокон'югат за п. 20, де лікарським засобом є монометилауристатин Е (ММАЕ).21. Immunoconjugate according to claim 20, where the drug is monomethylauristatin E (MMAE). 22. |Імунокон'югат за п. 19, де лінкер здатний до розщеплення протеазою.22. |Immunoconjugate according to claim 19, where the linker is capable of cleavage by protease. 23. Імунокон'югат за п. 22, де лінкер містить дипептид маї!-сії.23. The immunoconjugate according to claim 22, where the linker contains a dipeptide of may!-sia. 24. |Імунокон'югат за п. 19, що має формулу: АЬ-5 о ї А о А нон о) / ва; М ре М шо24. Immunoconjugate according to claim 19, which has the formula: АБ-5 о и А о A non о) / va; M re M sho М. кити о уа-сіМ о 0д0 б6бо БО є) й й де 5 є атомом сірки.M. kyty o ua-siM o 0d0 b6bo BO is) and and where 5 is a sulfur atom. 25. Імунокон'югат за п. 24, де р приймає значення від 2 до 5.25. Immunoconjugate according to claim 24, where p takes a value from 2 to 5. 26. Імунокон'югат за п. 24, що містить антитіло за п. 6.26. Immunoconjugate according to claim 24, containing an antibody according to claim 6. 27. Імунокон'югат за п. 24, що містить антитіло за п. 14.27. Immunoconjugate according to claim 24, containing an antibody according to claim 14. 28. Фармацевтична композиція, що містить імунокон'югат за п. 19 і фармацевтично прийнятний носій.28. A pharmaceutical composition containing an immunoconjugate according to claim 19 and a pharmaceutically acceptable carrier. 29. Фармацевтична композиція за п. 28, що додатково містить додатковий терапевтичний засіб.29. Pharmaceutical composition according to claim 28, which additionally contains an additional therapeutic agent. 30. Фармацевтична композиція за п. 29, де додатковим терапевтичним засобом є гемцитабін.30. Pharmaceutical composition according to claim 29, where the additional therapeutic agent is gemcitabine. 31. Фармацевтична композиція за п. 29, де додатковим терапевтичним засобом є анти-МОС16 антитіло, кон'юговане із цитотоксичним агентом. ВЕ о ан в . шин шо й й с ся СНО. ц сна щ у Й шо М ЗІ кДа МРЕ чай Да мемяелін ох кеккож окр вкоявою сах хбеезв жує віІмаьЬни (секретується) р ПН, МІВІчалЬНа вла БОСВтаВана ЯВНІ і чи ее нан вааваня варили навик ав соя ; ин жк т не ню К КАЖУ» зикоонююннхй31. Pharmaceutical composition according to claim 29, where the additional therapeutic agent is an anti-MOS16 antibody conjugated with a cytotoxic agent. VE about an in . shin sho y s sia SNO. ts sna sh u Y sho M ZI kDa MRE tea Da memyaelin oh kekkozh okr vkoyavoyu sah hbeezv chews viIma'ny (is secreted) r PN, MIVIchalNa vla BOSVtaVana YAVNI and chi ee nan vaavanya cooked skill av soy; in zhk t ne nyu K SAJU" zikoonyuyunnhy ЧНУ.CHNU 2304885 5 мові КК дих й я щї селах ЕВ сю й ЯК КН ЕХ ХЕ СУ КК Са а я щей 0533 мечетей . КЕ Дж Ж дих ЕКхвем и и КР «евчін тк и ВАК ЕВ Бра сени УК К в яд СКЖ КК КБУ завів транс ИницІнн Щек й ! рі екн травскритпнннй вера ї Н Е ІЗ З ! ї КЕ х 5 й Ми неси КН х ї Н Я З р ї ї Е ї З ї - ситу й пт отим к БОР ОЕ Я ТЕ | ЕН НИ ут КН ше шк ШЕ ШЕ КІ: а ем НИЖНЯ і НИ Не М М ЕН КА її ЕЕ 5 5 ОК. ї і ще МЕН З ИМЕНИ УНН: ЕВ 1 вої 1: 51 ї І я З ї т ї ї ї ї я ї ї ІЗ я Я З : ї ї І 1 МЕН І НЕ НЕ НИ НИ МИ НН ГОРЕ ВЕНИ І ЗЕ НЕ ИН: НЕ ІНЕЕ М: | вові: : з ВИ ОМ 15: З НЕ НИ НН ЗШ Ох СН МЕНЕ І У НИ Я ЧНУ КЕ Ві НИ ІНН ЕН Е БЕ: НИ ЗИ НИ їі НН ОБО ЇХ : Н чне НИ рю: їх 531 І Н ГРИШКЗ ИН 24 ОК: Ка І Ж її ЕЕ: 1531: БЕРЕ Таі : ПЕН У МИ НЕ УНН ТЕБЕ РІ і РИ ЕНН І З НЕ ШЕ ЯН М ЕЕ КІ: НИ НЕ УНН ТЕ ОБ ЕЕ її 51 не ВИНИ З ЗЕ ЗНУ2304885 5 languages KK breath and I schi villages EV syu and YAK KN EH HE SU KK Sa a ia schey 0533 mosques. KE J J dyh EKkhvem i i KR «evchin tk i VAK EV Bra seni UK K vyad SKZH KK KBU started trance InytInn Shchek y ! ri ekn travskritpnnny vera i N E IZ Z ! i KE x 5 i Mi nesi KN x i N Y Z r i i E i Z i - situ y pt otym k BOR OE I TE | EN NI ut KN she shk SHE SHE KI: a em LOWER and NI Ne M M EN KA her EE 5 5 OK. and also MEN WITH THE NAME UNN: EB 1 voi 1: 51 и I Z и т и и и и и и и ИZ и И З : и и I 1 MEN I NOT NOT WE WE NN GORE VENI AND ZE NOT YN : NOT INEE M: | vovi: : z VI OM 15: Z NE NI NN ZSH Oh SN ME I U NI I CHNU KE Vi NI INN EN E BE: NI ZI NI ii NN OBO IH : N chne NI ryu: ih 531 I N HRYSHKZ IN 24 OK : Ka I Z her EE: 1531: TAKES Tai : PEN U WE NOT UNN YOU RI i RI ENN I Z NE SHE YAN M EE KI: WE NE UNN TE OB EE her 51 not BLAME Z ZE ZNU КЗ. ни ще Шк НИК НЕ Н ж ши шк ШЕ НЕ ШЕ НЕ ЕНН ЕН НІ ЩЕ МЕН | НИ ПИ НЕ Уа і Н їх ї І ї ї г; | ї ї У їх Ії гої 4 м ГУК ї І : кі Ох я: ГУ ЕЕ НЕ : : ЕН У: Е и І НИ ЗЕ НИ НЕ НН Н ві В НЕЗ ЕН: МЕ МИНЕ ЕЕ НЕ МЕ МЕ НИК НН Кк іще НИ ЗЕ НЕ БЕ В: х Н 1 ї ї ї Н ї ї ї їх Н ж ї Її ї Ку Н ОО хх ї Н . : Кк ї ї ї ї У ЗУ с ї ї М і її ї : ї ЕЕ: ї ї ГУ їй Н її Я ї І ої і ї ОР ОЕ ИН НИ ЕШ м З ЗЕ ВИ ЗМЕН НЕ МЕН |! рі І МЕ х ї З ї ї ї І ї ї і Е 1 | ї І у її Мох ї ї ж х Ох ої є З і ї НЕ МЕ НЕ 5 ї ПИШЕ ЗЕ НУ НЯ : ЕОР БК: КЕ 1 5 її 31 З г СІ МЕ У В З ШЕ: хі І ЗИ Я: и НЕ ІН Я З ПЕ ЕН ОКО ЕЕ З її КЕ: и ЗИ НІШУ ИН З ех и І НЕ ПЕ УНН Е ЗИ Н ОБОЇ ЕЕ : З ї Ек 3 ї і ї ї ОО? ї шої ОХ ЕКО: Ж: ОК: 1 ї 1 ї ї ї І ї Н кої ї ї К З Є 3 ї ї ї ОО: : ї жо У їх їх ї КЕ ої ж її ї Я ї ї І Н Н Ко: ї : е ЗЕ МНЕ НЕ МНН М ЗЕ ЕНН М ЩЕ ЕНН НИ НЕ п ЕЕ и Іі НІ НЕKZ we still Shk NIC NE N zh shi shk SHE NE SHE NO ANN EN NO SCHE MEN | WE ARE NOT Ua i N ih i I i i i g; | и и U ih Ii goi 4 m SOUND и I : ki Oh I: GU EE NO : : EN U: E i I NI ZE NI NE NN N vi V NEZ EN: ME MINE EE NE ME ME NIC NN Kk still NI ZE DO NOT BE IN: х H 1 и и и N и и и их Н ж и І и Х Ku N OO хх и N . : Kk і і і і U ZU s s і і M і і і і : і EE: і і GU і N і і I і і oi і і OR OE YN NI ESH m Z ZE YOU CHANGE NOT MEN |! ri I ME x і Z і і і I і і i E 1 | І І у є є І є ж х Ох оі є Z і є NE ME NE 5 ц WRITE ZE NU YA : EOR BK: KE 1 5 і 31 Z r SI ME U V Z SHE: hi I ZY I: і NE IN I Z PE EN OKO EE Z her KE: i ZY NISHU IN Z ek i I NE PE UNN E ZY N OBOI EE : Z i Ek 3 i i i i i OO? Х шой OH ECO: F: OK: 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 i : e ZE MNE NOT MNN M ZE ENN M SCHE ENN WE NOT p EE i Ii NO NO ГК. З кої І У її: І У ї Н Н РІ Ех 1: 3 ї її Ех ї М : хх їЕ: Хе 1 ї : х ї ї х Х ї ї Н ї ї їх ї Х ї ї Я ї Е ї 3 І х ї 1 3 І х ї Х ї ГКУ де ЗМЕН з УНЕ НЕЕ і їх: ОУЕН УНН У: ИН ШЕ НИ НИ М НЕ хх 1: і ШЕ шишшшшшшш шишшшшшшш ще ЕЕ НИ М ЕЕ НЕ ШЕ З 5: ИН НУ З 1 СН ж КЕ МЕ З ВИНИ МЕ УН Не К З Кк 31 ї т ОО ОО І т 1 Н : 5 Н ї 1 я : х | З Ох хх: : ; ЗЕ НИИ ЗМЕН НЕ НИ НЕ НН ЕН 55 НИМИ МНН НЕ МИ УНН ЕЕ 153: ЗЕ: ЗИ н ПЕ НН Ж Н ри З НЕ МЕ НУ ВЕ ЕН НИ ЗИ ШУ 85133 : Є ЗЕ БОБ ОР Ох 5 і З ї ЕЕ ме їх В ле НИМ ГУ ШЕ ШИН Е Ге її ї СЕ ї ї же : Я же ЖЕ Я ї Я ї ї ї К Н паж З З М НЕ НЕ НЕ 5: 5555 КОР: | 5 ГР: ГКУ 3: МЕ ЕН І НЕ 1: І НН СОН ЕВ 1 ОХ кі 5 КОР її: 5 Н НЕ МК НН РОШЕН Н її ї ВОК: 173: : Е І РИш 3 ж НИ НИ І її: 53: Е Ох 5 : : ї оо: їх : ї хх ї у з ШИНУ Е 4 її: и : є ЗЕ НИ НЕ НЕ ЗНУ ї | КО. Я РІ г ке ПИШИ У Зх: НН и У Р 3: ТЕ нишІ ЗЕН И ГОМ ЕВ МИ ИН ІМ ННІ ЗНИК: ї 5 п ЕЕ: 1 533: з НЕ НН НЕ ЗНУ 5 її ж НИ У У КО Ех КО 1 г ГУ НН: хх 13 З 1: ж: Кк 1 ї її ї т ЕІ Н М і ИН З НН МИ МОУ о. оз х ЗУ ї у з ЗНМ У 3 : у же МЕН НЕ М НЕ ШЕ НЕ НИ НЕ НЕ ШЕ ШЕ НИ НЕ щк ще ШЕ МНН МЕ ШЕ МЕН : ДЕН ШЕУ НЕ ЗИ НЕ МЕН ОНИ У МИНЕ НЕ ШЕУ ! ЗЕ У З ЯН ШИ і з УНН РЕ Я Ж Її се, сх. й КІ Кк ї ї рі ї ї й : У М ї КІ ї 3 І ї Я їх ї х ї ї а ї У ії ї ІЗ х їх ї Х ї ї ЗК ЖЕ 31 и НИ НИ 3 1 З НЕ МИ НИ ше МИНЕ З НЕ: НН ШЕ ШЕ х Е с: ЖЕ ШИ МИНЕ ЕН НН ЗИ НЕ ТЕ 5 І ти и НН з МИНЕ: ї 5 31 вес ле ШЕ М МЕНЕ ; ВДЕ НЕ НИ ЗШ НИ НИК І МНЕ НУ кими НЕ НЕ І ПЕ І НН НЕ з 5: 3: Е Е Е х 3 ї хх: ї ' х Ех ОК: ж ї 1 У 5 її НК ЯН НУ ін : Е Е; кох Іще ГУМКУ ІЗ ЗНУ Н її: 2: Ж Ех ї ж Не Н її ЗЕ: х КН У г І З: ЩЕ НИ НЕ НН ЗЕ і ТЕ ЕЕ ОВЕН І НЕ НЕ ЕД НЕ: В М У ЗМЕН ВЕ НН Е НЕ ж НЕ ПИ ННЕ Ж З РІ. І: 5: ОК їі ж ві ЕВ НУ ІНН ЖЕ НЕ нин ВІ |і ИМЕНИ НЕ З МЕ ЩЕ У НЕ ШЕ НИ НЕ: ВИН НИ М З НЕ: ХК Я: і й ШЕ НЕ Ж ЕН ши ше ЕТ: ше ще ши ше 55: з і ЗЕ 3: ЕН ТЕН З Ше г ИН 1. з НИ НН НН: ху ЕІ НИ ЗЕ НЕ МЕНЕ МЕ І ШЕ НЕ НЗ ех ще МИ ЕН ЕЕ ; г ЕНН ДЕ ЖЕН ШЕ МЕН КЗ Я Н ї : Я ЗЕ 5 з ї : ОЇ 3 3 1: З Н їх я х ГУ 5 5 У Н ГІ ТИ ї ї ХА КОЖ ж ЗИ НЕ ИН ЗЕ КО же НИ ИН От Е ХХ л1, 1: 3 1: - Е Н ї Н ЕЕ у ї хх: Н : ж 5 ї ї ї Ох ї З З ї Ох я ЯН ЕНН 5: : 1: Н ж ЗНУ 5 НН ШК хх: її її і М НИ НУ КО: її: Е; її : НИ У ЕН ие 1 Ох РІШЕН "ЗЕ м НЕ 5 з ії є ПЕН УНН ЕН НЕ: Я: : | НЕ Є КІ. ЕЕ ШУ 3 5 ЕНН НН: КОР ж ЕН ЕК Мі НИ З НЕ ШИ 13. З її 1 ОН НИ НУ и ТИ НЕ У Кк: НИМ: МИ МЕ 5 1:15 5 1: ГЕ Н Н МЕ НЕ Я 1 В: х БОР ох ї ІЗ КЕ ЖІ хх 51 Ох г НИ и рРІШН 1 : : їх Н . А їх же Е жк І ОО: У ЗИ НУ чу : Н ; гц ЕВ У ЗЕ Е ВИНЕН ХЕ ЕЕ: Ж ОВ: 5 Ж: : НН НЕК ; пе ЗЕ НИЕ ШИ і ЕЕ У ; МИНОМ Н Н: ж НЕ З УНЕ МЕ ЯН З ж ЗИ НН ЕЕ Н МЕ М НН НЕ ЕН св ЕН МНЕ ШИ НЕ ИНЕ 533 Т 5 | ще м ще МИНЕ МИ НЕ: з оо: ЗЕ НЕ ІД 1 їх: 4 Е 1 їх 1 Ї Ех їх 5 Ех р ї ї : ї т : ї й ї ї її жк ї 2 «Ж х 1 : Н х : ГНЕ УНЕУ х Е КО: ОМ НИ ЕН " і м У НЕ КОЖ В: ГИ В 3 10 Н х Ех 1: Е Н РИ ї ї кої іч ї ї ї її У : ї хх ї ї ї х же : їх 53 5: є З НЕ НННЕУ ЕНН У хі ІЕЕ КІ КЕ: БК М ЗЕ ІМ НН 1: 5:43 ї Н Я З А Її о їх ї КІ ко: їх х ІЗ ї їх 1 1 Е й ї т ї ї : Ії Н : ї ї їх Її І Н Я ; ї ї ї жк КІ .. ; І ЕЕ я т т Мої Е ох Е; ї й : Н І З ОО Ох ї Й и ж З НЕ НИ НН ІН Наш я НЕ НИ У ж ОВ 5 ЗЕ НЕ ЗИ БЕ 5 У її сек ї КОХ ї ї 7 ї їх В Ото : Ол ї Х 1 і: ОМ І НЕ ИН: ЩЕ Я У Еш НЕ ШИ ЕІ ЯЗ СВ ШЕ УНН НН гене ЗЕ а З ЧИНУ КЗ Ох ВИМ МНН Еш и и НЕ ЕН м ж Шк М НЕ МНЕ ра ШЕ м У УН г ї Е : т: Кк їх ї їЕ .: Е ІЗ ЕЕ: . : Н ВЕ Є ї Ск: я х : КОМИ УНН р ЕН ЕН НИ НЕ з ЗЕ 5 вк: Кі Х УМ ПИ НЕ У на ПН З: ХО: Кк : їх ї ї х ї й ї ї ї ї ІЧ У г х 1 Н 3 ї х Н ї їх ї ї ї : ї х ї 2: 4. ПЕ ЗЕ РЕ 5: ї 1: ЗИ З НЕ ЗИ НИ НИ М І НЕ І НН НЕ У І ЗЕ УНН КЕ 5 МН НИ НЕ НЕ ЯН: і НЕ НЕ ЯН МНН МИНЕ НН НЕ НУ ЗНМ З ЕН МЕНЕ МУЗ НЕ ЕЕ НИ НИ НЕ ЧНУ мо З НЕ НИ НЕ НИ ї ем ж УНІ У І з З ЕН: Ер гі Н нн з УНН с МИ НЯ НИ ИН г УМ з ЕРА: А ЖЕ: Н ИН МИ НИ ЗЕ НУ х Й пе НИ ЗУ нн Не чи її У Гі Пн НН НН ЗИ ІЕЕ фр ЕВ Її хх ЕІ ГЕ ШЕ ще ІНШ Ер ШЕ «В Я ШЕ : п ШЕ ще ШЕ Ж і ес с ЗМ УНН Есе ИН 1.1 гі 3 ше З НЕ ; З ЕН ДЕННЕ НК її І хо : нин НН ЗИ їж 1 БЕ ві ї РІШУ Не ЗІ ОН ЕН: ГК г и Я У я г ЗВЕШе Ше ЖЕНЕ Я: ЕЕ шк й ШЕ шини шини ши ши щ К ї кі ОВ: у гм НН НН З ї Ох ї РН 3 ї : ї ГУ ши ДЕ м МЕН НЕ З ШЕ НЕ ЗО Ге: ЗЕ ШЕ ЗЕ ЕЕ Ей БЕ Е НЕ З гої її: ОКО Ов РІШЕ ж ЕН ІЗ : їх З ЖІ хо: і НИ МИ ЧНУ Е Я р ї ї ї ї : є с З із У їх Я і І ї 7 шк Я ї ; : : : її З М НЕ З ЗИ ОК ж кВ ЕЕ І ЗЕ ДИН НЕ ЗШ ге З З 1 Вк РОК: Е ї Е 3 ї ї ї : п що Кс Н ї 6 ГУ ї т пе Я . ї ї |: у ГУ ї ї ї к ї ї ї ї х БЕЗ: ОЇ ОБ Ось І ее НИ НЕ п НН и ;. МНЕ ОБОВ Ох - к х з ІЗ ІЗ й НЕ Ба що: Ж ж їх мо І Її пох ТОК хх 5: : ї : ї Її Н ри ВЕКЕКІУ ЩЕ ШУ - Ж: 8 Ех ше й Я Ще: ШЕ ши ие ІЙ й Шк НЕШЕ АНЯ ї ІНН ЗБ х 5:51 ЗИ І Я З З УНН І ЕЕ НЕ НУ сх НИ ЗЕ Ж й х в В КІ ЗВ: ЕОР АВ ВІ : і р з ШЕ ШЕ Ж Я У х ру К г ГУ У КОНКУ Зк. су їз Ї х НК Х Е І З х х І 4 ї їх ї м ВН ШЕ ких Еш Б: ШЕ ЕН ИН ШЕ і Н мамнеЕ й у й ще ї Її Я: о: Б «КОХ Н КОЖ : ї З Ж ж і в ь г ЕН Я А; ЕЕ УВІ х У ІН м ЕН НУ 2 ї жо ї ж а Я ї ху ї ІЯ х КК «Е ї ж г З ОХ: І ке : Н ї ЕЕ СЕ а ШЕ ШЕУ Е зе Ж ОК ву з х ЕЕ я ЕВ: ВИ НЕ НЕ ще Фу вот о Зх ЕК ХМ ех жк р - К БІЖІ ХХ Ку хі її У їх їх ІЗ кн з НЕ ТАК м С а Ах Ж в ак тк ї що КСКЕ Ь ї З з ї х Я ЗШ ї ІЗ Н Ії Ще вн «йо. з кі ща КУ вок «жа 1 ЗВ КЕ в НИ Нк ЕН і ие а же 4 ТЯ: ни. Ге В З ШЕУ: ШЕ З Я -: БЕЗ РУ . НЕ Е ших а ЕК ся Б: НК КС ЗЕ ЕЕ ЕЕ кі аг Ов охх ОЗ ЩО їх МО ол мае: й КІ ЕЕ ї ї же а х І 4 х : ї КОД моде ДОЩ щ З ж м ж тк ЧУЄ аа вм В. мої ВОК І ха Ії нини. хижа ж пед ж КЕ КК: ПЕ м 5 ОМ ОВ ОН ОО Ж о ОО Ж щ Ж М; 7 КК З ж КУ МОЖУ МО З Ко В що ж М шОМ ОО ЖОВ ша х В З у с ножу. ОМ о жк хх КУ ке БЕ ОО ОО М хо ЕМ МО МО Ж ХУ ОО ЩО .х и т а МО ке ЗХ У КИ ОО Ж ЩІ ЕМО МО ОБО Є Ж Ох оку ща м хх Кк ан ОО У ех ОТ ОО Ж ООЖ о може о ВИ ож Мох ее ке 5 Не ке У Мох ко ІН ОМ ож Я ЖОЖ МОЖ В ЖОШОЖОщкОЖ В Ж В Ж В В. - ВШ м в ще ж од 2 Ко М Бе ВХ В ж Важ ВК З оо 5 НЕ КО що Ж СУШЕЗЕСЯ Ех од Ж доже Море м я Мох СОЯ СУ Еш ОО що о В МЕ РОЛЬ МОЇХ їх й СЕ У ЯЖ ОКО т МО ЩО Ку БМ МО ще ОО ТУ М ВЕ ля ру ї- Я ЖК со ОО щ ж ж У ВоОЖОЖ ОВ В ОМ жо о «00 З зоне МОМ ОБОІХ ов МО ж В ВИШ ШУ Б я ж с НИ ШИ ШОН шок Кен домо Мо є МЕ М ЕК ЩШ Ко щ ЖЕ Мо Ж хе ті ЩЕ Х КУ Ме оо Троя й НЯ КЯ Ех що х ж и шо МОУ хе У п КЗ Ж КУ У хх Коня Осхх - ж го Ж Ж Ж У х ЗА т щ хх що ш рев Я КЗ х Мох З ГУ Би ЩЕ яко що щш У Я ро У Ге ЩЕ ок и Хх БУ «2. «ДУ т БО ро тім, ТУ: тп хх и хо шу їх ЕЗУ ЗУ с - Ж хх. її ВАЗ хх о Її и ех І ххх в - м ш й -у МКУ й км ях ЖЕ - ЖЖ я г, МОЖ ж ожGK Z koi I U her: I U i N N RI Ex 1: 3 i her Ex i M : xx iE: Xe 1 i : x i i i x X i i N i i i i h i i X i i I i i E i i 3 I х и 1 3 И х и Х и GKU de CHANGE with UNE NO and them: OWEN UNN U: YN SHE NI NI M NE xx 1: and SHE shishshshshshsh shishshshshshsh more EE WE M EE NE SHE Z 5: IN NU Z 1 SN z KE ME Z VYNY ME UN Ne K Z Kk 31 i t OO OO I t 1 N : 5 N i 1 i : x | With Oh xx: : ; ZE NII ZMEN NE NI NE NN EN 55 NIMI MNN NE MI UNN EE 153: ZE: ZY n PE NN Z N ry Z NE ME NU VE EN NI ZY SHU 85133 : Е ZE ZE BOB OR Oh 5 and Z i EE me me ih V le NIM GU SHE SHIN E Ge her y SE y y zhe : I seh seh I s s s s s K N page Z Z M NO NO NO 5: 5555 KOR: | 5 GR: GKU 3: ME EN I NE 1: I NN SON EV 1 OH ki 5 KOR her: 5 N NE MK NN ROSHEN N her e VOK: 173: : E I RYsh 3 zh NI NI I her: 53: E Ох 5 : : и оо: их : и хх и у з ШИНУ Е 4 ий: и : е ЗЕ WE NO НЕ ЗНУ и | KO. Я РИ г ке ПШИ У Зх: НН и У Р 3: TE NISHI ZEN AND HOM EV MI YN IM NNNI ZNYK: і 5 p EE: 1 533: з NE NN I DON'T KNOW 5 из ж NI U U U KO Eh KO 1 g GU NN: xx 13 Z 1: f: Kk 1 і і і т EI N M i YN Z NN MY MOU o. оз х ЗУ и у з ZNM У 3: у же MEN NO M NE SHE NO WE NO NE SHE SHE SHE NI NE shck sHE MNN ME SHE MEN : DEN SHEU NOT ZY NOT MEN THEY IN MINE NOT SHEU ! ZE U Z YANG SHY and z UNN RE I Z Her se, sh. y KI Kk yi ri yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi yi Z NE: NN SHE SHE x E s: ZHE SHI MINE EN NN ZY NE TE 5 And you and NN z MINE: і 5 31 ves le SHE M MENE ; VDE NE NI ZSH NI NIC I MNE NU kimi NO I PE I NN NE with 5: 3: E E E x 3 i xx: i ' x Eh OK: z i 1 U 5 her NK YAN NU in : E E; who is looking for an eraser from her knowledge: 2: Х Х Х ж Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Ч Х Х Х Х Х Х Х: ЧЧ Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х: ЧЭ Н Х Н Н Э и TE EE ОВЕН И НЕ НЕ ED НЕ: IN M U ZMEN VE NN E Не ж DO NOT DRINK WITH RI. И: 5: OK ии же в ЕВ НУ ИН ЖЕ НЕ нин В |i NAMES NOT Z ME ШЧЕ У НШШ ШШ НИ НЕ: ВІ НИ М Z НЕ: ХК Я: и и ШЕ ШЕ Ш EN ши ше ET: ше шче ши ше 55: z and ZE 3: EN TEN Z She g YN 1. z NI NN NN: hu EI NI ZE NE MENE ME I SHE NE NZ eh sce MI EN EE ; g ANN DE JEN SHE MEN KZ Y N y : I ZE 5 z y : ОЙ 3 3 1: Z N y h GU 5 5 U N GI TI y y HA KOHZ z ZY NE YN ZE KO ze NI YN Ot E ХХ l1, 1: 3 1: - E N i N EE u i xx: N : 5 i ii ii Oh i Z Z ii Oh i YAN ENN 5: : 1: N zh ZNU 5 NN ShK xx: her her and M WE NU KO: her: E; her : NI U EN ie 1 Oh DECIDED "ZE m NE 5 of her is PEN UNN EN NE: I: : | NE YE KI. EE SHU 3 5 ENN NN: KOR z EN EK Mi NI Z NE SHY 13. From her 1 HE NI NU i TI NE U Kk: NIM: MI ME 5 1:15 5 1: GE N N ME NE I 1 V: x BOR oh i ИZ KE ЖИ xx 51 Oh g NI i rRISHN 1 : : ih N . And their E zhk I OO: U ZY NU chu : N ; gts EV U ZE E WYNEN HE EE: Ж OV: 5 Ж: : NN NEK ; pe ZE NIE SHY and EE U ; MINOM N N: zh NOT Z UNE ME YAN Z z z ZY NN EE N ME M NN NE EN sv EN MNE SHY NE INE 533 T 5 | more m more MINE MI NE: z oo: ZE NE ID 1 them: 4 E 1 them 1 Y Eh eh 5 Eh r и и : и т : и и и и ий жк и 2 "Ж х 1 : Н х : ГНЕ UNEU х E KO: OM NI EN " and m U NE KOHZ V: GY V 3 10 Н х Эх 1: Е N Ри и и кой и и и и и и и и : и хх и и и и х же : их 53 5: е Z NE NNNEU ENN U hi IEE KI KE: BK M ZE IM NN 1: 5:43 и N Я З A Her about their KI ko: their x ИЗ their 1 1 І і ті і : Іі N : і і і Her I N I ; и и и жк КИ .. ; And EE I t t My E oh E; y y : N I Z OO Oh y Y y zh Z NE NI NN IN Our I NE NY U zh OV 5 ZE NE ZY BE 5 In her sec i KOH ii ii 7 i ih V Oto : Ol yi X 1 i: OM I NE YN: STILL I U Esh NE SHY EI IZ SV SHE UNN NN gene ZE a Z CHINU KZ Oh VIM MNN Esh i i NE EN m zh Shk M NE MNE ra SHE m U UNG yi E : t: Kk ikh i иЕ .: Е ИЗ EE: . : N VE Ye i Sk: i x : KOMY UNN r EN EN NI NE z ZE 5 vk: Ki X UM PI NE U na PN Z: HO: Kk : ih і і х і і і і і і IC U g х 1 N 3 y y N y y y y y y y y y y y y y : y y y y y y y y y y y y y : y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y : i NO NO YAN MNN MINE NN NO NU ZNM Z EN MENE MUZ NO EE NI NI NE ChNU mo Z NE NI NO NI i em j UNI U I z Z EN: Er gi N nn z UNN s MI NY NI ING g UM z ERA: A ZHE: N YN MY NY ZE NU x Y pe NI ZU nn Not whether her U Gi Pn NN NN ZZI IEE fr EV Her xx EI GE SHE still INSH Er SHE "V I SHE : p SHE still SHE Z i es s ZM UNN Ese YN 1.1 ги 3 ше Z NE ; Z EN DENNE NK her I ho : nin NN ZI eat 1 BE vi i RISHU Ne ZI ON EN: GK g i I U i g ZVESHE She ЖENE I: EE shk y SHE tires tires shi shi sh sh K ki OV: u hm NN NN Z и Ох и РН 3 и : и GU shi DE m MEN NE Z SHE NE ZO Ge: ZE SHE ZE EE EY BE E NE Z goi her: OKO Ov RISHE j EN IZ : ih Z JI ho: and WE WE ЧНУ Е Я рі і і і і: і с З з U і і І і І і 7 шк Я і ; : : : her Z M NE Z ZY OK zh kV EE I ZE DYN NE ZSh ge Z Z 1 Vk ROK: E і E 3 і і і і : p what Ks N і 6 GU і t pe I . и и |: in GU и и и k и и и и х WITHOUT: ОИ ОБ Osi I ee NI NE p NN y ;. MNE OBOV Oh - k x z ИZ ИZ y NO Ba what: Ж ж их mo І Her poh TOK хх 5: : і : і Her N ry VEKEKIU SCHE SHU - Ж: 8 Eh she y I Still: Ше ши ие ЙЙ y Shk NESHE ANYA y INN ЗB x 5:51 ZY I I Z Z UNN I EE NE NU ш НИ З Ж и х в В КИ ZV: EOR AV VI : i r z ШЕ ШЕ Ш I У х ru К g GU U KONKU Ex. suiz Y x NK H E I Z x x I 4 th ih i m VN SHE kih Ash B: SHE EN YN SHE i N mamneE y u y sce y Her I: o: B "KOH N KOHZ : і Z Z zh and в г ЕН Я A; EE UVI x U IN m EN NU 2 i zho i z a I i hu i IIA x KK «E i z g Z OH: I ke : N i EE SE a SHE SHEU E ze Z Z OK vu z x EE i EV: YOU ARE NOT NOT YET Fu vot o Zh EK HM eh zhk r - K BIZHI XX Ku hi her U ih ih IZ kn z NOT YES m S a Ah Ж v ak tk y what KSKE y y Z y y y I ЗХ y ИZ N Iii Still VN «yo. z kishka KU vok "zha 1 ZV KE v NI Nk EN i ie a same 4 TYA: ni. Ge V Z SHEU: SHE Z I -: WITHOUT RU . NE E shih a EK sia B: NK KS ZE EE EE ki ag Ov ohh OZ WHAT ih MO ol mae: y KI EE і і је х І 4 х : і CODE mode RAIN щ Z ж m ж tk HEAR aa vm V .. my VOK I ha Ii now. predator ped ped KE KK: ПЕ m 5 ОМ ОВ ОН ОО Ш o OO Ш щ Ш M; 7 KK Z w KU MAY MO Z Ko W what M shOM OO ХОВ sha h V Z u s knife. ОМ о жк хх КУ ke BE OO OO M ho EM MO MO Ж Х ОО ШЧ .х и t a MO ke Х У КИ ОО Ж ШЧI EMO MO OBO Е Ж Ох оку шча m хх Кк an ОО У ех ОТ ОО Ж ООЖ о може о YOU ож Mokh ee ke 5 Ne ke У Moh ko IN OM ож I ЖОЖ МОЖ В ЖошожощкОЖ В Ж В Ж В В В Ж В Ж В В В Ж В Ж В В В В В В В В В В В. What is the land? VOOJOH OV V OM zho o "00 Z zone MOM BOHIH ov MO same V VYSH SHUB i s NIS SHY SHON shock Ken domo Mo is ME M EC SHSH Ko sh JHE Mo J he ti SHE H KU Me oo Troy y NYA KYA Eh what x zh i sho MOU he U p KZ Ж KU U xx Konya Oshhh - zh go Ж Ж Х х З т щ хх х ш рев I KZ х Moh Z GU Bi ЧЕ како чхш ХХ ХХ ХХ ЧЭ ЧЭ ok and XX BU "2. "DU t BO ro tim, TU: tp xx i ho shu ih EZU ZU s - Ж xx. her VAZ xx o Her y eh I xxx w - m w y -u MKU y km yah JHE - ЖЖ я г, МОЖ ж ож - шетж ни - соні ден гійа ми НН Мінокловадені вве щу зн нкжиктинижьюєсь. с Б'ЯЗУВАННЯ ке нМ дів й й зах Запис лох ХДАК хх ї В КО : ч пап Лівщики УВІ НКУу ЗК Ку Нд ка ВМ мнения й Й Гостя панк АК ї щу ї : фея ро ТУТ ЕН Е вет й ших «уплдюлілл жк джина ях уч : АВ ї й пр Я КУ їх х її УВО 3 а ї ї Й со с ЗК 3 о я ДУ стнннностттттни ї ох схе й ТВА їй х нн дн син по З і о Фет тах і БА Х Гтюв ди дттт сін й ууактх Я ОВ 3 С по ЗА Н ай ї Зак ї пла З На ; З ПО вся З ден З а ЕП вн НН АК нн же х 1-2 їх ВОД о ЗАД ї Х плтння 7 м : що реф ддяяджхтт нти р лжннн няння «ух 158 З ЕК : ННІ ОН НН Я т ї ЕЕ Я дл оте пе и Ода си ЖК нин ; «ху фтиння З її щі «М пон нн: І З Не хнзнзаекнх : ЗВ | вини нини чн 33 ї і фен втнняя й БУ т жи нн нн но МО сів нт р Н В ; ов в ни зи З бу визначева І де : ре фонеми и нання илнднннннадрннння роза х ІБ Ух пов Е ТА Н но не ЩО ІЗ 73.43 ІЗ В НЕ ПИЛ се везе: а но Ї ЩІ у 7 У нн З - 54 за Н 20 пе тк З ЕЯ вк р с: пе вн М Фу В що 00 ори мин і Невизквио : дк Ух пттттяадтт тт туя укл тттнтннянкя З о ж Н щщ ї і подо вщоо: зоря а лі нини нин нн о т Тетяни КУ Ко Для тних ско качку о Меавннюмено 8 І8гНО СВ ї пе: реле І ікалю Ме ннзвачена іх ПИ мідна у ; ТЗ ІЗ покчякАннА А Анткк с тикннт, З фотки Я її у ЕУ В повними и не Й з а Кк З ї щ ; Б ш дик АНА З кої? З Тнхлюм дл Ат яятАй ї ля нен ен нини т з СН Ж АААКТУУ КАРАТ НАТО Ух М Доонннннннннну пн нннаподнннннннннині ох і ро неон ни Ме визначено ї ІВ З Ук се сон нн 1-33 ЕЗ їм 0 111-...- З ї У -к ї КЕ 3 1-3 ПО А о ТО тд но й туз і х Дрентнхчттнлтт тт ля я ттняжнтттх : дало ЕКЗ ї УМКя БОС ЯУ ї ппкктннкк тки В сколи, і Не таІНачещ й од з ! Б сети пон ЯН КЕ То Звжмкеено іш осо ПИКА и ск уя- shezh ny - soni den giya mi NN Minoklovadeni veshe schu zn nkzhiktinizyues. s BYAZUVANNYA ke nM girls y y zach Record loh KhDAK xx y V KO : h pap Hunters UVI NKUu ZK Ku Nd ka VM menya y Y Guest punk AK i schu y : feya ro TUT EN E vet y shih "upldyull zhk dzhina Yah uch: AV i y pr I KU ih x her UVO 3 a ii yi Y so s ZK 3 o i DU stnnnostttttni yi oh she y TVA her h nn dn son po Z i o Fet tah i BA Х Gtyuv di dttt sin y uuakth I OV 3 S po ZA N ay i Zak i pla Z Na ; Z PO all Z den Z a EP vn NN AK nn same x 1-2 ih VOD o ZAD i X pltnia 7 m: that ref ddyayazhhtt nty r lzhnnn nyannia "uh 158 Z EK : NNI ON NN Ya t i EE I dl ote pe and Oda si ZhK nin ; "hu ftinnia Z her shchi "M pon nn: I Z Ne khnznzaeknh : ZV | viny nyny chn 33 th and fen tutnyaya and BU t zhi nn nn no MO siv nt r N V ; ov v zy Z bu determinative And where: re phoneme y nannya ilndnnnnnadrnnnnya roza h IB Uh pov E TA N no ЧО ИЗ 73.43 ИЗ В НЕ ПИЛ se veze: but Й ШЧI y 7 У nn Z - 54 za H 20 pe tk Z EYA vkr s: pe wn M Fu W ch 00 ory min i Nevyzkvio : dk Uh pttttyaadtt tt tuya ukl tttntnyankya Z o zh N shshchy i pod o vshchoo: zorya a li nyny nin nn o t Tatyana KU Ko For tnyh sko kachku o Meavnniumeno 8 I8hNO SV i pe: rele I ikalu Me nnzvachena ih PI midna u ; TZ FROM pokciakAnnA A Antkk s tyknnt, From the photo I her in EU In full and not Y with a Kk Z i sch ; B sh dyk ANA From which? Z Tnkhlyum dl At yayatAi ila nen en niny t z SN Ж AAAKTUU KARATE NATO Uh M Doonnnnnnnnnnu nn nnnapodnnnnnnnnnnini oh i ro neon ny Me defined i IV Z Uk se son nn 1-33 EZ im 0 111-...- Z і U -k i KE 3 1-3 PO A o TO td no i tuz i x Drentnkhchtttnltt tt lya i ttnyazhnttth: dalo EKZ i UMKya BOS YAU i ppkktnnkk tki In schools, and Not taInachesch and od z! B seti pon YAN KE To Zvzhmkeeno ish oso PIKA and skuya ЗУ. Я х "Ем хх . зсув ТЕМ , мн чадце тома НнинУмНе ЕН н шЕБКНО ЛЕН ІННА чЕ БУ МаНКВ тазик жука іх УК пек З ЛЕ ММ Менш Й ше іесвийния виБивельних ЕН ПЕК БЕ ввв;виниажи ТНДНЯННХ верхні І зах паксвІІвинпиЕивиЕІ І мпи:;звнимнвюомціІвимах га пунниняияя стояння й н 5 8 5 18153515 153 БІ ЖК ОВУ хх паяянежітт няння зірки ід вт ї Жана 511555 ев век «НААН Я кя ї нн і фатин счки.і КІ плей т СНОМ аа ЛИСА уст Я ооо Мпа М в ЩШОЛИМХУМИА НМ ло нки у Я Геечеснч х ХК вія н с хіх хх ДО оон я МИША ЗІ 5» ах Ех вк ххх З КІх я Пд ЖЕК зх Ів та й чик 5 й хх хх ПЕ Жіш вік жі КВ: Іф ЖК З 1 Ки А ж ВХ хх ВХ Ах у я ПІІ жів ті ВІСК МІЖ і усві зи З ме пох 5 Б ЗЛЕ ЖЕ КІ ВІ Б КОН М під хї 2 5 МР З ї н сс БЕБІ т ЗЕ: ве я МИШКУ У дл і шва ск ув 1 зе: я ОК "з: 5Ех ж» КІВ їУ СКУ ЕК ЕЕ хх ЗХ ЗЕ М 5 5 х 5 " у Ж ЕВ х:5 5 5 в хх 5 хх меду - х У: ож Же ЕК ЕК Кл АААТРА ЗЕМ ВТІХУ й ххх в В В В В СС КИ ЕН Сех «їхав Ах 525555 " І хх їх ї Ка ч ТУ й х ск Ка КЗ 2 2 ТБ Ж: З 25 0 ТК 5 8: ІК ОБР ОЖЕ С БУ БІ ЖЕ КІ В У БА ЖІ КВ ОБ ЛХ ОФОТЕЗ ч а І ОВ У КУА Не чопваіваивиннвинанлмяВ к З ЗК ЯМ ЗХ ЯР Я 35 Р ЗХ 5 оон Кара МК п СН : кун є ї : АД ин гл ї ї МІ ЕЕ нн пан ВМ метру ТЕ і З Мжх : Жентакт ЗМК, хз вВкУ» ТежедляняннЕЕ т укклняня ть й з 5 х » « ША хол ІК ЖЕ СЕ: 55555 5 БЕБІ зв ох За вх їх В их: т ще ст ВЕ КІВ Ех «5 ж З БУ ко хз а ж т док їх 8 ЗК І ЕВ хх ЗІЖ ЖК БЕ їх В щу 5 б ЕХ їх зва й Б ЛЕ в: ВН А ІВ ЖК 17 52:55 85557851 сової в че ЕМ ШЕ хХ хх та іт 315 54 Ух З 5 52 53 х ЕЕ: ЩЕ ШЕ ВО З ЗЕ НЕ М ЕЕ Мк У З ЕЕ ИН Я витра хіх ху хх 55 3:5х5х5 7 сек ції ее и В З е З У хтів вії хіх хі: 5 5 5 вх 5 х й Та «кр: РІ хЕшІК віх ВІЇ БІ ни и и - х ЗІ ЕЕ ЩЕ ЗЩЕ ЗЕ ЗЕ ЯШННЯ ХК нити КК КК ланки ж ЕКЗ нина Ух ро їхд хх ЗЕ -х З МІЖ ве ще ще ца їм содкк ї Ж 5 ввозу ВОК І М ща І ЩЕ З В по В А 5 В б 8 дет Каша вБоававЮЕвеВи ин аа ЗО БОБ ри ва ЛИН; Ю нн Кх Ї вир : оо аква ях рт МТК 5 Т ; с; СОКАХ млляник г : КЕ ох з ПИ я ж я тав хх Уннннннннннннняяй длжжнжн, КУ З хх 7 Й м т с з зве винни ши: З ВЕ ж с: жк З х ВІ ЕЕ ЖЕ ач іх в хх т ж: хх Ж вні и и ЕІ ПЕРЕ БІР т а хх в З вим: зії гі ге Віа з пі МН В ах ж ххх хі З Ті кіЗіі всіх ХІІ ї 15і зі ях КУ Еш х Іжа З ЗІМІВІХТУТРЕ ТІК ЕІ НБУВ Н ІІ ЗІ З В ? вк ж й п ОО уз Ж ері тні : НН їх й 5 а В хх ж ВІ ЕЕ ; ххх й хх вх ЗД Ті ії їжі хх й я хх Я зних т ж а НЕОН: МІ ХК Й 5 в ТМ х Б х З ЗЕУТЕ да кі ців Є. дллннакююжн тати дня й ділян пт го Алі кАААААК ля Тер ха її Я Ж С ож, Є одхилилимя Алі іп деелт То Б пон й х поіідічя у п ТТ оте тт Медичнннтт тт ттттююютня Й й ск. а аікжднаних ваиріОостьних ділянок важкого ливі аче і гема Ооване 1 ЗК іже вазввинзвиховвввоІваднавнимвлваманві хв Ки СМ ТЕНЕТА й Сл кешож. 3 1 і Кри ІКНІ - сах У х с х с К с ся ух ї у х їж с. ч кН хз 855 Зх ІВ Уух ЕВ УВ з 5 ки г ЩО ой з ВЕСТ 2 вх КТК; о ІК КА ще «Ха ЇХ ж вій Я х ЦЕ їв «ща у Я и чи чн о з а нн и з а и и Чи ни и і а ча хе іт туї між А ї Її опо ох т Ту ж з и З З З З З В З З З І В ЗЕ Б В ЗЕ У ВЕ ЕН ЕН ТЕ Ж жи ТЕМ Я км нн и с нн и С ще хх хх г х Ж ТА ї тА КУ і. є й - ТМ СУВе с ЗМе МВ М ЗЕ ЗЕ ВЕ Е ЗІЕ З З НЕЯ 532 ЩІ Ві ТІ ВХ НЕ іх 5 хх к Ж У 3 х Кай ЧЕ ВІ Ж 3 Ж 55 В 35 5 МО я Х а ЗОМ ЗК ЗУ ЗИ я 3 Ж Ж СКУ ЖЕ ЗК ЕВ ЕВ МОВИ МОМОТ ОКОУК ЛК 15 83 пн нн по УСДП ин ткжжжююнняює кс кккккєюкє ї Уч РАХ Н че шк й пн нн нн и и а а а шк їх шк ав ох кт Е У КК 8 555 їх БЕЗ МЕТІ хкиВвхвІ іх дере ода Шин уні пад нн и ні па п вва хи М Ж Ж 155 РУТ Б'Є т ІК 5 КЕ п кВ КІ Я Ме віх МУ ВЗ Кеем х ї ї їх ї ї ї В 1. ЖІ А Мен ї том шу їх ву три шок еЕк фі сіж ох їж ік іі іві ів м хо а 1 Али шу ее ТМ х Ж Бк Б Ж ХЩ5 іт В ІБОЗІБ РТМ ЗІВ 5 В ВВІВ ВК У ХХ кВ ГЕ хх КЕ сви ще т що ти жи «їі кі ж Н Та: З и щ м М ш г г НИ ТА кох Мяча Зх 3 5 жк я ЖЕ хії3К м ошоІ зі» 5 з іще ха Кор ВОД КТ З СО А ЕЕ кІ ї- Й Ба хк КЯ ж У Я їх х х х х. Ух Жан 885 5 б НМ Ми М ВН в го в ОВ ОБ Кох ОК БО БІ КО І ІЖ НИ БЕРН МВ БЕ АВК УДК НІ Й кава СОМИ КО 214 сх фон М ЕЕ рннннннн снення Вк пе а Кк НН: гу : о вн : - їЗ зх пуюкиа кі Інн а В А ав шок КЕ з ЕЕ ЖЕ ДЕ В УК У У т Ж Три В Б УЮ хх В п Ір вк пІУ Кік вій жі хх хосія в ТЕТ и Я саке З ЧК пе ТІ ОМЖ КІ БІК БЕХ ЗР ВТ ХХ Я КК Ж В т ТІЖ 5 Б 5 ТІ БР ТЗ Ж 5 сумки МК Зк хх ТЕ 1 3 вх хе ги шого З нюх паж хівіхіз ху Іа тр 5 фо Ж 5 Б хх 5 ие ЗЕ: 5Х5537АК553: 3 КВ НЕ В ТР 5 п 5 т хх 75 Ж о ОД и є х х вх Є Х о и В в ПАРА ТТГ ТТ ТТТТ ТВ ВЖК КОНТ ТТ ТК ВЕЖА ММ тт МТВ ТАНКА я т птж тт ва х зу З ух зі а ві ваз ване за Мері З га в УМ я химе ВЕ Гума рю ван вари ги Ук меле сег ХАРАК КК ВУХ ок а ом воронок осн нанні ні осонні зи ник іні ванни ч ; ! о КОінмівіаносно . : х З ОК ВУ. ЕД З : Ж З У Ж х муку :Я : Я Я 3 скуті Я Бе | іє ММЗ лю і Н | : з екв г з се ен сн свинині УКХ сонні : І З х ча МЕ СК. ож ї АК вжи жиє Й ГУ кожи кКе. ХЕ З Х и Кех У х ІІ зх ях Я АК МИНЕ ї 1 СХ х «Ж М па З Ку Я МЕС, ЗК ї З ва : КЗ ї ї х Бех х ї З З Х нн и В и В У Я . таз че т овноплануВх шт ансвлантат Зав ; ія ТБ. ШЕ Бр НОТ ем ІЗ Ід ЗК Н ие У ; ї ЕЯ Е бх І З нин ненннн нн нон зони нина нена они ен сна нн 8: : Я Е: жо фа УМА жо ги. Кен Ї; Я ще Го члвдю мав КБТА ВВ, КВ, ще : тує Н чад ВЕ КОЮ Ко, БМ я т» ля Х і тв. уУ є : Уа, ВІР ї ГУД їх Й і Р. Х ! ІВ; и ВОМ | ! ї х ! І ї ХУ М С ж; КУ Я ен и ик и кн пи КК и кА КК Кк и я : Я ОЇ х х Я М лі (З х Я ме є. 5-3 : Оце вх У т з лк і і я сок скіжж ск ІЧ її х х Я їі Я : ЗК ЗКУ НЯ : СВК же ехуіиЗ во х х г із) ї мА ОК, НУК 00 Унія трансплантат В х Я х ке» ї ї і ї | Е ; ї санки кн НН и В в КО Я Ж г Я рю ке х зах зи дк КУ х УР ще ОМАН КАТА І КУ, я да : Я «я ї саке УЖ УКХ сх Я яку я й пролх ех мае ШК 7 з х : ОВУ о Мур невенланнн па . З : М78З и ОМ х ГУ ї ЧІ се Х х нини нин ми нн м ни НН НИ НО КІ Я Е; ї ІЗ З З а «ЖЕ | ча З Х 35 дак уекев щи : « ге ї х Я жу я сх Е КУ се рев ку кн ЗХ Я х пе ЗБЕ о УНата ансйланІВу за Ей Е ім ї ; ї Я І 5 шин нн НН МНН НН нн п м г : коощ ї се Й 1 ; ; Я ноя я за (У х пк З скнжж ко сижн скж ко сккека КІ до я ; КЗ ІЗ х ХЕ Я ще В е ІК ї З у . ЛОВУ і Я о УНута транспнантн Є. : ї яні І КЕ ї ї Н 5 доз яZU. I х "Em хх . shift THEM , mn chadtse toma NninUmNe EN n sheBKNO LEN INNA CHE BU MaNKV tasik zuka ih UK pek Z LE MM Less Y she iesvyniya vybyvelnyh EN PEK BE vvv; viniazh TNDNYANNH upper I zach paksviIIvynpiEyvyEI I mpy:; zvnimnvyuomtsiIvimah ha punninyaiyaya standing and n 5 8 5 18153515 153 BI ZK OVU xx payayanezhitt nanya star id tu i Zhan 511555 ev vek "NAAN I kya i nn i fatin schki.i KI play t SNOM aa LISA ust I ooo Mpa M v ShSHHOLYMKHUMYA NM lo nki y I Geechesnch x ХК via ns хих хх DO oon I MISHA ZI 5" ah Eh vk xxx Z КИх i Pd ЖЕК zhх Iv ta y chik 5 y xx xx PE Zish vik zhi KV: If ЖК Z 1 Ky A same ВХ хх Х Х Х у я ІІ ІІ жив ти WAX BETWEEN і usvi zy Z me poh 5 B ЗЛЕ ЖЕ КИ В Б КОН M під хі 2 5 MR Z і n ss BABY t ZE: ve i MISHKU U dl i shwa sk uv 1 ze: i OK "z: 5Eh zh" KIV iU SKU EK EE xx ЗХ ЗЕ M 5 5 х 5 " in Ж ЕВ x:5 5 5 in xx 5 xx medu - х U: ож Zhe EK EK Kl AAAATRA LAND OF COMFORT and xxx in В В В В СС КИ EN Шех "drove Ah 525555 " И хх их и Ка ч TU и х sk Ka KZ 2 2 TB ZH: Z 25 0 TK 5 8: IC OBR OZHE S BU BI ZHE KI V U BA ZHI KV About LH OFOTEZ ch a I OV U KUA Ne chopvaivaivaivynnvinanlmyaV k Z ZK YAM ZHH YAR Ya 35 R ZHH 5 oon Kara MK p SN : kun ye i : AD in gl i yi MI EE nn pan VM meter TE i Z Mzhh : Zhentakt ZMK, khz vVkU" TezhedlyanyannEE t ukklnyanya ty y 5 x » « SHA hol IC ZHE SE: 55555 5 BABY zv oh For vyh ih In ih: t sce st VE KIV Ex "5 zh Z BU ko khz a zh t dok ih 8 ZK I EV xx ZIZH ZHK BE them V schu 5 b EH their zva y B LE in: VN A IV ZHK 17 52:55 85557851 owl in che EM SHE xХ xx and it 315 54 Ukh Z 5 52 53 x EE: ШЭ ШЕ VO Z ZE NE M EE Mk U Z EE YN I vytra hih hu xx 55 3:5x5x5 7 sections ee i V Z e Z U khtiv vii hih hi: 5 5 5 inh 5 x y Ta «kr: RI hEshIK vih VII BI ni i i - х Ж Ж ЕЕ ШШШ ЗШ Ш ШАШННЯ ХК threads КК КК links ж EKZ nina Uh ro ihd xx Ш Ш Ш Z Ш Ш Ш Ш Ш Ш Ш Ш Ш Ш Ш Ш Ш 5 import VOK I M shcha Ш Ш В po В A 5 В b 8 det Kasha vBoavavYUEveVy in aa ZO BOB ry va LIN; Yu nn Kh Y vyr: oo aqua yah rt MTK 5 T; with; SOKAH mlyanik g : KE oh z PI i z zh i tav xx Unnnnnnnnnnnnnnnnayai dlzhzhnzhn, KU Z xx 7 Y m ts z zve vynny shi: Z VE zh s: zhk Z x VI EE ZHE ach ih v xx t z: xx Ж vni i i EI PERE BIR t a xx v Z vim: zii gi ge Via z pi MN V ah z xxx hi Z Ti kiZii all XII i 15i ziyah KU Esh x Izha Z ZIMIVIKHTUTRE TIK EI NBUV N II ZI Z V ? вк ж и п OO uz Zheritni: НН их и 5 а В хх ж VI EE; ххх хх вх ЗД Ti ii food хх и я хх I know the same a NEON: MI ХК Я 5 в TM х Б х Z ZEUTE da kitsiv E. dllnnakuyuzhn taty day and dilyan pt go Ali kAAAAAK la Ter ha her I Ж S ozh, E odhylilimya Ali ip deelt To B pon y x poiidichya u p TT ote tt Medicnnntt tt ttttyuyuyutnya Y y sk. and aikzhdnanyh vairiOostnyh areas of heavy liv ache and hema Oovane 1 ZK izhe vazvvynvykhovvvvoIvadnavnimvlvamanvi hv Ky SM TENETA and Sl keshoj. 3 1 and Kri IKNI - sah U x s x s K s sya uh y y kh yzh s. h kN xz 855 Zh IV Uukh EV UV with 5 ki g SCHO oi with VEST 2 in CTK; o IK KA still "Ha THEIR same vii I x THIS ate "scha u I i chi chno z anni z a i y Chi ni i i i a cha he it tui between A i Her opo oh t Tu j z i Z Z Z Z Z V Z Z Z I V ZE B V ZE U VE EN EN THE SAME JI THEM I km nn i s nn i S sce xx xx g x Ж TA i tA KU i. is y - TM SUVe s ZMe MV M ZE ZE VE E ZIE Z Z НЕЯ 532 SCHI Vi TI WH NE ih 5 xx k J U 3 x Kai CHE VI J J 3 J 55 V 35 5 MO i X a ZOM ZK ZU ZI i 3 Ж Ж SKU ЖЕ ЗК ЕВ ЕВ МОВИ МОМОТ ОКОУК ЛК 15 83 пн нн according to USDP in tkzhzhzhyuyunyayue ks kkkkkyyukye y Uch RAH N Czech sh y pn nn nn i i a a a shk their shk av oh kt E U KK 8 555 them WITHOUT METI hkyVvhvi ih dere oda Shin uni pad nn i ni pa p vva kh M F F 155 RUT BIE t IC 5 KE p kV KI I Me vih MU VZ Keem h i i i i i i i i i V 1. ZI A Men i tom shu ikh vu three shock eEk fi sit oh iz ik ii ivi iv m ho a 1 Ali shu ee TM x Ж Bk Б Ж ХШХ5 it V IBOZIB RTM ZIV 5 V VVIV VK U XX kV GE xx KE svi still t that you live "ии ки ж N Ta: Z і щ m M ш г г NI TA koh Myacha Zh 3 5 zhk i ZHE hii3K m moshoI zi" 5 z ische ha Kor VOD KT Z SO A EE kI i- Y Ba khk KYA zh U I am their x x x x. Uh Zhan 885 5 b NM Mi M VN v h o v OV OB Koh OK BO BI KO I IZH NI BERN MV BE AVK UDC NI Y kava SOMY KO 214 sch fon M EE rnnnnnnn sleep Vk pe a Kk NN: gu : o vn : - iZ zhh puyukia ki Inn a V A av shock KE z EE ZHE DE V UK U U t J Tri V B BUYU xx V p Ir vk pIU Kik vij zhi xx hosia v TET i I sake Z ЧК pe TI OMZH KI BIK BEH ЗР ТХ ХХ Х КХ Х W t ТИЖ 5 B 5 TI BR ТZ Х 5 bags MK Zk xx TE 1 3 вх хегы шого Z нух паж хивихиз ху Ia tr 5 fo Ж 5 B xx 5 ie ZE: 5X5537AK553: 3 KV NO В ТР 5 claim 5 т хх 75 Ж o OD i е х х вх Э Х о i В в PARA TTG TT TTTT TV VZHK CONT TT TK TOWER MM tt MTV TANK i t ptzh tt va x zu Z uh zi a vi vaz vane for Mary Z ha in UM i khime VE Guma ryu van vari gy Uk mele seg CHARAC KK VUH ok a om funnel osn nanni ni osonni zy nik ini vanny h ; ! o KOinmivianosno . : х Z OK VU. ED Z : Z Z U Z x flour :I : I I 3 skuti I Be | ie MMZ liu and N | : z ekv g z se en sn pork VHF sleepy : I Z h cha ME SK. ож и АК жы жие И ГУ кожи кКе. ХЕ Z Х i Keh У х II zh ях Я AK MINE і 1 СХ х "Ж M pa З Ku Я МЕС, ЗК і Z va: КЗ і і х Beh х і Z Z Х нні В і В У І . taz che t ovnoplanuVh sht ansvlantat Head; and TV. SHE Br NOT em IZ Id ZK N ie U ; и EYA E bh I Z nin nennnn nn non zoni nina nena they en sna nn 8: : I E: zho fa UMA zho gi. Ken Yi; I still had the KBTA VV, KV, also: tue N chad VE KOYU Ko, BM i t» la X and tv. uU is: Ua, VIR and HUD their Y and R. X! IV; and PTO | ! y x ! And ХУ MS ж; KU Ya en i ik i kn pi KK i kA KK Kk i i : I ОЙ x x I M li (Z x I me e is. 5-3 : Oce vh U t z lk i i i sok skizhzh sk ICH her x x Я ии Я : ЗК ЗКУ НЯ : SVK же ехуийЗ во х х гиз) и MA OK, NUK 00 Union transplant В х Я х ke» и и и и | IS ; i sled kn NN i V v KO I Ж g I ryu ke x zah zi dk KU x UR still OMAN KATA I KU, I da : I "I i sake UZH UKH skh I yaku i and prolh eh mae SHK 7 z x : OVU o Mur nevenlannn pa . Z: M78Z i OM x GU i CHI se X x nyny nin my nn m ny NN NI NO KI YA E; и ИЗ З З a "SAME | cha Z X 35 dak uekev schy: "hey i x Ya zhu i sh E KU se rev ku kn ZH I x pe ZBE o UNata ansylanIVu for Ei E im y ; i I I 5 tires nn NN MNN NN nn p m g: koosch i se Y 1; ; I noya i za (U x pk Z sknzhzh ko syzhn skzh ko skkeka KI to I ; KZ IZ x ХЕ I still V e IC i Z u. LOVU i I o UNuta transpnantn E. : i yani I KE i i H 5 doses I Фнг. оFng. at Поєднання вНнвОосльниХх дія нох ЛорКЕНО лапки дім икее у Канни а ЗЕ з у У 5 5 5 5 7 5 й хх їх М 33 ЗЕ І зх їх Ж І МО молу т М з дк а кож «кота хо ук їх лі лю кох кова хії:з5 с івипио;ав»ниливвоввио»вІа:с:віюсВвВвВВваАнвими дн ду р Дн НІЙ Пс С НИЙ ! фен С нут К-т дних стенд же ТА сер тт т доку В У с ж д є х "сх ех у оч шк м У ух М З ХХ 55 У хх ти ХХ гі З Ж БЖ З КМ ВК З ма фл унунттунядджкнняннцянняяник и ож сш кеВ хх Ф-оою км "Не АЛ хі ВІ В КУ З ІСІ її 5 Ж 5 Я З БІБЕЖ хх вид ЛК ВХ ум и м ми ав з З З Я м б т Ж хіх у ст їм кю кож ож ої: Зб хх нн ко о мМ МЕ ВВ ВИ М ВЕ ВИ МЕ В З и ЗЕ В М ВЕ В ЕЕ МІ ВУ ЩЕ А СК 5 хи ж й їх ж я їх хом м вом 2-8 ск ї-ї че іл хг САН ЗУ: ВЕК ЦІ 5 т ь щЕїЗ ; х нн ни а а В ко ам а а в Я мм м бр хм І І м жи ВЕ Б З СХ т ля КОКО ЗХ ІНВ уже вод нитанннн Ї кни ї АСК МУ ООН ІК пе пи в ї КОМІ У ГО : Ко 21. й і кї ч К її 2 ї ся У х се ж х. яка ЕД З З ЗЕ ЗЕ ЗЕ ЗШ З У 718 8 5 БЕ КУ х ка? 5555359 57: 55522 КУ 5 - Пи, й Я х ВАК а С дім сх кіт хом хх рова жит СК Ав ЕВ Ще» ЗБ з перо» в хв Мвт їх пі СА 5 ух ЕЕ Уві «Ме сі кі кіс з и ковток кох Банан - вла ЕЕ нена Ох вв з ЕЕ З З в В ВЕ ВИ З ЗВ З З ЕВ М Ве М М Я же НК ЧИ М а а Ки МО и МАК я ях ж хх а мих шок хх ож ху жан Зх СУ ЗІ ЗЕ ЗНУ ОА Вк В ВЕ З З ЕЕ ЗЕ ВВЕ З В ЗВ В М ВЕ В ТАЗ Коен нн х а жо. Кк У х х Ж КУ ях хо ах ще І т 0 їх Ач 2. пох х «ХЕ з А Ук ЖІ зи іх зи же ій сх ІЖе МН Б ОБО З м ОБОВ У ЗЕ В м З 3 В ох В с БОБ Оу ж М ОБОВ ОМ И Ме МОВНУ Не М ОЗ , нн у ЕВ ІНН їх Мами ОМ х с нн АН ся нн в ї Сжма - КІЗ і З Х доднтетянтннннни МК ддттатят ня нлотттутний КЗ І х суще т ї Хом СО КІ Я ї ЕХ ос В ЕВ А В АХ ще вх вини а на аа а ДИН с, пн зе ж ДЕ ве Я С ЕЕ У Ж Ті 5 5 я т я 5 я її хх «Ухк т «7355 х «ПИВА спот ух поря У ові їй ще ІА х йжі3хі8 ЗІКІТІ: СЯ УНЕУНЕВНКУ Е ІРЛІЕ УББ т Ж їх М Іза В Б Б І та ІБ х ЗНЯВ ЗЕ НН І ЗЕ ЗЕ З З ЗМ ЕІ А ЛтУ АХ їх хз їх хз хі Зі їхі х х хі хів с п йо у. г сх Код Ку м о С В В В ВВ В В ЕЛЕН ЕЕ о о А В ВИН В В ВЕ В У х 5 ІЗ фен нн нн і еко ж ше ТУ НЕТ У Бідодпизещця вом ує іди пам ПЗ нікЗ ми і гума пхриани ЕН. інЕшДднНчНІвВ ВЕНИ нмХ Піни нак ІНВ ЕММА ЧЕ Я УМІНЬ М КА А х : В БЖ з:1:3з35:5 З всс;иви»напнова:;ваапинвниивваХввие вищ пкт дон, Ка Я : МІХ о ЕІ ї па п ВВ КК Я п с т фен СОВИ ін НА ї Хлор тт урни рн АНА АКК АННА КЧНКМАКАККАКЧАККНК ; «у шах к е й й Голешніе з се у г о 5таа5тЕх55553 5555238 УХХя хх ІЖ ЕХ КБ кг ГУ мо шоу в хх ІЛ У йо у ху ДА ох м г ожій в ох ох ІМ щ У їЕ її У Кк ХЕ ЕНН ЖЕ В В З В ЖЕ ОХ ВЛ В З В З ВЕ ЗВ ВЕ З ОН В В В ЕВ ЕС ТЕ Б кВ а се МК я ою ж ох а й ох вк й «Ж ххх іх з «хх ж х Ко ов ВЕ ВИ ЧЕ ЗЕ ЗШ З ЗИ ВИ М В З ЗВ В ЗМО З З М Я І В В М ВХ СВ ІБ З В БЕ петк жі сяк во т яко сон ах шодо т т пн ча о а А У (У хв мож ЖАВ ХХ У В х Ж ЖК Б х Б З М ХХ Б Р Б ЕВ 5 ХВ Вс кто ХХ ЕЕ ТЕ Ж ЕЕ ВАВ : нн и С ї Кий КВУ Я 45 щк Її 5 45 55 БІ 32 5 5 їх МЗх ВБ 5 ЗБ У ЕВ КР КІ БІ ше МО МІЩЕ М БОЗРСМО УК ЗВО КОТ ЗБОСК Же і ках СТ З усвклие МІ і СОННА ЦК І мм о З Н Конт ПК М В за вх аск ВХ Вії ЕВ ТЕН хх ї хоЖ ох Ж хх АХ х жур хх ї хо» х зах й І-ї п щ- С з аше ен туї тло КТ - «ГК с чи НН У я ох ЖУХ т ж а їх а я ОХ кож Ж жа ТРЕК ІН? ХРУ У ЗІВА 5 З Ж ЩІ 7 5 ЦІВ БІВХ І: зо іВ тако, к х тех іш їні шіж хі до у ж ко ше Рок Є вх кі Ми ух Ж В ох БОЖЕ ВЕ ОВК ЗМ жі ХІУ 5 ЗБ 5 У ЦЕ ті АВ КТ хи У ве й ї 1-3 ЖАХ ж: х її . х , я є пут ух нн и НН ях хо ї2 сі «ка віків ку оїУ шт т г: ж шоп т Уж МеАНМ 5 Епік Іа ЗІ В ІЗ ІТ З хі 5 ж хх В я ті 5 СЕ 153 М у НК як я х. х КУ Ж. Ж х з. Е х. я х Кл КУ КК ОВК жо КУ Ж В У З ММ В В В ВА ВО В ВЕУ ВВ В СЯ ОН ї пк Еке НЕ ї ка ОА КО Н сет нн и ЛВ кВ г опа І ВХ ї од Кн ВХ СН хе Я Е ТУ й З як 5 ка х жк ех « хи УЗ їх ш ої х хх їх «ч МНвій 525555 5ЕВУХУУЕУ т Тіз 5 5 5 т 5 хх т 5: бод А ох БІЖИ схе т а «ТИ КД с хі я хг Ті х о 3 ВАТИ ГУ ІІ МІЖ ЩІК ОВ ОЗ ЗІЖРУ У ЛІ ВІК й ОБО її т ЖІ її ії рж ях хх В у ц Зк вм вечечи чи чия 514 хх ож ж шов сно я СТУ жо оско хх У писано вих і ЕІ т ск Зі ЖЕ 5 5 В хх «ул ії п в жк а х м «їз Уїю кох ох х ех хто к НН х в КО»; ет т.з Кк се ШЕ Ь Я 5 Бі Б й з ІЗ 5 ЖІ Ж хх ча х соя м м ЕЕ В ВЕ ВК А ех п А и В ШИ В В В В В В В Я Ж » У Ка х Пе тя НТ АТ чт КТ нок кке су дн А я я я з ЗАЖАДАВ ВАТ АТААЛВАТ Ж я я А А ВАЖ ЖЖ ДТ ЛЬ я Ж я тн ння я ють ЕЕ ІРА тю ут тк яти, ; и ях Уж СХ «НРК гмналіз Схетчарда геманіованих варіант НО ва стальних каіанах ІА Е: х ке вими з тванескованих Ск мектелном Кекси с Еге Феге Еге е ого ег г ге с ХУ кожи ж ж ж жі ж ж ж ж юю юю юю КА КК ЖЖ КАТА АЛТАЮ ЇЇ ЗЕ КХ СХ усу ях Ху куе в кеВ : - З "Приєднані | Яванська Якпанська Яванська 3 ща мМикакае ки тна хутра 3 х м якаАка їх Хннннне й нин нн я що є ооо мемдрово ма нн» повний Вин ен КК зе Я Тренжннах рез: я ВАК ИДЕЧ НИ З Я НЕ я Б ЗИ І ШИ верияХ веаланняя 000 МІНМ У? зі? зи. зер В КЕ ТОНЕ ЛаНя У зх ї Н ; о юІА1о «аа у сайти сан. і сайти у "АВ аск. Ше ро ккккике «Кн пок ровно ооо КАК Я То ЗАТ ВАННЯ КІ ЗИ Ее Ук я У Е й У дістутух В ин Є БИДО м яю 1.0 я 15 КВ. сон фо тютюн» кектевнотя он пн В ко КК а ПН А ДОК с М Ж зу Е х Ехо з хі їозхе жо ЧК | мо й с БАН люлння Я ОО ОВУ а же ших М ШЕ коро он ЗННВ еввн и вн кон яп М -е он оон У Б зуххіруу К а В ККУ КУ 5 5 зу її «з 555 Е -рж Ї сан З ВАВ ера 15 00059020 ІЮ ЗВ я НОЮ,The combination of the main actions of Lorkeno paws in Cannes and ZE with U 5 5 5 5 7 5 and xx their M 33 ZE I zh their Z I MO molu t M z dk a kozh "cat ho uk their li liu koh kova hii :z5 s ivypio;av»nylyvvvvio»vIa:s:viyusVvVvVVvaAnvymy dn du r Dn NIY Ps S NIY ! fen S nut K-t dnih stand zhe TA ser tt t doku V U s zh d e x "x eh u och shk m U uh M Z XX 55 U xx ti XX gi Z Ж BЖ Z KM VK Z ma fl unuttunyatdjknnyannnyanyanyak i ozh ssh keV xx F-ooyu km "Ne AL hi VI V KU Z ISI her 5 Z 5 I Z BIBEZ xx vid LK VX um i m we av z Z Z I m b t Z xhih u st im kyu kozh oj oi: Zb xx nn ko o mmM ME VV YOU M VE YOU ME V Z y ZE V M VE V EE MI VU SCHE A SK 5 hi zh y ih zh i ih hom m vom 2-8 sk i-i che il hg SAN ZU : VEK TSI 5 t шЭиЗ ; kh nn ny a a V koam a a v Ya mm m br hm I I m zhi VE B Z SH t lya COKO ZH INV already vod nitannnn Y kny y ASK MU UNO IC pe py v y COMI U GO : Ko 21. y i ki ch K her 2 i sia U x se zh x. what is ED Z Z ZE ZE ZE ZSH Z U 718 8 5 BE KU x ka? 5555359 57: 55522 KU 5 - Pi, y I x VAK a S dim skh kit hom xx rova zhit SK Av EV More" ЗB with pero" in min Mvt ih pi SA 5 uh EE Uvi "Me si ki kis z i kovtok koh Banana - vla EE nena Oh vv z EE Z Z v V VE YOU z ZV Z Z EV M Ve M M Ya je NK CHI M a a Ky MO i MAK i yah zh xx a myh shock xx oz hu zan Zh SU ZI ZE ZNU OA Vk V VE Z Z EE ZE VVE Z V ZV V M VE V TAZ Cohen nn h a zho. Кк У х х Ж КУ ях хо х ше І т 0 их Ач 2. poh х "ХЕ з A Ук ЖИ зи их зи же ий х ИЖe MN B OBO Z m OBOV U ZE W m Z 3 V oh V s BOB Ou zh MOBOV OM I Me MOVNU Ne M OZ , nn u EV INN ih Mami OM x s nn AN sya nn v y Szhma - KIZ i Z H dodntetyantnnnnny MK ddttatyat nya nlotttutnyy KZ I x suche t y Hom SO KI I y EH os V EV A V AH still vh vyn a na aa a DYN s, pn ze z DE ve I S EE U Zh Ti 5 5 i t i 5 i her xx "Uhk t "7355 x "BEER spot uh porya U ovi her still Я х йжи3хи8 ZIKITI: SYA UNEUNEVNKU E IRLIE UBB t J ih M Iza VBB I and IB x ZNYAV ZE NN I ZE ZE Z Z ZMEI A LTU AH ih khz ih khz hi Z ih kh kh hi khiv s p yo u . g shh Code K u m o S V V V VV V V V ELEN EE o o A V WIN V V VE V U x 5 IZ fen nn nn i eko zhe she TU NO U Bidodpiseshtsya vom uye idi pam PZ nikZ we and gum phryani EN . inEshDdnNchNIvV VENI nmH Piny nak INV EMMA CHE I UMIN M KA A x: In BZ z:1:3z35:5 With vss;yvy»napnova:;vaapinvniivvaHvvie vish pkt don, Ka I : MIH o EI i pa p VV I p s t fen OWL in NA i Chlor tt urny rn ANA AKK ANNA KCHNKMAKAKKAKCHAKKNK ; «u shah k e y y Goleshnie z se u g o 5taa5tEx55553 5555238 УХХя хх ИЖ ЭХ KB kg GU mo show в хх IL У yo у hu DA ох m g ожий в ох ох IM щ У иЕ her У Кк ХЕ ЕН ЖЕ В V Z V ZHE OH VL V Z V Z VE ZV VE Z ON V V V EV ES TE B kV a se MK i oyu z oh a i oh vk y «Ж ххх их з «хх ж х Ko ov VE YOU CHE ZE ZSH ZZY YOU MV Z ZV V ZMO Z ZM I I V V M VX SV IB Z V BE petkzhi syak vot tkao son ah shodo t t pn cha o a A U (U min mozh ZAV XX U V x Ж ЖК Б х Б З M ХХ Б Р B ЕВ 5 ХВ Вс кто ХХ EE TE Ж EE VAV : nn y S y Kyy KVU I 45 shk Her 5 45 55 BI 32 5 5 ih MZh VB 5 ЗB U EV KR KI BI ше MO MISHCHE M BOZRSMO UK ZVO KOT ZBOSK Zhe i kah ST Z usvklie MI and SONNA CK I mm o Z N Cont PC M V for х аск ВХ Vii ЕВ TEN хх и хоЖ ох Ж хх АХ х жур хх и хо» х zach y I-i p sh- S z ashe en tui tlo KT - "GK s chi NN U i oh ZHUH t z a ih a I OH kozh Z zha TREK IN? HRU U ZIVA 5 Z Z Z SHI 7 5 CIV BIVH I: zo iV tako, k x teh ish yini shizh hi do uzh koshe Rok E vh ki We uh Ж W oh GOD VE OVK ZM zhi HIU 5 ЗB 5 U CE ti AV KT hi U ve y yi 1-3 JAH zh: x her. x, I am put uh n n i NN yah ho i2 si «ka vikiv ku oiU sht t g: zh shop t Uzh MeANM 5 Epic Ia ZI V IZ IT Z hi 5 zh xx V ya ti 5 SE 153 M u NK as I x. x KU Zh. Zh x z. Eh. I x Kl KU KK OVK zho KU Ž V U Z MM V V V VA VO V VEU VV V SY ON i pk Eke NE i ka OA KO N set nn i LV kV g opa I VH i od Kn VX SN he I E TU y Z as 5 ka х жк ех « хи УЗ их шои х хх их «х MNviy 525555 5EVUHUUEU t Tiz 5 5 5 t 5 хх т 5: bod A oh RUN she t a «TY KD s hi i hg Those x o 3 WATTS GU II BETWEEN THE CHEEKS OV OZ ZIZHRU U LI VIC y OB her t JI her ii ryh yah xx V u ts Zk vm vechechi chi chia 514 xx oj zh shov sno i STU zho osko xx U pysan vyh i EI t sk Z SAME 5 5 V xx "ul ii p v zhk a h m "iz Uiyu koh ohh h eh kto k NN x v KO"; et t.z Kk se ШЕ Я 5 Bi B y z ИZ 5 ЖИ Ж xx cha x soya mm m EE В VE VK A eh p A i В ШЯ В В В В В В Я Ж » У Ка х Пе тя NT AT th KT nok kke su dn A I I I Z REQUESTED VAT ATAALVAT Ж Ж Ж Ж Ж Ж Ж Ж Ж Ж Д Л Ж Ж Ж ДТ Л Ж Ж Ж тн ння Ж ю Э ЕЕ ИР тю ut тк яти, ; и ях Uzh СХ "NRK гмнализ Shetchard's hemanized version of НО in steel kaians IA E: х ке вымы from tvanesque Skmektelon Keksy s Ege Fege Ege e ogo eg gge s Х ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ЖЖ KATA ALTAYU HER ZE ЧХ Х usu yah Hu kue in keV : - Z "Joined | Javanese Yakpanska Javanese 3 shcha mMykakae ky tna fur 3 x m yakAka ih Hnnnnne and nin nn I what is ooo memdrovo ma nn" full Vin en KK ze I Trenzhnnah rez: I WAK IDECH NI Z I NOT I B ZY I SHY veriyaH vealannya 000 MINM U? zi? zi. zer V KE TONE LaNya U zh i N ; o yuIA1o "aa u sites san. and sites u "AV ask . She ro kkkkike "Kn pokrovno ooo HOW I TO ZAT VANYA KI ZY Ee Uk I U E and U distutuh V in Y BYDO m maiyu 1.0 i 15 SQ. dream fo tobacco» kektevnotya on mon V ko KK a PN A DOK s M Zh zu E x Echo z hi yozhe zho ЧК | my s BAN lyulnia I OO OVU a zhesh shih M SHE koro on ZNNV evvn i vn kon yap M -e on oon U B zukhhiruu K a V KKU KU 5 5 zu her "z 555 E -rj Y san Z VAV era 15 00059020 IU ZV i NOU, сг. ЗА пох ях х з хе в щ їх ще з же В У в і ее а й ї БА Мої с У пОЖАТО те М в ще їй ща М і с: шишки шу ЕН НН Ба ни М а НВ ПКД НИ КК КК КН КК, УМ КЕ и ВЕНИ КМ пі о о ою шо г о о Кв По КК В Кс АВ В КУ вух Кк п и о о Яванеька Б ОО. х с Б ча ак В о В КК КВ о В ще м яКЖх ки Ко зе ЩО и . З а ОХ її М М м а М М ОН В В «хз в а в А з ФИНИ ПИПЕПИИПИЛИНН ЕК КПК КК КИМ КИ КИНИИНМИ це в с с ОО о ВК в ие УКХ ПКУ КО Ж ІН ОО я Тх ШК о о М М В о ОВО В шк Ос с с. - "МОЛ й г нин ПЕОМ НН ЕВ КВ СИШЕШИХ КО В я ОО в . М В в НН ПК НК Кр ее ша. з ее в ЕН в В В М В ПЕК У І в Я ее ек В ше о п М М ОО В В В ОВ В М СЯ в В КЕ ах п ВХ я шк 8 ЗО о В с й БО п а и В ВК СХ ше г с 53 ОО Ж В й а М я КК о о пани м п, ша х ПО КК СА КК ПЕ АК КЕКС КАК КК МВ Же» дак В ОО ВВ ПК м и в а В І М В 7 М и и В М и В о ОН в и М М в Іsg ZA pohjah x z he v sh ich still z same V U v ee a i yi BA Moi s U pOJHATO te M v still her scha M i s: cones shu EN NN Ba ny M a NV PKD NI KK KK KN KK . х s B cha ak V o V KK KV o V even m yakZh ky Ko ze SCHO y . Z a OH her M M m a M M ON V V "khz v a v A z FINY PIPEPIIPYILINN EK KPK KK KIM KY KYNYINMY it v s s OO o VK viie UKH PKU KO ZHI IN OO i Th ShK o o M M In o OVO In shk Os s p. - "MOL y gnyn PEOM NN EV KV SYSHESHIKH KO V i OO v . M V v NN PK NK Kree sha. z ee v EN v V V M V PEK U I v Ya ee ek V she o p M M OO В В В В В М СЯ в В КЕ ah p ВХ я шк 8 ЗО o В s y BO p і В ВК ШХ ше s s 53 ОО Ж V y a M я KK o o pany m p, sha х PO KK SA KK PE AK KEKS KAK KK MV Zhe» dak V OO VV PK m i v a V I M V 7 M i i V M i V o ON v i MM M v I Фіг. ВFig. IN КК мкнК. Ї ххх "у зе Пон зн інн м кіп току шк хх я АНІ Янка гема знав гО ІЗ Й ооо не котаовла с : : и М гум перук М: анжнна 70юЮ МСВДОВНІСТЬ ЗК. х нн нан дххохкхх м тех і; Х Е Іа п п це тео емо уро ому ум кл ооо попка чек Ач Км» Е ЕВ. шк З пам ОН Уа НУК каст УчаМеКМ ооокококототюно хоксоманй Я З І г КО і ГЕ РО с ВК В кон Ух пан 5 З з Ну КЕ БО Я Й Що М Яке ПКУ Кн КАК КАК УК КА КА КАК В В З ять ВЕУ , і; Не Ко й Геї М ща нач вЕУт очну АТАК КК КАНА КАК КА КК КК КАК КАК АХА З АХА кими КК сек. Код ках ; тет оон нн 19 В й Ї і, Ю гу му ЯМ З ом ен мое КК НК ХУ т от учня Х ї З З т ЕТО ТРК і щу ГЕ ТУ ЧАД їі ки на: щохжЕк у о я Пром ККУ АК КК Кк ех дчкяк клік Мак В я, Ва МУВНО Ко ЕК т пу пт нн КО) АК мою З ке З па щу КУМ секр вх рю сек ки: не В й і ЗЕ А Ай МИТ АК КО т в. ЗХ з, ій вк А Н до пох т ку ву вин я ї кишеня о АВБВЯЦОУ пн ШИ ща Уа нн нн З УК Кз і, ГА : За ху Е дух віт сопе ; У ХК КК Кк м хо с ще ой ї її коневі ІбюмтосвевісАВУЄрНУТЄ РО ЯКУ Вин Вк Пон ШЕ о авеню я ! ЗЕ ОК КАСКІ. і РЕ інеті кн я чі КАК КК п УК КАК пін му нин саму й а У п в ха Х я У У о В З мин на Одово о ор ад ов совки о «й З КБ іх. по віко : пічним пн шо лан не ДКОДКРОКАРКИГУ ще шен ЕК їй фу о сан УК ЗЕ З лові МЕН ЕОЕЕХ КЕ КК Ж о Зої у Зх рорЕх Ка у ку ее мхкинмих щ- ЗУ КК Ку хек учню К: ЕЕ в ах І БУ при ТЕ ще соки омана ххх НН: : М й ма с; ення ММ ся ще - цк ЯК ть : ще ГЕАТУЖе І У і Х п ю УЗ ЕКа фу вн нан и це їй БЕ певна ання Зувевсвланлестеть ев ОБеН, одер пні ням а Я сша А А ШИ ОЮА, ПТК УЗ МеВ Кок тн нен нн нн меж йо ; окуня УК ГЕОСООТКУЮКА кни ве й ЕК ШЕ ЕсУ Ї Н Буд З ЕКО ОВ Ое то уко рф нанннинн Кхжхженинн КК ; пох пххун Жук ник меж КМ. х. ЕЕ и ч шо ех Не, чі вила п шин Є і ЖК МЗБААВ | НК і Ті В Ї 3 ХВ КЕ ; й кожх мона й м Х ЯТЬ ле у іх І й ! чд Уа Не де ДК А х кана нн З пре як сені кіт : Бдолнаних от: Х леви пе Ева епос ктя кн ККК и шк ПОН: х мо СЕ А КЕ Кт ая ра пе мо сонні дк о я Мп пн шнек що та у. в 535 У й т пет о з з КК Кк ій ГУЖА їі і Х ІОВ ОВ УНН а ОТУТ пн шк ж хо ЕВ о З чн. 0А : У » КК : ! КЕН явка гема нізовамнаго п понезицнн Н х й МОБ ЖУКеК ВХ сво ке зізких о З ся : суки ке і жа А ;. осі ОВ ТЬ Е ТАН нн ВВ ТО, поле вка у у ук МК 5-3 з ай ОО лккКхх з ЕН ще і БА ДЖ т ГЕ іК Я ї с. ода В в вн я нн Е ке окт «ВЗ НУВЧИ | ВАВОВІЮМУММ пен шию ОМА нг; вееку понині МИШИМ х олкмххехчкхккакАннХ Е Те у ваз ді гу ваноук зе кі. ви 5 ск й нн нн В З ке Од 5 со А ї й ; щі З У Б Та В і Гй за ожини КАХ их ХХХ Ж нини: Ї сУхУхх куки к ен і; ху и м 5 рах дї ох вою соя х сехже кан не п а НН ВУ ; ЕН ; З М ее ще й. ТК ПУ в З ВВ З ОО пон в вн вн ким Ме : ще й КО и У Я З 7 нина но певною З вів ж песо НУК У БОС ше ке у й жа Яд че: Вер МІЖ о но а нина і хх ; хм Я ваз я Ех ія Я У й й кни дххних, ; Мі З сен ТАТОВІ МУ Вхни ! ОЕТЕБЛУЄ м в пн нн нин і тка ягжни ММА пн Б хек кот кокс Я З нео чн фо, х ко й лог МВ ТУ Ту їй ЕК ХУ ка | де БУХ В вве КМ, нн азни коди ж 3 ХКК мкнК. Y xxx "u ze Pon zn inn m kip toku shk xx I ANI Yanka hema znav gO IZ Y ooo not kotaovla s : : y M gum peruk M: anzhnna 70yuYU MSVDOVNISTY ZK. kh nn nan dhkhokkhkh m teh i; H E Ia p p this teo emo uro omu um kl ooo ass check Ach Km" E EV. shk Z pam ON Ua NUK cast UchaMeKM oookokokototyuno hoksomany I Z I g KO i GE RO s VK V kon Uh pan 5 Z z Nu KE BO I Y What M Yake PKU KN KAK KAK UK KA KA KAK V V Z yat VEU , and; Ne Ko y Gei M scha nach vEUt ochnu ATAK KK KANA KAK KA KK KK KAK KAK AHA Z AHA kimi KK sec. Code kah; tet oon nn 19 V y Y i, Yu gu mu YAM Z om en moe KK NK HU t ot student H y Z Z t ETO TRK i schu GE TU CHAD yi ki na: schokhzhEk u o ia Prom KKU AK KK Kk eh dckyak klik Mak V ya , Wa MUVNO Ko EK t pu pt nn KO) AK my Z ke Z paschu KUM secr vhryu sec ky: ne V y i ZE A Ai MYT AK KO t v. ZH z, ii vk A N do poh t ku vu vin i yi pocket o AVBVYATSOU pn SHY shcha Ua nn nn Z UK Kz i, GA : For hu E duh vit sope; In ХК KK Kk m ho s oe yi her konevi IbyumtosvevisAVUerNUTE RO YAKU Vin Vk Pon SHE o avenue i ! ZE OK HELMET and RE ineti kn i chi KA K KK p UK KAK pin mu nyn samo y a U p v ha X ia U U o V Z min na Odovo o orad ov sovki o "y Z KB ih. by the age: oven mon sho lan ne DKODKROKARKIGU still shen EK her fu o san UK ZE z lovi MEN EOEEH KE KK Zh o Zoi u Zh rorEh Ka u ku ee mhkinmyh sh- ZU KK Ku hek student K: EE in ah I BU pri THERE are still juices of deception xxx NN: : M y ma s; мм шя ше - цк Хак т: still GEATUZhe I U and X pyu UZ EKa fu wn nan y it BE certain annia Zuvevsvlanlestet ev OBeN, oder pnie nyam a Ya ssha A A SHY OYUA, PTK UZ MeV Kok tn nen nn nn mezh yo ; perch UK GEOSOOTKUYUKA kny ve i EK SHE ESU Y N Bud Z ECO OV Oe to ukor rf nannninn Khzhkhzheninn KK; poh phhun Beetle nick mezh KM. h. ЕЕ и ч шо ех No, chi vila p shin Yes and ZHK MZBAAV | NK and Ti V Y 3 ХВ KE ; y kozhkh mona y m Х ЯТ ле ю и и ! Chd Ua Ne de DK A kh kana nn Z pre yak seni kit : Bdolnanyh ot: H levi pe Eva epos ktya kn KKK i shk PON: kh mo SE A KE Kt aya ra pe mo sonny dk o i Mp pn shnek what ta u . in 535 U y t pet o z z KK Kk iy GUZHA iii i HIOV OV UNN a OTUT pn shk zh ho EV o Z chn. 0А : У » КК : ! KEN turnout of hema nizovamnago ponezitsnn Nh and MOB ZHUKeK VH svo ke zizkikh o Z sya: suki ke and zha A;. axes OV TIE TAN nn VV TO, field vka u u uk MK 5-3 z ay OO lkkKxx z EN sce i BA Ж t GE iK Ya i s. ode V v vn i nn E ke okt "WITH TEACHING | VAVOVIYUMUMM pen shyu OMA ng; veeku now MISHIM h olkmkhhehchkhkkakAnnH E Te u vaz di gu vanouk ze ki. you 5 sk y nn nn V Z ke Od 5 so A i y ; schi Z U B Ta V i Gy for blackberries KAH ih XXX Women: І sUhUh kuki k en i; hu i m 5 rah dyi oh voi soya x sehzhe kan ne p a NN VU; EN; With M ee also. TK PU in Z VV Z OO pon v vn vn kim Me: also KO i U I Z 7 nina no definite Z viv j peso NUK U BOS she ke u y zha Yad che: Ver ЖХ o no a nina and хх ; hm I vaz I Eh iya I U y y kny dhkhnyh, ; Mi Z sen TATOVI MU Vhny! ESTABLISHES m v pn nn nin i tka yajzhny MMA pn B hek kot koks I Z neo chn fo, h ko i log MV TU Tu her EK HU ka | where BUH V vve KM, nn different codes same 3 X Ц. їх Ку АК бах МА З ! АВК Се тон кон ши ЕК: й куки ман пхкноВих КЕОСТУКОУ ЗВ. с валки В км фу нен ван пада Хе Х це А і пе МУ : АВЕОКЕВ пен нн ни ши их ; В Я я; з хі Го х " о во й меч і КК тн и онов й у їй М ; За І ТЕТУ Я щнетю фер а мав Май анна ЛЕ З Мах «А 1 У ВЕ г: ой З Де ге щі г 2 К пон у ук ки шк М: що т» пи Майк х СЕК ВО АБУ ку Е кла ру ан МА Я око ЗИ СОХЖКк хх КАК Кк КК КК од м ща у СТАТ В ОК Я У уз рк ох ік они Ух З АлАТ пл о АК КУ Ме МУ й Я ОО КАКК В із Й ооо А АК Ккокікккк о е авнЙ иа хх в уми РН А МКУ КК КАК КАК КК ККАККК Х кускк кун ну вит ка ке і МА о ля. не Уві Не КЗ їх орних му оо мем ки оф і Е во Х МУК еконо СБК УК Т щу БОБ 5 я ее ЗНЕЩНІ 5 ТЗ З Е- ЗЕ, АТУУЄ й шен ОБ дла ее вод емо вв; вай АСВ ас ве ав ик РЕК АТУ З ПАТО ЕТАТОВ НИ ПОЗОТНИВ нини «ух ВВ жк й ХХХ УХА Муки М я У х дк нн ВЕК тм ЕХ Ма ТТ ту СЯ зе ЗК НЕ Б КЕ АТ мин ; ваз К КЗ й век М се пн КЕ і С ООПЬННоААВ а . М ее а й : я зів а Вікна оніми днем шли У Е ВАТИ МЕЖА УВО УНРКО МУКОАРОКОЬКИАМ нин В МКК 4 2 Живе рони АК ках ке китах Ї одкканннн ом тм Й З у в щі в Янв ноз й 4 й с! чі КЕ в ВЕ ий шо оон тн вх нок полкхкннмннк ї ТЕХ У КК ання пай Ше Ем КЕ З Хі ТА ак тк хг кх М: і З КЗ НЕ ВЕК у ку хх гесгескпн ня ння жемианини ВДЕ Я КОТА І чИ З Оса неза УВО ЕК АННУ : сінна Кола улчччкчААн ння їй З ДМАТО Оу МОЛАТОЖВЗУНКХ | УВОВТ УТУВА пн і дну серед різних видне 3 СЯ ЗОНУ ССО УМХ НИ І сичегія змолідюнеоюті ке ну сере І ХНН ІКНІ УННСХ МЕ х й ши - І кА, зу ААУ си мік СУ зії Кк ши ЦЕ поч ПЕ в орав ОО КІМ м ВЕ - тні ж ІЩЕ ІКІЖЕВВуКВКО Юа ктІАрх ін дв в ж в д АХ пік дів сажі кВНіКХ ОКОКІ ува ЕЗАСКВНУВАІКХ ; пешнна дк вік в во БІВ Ка ЖЕ Езя хи ІкУкхнЕМХВАКХ р а я рН Кр МЕ вм ТЕН КК ХК, и У Фів ом х ХК жид В ем се У : с хжк ж ЕщІ У КЕ І ЖНЦЬ І) НКУ перев ашими ММ і М Мівнакю коню а иа ЯВИ ЕЕ 55 вк. ит БІ ЖІЮМЕКЬВВСя р ЗВ: Ве В Вимк в Ілюмози меха кив еі Виник а вих У М ІОН, З шикньх страус виУнЕн ВУ пра В ре Кк. Іо ее я Б ЕНЬ І ВК ХО ВИХ ш ТВ АН юЯ В во ДАО ВИ несе Нед не ле Я МТ Мішив і КОВКА КОВІ ВІВ ЗК Міцна. хЗ роза пт шкоди ска Буд М, а ще нижня хіх. шк ВЕНИ ек, ЩаовБеИ КЕ ше що ве, ЕВ В кі рі жі, Мо жжеиеЕнЕМВ ви КЕ що ВЕ ЗХ зику ж Ук зуиахжхнив ен ЕЕ Жедина Хі У еВ хх ВУ о КК КО» Ткодщех В ша сі Ева піЖ іх КІ Х ВКА НН В МІ б студе хі міш хе дохх ро не ї Й МЕ ладу ціювк ж) ких А у и М КІ т ви НВ н Ми е Е у 22 з авноьса макзка ЗІ БЕЖ Ех БОКУ ме за т веж В ІВ Уів ви НЕ хм Зх вх Мем жвнюьа кни ЕХ РКиЖьОКтУРОЄтТве Вих Зак ах киев В пе суку КАКОВХ и воша хе В ВІ Ж - МЕшЕЖІЖЖВКЬ й Шо Маша І КОМОМІУ Я й ! ати і | І су зичу ДИ вве чи т почи ГКУ о Жах КІВ ВІЗ пу Ух. Кат ово ВИН ЇМ НМЖ М В НА ВЕ хх и в г І-й БУК в хі МКУ Вснало В ха ВЕННЯ Є 3 кох ТОМ ТИХ Аді що Душ КИ шах У Нік В жа ВЕНУ х Те хо ЖЕ кое а о т хз 1ю лама МЕ ох А рух Мк іже зімі: ее д тва ення БУКІЕ ЕВ В І: куріатнсв КЕ я ам кожи в: ЕТ АЖМЕ ВІ вишка ЕМ ОО Міемкенн яненськи меха ПИ ККУ ВЕЖ ВЖЕ УА ЩА ХК МВВ УВО У спр Не Мом ва ке Я. ДОК зна жіно аЗЖ Х ВНИМ ЕХ ВО зМищиап жим з ЕІ Кк БЕ КЕР Що Щур і кое Мк ЗК КІВ Мі вес, Вже ВИК ж х А МК РІВ МАЖК ІМЯ З ооо и ХЕ ВЖИВ І ДІВ с вшкУуюНОЇ» ВІЧЕ і; сОоЖОжу МІК ІК І КІ ХВ ї ї : Хив НИ ЖЕ На Та 2 Межвив ІЙ Кт, З Ух: і з І дода чи пед кВА КИ М пе ще стек віх б ЖИ ера ВЖИ зе -ш-- ж ВЕК Т» він сі І Мвт кВ Мат Х ке З ке - -- ї їх МІ хи ІМ М КІВ Ж зу Безе о ня ТА сих ст піжівііиот жін ВЦ я КО ВКМ лж вмію іш її ОЕМ У РК ПЕАЖВК І Нд БВ Б БЕРН: Я кВик и ік ліві вважаю акцивовн З дЕВУКУх ЗЮ вне ЕЕВСЕВУВЬХОВЮАНОВЬМСВ Невівні вп, вк А кі Кові жі ІІ Ох й вааха БІ НІЖ ші п ВОІВ моху міхх У 3 МЕ НК А І У хірюожінК ме 5 Ж ЕХ ВТ хо З ШЦінепенве лювнська мова 351 МК пів ам вівце моні НІХ БК ЗНОВ ЗІ У кіс звід коки ниако у ІІ МИ п Мура: ями ВХ БМ Ух їх: ке зни МУК АК Б У КЕ Я КБ МЕМИ У ІРЯ Мр пу Зніє м т Ми х ау ООЕВ НЯ АК МАЕ їх КУТА щи гпІЩОКІ КУ хх Е ІМ В ЩО Б Ка В Ха Мхоми КТ ІІ спам Вот КУ Мене ОМП МИХ маку М ; СХ х Мт У ЕІ ЕВ АМ о С ЕКО Ум кбік кв У ВПК ЕВ І 2 БІ КБВЦОНИ МИ мили вв У юю сут КА Нора Ж ба Кір НК ВО ШВУ ВІ КЕ з вліті вих УМ фЕОКІяО нан с еАРиВБЕКЬ т Ко ен квхманкахі теки КЕ вер Лю Є ММОЖИЯ Жила ем ами т КВ паж. ВЕ дихаю Се АН Ок вжь швів жи МТВ ВМІНЬ їх хіт , ма ді жи ЖЬсг м : зим одканівка макама ПР Бр вок Б діт ру Ір іхік спаму хітіму чивошанав ак пвОЕх Мінмипзнаєвезненка макама ЗБІГИ К змов ві ттрищаво вне ВЕБ КВК У кві циві й ох ХО) кни ее ме Пов шив МУ ВЕ - іхї т ІК ВПІ Ж ЕВ В зиск пвх пив ев виш еиВА ТЕ вхиош хх 5 МЕРА, АДМ ії Ів хви хи Ві пек МІХ М М Ви ЖЖ ТО В Ожр ЮДИ СМІТ МУКИ КІТ Я Макеа МУР ЗМІ ЖІ ТОВ Бо щ пом рон па Й че Уиюковованця З НАХ ПЕК ОВЕН хї З хм ТУ УВК ККЕХ ук Х чхати ТЕ ; : веЖЕижх кВ Ех ОБ еп нац ц ТЗІ ве ВОК ЕЕКИВЕУК МІХ 5 ко А ЩЕБВЕТЕ 50 нн юднна іл: В В І ме Хр зи КН І З їі і КЕ Е В ТАКУ т чазЗн. ЕЕ КЕ щи В М: НО о ТЕ 55 ую ч мехваномки макзка їі ВУ Б Но КРОВ В В Можемо цмек ман шві о Я хе і Кия ку КТЕВКХ прин АВ оке о Ен пепеннннннннняй НУ ті КОХ ОКО КК щ комік: ЕК МНК КЦ М ОК хат рол Миша йМО вн хі А в ях о ус. ї ших . 2 ХК в не вана НН У ї ОЦТІ ж АН КВ Певехоесна ВЕК тиВ петь ВГ З Епос ерехиеена вени НнІЄть Перехресна ревкена дз і Кн ит паж а - . кн ї 5 о нави нанинннняй зе ЕВ дерті пиши г я за нн нннннки : сі Монккккк ке КК КК КАК юкх ктнкювке подини жк АКХУ УК КК ник» КАХ. й з Май Й зання Аня о ДНІ КО УЖ Ту фокус КК ю УК ММмм М х дк оз заг ш дпчхізумі де фкужккк і а хх ЗЕ ок НАВИК . і х | -х їх хе а ШИ 5 й й ши Мити тт тх туту пк кв мли я хх а жа слоанння х се ОКА КАЖАН я ЖК СХ ох ке ЕН с ххкуккккккккккккккк єю кк кю кю «сккукх в. . І і й Її и ОГа хо ; та й Що Зо КК юшевна й - її що НЕ. чу Гек; де М ВАК Моє ОК За чн ну Ї си НИ Що ; зе о ен НИК З ххTs. ikh Ku AK bach MA Z ! AVK Se ton kon shi EK: y kuki man phknoVyh KEOSTUKOU ZV. s valki V km fu nen van pada He X ce A i pe MU: AVEOKEV pen nn ny shi ih; In I am; z hi Go x " o voy and sword and KK tn i onov and in her M ; Za I TETU I shnetyu fer a had Mai anna LE Z Mak "A 1 U VE g: oi Z De ge shchi g 2 K pon u uk ky shk M: what t» pi Mike x SEC VO ABU ku E kla ru an MA I oko ZY SOHZHKKk xx KAK Kk KK KK od mshka u STAT V OK I U uzrk oh ik ony Uh Z AlAT pl o AK KU Me MU and I OO KAKK V with Y ooo A AK Kkokikkkk o e avnY ia xx v umy RN A MKU KK KAK KAK KK KKAKKK X kuskk kun nu vyt ka ke and MA o la. ne Uvi Ne KZ their ornyh mu oo mem ki of and E in X MUK econo SBK UK T schu BOB 5 i ee ЗНШЩНИ 5 ТZ Z- ЗЕ, ATUUE and shen OB dla ee vod emo vv; vay ASV as ve av yk REK ATU Z PATO ETATOV WE POZOTNIV now «uh VV zhk ХХХ УХА Муки M я U х dk nn VEK tm EH Ma TT tu SYA ze ZK NE B KE AT min; vaz K KZ y vek M se pn KE i S OOPNNoAAV a. M ee a y: I called a Windows those days shl U E VATI MEZA UVO UNRKO MUKOAROKOKKYAM nin V MKK 4 2 Live wounds AK kah ke kitah Y odkkannnn om tm Y Z u v sh in Janv noz y 4 i s! chi KE v VE iy sho oon tn vh nok polkhknnmnnk y TEH U KK annia pai She Em KE Z Hi TA ak tk hg kh M: and Z KZ NE VEK u ku xx hesgeskpn nya zhemianyny WDE I KOTA AND CHI Z Osa neza UVO EK ANNU : senna Kola ulchchckchAAn nya nia Z DMATO Ou MOLATOZHVZUNKH | UVOVT UTUVA p and dnu among different visible 3 SYA ZONU SSO UMH NI I sichegia zmolidyuneoyuti ke nu sere I HNN IKNI UNNSH ME h y shi - I kA, zu AAU sy mik SU ziy Kk shi CE poch PE v orav OO KIM m VE - tni same ISCHE IKIZHEVVuKVKO Yua ktIArkh in dv v zh v d AH peak div sazhi kVNiKH OKOKI uva EZASKVNUVAIKH; peshnna dk vik v vo BIV Ka ZHE Ezya hi IkUkhnEMHVAKH r ra i rn Kr ME vm TEN KK ХК, и U Fiv om x ХК жид В em se У : s хжк ж ЕщI У KE I ЖНЦІ I) NKU with previous MM and M Mivnakyu konyu a ia JAVA EE 55 vk. it BI ZHIYUMEKVVSya r ZV: Ve V Mik v Ilyumozy mekha kiv ei Vynyt a vyh U MION, Z shiknkh straus yUnEn VU pra V re Kk. Io ee I BEN I VK HO VYH sh TV AN yuYA V vo DAO VI nese Ned ne le I MT Myshiv and KOVKA KOVI VIV ZK Mitsna. xZ rosa pt of damage ska Bud M, and also the lower xih. shk VENY ek, SchaovBeY KE she che ve, EV V ki ri zhi, Mo zhzheieEnEMV vy KE ch VE ZHX ziku zh Uk zuyahzhhniv en EE Zhedina Hi U eV xx VU o KK KO» Tkodscheh V sha si Eva piZ ih KI X VKA NN In MI b stude hi mish he dokh ro ne y Y ME ladu tsiyuvk zh) kih A u i M KI t vi NV n Mi e E u 22 z avnosa makzka ZI BEJ Eh BOKU me za tvej V IV Uiv vi NE hm Zh вх Мем жвнюя кны ЭХ РКиЖХОКТУРОЕТVE Вых Зак ах kiev В pe suk КАКОВХ и воша хе В ВЖ - МешЕЖЖЖЖВК и Шо Маша И КОМОМИУ I y ! aty and | And I would like to DY vve or t pochi GKU about the horrors of KIV WITH pu Uh. Kat ovo VYN IM NMZH M V NA VE xx i v g I-y BUK v hi MKU Vsnalo V ha VENIA There are 3 koh TOM TIK Adi that Dush KI shah U Nick V zha VENU x Te ho JE koe a o t khz 1yu lama ME oh A rukh Mk izhe zimi: ee d tva enny BUKIE EV V I: kuriatnsv KE i am kozhy v: ET AJME VI vyshka EM OO Miemkenn Yanensky meha PI KKU TOWER VZHE UA SCHA ХK MVV UVO U spr Ne Mom va ke Ya. DOK zna zino aZZH X VNIM EH VO zMyschyap zhim z EI Kk BE KER What Rat and koe Mk ZK KIV Mi ves, Vzhe Vyk j h A MK RIV MAZHK NAME Z ooo i HE LIVED AND DIV s shkUuyuNOI" VICHE i; I agree with MIK IK I KI ХВі і і: Khiv NI ZHE Na Ta 2 Mezhviv IY Kt, Z Uh: and z I doda chi ped kVA KI M pe still stack vyh b ŽY era ŽY ze -sh-- zh VEK T" he si I Mvt kV Mat H ke Z ke - -- y ih MI hi IM M KIV J zu Beze o nya TA sih st pzhiviiiiot women VC i KO VKM lzh imiyu ish her OEM U RK PEAZHVK I Nd BV B BERN: I kVik i ik left I consider aktsivovn Z DEVUKUh ZYU vne EEVSEVUVKHOVYUANOVMSV Nevivni vp, vk A ki Kovi zhi II Oh y vaaha BI NIZH shi p VOIV mohu mikhh U 3 ME NK A I U hiryuozhinK me 5 Ж EH VT ho Z ShTsinepenve Luvn language 351 MK am half vivtse moni NIH BK AGAIN ZI U kis zvid koki niako u II MY p Mura: pits VH BM Uh ih: ke zni MUK AK B U KE I KB MEMY U IRYA Mr pu Znie m t My h au OOEV NYA AK MAE them KUTA schi gpISHCHOKI KU xx E IM W SCHO B Ka V Ha Mkhomi KT II spam Vot KU Me OMP MYH maku M ; СХ x Mt U EI EV AM o S ECO Um kbik kv U VPK EV I 2 BI KBVTSONY WE mily vv U yuyu sut KA Nora Zh ba Kir NK VO SHVU VI KE z vlyti vyh UM feOKIiaO nan s eARyVBEKK t Koen kvkhmankahi teki KE ver Liu Ye MMOZHIA Lived with em amy t KV page. VE dikhayu Se AN Ok already seams zhi MTV UMIN ih hit , ma di zhi ЖЖsg m : zim odkanivka makama PR Br vok B dit ru Ir ikhik spam hitimu chivoshanav ak pvOEh Minmypznayeveznenka makama ZBIGY K zmov v ttryshchavo vne WEB KVK U kvi civ i oh HO) kny ee me Poshiv MU VE - ihi t IC VPI Ж EV V izk pvh pyv ev vysh eyVA TE vhyosh xx 5 MERA, ADM iiy Iv hvy hi Vi pek MIH M M Vi ЖЖ TO V Ozhr JUDI SMITH MUKY KIT I Makea MUR ZMI ZHI TOV Bo sh pom ron pa Y che Uiyukovovantsa Z NAH PEK OVEN hi Z hm TU UVK KKEH uk H sneeze TE ; : вежейхх кв Эх OB ep nats ц Жи ve VOK EEKIVEUK MIH 5 ko A SHCHEBVETE 50 nn yudnna il: V V I me Hr zi KN I Z ii i KE E V TAKU t chazZn. EE KE shchi V M: BUT o TE 55 uyu ch mehvanomky makzka ii VUB B But KROV V V We can tsmek man shvi o Ya heh and Kiya ku KTEVKH prin AV oke o En pepennnnnnnnai NU ti KOH OKO KK sh comic: EK MNK KC M OK hat roll Misha yMO vn hi A v yah o us. theirs 2 ХК в не вана НН У и ОСТИ ж AN KV Pevehoesna VEK tiV pet HV Z Epos erekhieena veni NNIET Perekhresna revkena dz i Kn it pazh a - . book 5 o navy naninnnniai ze EV derti write g i for nn nnnnnki: si Monkkkkkk ke KK KK KAK yukh ktnkyuvke podyny zhk AKHU UK KK nyk» KAH. y z May Y zany Anya o DNI KO UZH Tu focus KK yu UK MMmm M x dk oz zag sh dpckhizumi de fkuzhkkkk i a xx ZE ok SKILL . and x | -x ih he a SHY 5 y y shi Wash tt th tutu pk kv mly i xx a zha sloannnya x se OKA KAZHAN i ЖК СХ oh ke EN s ххкукккккkkkkkkkkkk ъ кк кю кю "skkukh v. . And and and Her and Oga ho ; yes and What Zo KK is yushevna and - her what is NOT. listen to Huck; where M VAC My OK Za chn nu Y si WE What ; ze o en NIK Z xx Хо. ков Ех ОА ск Сай кю ютя яю кожи ОКХ З Ко Кома ОО ех 5 СЛУХ АККАКК ВХ ук у КК КАК КАК А У УК Дій. КК и ви ши 5 У щі - й ши ян ї Ко ВМ хз Я КК кум й У шк з ЗО НИ Ве Що й 4-5 ; ї Ух ж ши ща зага яна я КА 15 яБ уч С В ке ВУ що З ВЕ А нач в СО ЕЕ. хо щі Ух я З ВЕН М: жених Е 5 . ЩЕ 5 ; а сих Уа «КЕ. ІПН М, К: ї | й. о що яко ТК у в ККУ С Но ОЗШЕОЯ хх 8 Жедххкхккхккккккккккккєєююєююютхх о п. То хи М ї В Ії ЗК о, ВЕ а ее холст Ха ща ї о ж 5 у сожж о и ММ У не с хх 7. сви Кк кю к к Кк куки я В Я ще й. З В З Ух КУ З я сему кА т БОКУ Ко КО о мое ши «ор ВОК же ЗО СА МОЗ ї М вх як а о т РЕ ЗИШКЯ ККУ июня щ а лиш ик ОС ; й ШЕ: З й Не: око хх: сушокяю ЖЖ КАК КАУ КК мих у Кк ЖЖ і: ЗКЖЕ З ГА ще В а не Ен я м З - кА : У КВ хх ХВ З З ох ї й З Ко ок . у б ни: Ме ня Гой ї їх Ух ТЯ ех ухки жк М: с. а мм дну дАХААААААА УААН Ти я ВН | я хе я З ня КВ і : в Кк ОО хкднкххм І ї Як В ки я к.з і З х Хе «МУ кох : Н ОК З Я КК ше й КІ Х упжх учи ххх с орки Кккккжннн ЗОМ ві щ х од М ЕК Мк нюн нт ня й Ей: юр ак ккк У вка и к зв Ан й й ; ще : х жа Е о ТК х, їх ВТО УЗ ІЗ АТО ж ЗВ льш ЗІ «Ж як кв нг, З ко ІК. « ж ч ях КУ е х. й о тузу руч уки гу Ух вузу асняніить знтнтіла проти мезотелнну наді ЕВ ЧчаІля на кп ениних ДНЯХ з еоКильНа пнерикоВциМ і а зи еннНниМ БТ ем ком конінінііМііяіО Аж» нн о вив аа аа ньоочяя нава ния ж і ЖК ве стуки кості іа й ій 3 щ дев тр ї НАМУЮ Чесло копій 0 пУАТВУВ чаело па шее х Я од З - ка нАй Жан ой КОЮ ОО КК кино КАН нн З ЖЖ Я ЖК ск лютутуви З КЗ пе З з Гаки х ! ШНАйЙ людини ЗЕ КО | й ЩО нн и нн нн з Я: змен ма УК тах св пев Ї. 5 жк сік х як вантек макакВі Се визначене 13 Е ЗНО р кп п п Е -- ї КОРУ зсув Ме пен аНе Ве: жк Те ЗHo. kov Eh OA sk Sai kyu yutya yayu kozhi OKH Z Ko Koma OO eh 5 SLUH AKKAKK ВХ uk u KK КАК КАК A У УК Act. KK y vy shi 5 U shchi - y shi yan y Ko VM khz I KK kum y U shk z ZO NI Ve Shcho y 4-5; Х Х ж ш шш ча гага я я КА 15 яB uch S V ke VU that Z VE A nach v SO EE. ho shchi Uh I Z VEN M: groom E 5 . 5 more; and sih Ua "KE. IPN M, K: i | and. o what as TK y v KKU S No OZSHEOYA xx 8 Zedkhkhkhkkhkkkkkkkkkkkkkkkeeeyuyuyuyuyuthkh o p. To khy M i V Ii ZK o, VE a ee canvas Ha shcha i o zh 5 u sozhzh o i MM U ne s xx 7. svi Kk kyu k k Kk kuki i V I also and. Z V Z Uh KU Z I semu kA t BOKU Ko KO o moe shi "or VOK ZE ZO SA MOZ i M vh as a o t RE ZISHKYA KKU iunia sh a lish ik OS ; y SHE: Z y Ne: eye xx: susokyayu ЖЖ КАК КАУ КК мых у Кк ЖЖ i: ЗКЖЭ Z ГА still В and not En я m Z - kA : У КВ xx ХВ З Z ох и и Z Ko ok . y b ny: Me nya Goy i ikh Uh TYA eh uhky zhk M: p. and mm dnu dAHAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA I he I Z nya KV i: in Kk OO hkdnkhkhm I i How V ky i k.z i Z x He "MU koh : N OK Z I KK she and KI X upzhh uchi xxx s orky Kkkkkzhnnn ZOM vi sh h od M EK Mk nyun nt nya y Ei: yur ak kkk U vka i k zv An y y ; more: х жа E about ТК х, their WTO UZ IZ ATO same ZV lsh ZI «Ж as kv ng, Z ko IC. « zh ch yah KU e x. and about the ace of the hands of the Uh of the university asnyaniit zntntila against the mesotelnnu nadi EV ChchaIlya on kpeninny DAYS with eoKylNa pnerikoVtsiM and azi enNnyM BT em kom konininiiMiiyaiO Azh» nn o vyv aa aa nyoochaya nava nya z and ZK ve knocks of bones ia and y 3 Щ дев три НАМУЮ Cheslo copies 0 pUATVUV chaelo pa shee x I od Z - ka nAy Zhan oi KOYU OO KK kino KAN nn Z ЖЖ I ЖК к лютутувы Z KZ pe Z z Haki x ! ШНАйЙ of a person ZE KO | y ХХО nn i nn nn z I: change ma UK tah sv pev Y. 5 zhk sik h yak vantek makakVi Se is determined 13 E ZNO r kp p p E -- y KORU shift Me pen aNe Ve: zhk Te Z ЗУ. щу М І ВІН ичеНО і же НН З вики, Ох КК по о п в тво т жк жк кю юю ооо ово пилові о ковани щуку моду ї ще ше укр кя хк.Ж їх Уа у «95 во ва Не визначене 37 шо а НК З ЛЕК г сзїуу му зи хх. РЕ ехух Я ГО дванеької макнино Ге визначене 43 ЗаОа ен нн п нн НН и в КК ТЕЗЕ ох ую : г. сечу як їх ат З іо НУК ши Ме визначено | ке ОВО. Енн кекк кни ХЕХУУУМУУЮ КО Ме ко ув ік з в ак ни зано ник" Ір ВЕУ укуси Р 7 К З ту ще. 53 ї ЗІ 5 ВТ ОБО пючанн ща Зою Ще с МЯНКЕ З нн ж нн нн м и пн кн НН кни нн мин нн ЕЛ з сухі вки ЕВ г Кк хз віки ї КО я : ЗК ож язвноююх вве і Сх визначене | ца ТІ. з нн и У Я зжуж км Кох жук ях Я і що Н «КРУ : ДНК зева о Бе визначено в.з Яд : СОМ ВИ ВОН ХОМА ОАВВНИ ОН НН ВИНО фо с ання кино о кн Зк в осно зв кв нак її а и Е т С ТВ 1 За ї кох З Са 0 | 38 Зх ши щи Б нн в нн ЕЕЕнн нн он п ЕХ ОХ ух ву У хх Ії ЗІБКХ хх ТАЖ х що МОВО пов і ЗОЗ З МА. ще | іно КК ОО МУКУ КУ М У у УУУУУМУМУМУ МУ МУВУМУМ М 5 га і хх г прав ту й і хи З ще ВАЄ 1 | Кк аж | СЕ ва іш нн НН п п нн п кН т НН НН НН В С хе у за шк т КК хіх йо м, З Фе саврайе ща НЮОО КЕ Те СЕ Ба шк КН в ПО КК НИ п КК А КК КК КК хх хви |; ку Жх снуд ; ТЕ м 5 БО х АЕРО ШІ ще й. МО я. ен кн п а и о їх грек к ї ща іехех з а току. х у НеАЕІ м НО це БЕ ЗУ ех |! З г ЗZU. schu M I VIN icheNO and same NN Z vyky, Okh KK po o p v tvo t zhk zhk kyu yuyu ooo ovo powder o forged pike fashion and still she ukr kya khk.Ж ih Ua u "95 vo va Undefined 37 sho a NK Z LEK g sziuu mu zy xx. RE ehukh I GO dvanekoi maknyno Ge defined 43 ZaOa en nn p nn NN y in KK TEZE oh uyu: g. schu as ikh at Z io NUK shi Me defined | ke OVO. Ann kekk kny HEHUUUMUUUU KO Me ko uvik z vakny zano nik" Ir VEU bites R 7 K Z tu still. 53 th ZI 5 W O Pyuchann shcha Zoyu Sche s MIANKE Z nn zh nn nn m i pn kn NN kni nn min nn EL from dry vky EV g Kk khz viky y KO i: ZK ozh zavnoyuyuh vve and Skh determined | tsa TI. z nn i U I zzhuzh km Koch bug yah I and that N "KRU: DNA zeva o Be determined v. from Yad: SOM VI VON HOMA OAVVNY ON NN WINE fo s anny cinema o kn Zk v osno zv kv nak her a i E t S TV 1 Za y koh Z Sa 0 | 38 Zh sh schi B nn v nn EEEnn nn on p ЭХ ОХ uh vu U xx Ii ZIBKKH xx ТАХ x what LANGUAGE pov and ZOZ Z MA. more | other KK OO MUKU KU M U u UUUUUMUMUMU MU MUVUMUM M 5 ha i xx g prav tu y i xy Z still VAE 1 | Kk azh | SE va ish nn NN p p nn p kN t NN NN NN V S he u za shk t KK hih yo m, Z Fe savraye shcha NYOO KE Te SE Ba shk KN v PO KK NI p KK A KK KK KK xx hvy |; ku Zhx snud ; TE m 5 BO x AERO SHI also y. MO ya. en kn p a i o ih grek k i scha ieheh z a toku. x u NeAEI m BUT this BE ZU eh |! Z r Z -кх Ї у є М ще ше ії ТЕ кю юю у ккуккюхх фот й пкккнккаке кдд няння СУЯ се дек і же Са КО Се . ших ВЕК: У ще - КЕ я ОКХ ! нн пе ша: ох зе Ка см З і КК СЯ що и ЕК: ї- М. сах Я му . Вк К КхХ у і М Кк ще в: : Зі ЗЕ ШЕ к КК кі кі а МК Є ис шо є ших Я 7 К Я З ХВ а Е і. | ; з: Я й Кох З КК - же ВК З ер Я Я Др же фев фе Офіхчккнн ЖЖ Фоєенння А. со сскюккснхк екю ЖАХ Коен Теофкх фмессое Ше и: шо чи: З Ох ЯК ооо Р я йо м о Я КА 15 о ЗЕ ОХ КК у ще Я В ВІ Бе Б УК Ша «7 У ; я: Іі х КМ КЕ І мк : кеш ШЕ ШЕ «КУ ЯКО х вах ЕК Я ЗЕ кі У ха її щк " і в: ї КУ ШИ ЕЕ о їВОЯ Е ще КЕ її я С жк: Ї в М З Я ШЕ НННІ Я т а КО Її че ЕК З. ОК киш я КУ КЗ й КВ Й г Е . Б ТКУ ше я З те хз Я Вам З У К ІБ кВ х 5. ЗА що Б КЕ: ши яка Еш ОХ Зк ОКОМ КАК г Во Р КУ ох ще вошш ше ще 5 т й й 5. йо і В: з ШЕ АЖ СУ КО х! кю р и Кв ка се ВЕ сою Ех, 5 іно зни Й ху неті БЕ я Е шо: шо ШЕ ше СК ОЖЯ Ве : са В Я о й. І Еш . ях т й: кіш КО З В БО «Ма а СО а Ка КО Б А У ща Кі С сш шо ши ши І ша с сш ШЕ ша ян пишеш ши шви ва 66 Б ШЕ и ОК КО его «НО Ки Бе : Я Я В ТК ях Й: Ул ро-kh Yi u is M more she ii TE kyu yuyu u kkukkyukhh fot y pkkknkkake kdd nyannia SUYA se dec i same Sa KO Se . shih VEK: In still - KE I OKH! nn pesha: oh ze Ka cm Z i KK SYA what i EK: і- M. sah I mu . Вк К ХхХ у i M Кк ще в: : Z ZE ШЕ k КК ki ki a MK Ye ys sho ye shih I 7 K I Z ХВ a E i. | ; with: I and Koch Z KK - same VK Z er I I Dr. fev fe Ofihchkknn ЖЖ Foyeennnya A. so sskyukksnkhk ekyu ZAH Cohen Teofkh fmessoe She y: so chi: Z Okh JAK ooo R ia yo m o I KA 15 o ZE ОХ КК у еще Я В ВИ Be B УК Sha «7 У ; i: Ii x KM KE I mk: kesh SHE SHE "KU YAKO x vah EK I ZE ki U ha her shk " and in: i KU SHY EE o iVOYA E even KE her I S zhk: Y in M Z I SHE NNNI I t a KO Her che EK Z. OK kish i KU KZ y KV Y g E . B TKU she i Z te xz I Vam Z U K IB kV x 5. FOR what B KE: shi yak Esh OH Zk OKOM KAK g Vo R KU oh still oshsh she still 5 t y 5. yo i V: z SHE AJ SU KO h! kyu r y Kv ka se VE soyu Eh, 5 ino zni Y hu neti BE I E sho: sho SHE she SK OZHYA Ve : sa V Ya o y. I Esh . yah t y: kish KO Z V BO "Ma a SO a Ka KO B A U shcha Ki S ssh sho shi shi I sha s ssh SHE sha yan write shi shvy va 66 B SHE i OK KO ego "NO Ky Be : I I V TK yah Y: Ul ro Не. . ЕЕ: ше с си: У го : За: Б ВЕДЕ: ШК З її Я и С Я ЕЕ І Б их М я ОК КУ ОВ Ух м щк я Б З КСВ Я 5 кю я в В КУ Ух МК сю УЖ: МВ об Ян пи ук що. й; шт ЕЙ ГО Б БВ ВХ БО р «ік Р и МО 1-3 М З АЖ Кі ке г Б кх "а кі еВ шана ШЕ Кох КК Ра СВ я Іа г ча ія : й шле ши ший па З У КК Ч УК КМ з ях й ЕЙ: саше Ша. у ке Око Й 5Not. . EE: she s sy: U go : For: B LEADS: SHK Z her I i S I EE I B ih M i OK KU OV Uh m shk i B Z KSV I 5 kyu i in V KU Uh MK syu UZH: MV about Yang pi uk what. and; sht EY GO B BV WH BO r «yr R y MO 1-3 M Z AJ Ki ke g B kh "a ki eV shana SHE Koh KK Ra SV ia Ia g cha ia : y shle shi shi shi pa Z U KK Ch UK KM with yah and EY: sashe Sha. in ke Oko Y 5 КО. ТК ух ЕВ «В Ж МЕ Ка; КК хи НК Ок ка: ШИК КУКА КК і о ше сш м ШИ шк я Ки ПЕ 55 ще о. ВЕ ОН ке КК ше ко ВЕ «З оса М Як ЕК туз ЗУ ее сх сх со хх со пово МАЯ Максимальне : Ж Ж ух руткууі скор юіт пе нн ! БА захисні ант ла зв'язування щкаІжЖниМ Я пп г Е їз де» ВТМ ; : І Кз фу ув Я са і й ІЗ хх же що Я З ії ще ; Її Н . хурржох В ух М же зх І У ник вх З З ОХ Не ох Я кер ду у Я ях доожх плесзаи МТА а КУ М Ж Щ ; 00 ЗБіЗеННІ льоні Тавізли» п автяній Б декор кнтяжнн І КЗKO. TC uh EV «V Zh ME Ka; КК хи NK Ok ka: SHIK KUKA KK i oshe ssh m ШЙ shk i Ky PE 55 more o. VE ON ke KK she ko VE «Z osa M How EK tuz ZU ee sh sh sh so xx so povo MAYA Maximum: Ж Ж ху rutkuui skor yuit pe nn ! BA protective ant la tying of the cheek IzhZhnyM I pp g E iz de" VTM ; : I Kz fu uv I sa i y IZ xx same that I Z ii still ; Her N. hurrzhoh V uh M zhe zhh I U nyk vyh Z Z OHH Ne oh I ker du u Ya yah doozhh pleszai MTA a KU M Ж Щ ; 00 POLISHED TAVIZLA LINEN" p avtyanii B decor kntyazhnn I KZ Чиг. 14 дж Хот од с з г Нумерація з її нля че : МО й ї Хамевніпорствектв кП-Мкі позвепення фурином Химерні конструкти ВООМНВ жо: Ме ї КА В ів Гі людани : НВ пока щу ! виУвК ї Щ КІМ гу ІЗ «уд НАНУ ччнн ня п НААНАНАКААНАН РТ КМ тет тест еяюв ; пл тючютья пиплахаваанажя пкилнииптивяяняняя. й Ї Щ | о пеня ких кманАтААНАЮК НАТАН 000 Бі зенві ша шо БЕ: ї їх АНЯ св-тВі прот м й ї ШИ сРінюво З соте і тенннннідядятнадянит дини чнтнннетнтдднн нене? ші БЕОНВАЖОЮЖЮ дя ви ша ШО . й х й З т ит тетитететенетенетитетитен спла Х лакданлавияи З Ж манахн й3К 0 МОУЕЖ пн пер пен тт ІЗ М су сН-АТтВ хз НН Н БО ГУМЛАЛЯ мущи і ТА пнумусмх ху ДИТ тт уитр ГАЛЯ Мини ов фот ВЕ а и Сея С ох а ви ин пн ; яка и жит о К-Т сЗБівища І ! а сс а з ов я ЗО МаКевних і ї ЩІ Я БЕ ЇХ фак Ва ха х ТО БтБілюдяня ситет ї ї Зорі янев ші : і ДАТ Мне З Й що УКТЕЙ ще Х вна МВВ дрон потен і й Щи взум жЗі-їтВ хх ТКУ ЕН їх -8 ї ння 3 рах О ї ста Кока ху: хChig. 14 j Khot od s z g Numbering from her nlya che: MO and y Khamevniportsvektv kP-Mki calcification with furin Chimera constructs VOOMNV zho: Me y KA V iv Gi lyudany: NV poka schu ! vyUvK i SH KIM gu IZ «ud NANU chchnn nya p NAANANAKAANAN RT KM tet test eyayuv ; pl tyuchyutya piplakhavaanazhya pkilniiptivyayayananyaya. и І Ш | o penya kih kmanAtAANAYUK NATAN 000 Bi zenvi sha sho BE: і і і і ї Аня sv-tVi prot m і і ШЪ sRіnuvo Z sote і tennnnnidyadyatnadyanit dyny chntnnnetntddnn nene? I appreciate you. y x y Z t it tetitetetetenetenetitetetiten spla H lakdanlaviyai Z Ж manakhn y3K 0 MOUEZH pn per pen tt ИZ M su sN-ATtV khz NN N BO GUMLALYA mushki i TA pnumusmh hu DIT tt uitr GALYA Mini ov fot VE a i Seya S oh a you in mon ; what a living o K-T sZbivyshcha And! a ss a z ov y ZO MaKevnyh and i SCHI I BE THEIR fak Va ha x TO BtBilyudyanya sitet i i Zori yanev shi: i DAT Mne Z Y that UKTEI still X vna MVV dron poten i y Shchy zum zhZi-itV xx TKU EN their -8 i ny 3 rak O i sta Koka hu: x Янг. 15Yang. 15 З ЗУ КУ А із 3125 за пріркууг ія и ГАС ВІЗА на клітинах які екепресують химерний Мене Зв'язування БОЮ мм в г СУКИ КО КК ККУ КК КК ОМ КУМ КК КК УКХ КК ККУ Ух, . ж кі я Б ет мн нн нн нн нан - и ех я ЕЕ: щ «я й- вин нн НК ОО как; ще й: шк ек З нак к й К «о Но х А ЕК Ж і й й З Ка Ме І З в нн НЯ ФУ Ж их Й зем ЗЙЯ КК що «В З ти С ЗШ ФУ і Ка ще КЗ що я ій й я 4 кох и ака а щ - й тки і тя т Ро зви ВН: мин інн нанні нн нн КО ВИ ох МОЙ а ї КЗ я Р Ки є й й КІ шї м ї - ї ск уже кни нн к мих а пн о о и ох я о в З І я КЗ я І І її я Е Я СЯ Я Й З НЕ преквкнет ко пк ин ее зав ЩО ес екон ж ши хкхінні оккжкхх воккВе оо су В ОК ту. Є уж ук Ж у Зоя. Св с їх5И ЯК Людина Яванськи Ми Ї" КН по ІЕ кіс и ие вк о макака зна (ОВ КЕ се си ж ТОЙ Й ти ІЗ сх с що 5 жк срукдх ле со Кит Без ДН БО ШЕ и ЩО, Зв'язування мм ва АТО БАЗУ ТС КК КК КК КК Кк 7 пох жах | щк щ окочнкеня БО ВЕК не 15 Х в в о 7 й хх у МК ох як я. ї х х - ІМ Хе З КОД ефоноютютохююютют . кн нн п. сохне В НН п ТМ ОО с ж МОХ х Мов о . й в Дюк кю ЖК куки шо ШК КК ту ХХХ КК КК нм кни кн х З СК З джу ух КОХ ха Хзнннн а щ- ще. км щк З ЗО ОВО З х | КО З ш Я злежчюеютюьч яю єю . ня о. пн нн п ОЗ доксееєк. о щ--- М ЕХ ВКМ СО СЗЗ . щ щ й КЕ пдрноюоюєююютонничксттоннккя о. ше . . окон рда нннннн яна онононнккююнсня с. хндкнннкк . - ЕЗВ : . о. І: їх - с М о Тра А КО КА СК КК КН и ЗЕМАН 7 ККУ Я я й СЯ т ж З ж їх З ж іх - І я ЗПеХнННЯ. Яканевки ініна БЕ ОТТО ВО Ку ІН ЗНЗ | до обженої 37 о макака | зв | НН, і Кез ДНК) В | ще о же Б Я т пн і сп Ду ех Фе нг. 16 чи ска КУ ЗІ т ВЗ Зунцая 21 ща і я УуЄБу: я х ме с помах их Б її ї во оди їх лижі РЕК З х УТя ши ми З декнечитя т д ча М Ой Лу АННИИЬ З пед і селу ОБО кю КЕ сію м ся По див з кт Кт ДАК ти СИНА е є ХУ ех певен диуттнея АКТИ ООН пи ни ан Кк ту і шите Де Зелена Зжувии ни ди днк зни вінни - 7 ит ЕКНВКННЕКЯ о МНЕ вЕНН. ТКА ЕВ, З ЕЖКЕя СКК Коник х 5 шт ЗВО ЕК ЗВО схе к Ето Дуклі х тя Х мк ВИ г КА МЖК ЩІ З. ЖИ У мае і. и Кокс оппятнюои м ЕП димвих МКМ ТК АН ВК ко хх ТЛІ У є хе й МЕТОЮ екв КУ ТК КИ Нас ан с с пав ГАМЕІМН В ПАТ ОІАНК КК ДЕН У ТУ БІР ї-х х є Веди КУМ РМК ХВ нь ОН З - Бі х Ду екнетех . ЕЕ А ІЕЕ НЯ німи ВЕВАЖВ КК Мк Ві ї ток НК ЕК ЕОМ ПЕКИ МКК те КК Ка ВЖЕ Я 1 ЗБОКУ щ: с я ХеБрокі х ДІБ КК НИ: ККЗ зо ИВВ Зо: ПК кра МОДИ У Ко ІК ТИХ о МО УМ ХО АК шТх Метан тк ЕЕ К Х ТИМИ МАПУ СХЕМА ІП Іа У І Я АХ МУК ХУЛуМХ жх ж шу К. ЗМІН З МЕМ МК МУК иХ А КА З БЖ Мо У КЕН іі. в Уж ОВ а ЗК АК ХЕ ХА о ВИМ: тОТІКУХ ЗЧвирана 13 КІ Ух ІК ОКОМ КЕН Ва МИНА МЖК ПМ Кг КЕН КИ. іЩлотух ЗОМ Уа ЗНАКОВУ: ЗБАИН КАХ ЗМ ММ. МИХ МЕ кв ГЖЛОХКВ Ве СОЯ еБИЖМ КН КК ОК КЕ Ух па мажаха КЕЛОАРІ фо Та ПВ ВЕ ки Фе ЕМ Мвонськай маках шт: КОКО пек енУє КЕКВ КФК по ва 15 СЕЗ ХНА ВО ИЕ ТКУ 45 Ніс ДО І ж их Ме СИ. й ма ІДУ ЕІ шк МУ Гл 3 УМ хх «МАХ, я ФІГ О Бая лиш шо 132-213 УМА : Би в же ХА Міні 13253 ЯК жи а Ме НЯ т ТУДИ У Б Й ДЕН З МП св т З МЕ зи Ммеи ЗК З Ки с хх Зх її . ІК За ОБЖ ЗХ циКя МА с ОЕК; х нок БОКИ Бон хг КеСНН МАК о ЗО КЯ : там ІК М сш п ЖОХНМИ Бо НИЙ весно усіх ххх МОЖ КЕ СОУ МНЕ ІК вок Би хе і ММ педв мне НЕЗАККУМ Мехавко» КМ ЕЕ ККЗ ВОК МАВ КІ мив УВК Пюзаина ГИ ой дій ЗЕ КУ МАН МОРЯХ 1-7 УНН в с - СОННА ми Є КІН НЯ ті МЕККА ТК ХЕТУКВх СУ пе УК ЧІ ВЖИВ. вл ве зх ЗІ. І АОНКЦАМИ Х ЗНУ Ме ВІВ па ІЗ ин «У ДН ЮК, хіх Щі вх мзхахи Ме ІА хи ТБ. фо ша М 4 митанте СУ Як Хлюське мекв ноу Сов вн снення ЗХ му чеовурамн 1 ЗО» -- КУ АК у За ЗМ делннкяння ї й ЗБК НУ ХFrom ZU KU A from 3125 by prirkuugiya and GAS VISA on cells that express a chimerical Me Binding of BOI mm in g BITCHES KO KK KKU KK KK OM KUM KK KK UKH KK KKU Uh, . zh ki I B et mn nn nn nn nan - and eh I EE: sh «ya y- vin nn NK OO kak; also: shk ek Z nak k y K "o No h A EK Zh i y y Z Ka Me I Z v nn YA FU Zh ih Y zem ZYYA KK that "V Z ti S ZSH FU and Ka even KZ that i y y i 4 koh i aka a sh - y tki i tia t Rozvy VN: min inn nanni nn nn KO YOU oh MY a i KZ i R Ky is i y KI shim my - i sk already kny nn k myh a pn о о и ох я о в З З З З З З З З З З З З З З З З З З З З З З З З З З З З З З НЕ преквкнет ко пк ин ее зав ЧО ес екон ж ши хххинни оккжхх воккВе оо в ок ту. There is already a uk Z at Zoya's. Svs ikh5Y JAK Human Javanese We Y" KN po IE kis i ie vk o macaka zna (OV KE se se si sHE and you İZ shh s what 5 zhk srukdh le so Whale Bez DN BO SHE and WHAT, Linking mm va ATO BAZU TS KK KK KK KK Kk 7 poh horror | shck sh okochnkenya BO VEK not 15 X in in o 7 and xx in MK oh how I. и х х - IM He Z CODE efonoyutyutokhyuyuyuyutyut. kn nn p. sohne V NN p TM OO s zh MOH x Mov o. y in Duke kyu ZK kuki sho ShK KK tu XXX KK KK nm kny kn x Z SK Z ju uh KOH ha Xznnnn a sh- more. km shk Z ZO OVO Z x | KO Z sh I'll be with you. I: ih - s M o Tra A KO KA SK KK KN i ZEMAN 7 KKU I i SY t zh Z zh ih Z zh ih - I zh ZPEHnNYA. Yakanevki inina BE OTTO VO Ku IN ZNZ | to married 37 o macaque | zv | NN, and Kez DNA) V | also o same B Ya t pn i sp Du eh Fe ng. 16 chi ska KU ZI t VZ Zuntsaya 21 scha and I UuYEBu: I h me s pomah ih B heri i vo od ih skis REK Z h UTya shi we Z deknechytya t d cha M Oi Lu ANNIIIB Z ped i selu OBO kyu KE siu m sya Look with kt Kt DAK you SINA e is HU eh certain diuttneya UN ACTS pi ni an Kk tu and shite De Zelena Zzhuvii ni di dnk zninny vinny - 7 it EKNVKNNEKYA about ME VENN. TKA EV, Z EZHKEya SKK Konik x 5 pcs ZVO EK ZVO shhe k Eto Dukli x tya X mk VI g KA MZHK SCHI Z. ZHY U mae i. и Koks oppyatnyuoi m EP dimvyh MKM TK AN VK ko xx TLI U e he y METOYU ekv KU TK KY Nas an s s pav GAMEIMN V PAT OIANK KK DEN U TU BIR i-х x е Vedy KUM RMK ХВ n ON Z - Bi х Du eknetech. EE A IEE NO nymy VEVAZHV KK Mk Vi i tok NK EK EOM PEKY MKK te KK Ka ALZHE I 1 SIDE s: s ia HeBroki x DIB KK NI: KKZ zo IVV Zo: PK kra MODY U Ko IC TIKH o MO UM HO AK shTx Methane tk EE K X TIMY MAP SCHEME IP Ia U I I AH MUK HULuMH zhh zh shu K. ZMIN Z MEM MK MUK iH A KA Z BZ Mo U KEN ii. in Uzh OV a ZK AK HE HA o VIM: tOTIKUH ZChvirana 13 KI Uh IC OKOM KEN Va MINA MZHK PM Kg KEN KI. iShlotuh ZOM Ua ZNAKOVO: ZBAIN KAH ZM MM. MYH ME kv GZHLOHKV Ve SOYA eBYZHM KN KK OK KE Uh pa majaha KELOARY fo Ta PV VE ki Fe EM Mvonskai makah st: COKO pek enUe KEKV KFK po wa 15 SEZ HNA VO IE TKU 45 Nis TO I zh ih Me SY. y ma IDU EI shk MU Gl 3 UM xx "MAH, I FIG O Baya lysh sho 132-213 UMA : Would in the same HA Mini 13253 YA zhi a Me NYA t TUDY U B Y DEN Z MP sv t Z ME zy Mmey ZK Z Ky s xx Zx her. IC for ОБЖ ХХ cyKya MA with OEK; kh nok BOKY Bon khg KeSNN MAK o ZO KYA : there IC M ssh p JOHNMY Bo NY spring of all xxx MAY KE SOU MNE IK wok By he and MM pedv mne NEZAKKUM Mekhavko" KM EE KKZ WOK MAV KI washed UVK Pyuzain GI oi action ZE KU MAN SEAS 1-7 UNN v s - SONNA mi YE KIN NYA ti MECCA TK HETUKVh SU pe UK CHI LIVE. вл ве зх ЗИ. AND AONKTSAMI X ZNU Me VIV pa IZ in "U DN YUK, hih Shchi vh mzhakhy Me IA hi TB. fosha M 4 mitante SU Yak Khlyuske mekv nou Sov vn snenation ZH mu cheovuramn 1 ZO" -- KU AK u Za ZM delnnkyannya i and ZBK NU X 3. ЗАЛІ їх: УІКЦ СТУК пет кажжннтжня. ІЗ щ ВН інфа 357. МИНЕ Ве питних ве І вік вм ІНУВ з3ліТ БЕХеЄ ВЗ ИН КА РОЖЕЖ ВХ ших Мбаав ЗОВ ЕО дО ТК КЕ : МА пекннннючнн хсть двднни Була І1хХ УА зБщув г 1 Н пить чАМК ПМ КВТ сів вка, дО А і ПЕКУН ОВК ще ІМ шОМЕ х НЯНІ х ї Вказана Мт в зара миня ї ій тя БО ОО МА ш- ше І ЦО БИ МЕН З соду ї 1 за ї м ц о сумна Не г МУТНІ ро 1: дм ї пипнводовернои і мУтТОрва ж му пе Е ха сен птн ща 1 МТВ но КУЦИК Ку рхІіх с І пакжнажантняня УЗ СЕ не ї щі уіувхи Вк 7 1 КАХ 1 чаш ї рт ПС, 3 ОМВК і маш омани раю 53 : УНІ СТЬ десни і пкнукнняти жк ще В Н луна рих УЗ ее і Паннннм Миття ех : фл х. "З ня хат. - її" КЕ Хо дсниннннх т Я ІК «тку. Н дя мот Єв Н ТЕ поет Фегнннняятя де НЕО ЖКУ КОВО ї Сток ї х Її (ех ре а - т: -ї ІВЦ І шу Н ТК ЕТЕВ ве векщр пеоекннняй я НКУ пря чо су ТК дляжеююня х ЗМО о Уч у п ОТ МНК | ни іх 5 Її ХУ сп жом МАЛАДААААААЛААЛААЛАААЛЛАЛАААЛАКЯ ВМО Бе Й ПММ даляянккнх ї По З Й рани нина кВ У пппннакААКАКАКАК В КАНА ААНААМККНКАК гри 7 г. 17 ск м ния х Пк як ве Я мусу з як окачування епотопів мутантних ТО ОА ОЗ СК ТЕКА НГ ЕВ І МА Ж КЕ ІМК М Я зе КЕ КУ у. з Й ся й З чежодо ку и побудовою карт точної ваепойка КАСВ посуд вВОокх КВК оч поки гом зн НН р З; НН Зв'язування ПТК ве ж о В КК ВК КЕ Ж М М ШЕ Со р Ва чу з худ ТОК хек сон в в КН КК НК с нн в вв ХУ ОН Е Гак Ва ех жо ся : ї ЕЙ са Ка Ви Ка ук Са ОВ замі Мк Ге; ШИ шк є, К ЕІ ОТ Уфа хм с в КК ВЕ в п КО не ВИ нн ВК хх МАК мк я З СК: 3 кож о ща У Ж ке же - Ка Ши ШИК. й ЕК; За ж У: х КТ. УЖ КЗ СЯ хо З М ЖЕЩУ ше с Ко. Я: й т в Му ЕН сш ке у о: Е зе КЕ: Не: Кай КУ КАК хе У Де М а ЗА За МК ЗІ ЗА: ГЗК З Я ще Ох ох А хе І МКК с Но в не НИ ро В но ВИ Ба Кк и С о Не Ко г ще хх КК жом х КЗ КО: КК Ск: є КОНИК СК Е ши ЖЕ ех ЗЯЯ я ОНИ ШК: Ох х: ЗШ З ЖЖ у шх КОКО Кк К х шХ ; КО Б: ч де Ж Ах хх КВ я Кк ж є ях СК КЕ: с ї- яз Б ЖЖ ШК КОНеЄ С ах х ШК Се: ОКХ, с Кк С З КО се; С Со Зак» СЕ Ка: С КК се їх ЩЕ: На КУ їх - кт в С ве: К; З Ко Ка Ох Кб КІ Ж Кз як. СК: КН: я й й най ж хх В Б уз СС; хх Са о ЗК: С: ОК ОЗ КТК а ; севейи ии жа и о н Е й м ск х шх - С: КК КЗ НК БУ х А : о ке й КЕ: Мей КК З КК С ОН ке що К ке ше з й З: я З З ЗК З р Й е Кк я КІ Со: КЕ: я Ка С жк СНИ Ге в й КОШв У С; х: ГО: СН: НЯ; Есе ща соя м т. К- Ка КЕ: КЕ З: Ух Е щу Ж Ку в з хе З Ж. є Кк М: СИ: 5 НЕ Ка я КІ ех КОЖ ї З Ка шк хх КК СК: У БЕ т «Я я ЕЕ С Ко ж ий 5 З х З Ж а хх ЕК той са С СК: о ки: ЗКУ СК М ЗХ У я ш ХУ СКЗ С т Са СЯ й в сі ШИ ХХ ЩЕ КУ й - ж ж я - я С у хх Ск КК Сх я ох а кое С: С СНУ Зк Са ж КОКО Ка хх КЗ НИ 3 с я ок Ко КО З Уха. Я Кк щу х Кк КО: КОН КУ х Ка хх ок х і за хоста ни п км у и а по п в п и о кв п по п КО вв Ж сук х А КК ке КЗ - ша: У ш я й ше хх МИ Ж Кі і Є КЗ М: ак: ва ххх Кк З КЕ КВК Ж Ко ЕК Со С ой ши С З: хх ой до ох С М Ж Ка КЗ С Я хх КЕ: СЯ я я я а ЕКЗ Ка З Кох КУ т: ОК: КОХ: Сх СЕ Ще ОН ко са: -х Ко о я о о - ЗК ЕК ЩЕ хх ох З З у о а х ХУ оф я зздаан ній я КК НН з: х чех ОККО з: еЗ в 5. хх З м КЗ їЗ зх є: х ї су х КЗ і. СЯ я ІЗ -к її х г і; К а Ь; КК КУКУУ я Є Б. ЕЕ Б ї г З 1 і 16 ІВ Її Я ж ку уки х, НЕК -Х Б М УТА3. THEIR HALLS: UIKTS STUK pet kazhzhnntzhna. IZ sh VN info 357. MINE Ve pitnykh ve I age vm INUV z3liT BEHEE VZYNKA ROZHEJ VH shih Mbaav ZOV EO dO TK KE : MA peknnnnuichnn hst dvdni Was I1xH UA zBshchuv g 1 N pit chAMK PM KVT siv vka, do A i PEKUN OVK still IM SHOME x NIANI x y Indicated Mt v zara minya y y tia BO OO MA s- she I TSO BI MEN Z sodu y 1 for yim ts o sad Ne g MUTNI ro 1: dm y pipnvodovernoy and mUTTORva zh mu pe E ha sen ptn shcha 1 MTV no KUTSIK Ku rhIih s I pakzhnazhantnyanya UZ SE ne y shchi uiuvhy Vk 7 1 KAH 1 chash i rt PS, 3 OMVK i mash omany rai 53 : UNI ST desni and pknuknniat zhk even V N luna ryh UZ ee and Pannnnm Washing ex: fl x. "Z nya hut. - her" KE Ho dsninnnnh t I IK "tku. N dya mot Yev N TE poet Fegnnnnayatya de NEO ZHKU KOVO i Stok i x Her (eh re a - t: -i IVC I shu N TK ETEV ve vekskhr peoeknniai i NKU pry cho su TK dlyazheyuyunya x ZMO o Uch u p OT MNK | ny ih 5 Her HU sp zom MALADAAAAAALAALAALAAALLALAAAALAKYA VMO Be Y PMM dalyayankknh y Po Z Y rani nina kV U pppnnakAAAKAKAKAK V KANA AANAAMKKNKAK game 7 g. 17 sk m niya x Pk ve I mustu z as circling etopopes of mutants TO OA OZ SK TEKA NG EV I MA Z KE IMK M YA ze KE KU u. with Y sya y Z chezhodo k and construction of maps of exact vaepokya KASV ware vVOokh KVK points until hom zn NN r Z; NN Linking PTK ve z o V KK VK KE Ж M M ШЕ So r Wa chu z hud TOK hek son v v KN KK NK s nn v vv HU ON E Gak Va eh jo sya : i EI sa Ka Vy Ka uk Sa OV zami Mk Ge; SHY shk is, K EI OT Ufa khm s v KK VE v p KO ne VI nn VC xx MAK mk y Z SK: 3 kozh o shcha U Zh ke same - Ka Shi SHIK. and EC; Za z U: x KT. UZH KZ SYA ho Z M ZHESCHU she s Co. I: y t v Mu EN ssh ke u o: E ze KE: Ne: Kai KU KAK he U De M a ZA Za MK ZI ZA: GZK Z I still Oh oh A he I MKK s No v ne NI ro V no VI Ba Kk i S o Ne Ko g still xx KK jom x KZ KO: KK Sk: there is a GOCIST SC E shi JHE eh ZAYA I THEY SHK: Oh x: ЗШ З ЖЖ у шх COKO Kk К х шХ ; KO B: h de Ж Ah xx KV i Kk zh is yah SK KE: s і- яз Б ЖЖ ШК КОНЕЕ С х х ШК Se: OKH, s Kk S Z KO se; S So Zak" SE Ka: S KK se ih SCHE: Na KU ih - kt in S ve: K; Z Ko Ka Oh Kb KI Zh Kz as. SK: KN: I and the same xx V B uz SS; xx Sa o ZK: S: OK OZ KTK a ; seveyi ii zha i o n E y m sk x shkh - S: KK KZ NK BU x A : o ke and KE: Mei KK Z KK S ON ke scho K ke she z y Z: i Z Z ZK Z r Y e Kk I KI So: KE: I Ka S zhk SNY Ge v y KOSHv U S; x: GO: SN: NA; Ese shcha soya m t. K- Ka KE: KE Z: Uh E schu Z Ku v z he Z Z Z. is Kk M: SY: 5 NE Ka i KI eh KOJZ y Z Ka shk xx KK SK: U BE t « I I EE S Every 5 Z x Z Z J a xx EK toy sa S SK: o ky: ZKU SK M ZHH U i sh HU SKZ S t Sa SYA y v si SHY XX ХШ ЧЕ KU y - zh zh I - I С u хх Ск КК Сх я ох a koe С: С SNU Zk Sa ж KOKO Ka xx KZ NI 3 s i ok Ko KO Z Uha. I Kk schu x Kk KO: KON KU x Ka xx ok x i za hosta ni p km u i a po p v p i o kv p po p KO vv Ж suk x A KK ke KZ - sha: U sh i y she хх МЙ Ж Ki i Е KZ M: ak: va xxx Kk Z KE KVK Z Ko EK So S oi shi S Z: xx oi do och S M Ж Ka KZ S I xx KE: SYA I I I a EKZ Ka Z Koh KU t: OK: KOH: Сх SE Че ОН ko sa: -х Ко о я о о - ЗК ЕК ЖЭ хх ох З Z u o a х ХУ of я zzdaan niy ЧК НН з: х чех OKKO з: eЗ в 5. xx Z m KZ iZ zhx are: x i su x KZ i. SYA I IZ -k her x g i; K and b; KK KUKUU i E B. EE B i g Z 1 and 16 IV Her I zh ku uky x, NEK -X B M UTA 5.2 я я фо жожь Я зкеазеавзвня ЗА НЬОЇ зн «ВЖК ОКУ ЯК вк ший ЖК ХК хе ї Іб І ванн а как дики, ьо ж, ї содою док еВ:5.2 I I fo zhozh I zkeazeavzvnya FOR HER know "VZHK OKU AS vk shiy ZHK ХK he і IB I bath a how wild, eh, і soda dok eV: 7 5. су х Я кг вав. КК: й ; щі 5 й - аз ї ІЗ хх ЖК о КК: вне м скл щей х ке Ве озна НИ а и не вк В и В Б м ЕКО ах: а: мн їй КЕ: Кк ДОН фуеХУ ке Я їх ї Е й я Кия Ко к КЗ ВН хе хо Й Ка Ку ще Ж С той в ой й й ке Се СЯ : СКК З: Са о СНИ ЗКУ СУ КО зх ггевкка ся ке Ко НЕ: КЕ: Ко із КО: її КЗ Ко КУ іх КЗ У че ВИтжий Я: СЯ: Гай хе кий БК: ої ко ее: КЗ: СЕ У; ЗЕ "НЯ Я ххх. са Й я С Ко й я ж Я. ше КО ще ВУ о КН о М са ово кс С я бе КИ а о ИН За ож їх с Уж ЗШ НК ТНК: СЕ; СК С: же, СКЗ и НК: с: Се, і; Я ше Кох хз КО щ-ї ж о я я я Ба: Ки М що ЕК З: с: ЗЕ; ск БО: а»: Са СН ЗЩКЗ и Са хх Н Е: КЗ я Ко: ї- ж і Ме: и - - Я : т. СИ Ки шк СИ Й НИК Ку КЕ Кк Кз й ОХ я ще - Ж: ке я: Моя Сз КІ БО: Мк СКЗ щу з М Зх: й хх ся ка Я Кі Кох КО НИК: Ку Ку я Й я же Ме кі «и Ку кяяКя З сенкан КЗ: ре о зни Я З в Кк; Ки Кози: й КЗ еко, ех Кх о й КЕ кри са о Й КЗ ож я я ШИ як ЕД Кк КЕ: жк Б Кк Кк В іа З Б ОШИКЯ ОО я НЕ З СК СК Я ЗХ ОХ ОК: У 5 Ре КЕ КЕ Кох ше Ой КК о ке б ЕЕ КЕ: ке Мх ТЕ, ЗК ЖЕ. ит. СК: Як Ка Те Зк я Ко р де Ку ох СК шк х Ки Не МОЖ ди СВ с ГКУ Кк Б: Кк й С Се их КК їж ї ЯК: СІ кт хо у. КО С: ОХ ща З хи ке хи З Я ко с ЕУй м КО АЖ Ше За: ж ЗМК Ие; КУ ОМ; ДЯ ден ХНИ Ока Й Ту" ек: ни М зни ше нн М шнек М ван К шк жи й ши Й ши М зненинанннни Хе ЕК: З: З ЗНО Зх: ше оо с й щу ЯК м: ШИ ЗИ БУ ЕМ КЕ: ЗЕ НЕ вої ке 53 Ко ЕСЕ СК: КЗ її Я хо дош Кох СОКУ: Ви КО: хи С: в СК; С: ко у Я ку КЗ Ко КВ ШЕ Зі З ех КЗ Ка КЕ: МЕ я Я вух Й й ХО Сх: с: Кз я Би я: КК: СН Б є КОНКУ й о : Ре 2 КК Ко С хз я Ж СО: са С км ОМ Хе я х До сеекбесде зннк нео ож же пофреюою А нм ТЕ я сх ЕХ к З ко Є о І: м хх з Ка В: ху Кох сх Прут Е щх « КЗ х. 7 Ки в У Ж у; ж їЕ ЗК Ухуиєх кто х Я мутанти з нн вн в нанні нон п й Є зх ож фік і1А Е: Е Як зи її х ОК.7 5. su x I kg vav. KK: and ; schi 5 y - az y ИZ xx ХК о КК: vne m skl schey х ke Ve ozna NI a y ne vk V i V B m ECO ah: a: mn her KE: Kk DON fueHU ke I ih і E і I Kiya Ko k KZ VN he ho Y Ka Ku still Z S toy v oy y y ke Se SYA : SKK Z: Sa o SNY ZKU SU KO zh ggevkka sya ke Ko NE: KE: Ko iz KO: her KZ Ko KU ih KZ U che Vytzhiy I: SYA: Gai he kyi BC: oi ko ee: KZ: SE U; ZE "NYA I xxx. sa Y I S Ko y I zh I. she KO still VU o KN o M sa ovo ks S ya be KI a o YN Za oz ih s Uzh ZSH NK TNK: SE; SK S: same, SKZ and NK: s: Se, and; I she Koh khz KO sh-yi zh o I I I Ba: Ky M that EK Z: s: ZE; sk BO: a»: Sa SN ZSHKZ i Sa xx N E: KZ I Ko: и- ж and Me: и - - I : t. SY Ky shk SY Y NIC Ku KE Kk Kz and OH I still - Z: ke I: My Sz KI BO: Mk SKZ schu with M Zh: y xx sya ka I Ki Koh KO NIC: Ku Ku i Y i same Me ki "y Ku kyayaKya Z senkan KZ: re o zny I Z in Kk; Ky Kozy: y KZ eko, eh Kh o y KE kry sa o Y KZ ож I I SHY as ED Kk KE: zhk B Kk Kk V ia Z B OSHIKYA OO i NE Z SK SK I ZH OH OK: U 5 Re KE KE Koh she Oy KK o ke b EE KE: ke Mh TE, ZK THE SAME . it. SK: Yak Ka Te Zk ya Kor de Ku oh SK shk x Ky Ne MOJ di SV s GKU Kk B: Kk y S Se ih KK eat i JAK: SI kt ho u. KO S: OH shcha Z hy ke hy Z Yakos EUy m KO AJ She Za: zh ZMK Ie; KU OM; DY den HNY Oka Y Tu" ek: ni M zny she nn M shnek M van K shk zhi y shi Y shi M zenininannnny He EK: Z: Z ZNO Zh: she oo s y schu YAK m: SHY ZY BU EM KE: ZE NE voi ke 53 Ko ESE SK: KZ her I ho dosh Koh SOKU: You KO: khy C: in SC; S: ko y Ya ku KZ Ko KV SHE Z Z eh KZ Ka KE: ME i Ya vuh Y y HO Shh: s: Kz i By i: KK: SN B is KONKU y o : Re 2 KK Ko S khz i Zh SO: sa S km OM He i x Do seekbesde znnk neo ozh zhe popreyuoui A nm TE i sh ЭH k Z ko Ye o I: m xx z Ka V: hu Koh skh Prut E shkh « KZ kh. 7 Ky in U Z in; zh iE ZK Uhuiyekh kto x I mutants z nn wn v nanni non p y Ye zh oj fik i1A E: E How zi her x OK. ху АХ Й 4 хека -- хх ніжок « я їх К й іч ш су зак ку ту В пю : Я ех ватра кту ІІ КУУ ек Я ХЕХаЖаЕ КУ завязУвВання позу м мУВНТИМИи ВІНКС мМаКакн і лим ТИНОМ - « ск о и хо З и пт Ба ІЗ ех Я Мк ме й х Є З (о фік кт КК КИ КМ Кк КК КК КК с ди же М ке х ; хе : са ; же КН у Гм Ех: я ши ее т 5 я Я: : в о Н п г 3 Хо щей МК ее Массеній ТЕ ик ххк о г ккквннни ДКккк юю км ХХ К о, хх Ж с ; хх ах хх КЗ хе х Ка я я КУ У КК М З: З. хх КУ в хо ОДН КЕ Ка У о 5 «З ї ук хо С ї о дк Ки ї Гая Й мо ; іЗ нон оон подкр Кеняя "тва аг м ВН В я сСнго І ве Жгіхіссуєс ТЕМ СА смуг єгохттоїмої Ук іх ск умі Бл ЛЕ СОА ЗО квріонам ма візнах сайтах дуги стоонннінонніннок І ОБ ЕЗЯІ а ДІ нн ож х ВОЗИ рі а х. В, Я ж у ІМЗИиниВ лин у СУМІ и с СУ У о Уж сем у ооо тла уньми сх м УЧЕТ МХ х, АМОдиВВ ілі МК хе СМ УМ у ВИК У К В ІМ У ПВП КА НИВІ та ВІКІ Зк МКК Є є КО КЕН ВМ Ж ВР ОВ КЕНЕ ВО в ОКУ КН я СОБАК КА ЯВНІ в ОКО Маванська макакиа 3300 фонд м м і и ОК и В М КОН ЦІ МОМ ване сек З ї НН Ех са ек й НІВИВННВК як ен кох ік ВН Тен БІЛЯ ЖЕН вв Ж і шани х м мк а я А и МД Ля ЖЖ ПЕМУКНКЕ 5 В ЕКО ве хе ЕНН ЗХ З ве ВА ке Врие т ен З ї х Її НЕТ й У У ща НРУ х Ко 2-5 х: їх її Мі и Мідта 133033 б іх КВУ МІВ ве від Не «ПАСМ МД КА МК піні кв Ін Вів уже 15. ДЕ ЛЕМ ОВО ТИВИ я ОВО ОВ ОКО ВІ КК ВА У ВВ ВВ ІВ В КМ БК ЕВ ОК КВН Перо БУ пуп ІМ ранки кур два и ТАЖ МІК Улас М ХК ЗНУ Ух ці ВМО и МОУ Я я косу пон а С ее Бо Не Жак, -к секаиєж тя філо ПОН їх. М ИН У У би УДО ХУ Замок макака 13 ВО НО УС ЧЕН НН ИН АД лаивс»ив макака млн ВЕН ОВУ е ВИМИ АКНЕ З во З яКІВ г Із КУТІ БАНК А АН Ми коки ні ми мМ КМ в у Мур іа хви юиа Кв юю я це МеВ Мухи Г.І ТЮ УВК ВМ Кен и іх і по ом Мвхна БЯЖНЄЇЙ ВІДЕОВЯСКВ БУКВА КЕ КО ВЕН ВКА ЕН Є В КОХ «ку КУ ан 15 кр РОТОВУ ВОК НККУК СТУ Е ВН ЗЕКЗЖОКК Вк МКК СНМЕОНТХ гос Е: ри звАЖХ ВЕН , паля лчянння Й БАРИ чн. 1hu AH Y 4 heka -- xx legs « I ih K y ich sh su zak ku tu V pyu: I eh vatra ktu II KUU ek I HEHAZHAE KU tying pose m MUVNTYMyi WINKS mmaKakn and lim TINOM - « sko i ho Z y pt Ba IZ ek I Mk me y x E Z (o fic kt KK KY KM Kk KK KK KK s di ze M ke x ; he : sa ; same KN u Hm Ex: I shi ee t 5 I I: : in o N p g 3 Ho scheie MK ee Massenii TE ik xxk o g kkkkvnnny DKkkkk yuyu km ХХ K o, хх Ж s; хх ah хх KZ heh х Ka i KU U KK M Z: Z. xx KU in ho ODN KE Ka U o 5 "Z і ukho S і o dk Ky і Gaya Y mo ; іZ non oon podkr Kenyaya "tva ag m VN Vya sSngo I ve Zhgihissues TEM SA smuh egohttoimoi U ih sk umi Bl LE SOA ZO krionam ma visanyh sites arcs stoonnninnonninnok I OB EZYAI a DI nn oj x VAZI ri a x. V, I same u IMZIiniV lin u SUMI i s SU U o Uzh sem u ooo tla unmy sh m ХЕТ МХ x, AMOdyVV ili MK he SM UM u VYK U K V IM U PVP KA NIVI and VIKI Zk IKK E is KO KEN VM J VR OV KENE VO in OKU KN i SOBAK KA YAVNI in OKO Mavanska macaque 3300 fund mm i i OK i V M KON TSI MOM vane sec Z i NN Eh sa ek and NIVIVNNVK as en koh ik VN Te n BY WOMEN vv Z i shany h m mk a i A i MD La ЖЖ PEMUKNKE 5 V ECO vehe ENN ZHH Z ve VA ke Vrye t en Z them x Her NO y U U shcha NRU x Ko 2-5 x: them her Mi and Midta 133033 b ih KVU MIV ve from Ne "PASM MD KA MK pini kw In Viv already 15. DE LEM OVO TIVY i OVO OV OKO VI KK VA U VV VV IV V KM BK EV OK KVN Pero BU pup IM mornings kur two and TAZH MIK Ulas M ХК ZNU Uh these VMO and MOU I I kosu pon a S ee Bo Ne Jak, -k sekaiezh tya filo PON them. M YN U U by UDO HU Castle of the macaque 13 VO NO US CHEN NN IN AD laivs»iv macaque mln VEN OVU e VIMY ACNE Z vo Z YAKIV g IZ KUTI BANK A AN We koki ni we mm KM v u Mur ia hvy yuia Kv yuyu i te MeV Muhy G.I TYU UVK VM Ken i ih i po om Mvhna BYAZHNEIY VIDEOVASKV BUKVA KE KO VEN VKA EN E V KOH "ku KU an 15 kr ROTOVU VOK NKKUK STU E VN ZEKZZHOKK Vk MKK SNMEONTH gos E: ry zVAZH VEN, pile of wood and BARS chn. 1 В Е З М ях ся -х ху «о ОЗ - ка щх сх ще г їх та Хе Фбозкні МеВ СТО людини с. ко шо їй ія с БЕ Бе З МУ ож К ях ях ми М АТ АТ ВІ ВО ЕСої Пуз Що 5 . Щек щк Що ЩЕ о. і їі щен Шо ей ії і У і аа На. хще «Пеаказана біля носок казана сл НСКУ експозиція сЖксх вну век ЗК ЖЕ скклусуукутту фу куки ЗАТЕ их . Фракой Мі СПО людини на чн ВК оЯ й МО і і що чи ех - Ех УК Б ре Я кана ан й ЩУ не ТВ що й ; ке ; «я | й у в м - Ж ї МО Хе З . и» г, і Кт Я Е пово І ооо но й чими м янезНОВан р ЩІ і фрак і | | У КУУМУ Юнь цх ! й 3 нні ях З З нини шик пи зн пон п пи по п на й суку ху їх С ах - ках Ге г хм МО ж БІК 5 ще Ме що щЮ БО Часісека ; вн нн Ж Кк гу я хVE Z Myakh sya -h hu «o OZ - ka shkh skh sche g ih ta He Fbozkni MeV STO person p. what is she ija s BE Be Z MU oj Kyah yah we M AT AT VI VO ESoi Puz What 5 . Cheek Cheek What ELSE o. i ii shchen Sho ei ii i U i aa Na. хще "Peakazana near the socks of the pot sl NSKU exposition sЖкшх vnu век ЗК ЖЕ skklusuukuttu fu kuki ZATE ih . Frakoi Mi SPO of a person on chn VC oYa and MO and and what or eh - Eh UK Bre I kana an y SHHU ne TV what and ; ke ; "I | y y v m - Zh y MO He Z . i» g, and Kt I E povo I ooo no and what is changed r SHHI and frock and | | In KUUM Yun tskh! y 3 nniyah Z Znyny shik pi zn pon p py po p na y suku hu ih S ah-kah Ge g hmm MO zh BIK 5 more Me that shЮ BO Chasiseka; вн нн Ж Кк гу я х НС зале не ЛК но ЗА Ї йлокує взасмодно . о Мусіє м одн Мем, С, Ш ж: ШИ У. і.NS hall is not LK, but it freely locates FOR IT. o Musiye m one Mem, S, Sh w: ШЙ U. i. В ; ММ як ов МИ у ДД-е З З х 2 ГЗЙ і Аа я Гор уко щ ше ше ши Е ея ГП ; ШЕ шт і ; : ши ши ши є еле ШЕ КЕ ї ши ше : і я. і Н кине ЕД Го ї , ой й 5 у г ж а хМ зу й пай очах чНИ ; мезо і Зв'язування Мисі8- з М5ів кТин «Конкурує з ТС «аленаез 79 (або Ав. шо не має ло цього шнемеді Я ще» Ми: їв а ру Й х з з Й І х МНН Ту с 5 «хх х їв, я КЗ: ГЕ Я З в у поле ши ИН . дв» пі ш Ком Б рі пише ше у шо и " ТЕ ї Е з 7 ЕЕ у МОЩІ шк г ГК : й г І І ї І. х ІЗ що І. х ок й й й 3 я х й Кк! Я іч ї ж з . Ос вт еко рр о о Я щюЮ ОО Згязування МілепіхВ із Мосів літ «Каонкувує З ССЗ з « Посвлюється дно ОА Фіг, гі зак ; ІН ксенону оче й її НС кн оінУ випхали ьо ї ЗИ НС меннелінх в юотоковий аденекирнинномі вевмлувковох вико рееогепстоттсююю лаг АТС КАК Осо ТАТО ЖЖ ; піожеосесестнку Ху ЦИТ З МАКУХУ ІК Е ; те ще кеш ЕЕ У ШЕ ак і З ІЗ й і пк хржжж жиди х х с; : днженнннкй їх лк її х ї хе: НИКИ ШАНИ, Її, ТМ Ох ях. ОЗ, ТК Е ІМетВУ Ух ХЕ кої п Ж і : З І І ї І нин З: УВК у тд» сх тоди З тт о хи ОКУ Мн о и У деесууих КК ВВ НК е х гтевпожттте вен рт КК ее по о М у Ж КК В КЕ шт МОХ Кос тю З ші я у Ки в В ВО НВ х ЖК ЯКА ВХ с о ЗЕ аж Хе: Бо Се. "ух ВВ М а хек - Кк КК шк, КК кру ОВ МН В со зе а: З МНЕ ЗИМ КЕ ех ТО УЗ о КИМ Бе Кк ВК Бе зе в с - : Ех : КИ а я ОВ КВ БЕ Кох да ВО мой М и и хо КАХ КОЮ. ку вк зу ах Ка с ВК: НЕ у НК УВК Є Ж І нн ях о о НН Па нки у А НО МА ех о М КН ї І І Зх с жо кВ ЗК ко ВОМ ОТ з МН М Ох ж ож ОК кт хо Ка УЯХ М Б се ох. Ки о ВК Той СК ЛЕ я м: сн М КН ВХ ок о, дя а ЧУ о ЗМК ВК Ж З с М Е і еВ Х ТЯ т Се 2 МА КО Ян о, Я 5 ри не - Р. М ях що по» З Ко у М у р: З а и Ми КЕ Я зу о т» Зх ОО оо ох вх ох ок ОКА Й ВЕ ОВ КАВУ ХЕ ОХ ее Я Зб ж Я АХ У г СА ВИ ев у ВК ие С В В Оу кн В о я ноу а хх "а А Же. Щ с ші БО х ЕК в КК фа а А ВАННЯ У сн и а с МОЯ о З МО І М з а хх Б, В Ж у 9 ВО КО и о ши В я. А ОО п в м а мя а и ше с Чий Ов У кс роз А В о М ОН о ще ее 53 ХУ я п с ос ЗМО М КС М НОЮ се В я о В с ДИ С з он ВУ. ще ска во ОВ ЩЕ нн ШЕ ле ме ВУ ще. Б 0 ЕЕ. пом Б Й сивий ОВ нн и -щ и ис нн Я и В БОМ Ох В ве В І ВО ВИН Н ша М ВХ м патини й ІЕИООНННННННННОННО ООН а В Ж па й Пезвтувнни: МР ВГС, МКУ щ , У Моди здатаікюжинк кн ддтвекдажюн кал кокос со доотетт ех ОТО ОТО О ОО ее ео тт тт ! рення ск Мр б. уки ЩЕ ме уутеь пі ву зу мхтухох ет ТНС мезотеліву в пухлинах яєчника ро а ; чу подат ТОР Того Ї ши тики ту Н ; Кази ЗНО ї нн х : шини нич нини пен чи ї ху. ї ж 4 Її з | ; нн Б г ПИ м ШИ З ОО бивувх ! ї Й й : і ЗОВ кННВНИМа З 5 з п ; ах гу, ня я В ї зах "ЕЕ Ї яке Й | якоря ен Ин АН Сн ЧИНИ УК ооо ук кни сексі, З пе жк ки в КЕ піти хх Я леж ДІ я ше з, ро и: У В ит НВ СО ЯЗ у их о М ХВ МУК т й ОуХ С сш я чо Я жу Я се Ох й як тя роту же ОК й : ее кОаши в сін й а СХ ге пе сх ех у гу МУ ох ах хо 5 н х есе в В В БК ВХ в МОВО ех шт ва ке» ЩО 5-5 а ок о КУ СК КЗ НН око хи мін дк - ККУ АК КК СХ КМ В ОХ ОК в кв НК ка ж ж Зх ки В. о о ЗВ МОВ КК ий Я и о о ОН Ми З Хр: ох СВ МКУ. о В ОХ ВО ОН и о и и ОН ВЗ в «З у МН І В В КК МОЯ пе я зак. о ни и м З я іх З КВ АК У У хд, оо на ши се СО. М они Ж ХХ у и Ки вх З ек ЗНО С і в НН ОК о ОК В я ши г На ек а Ми В ОК І ех Ко ен Фк НЕ: Ск и ух ВН АН ОХ и НСС і Ка Кк кс Вк ох ке ВІ МЕ МО В ОО ОЕМ ОА МЕ ж и ще сон и й ЗНОВ ЗХ Ко я ОК и Зх ях ЕЕ Му ВИ ще ой о ВО и су Оу ик С У фотку КК ж М и: ЗВО ОМ я ху ЕК АКА УК АХ В ЗАМ У дн ко Я ВХ Вени. З КН их й ОО ЕКО ьЯВ ее Я Ше: СС а м ПО и в КК ЕК й ОУЕН В ні а М Пе и В: пу Я ЗЕ і ка а ЗА ЩА ВО М о сок шу МО М и МК В В В з о о и і АК яма ПО КОЖ ех ТК що иа з РЕ РОМ ОО ко ПН М Ки ВУ БО В В о а М М ЗО В нн шинIn ; MM as ov MY in DD-e Z Z x 2 GZY and Aa I Hor uko sh she she she shi E eya GP ; SHE pieces and ; : shi shi shi is ele SHE KE yi shi she : and I. and N will throw ED Goi, oy and 5 u g zh a hM zu y pai ochah chNY; meso and Linking Mysi8- with M5iv kTyn "Competes with TS "alenaez 79 (or Av. that didn't have this shnemedi I still" We: ate a ru Y x z z Y I x MNN Tu s 5 "xx x yiv , i KZ: GE I Z v in the field shi YN . dv" pi sh Kom Bri writes she u sho i " TE i E z 7 EE in MOSTHI shk g GK : y g I I i I. x IZ what I. h ok y y 3 y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y 3 y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y NS kn oinU were blown out by yo and ZY NS mennelinh in yuotokovy adenekyrninnomi vemluvkovoh reeogepstotsyuyu lag ATS KAK Oso TATO LZH; piozheosesestnku Hu TSYT Z MAKUHU IK E; the same cache EE U SHE ak i Z IZ y i pk hrzhzhzh jews x x s; dnzhennnnky their lk her h i he: NIKY SHANY, Her, TM Oh yah. OZ, TK E IMetVU Uh HE koi p Z i : Z I I i I nin Z: UVK u td" skh tody Z tt o hi OKU Mn o y U deesuuyh KK VV NK e x gtevpozhttte ven rt KK ee po o M u Zh KK V KE sht MOH Kostyu Z sh i y Ky v V VO NV x ЖК ЯKA ВХ s o ZE azh He: Bo Se. "uh VV M a hek - Kk KK shk, KK kru OV MN V soze a: Z M NE ZYM KE eh TO UZ o KIM Be Kk VK Be ze v s - : Eh : KI a i OV KV BE Koh da VO my M i i ho KAH KOYU. ku vk zu ah Ka s VK: NE u NK UVK E Z I nn yah o o NN Pa nki u A NO MA eh o M KN i I I Zhs zho kV ZK ko VOM OT z MN M Oh zh osh OK kt ho Ka UYAH MB se oh. Ky o VK Toi SKLE i m: sn M KN VH ok o o, dya a ЧУ o ZMK VK Z Z s M E i eV H TYA t Se 2 MA KO Yan o, I 5 ry ne - R. M yah what po » Z Ko u M u r: Z a i Mi KE I zu o t» Zh OO oo ohh vhh oh ok OKA Y VE OV KAVU HE OH ee I Zb z I AH U g SA VI ev u VK ie S V V Ou kn V o i know a xx "a A Zhe. Sh s shi BO x EK v KK fa a A BATHROOM U sni a s MY o Z MO I M z a xx B, V W u 9 VO KO i o shi V i. ska vo OV SCHE nn SHE le me VU still. pa y Pezvtuvnny: MR HGS, MKU sh , U Mody zdataikyuzhynk kn ddtvekdajun kal cocos so dootett eh OTO OTO O OO ee eo tt tt !rennya sk Mr b. uky SHE me uuteh pi uzu zu mhtukhoh et TNS mesothelivu in ovarian tumors ro a chu podat TOR Togo Y shi tiki tu N ; Say ZNO i nn x: tires nich nini pen chi i hu. i j 4 Her with With 5 with n ; ah gu, nya ya V y zach "EE Я как Я | anchor en Yn AN Sn CHYNY UK ooo uk kny sexi, With pe zhk ky in KE to go xx I lay DI I she z, ro y: U V it NV SO IAZ у их о М ХВ МУК t y ОуХ S ssh ia cho Я жу Я se Ох и как тяроту same OK y : ee kOashy v sin y a СХ ge pe skh х у гу MU oh ah ho 5 n h ese v В В BK ВХ in MOVO eh sht va ke" ХХО 5-5 a ok o KU SK KZ NN oko hi min dk - KKU AK KK Х KM В ОХ OK in кв NK ka zh zh Х ky V. o o ZV MOV KK yy I i o o ON We Z Hr: oh SV MKU. o V OH VO ON i o i i ON VZ in "Z u MN I V V KK MY pe i zak. o ni i m Z i ih Z KV AK U U xd . i Ka Kk ks Vk oh ke VI ME MO V OO OEM OA ME zh i still dream i y NOV ЗХ Ko i OK i Zh yah EE Mu YOU still oi o VO i su Ou ik S U fotku KK zh M y: ZVO OM I hu EK AKA UK AH V ZAM U dn ko I ВХ Veny. Z KN ih y OO EKO yYAV ee I She: SS a m PO y v KK EK y OWEN V ni a M Pe y V: pu I ZE i ka a WHY M o sok shu MO M i MK V V V z o o i i AK yama PO KOJ eh T K ch ia z RE ROM OO ko PN M Ki VU BO V V o a M M ZO V nn shin 3. ВЖК. ща я. «Ж Зо свв : ОО ЗО ок о Ко МИ З 8 ко Пе іх х вана ОКО я НК А ВХ о В Пн З й ся Ме В ФО МОМ я ОК ке ос вва ЖЕ КК ВВ Ех М о ОВ у еВ, х ооо ОО У оз о и ах М у, д НО ОВ я ОК ОВ кеди й ня Ж М МНН ІН В В оо Бррентнв ЗКЧ; севозних ЗНУ ВІК вічне ки дови х ВАН Ж ТВ «УНК. ЯКЕ. Кк НІНА УНН НН ЗНО ЖБК інж ВЕСТИ |: й ЗМІННИМ М МО ЕК ХНУ ВИХ УМХ МЕТ их пУКлИиМ х ж й нн п п ії шт черг. а3. VZHK. I am "Z Zo svv: OO ZO ok o Ko MY Z 8 ko Pe ih h vana OKO i NK A ВХ o V Pn Z y sia Me V FO MOM i OK ke osvva ZHE KK VV Eh M o OV u eV, h ooo OO U oz o i ah M u, d NO OV i OK OV kedy i nya Zh M MNN IN V V oo Brrentnv ZKCH; sevoznyh ZNU VIK eternal ky dov h VAN Z TV "UNK. WHICH Kk NINA UNN NN ZNO ZHBK eng WESTI |: y VARIABLES M MO EK HNU VYH UMH MET ih pUKliyM х ж y nn p p ii st rt. and ІНС; мезотелінх ваденокарцнномі МСС дн плетення фах НЕ ! ши пана І їв Зк | ! Й | ; ж: в МИ НЕ: дики вжи жа тяжкі сх и сю -х сх і кщіг І х ї шк а Її ша шен ШИЯ : і Е іме : Зх ЕН ШЕ С: М ВИШ ЕСЕ Ух з їх НОМ ни МИ МИ «КВ НН Кі а М оо у Кт ю юка КТС ЄЄЮю ал ж тютюн сн тр Зх я З та й ЩІ совно у А За ЗК чяс пдра ДК а: Же мон ік ї В оф. У --е КВ, ще Код АВК С ОК Те А я вх ї соя Ко нини ЯН Ко УКХ КК х у: хо В ї бно ьо, ЗО кума в А І НИ ШИЯ Зо». Ей Зае Зк ОБО 5 тая СЕ ШСЗ ж як кож У ха є ах З ге ке Ук й щік що ее з е Не У и и ЧИ Ж ою Зк З ЕХ Юа вк у з Ше о: Кс ВК Га Со МН З Ж ще й ! ве «щ К м з НЕ ЦО в ме ще шо с ох ОС е е М КИ У ов че жи б ОО ге Я нина АНА я схе ІДИй що нь о ЩЕ Ви шк ужежа З С Бей У я ЕН в Кепки вовна ДК Ша хе г. Ти У У дк ЗИ ОКУ му Енея Кз Я лю ру Н в А ля Ж віх я я смак Ж се а У ко в ка в ск о. У зав ше є ОВ а в ДА Я як. З ке Же В у хх З ЖК хе ша Ем Не Ши шо се яки с ШЕ ще ока мес їй і ча КН . па у ИЙ : окох со а я КК У х їх в АБО кт зів Ех, Я нн м Що: Мох. ах з Ох хх нах Бо Я В г УЖ ТЕ о: ШО и НО о ИЙ вх мн окол СЕ УЗН КС жя аж Со они ее. хо ЗЕ ВЕ З ка виде ще М я, Ж зо КА Кен Меси В Кк і МО с но оку м -1й, Кк В о ДАЙ СК с Код Ва о я МУ чі ж ноу х зе і А В 5. бен Сх, З МО мк Дн о В К я З у В щь У дові М и В С и КК о В оч вок и З ке ой р НК с. зе хе ОК. ЗК ве ве ЕК се Ж З Я А о МВТ а и о я А ЖК КО бек З КМУ їн но Ко ВК нд МОН ши и МОЯ М ВХ де ее са 4 адх у роя ще М В В. В ВВ Яаоінмитивних МС бабу ВВІВ відвовілано ної : І вих ЕК, Оса МК ХК ВІЕННОВЕКНН НО ТмННММ УВІ ВКЗОТОМУ мука пні нь тт Ж Ж яні м М ду лужся жк т. З 'Я м лулулув ясж Ж я я т ттотій ж ж ж я я жд лу т тт ж і жах ЕЕ Ен пул Ж ходу я уклін у ох Іо водив В КРЕЗ ел ве ськОої макакн і зам еН МчИ) В А ск Я -д в и ВЕ В ЗОВ ВК о Що те Б п ОК ЗЕ є й о ШО х м ВХ ех В ОО ІКВ Я й ж 7 от ПП ко ЗО ВК КК о о ок я поса її ї ро Хе ОК, о я ОЕ Ж. ЖК МО М | т нс Оп що що : КО В КК ВО: те . ав в я ом Б 5 Ся а. хАЛеВрМ Мн С В її в Щ Ж й о. С. Зх п о В Ко Мн хо 0 ШО нання ЕТ БО я зе то и о ОО ЩЕ З ЕЗ ше | ї яегеН г - о. щи ШКО шт ВО ПОД КК ОМ 5Я Ж пошу Ж шк Б МО о Ех с г ка В те Я. ОС Я Ер 5 На : щу М З ОХ МЕ Я Не ЛК ка пе 0 чи і поши м о а А Замиш ше ко с. те ПО вн ім З. по ОМ и НН ОХ вимова Шо Мен ох а нн й по Ж о щен зежотеолмох вхо зно с с с ОО В Я ОВ З ОО М КК УВО МЕККА ЩО ВВ ЖК дк ек ОН КО КК -- по и я ОА о г о. крім ту ух НН А НУ о КК В М КК Периквох с 2 КО ня КО о. 0 о. с ме Ех ен 0. ОО свя її ії З. с. ЕЕ пан С в пн що і. Е шо Он ін шо . о. с п 5 МОЗМ рей пе її шо ЕМО Ме М С ОВ ВИКО ОО ОК КО 0 М ОО о ВЖК Кущ ЗВ У ОКА В ХУ ен Сея Ну г с о ОХ 0. пе не о сн НН ОК ОКО ши п ки ВМ У о нн ВОК ПКЕЕ СЕ о ОН ОК ко ЩА шо де . 0.ANN; mesothelinx vadenocarcinnomi MSS of the day of weaving of the profession NO! shi pana I ate Zk | ! And | ; zh: v WE NOT: dyky zhy zha heavy sh i syu -h sh i kshchig I h i shk a Her sha shen NECK : i E name : Zh EN SHE S: M VYSH ESE Uh with their NOM we WE WE "KV NN Ki a M oo u Kt yu yuka KTS EEYUyu al zh tabak sn tr Zh ya Z ta y SCHI sovno y A Za ZK chyas pdra DK a: Zhe mon ik yi V of. In --e KV, also Code AVK S OK Te A i vyh y soya Ko nyny YAN Ko UKH KK kh y: ho V y bno yo, ZO kuma in A I NI SHIA Zo". Hey Zae Zk OBO 5 taya SE SHSZ j as kozh U ha is ah Z ge ke Uk y shik that ee z e Ne U i i ЧЙ Х ою Zk Z EH Yua vk u z She o: Ks VK Ha So MN Z Z Ш more and ! ve «sh K m z NE TSO v meshe sh s oh OS e e M KY U ovche zhi b OO ge Ya nina ANA i shehe GO What n o SCHE You shk uezha Z S Bei U i EN v Capky vovna DK Sha he g. You U U dk ZY OKU mu Enea Kz I lyu ru N v A la Ž vih ia smak Ž se a U k kov ka v sk o. There is an OV in all, and I as in DA. Z ke Zhe V u xx Z ZK he sha Em Ne Shi sho se yaki s SHE still oka mes her and cha KN . pa y IY : okoh so a i KK U x ih v OR kt ziv Eh, I nn m What: Moh. ah z Ох хх нах Because I V g UZH TE o: SHO i NO o IY vh mn okol SE UZN KS zhya azh So they ee. ho ZE VE Z ka vide still M I, Z zo KA Ken Mesy V Kk i MO s no oku m -1y, Kk V o DAI SK s Code Va o i MU chi zh nou x ze i A V 5. ben Shh, Z MO mk Dn o V Kya Z u Vshch U dovi M i V S i KK o V och vok y Z ke oi r NK p. zee ok. ZK ve ve EC se Z Z I A o MVT a i o i A ZK KO bek Z KMU yin no Ko VC nd MON shi i MY M VH de ee sa 4 adh u roya still M V V. V VV Yaaoinmitivnyh MS babu VVIV ввовилано ной: I vyh EK, Osa MK ХК VIENNOVEKNN NO TmNNMM UVI VKZOTOMU muka pni n tt Z Zhjani m M du luzhsya zkh t. and horror EE En pool On the way I bowed in oh Io drove IN CHAIR el ve skOoi makakn and replaced eN MchY) V A sk I -d vy VE V ZOV VK o What te B p OK ZE is y o SHOH h m ВХ eh V OO IKV I i same 7 ot PP ko ZO VK KK o o ok i posa her i ro He OK, o i OE Zh. ZK MO M | t ns Op what what : KO V KK VO: te . av v i om B 5 Xia a. hALEVrM Mn S V her in Sh Zh and o. S. Zh p o V Ko Mn ho 0 SHO nannia ET BO I ze to i o OO SCHE Z EZ she | і ягеН g - o. шчи ШКО шт VO КК ОМ 5Я Ш шу Ш шк B MO o Eh s g ka V te J. OS I Er 5 Na : schu M Z OH ME I Ne LK ka pe 0 chi i posy m o a A Zamysh she ko with. te PO full name Z. po OM i NN OH pronunciation Sho Men oh ann y po Zho shchen zezhoteolmoh entry s s OO V I OV Z OO M KK UVO MECKA SCHO VV ZHK dk ek ON KO KK -- po y i OA o g o. except tu uh NN A NU o KK V M KK Perikwoh s 2 KO nya KO o. 0 o. s me Ekh en 0. OO svya iyi Z. p. EE Mr. S on Monday what and. What is it? What is it? at. s claim 5 MOZM rey pe her sho EMO Me M S OV VYKO OO OK KO 0 M OO o VZHK Kush ZV U OKA V HU en Seya Nu g s o OH 0. pe ne o sn NN OK OKO shi p ky VM U o nn VOK PKEE SE o ON OK ko SCHA sho where. 0. ОО. ПАН ЛК я б НО с мими ках х сх ду пи ож ТАКА АЖТАЖА Є ЖЖ ЖЖ Є ее лечеи м пе я еее ен ечечечнжтвчж тт чт ото тет евнхичя тт і пн нн нн нини "Кук СК.OO. PAN LK I b BUT s mimy kah х шх du pi ож TAKA AHTAZHA IS ЖЖ ЖЖ Ye ee lechey m pe I eee en echechechnzhtvchzh tt ot oto tet evnkhichya tt i mn nn nn nyny "Kuk SK. «Фр. 25"Fr. 25 . У щу сті НЕАЄс они ково зняв х. "чаніить з кеепотианвсплют НЕАЄ ЗНУ УНЖІИЮ. хо УТ АК ММА певоноупеє ефективне. В Креатин са пики ІЕМ УЮ ЛЕВОНСУВУ бактнчна ща є З уухухх хх Я рих ще ККУ: їх г ім тав - т; МІ МЕ ХЕ. МпРаЄ х БЕК ік 1 Кіз ква г щі ХХ МКК ІМ У НУК ЗУБІ МЕНЕ ЕЛЬ ЖЕ Т, 3: й тоже пет й мк ЗМіфЕеНия значень ему Ми У НИ ПІ Мипокмаваи МАХ що тінСВНКХ значень с єм ЕДКТе вені Мови МА мливутся с спллкювкя ов І Мах маку, АМуМе МОМ ККУ УЮ. «ко МЕС звів по. зн пи п п НН: титан ТА ВВКОЖУ, ЛКТМАНЕКТЕ клюють пла ї Н Н Її: Н ї па- Б мажу. ми Ми КЕ МОК кт ї і Й Я; Н В онко МУ КИ МЕ КМ К хх ї Н : ЗНО ще. Хна. Мет МКМ У ій ДУ рен фр Н фонем п дк «МАТІВ МЕ, Ммушх ХЕ Ех щі й Н ЕЙ рак БЕ МВТ, ВВЕ МЕМ ТІ В ХХ Ок їх 1 : : Її: і фс хорей ДАМ КЕ КК, їле Ї Я ї НИКА Н пу мафія» 15 МЕН, АНТ ЗМ КЕ ща ї х она зни зав кон зни пт - 22. ух: Біт КЕ, В КЕ мовно рови г Н о ї омтйня ЩУХ ее ХО Дух, КК ка ня пию ЧИХ В и; І й ОД НО Не де. ІЗ : й НС і фон дк м зику ен 1548 ан і : Тих Н Н га з ді км ке й , і Н ВО ННЯ вон зом зем іх. РІ хК МИТ шу жу мм ня 15КУ Я ТЕ КН пеллкжля нн хат т ок тд ех 7 й А УМО шо ОБАК, Н А цг Н В вну. їх міжх, епоху Ми ВКМ ТЕКУ КУ ї Н - Н х Х о МО ЗЛОМ ЖКК, МКМ «У Н : Х ІЗ : г ї кети тт Арт ж А І ни вино нн нн нн фУитТ СЕ ? ФЕДК нтттяннтянярннння ух, і Є І ія ті т г ЗШНЯ ї мої шо : Я же я В : НА Ех, і ж Ї Н К; ВК Не Ї і БЕУжи г жо ші хх ї ї Ку ї 1 ж ї Ше т БхЯ 1 : СК ооо ме нов Х усугмусозуєтуксхцо Ж 5 ЩЕ о нн в ВН ЕК СН т : РАНУ МКИЧНЕ х зво Ж че пе ЗК зенни Н ККУ їх ї АМКУ Не ян Кай ме З Ку «Я М ї Н . КК жк: ро Ї ох г й : ї завекниї І т. 4 - х Ні Мой С г ї ї ЕКО фАоло е ї ї їй с і В п І Її: - й їх ЖК птн ще С Ні ї їх о мо тя Її | КОЖ : их і ї ї неше ку Ка : ЯР і і ї дерті ши ї щу ї ЖИ да ни ни ни А В НИ еквваий їх ДЖ, тт няння ЖК б жниминоме вом Н ї ї 54 КВ ПН иися й кА т Я я Б ки Н Н ї Я рі т ї М і б у я кі Н у їх 5 сш ПИ ї и 1 ї Х хх СОУ ППП Її дух диВК ПО и ї її ї г 1 Пн ее ох М МН он ї Н ГРИ ПО я Й ох за з : Н : З Е них і ХДОХ Коли Н Н я ї ШЕ ЗНУ : МО і чех де Н Н ЗУ ЕМ І ї КК КК я нан нн ння Ше: НЕ Е3 З МО КЕ зв : - ОК Ку Же : 1 пюяя и х хх ЕЗ с ПО жо : ни. ж. й Те фен етянфксснн ї т РК х, Ен І дв Я по А З ІК Хі ВО еру и и ТЕ; їх Х ПК Енн нн ді ка 15 х їі ХВІЕОООМОННЯ У щ а СКУ і то ВОВК вва 2 вх М ХМ - й і ОС я Би мли Х КАХ ПАК ААКААТЯ ЄВА т Раю тю ее жесті я ее ї не пн нн спинним Моддднллюжлляня тя ккляняятюжтяня тля, ; у.. In the case of the NEAES, they were removed by x. "chaniit with keepotianvsplyut NEAE ZNU UNZHIIU. ho UT AK MMA pevonoupee effective. In Creatin sa piki IEM UYU LEVONSUVU baktnchna shcha is Z uhuhuhhh xx I ryh still KKU: ih g im tav - t; MI ME HE. MpRaE x BEK ik 1 Kiz kva g shchi XX MKK IM U NUK ZUBI MENE EL ZHE T, 3: y tozhe pet y mk ZMifEeNiya emu meanings We U NI PI Mypokmavai MAH that thinSVNKH meanings sem EDKTe veni Languages MA mlyutsya s spllkyuvkya ov I Mah maku, AMuMe MOM KKU UYU. K xx y N : ZNO more. Hna. Met MKM U yy DU ren fr N phoneme p dk "MATIV ME, Mmushh ХЕ Eh shchi y N EY rak BE MVT, VVE MEM TI V XX Ok ih 1 : : Her: and fs chorey DAM KE KK, ile Y I I y NIKA N pu mafia" 15 MEN, ANT ZM KE scha y h she know za kon know pt - 22. uh: Bit KE, W KE language ditch g N o i omtynya SHHUH ee HO Duh , КК каня пию ЧХХ В и; И и OD NO Не де. ИЗ: и НС и фондк мзику ен 1548 Ан и: Тих НН Га з дикм ке и , и N VO NNYA вон зом земи и. RI hK MYT shu zh mm nya 15KU I TE KN pellkzhlya nn hat t ok td eh 7 y A UMO sho OBAK, N A tsg N V vnu. between them, era We VKM TEKU KU i N - N x H o MO ZLOM ZHKK, MKM "U N : X IZ : g y kety tt Art z A I ny vino nn nn nn fUitT SE ? FEDK ntttyanntyanyarnnnnya uh, and E I iya ti t g ZSHNYA i moi sho: I am I V: NA Eh, and I I N K; VK Ne Y i BEUzhy g zho shi xxy y y Ku y 1 zh y She t BhYA 1: SK ooo me nov H usugmusozuetuxkhtso Х 5 ШЭ o nn v VN EK SN t: RANU MKYCHNE x zvo Х che pe ZK zenny N KKU them i AMKU Ne yan Kai me Z Ku «I M i N . КК жк: ro Y oh g y : і zaveknyi Et t. 4 - х No My S g і і ECO fAolo e і і і і і і і і і і і і і і і і і і Х Х Х Х пн ще S Ні і і і о мо ті І Her | KOZ: ih i ii ii neshe ku Ka: YA i ii ii derti shi ii schu yi ZHI da ni ni ni A V NI ekvvaiy ih Ж, tt nyannia ЖК b zhnyminome vom N і і 54 KV PN iisya і kA t I і B ky N N y Ya ri t y M i b y a ki N y y 5 ssh PI y y 1 y X xx SOU PPP Her spirit diVK PO y her y g 1 Pn ee oh M MN on y N GRY PO y Y oh for z : N : Z E them and KHOKH When N N i i SHE ZNU : MO and Czech de N N ZU EM I i KK KK i nan nn nia She: NO E3 Z MO KE zv : - OK Ku Zhe : 1 pyuaya i x xx EZ s PO zho : ny. same y Te fen etyanfkssnn y t RK x, En I dv I po A Z IK Hi VO eru y y TE; их Х PK Ann nn di ka 15 х ии ХВИЕООООМОНЯ У ша АСКУ и то VOВK vva 2 вх M ХМ - и ОС я Бы млы Х KAH PAK AAKAATYA EVA t I recommend tyu ee gestures I ee yi not pnn nn back Moddddnllyuzhllyanya tya kklyanyayatyuzhtyanya aphid, in. Чг. лв н падку вж ума 3 сне ниНх БОС УаНиниВ ЕН я й соку певним Бе ТЕ ХУ г пкт полей їх схо СИНІМ У В ОЛЕВНННс Х пику МА ВЕНИ УК юне Тит ї Й пі пуску злих ТЕТ КМЗ МВ ЕК : сх Ко У зи ока онкн анемони конче нн МКК, ТУТ піна пукХЛИЮКУ пила КЗ РО БАХК У Неренннх пуднке плели : : ї ЗМ МУ ообооююсоюй х Мод ОО ОО ДЕ ТО ОО ж М жузииюм КІ ї "Зкцік: ен НН КЛІ не 4 ККЗ Мод ОО ОК поши шо фе СЕ Й втра да я й хі п ВАНЯ кайж У Її ВІКУ ЄЕ а в С ЕН От пью ї жк ТІ ЗШ А ї ПДК Не и че У З Не НН: 2 З ни УЧ са ення ЕЕ ХОМ ЛЕ в Ве і КУ Х род мим в ен в МН НЕ я - а ЕХ її з а а шо ке о Н ро 1 їх НЕ її о не нн В шо й Тк їх, : ОО ПЕКИ т ХИТ ШУ Пощ ший, Дх толку Ж 1-1 лег У їі фі. льш ер и Б а ИН ш З НЕ г її: же ПОЖЕЖІ Жорж Ж Бог х сх я сад їх 3 І списи ий, ЗСУ ТК НО - м - Ж пря ї 1уі Рі МЕ і ОК ЕВ о ПДМ Мо дно і ш що х ЕНН, о. х 1 Н ІЗ х де А А З ШИЮ ти СВЖЕНОХ 1 т І «Ор Ук: х х В ех хх І мн вищі ее СН В ї ве З Хжею КВ : КН ще гр я в. «1 Фк Хр І. з Б щі шо ж Я ддю В ом Ме рей З Мдуву- ІБ. У шк а о нн -і т фохНКи р БУК ї У: Я М ж Жов -ї У - і щк х СТА М Кох шок и В А уп х х є. ех У ї КІ. ї я сх ї ї а а НИ ї Що за. 3 ВЕНУ г ко Ж. : МИНВе о я доповн ще «Зк ко КО ї їі «Шон ПЩУ ШТ СЯТЕ ТЕ й Ус попи ї ма хд Ал 1 хх їде ІАЕ ЗВ зх Кол 5 ПОМ о шІщі У х БОКИ ; ЕЕ ЕВ В Ех ою по ЛИ шо, : НК Гея їЕ- ТР Ф ви І Хшю шо поло х Ж х Ї ї ї МК ума ОК і лом ШО ОТ М я, ї ху щу хід НК ВНШЕА Колодки шви те п по 1 З 1 ва ЗЕ НАШ г Х ТІ Іо в пнтх Ше що д Н М і: й хх НО ри дою КК тд ПЕ ПОН ш ну ві ші В КК далкннкі нак А АКА КА ДАКА КК АКАЦАА АКАД АНКАРА АК КАКААААЖНАКАКААКАХ коООВеа В тя філ їх 4 ШІ ще ї жі РО М я п Ж ТМ вух із дж їх ; Шо тсечдх - У ши ша я ША ЗИ Я КО ж її Тими т х свуккд хх КІ НД че Ь ові М ЕКО хв го ки Уа з; Я і ПВХ Н ї ї 7 ж кт у а щі 7 м отри 13318 зас х Кодак хо 3 4 В дев ЇВ ту Я тих Ж тА іChg. lv n padku zh uma 3 sne nyNh BOS UaNyniV EN i and juice to certain Be TE HU g pkt field their scho SYNIM U V OLEVNNNs X piku MA VENI UK young Tit i Y pi launch evil TET KMZ MV EK : shh Ko U zy oka onkn anemones finished nn MKK, HERE foam pukHLYYUKU pila KZ RO BAHK U Nerennnkh pudnke plaley : : і ZM MU oobooyuyusoyuy x Mod OO OO DE TO OO zh M zhuziiyum KI y "Zkcik: en NN KLI ne 4 KKZ Mod OO OK poshi sho fe SE Y vtra da i i hi p VANYA kaij IN HER AGE EE a in S EN Ot pyu i zhk TI ZSH A i PDK Ne i che U Z Ne NN: 2 Z ni UCH sa en EE HOM LE in Ve i KU X rod mim v en v MN NE I - a EH her z a a sho ke o N ro 1 ih NE her o ne nn V sho y Tk ih, : OO PEKY t HIT SHU Posh shiy, Dh tolk Z 1-1 lay U ii fi . х ENN, o. х 1 N IZ х de A A Z SHYIU ty WEBSITES 1 t I "Or Uk: х х В ех хх I mn higher ee SN V i ve Z Xzheyu KV : KN still gr i v. "1 Fk Hr I. of B schi sho zh I ddyu V om Merey Z Mduvu- IB. U sh a o nn -i t fohNKy r B UK and U: I M zhov -y U - and shk x STA M Koch shock and VA A up x x is. eh U i KI. І І ш і і а а НІ і What for. 3 VENU g ko J.: MINVe o i additional "Zk ko KO i ii "Shon PSHHU SHT SYETE TE and Us popy i ma xd Al 1 xx goes IAE ZV zhh Col 5 POM o siSchi U x SIDES; EE EV V Eh oyu po LY sho, : NK Gaya iETR F vy I Hshyu sho polo x Ж х Й и и МК uma OK i lom ШО OT M я, і ху шчу ход NK ВНШЕА Blocks of sewing te p by 1 Z 4 ШІ still eats ROM M ia p Ж TM vuh iz j ih ; Sho tsechdh - U shi sha ya SHA ZY I KO zh her Tymy t h svukkd xx KI ND che b ovi M ECO hv go ky Ua z; I and PVC N y y 7 z kt u a schi 7 m otry 13318 zas x Kodak ho 3 4 V dev YIV tu I tih Z tA i ХВ. АК ще СК ИН ЗУ За кажи сеї ДИ: ак -- ше с не ЗЕ ШНМ Бенуа - ЗМК Я ЕЗЩЧ і о дк Х пд нти нОщ - в оойудюоаювох ме веХ вне ши шення перехо протеркоесуюннно Прачбитнеретмрутттря ту Й в х - со 3 Я м - Кт 5 о « ках: її І У я х сеКуУж ки суку фкеохя Знвиї БАК сЯ УЖ репо тіх ій ку зи а і філо бу Ов есметауниВиИ ЗТ роль НЕК ; й «ку вже З скжжих ЕКО Кз ЧО ЕН пгт і ототтоечтто рекет тет леж ж лен вжи Н ще пек ан пе пт На на а В а з хі лу ха У Фі «жкMIN. АК иск ИНЗУ Za tell this DY: ak -- ше s ne ЗЭ ШНМ Benois - ЗМК Я ЕЖШЧЧ and o dk X pd nty nЩch - in ооюдюоаювох ме веХ ші ші шехо протеркоесуюнно Прачбітнеретмрутттря ту в х - со 3 I m - Kt 5 o « kah: her I U I x seKUzh ki suku fkeohya Znvyi BAK sYA UZH repo tih iy kuzy a and filo bu OvesmetownyViY ZT role NEK ; y "ku already Z skzhzhih ECO Kz CHO EN pgt i otottoechtto racket tet lezh zh len use N che pek an pe pt Na na a V a z hi lu ha U Fi "zhk ІОТВЕ ЕВ и ви КОЖ ОК сохжккеьхтиєх пат фею Фіхте ІМ ХОМ ЦІ Мем ВВЕ щІЧНИКИА ВТ Уа мА декинетруєЄ екв нють Вмоде вуж ранкиааніа вечники іЕоДМИ В хт ато КД Е М БНУ м тактоль ї Не СІ мене ММ. МЕРЕ НЯ й суч. Уа свт кт ук Бізнесеннх значень муемуУ ВУХВКНИ с зно нн пен понно мпн о ввонон ИН ННН УМО ух І ї ї І КИ Ка пдасиике чно Шк ЗЕ ЗВ ННЯ Я МЕ ТКти з уник пн нин ня пинсвннанне : в ка ж ЩЕ : | | НН ; о, як її Я ! ж 1 ТЕН ки А ЗСУ: в зни нн пн нн и НА НН КТ о СО ВО я : ! Й З АЯЕ Се 55 ! ї їж ОРЕ и ще ЕІ Н : ка Б З А ЕК поко КИ 3 ; : 3 БК ВАШЕ що МК Кі а зни и нин а КД Ко Мо ОВ : : т кій З хі Ох Дом КОКО ЕЕ : і Х ж і : в оо їі і В с-ЯЕ ік ВОМ ОХ Со е кни ними пи Хе писк Я ШЕ ще Во Ж їх ї : Е кі хх ТЕ Б ГЗН ох З 1 : ї І гОВ дя ТРЕК т І в х о ан РУ 51 Н ї ї Кос сі 14 З х ППП х БУС пн нн нн ни и пн В в ММ С ЕК М що НЕЮ т шини я. в : кї і: СНИ в ї рай 15 Ї ї Х х я Е і : ЖД сн нн ке з ШЕ ї 0 кг х ЗК гЗк як нн пон о сн ння З По що 00ОКЕЖУТК : М ШУ виш їх о З її : Й й ев БЕ; 45; у, 0 м КІ : зі г щи ї Ї ЕЕ х МО В в ж у я панни зима Ем зпосрі у ам енннннн з Е че х п КО о СН де ВАЖКЕ ї СС Ко НЕ х х КК КВ що 35 ї с В Кі 155 А х ПППIOTVE EV and you KOHZ OK sohzhkkkekhtyeh pat feyu Fichte IM HOM TSI Mem VVE shCHCHNYKIA VT Ua mA dekinetrueYe equ nuy Vmode uzh rankyaania evchniki iEoDMY V ht ato KD E M BNU m taktol y Ne SI me MM. MERE NYA and SUCH. Ua svt kt uk Business meanings muemuU VUHVKNY s zno nn pen ponno mpn o vvonon IN NNN UMO uh I i ii I KI Ka pdasiike chno Shk ZE ZV NNYA I ME TKty z unik pn nin nya pinsvnnanne : v ka zh SHE : | | NN; Oh, how I am! same 1 TEN ki A ZSU: in zni nn nn nn i NA NN KT o SO VO i : ! Y Z AYE Se 55 ! eat ORE and more EI N: ka B Z A EK poko KY 3; : 3. I SHE still Vo Z ih y : E ki xx TE B GZN oh Z 1 : і I gov dya TREK t I v h o an RU 51 N і і Kos si 14 Z х PPP х BUS mon nn nn ny i mn V v MM S EK M what НЕУ t tires i. in : ki i: SNY v i rai 15 Y i X x i E i : ЖD sleep nn ke z SHE і 0 kg х ZK gZk as nn pon o sn nya Z Why 00OKEZHUTK : M SHU vys them o Z her : Y and ev BE; 45; y, 0 m KI: thickest Y EE x MO V v w h y maiden winter Em zposri u am ennnnnn z Eche x p KO o SN de HEAVY i SS Ko NE x x KK KV that 35 i s V Ki 155 A x PPP 3 7. У. х ї х ПИПИШ и хх 31 : й КУ Гея о: 1157 М у хо Х ПН в З де ї С о нн и Кк КО й МЕНЯ З КІН ж ЗК з ин вино Ми нн о нн шт у а иа ООН Ко ї Я ЗНУ б : й І Я Може че ї ЕК: Гнупи пу хо. тих ті То. За Ї одаддлооллллто етос вий ХУ НДУ жк Її финня мох и тм : ще о ЕН щи У Ж : яті т: я Я 7 х 1 МЕ шоком 53 ОИ св -Ке Ко ї т Ж С нн и НО ща нн ни нн нн п В В й дея хро ЩЕ: диво полей : вх ТО Дн р меже, диктує 15 ки ї у ах У п й дрож схе ху лк ій ка ЗМ ; айви М пеня В ВЕНУ, Ви ЧО ВЕ Ко нн с зи нини Но: ниви нин деки дж юю М о Н їх : з сажі в и В МНВК, ДНІ ТЕКТИ ІК ЕЯ Дня и ду КК : ті З ДІ. 15 усві жі кт ЕД ож і нИО00олежв ей я ЗО Мекки: ЗНАТІ КЕ и в т он зн п ані і п і " поМАН ще не МНи он ен и НН Ії сплю и ХК МИТКЖ, ДНК УЖЕ Ю: їх о дк її СКУ - У що Моугах ук а лм. ї ПН НН сей КЕ я Х зу, АЗС й у су : У ДАН пах ДЕК: Ще її КУ ща ЕВ я ЯМ В НІ кизкх АНЦКЖЕН УКВ Е3У 3 «М «М пт У х хх ЕКО 2 меті З меж, МЕЖ ДН г : х кл УМ вх миифен еф: Х вижхт, возахвене анна му степу нт дуть тент дуть тенту тить й йно нн нн пон нн с кдняждкллдяккюв? сук КЕ3 7. U. h i x PYPISH i xx 31 : y KU Gaia o: 1157 M u ho X PN v Z de i S o nn i Kk KO i MENY Z KIN z ZK z in wine My nn o nn sht u a и я UN К и І ЗНУ б : и І І Маже че и EK: Stupid pu ho. those those That. For Я odaddloollllto ethos vyy HU NDU zhk Her fine moss and tm : more about EN shchi U Zh : yati t: I I 7 x 1 ME by shock 53 OI sv -Ke Ko i t J S nn i NO scha nn ny nn nn p В В и дея хро ШЕ: the wonder of the fields: вх TO Dn r meze, dictates 15 ki і u ah U p y drosh sche hulk iy ka ZM ; quince M penya IN VENU, YOU CH VE Co nn s zi niny But: nivy nin deky yuyu M o N them: with soot in i IN MNVK, DAYS TEXTS IC EYA Day i du KK : those Z DI. 15 fresh kt ED ozh i nIO00olezhv ey i ZO Mecca: KNOW KE i v ton zn p ani i p i " poMAN not yet Mny on en i NN Ii splu i HC MYTKZH, DNA ALREADY YU: their o dk her SKU - What is Mougah uk a lm. мети З меж, МЖЖ ДН г : х кл UM вх миифен еф: Х выжхт, vozakhvene anna mu stepun nt blow tent blow tentu tyt y yno nn nn mon nn s kdnyazhdklldyakkyuv? suk KE ФГ. БЛУКАВ дехими тує ск уминість х МО ВИНУ ІН ЕЕ МИКУ СІК СВО КО КОРИ нки ях кім кали кари нОома; КА АКЕКИ ІЛЕГЕНЯ УЗ ТЮБИК ВНУ кі й ми ЕХ «М та і: ЖЕД її Її раду пе КЗ - Н НН ї їх З с Ї ИН НЕ НУ донні нок с оодооооосорвовд од Код ол овдодвввов Її ї ї х Зм : З М и Як щі ї М іа с а ОН ож МА і ! шо Фе й Ї х ке х ХХ дян 1 Е Ма кН ВУ ВК сяк В - даеоутих ке д.- Не вяу х жо и о «К І Калина Іо и я 1 шк ВАВ ЗОВ Е : ши и ах в НН жи х з З БЖ шу ух А В І; МАМFG. BLUKAV dekhymy tue sk uminsity x MO VINU IN EE MYKU SIK SVO KO KO KORY nki yah kim kali kari nOoma; KA AKEKY ILEGENYA UZ TYUBYK VNU ki i mi ЭХ «M ta i: ЖED her Her radu pe KZ - N NN i ih Z s И IN NE NU donni nok s oodooooosorvovd od Code ol ovdodvvvov Her her her x Zm : Z M i How schi y M ia s a ON oz MA i ! sho Fe y Y kh ke x ХХ дян 1 E Ma kN VU VK syak V - daeoutih ke d.- Ne vyau h zhó i o "K I Kalina Io i i 1 shk VAV ZOV E : shi i ah v NN zhi x z With BZ shu uh A V I; MAM Б. ВЕК Н ї ве Е Я ие Ж ЕФНрОдЬ і й Я кож кс З КОКЕя і; ой ї ї ох со 1 : ВО КМ ОК Й х КЕ: х, ЩО и в с | Еш пн НИ та У х ї Жива хі Її й ТлхІуММ Ма М : ї У х В т и я ЖК нку З в Б Е бах: ох ХА и ОК ця КК Х зу І КИ м хх ї ЗЗДЕ Дн ВЕ ШИ еС фочяччння опонент Васко п Б и вон ї і Ко : й - і 5, ке М нос й хв 1. сек ех. от м Му Я Маша Я нов г і х и КЗ х КО Ле Я ОКУ пр іч пе : див хе с Ж с ЖЕ о Ж ща з х хї в ах се х оон вне ш Аг х й р х х її ВН ВН їй і з с ТОКІО ЗТ ИИИИИВ о і ВЗ НКИ Як К 1 п я і Ж ву Ж я 13 і Ви Бо ї ква геї хх зх її т с ро Мк «с ши х Ж і її що фе ОО и СЯ сх ті ях 5 М ев і ія 7 грі т її ВЕБ МОН не : ке са се Ка го укедх її х: КОПНИПНИИК ВВК З В о » ОБЖ Гі гої ВО НК У ех Кай 7 2 ї У о ооо ЖЖ М : они й ПК му х 7 і ПО ВО ох їх ще ро їх ше ПО БАННя Е і 7 і ІОН ши нм ние мн 351, ЩО ПО ОЦЕ - | ї Х й і ВЕБЕОООНОНН НН ОН і не ри о ДН ПО вв й птутттуЕтТретутту пттуттуттрутриутттуттут у Сеня є ті жест тот «жк х х ї Ь; т ? Ь,; їх да - -к до хт За ха Зк да й З БО 5 5 ЗА ше о ох ОО Б ОВ З вка х, сег. СК кулон Кентваль є МВ хаосом Ах І х З с фен нн нн на нн нн нн нн ин Кн нн нн нн У че ЗB. CENTURY OF THE CENTURY ой и и ох со 1 : VO KM OK Y х KE: х, ЧО и в s | Esh pn NI and U h yi Zhiva hi Her and TlhIuMM Ma M : і U kh W t і ЖЧ нку Z v B E bah: oh Х Х Х OK this KK Х zu I KI m xx і ZZDE Dn VE ШХ еС fochachchnnya opponent Vasko p B i von i i Ko : i - i 5, ke M nos i hv 1. sec ek. ot m Mu I Masha I nov g i h i KZ x KO Le I OKU pr pe: see he s Ж s JHE o Ж shcha z х хи в ах se h оon vne ш Аг х й рх х her ВН ВН her i z s TOKYO ZT IIIIIIIV o i VZ NKY How K 1 p i i Zh vu Zh i 13 and You Bo i kva gei xx zhh her ts ro Mk «s shi x Z i her that fe OO i SYA sh ti yah 5 Meviya 7 gri t her WEB MON ne : ke sa se Ka go ukedh her x: KOPNIPNIIK VVK Z V o » OBZH Gi goi VO NK U eh Kai 7 2 і U o o o o ЖЖ M : they і PC mu х 7 and PO VO oh them still ro them she PO BANNya E and 7 and ION shi nm nie mn 351 WHAT ABOUT THIS - | ї Х й і ВЕБЕОООНОНН НН ОН і не ри о ДН ПО вв й птутттуЕтТретутту пттуттуттрутриутттуттут у Сеня є ті жест тот «жк х х ї Ь; t? b,; their yes - -k to kht Za ha Zk da y Z BO 5 5 ZA she o oh OO B OV Z vka x, seg. SK pendant Kentval is MV chaos Ah I x Z s fen nn nn na nn nn nn nn yn Kn nn nn nn U che Z Янг. 55Yang. 55 Коективність ПОВ УЄМ МАК подібна ВОЗА Не ММА ВАВ ОМ М люлиние що й , к СЯ я щем б сек ї ЩО НЕгЖТКеННЯ вант й па че : ВИ ще З з ЧЕ і ЕМ у КН м А У в : се сх с за ГАММА у Я ак ши око Мозненнией від що 00 в шиє ши м мен чн й АТБ юконтроль о мекр к я Я Ти й, Я заняоів пд: Я з ТО т ЕК я : і, Я г ї : Ї А Ю ї ї х а ! 3 т. їм ЩО ВІ ши шке З чо 00 ВО г у й що Як в ї ха з Ко Н я СТ Ея Бе Ї й х і к ; ДІ Я й г : Ке ї | Її й ши ши и я ! а, т5- НК Ті. че г ще і СМАК г й і они: пон пива зн кв Я ік Ми; о ча з К о 5 ЩО у ях М ж люк жк Кв Я ТУ обро енНнй хх День МЖК скоба ка й : ; же м ЕК колекція: ак ВАВ МСМ яванської маяка чкк Й : ше о , : кт» Тк Я Ж судету оку ке Жоодяяно Ко | Негатваний ем; КЕ о : ек КА кеВ ть хх - слух Ж. зе дв яд ій КОНТВОлЛЬь хе Мг/Кт т с. ах Кк Й ке ЙК тя ех ТЕ ТЕ до кУкку у. САНКИ НИ сх уж ще ш БОй» і ! ЩО Позитивний 20 контрель - й їх х я Ме я В ! «ДИ З мит ТХ !The co-activity of POV UYEM MAK is similar to VOZA Ne MMA VAV OM M lyulinie what and, to SYA i shchem b sec y WHAT NEGZHTKeNYA vant and pache: YOU still Z z CHE and EM in KN m A U v v: se sh s for GAMMA in I ak shi oko Moznennyei od tkh 00 v shiye shi m men chn y ATB yukontrol o mekr k ya I You y, I zanyaoiv pd: I z TO t EK i : i, I g yi : І A І і і х a ! 3 t. to them WHAT WE SHISHE WITH CHO 00 VO g y and what How vy ha z Ko N ya ST Eya Be Y y h i k ; DI I and r : Ke and | Her and shi shi and me! a, t5- NK Ti. che g still and TASTE g y and they: pon beer zn kv I ik My; o cha z K o 5 SHO u yah M zh luk zhk Kv I TU obro enNny xx Day of MZHK bracket ka y : ; same m EK collection: ak VAV MSM of the Javanese lighthouse chkk Y : she o , : kt» Tk I Ж sudetu oku ke Zhoodyaiano Ko | Uncooked em; KE o : ek KA keV ty xx - hearing Zh. ze dv yad iy KONTVOL'l he Mg/Kt t s. ah Kk Y ke YK tya eh TE TE to kUkku u. SLEDGES, we're still fighting" and! WHAT Positive 20 control - and their x I Me I V ! "YES From the customs of TH! ях. х З ї ку, . ші во тяоде то у Е и ци Ше 5 | І, г чеММАЄ: Ух й у ща ЗЕ оюх ЗК; її ія ЖЕ вової р Ку щ- ! я іні І "ЖЕ чо я х й К- З : В "я Ж. ат і «ЗВ: Кк ду ; ж на: з рен СЕНЕКА ши шия | вв ко а и ВюАц» м ЗХ щ ї З |З Й КОЖ о шу ою Мт: ни - г ще скжк Ку ; ЗИ морях вх уюю рр я хх | зе ї 0 юю и ЕН що ВО ЇУ оброблення: В День РК колекцн дав ІЗ нн НО НО ВН КН НН ПЛ В ОО ОО ОО Балyah х Z и ку, . shi vo tyode to u E i tsi She 5 | I, g cheMMAE: Uh y u shcha ZE oyuh ZK; her iya of the same river Ku sh- ! i ini I "ZHE cho i x y K- Z : V "i Zh. at i "ZV: Kk du ; same on: z ren SENECA shi shiya | вв коа и ВюАц» m ЗХ щ и Z |Z Й КОЖ о шу ой Mt: ny - g still skzhk Ku ; ZY seas vh uyuyu rr i xx | ze i 0 yuyu i EN that IN IU processing: On the Day of RK collection gave IZ nn NO NO VN KN NN PL V OO OO OO Bal Чи.Or. дя НО собу З КК до по КІ фут ка уза си Борективність ВО УМ МАК подібна ВОЗА ба ММА Я Жди фуру оку ких Кк ту ох у учи ух КК и ВИН хе Модель ксевотванесплантяеа мезотелієми ОО зх ЗУ г. с сс че х х Ся ще щі ОООЮ Негативний 5 р о им я пк я хм хз Кок ся кових чи контроль мо, ТЬО у е і НУЄ тки, 7 ІЗ х Б я - ЗЯЖВО 0 Мегренений й і? с шк В мг ноя сл ще Ка о са З Ши ТЕ З щ КОН АЛьЬ ше / у ве З | : ї адап У є КОМ но Її У «У | Я В ще І З Ж одно, ЕС Ше ши ШИ о ЩО Наиювновах - ТЕН; Пе я : и й вик як х х? Її ях ау В ж соду ха Ех дк т М її Ле Що пАНОВЕ хх Ка ше ї ях Е я їх я х Во о НИК. и ще : гай їх | Я у я ї я ще ей; я і К. ТО вх хе іс З ет» та ге сту хівІх те НК оо ув її й нт я ші. й Ша ху зав і й НН; ши нн «В гу й і й ся Де» пк и зи зи зн пишними зи, вим си й чо вав о я пи: й День ре й а в Їх вк ок ПИ НВ Модель кеенотранеплантата яєчника ОС лі І Негативний -е жа Мода ЇЇ вежею, ВК зей Ж я ВУ ан що ЮХ каІНнтиОопьіІв МІК З 3 5 Й Ви х ск Я Н . й Я х їж і р Її Нановнхвач | щі і З й їі ї- ще ; : Є Х І жк Я 5 сб Ж дя І; д Мі кн КД Ж КООю я ; й- ВаБАИВУВВ УСЕ хх Е КІ з жо "Я х ? з є ! Ві нен У МЕ Що Ж й Е ї з и І Із й АлАТ хе ЯН» ж я ; й м ЖЮ ' А ; і. і маку З ЕЕ З Її ЕІ ке Об є и й шо ше ще 1 Я Н Ко ю Н го Я (у і хх їй 14 мй х я Ге я і ОЗ ї х І г а щк ово Кй її її шко М ОО 7 І Що 00 влажУюЕ А їі Ве я со Ки х Й а як З з Я й Й й і М жене о то а Кт а їж : : день ве А й й и п аDya NO sobu Z KK to po KI foot ka uzo sy Borectivity VO UM MAC similar VOZA ba MMA I Wait furu oku kih Kk tu oh u uchi uh KK i VYN he Model ksevotvanesplantyaea mesotheliema OO zh ZU g. s ss che x x Sya more schi OOOU Negative 5 r o im i pk i hm khz Kok sya kovy or control mo, TYO u e i NUYE tki, 7 ИЗ x B i - ZYAZHVO 0 Megreneny y i? s shk V mg noya sl sce Ka o sa Z Shi TE Z sh КОН AL ше / у ve Z | : і adap U is KOM but Her U "U | I'm still the same with the same thing, ES She shi SHY about WHAT Naiyuvnovah - TEN; Pe I: y y yuk how x x? Her yah au V zh sodu ha Eh dk t M her Le What PANOVE xx Ka she yi yah E i ih i x Vo o NIC. and also: a grove of them I, I, I, I, I still, hey; I and K. TO vh he is Z et" ta gestu hivIh te NK oo uv her and nt I shi. and Sha hu zav and NN; shin nn "In hu y y sia De" pk y zy zy zn magnificent zy, vim sy and cho vav o i py: y Day re y a in Their vk ok PY NV Model of keenotraneplantata of the ovary OS li I Negative -e zha Fashion HER tower, VK zey Zh I VU an that YUH kaINntiOopiiV MIK Z 3 5 Y Vy x sk I N . y I h eat and r Her Nanovnvach | shchi i Z i ii i- still; : E X I zhk I 5 sb Z dya I; d Mi kn KD Zh KOOyu i ; y- VaBAIVUVV ALL xx E KI z zho "I x ? z is ! Vi nen U ME What Z y E i z i I Iz y AlAT he YAN" j i ; y m ZYU ' A ; i. i maku Z EE Z Her EI ke Ob e i s h o se 1 I N Ko yu N go I (in i xx her 14 my x i Ge i i OZ i x I h a shk ovo Ky her her shko M OO 7 I What 00 lazhUyuE A ii Ve i so Ky x Y a how Z z I y Y y i M wife o that a Kt a izh : : day ve A y y i p a Фіг.Fig. МІСТІ утворює комплекс із мезотеліном, і два - о витЕтенах клиннних ліній а ка Би ; : реа х "ЧЕ З є жо: МОСТЬ і мунОпоецинітує разом із Мі5ів в клітининх пзатах ОС гі й ще в КК. ж п хх ке х и шен ь ж ЗШ НС з сх ЗИ 5 о в я 8 ХХ рю дв Щ Мавій: Мій шк ШИ МОоси: мОосів Ії: 2007 ди Ковдншоновині середови шеменесють спільну імуновренннтацно Мізій їх МОТО тільки із ЛІВІЙ, яю : експресуть збила білки ФігMISTI forms a complex with mesothelin, and two - about the vitEten of wedge lines and ka By; : rea x "CHE Z is zho: MOST and munOpoecinites together with Mi5s in cell pzats of OS gi and also in CC. My shk SHY MOosi: mOosiv Ii: 2007 di Kovdnshonovyny mediums shemenesyut joint immunorennntatsno Miziy their MOTO only from LIVIY, yayu: express knocked down proteins Fig
UAA201309049A 2010-12-20 2011-12-19 ANTIBODY Binding Mesothelin and Immunoconjugate UA113838C2 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201061459962P 2010-12-20 2010-12-20
PCT/US2011/065895 WO2012087962A2 (en) 2010-12-20 2011-12-19 Anti-mesothelin antibodies and immunoconjugates

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA113838C2 true UA113838C2 (en) 2017-03-27

Family

ID=45498116

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201309049A UA113838C2 (en) 2010-12-20 2011-12-19 ANTIBODY Binding Mesothelin and Immunoconjugate
UAA201612949A UA115641C2 (en) 2010-12-20 2011-12-19 DETERMINED ANTIBODY Binds Mesothelin and Immunoconjugate Containing It

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201612949A UA115641C2 (en) 2010-12-20 2011-12-19 DETERMINED ANTIBODY Binds Mesothelin and Immunoconjugate Containing It

Country Status (25)

Country Link
US (3) US8911732B2 (en)
EP (2) EP3296321B1 (en)
JP (2) JP6253987B2 (en)
KR (1) KR20140014116A (en)
CN (1) CN107098972A (en)
AR (1) AR084356A1 (en)
AU (1) AU2011349443B2 (en)
BR (1) BR112013014527A2 (en)
CA (1) CA2819269A1 (en)
CL (2) CL2013001776A1 (en)
CO (1) CO6720984A2 (en)
CR (1) CR20130335A (en)
EA (2) EA028744B1 (en)
EC (1) ECSP13012784A (en)
IL (1) IL250764A0 (en)
MA (1) MA34881B1 (en)
MX (1) MX345519B (en)
NZ (1) NZ610976A (en)
PE (2) PE20141114A1 (en)
PH (1) PH12018500046A1 (en)
SG (2) SG10201510518TA (en)
TW (2) TWI589589B (en)
UA (2) UA113838C2 (en)
WO (1) WO2012087962A2 (en)
ZA (2) ZA201303765B (en)

Families Citing this family (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA028744B1 (en) 2010-12-20 2017-12-29 Дженентек, Инк. Anti-mesothelin antibodies and immunoconjugates
US20130066055A1 (en) * 2011-04-21 2013-03-14 Bayer Intellectual Property Gmbh New binder-drug conjugates (adcs) and use thereof
WO2014004549A2 (en) 2012-06-27 2014-01-03 Amgen Inc. Anti-mesothelin binding proteins
WO2015032695A1 (en) * 2013-09-09 2015-03-12 Ventana Medical Systems, Inc. Scoring method for mesothelin protein expression
US10640569B2 (en) * 2013-12-19 2020-05-05 Novartis Ag Human mesothelin chimeric antigen receptors and uses thereof
AU2015269219B2 (en) * 2014-06-06 2020-12-24 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Mesothelin-targeted chimeric antigen receptors and uses thereof
CN107429230B (en) 2015-01-26 2021-11-12 菲特治疗公司 Methods and compositions for inducing hematopoietic cell differentiation
EP3466967A1 (en) 2015-05-18 2019-04-10 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins
CN106338423B (en) 2015-07-10 2020-07-14 三斯坎公司 Spatial multiplexing of histological staining
TWI829617B (en) 2015-07-31 2024-01-21 德商安美基研究（慕尼黑）公司 Antibody constructs for flt3 and cd3
TWI796283B (en) 2015-07-31 2023-03-21 德商安美基研究（慕尼黑）公司 Antibody constructs for msln and cd3
CA2996060A1 (en) * 2015-08-21 2017-03-02 Carsgen Therapeutics, Ltd Fully human anti-mesothelin antibodies and immune effector cells targeting mesothelin
KR101782487B1 (en) * 2015-09-24 2017-09-27 재단법인 목암생명과학연구소 Novel Antibody Binding to Mesothelin(MSLN), and Composition Comprising the Same
CN108026179A (en) 2015-10-02 2018-05-11 豪夫迈·罗氏有限公司 With reference to mesothelin and the bispecific T cell activation antigen binding molecules of CD3
EA039859B1 (en) 2016-02-03 2022-03-21 Эмджен Рисерч (Мюник) Гмбх Bispecific antibody constructs binding egfrviii and cd3
GB201612520D0 (en) 2016-07-19 2016-08-31 F-Star Beta Ltd Binding molecules
JP7109789B2 (en) 2016-08-02 2022-08-01 ティーシーアール２ セラピューティクス インク． Compositions and methods for TCR reprogramming using fusion proteins
WO2018048975A1 (en) 2016-09-09 2018-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Use of an anti-pd-1 antibody in combination with an anti-mesothelin antibody in cancer treatment
DK3445787T3 (en) 2016-10-07 2021-03-01 Tcr2 Therapeutics Inc COMPOSITIONS AND PROCEDURES FOR PROGRAMMING T-CELL RECEPTORS USING FUSION PROTEINS
JP7291396B2 (en) 2016-11-22 2023-06-15 ティーシーアール２ セラピューティクス インク． Compositions and methods for TCR reprogramming using fusion proteins
WO2018102682A1 (en) 2016-12-01 2018-06-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Radiolabeled anti-pd-l1 antibodies for immuno-pet imaging
CN110650974B (en) 2017-02-10 2024-04-19 瑞泽恩制药公司 Radiolabeled anti-LAG 3 antibodies for immune-PET imaging
WO2018232020A1 (en) 2017-06-13 2018-12-20 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins
AU2018307744A1 (en) 2017-07-24 2020-02-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-CD8 antibodies and uses thereof
CA3086098A1 (en) 2017-12-19 2019-06-27 F-Star Beta Limited Fc binding fragments comprising a pd-l1 antigen-binding site
CN110507824A (en) * 2018-05-21 2019-11-29 荣昌生物制药（烟台）有限公司 A kind of Anti-mesothelin antibodies and its antibody drug conjugate
WO2019246003A1 (en) * 2018-06-18 2019-12-26 Anwita Biosciences, Inc. Anti-mesothelin constructs and uses thereof
GB201811415D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd Anti-Mesothelin Anti bodies
US11911484B2 (en) 2018-08-02 2024-02-27 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy
CA3108282A1 (en) 2018-08-02 2020-02-06 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
BR112021003416A2 (en) 2018-08-30 2021-05-18 TCR2 Therapeutics Inc. compositions and methods for reprogramming tcr using fusion proteins
JP2022536855A (en) * 2019-06-19 2022-08-19 シルバーバック セラピューティックス インコーポレイテッド Anti-mesothelin antibodies and their immunoconjugates
UY38995A (en) 2019-12-20 2021-06-30 Amgen Inc MESOTHELIN TARGETING CD40 AGONIST MULTI-SPECIFIC ANTIBODY CONSTRUCTS FOR THE TREATMENT OF SOLID TUMORS
EP4175650A1 (en) * 2020-07-06 2023-05-10 Kiromic BioPharma, Inc. Mesothelin isoform binding molecules and chimeric pd1 receptor molecules, cells containing the same and uses thereof
JP2023535078A (en) * 2020-07-23 2023-08-15 ダイン セラピューティクス，インコーポレーテッド Muscle-targeted complexes and their use for treating myotonic dystrophy
WO2022082068A1 (en) * 2020-10-18 2022-04-21 Ardeagen Corporation Anti-msln binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
CN113150128B (en) * 2020-11-24 2023-01-31 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） Monoclonal antibody of influenza virus NP protein and application thereof
US11771776B2 (en) 2021-07-09 2023-10-03 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
CA3226367A1 (en) * 2021-07-09 2023-01-12 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
IL309937A (en) * 2021-07-09 2024-03-01 Dyne Therapeutics Inc Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
US11633498B2 (en) 2021-07-09 2023-04-25 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy
WO2023006391A1 (en) 2021-07-30 2023-02-02 Ludwig-Maximilians-Universität München Anti-cd47 antibodies and use thereof
CN114426582B (en) * 2022-01-07 2022-11-25 陕西脉元生物科技有限公司 Nerve specific enolase monoclonal antibody and preparation method and application thereof
US11931421B2 (en) 2022-04-15 2024-03-19 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and formulations for treating myotonic dystrophy

Family Cites Families (157)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
AU600575B2 (en) 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
KR0184860B1 (en) 1988-11-11 1999-04-01 메디칼 리써어치 카운실 Single domain ligands receptors comprising said ligands methods for their production and use of said ligands
DE3920358A1 (en) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag BISPECIFIC AND OLIGO-SPECIFIC, MONO- AND OLIGOVALENT ANTI-BODY CONSTRUCTS, THEIR PRODUCTION AND USE
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ATE171207T1 (en) 1990-10-12 1998-10-15 Us Health MONOCLONAL ANTIBODIES
ATE164395T1 (en) 1990-12-03 1998-04-15 Genentech Inc METHOD FOR ENRICHMENT OF PROTEIN VARIANTS WITH MODIFIED BINDING PROPERTIES
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
LU91067I2 (en) 1991-06-14 2004-04-02 Genentech Inc Trastuzumab and its variants and immunochemical derivatives including immotoxins
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
EP0604580A1 (en) 1991-09-19 1994-07-06 Genentech, Inc. EXPRESSION IN E. COLI OF ANTIBODY FRAGMENTS HAVING AT LEAST A CYSTEINE PRESENT AS A FREE THIOL, USE FOR THE PRODUCTION OF BIFUNCTIONAL F(ab') 2? ANTIBODIES
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
DE69333807T2 (en) 1992-02-06 2006-02-02 Chiron Corp., Emeryville MARKERS FOR CANCER AND BIOSYNTHETIC BINDEPROTEIN THEREFOR
IL107366A (en) 1992-10-23 2003-03-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Genes coding for megakaryocyte potentiator
WO1994011026A2 (en) 1992-11-13 1994-05-26 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human b lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of b cell lymphoma
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
EP0714409A1 (en) 1993-06-16 1996-06-05 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US7375183B1 (en) 1996-01-05 2008-05-20 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Mesothelin, immunogenic peptides derived therefrom, and compositions comprising mesothelin, or immunogenic peptides thereof
ATE254931T1 (en) 1996-01-05 2003-12-15 Us Gov Health & Human Serv MESOTHELIN ANTIGEN, METHOD AND TEST KIT FOR TARGETING
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
DE69830315T2 (en) 1997-06-24 2006-02-02 Genentech Inc., San Francisco GALACTOSYLATED GLYCOPROTEIN CONTAINING COMPOSITIONS AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
EP1028751B1 (en) 1997-10-31 2008-12-31 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
US6809184B1 (en) 1997-12-01 2004-10-26 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Antibodies, including FV molecules, and immunoconjugates having high binding affinity for mesothelin and methods for their use
ES2255194T3 (en) 1997-12-01 2006-06-16 The Government Of The Usa, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services ANTIBODIES, WHICH INCLUDE PV MOLECULES, AND IMMUNOCONJUGADOS THAT PRESENT A RAISED LINK AFFINITY FOR MESOTHELINE AND METHODS FOR USE.
DK1034298T3 (en) 1997-12-05 2012-01-30 Scripps Research Inst Humanization of murine antibody
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
IL138608A0 (en) 1998-04-02 2001-10-31 Genentech Inc Antibody variants and fragments thereof
ES2340112T3 (en) 1998-04-20 2010-05-28 Glycart Biotechnology Ag ANTIBODY GLICOSILATION ENGINEERING FOR THE IMPROVEMENT OF DEPENDENT CELLULAR CYTOTOXICITY OF ANTIBODIES.
WO2000042072A2 (en) 1999-01-15 2000-07-20 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US7745159B2 (en) 1999-02-26 2010-06-29 Nathalie B Scholler Methods and compositions for diagnosing carcinomas
US6770445B1 (en) 1999-02-26 2004-08-03 Pacific Northwest Research Institute Methods and compositions for diagnosing carcinomas
EP1176195B1 (en) 1999-04-09 2013-05-22 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
MXPA01011950A (en) 1999-05-27 2002-05-06 Gov Health & Human Serv Immunoconjugates having high binding affinity.
US20110104675A1 (en) 1999-08-09 2011-05-05 Pacific Northwest Research Institute Methods and Compositions for Diagnosing Carcinomas
KR100797667B1 (en) 1999-10-04 2008-01-23 메디카고 인코포레이티드 Method for regulating transcription of foreign genes
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
JP4668498B2 (en) 1999-10-19 2011-04-13 協和発酵キリン株式会社 Method for producing polypeptide
WO2001044463A1 (en) 1999-12-15 2001-06-21 Genentech, Inc. Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes
DK1242438T3 (en) 1999-12-29 2007-02-12 Immunogen Inc Cytotoxic agents comprising modified doxorubicins and daunorubicins and their therapeutic use
LT2857516T (en) 2000-04-11 2017-09-11 Genentech, Inc. Multivalent antibodies and uses therefor
US20020132237A1 (en) 2000-05-26 2002-09-19 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
PL218428B1 (en) 2000-10-06 2014-12-31 Kyowa Hakko Kogyo Kk Cells producing antibody compositions
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US7521054B2 (en) 2000-11-17 2009-04-21 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Reduction of the nonspecific animal toxicity of immunotoxins by mutating the framework regions of the Fv to lower the isoelectric point
US7041870B2 (en) 2000-11-30 2006-05-09 Medarex, Inc. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
AU2002258518A1 (en) 2001-03-14 2002-09-24 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules and proteins for the identification, assessment, prevention, and therapy of ovarian cancer
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US7125663B2 (en) 2001-06-13 2006-10-24 Millenium Pharmaceuticals, Inc. Genes, compositions, kits and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of cervical cancer
MXPA03011979A (en) 2001-06-18 2005-04-08 Eos Biotechnology Inc Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer.
US7803915B2 (en) 2001-06-20 2010-09-28 Genentech, Inc. Antibody compositions for the diagnosis and treatment of tumor
US20050107595A1 (en) 2001-06-20 2005-05-19 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
EP2180044A1 (en) 2001-08-03 2010-04-28 GlycArt Biotechnology AG Antibody glycosylation variants having increased anti-body-dependent cellular cytotoxicity
AU2002323110A1 (en) 2001-08-08 2003-02-24 Incyte Genomics, Inc. Proteins associated with cell growth, differentiation, and death
WO2003035835A2 (en) 2001-10-25 2003-05-01 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
WO2003043583A2 (en) 2001-11-20 2003-05-30 Seattle Genetics, Inc. Treatment of immunological disorders using anti-cd30 antibodies
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
WO2003084569A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Drug containing antibody composition
PL373256A1 (en) 2002-04-09 2005-08-22 Kyowa Hakko Kogyo Co, Ltd. Cells with modified genome
CA2481837A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Production process for antibody composition
US20040259150A1 (en) 2002-04-09 2004-12-23 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Method of enhancing of binding activity of antibody composition to Fcgamma receptor IIIa
ES2362419T3 (en) 2002-04-09 2011-07-05 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. CELLS WITH DEPRESSION OR DELETION OF THE ACTIVITY OF THE PROTEIN THAT PARTICIPATES IN THE TRANSPORT OF GDP-FUCOSA.
US20050031613A1 (en) 2002-04-09 2005-02-10 Kazuyasu Nakamura Therapeutic agent for patients having human FcgammaRIIIa
AU2003239966B9 (en) 2002-06-03 2010-08-26 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
WO2003101283A2 (en) 2002-06-04 2003-12-11 Incyte Corporation Diagnostics markers for lung cancer
EP1575500A4 (en) 2002-07-12 2007-01-03 Univ Johns Hopkins Mesothelin vaccines and model systems
ES2544527T3 (en) 2002-07-31 2015-09-01 Seattle Genetics, Inc. Drug conjugates and their use to treat cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
AR042485A1 (en) 2002-12-16 2005-06-22 Genentech Inc HUMANIZED ANTIBODY THAT JOINS THE HUMAN CD20
CA2510003A1 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US20040180387A1 (en) 2003-03-13 2004-09-16 Fujirebio Diagnostics, Inc. Detection of urinary mesothelin-/megakaryocyte potentiating factor-related peptides for assessment of ovarian cancer
WO2005014652A1 (en) 2003-08-05 2005-02-17 Morphotek, Inc. A variant cell surface molecule associated with cancer
US20080241884A1 (en) 2003-10-08 2008-10-02 Kenya Shitara Fused Protein Composition
AU2004280065A1 (en) 2003-10-09 2005-04-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing antibody composition by using RNA inhibiting the function of alpha1,6-fucosyltransferase
EA036531B1 (en) 2003-11-05 2020-11-19 Роше Гликарт Аг Type ii anti-cd20 humanized antibody (variants), pharmaceutical composition comprising these antibody variants, and use thereof
ZA200603619B (en) 2003-11-06 2008-10-29 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
WO2005053742A1 (en) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Medicine containing antibody composition
EP2444805A3 (en) 2004-01-21 2012-06-20 Fujirebio America, Inc. Detection of mesothelin-/megakaryocyte potentiating factor-related peptides in peritoneal fluid for assessment of the peritoneum and the peritoneal cavity
US20060014221A1 (en) 2004-01-21 2006-01-19 Fujirebio Diagnostics, Inc. Detection of urinary mesothelin-/megakaryocyte potentiating factor-related peptides for assessment of mesothelioma
JP5064037B2 (en) 2004-02-23 2012-10-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド Heterocyclic self-destructive linkers and conjugates
ZA200608130B (en) 2004-03-31 2008-12-31 Genentech Inc Humanized anti-TGF-beta antibodies
WO2005101017A1 (en) 2004-04-07 2005-10-27 Genentech, Inc. Mass spectrometry of antibody conjugates
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
CA2561533C (en) 2004-04-13 2015-06-16 Yvo Graus Anti-p-selectin antibodies
KR20120064120A (en) 2004-06-01 2012-06-18 제넨테크, 인크. Antibody drug conjugates and methods
DK1782070T3 (en) 2004-06-17 2011-01-03 Mannkind Corp Tumor-associated antigen profiles in cancer diagnosis and immunotherapy
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
NZ580115A (en) 2004-09-23 2010-10-29 Genentech Inc Cysteine engineered antibody light chains and conjugates
US20100111856A1 (en) 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
JO3000B1 (en) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc Antibody Formulations.
WO2006060533A2 (en) 2004-12-01 2006-06-08 Genentech, Inc. Conjugates of 1, 8-bis-naphthalimides with an antibody
US7947839B2 (en) 2004-12-01 2011-05-24 Genentech, Inc. Heterocyclic-substituted bis-1,8 naphthalimide compounds, antibody drug conjugates, and methods of use
US20070134243A1 (en) 2004-12-01 2007-06-14 Gazzard Lewis J Antibody drug conjugates and methods
JP2008523105A (en) 2004-12-14 2008-07-03 エンゾン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド Polymer-linked Pseudomonas exotoxin immunotoxin
WO2006068204A1 (en) 2004-12-21 2006-06-29 Asahi Glass Company, Limited Substrate with transparent conductive film and patterning method thereof
CA2600505C (en) 2005-03-10 2016-05-03 Morphotek, Inc. Anti-mesothelin antibodies
WO2006124641A2 (en) * 2005-05-12 2006-11-23 The Government Of The United States, As Represented By The Secretary Of Health And Human Services, National Institutes Of Health Anti-mesothelin antibodies useful for immunological assays
US20090226465A1 (en) 2005-10-31 2009-09-10 Jackson David Y Macrocyclic depsipeptide antibody-drug conjugates and methods
US8679490B2 (en) 2005-11-07 2014-03-25 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus VH/VL hypervariable sequences
WO2007064919A2 (en) 2005-12-02 2007-06-07 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
WO2007112047A2 (en) 2006-03-24 2007-10-04 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Formulations containing immunotoxins targeted to the mesothelin tumor cell antigen
EP2016101A2 (en) 2006-05-09 2009-01-21 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
EP2024507B1 (en) 2006-05-19 2015-07-22 Technion Research and Development Foundation Ltd. Fusion proteins, uses thereof and processes for producing same
US10118970B2 (en) 2006-08-30 2018-11-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
WO2008068906A1 (en) 2006-12-08 2008-06-12 Immuno-Biological Laboratories Co., Ltd Diagnostic agent for mesothelioma, diagnosis kit for mesothelioma, and diagnosis method for mesothelioma
WO2008072723A1 (en) * 2006-12-14 2008-06-19 Forerunner Pharma Research Co., Ltd. ANTI-Claudin-3 MONOCLONAL ANTIBODY, AND TREATMENT AND DIAGNOSIS OF CANCER USING THE SAME
CA2650077A1 (en) 2006-12-19 2008-02-17 Ekaterina Dadachova Radioimmunotherapy and imaging of tumor cells that express viral antigens
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
WO2008141044A2 (en) * 2007-05-08 2008-11-20 Genentech, Inc. Cysteine engineered anti-muc16 antibodies and antibody drug conjugates
CN100592373C (en) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 Liquid crystal panel drive device and its drive method
CA2700860C (en) 2007-10-01 2016-07-19 Jonathan A. Terrett Human antibodies that bind mesothelin, and uses thereof
HUE027358T2 (en) * 2007-11-26 2016-09-28 Bayer Ip Gmbh Anti-mesothelin antibodies and uses therefor
ES2774337T3 (en) 2008-01-07 2020-07-20 Amgen Inc Method for manufacturing heterodimeric Fc molecules of antibodies using electrostatic conduction effects
US8742076B2 (en) 2008-02-01 2014-06-03 Genentech, Inc. Nemorubicin metabolite and analog reagents, antibody-drug conjugates and methods
EP2257572A1 (en) * 2008-03-27 2010-12-08 The Government of the United States of America as represented by The Secretary of the Department of Health and Human Services Human anti-mesothelin monoclonal antibodies
PE20110571A1 (en) 2008-07-15 2011-08-29 Genentech Inc CONJUGATES DERIVED FROM ANTHRACICLINE, AS ANTITUMORAL COMPOUNDS
ES2547712T3 (en) 2009-02-27 2015-10-08 Genentech, Inc. Methods and compositions for protein labeling
CA2756393C (en) * 2009-03-24 2017-06-20 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Anti-mesothelin antibodies
UY32560A (en) 2009-04-29 2010-11-30 Bayer Schering Pharma Ag IMMUNOCONJUGADOS OF ANTIMESOTELINA AND USES OF THE SAME
JP5972864B2 (en) 2010-04-15 2016-08-17 メディミューン リミテッド Pyrrolobenzodiazepines and their conjugates
SG10201600791TA (en) 2010-06-08 2016-03-30 Genentech Inc Cysteine engineered antibodies and conjugates
WO2012055019A1 (en) 2010-10-29 2012-05-03 Urban Surface Solutions Inc. Jet heating device
ES2544608T3 (en) 2010-11-17 2015-09-02 Genentech, Inc. Antibody and alaninyl-maitansinol conjugates
EA028744B1 (en) 2010-12-20 2017-12-29 Дженентек, Инк. Anti-mesothelin antibodies and immunoconjugates
BR112013019499B1 (en) 2011-02-04 2023-01-10 Genentech, Inc. VARIANT HETERO-MULTIMERIC PROTEIN OR MODIFIED IGG ANTIBODY, METHOD FOR PRODUCING A VARIANT HETERO-MULTIMERIC PROTEIN OR MODIFIED IGG ANTIBODY, COMPOSITION, METHOD FOR PREPARING A HETERO-MULTIMERIC PROTEIN AND VARIANT HETERO-MULTIMERIC PROTEIN
MX2013013054A (en) 2011-05-12 2014-02-20 Genentech Inc Multiple reaction monitoring lc-ms/ms method to detect therapeutic antibodies in animal samples using framework signature peptides.
RS54446B1 (en) 2011-10-14 2016-06-30 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof

Also Published As

Publication number Publication date
TW201302788A (en) 2013-01-16
EP2655418B1 (en) 2017-10-04
EP3296321B1 (en) 2020-07-15
NZ610976A (en) 2015-07-31
MX345519B (en) 2017-02-01
CN103347897A (en) 2013-10-09
SG191294A1 (en) 2013-07-31
EP3296321A1 (en) 2018-03-21
AU2011349443B2 (en) 2015-12-24
PE20170917A1 (en) 2017-07-12
JP6311042B2 (en) 2018-04-11
CR20130335A (en) 2013-08-12
MX2013006716A (en) 2013-09-26
AU2011349443A1 (en) 2013-05-09
TWI589589B (en) 2017-07-01
ECSP13012784A (en) 2013-09-30
ZA201303765B (en) 2014-11-26
US8911732B2 (en) 2014-12-16
US10022452B2 (en) 2018-07-17
CA2819269A1 (en) 2012-06-28
US20120225013A1 (en) 2012-09-06
US9719996B2 (en) 2017-08-01
JP6253987B2 (en) 2017-12-27
WO2012087962A2 (en) 2012-06-28
EA028744B1 (en) 2017-12-29
MA34881B1 (en) 2014-02-01
SG10201510518TA (en) 2016-01-28
PH12018500046A1 (en) 2019-04-08
ZA201406196B (en) 2016-09-28
KR20140014116A (en) 2014-02-05
EA201790664A1 (en) 2017-07-31
BR112013014527A2 (en) 2017-03-07
WO2012087962A3 (en) 2012-09-13
US20170281792A1 (en) 2017-10-05
US20150065388A1 (en) 2015-03-05
EA201390933A1 (en) 2013-12-30
IL250764A0 (en) 2017-04-30
TW201536807A (en) 2015-10-01
CN107098972A (en) 2017-08-29
AR084356A1 (en) 2013-05-08
TWI477513B (en) 2015-03-21
EP2655418A2 (en) 2013-10-30
CO6720984A2 (en) 2013-07-31
UA115641C2 (en) 2017-11-27
CL2013001776A1 (en) 2014-03-07
JP2017125022A (en) 2017-07-20
CL2017000772A1 (en) 2017-11-03
PE20141114A1 (en) 2014-09-15
JP2014509835A (en) 2014-04-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA113838C2 (en) ANTIBODY Binding Mesothelin and Immunoconjugate
UA124615C2 (en) Humanized and affinity matured antibodies to fcrh5 and methods of use
UA120753C2 (en) Anti-cd3 antibodies and methods of use
DK3013861T3 (en) ANTI-FCRH5 ANTIBODIES
CN103619882B (en) The φt cell receptor sample antibody that the WT1 peptide of presenting HLA-A2 is special
UA98762C2 (en) Monoclonal antibody which binds to tat226 and immunoconjugate
CN102209730B (en) Anti cxcr4 antibodies and their use for the treatment of cancer
UA119226C2 (en) ANTIBODY THAT SPECIFICALLY BECOMES AXL AND ITS APPLICATION AS A PRODUCT FOR ADDRESSED SHIPPING IN CANCER TREATMENT
JP7070932B2 (en) BAFF-R Targeted Chimeric Antigen Receptor Modified T Cells and Their Use
UA118749C2 (en) Antibody constructs for cdh19 and cd3
UA127450C2 (en) Cd123 binding proteins and related compositions and methods
UA127961C2 (en) ANTI-MYOSTATIN ANTIBODIES, POLYPEPTIDES CONTAINING VARIANT Fc REGIONS, AND METHODS OF USE
UA114814C2 (en) ANTI-Ly6E ANTIBODIES AND IMMUNOCONJUGATES AND METHODS OF USE
CN107108740A (en) Anti- FGFR2/3 antibody and its application method
UA120247C2 (en) Anti-ceacam5 antibodies and uses thereof
UA126561C2 (en) Anti-c5 antibodies and methods of use
CN101925612A (en) At antibody of the epi-position of the relevant NFKBIB variant of cancer and uses thereof
UA114077C2 (en) NEUTRALIZING ANTIBODY AGAINST CCL20
UA121464C2 (en) Anti-jagged1 antibodies and methods of use
UA115046C2 (en) Humanized anti-epiregulin antibody, and cancer therapeutic agent comprising said antibody as active ingredient
HU230586B1 (en) Use of an anti-erbb antibody-maytansinoid conjugates in the manufacture of a medicament for treating tumorous diseases
UA118950C2 (en) Prostate-specific membrane antigen binding proteins and related compositions and methods
CN109563164A (en) Anti-AXL antibodies, antibody fragment and their immunoconjugates with and application thereof
CN101142236A (en) Adam-9 modulators
UA118251C2 (en) Antibody drug conjugates (adc) that bind to 158p1d7 proteins