TWI840478B - 交聯性多醣及相關方法 - Google Patents

Abstract

揭示形成交聯多醣之方法，其中將一或多種多醣溶解於溶液中、使其膠凝、修飾以便具有所需濃度，並且隨後經照射。對凝膠進行照射使所存在的多醣得以交聯。所揭示技術可應用於各種多醣，包括但不限於瓊脂糖及/或透明質酸。

Description

交聯性多醣及相關方法

本申請案主張於2018年12月21日申請之美國臨時申請案第62/783,630號之權益，該臨時申請案之內容以引用之方式併入本文中。本發明係關於使多醣交聯之方法以及所得交聯組成物。具體而言，本發明描述照射處於膠凝狀態下之多醣，尤其瓊脂糖以便達成所需交聯水準的方法。

交聯為經由共價或離子鍵來使兩個或兩個以上聚合物鏈化學連接在一起之過程。聚合物之各種機械性質可藉由交聯來修飾。例如，使材料交聯至較低交聯密度可降低聚合物熔體之黏性，同時交聯至中等交聯密度可將膠黏聚合物轉化成具有彈性及潛在高強度之材料。在一些情況下，非常高的交聯密度可導致材料變得剛硬或呈玻璃狀。許多交聯技術為已知的，包括依賴於熱量、壓力、pH之變化、或輻射來引發交聯過程的過程。

本發明係關於使多醣交聯之方法以及所得交聯組成物。具體而言，本發明描述照射處於膠凝狀態下之多醣，尤其瓊脂糖以便達成所需交聯水準的方法。

如本文使用，術語「多醣」係指具有通式C_x (H₂ O)_y 之聚合物碳水化合物，例如像澱粉、糊精、纖維素、半纖維素、聚葡萄糖、菊糖、β-葡聚糖、果膠、車前子殼黏漿、甘露聚糖、β-甘露聚糖、刺槐豆膠、胡蘆巴、瓜爾膠、塔拉膠、葡甘露聚糖、阿拉伯樹膠、卡拉亞膠、黃蓍膠、阿拉伯木聚糖、結冷膠、黃原膠、褐藻酸鹽、瓊脂糖、角叉菜膠、瓊脂、透明質酸、幾丁質、及殼聚糖。使用多醣瓊脂糖之許多示例性實施例在本文中得以詳細描述。然而，本發明不意欲限制於此。具體而言，但是存在使用瓊脂糖之實例，但是可替代地或另外地使用任何其他合適類型之多醣。例如，使用透明質酸之實施例亦為受關注的並且在本文中詳細描述。

雖然先前已出於交聯目的，將照射技術應用於一些多醣，但是此類型之交聯過程(如先前執行)具有許多缺點。具體而言，在水中之低濃度下，大多數多醣受照射影響而降級。若多醣在乾燥狀態下(亦即，具有少於5%之水濃度)受到照射，則亦可發生降級。因此，僅在特定濃度範圍內，多醣之交聯得以在最小程度之降級或沒有降級的情況下發生。在低於或高於多醣之此濃度時，降級可發生並且可為相當顯著的。多醣之降級可呈現各種形式，包括多醣之一或多個糖苷鍵之斷裂。如以下更全面闡述，本文描述促進多醣尤其瓊脂糖，以及其他多醣諸如透明質酸之競爭性交聯的技術。

先前嘗試藉由照射來使多醣交聯通常涉及照射處於膏樣狀態下之多醣。如本文使用，術語「膏樣」係指具有以重量及/或體積計少於約90%之水濃度的多醣。與具有在某種程度上有序結構之膠凝多醣相反，膏樣多醣不一定具有有序結構並且可在各處展現不均勻的機械性質。如在本文中更全面解釋，與對膏樣多醣進行照射形成對照，藉由照射來對呈有序凝膠狀態之多醣進行照射可產生獨特地交聯之結構。

重要地是應注意，據本發明人所知，瓊脂糖先前未藉由照射技術來交聯。存在所揭示技術未曾嘗試的幾個原因。首先，促進交聯而非降級所需要的瓊脂糖之特定濃度範圍很難達成。另外，以前對於具有有利於經由照射來交聯之有用範圍內之瓊脂糖濃度之瓊脂糖凝膠而言，用途為有限的。因此，所揭示組成物及技術咸信為新穎的並且先前不容易實現。另外，本發明描述所描述之經照射並且經交聯之瓊脂糖材料之新穎有益用途，該等材料先前為未知的。

交聯多醣具有許多可用性質。例如，交聯瓊脂糖比未交聯瓊脂糖顯著更穩定。因此，交聯瓊脂糖在許多應用中具有前景廣闊的潛力，包括作為皮下填充劑、軟骨替代物、縫合線、外科織物、傷口護理材料、組織及骨骼支架、及/或藥物遞送載體。經由照射呈凝膠形式之交聯瓊脂糖亦提供許多優勢，該等優勢僅可使用所揭示技術而為可能的。例如，所揭示技術可提供：對於瓊脂糖濃度之良好控制、廣泛範圍之不同瓊脂糖濃度、及/或可以可預測之尺寸及形狀來形成之凝膠。如以下更詳細描述，凝膠及由所揭示交聯瓊脂糖來形成之其他製品可用於任何目的，包括美容、整形、及/或治療應用。

如第1圖中示出，方法200包括將瓊脂糖溶解於溶劑中以形成含有瓊脂糖之溶液(方塊202)。如本文使用，術語「瓊脂糖」係指基於以下聚合物結構之化合物：

用於所揭示方法及組成物中之瓊脂糖可為商業上獲得的或由使用者來製備。在一些實施例中，所揭示瓊脂糖可包括一或多種原態、純化、衍生或修飾瓊脂或瓊脂糖。例如，在某些實施例中，瓊脂糖選自瓊脂糖、純化瓊脂糖、修飾瓊脂糖、及衍生瓊脂糖。在一些實施例中，瓊脂糖亦可以與其他相容聚合物及添加劑諸如瓊脂、角叉菜膠、殼聚糖、褐藻酸鹽、明膠、透明質酸、膠原之混合物形式來使用。在選定實施例中，瓊脂糖為未修飾或修飾瓊脂糖、及/或衍生瓊脂糖。在某些實施例中，瓊脂糖為江籬(Gracilaria)衍生之瓊脂糖。與衍生自其他來源(例如，石花菜)之瓊脂糖相比，江籬衍生之瓊脂糖具有更高甲氧基含量。來自其他海藻例如雞毛菜(Pterocladia)或凝花菜(Gelidiella)之瓊脂糖亦可用作所揭示瓊脂糖。

任何合適溶劑可用於溶解瓊脂糖。例如，在一些實施例中，瓊脂糖可在存在或不存在非水性液體的情況下溶解於水中。可使用之示例性非水性液體包括但不限於甘油及乙二醇。在一些實施例中，瓊脂糖可溶解於足夠溶劑中以產生具有至少1重量%、3重量%、5重量%、10重量%、12重量%、15重量%或更多瓊脂糖之溶液。在此等及其他實施例中，可製備具有1重量%與15重量%之間、3重量%與10重量%之間、或大約5重量%瓊脂糖之溶液。在一些實施例中，可加熱溶劑以促進瓊脂糖之溶解。

若適合於規定應用，則亦可將一或多種添加劑添加至含有瓊脂糖之溶液(方塊203)。若存在，則可將呈液體及/或固體形式之添加劑添加至含有瓊脂糖之溶液。在一些實施例中，可將(交聯或未交聯)透明質酸添加至含有瓊脂糖之溶液。在一些此類實施例中，透明質酸可以溶液或顆粒形式添加至含有瓊脂糖之溶液。在此等及其他實施例中，羥磷灰石可添加至含有瓊脂糖之溶液。在所得交聯瓊脂糖凝膠用於皮下填充應用、骨組織工程改造、及其類似應用之實施例中，羥磷灰石層析作為添加劑可為尤其有用的。可使用之其他示例性添加劑包括聚氨酯泡棉，諸如顆粒、珠粒、細線、條材、或其他可能結構。在一些此類實施例中，可將聚氨酯泡棉併入凝膠中，並且在已經成形之後，該等聚氨酯泡棉可隨後實體上自凝膠中移除或溶解於凝膠中並且自凝膠中浸析出，從而在凝膠內產生孔及/或通道。

方法200繼續執行自溶解瓊脂糖中形成瓊脂糖凝膠(方塊204)。溶解瓊脂糖可根據任何已知技術來膠凝，包括化學交聯。在一些實施例中，藉由用含有瓊脂糖之溶液來裝填模具或其他鑄造裝置並且允許溶液膠凝，可實現膠凝。在一些實施例中，瓊脂糖可在室溫、或高於或低於室溫之溫度下膠凝。在膠凝之後，瓊脂糖凝膠可具有至少0.1重量%、1重量%、3重量%、5重量%、7重量%、10重量%、12重量%、15重量%、或更大之瓊脂糖濃度。

在一些實施例中，形成瓊脂糖凝膠(方塊204)包括使含有瓊脂糖之溶液以泡沫形式或以開放基體結構形式來膠凝。在選定實施例中，含有瓊脂糖之溶液作為塗層來施加至植入物或其他基材上，然後在處於基材上的同時得以膠凝。在此等及其他實施例中，含有瓊脂糖之溶液可吸收至吸收性材料(例如，繃帶或海綿)中，然後在吸收性材料上及/或在吸收性材料中膠凝。在選定實施例中，含有瓊脂糖之溶液可經由擠出過程來膠凝，由此形成具有明確界定之結構(例如，細線、條材、管、或具有所需橫截面之其他結構)的凝膠。在此等及其他實施例中，含有瓊脂糖之溶液可以珠粒形式膠凝。

方法200繼續執行視情況調整瓊脂糖凝膠中之瓊脂糖之濃度(方塊206)。如先前解釋，瓊脂糖凝膠可藉由照射來交聯以產生具有許多有利性質之交聯瓊脂糖凝膠。不希望受理論束縛，咸信藉由照射來交聯最佳適合於具有特定瓊脂糖濃度之瓊脂糖凝膠。例如，具有10%與80%之間之瓊脂糖濃度的瓊脂糖凝膠咸信處於藉由照射技術來交聯之合意範圍內。因此，若需要，則方法200包括將凝膠中之瓊脂糖濃度調整至完全適合於藉由照射來交聯之範圍的任選步驟。在一些實施例中，瓊脂糖濃度可調整至10重量%與80重量%之間。在此等及其他實施例中，瓊脂糖濃度可調整至20重量%與60重量%之間、30重量%及50重量%之間、或35重量%及45重量%之間。凝膠之瓊脂糖濃度可使用任何合適技術來調整。例如，在一些實施例中，瓊脂糖凝膠可為完全或部分脫水的。在一些此類實施例中，部分或完全脫水之瓊脂糖凝膠可復水(部分或完全)以便達成所需瓊脂糖濃度。

方法200繼續執行視情況將一或多種添加劑併入至瓊脂糖凝膠中(方塊208)。示例性添加劑及相對重量百分比可為先前在本文中論述之任何添加劑。在具體實施例中，將透明質酸(HA)併入至瓊脂糖凝膠中。不希望受理論束縛，HA可在處理期間與自身及/或與瓊脂糖交聯，從而可產生具有獨特性質之交聯凝膠組成物。此凝膠亦可受到暴露於透明質酸酶的影響。應注意若一或多種添加劑併入至瓊脂糖凝膠中，則若調整瓊脂糖濃度，那麼可在調整瓊脂糖凝膠中之瓊脂糖之濃度(按照方塊206)之前或之後添加一或多種添加劑。

方法200繼續執行照射瓊脂糖凝膠以形成交聯瓊脂糖凝膠(方塊210)。瓊脂糖凝膠可使用任何合適技術來照射，諸如使用伽馬輻射、x射線或貝他輻射之過程(例如，電子束「e-射束」處理)。許多類型之照射裝置在此項技術中為已知的並且可用於根據所揭示方法來照射瓊脂糖凝膠。瓊脂糖凝膠可用任何合適輻射量來照射，此舉取決於所得交聯瓊脂糖凝膠之所需規範。例如，在一些實施例中，瓊脂糖凝膠可接受至少5千戈瑞(kGy)、10 kGy、20 kGy、30 kGy、40 kGy、50 kGy、60 kGy、70 kGy、80 kGy、90 kGy、100 kGy、或更大。在選定實施例中，瓊脂糖凝膠用10及100 kGy之間、20及80 kGy之間、或40及60 kGy之間來照射。

經由所揭示照射過程來交聯之所得瓊脂糖凝膠可具有各種機械性質。例如，在一些實施例中，與未交聯之根據相同技術形成的瓊脂糖凝膠相比，交聯瓊脂糖凝膠可展現增加之強度。另外，在一些實施例中，交聯瓊脂糖凝膠可不再為熱可逆的。換言之，在暴露於導致類似未交聯瓊脂糖凝膠熔解之熱量後，交聯瓊脂糖凝膠可能不熔解。所揭示交聯瓊脂糖凝膠之許多其他機械性質為可能的並且涵蓋在本文中。

第1圖之方法200包括視情況將一或多種添加劑併入至交聯瓊脂糖凝膠中(方塊212)。若例如一或多種添加劑可能不耐受照射，可將該或該等添加劑併入至交聯瓊脂糖凝膠中。在併入至交聯瓊脂糖凝膠中之一或多種添加劑呈液體形式之實施例中，可將一或多種添加劑輸注至凝膠中。在併入至交聯瓊脂糖凝膠中之一或多種添加劑為固體之實施例中，可將一或多種添加劑負載至凝膠基體中。示例性液體添加劑包括但不限於藥劑或其他類型之有益試劑。示例性固體添加劑包括但不限於細胞、組織、醫藥及/或有益劑。

第1圖之方法200以視情況將交聯瓊脂糖凝膠投與患者來結束(方塊214)。所揭示交聯瓊脂糖凝膠可以任何所需結構來投與。例如，在一些實施例中，交聯凝膠可原樣使用，諸如以片材、細線、條材、鑄造結構、基體、或其他規定結構形式。在此等及其他實施例中，可將交聯瓊脂糖凝膠研磨或切碎以產生較小片段或顆粒。在其他實施例中，交聯瓊脂糖凝膠可首先脫水，然後原樣使用或在脫水之後切碎或研磨。在其他實施例中，所揭示交聯瓊脂糖凝膠可與未交聯凝膠或其他材料組合以產生混合結構。許多組態及變化為可能的並且涵蓋在本文中。

在一些實施例中，交聯瓊脂糖凝膠經由針來經皮投與患者。在一些此類實施例中，凝膠可經製備以供藉由無菌填充過程來使用(例如，瓊脂糖凝膠以無菌方式負載至遞送裝置中之過程)。在使用無菌填充過程的實施例中，在已經發生至少一些封裝之後，可能不需要發生對瓊脂糖凝膠進行滅菌之終末滅菌步驟。遞送技術可基於交聯瓊脂糖凝膠之規定用途來選擇。在選定實施例中，交聯瓊脂糖凝膠可用於皮下填充、整形、及/或支架應用。在選定實施例中，所揭示瓊脂糖凝膠用於以下中之一或多者：填充皺紋、細紋、或深折痕，改良皮膚瑕疵諸如疤痕，增加嘴唇或臉頰之體積，勾勒下頜輪廓，或調整任何其他身體部分之外觀，諸如隆鼻術。所揭示交聯瓊脂糖凝膠之無數其他用途為可能的並且涵蓋在本文中。

在一些實施例中，所揭示瓊脂糖凝膠組成物以至少2重量%、3重量%、4重量%、5重量%、6重量%、7重量%、8重量%、9重量%、或10重量%之濃度來投與患者。在此等及其他實施例中，藉由照射來交聯之瓊脂糖凝膠可與一或多種其他類型之水凝膠混合。例如，在一些實施例中，在投與患者之前，透明質酸(HA)與交聯瓊脂糖凝膠混合。

所揭示技術及組成物可提供超過替代製備及滅菌程序之許多優勢。值得注意地，藉由照射具有所需範圍內之濃度之瓊脂糖凝膠來使瓊脂糖交聯可產生完全適合於人體內之應用的穩定交聯瓊脂糖。根據所揭示方法來製備之瓊脂糖凝膠可在體內具有經改良之觸覺效應。例如，所揭示瓊脂糖凝膠(自藉由照射來交聯之瓊脂糖凝膠形成)可比習知瓊脂糖凝膠更堅硬。在一些實施例中，根據所揭示方法來製備之瓊脂糖凝膠可在不顯著損失凝膠結構的情況下藉由加熱來滅菌。由於本發明揭示之瓊脂糖凝膠之性質，藉由所揭示技術來交聯之瓊脂糖凝膠可在體內具有增加之總體停留時間，由此在需要補充由身體消耗之凝膠的後續程序之前提供額外時間。使用透明質酸之示例性實施例

如先前解釋，雖然揭示其中瓊脂糖用作藉由照射來交聯之多醣的許多實例，但是本發明亦擴展至其他多醣在處於膠凝狀態下時經由照射技術來交聯的實施例。例如，在一些實施例中，透明質酸凝膠得以形成並且隨後經照射以形成交聯透明質酸凝膠。第2圖之方法300描述使用照射技術來使透明質酸凝膠交聯的示例性方法。

如第2圖中示出，方法300包括形成透明質酸凝膠(方塊302)。形成透明質酸凝膠可使用熟習此項技術者已知的任何合適方法來完成。方法300繼續執行視情況調整透明質酸凝膠中之透明質酸之濃度(方塊304)。若執行，透明質酸之濃度可使用本文相對於方法200之方塊206來描述之任何技術來調整。另外，透明質酸之濃度可調整至先前在方法200中對於瓊脂糖所描述之任何濃度(例如，10重量%-80重量%、20重量%-60重量%、30重量%-50重量%、或35重量%-45重量%)。然後，透明質酸凝膠可經照射以形成交聯透明質酸凝膠(方塊306)。任何技術可用於照射透明質酸凝膠，包括在方法200，方塊210中所描述之技術。根據需要，在照射之前或之後，一或多種添加劑可視情況併入至透明質酸凝膠中。先前在本文中論述之任何添加劑可併入至透明質酸凝膠中。然後，可將交聯透明質酸凝膠投與患者(方塊308)。任何合適投與技術可用於將交聯透明質酸凝膠投與患者，包括先前相對於方法200之方塊214論述之彼等。使用瓊脂糖及透明質酸之示例性實施例

瓊脂糖凝膠與透明質酸之混合物經由照射來交聯之特定示例性實施例在下文中詳細描述。

透明質酸(未交聯)傾向於形成稠的凝膠樣溶液，甚至在相對較高濃度下亦如此。與採用在其中膠凝之特定形狀/結構之瓊脂糖凝膠相比，透明質酸之行為更像黏稠溶液並且採用容納在其中之容器之形狀。換言之，在瓊脂糖凝膠可通常保持給定形狀或結構的同時，透明質酸凝膠傾向於更可延展的。雖然經由照射來使透明質酸交聯可具有有用的應用，但是此等應用可能不需要交聯透明質酸具有明確界定之結構或形狀。然而，瓊脂糖與透明質酸之混合物可形成具有經界定結構之凝膠，並且在將水含量調整至合適量(必要時)之後，瓊脂糖凝膠與透明質酸之混合物可經由照射(使用先前在本文中描述之任何技術)來交聯以形成具有經界定形狀/形式之交聯凝膠。不希望受理論束縛，咸信經由照射來交聯的含有瓊脂糖及透明質酸之凝膠可具有展現獨特性質之凝膠基體。

為了產生含有瓊脂糖及透明質酸之交聯凝膠，可產生含有瓊脂糖及透明質酸之溶液。出於說明之目的，可產生含有1與2重量%之間之瓊脂糖及大約6重量%之透明質酸的溶液。然而，在其他實施例中，瓊脂糖及/或透明質酸之濃度可增加或減少且/或每一者之相對濃度可改變。然後，溶液可膠凝以形成特定形狀或結構。在凝膠形成之後，凝膠可部分脫水以便具有可接受範圍內之瓊脂糖及透明質酸濃度，以利於使用照射來交聯。然後，凝膠可經照射以使瓊脂糖及透明質酸交聯。在此示例性實施例中，可在瓊脂糖鏈之間、透明質酸鏈之間、及/或瓊脂糖鏈與透明質酸鏈之間形成交聯。許多組態及變化為可能的。然後，交聯凝膠可部分復水(若需要)並且在經受或不經受另外進一步處理的情況下投與患者。另外，在一些實施例中，交聯凝膠可暴露於透明質酸酶以便使交聯凝膠中之透明質酸降級。在一些此類實施例中，甚至在透明質酸已經部分或完全被降級之後，所得凝膠可保持其形式或形狀。在其他實施例中，在透明質酸已經部分或完全被降級之後，所得凝膠可失去一些或所有其強度、形式或形狀。

本文中所描述之特徵及優點並非包括全部，且特定而言，考慮到本發明，本領域中之一般技術者將顯而易見許多額外特徵及優點。熟習相關技術者可認識到鑒於以上揭示內容，許多改進及變化為可能的。

200:方法 202~214:方塊 300:方法 302~308:方塊

本發明可參考附圖來更全面理解。

第1圖示出根據本發明之各個實施例的製備交聯瓊脂糖凝膠之例示性方法。

第2圖示出根據本發明之各個實施例的製備交聯透明質酸凝膠之例示性方法。

國內寄存資訊(請依寄存機構、日期、號碼順序註記) 無 國外寄存資訊(請依寄存國家、機構、日期、號碼順序註記) 無

200:方法

202~214:方塊

Claims (17)

1. 一種形成交聯瓊脂糖凝膠之方法，該方法包含以下步驟：將瓊脂糖溶解於溶劑中以形成含有瓊脂糖之溶液；藉由化學交聯或擠出過程使該含有瓊脂糖之溶液膠凝以形成膠凝瓊脂糖；藉由使該膠凝瓊脂糖完全或部分脫水或是完全或部分復水來修飾該膠凝瓊脂糖以便具有10重量%與80重量%之間之瓊脂糖濃度；照射具有10重量%與80重量%之間之瓊脂糖濃度之該膠凝瓊脂糖以形成交聯瓊脂糖凝膠，其中藉由暴露於以下中之一或多者來實現照射：伽馬輻射、x-射線、或貝他輻射，以及該膠凝瓊脂糖用至少5千戈瑞(kGy)之輻射來照射。
2. 如請求項1所述之方法，其中該瓊脂糖選自由以下組成之群：純化瓊脂糖、修飾瓊脂糖、及衍生瓊脂糖。
3. 如請求項1所述之方法，其中該溶劑包含水。
4. 如請求項3所述之方法，其中該溶劑包含甘油或乙二醇。
5. 如請求項1所述之方法，其中修飾該膠凝瓊脂糖之步驟包含以下步驟：至少部分地使該膠凝瓊脂糖脫水以便產生具有10重量%與80重量%之間之瓊脂糖 濃度的膠凝瓊脂糖。
6. 如請求項1所述之方法，其中該膠凝瓊脂糖具有20重量%與60重量%之間之瓊脂糖濃度。
7. 如請求項1所述之方法，進一步包含以下步驟：向患者投與該交聯瓊脂糖凝膠。
8. 如請求項7所述之方法，進一步包含以下步驟：在投與該患者之前，將該交聯瓊脂糖凝膠與透明質酸混合。
9. 如請求項1所述之方法，其中使該含有瓊脂糖之溶液膠凝以形成膠凝瓊脂糖之步驟包含以下步驟：使該含有瓊脂糖之溶液以泡沫形式或以開放基體結構形式來膠凝。
10. 如請求項1所述之方法，其中膠凝包括將該含有瓊脂糖之溶液作為塗層來施加在基板上，然後使處於該基板上之該溶液膠凝。
11. 如請求項1所述之方法，其中膠凝包括將該含有瓊脂糖之溶液吸收至吸收性材料中，然後使該含有瓊脂糖之溶液在該吸收性材料上或在該吸收性材料中膠凝。
12. 如請求項1所述之方法，其中使該含有瓊脂糖之溶液得以膠凝經由擠出過程來實現。
13. 如請求項1所述之方法，進一步包含以下步驟：將一或多種添加劑併入該交聯瓊脂糖凝膠中，該一或多種添加劑選自由以下組成之群：透明質酸、藥劑、 細胞及組織。
14. 一種形成交聯凝膠之方法，該方法包括以下步驟：藉由將瓊脂糖溶解於溶劑中並且併入透明質酸來形成含有瓊脂糖及透明質酸之溶液；藉由化學交聯或擠出過程使該含有瓊脂糖及透明質酸之溶液膠凝以形成凝膠；及照射該凝膠以形成交聯凝膠，其中藉由暴露於以下中之一或多者來實現照射：伽馬輻射、x-射線、或貝他輻射，以及該膠凝瓊脂糖用至少5千戈瑞(kGy)之輻射來照射。
15. 如請求項14所述之方法，進一步包含以下步驟：在照射該凝膠之前，至少部分地使該凝膠脫水。
16. 如請求項14所述之方法，其中該含有瓊脂糖及透明質酸之溶液具有1重量%與2重量%之間之瓊脂糖濃度。
17. 如請求項14所述之方法，進一步包含以下步驟：藉由使該交聯凝膠暴露於透明質酸酶來使該交聯凝膠之該透明質酸降級。