TWI824364B - 結合trop2的抗體及其用途 - Google Patents
結合trop2的抗體及其用途 Download PDFInfo
- Publication number
- TWI824364B TWI824364B TW110148873A TW110148873A TWI824364B TW I824364 B TWI824364 B TW I824364B TW 110148873 A TW110148873 A TW 110148873A TW 110148873 A TW110148873 A TW 110148873A TW I824364 B TWI824364 B TW I824364B
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- antibody
- trop2
- antigen
- seq
- antibodies
- Prior art date
Links
- 102100027212 Tumor-associated calcium signal transducer 2 Human genes 0.000 title description 18
- 101150117918 Tacstd2 gene Proteins 0.000 title description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 49
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 28
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 claims abstract description 18
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 216
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 127
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 76
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 76
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 74
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 66
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 40
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 39
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims description 26
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims description 26
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 21
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 21
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 20
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 18
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 claims description 18
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 17
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 17
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 17
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 9
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 9
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 9
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 8
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 7
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 7
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 7
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 7
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 7
- 208000005016 Intestinal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 6
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 6
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 5
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 claims description 3
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 claims description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 3
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 claims description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 claims description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 abstract description 12
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 abstract description 12
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract description 12
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 abstract description 12
- 244000309459 oncolytic virus Species 0.000 abstract description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 96
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 87
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 description 79
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 62
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 61
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 54
- 102000046001 human TACSTD2 Human genes 0.000 description 45
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 33
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 31
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 31
- 101100368708 Homo sapiens TACSTD2 gene Proteins 0.000 description 30
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 26
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 25
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 23
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 23
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 22
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 21
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 21
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 20
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 20
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 19
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 17
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 16
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 16
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 16
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 15
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 15
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 12
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 12
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 11
- 230000005888 antibody-dependent cellular phagocytosis Effects 0.000 description 11
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 11
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 11
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 11
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 11
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 11
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 11
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 10
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 10
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 10
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 9
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 9
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 9
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 9
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 9
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 9
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 8
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 8
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 8
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 8
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 8
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 8
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 8
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 8
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 8
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 8
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 8
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 8
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 7
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 7
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 7
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical group C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 6
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 6
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 6
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- FJHBVJOVLFPMQE-QFIPXVFZSA-N 7-Ethyl-10-Hydroxy-Camptothecin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CC)=C(CN3C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=C33)=O)C3=NC2=C1 FJHBVJOVLFPMQE-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 5
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 5
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 5
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 5
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 5
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 5
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 5
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 5
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 4
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 4
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 4
- -1 aromatic amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 4
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 4
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 4
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 4
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 4
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 4
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000009747 swallowing Effects 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 4'-epidoxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N Epirubicin Natural products COc1cccc2C(=O)c3c(O)c4CC(O)(CC(OC5CC(N)C(=O)C(C)O5)c4c(O)c3C(=O)c12)C(=O)CO HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 3
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 description 3
- 101150030213 Lag3 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 3
- 101100368709 Mus musculus Tacstd2 gene Proteins 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 3
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 3
- SCJNCDSAIRBRIA-DOFZRALJSA-N arachidonyl-2'-chloroethylamide Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(=O)NCCCl SCJNCDSAIRBRIA-DOFZRALJSA-N 0.000 description 3
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 3
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 3
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 3
- 229960001904 epirubicin Drugs 0.000 description 3
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 3
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 description 3
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 3
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- ULRUOUDIQPERIJ-PQURJYPBSA-N sacituzumab govitecan Chemical compound N([C@@H](CCCCN)C(=O)NC1=CC=C(C=C1)COC(=O)O[C@]1(CC)C(=O)OCC2=C1C=C1N(C2=O)CC2=C(C3=CC(O)=CC=C3N=C21)CC)C(=O)COCC(=O)NCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCN(N=N1)C=C1CNC(=O)C(CC1)CCC1CN1C(=O)CC(SC[C@H](N)C(O)=O)C1=O ULRUOUDIQPERIJ-PQURJYPBSA-N 0.000 description 3
- 229950000143 sacituzumab govitecan Drugs 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N (2s)-2-[[(2r,3r)-3-methoxy-3-[(2s)-1-[(3r,4s,5s)-3-methoxy-5-methyl-4-[methyl-[(2s)-3-methyl-2-[[(2s)-3-methyl-2-(methylamino)butanoyl]amino]butanoyl]amino]heptanoyl]pyrrolidin-2-yl]-2-methylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CN[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N(C)[C@@H]([C@@H](C)CC)[C@H](OC)CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 2
- 102100021266 Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- GAGWJHPBXLXJQN-UORFTKCHSA-N Capecitabine Chemical compound C1=C(F)C(NC(=O)OCCCCC)=NC(=O)N1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O1 GAGWJHPBXLXJQN-UORFTKCHSA-N 0.000 description 2
- GAGWJHPBXLXJQN-UHFFFAOYSA-N Capecitabine Natural products C1=C(F)C(NC(=O)OCCCCC)=NC(=O)N1C1C(O)C(O)C(C)O1 GAGWJHPBXLXJQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010058546 Cyclin D1 Proteins 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 230000000970 DNA cross-linking effect Effects 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 108010019236 Fucosyltransferases Proteins 0.000 description 2
- 102100024165 G1/S-specific cyclin-D1 Human genes 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 2
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 2
- 238000012450 HuMAb Mouse Methods 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 2
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940079156 Proteasome inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 108010073443 Ribi adjuvant Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 2
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 2
- 102000012086 alpha-L-Fucosidase Human genes 0.000 description 2
- 108010061314 alpha-L-Fucosidase Proteins 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003080 antimitotic agent Substances 0.000 description 2
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 229960004117 capecitabine Drugs 0.000 description 2
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 2
- 190000008236 carboplatin Chemical compound 0.000 description 2
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 2
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 2
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 2
- 238000012054 celltiter-glo Methods 0.000 description 2
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 108091036078 conserved sequence Proteins 0.000 description 2
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 2
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 101150023212 fut8 gene Proteins 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003276 histone deacetylase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229940121372 histone deacetylase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 2
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000030147 nuclear export Effects 0.000 description 2
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003207 proteasome inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229940121649 protein inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 239000012268 protein inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 2
- 238000012409 standard PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940121358 tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 239000005483 tyrosine kinase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N vinorelbine Chemical compound C1N(CC=2C3=CC=CC=C3NC=22)CC(CC)=C[C@H]1C[C@]2(C(=O)OC)C1=CC([C@]23[C@H]([C@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N 0.000 description 2
- 229960002066 vinorelbine Drugs 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- AGGWFDNPHKLBBV-YUMQZZPRSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-methylbutanoyl]amino]-5-(carbamoylamino)pentanoic acid Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=O AGGWFDNPHKLBBV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- AUXMWYRZQPIXCC-KNIFDHDWSA-N (2s)-2-amino-4-methylpentanoic acid;(2s)-2-aminopropanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O.CC(C)C[C@H](N)C(O)=O AUXMWYRZQPIXCC-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 1
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- AAQGRPOPTAUUBM-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AAQGRPOPTAUUBM-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N Ala-Ala-His Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- ZIBWKCRKNFYTPT-ZKWXMUAHSA-N Ala-Asn-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ZIBWKCRKNFYTPT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- LIWMQSWFLXEGMA-WDSKDSINSA-N Ala-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N LIWMQSWFLXEGMA-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 101710146120 Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- PTNFNTOBUDWHNZ-GUBZILKMSA-N Asn-Arg-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O PTNFNTOBUDWHNZ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- LJUOLNXOWSWGKF-ACZMJKKPSA-N Asn-Asn-Glu Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N LJUOLNXOWSWGKF-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- KHCNTVRVAYCPQE-CIUDSAMLSA-N Asn-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KHCNTVRVAYCPQE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FANQWNCPNFEPGZ-WHFBIAKZSA-N Asp-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O FANQWNCPNFEPGZ-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 1
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical group [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108091007741 Chimeric antigen receptor T cells Proteins 0.000 description 1
- 102100040836 Claudin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000600 Claudin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100026098 Claudin-7 Human genes 0.000 description 1
- 108050007296 Claudin-7 Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000699662 Cricetomys gambianus Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- 102100026359 Cyclic AMP-responsive element-binding protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710112752 Cytotoxin Proteins 0.000 description 1
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 1
- 102000003915 DNA Topoisomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000323 DNA Topoisomerases Proteins 0.000 description 1
- 239000012625 DNA intercalator Substances 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000006471 Fucosyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 101150074355 GS gene Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 201000003741 Gastrointestinal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- NUSWUSKZRCGFEX-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Cys Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NUSWUSKZRCGFEX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000051366 Glycosyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 108700023372 Glycosyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 102100021519 Hemoglobin subunit beta Human genes 0.000 description 1
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000819490 Homo sapiens Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101000855516 Homo sapiens Cyclic AMP-responsive element-binding protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000934346 Homo sapiens T-cell surface antigen CD2 Proteins 0.000 description 1
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 1
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOVUXUSIGXCREV-DKIMLUQUSA-N Ile-Leu-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IOVUXUSIGXCREV-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 1
- 102000015271 Intercellular Adhesion Molecule-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 244000207740 Lemna minor Species 0.000 description 1
- 235000006439 Lemna minor Nutrition 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 241001045988 Neogene Species 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- WEMYTDDMDBLPMI-DKIMLUQUSA-N Phe-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N WEMYTDDMDBLPMI-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 1
- YTILBRIUASDGBL-BZSNNMDCSA-N Phe-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 YTILBRIUASDGBL-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- KIQUCMUULDXTAZ-HJOGWXRNSA-N Phe-Tyr-Tyr Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(O)=O KIQUCMUULDXTAZ-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 229920002732 Polyanhydride Polymers 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 1
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 description 1
- 235000001855 Portulaca oleracea Nutrition 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 102000003923 Protein Kinase C Human genes 0.000 description 1
- 108090000315 Protein Kinase C Proteins 0.000 description 1
- 108010044012 STAT1 Transcription Factor Proteins 0.000 description 1
- 108010017324 STAT3 Transcription Factor Proteins 0.000 description 1
- 101100221606 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) COS7 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- QMCDMHWAKMUGJE-IHRRRGAJSA-N Ser-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QMCDMHWAKMUGJE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- FZXOPYUEQGDGMS-ACZMJKKPSA-N Ser-Ser-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O FZXOPYUEQGDGMS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- DKGRNFUXVTYRAS-UBHSHLNASA-N Ser-Ser-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O DKGRNFUXVTYRAS-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- 102100029904 Signal transducer and activator of transcription 1-alpha/beta Human genes 0.000 description 1
- 102100024040 Signal transducer and activator of transcription 3 Human genes 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 description 1
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 1
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N Thr-Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N 0.000 description 1
- 101710183280 Topoisomerase Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 208000003721 Triple Negative Breast Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- 102000007537 Type II DNA Topoisomerases Human genes 0.000 description 1
- 108010046308 Type II DNA Topoisomerases Proteins 0.000 description 1
- ARJASMXQBRNAGI-YESZJQIVSA-N Tyr-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N ARJASMXQBRNAGI-YESZJQIVSA-N 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- QRZVUAAKNRHEOP-GUBZILKMSA-N Val-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QRZVUAAKNRHEOP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- AEMPCGRFEZTWIF-IHRRRGAJSA-N Val-Leu-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O AEMPCGRFEZTWIF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002679 ablation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004104 aryloxy group Chemical group 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N but-3-enoic acid;ethene Chemical compound C=C.OC(=O)CC=C DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000012200 cell viability kit Methods 0.000 description 1
- 239000012094 cell viability reagent Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000009920 chelation Effects 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000022811 deglycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000005038 ethylene vinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000012637 gene transfection Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 210000004013 groin Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 102000046699 human CD14 Human genes 0.000 description 1
- 230000014726 immortalization of host cell Effects 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000010297 mechanical methods and process Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 208000010658 metastatic prostate carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 101150091879 neo gene Proteins 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000006548 oncogenic transformation Effects 0.000 description 1
- 230000000174 oncolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000005305 organ development Effects 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000018883 protein targeting Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000013643 reference control Substances 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- JJGWLCLUQNFDIS-GTSONSFRSA-M sodium;1-[6-[5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]hexanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)CCCCCNC(=O)CCCC[C@H]1[C@H]2NC(=O)N[C@H]2CS1 JJGWLCLUQNFDIS-GTSONSFRSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 125000003003 spiro group Chemical group 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000023895 stem cell maintenance Effects 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000037317 transdermal delivery Effects 0.000 description 1
- 238000013271 transdermal drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000014723 transformation of host cell by virus Effects 0.000 description 1
- 206010044412 transitional cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 208000022679 triple-negative breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002993 trophoblast Anatomy 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 208000023747 urothelial carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/567—Framework region [FR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/77—Internalization into the cell
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本發明提供了一種與Trop2特異結合的分離的單株抗體。還提供編碼該抗體的核酸分子,以及用於表現該抗體的表現載體、宿主細胞和方法。本發明還提供包含該抗體的免疫偶聯物、雙特異性分子、嵌合抗原受體、溶瘤病毒和藥物組合物,以及使用本發明抗體的診斷或治療方法。
Description
本發明涉及一種與Trop2特異結合的抗體、及其製備和用途,尤其是其在診斷、預防和治療與Trop2相關的疾病中的用途,疾病包括腫瘤,例如乳癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、腸癌等。
滋養層細胞表面抗原2 (Trop2),又稱為腫瘤關聯鈣信號傳遞子2 (TACSTD2)、膜組分1表面標記1 (M1S1)、上皮醣蛋白1 (EGP1)或腸胃抗原733-1 (GA733-1),是一種I型跨膜細胞表面醣蛋白。
經無內含子基因的編碼,Trop2共有323個胺基酸殘基。該蛋白可以傳遞胞內鈣信號,且含有守恆的4,5-二磷酸磷脂醯肌醇(PIP(2))結合基序以及與蛋白激酶C相互作用的絲胺酸磷酸化位址。Trop2還與IGF-1、Claudin-1、Claudin-7、以及細胞週期蛋白D1相互作用。例如,Trop2經由週期蛋白D1和ERK-MAPK途徑活化CREB1、NF-κB、STAT1和STAT3,促成腫瘤細胞發展。
Trop2在很多正常組織中表現,在器官發生和幹細胞維持方面起到重要作用。同時,Trop2也在很多人的癌細胞中大量表現,例如乳癌、胃癌、胰腺癌和卵巢癌細胞,且Trop2的過度表現與增加的腫瘤生長、腫瘤侵襲性、腫瘤轉移以及較差的預後相關。例如,腸腫瘤細胞和卵巢腫瘤細胞中的Trop2低表現抑制細胞增殖。Trop2過度表現增加胰腺癌細胞的遷移。因此,Trop2被認為是潛在的治療標的。
研究表明,Trop2抗體抑制體內腫瘤生長,減少腸癌細胞和乳腺癌細胞的體內細胞遷移。已經證實Sacituzumab govitecan (IMMU-132),一種Trop2抗體-SN-38耦聯藥物,在一些腫瘤細胞株移植模型中有效果,且正在患有頑抗性三陰性乳癌、轉移性尿路上皮癌和耐受去勢的轉移前列腺癌的病人中做臨床試驗,嗜中性顆粒細胞缺乏和腹瀉是最常見的副作用。
因此,本領域迫切需要開發一種具有較佳的抗腫瘤效果並且毒性低的Trop2單株抗體。
本發明的目的就是提供一種具有較佳的抗腫瘤效果並且毒性低的Trop2單株抗體。
在本發明的第一方面,提供了一種Trop-2的抗體或抗原結合片段,包含如下的互補決定區(CDR):
(a) SEQ ID NO: 192-220中任一所示的重鏈可變區(VH)中含有的HCDR1或其序列的變體、HCDR2或其序列的變體、以及HCDR3或其序列的變體;和/或
(b) SEQ ID NO: 221-240中任一所示的輕鏈可變區(VL)中含有的LCDR1或其序列的變體、LCDR2或其序列的變體、以及LCDR3或其序列的變體;
優選地,所述序列的變體為與其來源CDR相比為具有一個或幾個胺基酸的置換、缺失或添加(例如1個,2個或3個胺基酸的置換、缺失或添加)的CDR;優選地,所述的置換為守恆置換。
在另一優選例中,所述抗體或抗原結合蛋白的重鏈可變區VH具有選自下組的互補決定區CDR組合:
(1) 如SEQ ID NO: 19所示的CDR1、如SEQ ID NO: 47所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 86所示的CDR3;
(2) 如SEQ ID NO: 20所示的CDR1、如SEQ ID NO: 48所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 87所示的CDR3;
(3) 如SEQ ID NO: 20所示的CDR1、如SEQ ID NO: 48所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 87所示的CDR3;
(4) 如SEQ ID NO: 21所示的CDR1、如SEQ ID NO: 49所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 88所示的CDR3;
(5) 如SEQ ID NO: 21所示的CDR1、如SEQ ID NO: 50所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 89所示的CDR3;
(6) 如SEQ ID NO: 22所示的CDR1、如SEQ ID NO: 51所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 90所示的CDR3;
(7) 如SEQ ID NO: 23所示的CDR1、如SEQ ID NO: 52所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 91所示的CDR3;
(8) 如SEQ ID NO: 24所示的CDR1、如SEQ ID NO: 53所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 92所示的CDR3;
(9) 如SEQ ID NO: 25所示的CDR1、如SEQ ID NO: 54所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 87所示的CDR3;
(10) 如SEQ ID NO: 26所示的CDR1、如SEQ ID NO: 51所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 93所示的CDR3;
(11) 如SEQ ID NO: 24所示的CDR1、如SEQ ID NO: 53所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 92所示的CDR3;
(12) 如SEQ ID NO: 21所示的CDR1、如SEQ ID NO: 50所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 89所示的CDR3;
(13) 如SEQ ID NO: 27所示的CDR1、如SEQ ID NO: 55所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 94所示的CDR3;
(14) 如SEQ ID NO: 27所示的CDR1、如SEQ ID NO: 55所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 95所示的CDR3;
(15) 如SEQ ID NO: 27所示的CDR1、如SEQ ID NO: 55所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 94所示的CDR3;
(16) 如SEQ ID NO: 19所示的CDR1、如SEQ ID NO: 52所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 96所示的CDR3;
(17) 如SEQ ID NO: 27所示的CDR1、如SEQ ID NO: 55所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 95所示的CDR3;
(18) 如SEQ ID NO: 27所示的CDR1、如SEQ ID NO: 55所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 95所示的CDR3;
(19) 如SEQ ID NO: 27所示的CDR1、如SEQ ID NO: 55所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 97所示的CDR3;
(20) 如SEQ ID NO: 27所示的CDR1、如SEQ ID NO: 55所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 94所示的CDR3;
(21) 如SEQ ID NO: 27所示的CDR1、如SEQ ID NO: 55所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 94所示的CDR3;
(22) 如SEQ ID NO: 27所示的CDR1、如SEQ ID NO: 56所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 95所示的CDR3;
(23) 如SEQ ID NO: 28所示的CDR1、如SEQ ID NO: 57所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 98所示的CDR3;
(24) 如SEQ ID NO: 27所示的CDR1、如SEQ ID NO: 55所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 95所示的CDR3;
(25) 如SEQ ID NO: 29所示的CDR1、如SEQ ID NO: 58所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 99所示的CDR3;
(26) 如SEQ ID NO: 27所示的CDR1、如SEQ ID NO: 55所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 94所示的CDR3;
(27) 如SEQ ID NO: 23所示的CDR1、如SEQ ID NO: 59所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 100所示的CDR3;
(28) 如SEQ ID NO: 30所示的CDR1、如SEQ ID NO: 51所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 101所示的CDR3;
(29) 如SEQ ID NO: 31所示的CDR1、如SEQ ID NO: 59所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 100所示的CDR3;或
(30) 如SEQ ID NO: 27所示的CDR1、如SEQ ID NO: 55所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 94所示的CDR3;
其中,上述胺基酸序列中任意一種胺基酸序列還包括任選地經過添加、缺失、修飾和/或取代至少一個胺基酸殘基的,並能夠保留Trop2結合親和力的衍生序列。
在另一優選例中,所述重鏈可變區具有SEQ ID NO: 192-220中任一項所示的胺基酸序列。
在另一優選例中,所述抗體或抗原結合蛋白的重鏈還包括重鏈恆定區。
在另一優選例中,所述重鏈恆定區為人源的。
在另一優選例中,所述重鏈恆定區為人抗體的重鏈恆定區Fc結構域;所述人抗體的重鏈恆定區Fc結構域包括人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重鏈恆定區Fc結構域。
在另一優選例中,所述重鏈恆定區包含SEQ ID NO: 292所示的胺基酸序列。
在另一優選例中,所述抗體或抗原結合蛋白的重鏈具有如SEQ ID NO: 241-269中任一項所示的胺基酸序列。
在另一優選例中,所述抗體或抗原結合蛋白還包括一輕鏈,所述輕鏈中包含一輕鏈可變區,所述的輕鏈可變區具有選自下組的互補決定區CDR組合:
(1) 如SEQ ID NO: 115所示的CDR1、如SEQ ID NO: 144所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 169所示的CDR3;
(2) 如SEQ ID NO: 116所示的CDR1、如SEQ ID NO: 145所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 170所示的CDR3;
(3) 如SEQ ID NO: 117所示的CDR1、如SEQ ID NO: 146所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 171所示的CDR3;
(4) 如SEQ ID NO: 118所示的CDR1、如SEQ ID NO: 147所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 172所示的CDR3;
(5) 如SEQ ID NO: 119所示的CDR1、如SEQ ID NO: 148所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 173所示的CDR3;
(6) 如SEQ ID NO: 120所示的CDR1、如SEQ ID NO: 146所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 174所示的CDR3;
(7) 如SEQ ID NO: 121所示的CDR1、如SEQ ID NO: 145所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 175所示的CDR3;
(8) 如SEQ ID NO: 122所示的CDR1、如SEQ ID NO: 149所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 176所示的CDR3;
(9) 如SEQ ID NO: 123所示的CDR1、如SEQ ID NO: 145所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 177所示的CDR3;
(10) 如SEQ ID NO: 120所示的CDR1、如SEQ ID NO: 146所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 174所示的CDR3;
(11) 如SEQ ID NO: 124所示的CDR1、如SEQ ID NO: 149所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 178所示的CDR3;
(12) 如SEQ ID NO: 125所示的CDR1、如SEQ ID NO: 148所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 179所示的CDR3;
(13) 如SEQ ID NO: 126所示的CDR1、如SEQ ID NO: 150所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 180所示的CDR3;
(14) 如SEQ ID NO: 127所示的CDR1、如SEQ ID NO: 151所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 180所示的CDR3;
(15) 如SEQ ID NO: 126所示的CDR1、如SEQ ID NO: 150所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 180所示的CDR3;
(16) 如SEQ ID NO: 128所示的CDR1、如SEQ ID NO: 152所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 181所示的CDR3;
(17) 如SEQ ID NO: 127所示的CDR1、如SEQ ID NO: 151所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 180所示的CDR3;
(18) 如SEQ ID NO: 127所示的CDR1、如SEQ ID NO: 151所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 180所示的CDR3;
(19) 如SEQ ID NO: 127所示的CDR1、如SEQ ID NO: 150所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 180所示的CDR3;
(20) 如SEQ ID NO: 127所示的CDR1、如SEQ ID NO: 150所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 180所示的CDR3;
(21) 如SEQ ID NO: 127所示的CDR1、如SEQ ID NO: 150所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 180所示的CDR3;
(22) 如SEQ ID NO: 127所示的CDR1、如SEQ ID NO: 151所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 180所示的CDR3;
(23) 如SEQ ID NO: 129所示的CDR1、如SEQ ID NO: 144所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 182所示的CDR3;
(24) 如SEQ ID NO: 127所示的CDR1、如SEQ ID NO: 151所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 180所示的CDR3;
(25) 如SEQ ID NO: 130所示的CDR1、如SEQ ID NO: 146所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 183所示的CDR3;
(26) 如SEQ ID NO: 127所示的CDR1、如SEQ ID NO: 150所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 180所示的CDR3;
(27) 如SEQ ID NO: 131所示的CDR1、如SEQ ID NO: 153所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 184所示的CDR3;
(28) 如SEQ ID NO: 132所示的CDR1、如SEQ ID NO: 154所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 185所示的CDR3;
(29) 如SEQ ID NO: 133所示的CDR1、如SEQ ID NO: 153所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 184所示的CDR3;
(30) 如SEQ ID NO: 127所示的CDR1、如SEQ ID NO: 150所示的CDR2,和如SEQ ID NO: 180所示的CDR3;
其中,上述胺基酸序列中任意一種胺基酸序列還包括任選地經過添加、缺失、修飾和/或取代至少一個胺基酸殘基的,並能夠保留Trop2結合親和力的衍生序列。
在另一優選例中,所述輕鏈可變區具有SEQ ID NO: 221-240任一項所示的胺基酸序列。
在另一優選例中,所述抗體或抗原結合蛋白的輕鏈還包括輕鏈恆定區。
在另一優選例中,所述輕鏈恆定區為人抗體恆定區。
在另一優選例中,所述輕鏈恆定區為人抗體輕鏈κ恆定區。
在另一優選例中,所述輕鏈恆定區包含SEQ ID NO: 293的胺基酸序列。
在另一優選例中,所述的輕鏈具有如SEQ ID NO: 270-289任一項所示的胺基酸序列。
在另一優選例中,所述抗體或抗原結合蛋白還包括上述胺基酸序列中任意一種胺基酸序列任選地經過添加、缺失、修飾和/或取代至少一個胺基酸的,並能夠保留Trop2結合親和力的衍生序列。
在另一優選例中,具有所述的衍生序列的抗體與TROP2結合的親和力F1與相應非衍生的抗體與TROP2結合的親和力F0之比(F1/F0)為0.5-2,較佳地為0.7-1.5,和更佳地0.8-1.2。
在另一優選例中,所述添加、缺失、修飾和/或取代的胺基酸數量為1-5個(如1-3個,較佳地1-2個,更佳地1個)。
在另一優選例中,所述的經過添加、缺失、修飾和/或取代至少一個胺基酸的,並能夠保留TROP2結合親和力的衍生序列為同源性或序列相同性為至少96%的胺基酸序列。
在另一優選例中,所述抗體的重鏈可變區還包括人源的框架區,和/或所述抗體的輕鏈可變區還包括人源的框架區。
在另一優選例中,所述抗體選自下組:動物源抗體、嵌合抗體、人源化抗體、全人抗體、或其組合。
在另一優選例中,所述的嵌合抗體在人中的免疫原性Z1與非嵌合的抗體(如鼠源抗體)在人中的免疫原性Z0之比(Z1/Z0)為0-0.5,較佳地0-0.2,更佳地0-0.05 (如0.001-0.05)。
在另一優選例中,所述的抗體是全人的單株抗體。
在另一優選例中,所述的抗體為雙鏈抗體。
在另一優選例中,所述抗體為抗體全長蛋白、或抗原結合片段。
在另一優選例中,所述的抗體為藥物偶聯物形式。
在另一優選例中,所述抗體具有選自下組的一個或多個特性:
(a) 在FACS測定中,能與過度表現人Trop2的HEK293細胞結合;
(b) 在FACS測定中,能與過度表現猴Trop2的CHO-K1結合;
(c) 在ELISA測定中,能與小鼠Trop2蛋白結合;
(d) 能內化到過度表現人Trop2的HEK293細胞或BxPC-3細胞中;
(e) 對BxPc-3細胞具有ADCC活性;和/或
(f) 對BxPc-3細胞具有ADCP活性。
在另一優選例中,所述的抗體是具有表A所示的各重鏈VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3,以及輕鏈VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3的組合的抗體之一:
表A
抗體編號 | 抗體名稱 | LCDR1 | LCDR2 | LCDR3 | HCDR1 | HCDR2 | HCDR3 |
(1) | PR001128 | 115 | 144 | 169 | 19 | 47 | 86 |
(2) | PR001130 | 116 | 145 | 170 | 20 | 48 | 87 |
(3) | PR001131 | 117 | 146 | 171 | 20 | 48 | 87 |
(4) | PR001132 | 118 | 147 | 172 | 21 | 49 | 88 |
(5) | PR001133 | 119 | 148 | 173 | 21 | 50 | 89 |
(6) | PR001134 | 120 | 146 | 174 | 22 | 51 | 90 |
(7) | PR001138 | 121 | 145 | 175 | 23 | 52 | 91 |
(8) | PR001139 | 122 | 149 | 176 | 24 | 53 | 92 |
(9) | PR001142 | 123 | 145 | 177 | 25 | 54 | 87 |
(10) | PR001143 | 120 | 146 | 174 | 26 | 51 | 93 |
(11) | PR001145 | 124 | 149 | 178 | 24 | 53 | 92 |
(12) | PR001147 | 125 | 148 | 179 | 21 | 50 | 89 |
(13) | PR001150 | 126 | 150 | 180 | 27 | 55 | 94 |
(14) | PR001151 | 127 | 151 | 180 | 27 | 55 | 95 |
(15) | PR001152 | 126 | 150 | 180 | 27 | 55 | 94 |
(16) | PR001153 | 128 | 152 | 181 | 19 | 52 | 96 |
(17) | PR001154 | 127 | 151 | 180 | 27 | 55 | 95 |
(18) | PR001155 | 127 | 151 | 180 | 27 | 55 | 95 |
(19) | PR001156 | 127 | 150 | 180 | 27 | 55 | 97 |
(20) | PR001158 | 127 | 150 | 180 | 27 | 55 | 94 |
(21) | PR001159 | 127 | 150 | 180 | 27 | 55 | 94 |
(22) | PR001160 | 127 | 151 | 180 | 27 | 56 | 95 |
(23) | PR001162 | 129 | 144 | 182 | 28 | 57 | 98 |
(24) | PR001163 | 127 | 151 | 180 | 27 | 55 | 95 |
(25) | PR001164 | 130 | 146 | 183 | 29 | 58 | 99 |
(26) | PR001165 | 127 | 150 | 180 | 27 | 55 | 94 |
(27) | PR001166 | 131 | 153 | 184 | 23 | 59 | 100 |
(28) | PR001168 | 132 | 154 | 185 | 30 | 51 | 101 |
(29) | PR001170 | 133 | 153 | 184 | 31 | 59 | 100 |
(30) | PR001171 | 127 | 150 | 180 | 27 | 55 | 94 |
其中,上述胺基酸序列中任意一種胺基酸序列還包括任選地經過添加、缺失、修飾和/或取代至少一個胺基酸的,並能夠保留TROP2結合親和力的衍生序列。
在另一優選例中,所述的抗體是表A中選自下組的編號的抗體:(1)、(2)、(5)、(8)、(9)、(23)、(26)或(27)。(分別對應於實施例中的抗體編號PR001128、PR001130、PR001133、PR001139、PR001142、PR001162、PR001165、PR001166)
在另一優選例中,所述的抗體是表A中選自下組的編號的抗體:(9)、(23)、(26)或(27)。(分別對應於實施例中的抗體編號PR001142、PR001162、PR001165、PR001166)
在另一優選例中,所述的抗體是表A中編號為(27)的抗體。(對應於實施例中的抗體編號PR001166)
在另一優選例中,所述重鏈可變區具有SEQ ID NO: 192~220中任一項所示的胺基酸序列,或與其至少有80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同源性的胺基酸序列;和/或所述輕鏈可變區具有SEQ ID NO: 221~240中任一項所示的胺基酸序列,或與其至少有80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同源性的胺基酸序列。
在另一優選例中,所述的抗體是具有表B所示的各重鏈可變區、輕鏈可變區的組合的抗體之一:
表B
抗體編號 | 抗體名稱 | VL | VH |
(1) | PR001128 | 221 | 192 |
(2) | PR001130 | 222 | 193 |
(3) | PR001131 | 223 | 193 |
(4) | PR001132 | 224 | 194 |
(5) | PR001133 | 225 | 195 |
(6) | PR001134 | 226 | 196 |
(7) | PR001138 | 227 | 197 |
(8) | PR001139 | 228 | 198 |
(9) | PR001142 | 229 | 199 |
(10) | PR001143 | 226 | 200 |
(11) | PR001145 | 230 | 201 |
(12) | PR001147 | 231 | 202 |
(13) | PR001150 | 232 | 203 |
(14) | PR001151 | 233 | 204 |
(15) | PR001152 | 232 | 205 |
(16) | PR001153 | 234 | 206 |
(17) | PR001154 | 233 | 207 |
(18) | PR001155 | 233 | 208 |
(19) | PR001156 | 235 | 209 |
(20) | PR001158 | 235 | 210 |
(21) | PR001159 | 235 | 211 |
(22) | PR001160 | 233 | 212 |
(23) | PR001162 | 236 | 213 |
(24) | PR001163 | 233 | 214 |
(25) | PR001164 | 237 | 215 |
(26) | PR001165 | 235 | 216 |
(27) | PR001166 | 238 | 217 |
(28) | PR001168 | 239 | 218 |
(29) | PR001170 | 240 | 219 |
(30) | PR001171 | 235 | 220 |
在另一優選例中,所述的抗體是表B中選自下組的編號的抗體:(1)、(2)、(5)、(8)、(9)、(23)、(26)或(27)。(分別對應於實施例中的抗體編號PR001128、PR001130、PR001133、PR001139、PR001142、PR001162、PR001165、PR001166)
在另一優選例中,所述的抗體是表B中選自下組的編號的抗體:(9)、(23)、(26)或(27)。(分別對應於實施例中的抗體編號PR001142、PR001162、PR001165、PR001166)
在另一優選例中,所述的抗體是表B中編號為(27)的抗體。(對應於實施例中的抗體編號PR001166)
在另一優選例中,所述的抗體是具有表C所示的各重鏈、輕鏈的組合的抗體之一:
表C
抗體編號 | 抗體名稱 | LC | HC |
(1) | PR001128 | 270 | 241 |
(2) | PR001130 | 271 | 242 |
(3) | PR001131 | 272 | 242 |
(4) | PR001132 | 273 | 243 |
(5) | PR001133 | 274 | 244 |
(6) | PR001134 | 275 | 245 |
(7) | PR001138 | 276 | 246 |
(8) | PR001139 | 277 | 247 |
(9) | PR001142 | 278 | 248 |
(10) | PR001143 | 275 | 249 |
(11) | PR001145 | 279 | 250 |
(12) | PR001147 | 280 | 251 |
(13) | PR001150 | 281 | 252 |
(14) | PR001151 | 282 | 253 |
(15) | PR001152 | 281 | 254 |
(16) | PR001153 | 283 | 255 |
(17) | PR001154 | 282 | 256 |
(18) | PR001155 | 282 | 257 |
(19) | PR001156 | 284 | 258 |
(20) | PR001158 | 284 | 259 |
(21) | PR001159 | 284 | 260 |
(22) | PR001160 | 282 | 261 |
(23) | PR001162 | 285 | 262 |
(24) | PR001163 | 282 | 263 |
(25) | PR001164 | 286 | 264 |
(26) | PR001165 | 284 | 265 |
(27) | PR001166 | 287 | 266 |
(28) | PR001168 | 288 | 267 |
(29) | PR001170 | 289 | 268 |
(30) | PR001171 | 284 | 269 |
在另一優選例中,所述的抗體是表B中選自下組的編號的抗體:(1)、(2)、(5)、(8)、(9)、(23)、(26)或(27)。(分別對應於實施例中的抗體編號PR001128、PR001130、PR001133、PR001139、PR001142、PR001162、PR001165、PR001166)
在另一優選例中,所述的抗體是表B中選自下組的編號的抗體:(9)、(23)、(26)或(27)。(分別對應於實施例中的抗體編號PR001142、PR001162、PR001165、PR001166)
在另一優選例中,所述的抗體是表B中編號為(27)的抗體。(對應於實施例中的抗體編號PR001166)
在本發明的第二方面,提供了一種重組蛋白,所述的重組蛋白包括:
(i) 如本發明第一方面所述的抗體或抗原結合蛋白;和
(ii) 任選的協助表現和/或純化的標籤序列。
在另一優選例中,所述的標籤序列包括6His標籤。
在另一優選例中,所述的重組蛋白(或多肽)包括融合蛋白。
在另一優選例中,所述的重組蛋白為單體、二聚體、或多聚體。
在本發明的第三方面,提供了一種多核苷酸,所述多核苷酸編碼選自下組的多肽:如本發明第一方面所述的抗體或抗原結合蛋白,和/或如本發明第二方面所述的重組蛋白。
在本發明的第四方面,提供了一種載體,所述載體含有本發明第三方面所述的多核苷酸。
在另一優選例中,所述的載體包括:細菌質體、噬菌體、酵母質體、植物細胞病毒、哺乳動物細胞病毒如腺病毒、反轉錄病毒、或其他載體。
在另一優選例中,所述的載體為溶瘤病毒載體。
在本發明的第五方面,提供了一種遺傳工程化的宿主細胞,所述宿主細胞含有本發明第四方面所述的載體或基因組中整合有本發明第三方面所述的多核苷酸。
在本發明的第六方面,提供了製備第一方面的抗體或其抗原結合片段的方法,其包括,在允許所述抗體或其抗原結合片段表現的條件下,培養第五方面的宿主細胞,和從培養的宿主細胞培養物中回收所述抗體或其抗原結合片段。
在本發明的第七方面,提供了一種抗體偶聯物,所述抗體偶聯物含有:
(a) 抗體部分,所述抗體部分包括如本發明第一方面所述的抗體或抗原結合蛋白;和
(b) 與所述抗體部分偶聯的偶聯部分,所述偶聯部分選自下組:可檢測標記物、藥物、毒素、細胞因子、放射性核素、酶、或其組合。
在另一優選例中,所述的抗體部分與所述的偶聯部分透過化學鍵或連接子進行偶聯。
在另一優選例中,偶聯部分包括:細胞毒素、烷化劑、DNA小溝結合分子、DNA嵌入劑、DNA交聯劑、組蛋白去乙醯化酶抑制劑、核輸出抑制劑、蛋白酶體抑制劑、拓撲異構酶I或II的抑制劑、熱休克蛋白抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑、抗生素和抗有絲分裂劑,優選為SN-38。
在本發明的第八方面,提供了一種嵌合抗原受體(CAR),所述CAR包括本發明第一方面所述的抗體或抗原結合蛋白。
在本發明的第九方面,提供了一種免疫細胞,所述免疫細胞表現或在細胞膜外暴露有如本發明第一方面所述的抗體或抗原結合蛋白。在另一優選例中,所述的免疫細胞包括NK細胞、T細胞。
在另一優選例中,所述的免疫細胞來自人或非人哺乳動物(如鼠)。
在另一優選例中,所述的免疫細胞包括本發明第八方面所述的嵌合抗原受體,所述免疫細胞優選地是嵌合抗原受體T細胞(CAR-T細胞)或嵌合抗原受體NK細胞(CAR-NK細胞)。
在本發明的第十方面,提供了一種多特異性抗體,其包含本發明第一方面的結合Trop-2的抗體或抗原結合片段的,和另外的抗體或其片段或抗體類似物。
在另一優選例中,所述多特異性抗體由第一抗體或其抗原結合片段與其他抗體或其抗原結合片段或抗體類似物透過偶聯形成,並且其中各抗體或其抗原結合片段或抗體類似物保持其原結合特異性,所述第一抗體或其抗原結合片段為本發明所述的抗體或其抗原結合片段。
在另一優選例中,所述多特異性抗體為雙特異性抗體或三特異性抗體或四特異性抗體。
在本發明的第十一方面,提供了一種藥物組合物,所述藥物組合物含有:
(i) 活性成分,所述活性成分選自下組:如本發明第一方面所述的抗體或抗原結合蛋白、如本發明第二方面所述的重組蛋白、如本發明第七方面所述的抗體偶聯物、本發明第九方面所述的免疫細胞、本發明第十方面所述的多特異性抗體或其組合;以及
(ii) 藥學上可接受的載劑。
在另一優選例中,所述的藥物組合物為液態製劑。
在另一優選例中,所述的藥物組合物為注射劑。
在另一優選例中,所述的藥物組合物包括0.01~99.99%的如本發明第一方面所述的抗體或抗原結合蛋白、如本發明第二方面所述的重組蛋白、如本發明第七方面所述的抗體偶聯物、如本發明第九方面所述的免疫細胞、第十方面所述的多特異性抗體或其組合和0.01~99.99%的藥用載劑,所述百分比為占所述藥物組合物的品質百分比。
在另一優選例中,所述的藥物組合物還包括第二治療劑。
在另一優選例中,第二治療劑包括第二抗體、或化療劑。
在另一優選例中,所述第二抗體包括:LAG-3抗體、PD-1抗體或CTLA-4抗體等。
在另一優選例中,所述化療劑選自下組:多西他賽、卡鉑、卡培他濱、長春瑞濱,或其組合。
在另一優選例中,所述化療劑是細胞毒性劑,包括:SN-38、表阿黴素、奧沙利鉑,或5-FU。
在本發明的第十二方面,提供了一種治療、預防或減輕腫瘤的方法,所述方法包括向有需要的受試者施用本發明第一方面所述的抗體或抗原結合蛋白,第二方面所述的重組蛋白,第七方面所述的抗體偶聯物,第九方面所述的免疫細胞,第十方面所述的多特異性抗體及第十一方面所述的藥物組合物。
在另一優選例中,所述腫瘤可以是實體瘤或非實體瘤。
在另一優選例中,所述實體瘤選自下組:乳癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、腸癌、肺癌、子宮頸癌,或其他Trop2表現陽性的腫瘤。
在另一優選例中,所述方法進一步包括第二治療劑的施用。
在另一優選例中,第二治療劑包括第二抗體、或化療劑。
在另一優選例中,所述第二抗體包括:LAG-3抗體、PD-1抗體或CTLA-4抗體。
在另一優選例中,所述化療劑選自下組:多西他賽、卡鉑、卡培他濱、長春瑞濱,或其組合。
在另一優選例中,所述化療劑是細胞毒性劑,包括:SN-38、表阿黴素、奧沙利鉑,或5-FU。
在本發明的第十三方面,提供了一種活性成分的用途,所述活性成分選自下組:如本發明第一方面所述的抗體或抗原結合蛋白、如本發明第二方面所述的重組蛋白、如本發明第七方面所述的抗體偶聯物、如本發明第九方面所述的免疫細胞、第十方面所述的多特異性抗體或其組合,其中所述活性成分被用於:(a)製備與TROP2表現異常相關的疾病的診斷試劑或套組;和/或(b)製備預防和/或治療與TROP2表現異常相關的疾病的藥物。
在另一優選例中,所述的診斷試劑為檢測片或檢測盤。
在另一優選例中,所述TROP2表現或功能異常相關的疾病主要包括腫瘤。
在另一優選例中,所述腫瘤可以是實體瘤或非實體瘤。
在另一優選例中,所述實體瘤選自下組:乳癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、腸癌、肺癌、子宮頸癌,或其他Trop2表現陽性的腫瘤。
在另一優選例中,所述診斷試劑或套組用於:
(1) 檢測樣品中TROP2蛋白;
(2) 檢測細胞中內源性的TROP2蛋白;和/或
(3) 檢測表現TROP2蛋白的細胞。
在另一優選例中,所述的抗體為藥物偶聯物(ADC)形式。
在本發明的第十四方面,提供了一種體外檢測(包括診斷性或非診斷性)樣品中TROP2蛋白的方法,所述方法包括步驟:
(1) 在允許本發明第一方面所述的抗體或抗原結合片段與Trop-2之間形成複合物的條件下,將樣品與所述的抗體或抗原結合蛋白接觸;
(2) 檢測是否形成抗原-抗體複合物,其中形成複合物就表示樣品中存在TROP2蛋白。
在另一優選例中,所述檢測用於非診斷目的。在另一優選例中,所述非診斷目的包括將第一方面所述的抗體或抗原結合蛋白用於途徑研究、藥物篩選、組織化學分析等。
在本發明的第十五方面,提供了一種檢測盤,所述的檢測盤包括:基片(支撐盤)和測試條,所述的測試條含有如本發明第一方面所述的抗體或抗原結合蛋白、如本發明第二方面所述的重組蛋白、如本發明第七方面所述的抗體偶聯物、如本發明第九方面所述的免疫細胞、或其組合。
在本發明的第十六方面,提供了一種套組,所述套組中包括:
(1) 第一容器,所述第一容器中含有本發明的抗體或抗原結合片段;和任選地
(2) 第二容器,所述第二容器中含有抗本發明抗體的二抗;
在另一優選例中,所述套組含有如本發明第十五方面所述的檢測盤。
在另一優選例中,所述套組進一步含有使用說明書。
在本發明的第十七方面,提供了一種給藥裝置,所述裝置包括:
(i) 輸注模組,所述輸注模組用於對受試者施用包括具有一活性成分的藥物組合物;
(ii) 用於輸注的藥物組合物,所述藥物組合物中含有一活性成分,所述活性成分選自下組:如本發明第一方面所述的抗體或抗原結合蛋白、如本發明第二方面所述的重組蛋白、如本發明第七方面所述的抗體偶聯物、本發明第九方面所述的免疫細胞、或其組合;以及
(iii) 任選的藥效監控模組。
在另一優選例中,所述的施用包括腸道外施用和非腸道外施用。
在另一優選例中,所述腸道外施用包括注射施用,所用的注射的路徑包括:靜脈內、肌內、動脈內、膜內、囊內、眶內、心臟內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛網膜下、脊柱內、硬腦膜上和胸骨內注射和推注。
在另一優選例中,所述非腸道外施用包括外用、表皮施用或粘膜施用,例如鼻內、經口、陰道、直腸、舌下、或局部外用。
在另一優選例中,所述的輸注模組為無針皮下注射設備、微量輸液泵、經皮給藥設備、推注設備,或滲透設備。
應理解,在本發明範圍內中,本發明的上述各技術特徵和在下文(如實施例)中具體描述的各技術特徵之間都可以互相組合,從而構成新的或優選的技術方案。限於篇幅,在此不再一一累述。
具體實施方式
本發明人經過廣泛而深入的研究,經過大量的篩選,首次開發了一種標靶Trop2的結合蛋白及其應用。在此基礎上完成了本發明。
本發明所要解決的技術問題是為克服現有技術中抗體藥物缺乏抗腫瘤療效,以及安全性欠佳等缺陷,提供一種標靶Trop2結合蛋白及其應用。
為更好理解本發明,首先定義一些術語。其他定義則貫穿具體實施方式部分而列出。
術語“Trop2”是滋養層細胞表面抗原2。該術語包括變體、同源物、類似物、直向同源物和/或平行同源物。例如,對人Trop2特異的抗體可以在某些情況下與另一物種例如猴的Trop2蛋白交叉反應。在其他實施方式中,對人Trop2蛋白特異的抗體可以完全地對人Trop2蛋白特異而不與其他物種或其他類型的蛋白交叉反應,或者可以與一些其他物種而非所有其他物種的Trop2蛋白交叉反應。
術語“人Trop2”是指具有人胺基酸序列的Trop2蛋白,例如Genbank登錄號為NP_002344.2的胺基酸序列。
術語“猴Trop2”是指具有猴胺基酸序列的Trop2蛋白,例如Genbank登錄號為XP_005543292.1的胺基酸序列。
術語“小鼠Trop2”是指具有小鼠胺基酸序列的Trop2蛋白,例如Genbank登錄號為NP_064431.2的胺基酸序列。
本文中的術語“抗體”意在包括全長抗體及其任何抗原結合片段(即,抗原結合部分)或單鏈。全長抗體是包含至少兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈的醣蛋白,重鏈和輕鏈由二硫鍵連接。各重鏈由重鏈可變區(簡稱V
H)和重鏈恆定區構成。重鏈恆定區由三個結構域構成,即C
H1、C
H2和C
H3。各輕鏈由輕鏈可變區(簡稱V
L)和輕鏈恆定區構成。輕鏈恆定區由一個結構域C
L構成。V
H和
VL區還可以劃分為稱作互補決定區(CDR)的高度變異區,其由較為守恆的框架區(FR)區分隔開。各V
H和V
L由三個CDR以及四個FR構成,從胺基端到羧基端以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的順序排布。重鏈和輕鏈的可變區包含與抗原相互作用的結合域。抗體的恆定區可以介導免疫球蛋白與宿主組織或因子的結合,包括多種免疫系統細胞(例如,效應細胞)和傳統補體系統的第一組分(C1q)。
本文中的術語,抗體的“抗原結合部分”(或簡稱為抗體部分),是指抗體的保持有特異結合抗原(例如,Trop2蛋白)能力的一個或多個片段。已證實,抗體的抗原結合功能可以透過全長抗體的片段來實施。包含在抗體的“抗原結合部分”中的結合片段的例子包括(i) Fab片段,由V
L、V
H、C
L和C
H1構成的單價片段;(ii) F(ab’)
2片段,包含樞紐區二硫橋連接的兩個Fab片段的二價片段;(iii)由V
H和C
H1構成的Fd片段;(iv)由抗體單臂V
L和V
H構成的Fv片段;(v)由V
H構成的dAb片段;(vi)分離的互補決定區(CDR);以及(vii)奈米抗體,一種包含單可變結構域和兩個恆定結構域的重鏈可變區。此外,儘管Fv片段的兩個結構域V
L和V
H由不同的基因編碼,它們可以透過重組法經由使兩者成為單蛋白鏈的合成連接子而連接,其中V
L和V
H區配對形成單價分子(稱為單鏈Fc(scFv))。這些單鏈抗體也意在包括在術語涵義中。這些抗體片段可以透過本領域技術人員已知的常用技術而得到,且片段可以透過與完整抗體相同的方式進行功能篩選。
本文所用的術語“分離的抗體”是指基本不含具有不同抗原特異性的其他抗體的抗體。例如,與Trop2蛋白特異結合的分離抗體基本不含特異結合Trop2蛋白之外抗原的抗體。但是,特異結合人Trop2蛋白的分離抗體可能對其他抗原例如其他物種的Trop2蛋白具有交叉結合性。此外,分離的抗體基本不含其他細胞材料和/或化學物質。
術語“單株抗體”或“單抗”或“單株抗體組成”是指單一分子組成的抗體分子製品。單株抗體組成呈現出對於特定表位的單一結合特異性和親和力。
術語“人源抗體”是指可變區框架和CDR區得自人種系免疫球蛋白序列的抗體。此外,如果抗體包含恆定區,其也得自人種系免疫球蛋白序列。本發明的人源抗體可以包含不由人種系免疫球蛋白序列編碼的胺基酸殘基,例如透過體外隨機突變或點突變或透過體內體細胞突變而導入的突變。然而,術語“人源抗體”不包括在人框架序列中插入得自其他哺乳動物物種的CDR序列的抗體。
術語“辨識抗原的抗體”以及“對抗原特異的抗體”在本文中與術語“特異結合抗原的抗體”交替使用。
在本文中,“特異結合人Trop2”的抗體是指與人Trop2 (還可能是其他非人物種的Trop2)結合但是基本不與非Trop2蛋白結合的抗體。優選地,抗體以“高親和力”結合人Trop2蛋白,即K
D值為1.0 × 10
-8M以下,更優選為5.0 × 10
-9M以下。
術語“基本不結合”蛋白或細胞是指,不與蛋白或細胞結合,或者不以高親和力與其結合,即結合蛋白或細胞的K
D為1.0 × 10
-6M以上,更優選1.0 × 10
-5M以上,更優選1.0 × 10
-4M以上、1.0 × 10
-3M以上,更優選1.0 × 10
-2M以上。
術語“高親和性”對於IgG抗體而言,是指對於抗原的K
D為1.0 × 10
-6M以下,優選5.0 × 10
-8M以下,更優選1.0 × 10
-8M以下、5.0 × 10
-9M以下,更優選1.0 × 10
-9M以下。對於其他抗體亞型,“高親和性”結合可能會變化。例如,IgM亞型的“高親和性”結合是指K
D為10
-6M以下,優選10
-7M以下,更優選10
-8M以下。
術語“K
assoc”或“K
a”是指特定抗體-抗原相互作用的結合速率,而術語“K
dis”或“K
d”是指特定抗體-抗原相互作用的離解速率。術語“K
D”是指解離常數,由K
d與K
a比(K
d/K
a)得到,並以莫耳濃度(M)表示。抗體的K
D值可以透過領域內已知的方法確定。優選的確定抗體K
D的方式是使用表面等離子共振儀(SPR)測得的,優選使用生物感測系統例如Biacore
TM或Octet Red96e系統測得。
術語“EC
50”,又叫半數最大效應濃度,是指引起50%最大效應的抗體濃度。
術語“抗體依賴的細胞毒性”、“抗體依賴的細胞介導的細胞毒性”或“ADCC”是指細胞介導的免疫防禦,其中免疫系統效應細胞主動地將細胞膜表面抗原與抗體,例如Trop2抗體,結合的標的細胞例如癌細胞裂解。
術語“抗體依賴的細胞介導的吞噬作用”或“ADCP”是指抗體與標的細胞上相應的抗原結合後,抗體的Fc段與效應細胞如吞噬細胞上的Fc受體結合,從而誘導效應細胞吞噬標的細胞的作用。
術語“受試者”包括任何人或非人動物。術語“非人動物”包括所有脊椎動物,例如哺乳類和非哺乳類,例如非人靈長類、羊、狗、貓、牛、馬、雞、兩棲類、和爬行類,優選哺乳動物,例如非人靈長類、羊、狗、貓、牛和馬。
術語“治療有效量”是指足以防止或減緩與疾病或病症(例如癌症)相關的症狀的本發明抗體量。治療有效量與被治療的疾病相關,其中本領域技術人員可以方便地判別出實際的有效量。
本發明的多個方面在以下更加具體地加以描述。
Trop2抗體對Trop2的結合特異性以及其他有益的功能特徵
本發明的抗體特異性地結合人或猴Trop2,也與小鼠Trop2結合。具體而言,本發明的抗體以與hRS7相當或更低的EC
50值與人、猴Trop2結合。此外,本發明的抗體還具有與hRS7相當或更好的內化活性、ADCC或ADCP活性。
優選的本發明抗體是單株抗體。此外,抗體可以是例如鼠源的、嵌合的或人源的單株抗體,優選為人源抗體。
Trop2單株抗體
優選的本發明抗體是結構和化學特性在以下描述的單株抗體。Trop2抗體的V
H包含SEQ ID NO: 192-220中的任一胺基酸序列。Trop2抗體的V
L包含 SEQ ID NO: 221-240中的任一胺基酸序列。抗體的重鏈/輕鏈可變區序列列於以下表1a和表1b中。所有抗體的重鏈恆定區和輕鏈恆定區分別包含SEQ ID NO:292和293的胺基酸序列。抗體還可以包含其他合適的重鏈恆定區和輕鏈恆定區序列。
表1a. 重鏈/輕鏈可變區及CDR的胺基酸序列總結(SEQ ID NO)
表1b重鏈/輕鏈可變區框架區的胺基酸序列總結(SEQ ID NO)
抗體編號 | 輕鏈 | 重鏈 | VL | VH | LCDR1 | LCDR2 | LCDR3 | HCDR1 | HCDR2 | HCDR3 |
PR001128 | 270 | 241 | 221 | 192 | 115 | 144 | 169 | 19 | 47 | 86 |
PR001130 | 271 | 242 | 222 | 193 | 116 | 145 | 170 | 20 | 48 | 87 |
PR001131 | 272 | 242 | 223 | 193 | 117 | 146 | 171 | 20 | 48 | 87 |
PR001132 | 273 | 243 | 224 | 194 | 118 | 147 | 172 | 21 | 49 | 88 |
PR001133 | 274 | 244 | 225 | 195 | 119 | 148 | 173 | 21 | 50 | 89 |
PR001134 | 275 | 245 | 226 | 196 | 120 | 146 | 174 | 22 | 51 | 90 |
PR001138 | 276 | 246 | 227 | 197 | 121 | 145 | 175 | 23 | 52 | 91 |
PR001139 | 277 | 247 | 228 | 198 | 122 | 149 | 176 | 24 | 53 | 92 |
PR001142 | 278 | 248 | 229 | 199 | 123 | 145 | 177 | 25 | 54 | 87 |
PR001143 | 275 | 249 | 226 | 200 | 120 | 146 | 174 | 26 | 51 | 93 |
PR001145 | 279 | 250 | 230 | 201 | 124 | 149 | 178 | 24 | 53 | 92 |
PR001147 | 280 | 251 | 231 | 202 | 125 | 148 | 179 | 21 | 50 | 89 |
PR001150 | 281 | 252 | 232 | 203 | 126 | 150 | 180 | 27 | 55 | 94 |
PR001151 | 282 | 253 | 233 | 204 | 127 | 151 | 180 | 27 | 55 | 95 |
PR001152 | 281 | 254 | 232 | 205 | 126 | 150 | 180 | 27 | 55 | 94 |
PR001153 | 283 | 255 | 234 | 206 | 128 | 152 | 181 | 19 | 52 | 96 |
PR001154 | 282 | 256 | 233 | 207 | 127 | 151 | 180 | 27 | 55 | 95 |
PR001155 | 282 | 257 | 233 | 208 | 127 | 151 | 180 | 27 | 55 | 95 |
PR001156 | 284 | 258 | 235 | 209 | 127 | 150 | 180 | 27 | 55 | 97 |
PR001158 | 284 | 259 | 235 | 210 | 127 | 150 | 180 | 27 | 55 | 94 |
PR001159 | 284 | 260 | 235 | 211 | 127 | 150 | 180 | 27 | 55 | 94 |
PR001160 | 282 | 261 | 233 | 212 | 127 | 151 | 180 | 27 | 56 | 95 |
PR001162 | 285 | 262 | 236 | 213 | 129 | 144 | 182 | 28 | 57 | 98 |
PR001163 | 282 | 263 | 233 | 214 | 127 | 151 | 180 | 27 | 55 | 95 |
PR001164 | 286 | 264 | 237 | 215 | 130 | 146 | 183 | 29 | 58 | 99 |
PR001165 | 284 | 265 | 235 | 216 | 127 | 150 | 180 | 27 | 55 | 94 |
PR001166 | 287 | 266 | 238 | 217 | 131 | 153 | 184 | 23 | 59 | 100 |
PR001168 | 288 | 267 | 239 | 218 | 132 | 154 | 185 | 30 | 51 | 101 |
PR001170 | 289 | 268 | 240 | 219 | 133 | 153 | 184 | 31 | 59 | 100 |
PR001171 | 284 | 269 | 235 | 220 | 127 | 150 | 180 | 27 | 55 | 94 |
hRS7 | 291 | 290 |
抗體編號 | HFWR1 | HFWR2 | HFWR3 | HFWR4 | LFWR1 | LFWR2 | LFWR3 | LFWR4 |
PR001128 | 1 | 32 | 60 | 102 | 105 | 134 | 155 | 186 |
PR001130 | 1 | 32 | 61 | 102 | 106 | 135 | 156 | 187 |
PR001131 | 1 | 32 | 61 | 102 | 107 | 136 | 157 | 188 |
PR001132 | 2 | 33 | 62 | 102 | 108 | 135 | 158 | 187 |
PR001133 | 3 | 34 | 63 | 102 | 109 | 135 | 159 | 187 |
PR001134 | 4 | 35 | 64 | 103 | 109 | 137 | 160 | 189 |
PR001138 | 5 | 36 | 65 | 102 | 106 | 138 | 161 | 187 |
PR001139 | 6 | 37 | 66 | 102 | 110 | 139 | 162 | 187 |
PR001142 | 1 | 32 | 67 | 102 | 106 | 135 | 163 | 190 |
PR001143 | 7 | 35 | 68 | 102 | 109 | 137 | 160 | 189 |
PR001145 | 6 | 38 | 66 | 102 | 111 | 140 | 162 | 187 |
PR001147 | 3 | 39 | 69 | 102 | 109 | 135 | 158 | 187 |
PR001150 | 8 | 40 | 70 | 104 | 112 | 141 | 164 | 186 |
PR001151 | 6 | 35 | 71 | 104 | 112 | 135 | 164 | 186 |
PR001152 | 9 | 35 | 72 | 104 | 112 | 141 | 164 | 186 |
PR001153 | 1 | 32 | 73 | 102 | 113 | 142 | 165 | 188 |
PR001154 | 10 | 35 | 74 | 104 | 112 | 135 | 164 | 186 |
PR001155 | 11 | 35 | 75 | 104 | 112 | 135 | 164 | 186 |
PR001156 | 12 | 35 | 76 | 104 | 112 | 135 | 164 | 186 |
PR001158 | 13 | 35 | 77 | 104 | 112 | 135 | 164 | 186 |
PR001159 | 10 | 35 | 78 | 104 | 112 | 135 | 164 | 186 |
PR001160 | 10 | 35 | 79 | 104 | 112 | 135 | 164 | 186 |
PR001162 | 14 | 41 | 80 | 102 | 105 | 140 | 166 | 186 |
PR001163 | 15 | 42 | 75 | 104 | 112 | 135 | 164 | 186 |
PR001164 | 16 | 43 | 81 | 102 | 112 | 135 | 164 | 189 |
PR001165 | 10 | 35 | 82 | 104 | 112 | 135 | 164 | 186 |
PR001166 | 17 | 44 | 83 | 102 | 111 | 143 | 167 | 189 |
PR001168 | 18 | 45 | 84 | 102 | 114 | 140 | 168 | 191 |
PR001170 | 17 | 46 | 83 | 102 | 111 | 143 | 167 | 189 |
PR001171 | 6 | 35 | 85 | 104 | 112 | 135 | 164 | 186 |
與人Trop2結合的其他Trop2抗體的V
H和/或V
L序列(或CDR序列)可以與本發明抗體的V
H和/或V
L序列(或CDR序列)“混合並配對”。優選地,當V
H和V
L(或其中的CDR)混合並配對時,特定V
H/V
L配對中的V
H序列可以由結構近似的V
H序列取代。相似地,優選特定V
H/V
L配對中的V
L序列由結構近似的V
L序列取代。
因此,在一個實施方式中,本發明的抗體或其抗原結合部分包括:
(a)包含列於表1a中胺基酸序列的重鏈可變區;以及
(b)包含列於表1a中胺基酸序列的輕鏈可變區,或者另一Trop2抗體的V
L,其中該抗體特異結合人Trop2。
在另一實施方式中,本發明的抗體或其抗原結合部分包括:
(a)列於表1a中的重鏈可變區的CDR1、CDR2和CDR3;以及
(b)列於表1a中的輕鏈可變區的CDR1、CDR2和CDR3,或者另一Trop2抗體的CDR,其中該抗體特異結合人Trop2。
在另一實施方式中,本發明的抗體或其抗原結合部分包括Trop2抗體的重鏈可變區CDR以及其他結合人Trop2的抗體的CDR,例如重鏈可變區CDR1、CDR2和/或CDR3,和/或另一Trop2抗體的輕鏈可變區CDR1、CDR2和/或CDR3。
此外,領域內公知的是,CDR3結構域,獨立於CDR1和/或CDR2,可單獨確定抗體對同種抗原的結合特異性,且可以預測到基於該CDR3序列可生成具有相同結合特異性的多種抗體。
在另一實施方式中,本發明的抗體包含Trop2抗體的重鏈可變區的CDR2以及至少Trop2抗體的重鏈和/或輕鏈可變區的CDR3,或另一Trop2抗體的重鏈和/或輕鏈可變區的CDR3,其中該抗體能夠特異結合人Trop2。優選這些抗體(a)競爭結合Trop2;(b)保留功能特性;(c)結合相同表位;和/或(d)具有與本發明Trop2抗體相似的結合親和力。在另一實施方式中,抗體還可以包含Trop2抗體的輕鏈可變區CDR2,或者另一Trop2抗體的輕鏈可變區CDR2,其中該抗體特異結合人Trop2。在另一實施方式中,本發明的抗體可以包括Trop2抗體的重鏈/輕鏈可變區CDR1,或另一Trop2抗體的重鏈和/或輕鏈可變區CDR1,其中該抗體特異結合人Trop2。
守恆修飾
在另一實施方式中,本發明的抗體包含與本發明Trop2抗體存在一個或多個守恆修飾的重鏈和/或輕鏈可變區序列或CDR1、CDR2和CDR3序列。本領域知道,一些守恆序列修改不會使抗原結合性消失。參見,例如,Brummell
et al., (1993)
Biochem32:1180-8; de Wildt
et al., (1997)
Prot. Eng.10:835-41; Komissarov
et al., (1997)
J. Biol. Chem.272:26864-26870; Hall
et al., (1992)
J. Immunol.149:1605-12; Kelley and O’Connell (1993)
Biochem.32:6862-35; Adib-Conquy
et al., (1998)
Int. Immunol.10:341-6 and Beers
et al., (2000)
Clin. Can. Res. 6:2835-43。
因此,在一個實施方式中,抗體包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區,重鏈可變區和輕鏈可變區分別包含CDR1、CDR2和CDR3,其中:
(a)重鏈可變區CDR1包含表1a列出的序列,和/或其守恆修改;和/或
(b)重鏈可變區CDR2包含表1a列出的序列,和/或其守恆修改;和/或
(c)重鏈可變區CDR3包含表1a列出的序列,和/或其守恆修改;和/或
(d)輕鏈可變區CDR1、和/或CDR2、和/或CDR3包含表1a列出的序列,和/或其守恆修改;且
(e)該抗體特異結合人Trop2。
本發明的抗體具有一個或多個以下功能特徵,例如對人Trop2的高親和力,以及引發對Trop2表現細胞的ADCC或CDC的能力。
在多個實施方式中,抗體可以是例如鼠源、人源、嵌合或人源化抗體。
本文所用的術語“守恆序列修飾”是指不會顯著影響或改變抗體結合特性的胺基酸修飾。這樣的守恆修飾包括胺基酸替換、添加和刪除。可以透過領域內已知的標準技術,例如點突變和PCR介導的突變,將修飾引入本發明抗體中。守恆胺基酸替換是胺基酸殘基用具有相似側鏈的胺基酸殘基進行替換。具有相似側鏈的胺基酸殘基組在領域內已知。這些胺基酸殘基組包括具有鹼性側鏈(例如,離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如,天冬胺酸、麩胺酸)、不帶電極性側鏈(例如,甘胺酸、天冬醯胺、穀胺醯胺、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸)、非極性側鏈(例如,丙胺酸、纈胺酸、亮胺酸、異亮胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸)、β-支鏈側鏈(例如,蘇胺酸、纈胺酸、異亮胺酸)和芳香族側鏈(例如,酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)的胺基酸。因此,本發明抗體的CDR區中的一個或多個胺基酸殘基可以用同側鏈組的其他胺基酸殘基替換,且得到的抗體可以使用本文所述的功能檢測對其進行保留功能(即,上述的功能)的測試。
基因修飾的抗體
本發明的抗體可以以具備本發明Trop2抗體的一個或多個V
H/V
L序列的抗體作為起始材料,製備成基因修飾的抗體。抗體可以透過修飾一個或兩個可變區(即,V
H和/或V
L)內(例如,在一個或多個CDR區和/或一個或多個框架區)的一個或多個殘基來進行基因修飾,以改善結合親和力和/或增加與某些物種天然產生的抗體的相似性。例如,框架區經修飾成提供人源化的抗體。此外,或者抗體可以透過修飾恆定區中的殘基進行基因修飾,例如改變抗體的效應功能。
在某些實施方式中,CDR區植入可以用來基因修飾抗體的可變區。抗體主要透過位於六個重鏈和輕鏈互補決定區(CDR)中的胺基酸殘基與標的抗原進行相互作用。出於這個原因,CDR內的胺基酸殘基比起CDR外的序列在個體抗體之間更加地多樣。因為CDR序列負責主要的抗體-抗原相互作用,可以透過構建含有特定天然抗體的CDR序列植入到不同特性的不同抗體的框架序列的表現載體,來表現模擬特定天然抗體的特性的重組抗體(Riechmann
et al., (1998)
Nature332:323-327; Jones
et al., (1986)
Nature321:522-525; Queen
et al., (1989)
Proc. Natl. Acad; U.S.A. 86:10029-10033; U.S. Pat. Nos. 5,225,539; 5,530,101; 5,585,089; 5,693,762和6,180,370)。
因此,本發明的另一實施方式涉及分離的單株抗體或其抗原結合部分,其包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區,重鏈可變區包含具有本發明上述序列的CDR1、CDR2和CDR3,輕鏈可變區包含具有本發明上述序列的CDR1、CDR2和CDR3。儘管這些抗體包含本發明單株抗體的V
H和V
LCDR序列,它們可以含有不同的框架序列。
這樣的框架序列可以從包括種系抗體基因序列的公開DNA資料庫或公開參考文獻中獲得。例如,用於人重鏈和輕鏈可變區基因的種系DNA序列可以在Vbase人種系序列資料庫(www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase)以及Kabat
et al., (1991),同上; Tomlinson
et al., (1992)
J. Mol. Biol. 227:776-798;和Cox
et al., (1994)
Eur. J. Immunol. 24:827-836中獲得。作為另一實施方式,用於人重鏈和輕鏈可變區基因的種系DNA序列可以在Genbank資料庫中得到。例如,下列HCo7 HuMAb小鼠中的重鏈種系序列的Genbank登錄號為1-69 (NG--0010109, NT--024637 & BC070333)、3-33 (NG--0010109 & NT--024637)和3-7 (NG--0010109 & NT--024637)。作為另一例子,以下來自Hco12 HuMAb小鼠的重鏈種系序列的Genbank登錄號為1-69 (NG--0010109, NT--024637 & BC070333)、5-51 (NG--0010109 & NT--024637)、4-34 (NG--0010109 & NT--024637)、3-30.3 (CAJ556644)和3-23 (AJ406678)。
透過使用本領域公知的稱為空格(gap) BLAST的序列相似性搜索方法之一(Altschul
et al., (1997), 同上),將抗體蛋白序列與蛋白序列資料庫進行比較。
用於本發明抗體的優選框架序列是結構上與本發明抗體所用的框架序列相似的那些。V
HCDR1、CDR2、和CDR3序列可以植入到與得到該框架序列的種系免疫球蛋白基因具有相同序列的框架區中,或者CDR序列可以植入到包含有與種系序列相比具有一個或多個突變的框架區中。例如,在一些情況下,將框架區中的殘基進行突變是有益的,以保持或增強抗體的抗原結合性(參見例如U.S. Pat. Nos. 5,530,101; 5,585,089; 5,693,762和6,180,370)。
另一類的可變區修飾是將V
H和/或V
LCDR1、CDR2和/或CDR3區內的胺基酸殘基進行突變,從而改進目標抗體的一種或多種結合特性(例如,親和力)。可以進行點突變或PCR介導的突變來引入突變,且其對於抗體結合或其他功能特性的影響可以在本領域所知的體外或體內檢測中進行評價。優選地,引入本領域所知的守恆修飾。突變可以是胺基酸替換、添加或缺失,但優選為替換。此外,通常改變CDR區內的不多於一個、兩個、三個、四個或五個的殘基。
此外,在另一實施方式中,本發明提供分離的Trop2單株抗體或其抗原結合部分,包含重鏈可變區和輕鏈可變區,其包含:(a) V
HCDR1區,包含本發明的序列,或一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸替換、缺失或添加的胺基酸序列;(b) V
HCDR2區,包含本發明的序列,或一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸替換、缺失或添加的胺基酸序列;(c) V
HCDR3區,包含本發明的序列,或一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸替換、缺失或添加的胺基酸序列;(d) V
LCDR1區,包含本發明的序列,或一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸替換、缺失或添加的胺基酸序列;(e) V
LCDR2區,包含本發明的序列,或一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸替換、缺失或添加的胺基酸序列;和(f) V
LCDR3區,包含本發明的序列,或一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸替換、缺失或添加的胺基酸序列。
本發明的基因改造抗體包括在V
H和/或V
L的框架殘基中做出基因修飾以例如改變抗體特性的那些。通常而言,這些框架修飾用來降低抗體的免疫原性。例如,一種方法是將一個或多個框架殘基“回復突變”成相應的種系序列。更加具體而言,經歷體細胞突變的抗體可能包含不同於得到抗體的種系序列的框架殘基。這些殘基可以透過將抗體框架序列與得到抗體的種系序列相比較而辨識出來。
另一類的框架修飾包括對框架區的、或者甚至一個或多個CDR區的一個或多個殘基進行突變,以去除T細胞表位,從而減少抗體的可能導致的免疫原性。該方法也稱為“去免疫化”,在美國專利公開20030153043中有更加詳細的描述。
本發明還包括抗Trop2抗體的活性片段、衍生物和類似物。如本文所用,術語“片段”、“衍生物”和“類似物”是指基本上保持Trop2結合親和力功能或活性的多肽。本發明的多肽片段、衍生物或類似物可以是(i)有一個或幾個守恆或非守恆性胺基酸殘基(優選守恆性胺基酸殘基)被取代的多肽,或(ii)在一個或多個胺基酸殘基中具有取代基團的多肽,或(iii) CDR3-P1多肽與另一個化合物(比如延長多肽半衰期的化合物,例如聚乙二醇)融合所形成的多肽,或(iv)附加的胺基酸序列融合於此多肽序列而形成的多肽(與前導序列、分泌序列或6His等標籤序列融合而形成的然後蛋白)。根據本文的教導,這些片段、衍生物和類似物屬於本領域熟練技術人員公知的範圍。
一類優選的活性衍生物指與表1的胺基酸序列相比,有至多3個,較佳地至多2個,更佳地至多1個胺基酸被性質相似或相近的胺基酸所替換而形成多肽。這些守恆性變異多肽最好根據表2進行胺基酸替換而產生。
表 2
最初的殘基 | 代表性的取代 | 優選的取代 |
Ala (A) | Val; Leu; Ile | Val |
Arg (R) | Lys; Gln; Asn | Lys |
Asn (N) | Gln; His; Lys; Arg | Gln |
Asp (D) | Glu | Glu |
Cys (C) | Ser | Ser |
Gln (Q) | Asn | Asn |
Glu (E) | Asp | Asp |
Gly (G) | Pro; Ala | Ala |
His (H) | Asn; Gln; Lys; Arg | Arg |
Ile (I) | Leu; Val; Met; Ala; Phe | Leu |
Leu (L) | Ile; Val; Met; Ala; Phe | Ile |
Lys (K) | Arg; Gln; Asn | Arg |
Met (M) | Leu; Phe; Ile | Leu |
Phe (F) | Leu; Val; Ile; Ala; Tyr | Leu |
Pro (P) | Ala | Ala |
Ser (S) | Thr | Thr |
Thr (T) | Ser | Ser |
Trp (W) | Tyr; Phe | Tyr |
Tyr (Y) | Trp; Phe; Thr; Ser | Phe |
Val (V) | Ile; Leu; Met; Phe; Ala | Leu |
此外,作為框架或CDR區內修飾之外的另一種選擇,本發明的抗體可以基因改造成在Fc區包括基因修飾,通常來改變抗體的一個或多個功能特性,例如血清半衰期、補體結合、Fc受體結合、和/或抗體依賴的細胞毒性。此外,本發明的抗體可以進行化學修飾(例如,可以向抗體附加一個或多個化學功能基團),或者修飾成改變其醣基化,來改變抗體的一個或多個功能特性。
在一個實施方式中,C
H1的樞紐區進行修飾,改變,例如增加或減少樞紐區的半胱胺酸殘基的數量。該方法在美國專利5,677,425中進一步描述。改變C
H1樞紐區的半胱胺酸殘基,來例如促進重鏈輕鏈的組裝或增加/降低抗體的穩定性。
在另一個實施方式中,對抗體的Fc樞紐區進行突變,以降低抗體的生物半衰期。更加具體地,將一個或多個胺基酸突變引入Fc樞紐片段的C
H2-C
H3連接區,從而抗體相對於天然Fc-樞紐結構域SpA結合而言,具有減弱的SpA結合力。該方法在美國專利6,165,745中有更詳細的描述。
在另一實施方式中,修飾抗體的醣基化。例如,可以製備去醣基化的抗體(即,抗體缺少醣基化)。可以改變醣基化,來例如增加抗體對抗原的親和性。這樣的醣化修飾可以透過例如改變抗體序列中的一個或多個醣基化位點來達成。例如,可以做出一個或多個胺基酸替換,以消除一個或多個可變區框架醣基化位點,從而消除該位置的醣基化。這樣的去醣基化可以增加抗體對抗原的親和性。參見,例如美國專利5,714,350和6,350,861。
此外,可以製備具有改變的醣基化類型的抗體,例如岩藻醣殘基量減少的低岩藻醣基抗體,或者具有增加的平分型GlcNac結構的抗體。改變的醣基化形式被證明能增加抗體的ADCC活性。這樣的醣化修飾可以透過例如在醣基化系統改變的宿主細胞中表現抗體而進行。具有改變的醣基化系統的細胞在領域中已知,且可以用作表現本發明重組抗體的宿主細胞,以製備具有改變的醣基化的抗體。例如,細胞株Ms704、Ms705和Ms709缺少岩藻醣基轉移酶基因FUT8 (α(1,6)-岩藻醣基轉移酶),從而在Ms704、Ms705和Ms709細胞株中表現的抗體在其醣中缺失岩藻醣。Ms704、Ms705和Ms709 FUT8-/-細胞株透過在CHO/DG44細胞中使用兩種替換載體定向破壞FUT8基因而製備(參見美國專利公開20040110704和Yamane-Ohnuki et al., (2004) Biotechnol Bioeng 87:614-22)。作為另一個例子,EP 1,176,195記載了FUT8基因功能破壞的細胞株,其編碼岩藻醣基轉移酶,從而在該細胞株中表現的抗體透過降低或消除α-1,6鍵相關酶而表現出低岩藻醣基化。EP 1,176,195也描述了一種細胞株,其具有較低的用於向結合抗體Fc區的N-乙醯葡萄糖胺添加岩藻醣的酶活性,或者不具有這種酶的活性,例如大鼠骨髓瘤細胞株YB2/0 (ATCC CRL 1662)。WO 03/035835描述了CHO變體細胞株,Lec13細胞,其具有降低的向Asn(297)-相關醣添加岩藻醣的能力,從而使得宿主細胞中表現的抗體的低岩藻醣基化(參見Shields
et al., (2002)
J. Biol. Chem.277:26733-26740)。具有改變的醣基化圖譜的抗體也可以在雞蛋中製備,如WO 06/089231中所述的。或者,具有改變的醣基化圖譜的抗體可以在植物細胞如浮萍中製備。WO 99/54342公開了一種細胞株,其基因改造成表現修飾醣蛋白的醣基轉移酶(例如,β(1,4)-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶III (GnTIII)),從而在基因改造細胞株中表現的抗體表現出增加的平分型GlcNac結構,其引起抗體增強的ADCC活性(Umana
et al., (1999)
Nat. Biotech.17:176-180)。或者,抗體的岩藻醣殘基可以使用岩藻醣苷酶來切除抗體的岩藻醣殘基,例如α-L-岩藻醣苷酶從抗體移除岩藻醣殘基(Tarentino
et al., (1975)
Biochem. 14:5516-23)。
本文抗體的另一修飾是聚乙二醇化(PEG化)。抗體可以PEG化,例如來增加抗體的生物(例如,血清)半衰期。為使抗體PEG化,抗體或其片段通常與聚乙二醇(PEG),例如PEG的反應性酯或醛類衍生物,在使一個或多個PEG基團附於抗體或抗體片段的條件下反應。優選地,PEG化透過與反應性PEG分子(或類似的有反應性的水溶性聚合物)的醯化反應或烷化反應進行。本文中所用的術語“聚乙二醇”包括任何形式的用於衍生其他蛋白的PEG,例如單(C
1-C
10)烷氧基-或芳氧基聚乙二醇或聚乙二醇馬來醯亞胺。在某些實施方式中,需要PEG化的抗體是去醣基化的抗體。PEG化蛋白的方法在領域內已知,且可以應用到本發明的抗體。參見,例如EPO 154 316和EP 0 401 384。
抗體的物理特性
本發明的抗體可以用它們的多種物理特性進行表徵,以檢測和/或區別其分類。
例如,抗體可以在輕鏈或重鏈可變區包含一個或多個醣基化位點。這些醣基化位點可能引起增加的抗體免疫原性,或由於改變的抗原結合而引起改變的抗體pK值(Marshall
et al(1972)
Annu Rev Biochem41:673-702; Gala and Morrison (2004)
J Immunol172:5489-94; Wallick
et al(1988)
J Exp Med168:1099-109; Spiro (2002)
Glycobiology12:43R-56R; Parekh
et al(1985)
Nature316:452-7; Mimura
et al., (2000)
Mol Immunol37:697-706)。醣基化已知發生在含有N-X-S/T序列的基序中。在一些情況下,優選Trop2抗體不包含可變區醣基化。這可以透過選擇不在可變區包含醣基化基序的抗體或透過突變醣基化區域的殘基來實現。
在優選實施方式中,抗體不包含天冬醯胺異構位點。天冬醯胺的脫醯胺可能出現在N-G或D-G序列,創建出異天冬胺酸殘基,其向多肽鏈中引入扭結並降低其穩定性(異天冬胺酸效果)。
各抗體將具有獨特的等電點(pI),基本落在6-9.5的pH範圍內。IgG1抗體的pI通常落在7-9.5的pH範圍內,而IgG4抗體的pI基本落在6-8的pH範圍內。推測pI在正常範圍外的抗體可能在體內條件下具有一些展開結構且不穩定。因此,優選Trop2抗體的pI值落在正常範圍內。這可以透過選擇pI在正常範圍內的抗體或透過突變不帶電的表面殘基來實現。
編碼本發明抗體的核酸分子
在另一方面,本發明提供編碼本發明抗體的重鏈和/或輕鏈可變區或CDR的核酸分子。核酸可以存在整細胞中,在細胞裂解液中,或處於部分純化或基本純的形式。當透過標準技術從其他細胞組分或其他污染物例如其他細胞核酸或蛋白中純化出來後,核酸是“分離的”或“基本純的”。本發明的核酸可以為例如DNA或RNA,且可能包含或可能不包含內含子序列。在優選實施方式中,核酸是cDNA分子。
本發明的核酸可以使用標準的分子生物學技術獲得。對於由融合瘤(例如,由攜帶人免疫球蛋白基因的基因轉殖小鼠製備的融合瘤)表現的抗體,編碼融合瘤製備的抗體的輕鏈和重鏈的cDNA可以透過標準PCR擴增或cDNA轉殖技術獲得。對於(例如使用噬菌體展示技術)從免疫球蛋白基因庫獲得的抗體,編碼這類抗體的核酸可以從基因庫中收集。
優選的本發明核酸分子包括編碼Trop2單株抗體的V
H和V
L序列或CDR的那些。一旦獲得了編碼V
H和V
L的DNA片段,這些DNA片段可以進一步透過標準的重組DNA技術進行操作,例如將可變區基因轉變為全長抗體鏈基因、Fab片段基因或scFv基因。在這些操作中,編碼V
H或V
L的DNA片段與編碼另一蛋白的另一DNA片段,例如抗體恆定區或柔性連接子,可操作地連接。術語“可操作地連接”是指兩個DNA片段連接在一起,從而兩個DNA片段編碼的胺基酸序列都在閱讀框內。
編碼V
H區的分離DNA可以透過可操作地連接V
H編碼DNA與編碼重鏈恆定區(C
H1、C
H2和C
H3)的另一DNA分子而轉變成全長重鏈基因。人重鏈恆定區基因的序列在領域內已知,且包括這些區域的DNA片段可以透過標準PCR擴增而獲得。重鏈恆定區可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恆定區,但是優選為IgG1或IgG4恆定區。對於Fab片段重鏈基因,編碼V
H區的DNA可以可操作地與僅編碼重鏈C
H1恆定區的另一DNA分子連接。
編碼V
L區的分離DNA可以透過可操作地連接V
L編碼DNA與編碼輕鏈恆定區C
L的另一DNA分子而轉變成全長輕鏈基因。人輕鏈恆定區基因的序列在領域內已知,且包括這些區域的DNA片段可以透過標準PCR擴增而獲得。在優選實施方式中,輕鏈恆定區可以是κ和λ恆定區。
為創建scFv基因,編碼V
H和V
L的DNA片段可以可操作地與編碼柔性連接子例如編碼胺基酸序列(Gly4-Ser)
3的另一片段連接,從而V
H和V
L序列可以作為連續的單鏈蛋白進行表現,其中V
H和V
L區域透過該柔性連接子連接(參見,例如Bird
et al., (1988)
Science242:423-426; Huston
et al., (1988)
Proc. Natl. Acad. Sci.
USA85:5879-5883; McCafferty
et al., (1990)
Nature348:552-554)。
本發明單株抗體的製備
本發明使用和鉑生物H2L2基因轉殖小鼠來製備具有全人源可變區的兩重鏈和兩輕鏈免疫球蛋白抗體。利用基因工程改造,在小鼠體內引入人源重鏈和輕鏈基因轉殖位點以產生人源抗體。根據引入的抗體重鏈基因座的設計不同,特定抗原的免疫刺激可以產生一類具有特定功能效應的傳統抗體(如IgG或IgA)或多類抗體(如IgM和IgG)。
抗原特異性的H2L2單株抗體可以使用Kohler and Milstein (1975)
Nature256: 495的體細胞雜交(融合瘤)技術進行製備。製備單株抗體的其他實施方式包括B淋巴細胞的病毒或致癌性轉形以及噬菌體展示技術。嵌合或人源化抗體也在領域內熟知。參見,例如美國專利4,816,567; 5,225,539; 5,530,101; 5,585,089; 5,693,762和6,180,370。
製備本發明單株抗體的轉染瘤的生成
本發明的抗體還可以使用例如重組DNA技術結合基因轉染方法,在宿主細胞轉染瘤中生成(例如Morrison, S. (1985)
Science229:1202)。在一個實施方式中,將由標準分子生物技術得到的編碼部分或全長輕鏈和重鏈的DNA插入一個或多個表現載體中,從而基因與轉錄和轉譯調控序列可操作地連接。在該情況下,術語“可操作地連接”是指抗體基因連接到載體中,從而載體內的轉錄和轉譯控制序列行使它們既定的調控抗體基因轉錄和轉譯的功能。
術語“調控序列”包括控制抗體基因轉錄或轉譯的啟動子、增強子和其他表現控制元件(例如,多腺苷酸化信號)。這樣的調控序列在例如Goeddel (Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990))中有過描述。優選的用於哺乳動物宿主細胞表現的調控序列包括引導在哺乳動物細胞中的高位準蛋白表現的病毒元件,例如得自巨細胞病毒(CMV)、猿猴病毒40(SV40)、腺病毒的啟動子和/或增強子,如腺病毒主要晚期啟動子(AdMLP)和多瘤病毒。或者,可以使用非病毒調控序列,例如泛素啟動子或β-珠蛋白啟動子。另外,調控元件由不同來源的序列構成,例如SRα啟動子系統,其包含來自SV40早期啟動子的序列和人T細胞白血病I型病毒的長末端重複(Takebe
et al., (1988)
Mol. Cell. Biol.8:466-472)。表現載體和表現控制序列選為與所使用的表現宿主細胞相容。
抗體輕鏈基因和抗體重鏈基因可以插入到同一或不同的表現載體中。在優選實施方式中,可變區透過插入到已經編碼所需亞型的重鏈恆定區和輕鏈恆定區的表現載體中而構建全長抗體基因,從而V
H與載體中的C
H可操作地連接,V
L與載體中的C
L可操作地連接。或者,重組表現載體可以編碼促進抗體鏈從宿主細胞分泌的信號肽。抗體鏈基因可以轉殖到載體中,從而信號肽在閱讀框內連接到抗體鏈基因的胺基端。信號肽可以是免疫球蛋白信號肽或異源信號肽(即,來自非免疫球蛋白的信號肽)。
除抗體鏈基因和調控序列外,本發明的重組表現載體可以攜帶其他序列,例如調控載體在宿主細胞中複製的序列(例如,複製起始點)和可選擇標記物基因。可選擇標記物基因可用於選擇已導入載體的宿主細胞(參見,例如,美國專利4,399,216; 4,634,665和5,179,017)。例如,通常可選擇標記物基因賦予已導入載體的宿主細胞以藥物抗性,例如G418、潮黴素、或氨甲喋呤抗性。優選的可選擇標記物基因包括二氫葉酸還原酶(DHFR)基因(用於dhfr宿主細胞的氨甲喋呤選擇/擴增)和neo基因(用於G418選擇)。
對於輕鏈和重鏈的表現,編碼重鏈和輕鏈的表現載體透過標準技術轉染到宿主細胞中。多個形式的術語“轉染”包括多種常用於將外源DNA導入原核或真核宿主細胞的技術,例如,電穿孔、磷酸鈣沉澱、DEAE-葡聚糖轉染等。儘管在原核或真核宿主細胞中表現本發明抗體在理論上是可行的,優選抗體在真核細胞中表現,最優選在哺乳動物宿主細胞中表現,因為真核細胞,特別是哺乳動物細胞,比原核細胞更可能組裝並分泌適當折疊且有免疫活性的抗體。
優選的用於表現本發明重組抗體的哺乳動物宿主細胞包括中國倉鼠卵巢(CHO細胞)(包括與DHFR可選擇標記物一起施用的dhfr-CHO細胞,在Urlaub and Chasin, (1980)
Proc. Natl. Acad. Sci. USA77:4216-4220中有過描述,DHFR可選擇標記物在例如R. J. Kaufman and P. A. Sharp (1982)
J. Mol. Biol. 159:601-621中描述)、NSO骨髓瘤細胞、COS細胞和SP2細胞。特別在使用NSO骨髓瘤細胞時,另一優選的表現系統是GS基因表現系統,記載於WO 87/04462、WO 89/01036和EP 338,841。當編碼抗體基因的重組表現載體導入哺乳動物宿主細胞時,透過將宿主細胞培養足以使得宿主細胞中抗體表現、或優選地足以使得抗體分泌到宿主細胞生長的培養基中的一段時間,從而製備抗體。抗體可以使用蛋白純化方法從培養基中回收。
重組蛋白及其製備方法
本發明還涉及包含本發明抗體或抗原結合蛋白,或包含與本發明抗體或抗原結合蛋白具有至少50%,較佳地至少70%,更佳地至少80%序列相同性的胺基酸序列的重組蛋白。此外,本發明的重組蛋白還可包括本發明奈米抗體與表現標籤(如6His)融合在一起所形成的融合蛋白。
一旦獲得了有關的序列,就可以用重組法來大批量地獲得有關序列。這通常是將其轉殖入載體,再轉入細胞,然後透過常規方法從增殖後的宿主細胞中分離得到有關序列。本發明所涉及的生物分子(核酸、蛋白等)包括以分離的形式存在的生物分子。
目前,已經可以完全透過化學合成來得到編碼本發明重組蛋白(或其片段,或其衍生物)的DNA序列。然後可將該DNA序列引入本領域中已知的各種現有的DNA分子(或如載體)和細胞中。此外,還可透過化學合成將突變引入本發明重組蛋白序列中。
本發明還涉及包含上述的適當DNA序列以及適當啟動子或者控制序列的載體。這些載體可以用於轉形適當的宿主細胞,以使其能夠表現蛋白質。
宿主細胞可以是原核細胞,如細菌細胞;或是低等真核細胞,如酵母細胞;或是高等真核細胞,如哺乳動物細胞。代表性例子有:大腸桿菌,鏈黴菌屬;鼠傷寒沙門氏菌的細菌細胞;真菌細胞如酵母;果蠅S2或Sf9的昆蟲細胞;CHO、COS7、293細胞的動物細胞等。
用重組DNA轉形宿主細胞可用本領域技術人員熟知的常規技術進行。當宿主為原核生物如大腸桿菌時,能吸收DNA的勝任細胞可在指數生長期後收穫,用CaCl
2法處理,所用的步驟在本領域眾所周知。另一種方法是使用MgCl
2。如果需要,轉形也可用電穿孔的方法進行。當宿主是真核生物,可選用如下的DNA轉染方法:磷酸鈣共沉澱法,常規機械方法如顯微注射、電穿孔、脂質體包封等。
獲得的轉形體可以用常規方法培養,表現本發明的基因所編碼的多肽。根據所用的宿主細胞,培養中所用的培養基可選自各種常規培養基。在適於宿主細胞生長的條件下進行培養。當宿主細胞生長到適當的細胞密度後,用合適的方法(如溫度轉換或化學誘導)誘導選擇的啟動子,將細胞再培養一段時間。
在上面的方法中的重組多肽可在細胞內、或在細胞膜上表現、或分泌到細胞外。如果需要,可利用其物理的、化學的和其它特性透過各種分離方法分離和純化重組的蛋白。這些方法是本領域技術人員所熟知的。這些方法的例子包括但並不限於:常規的複性處理、用蛋白沉澱劑處理(鹽析方法)、離心、滲透破菌、超音波處理、超高速離心、分子篩層析(凝膠過濾)、吸附層析、離子交換層析、高效液相層析(HPLC)和其它各種液相層析技術及這些方法的結合。
免疫偶聯物
本發明的抗體可以與治療劑交聯,形成免疫偶聯物,例如抗體-藥物偶聯物(ADC)。合適的治療劑包括細胞毒素、烷化劑、DNA小溝結合分子、DNA嵌入劑、DNA交聯劑、組蛋白去乙醯化酶抑制劑、核輸出抑制劑、蛋白酶體抑制劑、拓撲異構酶I或II的抑制劑、熱休克蛋白抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑、抗生素和抗有絲分裂劑,優選為SN-38。在ADC中,抗體和治療劑優選地透過連接子交聯,該連接子可切割,例如肽類連接子、二硫類連接子或腙類連接子。更優選地,連接子是肽類連接子,例如Val-Cit、Ala-Val、Val-Ala-Val、Lys-Lys、Pro-Val-Gly-Val-Val、Ala-Asn-Val、Val-Leu-Lys、Ala-Ala-Asn、Cit-Cit、Val-Lys、Lys、Cit、Ser或Glu。ADC可以如美國專利7,087,600; 6,989,452;和7,129,261; PCT公開WO 02/096910; WO 07/038,658; WO 07/051,081; WO 07/059,404; WO 08/083,312;和WO 08/103,693; 美國專利公開20060024317; 20060004081;和20060247295中描述般進行製備。
多特異性抗體
另一方面,本發明涉及包含與至少一個其他功能分子如另一種胜肽或蛋白(例如,另一抗體或受體配體)相連接的一種或多種本發明抗體的多特異性抗體,以生成與至少兩個不同結合位點或標靶分子結合的多特異性抗體。術語“多特異性抗體”包括具有三種或更多種特異性的抗體。
在實施方式中,除Fc結合特異性和Trop2結合特異性外,雙特異性分子還具有第三特異性。第三特異性可以是針對增強因子(EF),例如與參與細胞毒性活性的表面蛋白結合並從而增加針對標的細胞的免疫反應的分子。例如,增強因子抗體可以與細胞毒性T細胞(例如,透過CD2、CD3、CD8、CD28、CD4、CD40或ICAM-1)或其他免疫細胞結合,引起增強的針對標的細胞的免疫反應。
多特異性抗體可以以多種形式和尺寸出現。在尺寸譜的一端,多特異性抗體保持傳統抗體形式,除其具有兩個結合臂且各臂具有不同特異性外,替代具有兩個特異性相同的結合臂的情況。在另一極端的是雙特異性分子,由兩個經肽鏈連接的單鏈抗體片段(scFv)構成,稱為Bs(scFv)
2構建體。中間尺寸的雙特異性分子包括由肽類連接子連接的兩個不同的F(ab)片段。這些和其他形式的雙特異性分子可以透過基因改造、體細胞雜交或化學法進行製備。參見,例如Kufer et al, cited supra; Cao and Suresh,
Bioconjugate Chemistry, 9 (6), 635-644 (1998);和van Spriel
et al., Immunology Today, 21 (8), 391-397 (2000)。
編碼抗體或攜帶抗體的溶瘤病毒
溶瘤病毒偏好地侵襲並殺滅癌細胞。本發明的抗體與溶瘤病毒一起使用。此外,編碼本發明抗體的溶瘤病毒可以引入人體中。
藥物組合物
在另一方面,本發明提供一種藥物組合物,其包含本發明的一種或多種抗體,與藥學上可接受的載劑配製在一起。組合物可以任選地包含一種或多種其他藥學上的有效成分,例如另一抗體、化療劑等。本發明的藥學組合物可以在與例如另一抗癌劑、另一抗炎劑或疫苗的聯合療法中進行施用。
藥學組合物可以包含任何數量的賦形劑。可以使用的賦形劑包括載劑、表面活性劑、增稠或乳化劑、固體粘合劑、分散或懸浮劑、增溶劑、染色劑、矯味劑、塗層、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、防腐劑、等滲劑及其組合。合適賦形劑的選擇和使用在Gennaro, ed., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed. (Lippincott Williams & Wilkins 2003)中有教導。
優選地,藥物組合物適合於靜脈內、肌內、皮下、腸道外、脊柱或表皮施用(例如透過注射或推注)。基於施用途徑的不同,有效成分可以包在材料中,以保護其不受酸和可能使其失活的其他自然條件的影響。“腸道外施用”是指不同於腸道和局部外用的方式,通常透過注射進行,包括但不限於靜脈內、肌內、動脈內、膜內、囊內、眶內、心臟內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛網膜下、脊柱內、硬腦膜上和胸骨內注射和推注。或者,本發明的抗體可以透過非腸道外路徑施用,例如外用、表皮施用或粘膜施用,例如鼻內、經口、陰道、直腸、舌下、或局部外用。
藥物組合物可以為無菌水溶液或分散液的形式。它們也可以配製在微乳劑、脂質體或其他適於高濃度藥物的有序結構中。
與載劑材料一起製備成單劑型的有效成分的量將隨著治療主體和特定施用模式而變,且基本上而言是產生療效的組合物的量。以百分比計,該量為約0.01-約99%的與藥學上可接受載劑結合的有效成分,優選為約0.1%-約70%,最優選為約1%-約30%的有效成分。
給藥方案經調整提供最佳的所需反應(例如,治療反應)。例如,可以施用快速灌注劑,可以隨時間推移施用多個分劑量,或者劑量可以隨治療情況的危急程度成比例降低或提高。特別有利的是,以方便施用和劑量均勻的劑量單位型配置腸道外組合物。劑量單位型是指物理上分開的單位,適於治療主體的單次給藥;各單位包含計算出來與藥學載劑一起產生所需療效的預定量的有效成分。或者,抗體可以以緩釋劑施用,這種情況下所需的施用頻率降低。
對於抗體的施用,劑量可以為約0.001-100 mg/kg宿主體重,更常見的為0.01-5 mg/kg。例如,劑量可以為0.3 mg/kg體重、1 mg/kg體重、3 mg/kg體重、5 mg/kg體重或10 mg/kg體重,或在1-10 mg/kg範圍內。例示性的治療方案涉及每週施用一次、兩週一次、三週一次、四周一次、一個月一次、3個月一次、或3-6個月一次。本發明Trop2的優選給藥方案包括靜脈內施用,1 mg/kg體重或3 mg/kg體重,抗體以以下給藥時間表中的一個進行給藥:(i)每四周給藥六次,然後每三個月一次;(ii)每三週一次;(iii) 3 mg/kg體重一次,之後1 mg/kg體重每三週一次。在一些方法中,劑量調整成實現約1-1000 µg/ml的血藥濃度,在一些方法中為約25-300 µg/ml。
“治療有效量”的本發明Trop2抗體引起疾病症狀嚴重程度的降低、無症狀期頻率和持續時間的增加、或對感病性引起的損傷或無能的預防能力。例如,對於帶瘤受試者的治療,“治療有效量”優選地,與未治療受試者相比,將腫瘤生長抑制至少約20%、更優選抑制至少約40%,甚至更優選地抑制至少約60%,且更優選地抑制至少約80%。治療有效量的治療抗體可以減小腫瘤尺寸,或者減輕受試者的症狀,受試者可以是人或另一哺乳動物。
藥物組合物可以是緩釋試劑,包括植入體、透皮貼劑、和微膠囊遞送系統。可以使用生物可降解、生物相容的聚合物,例如乙烯-醋酸乙烯、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯、和聚乳酸。參見,例如,Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978。
藥學組合物可以經醫學設備來給藥,例如(1)無針皮下注射設備(例如,美國專利5,399,163; 5,383,851; 5,312,335; 5,064,413; 4,941,880; 4,790,824;和4,596,556);(2)微量輸液泵(美國專利4,487,603);(3)經皮給藥設備(美國專利4,486,194);(4)推注設備(美國專利4,447,233和4,447,224);和(5)滲透設備(美國專利4,439,196和4,475,196)。
在某些實施方式中,本發明的單抗可以經配製,以確保合適的體內分佈。例如,為確保本發明的治療抗體穿越血腦屏障,抗體可以配製在脂質體中,其還可以額外地包含標靶功能基團,以增強對特定細胞或器官的選擇性輸送。參見,例如美國專利4,522,811; 5,374,548; 5,416,016;和5,399,331; V. V. Ranade (1989)
J. Clin.Pharmacol.29:685; Umezawa
et al., (1988)
Biochem. Biophys. Res. Commun. 153:1038; Bloeman
et al., (1995)
FEBS Lett.357:140; M. Owais
et al., (1995)
Antimicrob. Agents Chemother. 39:180; Briscoe
et al., (1995)
Am. J. Physiol. 1233:134; Schreier
et al., (1994)
J. Biol. Chem.269:9090; Keinanen and Laukkanen (1994)
FEBS Lett.346:123;和Killion and Fidler (1994)
Immunomethods4:273。
本發明的用途和方法
本發明的抗體(組合物、雙特異性分子和免疫偶聯物)具有多種體外和外內應用,涉及例如癌症的診斷、和/或治療。抗體可以施用至人受試者,以例如體內抑制腫瘤生長。在癌症的診斷中,可以收集目標群組織樣本,並與本發明抗體接觸,其中,如果在某些區域或細胞類中檢測到高位準的Trop2,則診斷該受試者可能患有癌症,且Trop2表現的增加/減少表示癌症發展/減輕。
考慮到本發明Trop2抗體的抑制腫瘤細胞增殖和存活的能力,本發明提供抑制受試者中腫瘤細胞生長的方法,包括向該受試者施用本發明的抗體,從而在該受試者中腫瘤生長被抑制。可以由本發明抗體治療的腫瘤的非限制性例子包括但不限於乳癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、和腸癌,原發或轉移的。此外,難治的或復發的惡性腫瘤可能可以用本發明的抗體抑制。
本發明的這些和其他方法在以下進一步討論。
聯合療法
本發明提供本發明Trop2抗體或其抗原結合部分與一種或多種其他抗體一起施用的聯合療法,其能有效抑制受試者中的腫瘤生長。在一個實施方式中,本發明提供在受試者中抑制腫瘤生長的方法,包括向受試者施用Trop2抗體以及一種或多種其他抗體,例如LAG-3抗體、PD-1抗體和/或CTLA-4抗體。在某些實施方式中,受試者是人。在另一個方面,本發明提供癌症治療方法,其中本發明的Trop2抗體或其抗原結合部分與化療劑一起施用,化療劑可以是細胞毒性劑。例如,SN-38、表阿黴素、奧沙利鉑、和/或5-FU可以施用給接受Trop2抗體療法的患者。
其他可以與Trop2抗體聯合的療法包括但不限於免疫原性劑施用、介白素2(IL-2)施用、放療、手術或激素去除。
本文討論的治療劑的組合可以作為在藥學可接受載劑中的單一組合物同時施用,或者作為分開的組合物同時施用,其中各藥劑處於藥學可接受載劑中。在另一個實施方式中,治療劑的組合可以按序施用。
此外,如果進行多次聯合療法施用,且藥劑按序施用,則在各時間點的按序施用的次序可以反轉或保持相同,按序施用可以與同時施用或其任何組合相結合。
套組
本發明還提供了一種含有本發明的抗體(或其片段)或檢測盤的套組,在本發明的一個優選例中,所述的套組還包括容器、使用說明書、緩衝劑等。
本發明還提供了用於檢測Trop2位準的檢測套組,該套組包括辨識Trop2蛋白的抗體,用於溶解樣本的裂解介質,檢測所需的通用試劑和緩衝液,如各種緩衝液、檢測標記、檢測受質等。該檢測套組可以是體外診斷裝置。
本發明的主要優點包括:
本申請提供了一種抗Trop2結合蛋白的全人源抗體,其具有至少一種下述性質:
1) FACS測定中,能夠特異性結合過度表現人Trop2的HEK293細胞、過度表現猴Trop2的CHO-K1細胞或BxPC-3細胞表面的Trop2蛋白。
2) 經MMAF偶聯後能夠內化毒殺BxPC-3細胞。
3) 對BxPC-3細胞具有ADCP活性。
4) 對BxPC-3細胞具有ADCC活性。
5) 結合表位與參照抗體hRS7不同。
6) 能夠在較短的時間被腫瘤細胞BxPC-3或者過度表現人Trop2的HEK293細胞內吞。
下面結合具體實施例,進一步闡述本發明。應理解,這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法,通常按照常規條件,例如Sambrook等人,分子選殖:實驗室手冊(New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件,或按照製造廠商所建議的條件。除非另外說明,否則百分比和份數是重量百分比和重量份數。
實施例 1 : H2L2 鼠免疫,融合瘤細胞融合和抗體篩選
H2L2基因轉殖小鼠(WO2010/070263 Al)能夠產生與野生型小鼠(如BALB/C)相當的免疫反應和抗體效價。抗人Trop2的抗體分別由兩種免疫原(人Trop2 ECD-hFc蛋白及HEK293T/hTrop2細胞株)免疫H2L2小鼠產生。
1.1. Trop2 ECD-hFc蛋白免疫
用免疫原為重組的醣基化的人Trop2 ECD-hFc 蛋白(Chempartner, Shanghai)免疫6-8周齡的Harbour H2L2基因轉殖小鼠,並將其養殖於無特定的病原條件(SPF)下。在第一次免疫中,每隻小鼠分別在腹腔和腋下淋巴結及腹股溝淋巴結處注射50 µg免疫原蛋白和0.2 ml完全弗氏佐劑(CFA, Sigma, #F5881)。為了增強免疫反應,在第一次免疫接種兩周後,將25 µg免疫原蛋白連同200 µl Ribi (Sigma佐劑系統, Sigma, #S6322),注射到每隻小鼠的腹腔內和皮下淋巴結處,隨後每隻老鼠每隔2周注射一次25 µg免疫原和200 µl Ribi佐劑,加上第一次免疫共計6次。分別在此免疫期間的第四針及第六針的一周後,採集小鼠血液,對血液進行10倍稀釋取5個濃度(1:100、1:1000、1:10000、1:100000、1:1000000),在塗佈有人Trop2 Fc蛋白(Chempartner, Shanghai)的ELISA盤進行ELISA檢測來確定小鼠血液中抗人Trop2的效價,並經流式細胞術檢測2個濃度的小鼠血液(1:100、1:1000)對Trop2高度表現的CHO-K1/hTrop2細胞(Chempartner, Shanghai)和CHO-K1母細胞的特異反應性。空白對照組(PB)為免疫前老鼠的血清。
1.2. Trop2的穩定表現細胞株HEK293/hTrop2免疫
用免疫原為高度表現人Trop2的穩定表現細胞株HEK293/hTrop2 (Chempartner, Shanghai)免疫6-8周齡的Harbour H2L2基因轉殖小鼠,並將其養殖於無特定的病原條件(SPF)下。在第一次免疫中,每隻小鼠分別在腹腔和腋下及腹股溝共注射2×10
6免疫原HEK293/Trop2細胞和0.2 ml完全弗氏佐劑(CFA, Sigma, #F5881)。為了增強免疫反應,在第一次免疫接種兩周後,將2×10^6免疫原HEK293/Trop2細胞連同200 µl Ribi (Sigma佐劑系統, Sigma, #S6322),注射到每隻小鼠的腹腔內和皮下淋巴結處,隨後每隻老鼠每隔2周注射一次2×10
6免疫原和200 µl Ribi佐劑,加上第一次免疫共計6次。分別在此免疫期間的第四針及第六針的一周後,採集小鼠血液,對血液進行10倍稀釋取5個濃度(1:100、1:1000、1:10000、1:100000、1:1000000),在塗佈有人Trop2 Fc蛋白(Chempartner, Shanghai)的ELISA盤進行ELISA檢測來確定小鼠血液中抗人Trop2的效價,並經流式細胞術檢測2個濃度的小鼠血液(1:100、1:1000)對Trop2高度表現的CHO-K1/hTrop2細胞(Chempartner, Shanghai)和CHO-K1母細胞的特異反應性。空白對照組(PB)為免疫前老鼠的血清。
在完成上述步驟之後,選擇具有針對人Trop2的特異性免疫反應的小鼠進行融合之前,在會陰內注射100 µg純化的人Trop2 Fc (Chempartner, Shanghai,#151215003)蛋白加強免疫。三天後,處死小鼠,並收集其脾細胞和淋巴結細胞。將NH
4OH添加到脾細胞和淋巴結樣品中,最終濃度為1% (w/w),以溶解樣品中的紅血球。樣品以1000轉/分的速度離心,用DMEM培養基洗滌三次,測定細胞的存活率和數量。小鼠骨髓瘤細胞sp2/0 (ATCC, #CRL-1581)用無血清的DMEM洗滌兩次,測定細胞的存活率和數量。然後用高效電融合法以4:1的比例將活脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞sp2/0 (ATCC, #CRL-1581)融合。
將融合細胞重新懸浮於含有20%超低IgG FBS (ultra-low IgG, Fetal Bovine Serum, #16250086, Life Technologies)並添加有1×次黃嘌呤、氨蝶呤和胸苷(50 × HAT supplement, #21060017, Life Technologies)的培養基(Hybridoma-SFM, #12045084, Life Technologies)中,將濃度調整為10
5個細胞/200 µl。在96孔盤的每個孔中加入200 µl的融合細胞,在37˚C、5%CO
2條件下培養。細胞融合後14天,免疫原為醣基化Trop2 Fc蛋白得到的融合瘤上清液用酵素連結免疫吸附試驗(ELISA)測定其與人Trop2 Fc蛋白結合的能力來篩選;免疫原為HEK293/hTrop2得到的融合瘤上清液用Acumen螢光微量井培養盤檢測其與CHO-K1/hTrop2及CHO-K1母細胞的結合能力。
篩選出的陽性選殖株(OD450>2)或者在Acumen上陽性百分比>80%的選殖株再透過流式細胞儀篩選與CHO-K1/人Trop2細胞,CHO-K1/猴Trop2細胞及CHO-K1/小鼠Trop2細胞(Chempartner,Shanghai)特異結合的選殖株。在螢光強度評分後,選擇螢光強度最強的70個融合瘤母選殖株,透過有限稀釋法進行次選殖,經篩選生長起來的單株次選殖株透過ELISA和Acumen及流式細胞術篩選,找出與人,猴及小鼠Trop2細胞均結合的最強的單株次選殖株。經小鼠Ig分型Ready-SET-GO! ELISA (Life technologies, #88-50640-88) 確定為IgG亞型的單株次選殖株將進行定序分析。
實施例 2 :單株 Trop2 抗體的定序、表現和純化
對單株Trop2抗體進行定序,序列總結在表1a和表1b中。
將Trop2抗體的重鏈可變區序列次選殖到含有信號肽和人重鏈IgG1恆定區的pTT5表現載體中。將Trop2抗體的輕鏈可變區序列次選殖到含有信號肽和人抗體輕鏈kappa恆定區的表現載體中。重組質體經定序證實後用大量萃取套組(Macherey-Nagel,NucleoBond® Xtra Midi)萃取質體,以提高重組質體的純度和品質,質體透過0.22 µm篩檢程式(millpore)過濾。純化後的質體用於轉染。
293-6E細胞(Genescript, Nanjing, China)在FreeStyle 293培養基(Invitrogen, #12338026)中37˚C,130rpm,5% CO
2培養箱培養。調整HEK293-6E細胞到1-1.5×10
6/ml細胞密度後進行轉染。用重鏈質體和輕鏈質體透過PEI (sigma)共轉染HEK293-6E細胞,持續一周。大約在第5-7天,測定抗體的效價。約在第6-7天,對HEK293E培養物進行離心(30分鐘,3500 rpm),收集上清液,並透過0.22 µm篩檢程式過濾純化。
蛋白A管柱(GE)用0.1M NaOH洗滌30分鐘或用5倍管柱體積的0.5M NaOH洗滌以去除內毒素。長期未使用的蛋白A管柱先在1 M NaOH中浸泡至少1小時,再用無內毒素水清洗至pH為中性值,最後用10倍管柱體積的1% Triton X-100進行清洗。然後用5倍管柱體積的磷酸鹽緩衝液PBS (pH7.4)平衡蛋白管柱。將上述收集的上清液裝載到管柱上,必要時收集流過的液體。用5倍管柱體積的PBS洗滌管柱,然後用5倍管柱體積的0.1 M甘胺酸-HCl (pH3.0)洗提。含有Trop2抗體的洗提液用0.5倍管柱體積的1 M Tris-HCl (Nacl 1.5 M) pH8.5中和。人抗Trop2抗體在1 × PBS中透析4小時,以避免內毒素污染。透析後用分光光度法或套組測定抗Trop2的抗體濃度,用高效液相色譜-質譜法測定抗體純度,用可擕式內毒素測試儀器(Endosafe
®nexgen-PTS™,Charles River)測定內毒素含量。
經上述實驗,共得到29種具有獨特序列的Trop2單株抗體,抗體的可變區序列列於表1a。得到的29種抗體均為IgG1亞型,兩條鏈的種系不同於參照抗體Tab(hRS7)。
此外,準備了兩種對比例抗體,用於後續實施例,一種是對比例1抗體PR001131 (自製),另一種是對比例2抗體Tab (hRS7,ChemPartner,#T07-001)。
具體而言,對比例1抗體PR001131的恆定區序列,可變區序列,具體地,其VH的胺基酸序列如NO.193所示,VL的胺基酸序列如NO.223所示,重鏈的胺基酸序列如NO.242所示,輕鏈的胺基酸序列如NO.272所示。
對比例2抗體Tab(hRS7)是在Immunomedics, Inc.和Seattle Genetics公司的sacituzumab govitecan基礎上製備的對比例抗體,其重鏈和輕鏈的胺基酸序列分別如SEQ NO ID: 290和SEQ NO ID: 291所示。
實施例 3 :重組 Trop2 抗體與 293T- 人 Trop2 結合能力
用3 ml TrypLE酶(Life technologies, #12604-013)消化293T-人Trop2細胞(KyInno,#KC-0995),用7 ml相應培養基終止消化酶處理。確定細胞密度,用PBS重新懸浮細胞至1×10
6/ml,每孔取100 ul細胞懸浮液至96孔V型盤內。96孔V型盤1000 rpm離心5分鐘,用PBS+0.5% BSA (VWR, #0332-100G)清洗一次。將細胞重新懸浮於100 µl梯度稀釋的抗體中(5倍稀釋,起始濃度66.67 nM),並於4℃培育1小時,hRS7 (ChemPartner,#T07-001)和hlgG1分別作為參考對照和陰性對照。1小時後用PBS+0.5% BSA清洗兩次。將細胞與100 µl Alexa Fluor 488山羊抗人IgG (Life technologies,1:1000,#A-11013)避光4℃培育1小時,用PBS+0.5%BSA清洗兩次。將細胞重新懸浮在200 µl PBS+0.5% BSA中。用FACS verse流式細胞儀分析細胞的螢光強度。所有操作均在冰上進行。
如圖1和表3所示,本發明的29株Trop2抗體均能特異性地結合人Trop2,且檢測到的抗體結合能力與抗體濃度成正相關的關係遞增。與之相反,對比例1抗體PR001131與人Trop2的結合則很弱。與對比例2抗體Tab(hRS7)相比,在相同濃度下,本發明的26個Trop2抗體表現出比參照抗體hRS7更高或者相當的MFI max,表明了抗體能在HEK293/hTrop2細胞上結合更多的hTrop2蛋白。其中14個抗體的EC
50比參照抗體更低,說明這些抗體能以較低的濃度更靈敏得結合Trop2,其中以PR001142,PR001162和PR001166為最佳,其EC
50均小於0.3 nM,比參照抗體的EC
50小約三倍。
表 3. Trop2抗體與293T-人Trop2的結合力
抗體 | EC 50(nM) | 最高值(MFI) | Top% |
PR001128 | 0.466 | 6846 | 105.66 |
PR001130 | 2.057 | 6819 | 105.25 |
PR001131 | 22.62 | 68.35 | 1.05 |
PR001132 | 0.441 | 6923 | 106.85 |
PR001133 | 0.995 | 7198 | 111.1 |
PR001134 | 0.653 | 6035 | 93.15 |
PR001138 | 0.478 | 6726 | 103.81 |
PR001139 | 0.325 | 6846 | 105.66 |
PR001142 | 0.23 | 6512 | 100.51 |
PR001143 | 0.795 | 6299 | 97.22 |
PR001145 | 0.48 | 7026 | 108.44 |
PR001147 | 1.314 | 7422 | 114.55 |
PR001150 | 0.589 | 6571 | 101.42 |
PR001151 | 1.608 | 7511 | 115.93 |
PR001152 | 1.929 | 7185 | 110.9 |
PR001153 | 2.466 | 6937 | 107.07 |
PR001154 | 2.106 | 7470 | 115.3 |
PR001155 | 2.541 | 7319 | 112.96 |
PR001156 | 1.667 | 7271 | 112.22 |
PR001158 | 1.257 | 6952 | 107.3 |
PR001159 | 0.977 | 6788 | 104.77 |
PR001160 | 1.224 | 6713 | 103.61 |
PR001162 | 0.158 | 5847 | 90.25 |
PR001163 | 0.496 | 5988 | 92.42 |
PR001164 | 2.396 | 8949 | 138.12 |
PR001165 | 0.414 | 6457 | 99.66 |
PR001166 | 0.204 | 7048 | 108.78 |
PR001168 | 0.669 | 6776 | 104.58 |
PR001170 | 0.352 | 6961 | 107.44 |
PR001171 | 0.997 | 6597 | 101.82 |
hRS7 | 0.753 | 6479 | 100 |
對Trop2抗體與人Trop2穩定轉殖株的結合親和力的EC
50和中位螢光強度(MFI)最高值(MFI
max)進行排序,選擇EC
50<3 nM 且MFI
max>4000的29個Trop2抗體進行後續檢測。
實施例 4 : Trop2 抗體對重組人或猴 Trop2 蛋白的結合親和力和解離常數的測定
按照製造商提供的詳細操作和方法,使用Octet RED96儀器(Fortiebio)和抗人IgG Fc親和素感測器(AHC感測器,Pall ForteBio,#18-5060)測定親和力。具體地,用含有0.1% (w/w) BSA和0.02% (v/v)吐溫20的PBS緩衝液(pH7.4)將人TROP2蛋白(Sino Biological,#10428-H08H)或者猴Trop2蛋白(Sino Biological,#90893-C08H)稀釋至200 nM,分別與AHC感測器培育。將40 nM的Trop2抗體分別與攜載人Trop2蛋白或猴蛋白的AHC感測器在30℃培育3分鐘。該反應混合物在含有0.1% (v/w) BSA和0.02% (v/v)吐溫20的PBS緩衝液(pH7.4)中於30℃繼續培育5分鐘。Octet Red 96即時記錄Trop2抗體與人Trop2蛋白或者猴Trop2蛋白的結合和分離信號。親和力、關聯和解離常數由Octet使用軟體確定,結果如表4、表5和表6所示,測試的29個Trop2抗體中4個抗體(PR001128,PR001130,PR001166,PR001170)與人Trop2蛋白和猴Trop2蛋白的KD值均低於參照抗體Tab(hRS7),表明其更強的人和猴Trop2結合親和力。在與人Trop2蛋白結合親和力方面,除上述四種抗體外,PR001132、PR001138、PR001150、PR001159、PR001153、PR001165的KD值約低於參照抗體10倍;而這些抗體與猴蛋白的親和力與參照抗體相當。
表 4 Trop2抗體與人Trop2蛋白的結合與解離常數
表 5 Trop2抗體與猴Trop2蛋白的結合與解離常數
表 6 抗體與猴Trop2蛋白和人Trop2蛋白的解離常數的比較
實施例 5 : MMAF 偶聯抗體內化對標的細胞的毒殺
抗原 | 抗體 | 反應 | KD (M) | kon(1/Ms) | kdis(1/s) |
人TROP2 | PR001128 | 0.4021 | <1.0E-12 | 1.30E+05 | <1.0E-07 |
人TROP2 | PR001130 | 0.3574 | <1.0E-12 | 5.52E+04 | <1.0E-07 |
人TROP2 | PR001132 | 0.4167 | <1.0E-12 | 1.21E+05 | <1.0E-07 |
人TROP2 | PR001133 | 0.3864 | 1.10E-09 | 8.85E+04 | 9.72E-05 |
人TROP2 | PR001134 | 0.354 | 5.42E-09 | 8.31E+04 | 4.51E-04 |
人TROP2 | PR001138 | 0.3381 | <1.0E-12 | 1.48E+05 | <1.0E-07 |
人TROP2 | PR001139 | 0.3362 | 4.79E-09 | 8.90E+04 | 4.26E-04 |
人TROP2 | PR001142 | 0.3898 | 3.23E-10 | 2.72E+05 | 8.78E-05 |
人TROP2 | PR001143 | 0.3346 | 6.94E-09 | 8.01E+04 | 5.56E-04 |
人TROP2 | PR001145 | 0.2897 | 1.47E-08 | 9.19E+04 | 1.35E-03 |
人TROP2 | PR001147 | 0.349 | 4.98E-10 | 8.50E+04 | 4.23E-05 |
人TROP2 | PR001150 | 0.3823 | 3.26E-11 | 1.61E+05 | 5.25E-06 |
人TROP2 | PR001151 | 0.4069 | 1.12E-09 | 1.13E+05 | 1.27E-04 |
人TROP2 | PR001152 | 0.3481 | 1.35E-10 | 1.54E+05 | 2.08E-05 |
人TROP2 | PR001153 | 0.3809 | 3.23E-11 | 7.86E+04 | 2.53E-06 |
人TROP2 | PR001154 | 0.4103 | 8.55E-10 | 1.08E+05 | 9.23E-05 |
人TROP2 | PR001155 | 0.4057 | 1.84E-09 | 7.81E+04 | 1.44E-04 |
人TROP2 | PR001156 | 0.3536 | 9.16E-11 | 1.83E+05 | 1.67E-05 |
人TROP2 | PR001158 | 0.433 | 1.55E-10 | 1.32E+05 | 2.05E-05 |
人TROP2 | PR001159 | 0.3802 | <1.0E-12 | 1.76E+05 | <1.0E-07 |
人TROP2 | PR001160 | 0.3903 | 8.19E-10 | 1.16E+05 | 9.48E-05 |
人TROP2 | PR001162 | 0.3661 | 1.70E-09 | 2.98E+05 | 5.07E-04 |
人TROP2 | PR001163 | 0.3956 | 7.90E-10 | 1.06E+05 | 8.34E-05 |
人TROP2 | PR001164 | 0.1942 | 2.41E-09 | 1.09E+05 | 2.62E-04 |
人TROP2 | PR001165 | 0.3798 | <1.0E-12 | 1.64E+05 | <1.0E-07 |
人TROP2 | PR001166 | 0.3237 | <1.0E-12 | 4.70E+05 | <1.0E-07 |
人TROP2 | PR001168 | 0.3325 | 1.59E-09 | 8.80E+04 | 1.40E-04 |
人TROP2 | PR001170 | 0.3683 | <1.0E-12 | 4.76E+05 | <1.0E-07 |
人TROP2 | PR001171 | 0.3257 | 2.51E-11 | 1.49E+05 | 3.74E-06 |
人TROP2 | Tab(hRS7) | 0.3492 | 1.99E-10 | 1.66E+05 | 3.30E-05 |
抗原 | 抗體 | 反應 | KD (M) | kon(1/Ms) | kdis(1/s) |
猴 Trop2 | PR001128 | 0.3835 | <1.0E-12 | 8.35E+04 | <1.0E-07 |
猴 Trop2 | PR001130 | 0.3145 | <1.0E-12 | 3.77E+04 | <1.0E-07 |
猴 Trop2 | PR001132 | 0.4181 | 1.64E-10 | 8.69E+04 | 1.43E-05 |
猴 Trop2 | PR001133 | 0.3691 | 2.49E-09 | 5.98E+04 | 1.49E-04 |
猴 Trop2 | PR001134 | 0.335 | 9.33E-09 | 5.49E+04 | 5.12E-04 |
猴 Trop2 | PR001138 | 0.3289 | 4.09E-10 | 9.74E+04 | 3.98E-05 |
猴 Trop2 | PR001139 | 0.3278 | 7.75E-09 | 6.81E+04 | 5.28E-04 |
猴 Trop2 | PR001142 | 0.3824 | 2.60E-10 | 1.65E+05 | 4.29E-05 |
猴 Trop2 | PR001143 | 0.3078 | 1.24E-08 | 5.21E+04 | 6.45E-04 |
猴 Trop2 | PR001145 | 0.2767 | 1.91E-08 | 7.01E+04 | 1.34E-03 |
猴 Trop2 | PR001147 | 0.3405 | 1.92E-09 | 6.09E+04 | 1.17E-04 |
猴 Trop2 | PR001150 | 0.3441 | 3.19E-10 | 1.07E+05 | 3.41E-05 |
猴 Trop2 | PR001151 | 0.3512 | 2.38E-09 | 7.58E+04 | 1.80E-04 |
猴 Trop2 | PR001152 | 0.3432 | 1.02E-09 | 1.03E+05 | 1.05E-04 |
猴 Trop2 | PR001153 | 0.3366 | 1.81E-10 | 5.93E+04 | 1.07E-05 |
猴 Trop2 | PR001154 | 0.3792 | 1.91E-09 | 7.27E+04 | 1.39E-04 |
猴 Trop2 | PR001155 | 0.3561 | 4.26E-09 | 5.15E+04 | 2.19E-04 |
猴 Trop2 | PR001156 | 0.3494 | 5.36E-10 | 1.15E+05 | 6.15E-05 |
猴 Trop2 | PR001158 | 0.4055 | 7.08E-10 | 8.79E+04 | 6.23E-05 |
猴 Trop2 | PR001159 | 0.3716 | 3.07E-10 | 1.11E+05 | 3.39E-05 |
猴 Trop2 | PR001160 | 0.3603 | 1.82E-09 | 7.43E+04 | 1.35E-04 |
猴 Trop2 | PR001162 | 0.3701 | 3.66E-09 | 2.00E+05 | 7.32E-04 |
猴 Trop2 | PR001163 | 0.3721 | 1.96E-09 | 6.84E+04 | 1.34E-04 |
猴 Trop2 | PR001164 | 0.173 | 2.04E-09 | 7.94E+04 | 1.62E-04 |
猴 Trop2 | PR001165 | 0.3925 | 2.60E-10 | 1.01E+05 | 2.62E-05 |
猴 Trop2 | PR001166 | 0.3224 | <1.0E-12 | 3.16E+05 | <1.0E-07 |
猴 Trop2 | PR001168 | 0.3111 | 2.45E-09 | 5.93E+04 | 1.45E-04 |
猴 Trop2 | PR001170 | 0.3865 | <1.0E-12 | 3.07E+05 | <1.0E-07 |
猴 Trop2 | PR001171 | 0.3194 | 1.51E-10 | 8.83E+04 | 1.34E-05 |
猴 Trop2 | Tab(hRS7) | 0.3224 | 1.37E-10 | 1.08E+05 | 1.48E-05 |
抗體 | KD (M)(抗原: 猴Trop2蛋白) | KD (M)(抗原: 人Trop2蛋白) | KD( 猴 )/ KD( 人 ) |
PR001128 | <1.0E-12 | <1.0E-12 | n/a |
PR001130 | <1.0E-12 | <1.0E-12 | n/a |
PR001132 | 1.64E-10 | <1.0E-12 | n/a |
PR001133 | 2.49E-09 | 1.10E-09 | 2.27 |
PR001134 | 9.33E-09 | 5.42E-09 | 1.72 |
PR001138 | 4.09E-10 | <1.0E-12 | n/a |
PR001139 | 7.75E-09 | 4.79E-09 | 1.62 |
PR001142 | 2.60E-10 | 3.23E-10 | 0.81 |
PR001143 | 1.24E-08 | 6.94E-09 | 1.78 |
PR001145 | 1.91E-08 | 1.47E-08 | 1.3 |
PR001147 | 1.92E-09 | 4.98E-10 | 3.86 |
PR001150 | 3.19E-10 | 3.26E-11 | 9.76 |
PR001151 | 2.38E-09 | 1.12E-09 | 2.12 |
PR001152 | 1.02E-09 | 1.35E-10 | 7.57 |
PR001153 | 1.81E-10 | 3.23E-11 | 5.61 |
PR001154 | 1.91E-09 | 8.55E-10 | 2.24 |
PR001155 | 4.26E-09 | 1.84E-09 | 2.32 |
PR001156 | 5.36E-10 | 9.16E-11 | 5.85 |
PR001158 | 7.08E-10 | 1.55E-10 | 4.56 |
PR001159 | 3.07E-10 | <1.0E-12 | n/a |
PR001160 | 1.82E-09 | 8.19E-10 | 2.22 |
PR001162 | 3.66E-09 | 1.70E-09 | 2.16 |
PR001163 | 1.96E-09 | 7.90E-10 | 2.48 |
PR001164 | 2.04E-09 | 2.41E-09 | 0.85 |
PR001165 | 2.60E-10 | <1.0E-12 | n/a |
PR001166 | <1.0E-12 | <1.0E-12 | n/a |
PR001168 | 2.45E-09 | 1.59E-09 | 1.54 |
PR001170 | <1.0E-12 | <1.0E-12 | n/a |
PR001171 | 1.51E-10 | 2.51E-11 | 6.02 |
Tab | 1.37E-10 | 1.99E-10 | 0.69 |
Trop2抗體可以透過結合Trop2的胞外部分介導表面表現的Trop2蛋白的細胞內化。在本實施例中,測試Trop2抗體內化後Trop2+細胞對於Trop2抗體毒殺的易感性。
BxPC-3細胞在T-75培養瓶中用含10%血清(BI, 胎牛血清,#04-002-1A)的DMEM培養基(Life technologies,#11995-065)培養和擴增,達到90%的融合後吸取培養基,用PBS洗滌細胞兩次。細胞用胰蛋白酶(Invitrogen,#15050065)處理1分鐘左右,再用培養基中和胰蛋白酶。將細胞轉移到15 ml無菌離心管中,1000 rpm室溫離心5分鐘,使細胞成團。吸去培養基,將細胞重新懸浮於各自的培養基。輕柔地吸沖細胞,得到單細胞懸浮液。用細胞計數盤進行計數,之後將2×10
3BxPC-3細胞加至黑色ViewPlate-96 TC (Perkin Elmer, #6005225)盤中。37℃、5%CO
2培育箱中培育過夜。
第二天,用不含FBS的培養基製備10×起始濃度(100 nM)的抗體溶液,5倍稀釋,製備6個抗體濃度。將10 µl各梯度的抗體樣品移至上述細胞盤內,各孔的終體積為100 µl。每孔加入2 µl的50 µg/ml αHFc-CL-MMAF培養基(Moradec, αHFc-CL-MMAF套組,#AH-102AF),使其終濃度為1 µg/ml。37℃、5%CO
2培育4天。
在第六天,每孔加入100 µl CellTiter-Glo
®發光細胞活性試劑(Promega, USA, #G7570),在震盪培養箱上混合2分鐘,誘導細胞裂解。96孔盤在室溫培育10分鐘來穩定光信號。使用PE Enspire酶標儀(Perkin Elmer, EnSpire)記錄發光情況,存活率=(1-(IgG1
發光值平均值-抗體樣品
發光值)/ IgG1
發光值平均值)*100%。根據存活率確定EC
50值。
圖2和表7示出抗體處理下BxPC-3細胞的存活率。本發明的27個抗體的內化活性的EC
50與hRS7相當或更好,除了PR001163和PR001164。具體而言,絕大部分的Trop2抗體的EC
50值低於參照抗體,說明其能夠以較低濃度實現最大抗體內化毒殺效應,而PR001166抗體處理下的細胞存活率與參照抗體Tab(hRS7)相比,最高存活率明顯低於Tab處理下的細胞存活率,說明其在較低濃度下具有最好的抗體內化毒殺效應。
表 7 Trop2抗體的內化毒殺標的細胞活性
抗體編號 | EC 50(nM) | 最低細胞存活% | 最高細胞存活% |
PR001128 | 0.2812 | 5.059 | 87.77 |
PR001130 | 0.346 | 2.622 | 103.2 |
PR001132 | 0.3855 | 2.19 | 93.38 |
PR001133 | 0.375 | 2.454 | 99.81 |
PR001134 | 0.4174 | -1.342 | 111.7 |
PR001138 | 0.3242 | 3.166 | 101.7 |
PR001139 | 0.313 | 3.269 | 109.9 |
PR001142 | 0.1314 | 3.344 | 91.76 |
PR001143 | 0.6106 | 1.921 | 99.67 |
PR001145 | 0.3823 | 2.107 | 107.3 |
PR001147 | 0.6507 | 1.712 | 97.44 |
PR001150 | 0.3282 | 2.32 | 91.45 |
PR001151 | 0.2811 | 0.7009 | 103.5 |
PR001152 | 0.4276 | 2.273 | 92.38 |
PR001153 | 0.451 | 1.201 | 95.39 |
PR001154 | 0.2118 | 2.462 | 107.9 |
PR001155 | 0.5242 | 0.8184 | 92.29 |
PR001156 | 0.2243 | 2.78 | 89.87 |
PR001158 | 0.3612 | 0.5579 | 101.5 |
PR001159 | 0.4044 | 1.934 | 95.9 |
PR001160 | 0.4257 | 3.753 | 97.68 |
PR001162 | 0.3922 | 3.221 | 92.52 |
PR001163 | ~ 0.3966 | 3.506 | 90.94 |
PR001164 | ~ 1.186 | 4.869 | 98.67 |
PR001165 | 0.4608 | 2.824 | 91.61 |
PR001166 | 0.147 | 4.528 | 28.47 |
PR001168 | 0.8201 | 4.947 | 98.5 |
PR001170 | 0.0213 | 3.396 | 91.97 |
PR001171 | 0.276 | 2.063 | 105.9 |
hRS7 | 0.709 | -1.22 | 100.9 |
根據抗體與HEK293/hTrop2的結合EC
50的高低、抗體序列的種系多樣性和轉譯後修飾的位點多少(表8)、與人猴蛋白親和力的高低以及內吞效應的優劣,選擇出表8中的8個抗體做後續分析。
表 8 Trop2抗體序列的種系和轉譯後修飾位點
實施例 6 :重組抗體與 BxPC-3 腫瘤細胞株結合
抗體編號 | 重鏈種系 | 輕鏈種系 | 重鏈轉譯後修飾 | 輕鏈轉譯後修飾 |
PR001128 | VH4_4*02 | Vk3_11*01 | ||
PR001130 | VH4_4*02 | Vk1_5*01 | ||
PR001133 | VH3_30*18 | Vk1_39*01 | DG (HCDR2), DG (HFR3) | NS (LCDR1) |
PR001139 | VH3_30*01 | Vk3_15*01 | DG (HCDR2) | |
PR001142 | VH4_4*02 | Vk1_5*01 | ||
PR001145 | VH3_30*01 | Vk3_15*01 | DG (HCDR2) | |
PR001162 | VH3_30*01 | Vk3_11*01 | DG (HCDR1), DG (HCDR2) | |
PR001165 | VH3_30*01 | Vk1_9*01 | DG (HCDR2), DG (HFR3) | NS (LCDR3) |
PR001166 | VH4_38-2*01 | Vk3_15*01 |
用3 mL TrypLE消化酶處理BxPC-3腫瘤細胞(中國科學院細胞庫,#TCHu 12),用7 mL相應培養基終止消化酶處理。確定細胞密度,為每孔的測試樣品收集1×10
5細胞。細胞液離心,用PBS+0.5% BSA緩衝液清洗一次。將細胞懸浮在100 µl梯度稀釋的抗體(5倍稀釋,起始濃度100 nM),並於4℃培育1小時,hRS7和hIgG1用作對照。用PBS+0.5% BSA清洗一次。將細胞與100 µl 1:1000稀釋的Alexa Fluor 488山羊抗人IgG (Life technologies,#A-11013)避光4℃培育1小時,用PBS+0.5% BSA清洗兩次。將細胞重新懸浮在200 µl PBS+0.5% BSA中。2000 rpm、4℃離心5分鐘,用FACS verse流式細胞儀或NovoCyte流式細胞儀(ACEA Biosciences)測試。所有操作均在冰上進行。
抗體與BxPC腫瘤細胞的結合如圖3和表9所示。與對照hRS7相比,本發明的這8個抗體表現出與參照抗體相當的或者更高的BxPC腫瘤細胞的結合力。本發明中的3個抗體(PR001142,PR001162和PR001166) EC
50比參照抗體更低,其EC
50比參照抗體的EC
50小約二倍,說明這些抗體能以較低的濃度更靈敏地結合Trop2。
表 9 Trop2抗體與BxPC-3腫瘤細胞的結合力
實施例 7 :重組抗體與 CHO-K1/ 猴 Trop2 結合
BxPC-3 | BxPC-3 | |||||
抗體編號 | EC 50(nM) | 最高MFI值 | 抗體編號 | EC 50(nM) | 最高MFI值 | |
PR001128 | 1.704 | 8412 | PR001165 | 1.707 | 1012414 | |
PR001130 | 3.852 | 9962 | Tab(hRS7) | 2.67 | 1078897 | |
PR001133 | 2.071 | 8948 | hIgG1 | / | 670 | |
PR001139 | 3.145 | 9361 | ||||
PR001142 | 1.146 | 10849 | ||||
PR001162 | 1.117 | 9107 | ||||
PR001166 | 0.7157 | 8393 | ||||
hRS7 | 2.084 | 8727 | ||||
hIgG1 | / | 77 |
分別用3 mL TrypLE消化酶處理CHO-K1 /猴Trop2細胞(Chempartner, Shanghai, China)和CHO-K1母細胞,分別用7 mL相應培養基終止消化酶處理。測定細胞密度,為每孔測試樣品收集2×10
5細胞。細胞液離心,用PBS+0.5% BSA清洗一次。將細胞懸浮在100 µl梯度稀釋的抗體中(5倍稀釋,起始濃度100 nM),並於4℃培育1小時,hRS7和hlgG1用作對照。用PBS+0.5% BSA清洗一次。將細胞與1:1000稀釋的100 µl Alexa Fluor 488山羊抗人IgG (Life technologies,#A-11013)避光4℃培育1小時,用PBS+0.5% BSA清洗兩次。將細胞重新懸浮在200 µl PBS+0.5% BSA中。2000 rpm、4℃離心5分鐘,用FACS verse流式細胞儀或NovoCyte流式細胞儀(ACEA Biosciences)測試。所有操作均在冰上進行。
如圖4和表10所示,本發明的8個抗體與猴Trop2的結合力與參照抗體hRS7相當,其中PR001166的EC
50比參照抗體的EC
50小,說明該抗體能以較低的濃度更靈敏地結合Trop2。但PR001130與猴Trop2的結合力稍弱一些。
表 10. Trop2抗體與CHO-K1 /猴Trop2及CHO-K1的結合力
實施例 8 :重組抗體與小鼠 Trop2 結合
抗體編號 | CHO-K1 /猴Trop2 | CHO-K1 | ||
EC 50(nM) | 最高MFI值 | EC 50(nM) | 最高MFI值 | |
PR001128 | 2.573 | 53221 | / | 104.5 |
PR001130 | 6.256 | 61693 | / | 104.5 |
PR001133 | 2.866 | 55333 | / | 105.9 |
PR001139 | 3.329 | 46430 | / | 104.5 |
PR001142 | 2.101 | 51218 | / | 104.5 |
PR001162 | 2.245 | 45496 | / | 104.5 |
PR001166 | 1.97 | 51463 | / | 105.9 |
Tab_hRS7 | 2.134 | 53057 | / | 107.2 |
hIgG1 | ~ 1894 | 277.4 | / | 105.9 |
抗體編號 | CHO-K1 /猴Trop2 | CHO-K1 | ||
EC 50(nM) | 最高MFI值 | EC 50(nM) | 最高MFI值 | |
PR001165 | 1.8 | 50254 | / | 101.4 |
Tab_hRS7 | 1.302 | 49024 | / | 100 |
hIgG1 | / | 109.4 | / | 98.6 |
用100 µl溶於PBS的1 µg/ml小鼠Trop2-his蛋白(Sino Biological, #50922-M08H)對ELISA盤進行塗佈,4℃過夜。用200 µl溶於PBST (PBS+0.05%吐溫20)+2% BSA進行封阻,37℃,1小時。用PBST清洗4遍。向ELISA盤加入100 µl梯度稀釋的Trop2抗體(5倍稀釋,起始濃度33.33 nM),37℃培育1小時。用PBST清洗4遍。加入100 µl 1:4000稀釋的抗人IgG (H+L)-HRP (Sigma,#A8667),37℃培育1小時。用PBST清洗4遍。加入100 µl TMB受質(Invitrogen,#88-7025-88),室溫培育5分鐘,隨後加入50 µl終止緩衝液(BBI life sciences,#E661006-0200)來終止反應。用酶標儀(Perkin Elmer, EnSpire)記錄OD 450 nm讀值。
結果圖5顯示,抗體PR001139、PR001166與小鼠Trop2蛋白結合,參照抗體hRS7及其他6種Trop2抗體均沒有小鼠Trop2結合活性。
根據上述各種實驗結果選擇3種抗體,即PR001142、PR001165和PR001166,進一步測試其抗體依賴的細胞介導的細胞毒性作用、補體依賴的細胞毒性作用和抗體依賴的細胞介導的細胞吞噬作用。
實施例 9 : Trop2 抗體介導的 ADCC 活性
細胞裂解後細胞內的乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)會隨之增加,因此可以透過檢測LDH-釋放量來判定腫瘤細胞被毒殺的效果。先用2% FBS的RPMI 1640稀釋抗體至40 nM,再從40 nM做5倍稀釋,稀釋為不同的7個濃度。取25 µl加至100 µl的終體積,得到終濃度為10.0、2.0、0.4、0.08、0.016、0.0032、0.00064 nM的7個濃度。收集BxPC-3和周邊血液單核細胞(PBMC,Miaotong, #PB050F),1200 rpm離心5 min,棄上清液,並分別再懸浮於含2% FBS的無酚紅的RPMI-1640培養基中,PBMC密度調整為4 ×10
6/ml,取50 µl/孔加入96孔U形盤(Corning, #3799),BxPC-3細胞密度調整為4 × 10
5/ml,取25 µl/孔加入同一96孔盤內,效應細胞-標的細胞比為20:1,設三個重複。在同一盤內加入25 µl相應的稀釋抗體(此為ER: BxPC-3+PBMC+mAb),37度二氧化碳培養箱培育4小時。同時在盤內設置不同的對照組:ER(0):BxPC-3+PBMC+2% FBS+1640;ESR:PBMC+2% FBS+1640;TSR:BxPC-3+2% FBS+1640;CMB: 2% FBS+1640;TMR: BxPC-3+2% FBS+1640+裂解緩衝液(裂解緩衝液於培育3小時後加入);VCC:2% FBS 1640+裂解緩衝液(裂解緩衝液於培育3小時後加入)。培育完成後,取50 µl上清液,加入96孔盤(Corning, #3599),並加入50 µl細胞毒性檢測試劑(CytoTox 96
®非放射性細胞毒性檢測套組,Promega, USA,#G1780),室溫培育30分鐘,加入終止溶液停止反應並用Enspire (Perkin Elmer)讀取OD490值。該讀值按照以下公式來計算ADCC效果,ADCC特異性毒殺%={(ER-CMB)-[(ESR-CMB)+(TSR-CMB)]}/(TMR-VCC)*100%,重複2個不同的PBMC供體(Lot#1152和Lot#2153)。最高特異性毒殺%和EC
50值總結在表11中。
圖6顯示3種Trop2抗體在不同的供體的PBMC中介導對BxPC-3的細胞毒殺作用。從表11可以看出,3種抗體均顯示出對BxPC-3細胞的特異毒殺性。其中,在使用兩種不同的供體1152#和2153#的PBMC的情況下,從特異性毒殺率的平均值和標準誤差看,相比,抗體PR001166和參照抗體Tab(hRS7)的最高毒殺率相當,但EC
50值更低,說明PR001166抗體能夠在更低濃度下達到與參照抗體相當的毒殺力。而其他兩種抗體PR001142和PR001165與參照抗體的毒殺程度相當。
表 11. 3種Trop2抗體對BxPC-3的ADCC效果
實施例 10 : Trop2 抗體的 ADCP 活性
抗體編號 | ADCC (供體1152#) | ADCC (供體2153#) | ||||
EC 50(nM) | 最高細胞毒殺% | 最低細胞毒殺% | EC 50(nM) | 最高細胞毒殺% | 最低細胞毒殺% | |
Tab(hRS7) | 0.03907 | 42.06 | 4.321 | 0.08005 | 62.65 | 10.18 |
PR001142 | 0.02791 | 41.58 | 4.47 | 0.05466 | 58.79 | 9.276 |
PR001165 | 0.03236 | 38.96 | 5.793 | 0.06155 | 70.79 | 14.02 |
PR001166 | 0.01999 | 36.48 | 3.255 | 0.03469 | 69.1 | 11.9 |
抗體依賴的細胞介導的細胞吞噬作用是治療性抗體對抗病毒感染或者腫瘤疾病的一種重要作用機制。
從PBMC (Miaotong, #PB050F)中用人CD14 分選磁珠(Meltenyi Biotech, #130-050-201)分離CD14+單核細胞,以密度為1×10
6/mL重新懸浮於含10%FBS 的RPMI1640培養基,加入100 ng/ml GM-CSF (PeproTech, #300-03-A)。取2×10
6個單核細胞每孔於6孔盤內,37度二氧化碳培養箱培養9天,使其分化為巨噬細胞。每隔3-4天換一次液(含100 ng/ml GM-CSF)。9天後用胰蛋白酶消化巨噬細胞,用含10% FBS 的RPMI1640終止胰蛋白酶反應。收集細胞,用PBS洗滌一次,用PBS重新懸浮為密度為1×10
6/ml。同樣收集BxPC-3細胞,用PBS重新懸浮為密度為1×10
6/ml。巨噬細胞用0.1 µM Far-red (溶於PBS),BxPC-3細胞用0.5 µM CFSE (溶於PBS) 在4度染色10分鐘。離心染色後的細胞,用>20 ml的RPMI1640+10% FBS培養基洗滌一次。重新懸浮洗滌後的細胞於1% BSA+RPMI1640培養基中,並調整細胞密度均為1.6×10
6/ml。在96孔V型盤內(Corning, #3894)每孔加入25 µl BxPC-3細胞(每孔細胞數為4×10
4)和25 µl巨噬細胞(每孔細胞數為4×10
4)。用1% BSA+RPMI1640稀釋抗體至中間濃度20 nM,再從20 nM 5倍稀釋成7個梯度。 含有BxPC-3和巨噬細胞的同一96孔V型盤內每孔加入50 µl的稀釋抗體,混勻完全。37℃培育1小時。使用NovoCyte流式細胞儀(ACEA Biosciences)經流式細胞術辨識FITC+ BxPC-3細胞和Alexa647+巨噬細胞雙陽性的比例。數據用FlowJo軟體(Tree Star, Ashland, OR)分析,雙染細胞的百分比用於確定ADCP介導的細胞吞噬。
圖7顯示3種Trop2抗體在不同的供體的巨噬細胞中介導的對BxPC-3的吞噬作用。如表12所示,3種抗體均顯示出對BxPC-3細胞的ADCP效應。其中,在使用供體A1925144#的PBMC的情況下,從特異性毒殺率的平均值和標準誤差看,3種抗體的最高吞噬%均接近於參照抗體Tab,而這些抗體的EC
50值均小於Tab,表明其能夠在較低濃度下達到與參照抗體相當或更高的最大毒殺力。而在使用供體A19143143#的PBMC的情況下,從特異性毒殺率的平均值和標準誤差看,3種抗體最高吞噬%與Tab沒有顯著差異,但EC
50值更低,表明其能夠在較低濃度下達到與參照抗體相當或更高的最大毒殺力。這兩種供體均表明這3種抗體能夠在更低濃度下達到與參照抗體相當的毒殺力。
表 12 3種Trop2抗體對BxPC-3的ADCP效果
實施例 11 : Trop2 抗體的 CDC 活性
抗體編號 | ADCP(供體A19143143#) | ADCP(供體A1925144#) | ||||
EC 50(nM) | 最高吞噬% | 最低吞噬% | EC 50(nM) | 最高吞噬% | 最低吞噬% | |
Tab( hRS7) | 0.2083 | 44.83 | 1.041 | 0.1247 | 14.83 | 1.721 |
PR001142 | 0.1994 | 36.4 | 1.754 | 0.03618 | 11.98 | 0.861 |
PR001165 | 0.1777 | 42.68 | 1.37 | 0.06833 | 12.52 | 2.245 |
PR001166 | 0.1609 | 40.25 | 2.045 | 0.03106 | 9.333 | 2.048 |
透過補體介導的細胞毒殺檢測來評估Trop2抗體的CDC活性。用胰蛋白酶消化處理BxPC-3細胞或HEK293/hTrop2細胞,終止胰蛋白酶反應後用無血清的RPMI-1640重新懸浮BxPC-3細胞或HEK293/hTrop2細胞,在黑色底透96孔盤(ViewPlate-96 TC, black,Perkin Elmer,#6005225)鋪上每孔25 µl的1×10
4BxPC-3細胞。用無血清的RPMI-1640稀釋抗體,每孔加入25 µl不同梯度的抗體。每孔再加入50 ul的人血清,混勻完全。在37度二氧化碳培養箱培養24小時。根據製造商提供的方法,使用Celltiter Glo發光細胞活力套組(Promega,#G7573)測試細胞活力。將培養皿在微量井培養盤震盪培養箱上以200的轉速搖動2分鐘,然後在室溫下培養10分鐘。用讀盤機(Perkin Elmer, EnSpire)讀取發光信號。為了進行數據分析,使用graphpad prism 7.0計算細胞毒性百分比。
圖8結果表明3種抗體以及參照抗體Tab(hRS7)在BxPC-3和HEK293/hTrop2細胞上均未顯示出CDC活性(CDC ≤ 20%)。
實施例 12 : BIACORE 測試的抗體與人及猴 Trop2 蛋白的結合親和力
整個測試過程中使用HBS-EP + (10 mM HEPES,150 mM NaCl,3 mM EDTA和0.05% P20,pH7.4,GE Healthcare,BR-1001-88)作為電泳緩衝液。先使用手動操作模式透過以下程式將抗原人Trop2蛋白或猴Trop2蛋白固定在晶片表面上,該程式為:1)用新混合的50 mM N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)和200 mM 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)以10μl /分鐘活化系列S CM5感測器晶片(GE Healthcare,#29-1275-56)的流動池3,該過程持續420秒。 2)然後將稀釋於10 mM NaOAc (pH 5.0)中的0.2 μg/ml人Trop2或者猴Trop2以10μl /分鐘注入活化流動池3中,該過程持續120秒。 3)用1 M乙醇胺(pH8.5)以10 μL/min封阻剩餘的活性酯基團120秒。再將不同濃度的稀釋後的抗體(濃度分別為0、3.125、6.25、12.5、25.0、50.0、100 nM)以30 μl/分鐘注入將流體池1、2、3和4內,結合時間設定為180秒。PR001142、PR001165和hRS7的解離時間為900 s,PR001166解離時間設為1800 s。為了從表面除去測試的抗體,將10 mM甘胺酸-HCl pH1.5 (GE Life Sciences, #BR-1003-54)以30 μL/min注入流動池1、2、3和4中30秒。使用Biacore T200 (GE Healthcare, T200 model, #BIAC-B20-03)評估3.1軟體來分析數據。
如表13所示BIACORE測試結果,結果顯示不管是與人還是猴的Trop2蛋白的結合親和力上,抗體PR001142和PR001165的結合親和力與hRS7相當,而PR001166的結合親和力高於hRS7。
表 13. BIACORE測定的Trop2抗體的與人和猴Trop2蛋白的結合親和力
實施例 13 :抗原結合蛋白的表位鑑定 (Epitope binning)
抗體編號 | 人Trop2蛋白抗原(His tag) | 猴Trop2蛋白抗原(His tag) | ||||
ka (1/Ms) | kd (1/s) | KD (M) | ka (1/Ms) | kd (1/s) | KD (M) | |
PR001142 | 4.75E+05 | 2.52E-04 | 5.30E-10 | 4.79E+05 | 1.79E-04 | 3.74E-10 |
PR001165 | 3.07E+05 | 1.52E-04 | 4.95E-10 | 2.55E+05 | 1.25E-04 | 4.91E-10 |
PR001166 | 2.07E+06 | 5.78E-05 | 2.79E-11 | 1.59E+06 | 1.37E-04 | 8.56E-11 |
hRS7 | 3.24E+05 | 1.94E-04 | 6.01E-10 | 3.64E+05 | 2.25E-04 | 6.19E-10 |
使用ForteBio Octet平臺對得到的抗原結合蛋白(PR001142, PR001165, PR001166)和hRS7進行表位鑑定。生物素分子(Sulfo-NHS-LC-Biotin, Thermo Fisher, #A39257)與人Trop2蛋白 (Sino biological,#10428-H08H)按莫耳數3:1的比例在室溫培育2小時。培育後的生物素化混合物用PBS及Zeba離心脫鹽管柱(Thermo Fisher, #89882)洗滌三次去除多餘的生物素。生物素化Trop2蛋白由SA感測器(Pall ForteBio,#18-5019)捕捉,上樣基線設置為0.3 nm。感測器浸入含有50 nM的第一抗體的測定緩衝液的孔,持續300秒。再將感測器轉移至含有50 nM的第一抗體的測定緩衝液的孔,持續300秒。如果第二抗體表現出明顯結合,那麼就將它視為非競爭劑(即,在與第一抗體不同的表位區間中)。如果第二抗體不表現明顯結合,那麼就將它視為競爭劑(即,在與第一抗體相同的表位區間中)。透過比較第二抗體在第一抗體存在下與Trop2的結合與第一抗體阻斷本身來進行結合測定。
結果如下表14所示,PR001142和PR001165與hRS7在Trop2的結合位點重疊性高,但是PR001166與hRS7及PR001165的結合位點重疊性低。
表 14 本申請抗原結合蛋白與臨床抗體的表位鑑定
實施例 14 : Trop2 抗體在標的細胞上的短時間內吞效應
抑制率(%) | 第二抗體 | ||||
PR001142 | PR001165 | PR001166 | hRS7 | ||
第一抗體 | PR001142 | 100.7 | 99.19 | 85.51 | 97.78 |
PR001165 | 98.08 | 97.73 | 5.24 | 96.44 | |
PR001166 | 85.4 | 18.5 | 101.7 | 21.82 | |
hRS7 | 93.27 | 92.04 | 7.34 | 96.49 |
Trop2抗體可以透過結合Trop2的胞外部介導細胞表面表現的Trop2蛋白的內化。在本實施例中,測試Trop2抗體在短時間(3小時以內)不同時間點內化的情況。
BxPC-3或HEK293/hTrop2細胞在T-75培養瓶中用含10%血清(BI,胎牛血清,#04-002-1A)的DMEM培養基(Life technologies,#11995-065)培養和擴增,達到90%的融合後吸取培養基,用PBS洗滌細胞兩次。細胞用胰蛋白酶(Invitrogen,#15050065)處理1分鐘左右,再用培養基中和胰蛋白酶。將細胞轉移到15 ml無菌離心管中,1000 rpm室溫離心5分鐘,使細胞成團。吸去培養基,將細胞重新懸浮於各自的培養基。輕柔地吸沖細胞,得到單細胞懸浮液。用細胞計數盤進行計數,之後用冰冷的FACS緩衝液(PBS+2% FBS)將BxPC-3細胞重新懸浮成2×10
6個細胞/ml,取100 ul每孔細胞懸浮液至96孔V型盤(Corning, #3894)內,400 g離心5分鐘。棄上清液後,對於無內吞作用的測定按如下流程操作:分別加入100 ul含終濃度為100 nM的PR001142或PR001165或PR001166或hIgG1的FACS緩衝液,在4℃培育一小時。用冰冷的FACS緩衝液洗滌兩次去除未結合的抗體。而對於內吞作用的測定,則將加入抗體後的細胞分別在37℃放置0/15 min/30 min/45 min/1 hr/1.5 hr/2 hr/3 hr,然後再將細胞轉移至4℃,加入預冷的PBS來阻止抗體的內吞。用冰冷的FACS緩衝液洗滌兩次去除未結合的抗體。兩種情況下,細胞用2 ug/ml的Alexa Fluor 488 goat anti-human lgG (H+L)(Jackson ImmunoResearch,#109-545-003)在冰冷的FACS緩衝液中於4℃放置半小時。用冰冷的FACS緩衝液洗滌兩次去除未結合的二抗。將細胞重新懸浮在200 µlFACS緩衝液中。用FACS canto II流式細胞儀分析細胞的螢光強度。內吞率% (=(1-MFI
37℃/MF
I4℃)*100%。
結果如圖9和圖10所示,PR001142/PR001165/PR001166在飽和的抗體結合濃度下,在重組細胞株HEK293/hTrop2或者Trop2陽性的腫瘤細胞BxPC-3中的內吞速率彼此相差不大。然而在1小時以內,PR001166與其他抗體包括參照抗體相比,具有更好的內吞效應。
在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考,就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解,在閱讀了本發明的上述講授內容之後,本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改,這些等價形式同樣落於本申請所附申請專利範圍所限定的範圍。
圖1顯示了本發明抗體與293T-人Trop2細胞的結合能力。
圖2顯示了本發明抗體經MMAF偶聯後對BxPC-3腫瘤細胞的內化毒殺活性。
圖3顯示了本發明抗體與腫瘤細胞BxPC-3的結合能力。
圖4顯示了本發明抗體與過度表現猴Trop2的CHO-K1細胞的結合能力。
圖5顯示了本發明抗體與鼠Trop2蛋白的結合能力。
圖6顯示了本發明抗體介導的ADCC活性。
圖7顯示了本發明抗體的ADCP活性。
圖8顯示了本發明抗體的CDC活性。
圖9顯示了本發明抗體分別在4℃和37℃的HEK293/hTrop2細胞上的內吞情況。
圖10顯示了本發明抗體分別在4℃和37℃的腫瘤細胞BxPC-3上的內吞情況。
Claims (19)
- 一種Trop-2的抗體或抗原結合片段,所述抗體或其抗原結合片段包含如下的互補決定區(CDR):重鏈可變區(VH)CDR,其包括如SEQ ID NO:23所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO:59所示的VH-CDR2,和如SEQ ID NO:100所示的VH-CDR3,以及輕鏈可變區(VL)CDR,其包括如SEQ ID NO:131所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO:153所示的VL-CDR2,和如SEQ ID NO:184所示的VL-CDR3。
- 如請求項1所述的抗體或抗原結合片段,其特徵在於,所述的抗體或抗原結合片段是具有如SEQ ID NO:217所示的重鏈可變區,和如SEQ ID NO:238所示的輕鏈可變區。
- 根據請求項1或2所述的抗體或抗原結合片段,其特徵在於,所述抗體或其抗原結合片段選自scFv、Fab、Fab’、(Fab’)2、Fv片段、二硫鍵連接的Fv(dsFv)和雙抗體(diabody)。
- 一種重組蛋白,其特徵在於,所述的重組蛋白包括:(i)如請求項1所述的抗體或抗原結合片段;和(ii)協助表現和/或純化的標籤序列。
- 一種多核苷酸,其特徵在於,所述多核苷酸編碼選自下組的多肽:如請求項1-3任一項所述的抗體或抗原結合片段,和/或如請求項4所述的重組蛋白。
- 一種載體,其特徵在於,所述載體含有請求項5所述的多核苷酸。
- 一種遺傳工程化的宿主細胞,其特徵在於,所述宿主細胞含有請求項6所述的載體或基因組中整合有請求項5所述的多核苷酸。
- 一種製備請求項1-3中任一項所述的抗體或其抗原結合片段的方法,其包括,在允許所述抗體或其抗原結合片段表現的條件下,培養請求項7所述的宿主細胞,和從培養的宿主細胞培養物中回收所述抗體或其抗原結合片段。
- 一種抗體偶聯物,其特徵在於,所述抗體偶聯物含有:(a)抗體部分,所述抗體部分包括如請求項1-3所述的抗體或抗原結合片段;和(b)與所述抗體部分偶聯的偶聯部分,所述偶聯部分選自下組:可檢測標記物、藥物、毒素、細胞因子、放射性核素、酶、或其組合;所述抗體部分和偶聯部分透過化學鍵或連接子進行偶聯。
- 一種嵌合抗原受體(CAR),其特徵在於,所述CAR包括請求項1-3所述的抗體或抗原結合片段。
- 一種免疫細胞,其特徵在於,所述免疫細胞表現請求項10所述的嵌合抗原受體(CAR)。
- 一種多特異性抗體,其特徵在於,包含請求項1-3任一項所述的Trop-2的抗體或抗原結合片段,和另外的抗體或其片段或抗體類似物。
- 如請求項12所述的多特異性抗體,其特徵在於,所述多特異性為雙特異性、三特異性或四特異性。
- 一種藥物組合物,其特徵在於,所述藥物組合物含有:(i)活性成分,所述活性成分選自下組:如請求項1-3所述的抗體或抗原結合片段、如請求項4所述的重組蛋白、如請求項9所述的抗體偶聯物、請求項11所述的免疫細胞、請求項12所述的多特異性抗體或其組合;以及(ii)藥學上可接受的載劑。
- 一種如請求項1-3所述的抗體或抗原結合片段、如請求項4所述的重組蛋白、如請求項9所述的抗體偶聯物、如請求項11所述的免疫細胞、如請求項12-13所述的多特異性抗體和/或如請求項14所述的藥物組合物在製備預防和/或治療腫瘤的藥物中的用途,其特徵在於,所述腫瘤為乳癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、腸癌、肺癌、子宮頸癌,或其他Trop2表現陽性的腫瘤。
- 一種體外檢測Trop-2在樣品中存在或其位準的方法,其特徵在於,包括在允許請求項1-3所述的抗體或抗原結合片段與Trop-2之間形成複合物的條件下,使所述 樣品與所述抗體或其抗原結合片段接觸,並且檢測所述複合物的形成;並且所述檢測用於非診斷目的。
- 一種如請求項1-3所述的抗體或抗原結合片段在製備Trop-2檢測試劑或套組中的用途。
- 一種套組,其特徵在於,包含請求項1-3所述的抗體或抗原結合片段、請求項4所述的重組蛋白、請求項9所述的抗體偶聯物、請求項11所述的免疫細胞、請求項12所述的多特異性抗體,和/或請求項14所述的藥物組合物,以及使用說明書。
- 一種給藥裝置,其特徵在於,包含:(i)輸注模組,所述輸注模組用於對受試者施用包括具有一活性成分的藥物組合物;(ii)用於輸注的藥物組合物,所述藥物組合物中含有一活性成分,所述活性成分選自下組:如請求項1-3所述的抗體或抗原結合片段、請求項4所述的重組蛋白、請求項9所述的抗體偶聯物、請求項11所述的免疫細胞、請求項12-13所述的多特異性抗體,和/或請求項14所述的藥物組合物;以及(iii)藥效監控模組。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011611968.X | 2020-12-30 | ||
CN202011611968.XA CN114685669A (zh) | 2020-12-30 | 2020-12-30 | 结合trop2的抗体及其用途 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
TW202233692A TW202233692A (zh) | 2022-09-01 |
TWI824364B true TWI824364B (zh) | 2023-12-01 |
Family
ID=82132604
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
TW110148873A TWI824364B (zh) | 2020-12-30 | 2021-12-27 | 結合trop2的抗體及其用途 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20240067748A1 (zh) |
EP (1) | EP4273171A1 (zh) |
CN (2) | CN114685669A (zh) |
TW (1) | TWI824364B (zh) |
WO (1) | WO2022143670A1 (zh) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TW201333036A (zh) * | 2011-11-11 | 2013-08-16 | Rinat Neuroscience Corp | 營養層細胞表面抗原(Trop-2)之專一性抗體類及彼等之用途 |
TW202016148A (zh) * | 2018-07-09 | 2020-05-01 | 大陸商艾比瑪特生物醫藥(上海)有限公司 | 滋養層抗原2(trop2)特異性抗體 |
Family Cites Families (49)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5179017A (en) | 1980-02-25 | 1993-01-12 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
US4634665A (en) | 1980-02-25 | 1987-01-06 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
US4399216A (en) | 1980-02-25 | 1983-08-16 | The Trustees Of Columbia University | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
US4475196A (en) | 1981-03-06 | 1984-10-02 | Zor Clair G | Instrument for locating faults in aircraft passenger reading light and attendant call control system |
US4447233A (en) | 1981-04-10 | 1984-05-08 | Parker-Hannifin Corporation | Medication infusion pump |
US4439196A (en) | 1982-03-18 | 1984-03-27 | Merck & Co., Inc. | Osmotic drug delivery system |
US4522811A (en) | 1982-07-08 | 1985-06-11 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides |
US4447224A (en) | 1982-09-20 | 1984-05-08 | Infusaid Corporation | Variable flow implantable infusion apparatus |
US4487603A (en) | 1982-11-26 | 1984-12-11 | Cordis Corporation | Implantable microinfusion pump system |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US4486194A (en) | 1983-06-08 | 1984-12-04 | James Ferrara | Therapeutic device for administering medicaments through the skin |
US4596556A (en) | 1985-03-25 | 1986-06-24 | Bioject, Inc. | Hypodermic injection apparatus |
US5374548A (en) | 1986-05-02 | 1994-12-20 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for the attachment of proteins to liposomes using a glycophospholipid anchor |
MX9203291A (es) | 1985-06-26 | 1992-08-01 | Liposome Co Inc | Metodo para acoplamiento de liposomas. |
GB8601597D0 (en) | 1986-01-23 | 1986-02-26 | Wilson R H | Nucleotide sequences |
US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
US4941880A (en) | 1987-06-19 | 1990-07-17 | Bioject, Inc. | Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly |
US4790824A (en) | 1987-06-19 | 1988-12-13 | Bioject, Inc. | Non-invasive hypodermic injection device |
GB8717430D0 (en) | 1987-07-23 | 1987-08-26 | Celltech Ltd | Recombinant dna product |
US5677425A (en) | 1987-09-04 | 1997-10-14 | Celltech Therapeutics Limited | Recombinant antibody |
GB8809129D0 (en) | 1988-04-18 | 1988-05-18 | Celltech Ltd | Recombinant dna methods vectors and host cells |
WO1990006952A1 (en) | 1988-12-22 | 1990-06-28 | Kirin-Amgen, Inc. | Chemically modified granulocyte colony stimulating factor |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
US5108921A (en) | 1989-04-03 | 1992-04-28 | Purdue Research Foundation | Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules |
US5064413A (en) | 1989-11-09 | 1991-11-12 | Bioject, Inc. | Needleless hypodermic injection device |
US5312335A (en) | 1989-11-09 | 1994-05-17 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
US5714350A (en) | 1992-03-09 | 1998-02-03 | Protein Design Labs, Inc. | Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region |
WO1993022332A2 (en) | 1992-04-24 | 1993-11-11 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells |
US5383851A (en) | 1992-07-24 | 1995-01-24 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
CA2290485C (en) | 1997-05-21 | 2008-08-05 | Biovation Limited | Method for the production of non-immunogenic proteins |
WO1999054342A1 (en) | 1998-04-20 | 1999-10-28 | Pablo Umana | Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity |
ES2420835T3 (es) | 1999-04-09 | 2013-08-27 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Procedimiento para controlar la actividad de las moléculas inmunofuncionales |
MXPA03011094A (es) | 2001-05-31 | 2004-12-06 | Medarex Inc | Citotoxinas, profarmacos, ligadores, y estabilizadores utiles para ello. |
MXPA04003798A (es) | 2001-10-25 | 2004-07-30 | Genentech Inc | Composiciones de glicoproteina. |
EA200401325A1 (ru) | 2002-04-09 | 2005-04-28 | Киова Хакко Когио Ко., Лтд. | Клетки с модифицированным геномом |
WO2005112919A2 (en) | 2004-05-19 | 2005-12-01 | Medarex, Inc. | Self-immolative linkers and drug conjugates |
RU2402548C2 (ru) | 2004-05-19 | 2010-10-27 | Медарекс, Инк. | Химические линкеры и их конъюгаты |
JP5249587B2 (ja) | 2005-02-18 | 2013-07-31 | メダレックス, インク. | フコシル残基を欠く前立腺特異的膜抗原(psma)に対するモノクローナル抗体 |
US7714016B2 (en) | 2005-04-08 | 2010-05-11 | Medarex, Inc. | Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates |
EA016577B1 (ru) | 2005-09-26 | 2012-06-29 | Медарекс, Инк. | Конъюгаты антитело-лекарство и их применение |
EA015324B1 (ru) | 2005-10-26 | 2011-06-30 | Медарекс, Инк. | Способы и соединения для получения аналогов сс-1065 |
WO2007059404A2 (en) | 2005-11-10 | 2007-05-24 | Medarex, Inc. | Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates |
TWI412367B (zh) | 2006-12-28 | 2013-10-21 | Medarex Llc | 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物 |
TW200900059A (en) | 2007-02-21 | 2009-01-01 | Medarex Inc | Chemical linkers with single amino acids and conjugates thereof |
MX2011007660A (es) | 2008-12-18 | 2011-08-17 | Kingdon Craig R | Animales transgenicos no humanos que expresan anticuerpos humanizados y usos de los mismos. |
SG10201503904XA (en) * | 2010-05-17 | 2015-06-29 | Livtech Inc | Anti-human trop-2 antibody having antitumor activity in vivo |
US9427464B2 (en) * | 2011-11-22 | 2016-08-30 | Chiome Bioscience Inc. | Anti-human TROP-2 antibody having an antitumor activity in vivo |
WO2020191092A1 (en) * | 2019-03-19 | 2020-09-24 | Cspc Dophen Corporation | Anti-trophoblast cell surface antigen 2 (trop2) antibodies and antibody drug conjugates comprising same |
CN110317822B (zh) * | 2019-07-19 | 2020-06-05 | 英威福赛生物技术有限公司 | Trop2嵌合抗原受体、其t细胞及其制备方法和用途 |
-
2020
- 2020-12-30 CN CN202011611968.XA patent/CN114685669A/zh active Pending
-
2021
- 2021-12-27 TW TW110148873A patent/TWI824364B/zh active
- 2021-12-28 US US18/260,074 patent/US20240067748A1/en active Pending
- 2021-12-28 CN CN202180087709.8A patent/CN117177991A/zh active Pending
- 2021-12-28 WO PCT/CN2021/142095 patent/WO2022143670A1/zh active Application Filing
- 2021-12-28 EP EP21914404.5A patent/EP4273171A1/en active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TW201333036A (zh) * | 2011-11-11 | 2013-08-16 | Rinat Neuroscience Corp | 營養層細胞表面抗原(Trop-2)之專一性抗體類及彼等之用途 |
TW202016148A (zh) * | 2018-07-09 | 2020-05-01 | 大陸商艾比瑪特生物醫藥(上海)有限公司 | 滋養層抗原2(trop2)特異性抗體 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
TW202233692A (zh) | 2022-09-01 |
EP4273171A1 (en) | 2023-11-08 |
US20240067748A1 (en) | 2024-02-29 |
CN117177991A (zh) | 2023-12-05 |
CN114685669A (zh) | 2022-07-01 |
WO2022143670A1 (zh) | 2022-07-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
WO2022095851A1 (en) | Nanobodies binding trop2 and uses thereof | |
WO2020147321A1 (en) | Antibodies binding human claudin 18.2 and uses thereof | |
WO2021043221A1 (en) | Antibodies binding tslp and uses thereof | |
CN111454362B (zh) | 特异结合cd40的抗体及其用途 | |
US10946092B1 (en) | Antibodies binding LAG3 and methods of treatment using them | |
WO2021170020A1 (en) | Antibodies binding il4r and uses thereof | |
US10577424B1 (en) | Antibodies binding VISTA and uses thereof | |
JP2023520288A (ja) | Cd40に結合する抗体及びその使用 | |
US20230212304A1 (en) | Antibodies binding ctla4 and uses thereof | |
TWI824364B (zh) | 結合trop2的抗體及其用途 | |
US11807683B2 (en) | Antibody binding TIM-3 and use thereof | |
WO2022222992A1 (en) | Antibodies binding trop2 and uses thereof | |
CN117186222A (zh) | Pd-l1结合分子及其用途 | |
CN117917435A (zh) | 结合fgfr2b的抗体及其用途 |