TWI833222B

TWI833222B - 聯合療法

Info

Publication number: TWI833222B
Application number: TW111119152A
Authority: TW
Inventors: 薩拉薩爾約蘇揚巴拉; 阿雷瓦洛埃內克阿爾達瓦; 伊格萊西亞斯塔瑪拉貝洛; 布埃拉勞雷亞諾西蒙
Original assignee: 西班牙商奎馬特裏克斯有限公司
Priority date: 2022-04-29
Filing date: 2022-05-23
Publication date: 2024-02-21
Also published as: CN114652715A; CN114652715B; WO2023208391A1; TW202341990A

Abstract

本發明關於聯合療法，特別是用於治療癌症的聯合療法。本文公開了治療哺乳動物受試者的增生性病症的方法，所述方法包含向有此需要的患者施用治療有效量的QTX125，其中所述方法包含將QTX125與第二藥劑同時、依次或分開施用給受試者。還提供了包含QTX125的藥物組合物及其使用方法。本發明在癌症治療中具有特殊用途。

Description

聯合療法

本發明關於聯合療法，特別是用於治療癌症的聯合療法。

組蛋白去乙醯化酶(HDAC)

組蛋白去乙醯化酶(HDAC)構成癌症(參見P.A.Marks等人，《自然綜述：癌症(Nature Rev.Cancer)》,2001,1,194；J.E.Bolden等人，《自然綜述：藥物發現(Nature Rev.Drug Discov.)》2006,5,769；P.Gallinari等人，《細胞研究(Cell Res.)》2007,17,195；K.B.Glaser，《生化藥理學(Biochem.Pharmacol.)》2007,74,659；L.Pan等人，《細胞與分子免疫學(Cell.Mol.Immunol.)》2007,4,337；M.Haberland等人，《自然綜述：遺傳學(Nature Rev.Genetics)》2009,10,32；Y.Zhang等人，《當今醫藥化學(Curr.Med.Chem.)》2008,15,2840；S.Ropero和M.Esteller，《分子腫瘤學(Mol.Oncol.)》2007,1,19)和其它疾病例如與中樞神經系統相關的疾病，例如自身免疫性疾病(參見A.G.Kazantsev和L.M.Thompson，《自然綜述：藥物發現(Nature Rev.Drug Discov.)》2006,7,854)治療的一個有吸引力的治療靶標。

已經設計出幾種HDAC抑制劑(HDACi)家族，其一般結構可以在不同綜述中找到(參見A.Villar-Garea和M.Esteller，《國際癌症雜誌(Int.J.Cancer)》2004,112,171；T.A.Miller等人，《藥物化學雜誌(J.Med.Chem.)》 2003,46,5097；T.Suzuki和N.Miyata，《當今醫藥化學(Curr.Med.Chem.)》2005,12,2867；M.Paris等人，《藥物化學雜誌(J.Med.Chem.)》2008,51,1505)。這些抑制劑的一般結構由環狀結構、間隔基和螯合基組成，所述螯合基能夠與屬於I類(HDAC1、HDAC2、HDAC3和HDAC8)、II類(HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC9和HDAC10)和IV類(HDAC11)的不同HDAC同工型的活性中心的Zn(II)陽離子結合。

HDAC抑制劑的作用機制是通過其對組蛋白去乙醯化酶的拮抗性質來解釋，所述組蛋白去乙醯化酶參與調節與細胞凋亡、細胞生長、腫瘤發展、癌症轉移、細胞黏附等相關的過程。這些性質阻止HDAC與其天然配體的結合以及其正常催化活化，即存在於這些蛋白質中的ε-N-乙醯基賴胺酸殘基的去乙醯化，所述天然配體可以為組蛋白或細胞質蛋白(例如微管蛋白)。

儘管具有類似的抑制模式，但偶爾會在不同HDAC同功型抑制中觀察到一些選擇性(參見J.C.Wong等人，《美國化學會志(J.Am.Chem.Soc.2003,125,5586；G.Estiu等人，《藥物化學雜誌(J.Med.Chem.)》2008,51,2898)。所提到的選擇性具有治療意義(參見K.V.Butler和A.P.Kozikowski，《當今藥物設計(Curr.Pharm.Design)》2008,14,505；T.C.Karagiannis和A.El-Osta，《白血病(Leukemia)》2007,21,61)。

HDAC抑制劑

一類重要的HDAC抑制劑為通過芳香族基團和雜芳香族基團與螯合基連接的三取代吡咯衍生物，例如WO2011/039353中所描述。已經顯示這些化合物可有效治療癌症(參見WO2011/039353)。

另外，已經顯示這些化合物可有效治療數種自身免疫性疾病。舉例來說，已經顯示這些化合物在自身免疫性肝炎和自身免疫性腦脊髓炎的動物模型中有效(參見WO 2018/087082)。

一種特別有前景的化合物為3-(3-呋喃基)-N-{4-[(羥氨基)羰基]苄基}-5-(4-羥苯基)-1H吡咯-2-甲醯胺(在本文中稱為QTX125)。

QTX125為一種高度選擇性並且高效的HDAC 6抑制劑。其在套細胞淋巴瘤(參見Perez-Salvia,M.等人，《血液學(Haematologica)》2018；103：e540)、肺癌和胰腺癌異種移植鼠類模型中顯示出高抗腫瘤功效。QTX125在兩種不同的多發性硬化小鼠模型中也顯示出高功效(參見WO 2018/087082)。

聯合療法

化學療法為治療多種癌症的黃金標準，並且關於向有此需要的患者施用抗癌藥劑。然而，眾所周知，耐藥性和/或副作用的發展會限制化學治療劑的治療效用和臨床耐受性(參見Housman,G等人，《癌症(Cancers)》(巴塞爾)2014 6(3)：1769-1792；Prieto-Callajero,B等人，《醫學(Medicine)》2020 99(33)：pe21695)。

“聯合療法”利用單獨有效的化學治療劑(具有不同的作用機制)以通過擴大對單個腫瘤細胞施加的選擇壓力來降低耐藥性發生率。聯合療法還允許減少每種構成性化學治療劑的單獨劑量，從而以劑量依賴性方式減少副作用的發生(Mokhtari,R.等人，《腫瘤靶點(Oncotarget)》2017 6(23)：38025-38043)。

然而，聯合使用多種藥劑可能會導致藥物-藥物相互作用，通常會限制構成性藥劑的溶瘤功效。藥物-藥物相互作用在癌症患者中尤其常見且複雜，這是因為這些個體通常為多重用藥的物件。這種藥物-藥物相互作用限制了聯合療法的治療效用和臨床耐受性。

據報導，HDAC抑制劑辛二醯苯胺異羥肟酸(SAHA；也稱為伏立諾他(Vorinostat))與EGFR抑制劑吉非替尼(Gefitinib)的組合對頭頸癌具有協同抗腫瘤活性(參見Citro等人，《英國癌症雜誌(British Journal of Cancer)》(2019)120：658-667)。然而，對於特定的藥劑組合和/或特定的癌症類型，存在或不存在協同抗腫瘤活性可能為不可預測的。此外，QTX125與其他HDAC抑制劑例如SAHA不同，其中許多HDAC抑制劑為相對非特定的“泛HDAC”抑制劑，因為QTX125已經被證明為很大程度上HDAC6特異性的。因此，不確定包括QTX125的藥物組合是否或在何種情況下會展現出增強的抗癌活性。

在這種情況下，所屬領域中仍然需要用於治療癌症的有效且良好耐受的聯合療法。特別地說，對於新穎聯合療法仍然存在大量未滿足的臨床需求，所述聯合療法會實現協同效應，如果聯合使用，就會提高構成性藥劑的溶瘤功效。

本發明的一個目的為提供包含與第二藥劑同時、依次或分開施用的QTX125的聯合療法，以解決上述常規化學治療方案所面臨的問題。

因此，本發明的第一方面提供一種治療哺乳動物受試者的增生性病症的方法，所述方法包含：向有此需要的患者施用治療有效量的式I的化合物，

其中，所述方法包含向所述受試者同時、依次或分開施用式I的化合物與第二藥劑，所述第二藥劑選自由(i)蛋白激酶抑制劑，(ii)核糖核苷酸還原酶抑制劑，和(iii)蛋白酶體抑制劑組成的組。

在本發明的一些方面中，增生性病症為癌症，例如實體腫瘤。本公開的實體腫瘤包括結腸直腸腫瘤、胰腺腫瘤、肝腫瘤和卵巢腫瘤。

在第二藥劑為蛋白激酶抑制劑的本發明的方面中，蛋白激酶抑制劑可以為酪胺酸蛋白激酶抑制劑。所述酪胺酸蛋白激酶抑制劑的一個實例為索拉非尼(sorafenib)。在所述方面中，治療方法可以為治療結腸直腸癌、胰腺癌、肝癌或卵巢癌的方法。舉例來說，治療方法可以為治療結腸直腸癌或肝癌的方法。

在第二藥劑為核糖核苷酸還原酶抑制劑的本發明的方面中，核糖核苷酸還原酶抑制劑可以為吉西他濱(gemcitabine)。在所述方面中，治療方法可以為治療胰腺癌、肝癌或卵巢癌的方法。舉例來說，治療方法可以為治療胰腺癌或卵巢癌的方法。

在第二藥劑為蛋白酶體抑制劑的本發明的方面中，蛋白酶體抑制劑可以為26S蛋白酶體抑制劑。所述26S蛋白酶體抑制劑的一個實例為硼替佐米(bortezomib)。在所述方面中，治療方法可以為治療結腸直腸癌、胰腺癌、肝癌或卵巢癌的方法。舉例來說，治療方法可以為治療胰腺癌、肝癌或卵巢癌的方法。具體地說，所述方法可以為治療肝癌或卵巢癌的方法。

本發明的第二方面提供了用於根據本發明的第一方面的式I的化合物(QTX125)或其藥學上可接受的鹽在治療哺乳動物受試者的增生性病症的方法中的用途。

本發明的協力廠商面提供了藥物組合物在根據本發明的第一方面的治療哺乳動物受試者的增生性病症的方法中的用途，其中所述藥物組合物包含式I的化合物(QTX125)或其藥學上可接受的鹽以及藥學上可接受的賦形劑。

本發明的第四方面提供了第二藥劑在根據本發明的第一方面的治療哺乳動物受試者的增生性病症的方法中的用途。

舉例來說，在本發明的一些方面中，提供了索拉非尼在根據本發明的第一方面的治療哺乳動物受試者的增生性病症的方法中的用途。

在其它方面中，提供了吉西他濱在根據本發明的第一方面的治療哺乳動物受試者的增生性病症的方法中的用途。

在另外的方面中，提供了硼替佐米在根據本發明的第一方面的治療哺乳動物受試者的增生性病症的方法中的用途。

本發明的第五方面提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包含：第一藥劑，其包含式I的化合物(QTX125)或其藥學上可接受的鹽；第二藥劑，其選自由以下組成的組：(i)蛋白激酶抑制劑，(ii)核糖核苷酸還原酶抑制劑和(iii)蛋白酶體抑制劑；以及藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。

在本發明的一些方面中，第二藥劑選自由以下組成的組：索拉非尼、吉西他濱和硼替佐米。

在另外的方面中，本發明的第五方面的藥物組合物中的第一藥劑與第二藥劑的莫耳比在1：10至10：1範圍內。

本文提供了本發明的第五方面的藥物組合物在醫療中的用途，例如在根據本發明的第一方面的治療哺乳動物受試者的增生性病症的方法中的用途。本發明的第五方面的藥物組合物還可以用於製備藥劑，例如在根據本發明的第一方面的治療哺乳動物受試者的增生性病症的方法中使用的藥劑。

本發明的第六方面提供了式I的化合物(QTX125)或其藥學上可接受的鹽在製備藥劑中的用途。舉例來說，藥劑在根據本發明的第一方面的治療哺乳動物受試者的增生性病症的方法中的用途。

因此，本發明的第七方面提供了本發明的第二藥劑在製備藥劑中的用途。

在一些方面中，本發明提供了索拉非尼在製備藥劑，例如在根據本發明的第一方面的治療哺乳動物受試者的增生性病症的方法中使用的藥劑中的用途。

在其它方面中，本發明提供了吉西他濱在製備藥劑，例如在根據本發明的第一方面的治療哺乳動物受試者的增生性病症的方法中使用的藥劑中的用途。

在另外的方面中，本發明提供了硼替佐米在製備藥劑，例如在根據本發明的第一方面的治療哺乳動物受試者的增生性病症的方法中使用的藥劑中的用途。

本文所提及的本發明由申請專利範圍界定。

現在將參考附圖討論例示本發明原理的實施例和實驗：圖1.表明QTX125/索拉非尼聯合療法在HCT-116結腸癌細胞中的溶瘤功效的劑量-反應曲線。

圖2.表明QTX125/吉西他濱聯合療法在HCT-116結腸癌細胞中的溶瘤功效的劑量-反應曲線。

圖3.表明QTX125/硼替佐米聯合療法在HCT-116結腸癌細胞中的溶瘤功效的劑量-反應曲線。

圖4.表明QTX125/索拉非尼聯合療法在MiaPaCa-2胰腺癌細胞中的溶瘤功效的劑量-反應曲線。

圖5.表明QTX125/吉西他濱聯合療法在MiaPaCa-2胰腺癌細胞中的溶瘤功效的劑量-反應曲線。

圖6.表明QTX125/硼替佐米聯合療法在MiaPaCa-2胰腺癌細胞中的溶瘤功效的劑量-反應曲線。

圖7.表明QTX125/索拉非尼聯合療法在Hep-G2肝癌細胞中的溶瘤功效的劑量-反應曲線。

圖8.表明QTX125/吉西他濱聯合療法在Hep-G2肝癌細胞中的溶瘤功效的劑量-反應曲線。

圖9.表明QTX125/硼替佐米聯合療法在Hep-G2肝癌細胞中的溶瘤功效的劑量-反應曲線。

圖10.表明QTX125/索拉非尼聯合療法在SK-Ov-3卵巢癌細胞中的溶瘤功效的劑量-反應曲線。

圖11.表明QTX125/吉西他濱聯合療法在SK-Ov-3卵巢癌細胞中的溶瘤功效的劑量-反應曲線。

圖12.表明QTX125/硼替佐米聯合療法在SK-Ov-3卵巢癌細胞中的溶瘤功效的劑量-反應曲線。

圖13.表明QTX125/索拉非尼聯合療法在Panc-1胰腺癌細胞中的溶瘤功效的劑量-反應曲線。

圖14.表明QTX125/吉西他濱聯合療法在Panc-1胰腺癌細胞中的溶瘤功效的劑量-反應曲線。

圖15.表明QTX125/硼替佐米聯合療法在Panc-1胰腺癌細胞中的溶瘤功效的劑量-反應曲線。

定義

除非另外定義，否則本文使用的所有技術術語和科學術語均具有與本公開所屬技術領域的通常知識者通常所理解的含義相同的含義。本文描述了用於本公開中的方法和材料；也可以使用所屬領域中已知的其它合適的方法和材料。材料、方法和實例僅為說明性的而不打算為限制性的。本文提及的所有出版物、專利申請、專利、序列、資料庫條目和其它參考文獻都通過全文引用併入。在有衝突的情況下，以本說明書(包括定義)為準。

所陳述值之前的術語“約”指示所述值可以具有所陳述值的±20%、優選地±10%、±5%、±2%、±1%的不確定度。術語“室溫”是指典型實驗室的環境溫度，所述環境溫度在大氣壓下通常在20℃與30℃之間，優選地約25℃。

術語“注射”是指所屬領域的技術人員已知的任何形式的注射，例如皮下、皮內、肌肉內、靜脈內、動脈內、心內、鞘內、脊柱內、囊內、囊下、眶內、腹膜內、氣管內、表皮下、關節內、蛛網膜下和胸骨內。注射可以指輸注過程(例如持續施用)以及推注(不連續)施用。

術語“治療(treatment/treating)”是指施用本發明的化合物或藥物組合物以改善或消除疾病或與所述疾病相關的一種或多種症狀。術語“預防(prevention/prevent)”包括降低疾病出現或發展的風險。

如果沒有另外指示，則“%”是指重量百分比。

優點

本發明的聯合療法是非常有利的。

舉例來說，本文所描述的含有QTX125的聯合療法在介導癌細胞的有效殺死中展示出協同效應。這意味著含有QTX125的聯合療法為高效的溶瘤劑，並且因此含有QTX125的聯合療法為有吸引力的可用於治療有此需要的哺乳動物受試者的增生性病症的治療工具。

聯合的協同作用的優點在於可以減少聯合中每種構成性藥劑的劑量，因此克服了通常與更高劑量的單獨化學治療劑的使用相關的副作用的發展。協同聯合療法通過降低耐藥性的發生率也有優點，因為施加於單獨腫瘤細胞的選擇壓力被擴大。

QTX125

如前所述，QTX125為3-(3-呋喃基)-N-{4-[(羥氨基)羰基]苄基}-5-(4-羥苯基)-1H-吡咯-2-甲醯胺並且具有以下化學式：

本文提及術語“QTX125”旨在包括QTX125和其加合物的結晶形式。還提供了式I的化合物的藥學上可接受的鹽。製備式I的化合物的方法以及其應用於各種醫學治療中的生物活性的跡象描述於例如WO 2011/039353和WO 2018/087082中，其內容通過引用併入本文中。有利的包含QTX125的藥物製劑進一步描述於CN 202210325433.9中，其內容通過引用併入本文中。

本發明人已經發現，與其它組蛋白去乙醯化酶抑制劑不同，QTX125有利地不顯示出基因毒性跡象，特別是染色體斷裂性(clastogenicity)或染色體誘裂性(aneugenicity)。類似地，出乎意料地觀察到，QTX125具有與其它組蛋白去乙醯化酶抑制劑相比改善的藥代動力學性質，特別是更長的半衰期和更大的分佈體積。

術語“藥學上可接受的鹽”是指當施用到接受者時可以(直接或間接)提供如本發明所描述的化合物的鹽。“藥學上可接受的”優選地指生理上可耐受並且當施用到人類或動物時通常不會產生過敏反應或類似的不利反應例如胃病、頭暈等等的組合物和分子實體。優選地，術語“藥學上可接受的”意思指其被州或聯邦政府的監管機構批准或包括在《美國藥典(U.S.Pharmacopoeia)》或其它公認的用於動物並且更尤其用於人類中的藥典中。

可以通過所屬領域中已知的方法實現鹽的製備。舉例來說，藥學上可接受的鹽可以通過常規化學方法由含有鹼性殘基的原始化合物合成。一般來說，例如通過使所述化合物的游離鹼形式與適當的鹼或酸在水中或在有機溶劑中或在兩者的混合物中反應來製備所述鹽。一般來說，非水性介質如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈為優選的。酸加合鹽的實例包括無機酸加合鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽；和有機酸加合鹽，例如乙酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、檸檬酸鹽、草酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、蘋果酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽和對甲苯磺酸鹽。鹼加合鹽的實例包括無機鹽，例如鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、銨鹽、鎂鹽、鋁鹽和鋰鹽；和有機鹽，例如乙二胺、乙醇胺、N,N-二亞烷基乙醇胺、三乙醇胺、葡萄糖胺和胺基酸的鹼性鹽。

增生性病症和癌症

本文提供了治療哺乳動物受試者的增生性病症的方法，其中，所述方法包含向受試者同時、依次或分開施用式I的化合物與選自由以下組成的組的第二藥劑：(i)蛋白激酶抑制劑，(ii)核糖核苷酸還原酶抑制劑，和(iii)蛋白酶體抑制劑。

在本公開的一些方面中，增生性病症為癌症。癌症可以包含實體腫瘤，例如結腸直腸腫瘤、纖維肉瘤、胃腫瘤、膠質母細胞瘤、腎腫瘤、肝腫瘤、肺腫瘤、黑色素瘤、鼻咽腫瘤、口腔腫瘤、骨肉瘤、卵巢腫瘤、胰腺腫瘤或前列腺腫瘤。優選地，癌症可以包含結腸直腸腫瘤、胰腺腫瘤、肝腫瘤或卵巢腫瘤。或者，癌症可以包含血癌，例如淋巴瘤、白血病或骨髓瘤。

第二藥劑

本文提供了治療方法、使用方法和藥物組合物，其利用式I的化合物(或其藥學上可接受的鹽)以及選自由以下組成的清單的第二藥劑：(i)蛋白激酶抑制劑，(ii)核糖核苷酸還原酶抑制劑，和(iii)蛋白酶體抑制劑。

蛋白激酶抑制劑為抑制一種或多種蛋白激酶作用的生物活性劑。蛋白激酶為用於將磷酸根基團(PO₄)添加到蛋白質並用於修改蛋白質和信號傳導路徑的功能的酶。

適用於本公開的蛋白激酶抑制劑可以包括：阿達沃替尼(adavosertib)、阿法替尼(afatinib)、阿西替尼(axitinib)、博舒替尼(bosutinib)、西妥昔單抗(cetuximab)、考比替尼(cobimetinib)、克唑替尼(crizotinib)、卡博替尼(cabozantinib)、達克替尼(dacomitinib)、達沙替尼(dasatinib)、恩曲替尼(entrectinib)、厄達替尼(erdafitinib)、厄洛替尼(erlotinib)、福斯塔替尼(fostamatinib)、吉非替尼(gefitinib)、依魯替尼(ibrutinib)、伊馬替尼(imatinib)、拉帕替尼(lapatinib)、樂伐替尼(lenvatinib)、莫布裡替尼(mubritinib)、尼祿替尼(nilotinib)、培唑帕尼(pazopanib)、培加他尼(pegaptanib)、盧梭替尼(ruxolitinib)、索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)、SU6656、圖卡替尼(tucatinib)、凡德他尼(vandetanib)和威羅非尼(vemurafenib)。

在本公開的優選方面中，蛋白激酶抑制劑為酪胺酸蛋白激酶抑制劑。在最優選的方面中，蛋白激酶抑制劑為索拉非尼。

核糖核苷酸還原酶抑制劑為阻止核糖核苷酸還原酶(RNR)的酶活性的生物活性劑，RNR也稱為核糖核苷二磷酸還原酶(rNDP)。換句話說，核糖核苷酸還原酶抑制劑抑制核糖核苷酸形成去氧核糖核苷酸(DNA的一種組分)。

適用於本公開的核糖核苷酸還原酶抑制劑可以包括：莫特沙芬釓、羥基脲、氟達拉濱(fludarabine)、克拉屈濱(cladribine)、吉西他濱、替紮他濱(tezacitabine)、3-氨基吡啶-2-甲醛縮氨基硫脲(triapine)、麥芽酚鎵和硝酸鎵。

在本公開的優選方面中，核糖核苷酸還原酶抑制劑為吉西他濱。

蛋白酶體為通過蛋白水解降解受損或不需要的蛋白質的蛋白酶複合物。26S蛋白酶體(包含一個20S蛋白質亞單元和兩個19S調節帽亞單元)為真核細胞中的主要蛋白酶，並且負責細胞質和細胞核兩者中的蛋白質降解。蛋白酶體抑制劑為抑制蛋白酶體複合物作用的生物活性劑。

適用於本公開的蛋白酶體抑制劑可以包括：乳胞素、雙硫侖、表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯、馬里佐米(marizomib)、奧普佐米(oprozomib)、地蘭佐米(delanzomib)、環氧酶素、MG132、β-羥基-β-甲基丁酸酯、硼替佐米、卡非佐米(carfilzomib)和伊沙佐米(ixazomib)。

在本公開的優選方面中，蛋白酶體抑制劑為26S蛋白酶體的抑制劑。在最優選的方面中，蛋白激酶抑制劑為硼替佐米。

治療方法

本發明提供了包含QTX125和第二藥劑的聯合療法。

在本公開的一些方面中，提供一種治療哺乳動物受試者的增生性病症的方法，所述方法包含：向有此需要的患者施用治療有效量的式I的化合物，

其中，所述方法包含將式I的化合物與選自由以下組成的組的第二藥劑同時、依次或分開施用給所述受試者：(i)蛋白激酶抑制劑；(ii)核糖核苷酸還原酶抑制劑；和(iii)蛋白酶體抑制劑。

本文所公開的方法可以為治療哺乳動物受試者的癌症的方法。所述方法可以為治療有此需要的受試者的實體腫瘤的方法。適合通過本發明的方法進行治療的實體腫瘤可以包括例如結腸直腸癌、胰腺癌、肝癌或卵巢癌。在根據本發明的任何方面的一些實施例中，結腸直腸癌可以為結腸癌。

在本發明的優選方法中，蛋白激酶抑制劑為索拉非尼。

在本發明的其它優選方法中，核糖核苷酸還原酶抑制劑為吉西他濱。在本發明的另外的優選方法中，蛋白酶體抑制劑為硼替佐米。

利用蛋白激酶抑制劑的方法

本發明的一些方面提供了治療哺乳動物受試者的增生性病症的方法，所述方法包含：向有此需要的患者同時、依次或分開施用治療有效量的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽與蛋白激酶抑制劑。

舉例來說，本發明提供了治療有此需要的哺乳動物受試者的癌症(包括實體腫瘤)的方法，所述方法通過向受試者同時、依次或分開施用治療有效量的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽與蛋白激酶抑制劑來進行。

在所述方法的優選方面中，實體腫瘤可以為結腸直腸腫瘤、胰腺腫瘤、肝腫瘤或卵巢腫瘤。在所述方法中更優選地，實體腫瘤可以為結腸直腸腫瘤或肝腫瘤。

舉例來說，本發明的特定方面提供了治療有此需要的哺乳動物受試者的結腸直腸癌的方法，所述方法包含將治療有效量的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽與蛋白激酶抑制劑同時、依次或分開施用給所述受試者。

還提供了治療有此需要的哺乳動物受試者的胰腺癌的方法，所述方法包含向受試者同時、依次或分開施用治療有效量的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽與蛋白激酶抑制劑。

本文提供了治療有此需要的哺乳動物受試者的肝癌的方法，所述方法包含向受試者同時、依次或分開施用治療有效量的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽與蛋白激酶抑制劑。

進一步提供了治療有此需要的哺乳動物受試者的卵巢癌的方法，所述方法包含向受試者同時、依次或分開施用治療有效量的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽與蛋白激酶抑制劑。

優選地，適用於所述方法中的蛋白激酶抑制劑為酪胺酸蛋白激酶抑制劑。最優選地，用於所述方法中的蛋白激酶抑制劑為索拉非尼。

利用核糖核苷酸還原酶抑制劑的方法

本發明的一些方面提供了治療哺乳動物受試者的增生性病症的方法，所述方法包含：向有此需要的患者同時、依次或分開施用治療有效量的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽與核糖核苷酸還原酶抑制劑。

舉例來說，本發明提供了治療有此需要的哺乳動物受試者的癌症(包括實體腫瘤)的方法，所述方法通過向受試者同時、依次或分開施用治療有效量的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽與核糖核苷酸還原酶抑制劑來進行。

在所述方法的優選方面中，實體腫瘤可以為結腸直腸腫瘤、胰腺腫瘤、肝腫瘤或卵巢腫瘤。更優選地，實體腫瘤可以為胰腺腫瘤、肝腫瘤或卵巢腫瘤。最優選地，實體腫瘤可以為胰腺腫瘤或卵巢腫瘤。

本發明的特定方面提供了治療有此需要的哺乳動物受試者的結腸直腸癌的方法，所述方法包含向受試者同時、依次或分開施用治療有效量的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽與核糖核苷酸還原酶抑制劑同時、依次或分開施用給所述受試者。

還提供了治療有此需要的哺乳動物受試者的胰腺癌的方法，所述方法包含向受試者同時、依次或分開施用治療有效量的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽與核糖核苷酸還原酶抑制劑。

本文提供了治療有此需要的哺乳動物受試者的肝癌的方法，所述方法包含向受試者同時、依次或分開施用治療有效量的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽與核糖核苷酸還原酶抑制劑。

進一步提供了治療有此需要的哺乳動物受試者的卵巢癌的方法，所述方法包含向受試者同時、依次或分開施用治療有效量的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽與核糖核苷酸還原酶抑制劑。

優選地，用於所述方法中的核糖核苷酸還原酶抑制劑為吉西他濱。

利用蛋白酶體抑制劑的方法

本發明的一些方面提供了治療哺乳動物受試者的增生性病症的方法，所述方法包含：將治療有效量的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽與蛋白酶體抑制劑同時、依次或分開施用給有此需要的患者。

舉例來說，本發明提供了治療有此需要的哺乳動物受試者的癌症(包括實體腫瘤)的方法，所述方法通過將治療有效量的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽與蛋白酶體抑制劑同時、依次或分開施用給所述受試者來進行。

在所述方法的優選方面中，實體腫瘤可以為結腸直腸腫瘤、胰腺腫瘤、肝腫瘤或卵巢腫瘤。更優選地，實體腫瘤可以為胰腺腫瘤、肝腫瘤或卵巢腫瘤。最優選地，實體腫瘤可以為肝腫瘤或卵巢腫瘤。

本發明的特定方面提供了治療有此需要的哺乳動物受試者的結腸直腸癌的方法，所述方法包含將治療有效量的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽與蛋白酶體抑制劑同時、依次或分開施用給所述受試者。

本文還提供了治療有此需要的哺乳動物受試者的胰腺癌的方法，所述方法包含將治療有效量的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽與蛋白酶體抑制劑同時、依次或分開施用給所述受試者。

本文提供了治療有此需要的哺乳動物受試者的肝癌的方法，所述方法包含將治療有效量的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽與蛋白酶體抑制劑同時、依次或分開施用給所述受試者。

進一步提供了治療有此需要的哺乳動物受試者的卵巢癌的方法，所述方法包含將治療有效量的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽與蛋白酶體抑制劑同時、依次或分開施用給所述受試者。

優選地，適用於所述方法中的蛋白酶體抑制劑為26S蛋白酶體抑制劑。最優選地，用於所述方法中的蛋白酶體抑制劑為硼替佐米。

本發明的藥劑

本發明提供了用於治療有此需要的哺乳動物受試者的增生性病症的方法中的式I的化合物，所述方法包含將式I的化合物與選自由以下組成的組的第二藥劑同時、依次或分開施用給受試者：(i)蛋白激酶抑制劑；(ii)核糖核苷酸還原酶抑制劑；和(iii)蛋白酶體抑制劑。

在一些方面中，式I的化合物可以用於治療受試者的癌症的方法中。舉例來說，結腸直腸癌、胰腺癌、肝癌或卵巢癌。

在一些方面中，本發明的第二藥劑選自由以下組成的組：索拉非尼、吉西他濱和硼替佐米。

因此，本發明還提供了用於治療有此需要的哺乳動物受試者的增生性病症的方法中的索拉非尼，其中，所述方法包含將索拉非尼與式I的化合物或其藥學上可接受的鹽同時、依次或分開施用給患者。

在本發明的優選方面中，所述方法為治療受試者的癌症例如結腸直腸癌、胰腺癌、肝癌或卵巢癌的方法。在最優選的方面中，所述方法為治療結腸直腸腫瘤或肝腫瘤的方法。

類似地，本發明提供了用於治療有此需要的哺乳動物受試者的增生性病症的方法中的吉西他濱，其中，所述方法包含將吉西他濱與式I的化合物或其藥學上可接受的鹽同時、依次或分開施用給患者。

在本發明的優選方面中，所述方法為治療受試者的癌症例如結腸直腸癌、胰腺癌、肝癌或卵巢癌的方法。在更優選的方面中，所述方法為治療胰腺腫瘤、肝腫瘤或卵巢腫瘤的方法。在最優選的方面中，所述方法為治療胰腺腫瘤或肝腫瘤的方法。

本發明進一步提供了用於治療有此需要的哺乳動物受試者的增生性病症的方法中的硼替佐米，其中，所述方法包含將硼替佐米與式I的化合物或其藥學上可接受的鹽同時、依次或分開施用給患者。

在本發明的優選方面中，所述方法為治療受試者的癌症例如結腸直腸癌、胰腺癌、肝癌或卵巢癌的方法。在更優選的方面中，所述方法為治療胰腺腫瘤、肝腫瘤或卵巢腫瘤的方法。在最優選的方面中，所述方法為治療肝腫瘤或卵巢腫瘤的方法。

使用方法

本文提供了用於醫療中的式I的化合物。所述使用可以包括將式I的化合物與選自由以下組成的組的第二藥劑同時、依次或分開施用給受試者：(i)蛋白激酶抑制劑；(ii)核糖核苷酸還原酶抑制劑；和(iii)蛋白酶體抑制劑。類似地，本文提供了用於醫療中的藥物組合物，所述藥物組合物包含式I的化合物和藥學上可接受的賦形劑以及任選的選自由以下組成的組的第二藥劑：(i)蛋白激酶抑制劑；(ii)核糖核苷酸還原酶抑制劑；和(iii)蛋白酶體抑制劑。所述使用可以包括用以製備用於治療方法的藥劑。舉例來說，治療哺乳動物受試者例如人類患者的增生性病症或癌症的方法。

此外，本文提供了用以製備用於治療方法的藥劑的索拉非尼、吉西他濱和硼替佐米。舉例來說，治療哺乳動物受試者例如人類患者的增生性病症或癌症的方法。

受試者、給藥和施用方法

術語‘哺乳動物受試者’涵蓋所有哺乳動物。因此，受試者可以為大鼠、小鼠、貓科動物、犬科動物、馬科動物、豬科動物、綿羊科動物、牛科動物、靈長類動物或人類。優選地，受試者為人類患者。

一般來說，要被施用的式I的化合物的有效量將取決於一系列因素，例如所治療的疾病的嚴重程度和受試者的體重。活性化合物通常每天施用一次或多次，例如每天1、2、3或4次，其中，典型的每日總劑量在0.01至1,000mg/kg/天範圍內。

優選地，將式I的化合物以0.5至50mg/kg、優選地0.5至30mg/kg、優選地1至20mg/kg、更優選地5至10mg/kg的劑量施用於人類患者。

優選地，將式I的化合物以每天25mg至4500mg、優選地50mg至3000mg、優選地250mg至1500mg的劑量施用於人類患者。

優選地，式I的化合物或包含式I的化合物的藥物組合物是通過注射施用的。所述施用可以通過輸注(連續)或推注(不連續)施用進行。通過注射施用的方法可以為例如皮下、皮內、肌肉內、靜脈內、動脈內、心內、鞘內、脊柱內、囊內、囊下、眶內、腹膜內、氣管內、表皮下、關節內、蛛網膜下和胸骨內注射。優選地，施用是通過靜脈內輸注或靜脈內注射(推注施用)進行。更優選地，施用是通過靜脈內輸注進行。

藥物組合物

本公開的藥物組合物可以包含式I的化合物和藥學上可接受的賦形劑。舉例來說，藥物組合物可以包含式I的化合物的結晶形式、式I的化合物的加合物的結晶形式和藥學上可接受的賦形劑。

本文所公開的藥物組合物中的QTX125的示例性最終濃度為至少8mg/mL、任選地高達20mg/mL，例如8.5mg/mL或更高、9mg/mL或更高並且更優選地9.5mg/mL或更高。

除了本文所描述的式I的化合物之外，本發明的藥物組合物還可以包含一種或多種所屬領域的技術人員熟知的其它藥學上可接受的成分，包括但不限於藥學上可接受的載體、稀釋劑、賦形劑、佐劑、緩衝劑、pH調節劑、防腐劑、抗氧化劑、抑菌劑、穩定劑、懸浮劑、增溶劑、表面活性劑(例如潤濕劑)、著色劑和等滲溶質(即，使製劑與預期接受者的血液或其它相關體液等滲)。合適的載體、稀釋劑、賦形劑等可以在標準藥學文獻中找到。參見例如《藥物添加劑手冊(Handbook of Pharmaceutical Additives)》，第2版(編者M.Ash和I.Ash),2001(美國紐約恩迪科特的Synapse Information Resources公司)；《雷明頓藥物科學(Remington's Pharmaceutical Sciences)》，第18版，賓夕法尼亞伊斯頓的馬克出版社(Mack Publishing Company),1990；和《藥用輔料手冊(Handbook of Pharmaceutical Excipients)》，第2版，1994。

任選地說，本發明的藥物組合物還包含緩衝劑(即，組合物還包含溶解在其中的緩衝鹽)。任選地說，所述緩衝劑可以選自以下的群組：MES、Bis-Tris、ADA、ACES、PIPES、MOPSO、BES、MOPS、TES、HEPES、DIPSO、MOBS、TAPSO、Tris-HCl、HEPPSO、POPSO、TEA、EPPS、三(羥甲基)甲基甘胺酸(Tricine)、Gly-Gly、N,N-二羥乙基甘胺酸(Bicine)、HEPBS、TAPS、AMPD、TABS、AMPSO、CHES、CAPSO、APS、CHAPS、CABS、磷酸鹽和組胺酸或以上物質的組合。在不希望受理論束縛的情況下，據信使用緩衝劑可以有助於使組合物穩定在生理pH下。水性藥物組合物中的緩衝鹽的濃度範圍可以為 1mM至1M、優選地1mM至100mM、優選地5mM至50mM、優選地5mM至20mM。

藥物組合物還可以包含抗衡離子和鹽，例如鈉抗衡離子、氯離子或溶解在溶液中的NaCl。

除了式I的化合物之外，藥物組合物還可以包含一種或多種其它活性劑，例如一種或多種其它治療劑或預防劑。在一些方面中，所述藥物組合物可以用於提供聯合療法。特別地說，本文所描述的藥物組合物可以包含第二藥劑，例如蛋白激酶抑制劑例如索拉非尼、核糖核苷酸還原酶抑制劑例如吉西他濱或蛋白酶體抑制劑例如硼替佐米。第二藥劑可以為相同組合物的一部分或可以作為單獨組合物提供並且可以同時或不同時施用。

舉例來說，本文公開了一種藥物組合物，所述藥物組合物包含：第一藥劑，其包含式I的化合物或其藥學上可接受的鹽；第二藥劑，其選自由以下組成的組：(i)蛋白激酶抑制劑；(ii)核糖核苷酸還原酶抑制劑；和(iii)蛋白酶體抑制劑；以及藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。在一些方面中，第二藥劑選自由以下組成的組：索拉非尼、吉西他濱和硼替佐米。

第一藥劑(即式I的化合物)與第二藥劑的示例性莫耳比為1：40至1：2.5、優選地1：30至1：2.5、優選地1：25至1：2.5、優選地1：20至1：2.5，例如1：15至1：2.5、優選地1：10至1：2.5、優選地1：9至1：2.5、優選地1：8至1：2.5、優選地1：6至1：2.5、更優選地1：4.5至1：2.5。在本公開的一些方面中，第一藥劑與第二藥劑的莫耳比在1：10至10：1範圍內。

如所屬領域的技術人員將瞭解，本發明一個方面的特點和優選實施例也將關於本發明的其它方面。

實施例

提供以下實施例來說明本發明的有效性。這些實施例旨在為非限制性的。

實施例1-實驗方案

為了在體外評估含有QTX125的聯合療法的溶瘤功效，以EC_25、EC₅₀和EC₇₅劑量向結腸腫瘤細胞、胰腺腫瘤細胞、肝腫瘤細胞和卵巢腫瘤細胞施用索拉非尼、吉西他濱或硼替佐米。共同施用QTX125以產生劑量反應曲線。將在聯合療法施用後計算的QTX125 EC₅₀值與QTX125單一療法EC₅₀值進行比較，從而指示與單獨的QTX125治療相比，含有QTX125的聯合療法是否會實現協同效應(降低的EC₅₀)、累加效應(無位移)或拮抗效應(增加的EC₅₀)。

細胞培養

遵循標準慣例培養結腸腫瘤細胞系(HCT-116；ECACC 91091005)、胰腺腫瘤細胞系(MIAPaCa-2，ECACC 85062806，和Panc-1，ECACC 87092802)、肝腫瘤細胞系(Hep-G2，ECACC 85011430)和卵巢腫瘤細胞系(SK-OV-3，ECACC 91091004)。

簡單來說，在具有10%熱滅活胎牛血清(FCS)(PAA，A15-101)的高葡萄糖DMEM(Sigma D5796)中解凍HCT-116、MiaPaCa-2和Panc-1細胞。在具有1%非必需胺基酸(Sigma M7145)、2mM穀氨醯胺(Sigma G7513)和10% FCS的最低必需培養基(MEM)(Sigma M2279)中解凍Hep-G2和SK-Hep1細胞。在具有15% FCS的McCoy’s 5A培養基(Sigma，M8403)中解凍SK-OV-3細胞。通過在不含陽離子的dPBS(Sigma，D1408)中洗滌一次來使所有細胞傳代，並將所述細胞與胰蛋白酶([0.5μg/ml]/EDTA[0.2μg/ml](Sigma， T4174)於dPBS中)一起培育3分鐘。在37℃下完成傳代，並將細胞轉移到適當的培養基中。在以確定的細胞密度接種之前，在培養基中回收細胞，將所述細胞離心並重新懸浮以進行計數。

細胞活力分析

為了製備細胞以用於活力分析，將細胞轉移到96孔組織培養板(Cultek)中，並以100μL以下密度重新懸浮：10,000個細胞/孔(Hep-G2和MiaPaCa-2)、5000個細胞/孔(Panc-1和SK-OV-3)或3000個細胞/孔(HCT-116)。培育24小時後，移除培養基並用100μL外加有QTX125和測試化學治療劑的培養基替換。本研究中使用的藥劑的儲備溶液示於下表1中。在使用ALAMAR^®和氨基己糖苷酶分析評估細胞活力之前，將細胞再培育72小時。

對於ALAMAR^®藍分析，除去含有QTX125和測試化學治療劑的培養基，並遵循製造商說明書在37℃下使用ALAMAR^®藍(BioSource DAL1100)對細胞進行染色4小時。使用Cytofluor®板讀取器(Millipore)在535/590nm(激發/發射)下測量相對螢光強度。此測量結果與每個孔中存在的活細胞數量直接相關。

對於氨基己糖苷酶分析，除去含有QTX125和測試化學治療劑的培養基，並用PBS洗滌細胞一次。將60μL底物溶液(含有：7.5mM對硝基苯酚-N-乙醯基-β-D-葡萄糖醯胺[Sigma N-9376]、0.1M檸檬酸鈉pH 5.0和0.25% Triton X-100)添加到每個孔中，並在37℃下培育細胞至少1小時。以這種方式培育細胞會使底物溶液變成亮黃色，此時將90μL顯影溶液(含有50mM甘胺酸pH 10.4和5mM EDTA)添加到每個孔中。使用板讀取器記錄在410nm下的吸光度。

對照樣品

包括許多適當的對照樣品。首先，從在含有‘測試’樣品的孔中測量的吸光度值減去在試劑‘空白’孔(僅含有細胞培養基和比色劑)中測量的吸光度值。‘空白’吸光度值通常在測試孔中記錄的值的5%與10%之間。然後，適當時將在測試孔中記錄的吸光度值與在含有以下的孔中記錄的吸光度值進行比較：(i)僅經QTX125刺激的細胞；(ii)僅經索拉非尼、吉西他濱或硼替佐米刺激的細胞和/或(iii)未經刺激的細胞。

資料分析

將對照值標準化到100%，並計算活力百分比(%)。使用資料以使用S型劑量反應(可變斜率)方程繪製對數劑量反應曲線。使用方程1獲得EC₅₀值，其中‘X’為對數濃度；‘Y’為反應輸出，並且假設Y從圖形底部開始並以整體S型到達頂部。

方程1. Y=底部+(頂部-底部)/(1+10^((LogEC₅₀-X)×坡斜率))

計算所有測試條件的組合指數(CI)以能夠鑒定與QTX125單一療法相比，含有QTX125的聯合療法是否能實現協同效應、累加效應或拮抗效應。使用方程2獲得CI，其中(Dm)₁為QTX125的EC_x濃度並且(D)₁為在存在索拉非尼、吉西他濱或硼替佐米的情況下QTX125的EC_x濃度。

方程2. 組合指數(CI)=(D)₁/(Dm)₁

實施例2-評估單獨化學治療劑的溶瘤功效

在評估含有QTX125的聯合療法的溶瘤功效之前，單獨評估每種測試藥劑的溶瘤功效。通過連續稀釋(1：1)產生劑量-反應曲線，從而允許計算單一療法的EC₅₀值。

將化學治療劑以100μM起始濃度添加到孔中。然而，很快確定不可能將此範圍用於所有測試化學治療劑。因此，完成了一項優化研究以鑒定用於每種藥劑和於每個單獨細胞系中的合適的最大(“高”)劑量。優化研究的結果提供於表2中。

僅索拉非尼單一療法促進了100μM目標濃度用於所有細胞系。觀察到硼替佐米具有最高功效，因為適當的高劑量起始濃度被測定為低至1μM。1μM劑量也被確定為適用於HCT-116細胞中的QTX125單一療法的高劑量。與其它測試系(Hep-G2、MiaPaCa-2、Panc-1和SK-OV-3)的相對抗性相比，由於 HCT-116系的敏感性非常高，吉西他濱存在不同結果。暴露於高劑量化學治療劑之後，每個孔中剩餘的活細胞百分比示於下表3.1至3.4中。

如使用ALAMAR®藍分析所測量，高劑量QTX125單一療法成功地介導了所有測試細胞系的殺死。如使用氨基己糖苷酶分析所測量，高劑量QTX125單一療法作為抗肝癌劑最為成功，在72小時內將活Hep-G2細胞群減少了近98%。

如使用ALAMAR®藍分析所測量，高劑量索拉非尼單一療法成功地介導了所有測試細胞系的殺死。如使用氨基己糖苷酶分析所測量，高劑量索拉非尼作為抗肝癌劑最為成功，在72小時內將活Hep-G2細胞群減少了超過98%。

如使用ALAMAR®藍和氨基己糖苷酶分析所測量，高劑量吉西他濱作為抗結腸癌劑最為成功，分別在72小時過程內將活HCT-116細胞群減少了超過98%和80%。

如使用ALAMAR®藍分析所測量，高劑量硼替佐米單一療法成功地介導了所有測試細胞系的殺死。如使用氨基己糖苷酶分析所測量，高劑量硼替佐米作為抗胰腺癌劑最為成功，在72小時內將活Panc-1細胞群減少了97%。

使用細胞活力資料以計算高劑量QTX125、索拉非尼、吉西他濱或硼替佐米單一療法的EC₅₀值，如下表3.5至3.8中所示。

如使用ALAMAR®藍分析所測量，高劑量QTX125單一療法在殺死HCT-116胰腺癌細胞方面最有效(EC₅₀為0.33±0.03μM)。這通過使用氨基己糖苷酶分析得到證實，所述分析還鑒定了QTX125在殺死HCT-116細胞方面最有效(EC₅₀為0.43±0.06μM)。

如使用ALAMAR®藍分析所測量，如果高劑量索拉非尼單一療法用作抗胰腺癌劑，那麼其在以0.62±0.16μM的EC₅₀殺死MiaPaCa-2細胞方面最為有效。如使用氨基己糖苷酶分析所測量，如果高劑量索拉非尼單一療法用作抗肝癌劑，那麼其在以2.70±0.80μM的EC₅₀殺死Hep-G2細胞方面最為有效。

許多細胞系(HCT-116、Hep-G2、Panc-1和SK-OV-3細胞)被鑒定為對高劑量吉西他濱單一療法具有抗性，從而阻礙了完整的EC₅₀值計算。如使用ALAMAR®藍和氨基己糖苷酶分析所鑒定，吉西他濱被鑒定為一種高效的抗胰腺癌劑，在極低劑量下殺死MiaPaCa-2細胞(EC₅₀分別為0.026±0.007μM和0.033±0.004μM)。

如使用ALAMAR®藍分析所鑒定，硼替佐米在殺死Panc-1胰腺癌細胞方面最有效，EC₅₀為0.0062±0.0010μM。如使用氨基己糖苷酶分析所鑒定，硼替佐米在殺死HCT-116結腸癌細胞方面最有效，EC₅₀為0.0066±0.0005μM。

實施例3-評估含有QTX125的聯合療法的溶瘤功效

為了評估含有QTX125的聯合療法的溶瘤功效，計算了索拉非尼、吉西他濱和硼替佐米的單一療法EC₂₅、EC₅₀和EC₇₅劑量(根據實驗3)並以這些固定濃度施用到孔中。將QTX125以一定範圍的濃度共同施用以繪製劑量-反應曲線，以使得可以計算在存在索拉非尼/吉西他濱/硼替佐米的情況下的QTX125的EC₅₀劑量。將QTX125以起始高劑量施用給細胞，並且之後完成1：1稀釋。QTX125和索拉非尼、吉西他濱和硼替佐米的細胞系特異性給藥方案在表4.1、4.2和4.3中提供。在研究的這一部分中，僅採用氨基己糖苷酶分析來評估用含有QTX125的聯合療法治療後的細胞活力。

應該注意，不可能確定適用於所有測試細胞系中的吉西他濱濃度。在對吉西他濱具有抗性的細胞中，使用標稱濃度代替EC₂₅、EC₅₀和EC₇₅劑量(例如，在Panc-1和Hep-G2細胞中使用1、10和100μM標稱劑量)。

下文提供了證明含有QTX125的聯合療法的溶瘤功效的資料。如實施例1中所描述計算組合指數(CI)以指示與QTX125單一療法相比，含有QTX125的聯合療法在介導細胞殺死方面是否會實現協同效應(降低的EC₅₀)、累加效應(無位移)或拮抗效應(增加的EC₅₀)。

提供以下指數以幫助導航表5.1.1至5.5.3中呈現的數據：

5.1.x-HCT-116細胞評估

5.2.x-MiaPaCa-2細胞評估

5.3.x-Hep-G2細胞評估

5.4.x-SK-Ov-3細胞評估

5.5.x-Panc-1細胞評估

5.x.1-QTX125/索拉非尼聯合療法評估

5.x.2-QTX125/吉西他濱聯合療法評估

5.x.3-QTX125/硼替佐米聯合療法評估

在HCT-116結腸癌細胞中，發現QTX125/索拉非尼聯合療法在所有測試條件下均實現協同效應。表5.1.1中呈現的資料顯示為劑量-反應曲線，如圖1中所示。

在HCT-116結腸癌細胞中，QTX125/吉西他濱聯合療法被鑒定為在EC₂₅劑量的吉西他濱時產生拮抗效應。表5.1.2中呈現的資料顯示為劑量-反應曲線，如圖2中所示。注意，不可能從給藥EC₅₀和EC₇₅吉西他濱的孔中推導出QTX125劑量-反應曲線，並且因此無法計算CI。

在HCT-116結腸癌細胞中，發現QTX125/硼替佐米聯合療法在EC₇₅劑量的硼替佐米時實現協同效應。在EC₂₅劑量下注意到累加效應，並且在EC₅₅劑量下鑒定到拮抗效應。表5.1.3中呈現的資料顯示為劑量-反應曲線，如圖3中所示。

在MiaPaCa-2胰腺癌細胞中，發現QTX125/索拉非尼聯合療法在所有測試條件下均產生拮抗效應。表5.2.1中呈現的資料顯示為劑量-反應曲線，如圖4中所示。

在MiaPaCa-2胰腺癌細胞中，發現QTX125/吉西他濱聯合療法在所有測試條件下均實現協同效應。表5.2.2中呈現的資料顯示為劑量-反應曲線，如圖4中所示。

在MiaPaCa-2胰腺癌細胞中，發現QTX125/硼替佐米聯合療法在EC₇₅劑量的硼替佐米時產生拮抗效應。在EC₂₅和EC₅₀劑量下注意到累加效應。表5.2.3中呈現的資料顯示為劑量-反應曲線，如圖5中所示。

表5.3.1. QTX125/索拉非尼聯合療法在Hep-G2細胞中的溶瘤功效評估。所提供的值為以奈米莫耳(nM)為單位表示的濃度或以任意單位表示的組合指數(CI)。

在Hep-G2肝癌細胞中，發現QTX125/索拉非尼聯合療法在所有測試條件下均實現協同效應。表5.3.1中呈現的資料顯示為劑量-反應曲線，如圖7中所示。

在Hep-G2肝癌細胞中，發現QTX125/吉西他濱聯合療法在所有測試條件下均實現協同效應。QTX125/吉西他濱聯合療法在EC₇₅劑量的吉西他濱時在介導細胞殺死方面特別有效。表5.3.2中呈現的資料顯示為劑量-反應曲線，如圖8中所示。

在Hep-G2肝癌細胞中，發現QTX125/硼替佐米聯合療法在所有測試條件下均實現協同效應。表5.3.3中呈現的資料顯示為劑量-反應曲線，如圖9中所示。

在SK-Ov-3卵巢癌細胞中，發現QTX125/索拉非尼聯合療法在EC₂₅和EC₇₅劑量下實現協同效應。在EC₅₀劑量下產生拮抗效應。表5.4.1中呈現的資料顯示為劑量-反應曲線，如圖10中所示。

在SK-Ov-3卵巢癌細胞中，發現QTX125/吉西他濱聯合療法在EC₂₅和EC₇₅劑量下實現協同效應。在EC₅₀劑量下產生拮抗效應。表5.4.2中呈現的資料顯示為劑量-反應曲線，如圖11中所示。

在SK-Ov-3卵巢癌細胞中，發現QTX125/硼替佐米聯合療法在所有測試條件下均實現協同效應。表5.4.3中呈現的資料顯示為劑量-反應曲線，如圖12中所示。

在Panc-1胰腺癌細胞中，發現QTX125/索拉非尼聯合療法在EC₇₅劑量下實現協同效應。在EC₂₅和EC₅₀劑量下產生拮抗效應。表5.5.1中呈現的資料顯示為劑量-反應曲線，如圖13中所示。

在Panc-1胰腺癌細胞中，發現QTX125/吉西他濱聯合療法在所有測試條件下均實現協同效應。表5.5.2中呈現的資料顯示為劑量-反應曲線，如圖14中所示。

在Panc-1胰腺癌細胞中，發現QTX125/硼替佐米聯合療法在所有測試條件下均實現協同效應。表5.5.3中呈現的資料顯示為劑量-反應曲線，如圖15中所示。

結論

本研究的目的在於確定與化學治療劑索拉非尼、吉西他濱和硼替佐米共同施用的QTX125的溶瘤功效。使用代表結腸癌、胰腺癌、肝癌和卵巢癌的五種不同的腫瘤細胞系評估功效。

鑒定出所有單獨的測試化學治療劑(即，作為單一療法)的EC₅₀值，從而允許鑒定用於聯合療法分析中的適當劑量。繪製劑量-反應曲線以鑒定與索拉非尼、吉西他濱或硼替佐米(在EC₂₅、EC₅₀和EC₇₅劑量下)共同施用的QTX125的EC₅₀變化。隨後，將單一療法EC₅₀值與測試EC₅₀值進行比較以計算組合指數(CI)，從而指示與QTX125單一療法相比，給定QTX125聯合療法是否會實現協同效應(降低的EC₅₀)、累加效應(無位移)或拮抗效應(增加的EC₅₀)。

所述研究鑒定了在所有腫瘤細胞系中QTX125與硼替佐米之間的協同效應，MiaPaCa-2胰腺癌細胞除外，其中注意到累加/輕度拮抗效應。然而，應該注意，這種聯合在介導Panc-1胰腺癌細胞殺死方面特別有效。

QTX125/吉西他濱聯合療法在所有腫瘤細胞系中類似地實現了協同效應，HCT-116結腸癌細胞除外，其中這種聯合產生了輕度拮抗效應。

然而，QTX125/索拉非尼聯合療法的溶瘤功效變化更大，其中在HCT-116、Hep-G2和Sk-Ov-3細胞中鑒定到協同效應。在MiaPaCa-2細胞中，所述聯合產生了拮抗效應。在Panc-1細胞中，在EC₇₅劑量的索拉非尼時鑒定到協同效應，而在EC₂₅和EC₅₀劑量下產生了拮抗效應。

總結

總而言之，本節提供的實驗資料證實了本發明的功效和治療效用。所述資料成功地證明了含有QTX125的聯合療法實現了協同作用，從而在體外介導了對結腸腫瘤細胞、胰腺腫瘤細胞、肝腫瘤細胞和卵巢腫瘤細胞的有效殺死。因此，含有QTX125的聯合療法可能為用於治療疾病的寶貴工具。

以上概述了數個實施例的部件、使得在本發明所屬技術領域中具有通常知識者可以更理解本發明實施例的概念。在本發明所屬技術領域中具有通常知識者應該理解、可以使用本發明實施例作為基礎、來設計或修改其他製程和結構、以實現與在此所介紹的實施例相同的目的及/或達到相同的好處。在本發明所屬技術領域中具有通常知識者也應該理解、這些等效的結構並不背離本發明的精神和範圍、並且在不背離本發明的精神和範圍的情況下、在此可以做出各種改變、取代和其他選擇。因此、本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定為準。

Claims

一種式I的化合物與第二藥劑的組合在製備用於治療哺乳動物受試者的增生性病症的藥劑中的用途，
其中，所述治療包含向所述受試者同時、依次或分開施用治療有效量的式I的化合物和第二藥劑，所述第二藥劑選自由索拉非尼、吉西他濱和硼替佐米組成的組，並且其中所述增生性病症為癌症。
根據請求項1所述的用途，其中，所述癌症包含實體腫瘤。
根據請求項2所述的用途，其中，所述實體腫瘤包含結腸直腸腫瘤、胰腺腫瘤、肝腫瘤或卵巢腫瘤。
根據請求項1至3中任一項所述的用途，其中，所述第二藥劑為索拉非尼。
根據請求項4所述的用途，其中，所述癌症為結腸直腸癌、胰腺癌、肝癌或卵巢癌。
根據請求項4所述的用途，其中，所述癌症為結腸直腸癌或肝癌。
根據請求項1至3中任一項所述的用途，其中，所述第二藥劑為吉西他濱。
根據請求項7所述的用途，其中，所述癌症為胰腺癌、肝癌或卵巢癌。
根據請求項7所述的用途，其中，所述癌症為胰腺癌或卵巢癌。
根據請求項1至3中任一項所述的用途，其中，所述第二藥劑為硼替佐米。
根據請求項10所述的用途，其中，所述癌症為結腸直腸癌、胰腺癌、肝癌或卵巢癌。
根據請求項10所述的用途，其中，所述癌症為胰腺癌、肝癌或卵巢癌。
根據請求項10所述的用途，其中，所述癌症為肝癌或卵巢癌。
一種藥物組合物，其包含：a)包含式I的化合物或其藥學上可接受的鹽的第一藥劑
b)選自由索拉非尼、吉西他濱和硼替佐米組成的組的第二藥劑；和c)藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。
根據請求項14所述的藥物組合物，其中，所述第一藥劑與所述第二藥劑的莫耳比在1：10至10：1的範圍內。
根據請求項14所述的藥物組合物，其中，所述藥物組合物包含藥學上可接受的賦形劑。
根據請求項14所述的藥物組合物，其中，所述第二藥劑為索拉非尼。
根據請求項14所述的藥物組合物，其中，所述第二藥劑為吉西他濱。
根據請求項14所述的藥物組合物，其中，所述第二藥劑為硼替佐米。
根據請求項15所述的藥物組合物，其中，所述第二藥劑為索拉非尼。
根據請求項15所述的藥物組合物，其中，所述第二藥劑為吉西他濱。
根據請求項15所述的藥物組合物，其中，所述第二藥劑為硼替佐米。
根據請求項14至22中任一項所述的藥物組合物，其中，所述藥物組合物用作藥劑。
根據請求項23所述的藥物組合物，其中，所述藥劑用於治療癌症。
根據請求項24所述的藥物組合物，其中，所述癌症包含實體腫瘤。
根據請求項25所述的藥物組合物，其中，所述癌症包含結腸直腸腫瘤、胰腺腫瘤、肝腫瘤或卵巢腫瘤。
一種根據請求項14至22中任一項所述的藥物組合物在製備用於治療哺乳動物受試者中的癌症的藥劑中的用途。
根據請求項27所述的用途，其中，所述癌症包含實體腫瘤。
根據請求項28所述的用途，其中，所述實體腫瘤包含結腸直腸腫瘤、胰腺腫瘤、肝腫瘤或卵巢腫瘤。
一種藥劑，所述藥劑包括根據請求項14至22中任一項所述的藥物組合物。
根據請求項30所述的藥劑，其中，所述藥劑用於治療癌症。
根據請求項31所述的藥劑，其中，所述癌症包含實體腫瘤。
根據請求項32所述的藥劑，其中，所述癌症包含結腸直腸腫瘤、胰腺腫瘤、肝腫瘤或卵巢腫瘤。
根據請求項30至33中任一項所述的藥劑，其中，所述第二藥劑為索拉非尼。
根據請求項30至33中任一項所述的藥劑，其中，所述第二藥劑為吉西他濱。
根據請求項30至33中任一項所述的藥劑，其中，所述第二藥劑為硼替佐米。