UA10385U - СПОСІБ ДІАГНОСТИКИ Ph' ЛЕЙКЕМІЙ ЗА ДОПОМОГОЮ СПЕЦИФІЧНИХ ПРАЙМЕРІВ - Google Patents
СПОСІБ ДІАГНОСТИКИ Ph' ЛЕЙКЕМІЙ ЗА ДОПОМОГОЮ СПЕЦИФІЧНИХ ПРАЙМЕРІВ Download PDFInfo
- Publication number
- UA10385U UA10385U UAU200503775U UAU200503775U UA10385U UA 10385 U UA10385 U UA 10385U UA U200503775 U UAU200503775 U UA U200503775U UA U200503775 U UAU200503775 U UA U200503775U UA 10385 U UA10385 U UA 10385U
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- primers
- stage
- polymerase chain
- chain reaction
- synthesis
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 title claims abstract description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 17
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims abstract description 17
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims abstract description 14
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims abstract description 11
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims abstract description 10
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 8
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 claims description 5
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 claims description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 claims description 2
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 abstract 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 abstract 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- 238000004159 blood analysis Methods 0.000 description 6
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 6
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 208000014767 Myeloproliferative disease Diseases 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 3
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000002559 cytogenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 230000000093 cytochemical effect Effects 0.000 description 2
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- MGSRCZKZVOBKFT-UHFFFAOYSA-N thymol Chemical compound CC(C)C1=CC=C(C)C=C1O MGSRCZKZVOBKFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 2
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102100024365 Arf-GAP domain and FG repeat-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000034951 Genetic Translocation Diseases 0.000 description 1
- 101000833314 Homo sapiens Arf-GAP domain and FG repeat-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108090000235 Myeloperoxidases Proteins 0.000 description 1
- 102000003896 Myeloperoxidases Human genes 0.000 description 1
- 235000012093 Myrtus ugni Nutrition 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 1
- 101000746496 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) GTP-binding protein ypt3 Proteins 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 244000061461 Tema Species 0.000 description 1
- 239000005844 Thymol Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000013394 immunophenotyping Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010024378 leukocytosis Diseases 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004214 philadelphia chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229960000790 thymol Drugs 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Abstract
Спосіб діагностики Ph' лейкемій за допомогою специфічних праймерів включає операції отримання зразка крові хворого, приготування реакційної суміші для синтезу кДНК, яка містить РНК, відповідний праймер, зворотну транскриптазу M-MLV (GibcoBRL), PHазін і dNTP та буфер для зворотної транскриптази, проведення синтезу при температурі +36,8...+37,2°С протягом 50-70 хвилин, використання аліквоти реакційної суміші для проведення ампліфікації. При цьому на першому етапі проводять серію циклів полімеразної ланцюгової реакції з використанням відповідних праймерів при заданому температурному режимі синтезу, далі проводять другий етап полімеразної ланцюгової реакції з використанням відповідних праймерів при заданому температурному режимі, а продукти ампліфікації аналізують у агарозному гелі і прогнозують подальший перебіг захворювання. Як праймери під час приготування реакційної суміші для синтезу кДНК використовують, відповідно, праймери Phl-f (5'-GTCTTCCTGTTCACCGAGCTG-3') та Phl-r (5'-GCTTAGAGTGTTATCTCCACTGGC-3'), а на другому етапі полімеразної ланцюгової реакції використовують праймери Ph-f (5'-CTGCAAATGGTACATTCCGCTCAC-3') та Ph-r (5'-AACGAGCGGCTTCACTCAGACC-3').
Description
Опис винаходу
Пропонована корисна модель відноситься до медицини, а більш конкретно - до засобів діагностики лейкемії. 2 Згадані засоби застосовують у повсякденній практиці. Вони включають дослідження таких цитологічних критеріїв, як форма та розмір клітин, характер зернистості цитоплазми, ядерно-цитоплазматичне співвідношення, структура ядра, а також доповнюються використанням протоколів для детекції характерної генномної перебудови за допомогою полімеразної ланцюгової реакції з специфічними праймерами.
Згадані протоколи можуть бути застосовані в клінічній гематології для детекції наявності гібридного 70 роуаві у хворих на мієлопроферативні захворювання в тих випадках, коли стандартні протоколи не засвідчують наявності бег/арі перебудови.
Методи діагностики лейкемій, які застосовують у повсякденній практиці, включають використання простих цитологічних критеріїв, таких як форма та розмір клітин, характер зернистості цитоплазми, ядерно-цитоплазматичне співвідношення, структура ядра тощо. Ці методи доповнюються також цитохімічними 12 методами (визначення активності кислої фосфатази, мієлопероксидази, РАБ реакція) (1). На підставі результатів, що дають ці методи, можна встановити діагноз у більшості пацієнтів.
Для уточнення природи конкретного лейкемічного клону необхідне імунофенотипування та цитогенетичний аналіз. Використання моноклональних антитіл, імунофлуоресцентних та імуноферментних методів дозволяє більш точно встановлювати рідкісні форми та варіанти лейкемій і, таким чином, застосовувати відповідні протоколи лікування (2; З).
Хромосомні транслокації виявляють при більшості неоплазій людини і, переважно, саме вони зумовлюють один чи декілька етапів пухлинного розвитку.
У зв'язку з цим результати цитогенетичного аналізу, під час якого виявляють характерні аномалії (транслокації, інверсії, делеції тощо) шляхом диференційного забарвлення хромосом, мають самостійне діагностичне і прогностичне значення |4; 6)Ї. Першим подібним маркером пухлинного росту була маленька в б-забарвлена хромосома, описана в 1960Ор. і названа філадельфійською (РИ) І7|. Утворення даної хромосоми обумовлене реципрокною транслокацією між 9 і 22 хромосомами І (9:22) (д34: 411) (8). Її виявили приблизно у 9590 хворих на хронічну гранулоцитарну лейкемію, а також у 25-3095 дорослих та 2-1095 дітей, хворих на гостру лімфобластну лейкемію (ГЛЛ) (|9). На молекулярному рівні утворення філадельфійскої хромосоми о супроводжується утворенням нового злитого рег/арі гена (представленого на 5- кінці ділянкою гена бБсг, а на с
З-кінці -ділянкою гена арі (10). Як показали численні експерименти, саме продукт транскрипції гена Беаг/арі є головним етіологічним моментом у розвитку РІ" лейкемії. Наявність цього гена в клітинах крові та кісткового о мозку дозволяє виявляти Рі! хромосому методами молекулярної біології. Га»)
На сьогодні молекулярно-біологічні методи включають методи з використанням геномних зондів |11; 121, 3о полімеразної ланцюговою реакції (13; 14), флюоресценцію іп зіш гібридизацію (РІЗН) (151, "РОК іп сеї!" (16) тощо. --
Найбільш близьким до пропонованого способу за кількістю суттєвих ознак є відомий спосіб діагностики РИ! лейкемій за допомогою специфічних праймерів, який включає операції отримання зразка крові хворого, приготування реакційної суміші для синтезу кДНК, яка містить РНК, відповідний праймер, зворотну транскиптазу «
М-МІМ (сірсоВвК/), РНазін, і аМмТР та буфер для зворотної транскриптази, проведення синтезу при температурі З 36,8..37,22с протягом 50-70 хвилин, використання аліквоти реакційної суміші для проведення ампліфікації, при с цьому на першому етапі проводять серію циклів полімеразної ланцюгової реакції з використанням відповідних "з праймерів при заданому температурному режимі синтезу, далі проводять другий етап полімеразної ланцюгової реакції з використанням відповідних праймерів при заданому температурному режимі, а продукти ампліфікації аналізують у агарозному гелі і прогнозують подальший перебіг захворювання |Г.Д. Телегеєв, М.В. Дибков, М.В. -з 15 Божко, Н.М.Третяк, С.С.Малюта Молекулярно-біологічна діагностика неопластичних захворювань крові //
Цитология и генетика, 1998, 7.32, М1, С.71-78.|.
І ав | Недолік описаного способу полягає в недостатній достовірності отриманих результатів діагностики, зокрема, у хворих на мієлопрофілеративні захворювання. Це викликано тим, що праймери, які використовують у о згаданому способі, не враховують факту високої нестабільності пухлинного генному. Це в деяких випадках (ее) 50 призводить до неможливості отримання позитивної ланцюгової реакції при наявності характерної геномної перебудови (Брег/абі). сл В основу пропонованого винаходу поставлено задачу створення такого методу діагностики, який би підвищив достовірність отриманих результатів діагностики у хворих на мієлопрофілеративні захворювання за рахунок створення умов для зменшення негативних моментів полімеразної ланцюгової реакції шляхом врахування 959 нестабільності пухлинного геному. с Поставлена задача вирішується у пропонованому способі, який, як і відомий спосіб діагностики Рі" лейкемій за допомогою специфічних праймерів, який включає операції отримання зразка крові хворого, приготування реакційної суміші для синтезу кКДНК, яка містить РНК, відповідний праймер, зворотну транскиптазу М-МІ М (сіосовКкІ), РНазін, і аМТР та буфер для зворотної транскриптази, проведення синтезу при температурі 60 т-36,8...37,22С протягом 50-70 хвилин, використання аліквоти реакційної суміші для проведення ампліфікації, при цьому на першому етапі проводять серію циклів полімеразної ланцюгової реакції з використанням відповідних праймерів при заданому температурному режимі синтезу, далі проводять другий етап полімеразної ланцюгової реакції з використанням відповідних праймерів при заданому температурному режимі, а продукти ампліфікації аналізують у агарозному гелі і прогнозують подальший перебіг захворювання, а, відповідно до пропозиції, як бо праймери під час приготування реакційної суміші для синтезу КДНК використовують, відповідно, праймери РпПІ-ї
(5-СТСТТСОСТОТТСАССОСАСОСТО-3) та РНІ-г (Х-ВОСТТАСАСТОТТАТСТОСАСТОСС-3), а на другому етапі полімеразної ланцюгової реакції використовують праймери РА-ї (Х-СТОСАААТООТАСАТТССОСТСАС-3) та РА-Г (5-ААССАОСООСТТСАСТСАСАСС-3).
Використання пропонованого способу з праймерами РНІ-, РпІ-г, РИА-ї, Ри-г дає можливість підвищити достовірність отриманих результатів діагностики у хворих на мієлопрофілеративні захворювання за рахунок створення умов для зменшення негативних моментів полімеразної ланцюгової реакції і врахування факту високої нестабільності пухлинного генному та отримання позитивної ланцюгової реакції при наявності характерної геномної перебудови (реаг/абі). 70 Використовували зразки крові хворих, які лікувалися в гематологічних клініках м. Києва. РНК отримували за відомою методикою (|17)Ї. Реакційна суміш для синтезу кКДНК містила 1-5мкг РНК, 10 рмМ праймера А!1 (5-ТОАТТАТАСОССТААСАСССОА-3)), 20 од. зворотної транскиптази М-МІ М (бірсоВвк/), 10-20 од. РНазіну, ІіммМ амтР, буфер для зворотної транскриптази. Загальний об'єм суміші склав 4О0мкл. Синтез проводили при 372 протягом 1 год. Аліквоти реакційної суміші (5-10 мкл) використовували для проведення ампліфікації. На першому 7/5 етапі проводили 30 циклів полімеразної ланцюгової реакції з використанням праймерів РНІ-ї та РпЇ-г в об'ємі
ЗО мкл, за умов, що рекомендовані фірмою-виготовлювачем Тад-полімерази. Температурний режим синтезу: 9490 - 18 сек, 5590 - 1всек, 7220- 1хв. Далі проводили другий етап ПЛР з використанням праймерів Рі-і та Ри-г 9490 - 24 сек, 5820 -18 сек, 7290 - 1 хв. Продукти ампліфікації аналізували в 395 агарозному гелі.
Полімеразна ланцюгова редакція застосовується для отримання значної кількості певних ділянок молекули
ДНК. Це досягається проведенням декількох (до 40) циклів, кожен з яких складається із стадії денатурації, стадії віджигу та стадії синтезу. На стадії синтезу відбувається копіювання ДНК ланцюга (на ділянці, обмеженій спеціально підібраними праймерами) термостабільним ферментом. У нашому випадку напрацьовували ділянку гібридного гена рег/арі. У зв'язку з тим, що розрив у генах бБсг та арі відбувається на значних за розміром ділянках, це робить проблематичним застосуванням ДНК в полімеразній ланцюговій реакції, тому в діагностиці використовують дослідження РНК, яка має значно менший розмір. Через те ПЛР розпочинали 7 з отримання ДНК копії (КДНК), яку синтезували за допомогою зворотної транскриптази, використовуючи РНК як матрицю і праймер А1 як затравку. Перший етап ПЛР, що проводили з використанням праймерів РпІ-ї та РАІ-г, не дав необхідної для візуального виявлення в агарозному гелі такої кількості продукту. Тому проводили другий етап ПЛР, використовуючи аліквоту ПЛР продукту з першого етапу та інші (внутрішні) праймери РНА-ї та Р-г. ІФ)
Приклад 1. со
Отримана електрофореграма продукту ПЛР при дослідженні крові хворого К. Хворий 1956 р.н., ліквідатор аварії на ЧАЕС. Вперше на прийомі в травні 1999 року, в гемограмі з 1992р. - нейтрофільний лейкоцитоз з8 «9 тенденцією до зростання. Аналіз крові 7.07.1999р.: Ер - 5х10", НЬ - 143 г/л, І - 114х109, е- 295, п - 595, с - о ббоб, л-1895, м - 1095, ШОЕ - 12мм/год. Наступний аналіз крові 31.08.2000 р. Ер - 5х1072, Нр-168Гг/л, тр - 250х109, 1 - 18,9х109, е - 2965, п - 795, с - 6495, л - 2095, м - 795, ШОЕ -7мм/год. Стаціонарне лікування - проводили з 5.09.2000 р. по 19.09.2000 р. При надходжені: скарги за загальну слабкість, болі в суглобах.
Об'єктивно: шкіра чиста, печінка та селезінка не збільшені. Аналіз крові 6.09.2000 р.: Ер - 5,3х10"?, Нь - 176г/л, тр - 275хХ109, 1 - 15,7х109, е - 296, п - 795, с - 6695, л-1695, м - 995, ШОЕ - Тмм/год. « 20 Дослідження кісткового мозку: бласти - 2,095, нейтроф., пром - 0,595, мієл -8,595, п -2495, с - 27,595, еоз - 2 с О,БУб, л - 10,595, м - 2,095, пл. кл -1,595, еритробл - 0,595, нормоцити баз. -1,595, нормоцити поліхр. 4,590, нормоцити кс. - 8,095. При цитохімічному дослідженні лужної фосфатази нейтрофілів не виявили. Біохімічний :з» аналіз крові 6.09.2000 р. - незначне підвищення тимолової проби, інші показники в нормі.
УЗД: печінка та селезінка - не збільшені.
Невизначеність клінічної картини обумовило проведення тесту на наявність РИ" хромосоми. Використання - стандартного набору праймерів (В1, АТ, В2, АЗ) не виявило Беаг/арі -перебудову.
При проведенні аналізу крові методом ПЛР з використанням праймерів, що згадані у пропонованому способі, о виявили фрагмент гену регарі розміром 530 п.н. На підставі цього поставили діагноз: хронічна мієлоїдна с лейкемія (ХМ, вперше виявлена, початкова стадія. 20 Приклад 2 бо Аналіз крові хворого Є. (гостра лімфобластна лейкемія 12, не Т-клітинний варіант, 1 гострий період) с проводили з використанням на першому раунді праймерів Рпі-і та РпІ-т, а на другому - праймерів ВЗ та А2.
Виявлено перебудований фрагмент гену Брег/арі розміром 200 п.н. Виходячи з результату аналізу, було поставлено діагноз Рі-позитивна лейкемія та скориговано протоколи лікування. Приклад З
Також аналогічно проводили аналіз крові хворого П. з підозрою на ХМЛ. Використання розроблених (РПІ-ї,
Рпі-т, РА-ї, Рі-г) та стандартних праймерів (В1, АТ, В2, АЗ) не виявило Бег/арі -перебудови, що визначило с подальшу тактику лікування хворого. Ці дані свідчать про високу ефективність пропонованого способу у діагностиці хворих з невизначеним діагнозом. Використання пропонованого способу дає змогу виявляти мінімальну кількість патологічних клітин (10-4-140-5), що дозволяє проводити ранню діагностику. Даний метод бо дозволяє прогнозувати подальший перебіг захворювання, оцінювати цитогенетичну ремісію та ефективність лікування.
Таким чином, пропонований спосіб, у якому використовують праймери РІ (5-СТСТТСОСТОТТСАССОСАСОСТО-3) та РНІ-г (Х-ВОСТТАСАСТОТТАТСТОСАСТОСС-3), а на другому етапі полімеразної ланцюгової реакції опраймери РН- (5-СТЗСАДАТОСТАСАТТССОСТСАС-3) та /Р-г в5 (5-ААСОСАОСООСсСТТСАСТСАСАСС-3), дає змогу детектувати наявність гібридного Бег/арі гена у випадку, коли стандартний набір праймерів не дозволяє це зробити.
Література: 1.Бутенко ЗА., Глузман Д.Ф., Зак К.П. и др. Цитохимия и електронная микроскопия клеток крови и кроветворньїх органов //Киев, Наукова Думка, 1074,244с. 2.Глузман Д.Ф., Бебешко В.Г., Надгорная В.А. и др. Змбриональное кроветворение и гемобластозь! у детей. // Киев, Наукрва Думка, 1988,200с.
З. Пинчук В.Г., Глузман Д.Ф., Надгорная В.А. и др. Иммуноцитохимические методьії и моноклональнье антитела в онкогематологии // Киев, Наукова Думка, 1990,233 с. 4.Воепт, Т.Н. Каррбіїв А спготозотаї! равів ої ЇІМтрпоїа таїїдпапсу іп тап // Е.).Віоспет, 1989-М.185,Р.1-17. 70 5. М.). Сііпе Тне тоїіесціаг разіз опеикетіа // Тпе Мем Епдіапа дошгпаї! ої Меадісіпе, 1994.-М.330,М5.-Р.328-336. 6. Т.Н. Кабрбріїв Спготозотаї Ігапзіосайопзв іп питап сапсег /Майиге, 1994.- М.372, М.6502-Р.143-149, 7. Можеїї РС, Нипдепога ЮА. А тіпше спготовоте іп питап спгопіс дгапціосуйіс ІеиКетіа // Зсіепсе 1960.-
М.132, Р. 1497-1499. 8. КоулЛеу 90. А пем/ сопвівіепі спготовота! арпогтаїйу іп спгопіс туеодепоиз Іеикаетіа ідепійей ру /5 Зчіпасгіпе Ппогезсепсе апа Сіетва віаіпіпу // Майиге- 1973.-М.243, М5405-Р.290-293. 9. Телегеев Г.Д., Дьібков М.В., Карпенко О.И., Черепенко Е.И. Молекулярнье основьі! Рі-лейкемий и пути их лечения Биополимерь и клетка 1994; 10(5):78-92. 10. Сівпі2ку МІ. Моїесшаг теспапізте ої Всег-АбБі-іпдисед опсодепевзів // СуюКіпез Моїшаг Тпегару 1996-
М2, МА. - Р.251-261. 11. Е.М. Боцшійет Оеїесіоп ої зресіїс зедцепсез атопд ОМА Ігадтепів зерагаїедй ру де! еІесігоїогевів. //
У. Мої.ВіоІ.-1975- М.98, М.3- Р.503-517. 12. б. Оговмеїй, Т. Мепмоега, Т мап Адійомеп еї аІ. Те сПпгопіс туеїосуїйс сеї Ппе К 562 сопіаіпз а
БгеаКроіїпі іп о рсго апа о оргодисев а спітегіс Бсг/с-арі ігапесгірі // МоІесшаг апа Сеїїшаг Віоіоду, 1986-М.6,42.-Р.607-616. 13. Е.5. Камавзакі, 5.5. Сіагк, М.М. Соупе еї а Оіадповів ої спгопіс туеїрій апа асше Іутрпосуййс
Іеикетіаз Бу аеїейоп ої ІеиКептіа-зресіїс тЕМА зедцепсез атрійіеа іп мійго. // Ргос. Май. Асад. сі. О5А, т 1988. - М.85, М15.-Р.5698-5702. 14. Мацйгег .у)., ЧУЧапввзеп У., Ті! Е., еї аї. ОеїЇейоп ої сПпітегіс ВСК-АВІ депез іп асше Іутрпорбіавіїс
Іеикетіа Бу (пе роїутегазе спаїп геасійоп // Те І апсеї.-1991.-М.337, М 8749.-Р.1055-1058. ю зо 15. Ткаспик О.С., МУевіргоок С.А., АпагеейМ., еї аІ. Оефесіоп ої Бег-АБІ їивіоп іп спгопіс туеодепоийв
Іеикетіа Бу іп зіш Нубгіаігавоп // Зсіепсе -1990 - М.250, М.4980, Р.559-562 со 16. М.Тевіоп, о-Мапіпеїйї, Р.Рагаредої ек оа. А пем/ теїйой ої "їп-сеї гемегве (гапзсіріазе-роїутегазе (У спаійп геасіоп" їог о дейесіоп ої Всі/арі | гапесгірів іп спгопіс туеїсій ІеиКкетіа райепів. // Віоса- 1996.-М.87, М.9 - Р.З 884-3 892. о 17. СпотсгупеКкі Р., Зассні М. Зіпдіе-зіер теїфой ої АКМА ізоїайоп ру асій оцапідіпит де
Іпіосуапаїе-рпепо!-спіогоїогт ехігасіоп // Апа)мї. Віоспет. -1987. -М.І 62, Р. 156-159.
Claims (1)
- Формула винаходу « М нд | о й ші с Спосіб діагностики РІ! лейкемій за допомогою специфічних праймерів, що включає операції отримання зразка крові хворого, приготування реакційної суміші для синтезу кДНК, яка містить РНК, відповідний праймер, :з» зворотну транскриптазу М-МІМ (сбірсоВкК/), РНазін і аМТР та буфер для зворотної транскриптази, проведення синтезу при температурі 36,8...-37,22С протягом 50-70 хвилин, використання аліквоти реакційної суміші для проведення ампліфікації, при цьому на першому етапі проводять серію циклів полімеразної ланцюгової реакції з - використанням відповідних праймерів при заданому температурному режимі синтезу, далі проводять другий етап полімеразної ланцюгової реакції з використанням відповідних праймерів при заданому температурному о режимі, а продукти ампліфікації аналізують у агарозному гелі і прогнозують подальший перебіг захворювання, оо який відрізняється тим, що як праймери під час приготування реакційної суміші для синтезу кКДНК Використовують, відповідно, праймери РІ (5-СВТСТССТОТТСАССОАОСТО-3) та Ріг со (5-ВОСТТАСАСТОТТАТСТОСАСТООС-3), а на другому етапі полімеразної ланцюгової реакції використовують с праймери РЕ-ї (-СТОСАААТОСТАСАТТССОСТСАС-3) та Ри-г (-ААССАОСООСТТСАСТСАСАСС-3). Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних 5Б мікросхем", 2005, М 11, 15.11.2005. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України. с 60 б5
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU200503775U UA10385U (uk) | 2005-04-20 | 2005-04-20 | СПОСІБ ДІАГНОСТИКИ Ph' ЛЕЙКЕМІЙ ЗА ДОПОМОГОЮ СПЕЦИФІЧНИХ ПРАЙМЕРІВ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU200503775U UA10385U (uk) | 2005-04-20 | 2005-04-20 | СПОСІБ ДІАГНОСТИКИ Ph' ЛЕЙКЕМІЙ ЗА ДОПОМОГОЮ СПЕЦИФІЧНИХ ПРАЙМЕРІВ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA10385U true UA10385U (uk) | 2005-11-15 |
Family
ID=74506024
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAU200503775U UA10385U (uk) | 2005-04-20 | 2005-04-20 | СПОСІБ ДІАГНОСТИКИ Ph' ЛЕЙКЕМІЙ ЗА ДОПОМОГОЮ СПЕЦИФІЧНИХ ПРАЙМЕРІВ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA10385U (uk) |
-
2005
- 2005-04-20 UA UAU200503775U patent/UA10385U/uk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chen et al. | From tissues to cell types and back: single-cell gene expression analysis of tissue architecture | |
| CN103608818B (zh) | 非侵入性产前倍性识别装置 | |
| US20180068058A1 (en) | Methods and compositions for sample identification | |
| Cirillo et al. | Liquid biopsy in lymphoma: Molecular methods and clinical applications | |
| CN104120181B (zh) | 对染色体测序结果进行gc校正的方法及装置 | |
| ES2806728T3 (es) | Resolución de fracciones de genoma usando recuentos de polimorfismos | |
| UA126898C2 (uk) | Застосування розміру фрагмента безклітинної днк для визначення варіацій числа копій | |
| CN109983134A (zh) | 尿液和其他样品中无细胞dna的分析 | |
| Vialard et al. | Prenatal BACs‐on‐BeadsTM: the prospective experience of five prenatal diagnosis laboratories | |
| CN107849607A (zh) | 血浆dna的单分子测序 | |
| CN105917008A (zh) | 用于前列腺癌复发的预后的基因表达面板 | |
| CN105765083A (zh) | 基于表观遗传学标记物来估计组织和细胞类型的年龄的方法 | |
| CN106498076A (zh) | 用于诊断病状的方法和组合物 | |
| CN103403183A (zh) | 胎儿遗传异常的无创性检测 | |
| JP2022524208A (ja) | 腫瘍モデルの同定のための方法および組成物 | |
| CN108441552B (zh) | 一种与妊娠期肝内胆汁淤积症辅助诊断相关的血清/血浆miRNA标志物及其应用 | |
| Raghavendra et al. | Advances in cell and molecular diagnostics | |
| US20230151358A1 (en) | Single step sample preparation for next generation sequencing | |
| CN108559776A (zh) | 一种用于突发性弱精辅助诊断的生物标志物及其应用 | |
| EP4048809A1 (en) | Systems and methods for predicting therapeutic sensitivity | |
| Zucherato et al. | Identification of suitable reference genes for mesenchymal stem cells from menstrual blood of women with endometriosis | |
| Kilpatrick et al. | Automated detection of rare fetal cells in maternal blood: eliminating the false-positive XY signals in XX pregnancies | |
| Shegekar et al. | The emerging role of liquid biopsies in revolutionising cancer diagnosis and therapy | |
| Hahn et al. | Noninvasive prenatal diagnosis of fetal aneuploidies and Mendelian disorders: new innovative strategies | |
| CN101671736B (zh) | 一种用于检测细胞嵌合状态或个体识别的基因检测试剂盒 |