TWI817332B - 乳酸菌用於提升對腸病毒71型之抵抗力之用途 - Google Patents
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Abstract
本發明係有關於一種乳酸菌用於製備提升對腸病毒71型(EV71)之抵抗力的組成物之用途，其中乳酸菌是選自於由胚芽乳酸桿菌GKM3、GK4、GKD7、GKK1、副乾酪乳酸桿菌GKS6、發酵乳酸桿菌GKF3、乾酪乳酸桿菌GKC1、乳雙歧桿菌GKK2、洛德乳酸桿菌GKR1、鼠李醣乳酸桿菌GKLC1、GKY7、乳酸片球菌GKA4、戊醣片球菌GKP4、長雙歧桿菌GKL7、兩歧雙歧桿菌GKB2、短雙歧桿菌GKV1、短乳酸桿菌GKJOY、GKL9、動物雙歧桿菌GKBA及上述任意組合所組成之族群，且組成物包含乳酸菌之死菌培養物做為有效成分，從而降低EV71體外感染動物細胞之機率，及於體外降低EV71之細胞毒性。
Description
本發明是有關於益生菌用於製備提升對腸病毒之抵抗力的組成物之用途，特別是關於乳酸菌用於製備提升對腸病毒71型之抵抗力的組成物之用途。
微小核醣核酸病毒科(Picornaviridae)中的腸病毒(Enterovirus，EV)是一種二十面體RNA病毒。EV是一群在腸道寄生之病毒株的總稱，然而EV較少引發與腸胃相關的症狀，而是引起諸如類流感的症狀(如：發燒、喉痛、頭痛及噁心等)、皰疹型咽峽炎及/或手足口病，有些EV甚至會引起心肺系統或是神經系統的併發症。
EV可分為四類：克沙奇病毒A型(coxsackie A virus，CAV)與B型(CBV)、伊科病毒(echovirus)、脊髓灰質炎病毒(poliovirus)，以及腸病毒68型至71型(EV68 to EV71)，其中EV71不僅容易引起手足口病，還可能引發如腦炎等嚴重的中樞神經系統病變。5歲以下孩童是EV71重症高危險群，嚴重者可能死亡。然而，目前
沒有針對EV71之疫苗與特效藥，僅少數藥物能紓緩發燒及潰瘍引致的痛楚，因此，實有必要研發預防及/或治療EV71之醫療組成物。
除了疫苗及藥物外，乳酸菌也是目前研發預防及/或治療EV71的標的之一。乳酸菌可藉由附著在宿主的腸道上，達到防止病原體入侵之效果。此外，乳酸菌還具有改善生理機能的功效，如：改善腸躁症、抗發炎、改善異位性皮膚炎和抗過敏等功能。目前研究發現，部分乳酸菌活菌還可用來預防或治療EV71。然而，乳酸菌活菌的活性及有效劑量不易控制，且乳酸菌活菌無法百分之百保證安全性，雖有研究證實乳酸菌之熱致死菌具有改善生理機能之功效，但目前無研究證實乳酸菌之熱致死菌是否也具有抗EV71之功效。
有鑑於此，亟須提供乳酸菌株用於提升對EV71抵抗力之用途，以解決上述問題。
因此，本發明之一態樣是提乳酸菌用於製備提升對腸病毒71型(Enterovirus 71，EV71)之抵抗力的組成物之用途。
根據本發明之上述之態樣，提出一種乳酸菌用於製備提升對EV71之抵抗力的組成物之用途。上述乳酸菌可例如選自於由寄存編號為BCRC 910787之胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)GKM3、寄存編號為
BCRC 910788之副乾酪乳酸桿菌(L.paracasei)GKS6、寄存編號為BCRC 910824之發酵乳酸桿菌(L.fermentum)GKF3、寄存編號為BCRC 910825之乾酪乳酸桿菌(L.casei)GKC1、寄存編號為BCRC 910826之乳雙歧桿菌(Bifidobacterium lactis)GKK2、寄存編號為BCRC 910827之洛德乳酸桿菌(L.reuteri)GKR1、寄存編號為BCRC 910828之鼠李醣乳酸桿菌(L.rhamnosus)GKLC1、寄存編號為BCRC 910858之胚芽乳酸桿菌GK4、寄存編號為BCRC 910877之胚芽乳酸桿菌GKD7、寄存編號為BCRC 910876之乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)GKA4、寄存編號為BCRC 91087之戊醣片球菌(P.pentosaceus)GKP4、寄存編號為BCRC 910919之胚芽乳酸桿菌GKK1、寄存編號為BCRC 910988之長雙歧桿菌(B.longum)GKL7、寄存編號為BCRC 910986之兩歧雙歧桿菌(B.bifidum)GKB2、寄存編號為BCRC 910989之短雙歧桿菌(B.breve)GKV1、寄存編號為BCRC 910920之短乳酸桿菌(L.brevis)GKJOY、寄存編號為BCRC 910917之動物雙歧桿菌(B.animals)GKBA、寄存編號為BCRC 910918之鼠李醣乳酸桿菌(L.rhamnosus)GKY7、寄存編號為BCRC 910859之短乳酸桿菌GKL9及上述任意組合所組成之族群。上述長雙歧桿菌GKL7及兩歧雙歧桿菌GKB2是在2020年04月10日寄存於台灣新竹食
品路331號財團法人食品工業發展研究所生物資源中心(BCRC)，而短雙歧桿菌GKV1是2020年04月13日寄存於BCRC。上述組成物可包含乳酸菌之死菌培養物做為有效成分。
依據本發明上述之實施例，上述組成物用於降低EV71體外感染動物細胞之機率或於體外降該EV71之細胞毒性。
依據本發明上述之實施例，上述死菌培養物可包含上述乳酸菌之死菌菌體及醱酵液。
依據本發明上述之實施例，上述死菌培養物對動物細胞之有效劑量可例如小於等於5體積百分比(vol.%)。
依據本發明上述之實施例，上述胚芽乳酸桿菌GKM3、洛德乳酸桿菌GKR1、鼠李醣乳酸桿菌GKLC1、胚芽乳酸桿菌GK4、胚芽乳酸桿菌GKD7、戊醣片球菌GKP4、胚芽乳酸桿菌GKK1、長雙歧桿菌GKL7、兩歧雙歧桿菌GKB2、短雙歧桿菌GKV1、短乳酸桿菌GKJOY、動物雙歧桿菌GKBA、鼠李醣乳酸桿菌GKY7及短乳酸桿菌GKL9之死菌培養物對動物細胞之有效劑量可例如小於等於1.25vol.%。
依據本發明上述之實施例，上述胚芽乳酸桿菌GKM3、鼠李醣乳酸桿菌GKLC1、胚芽乳酸桿菌GK4、戊醣片球菌GKP4、胚芽乳酸桿菌GKK1、長雙歧桿菌GKL7、兩歧雙歧桿菌GKB2、短雙歧桿菌GKV1、短乳酸桿菌GKJOY、動物雙歧桿菌GKBA、鼠李醣乳酸桿菌
GKY7及短乳酸桿菌GKL9之死菌培養物對動物細胞之有效劑量是小於等於0.3vol.%。
依據本發明上述之實施例，上述組成物可例如口服組成物。
依據本發明上述之實施例，上述組成物可例如食品組成物或醫藥組成物。
依據本發明上述之實施例，上述組成物可進一步包含食品或醫藥上可接受的載體、賦形劑、稀釋劑、輔助劑及/或添加劑。
依據本發明上述之實施例，上述組成物可例如乳製品、醱酵乳品、豆漿、豆漿製品、嬰兒食品、健康食品或膳食補充品。
應用本發明含有上述乳酸菌之死菌培養物的組成物，不僅可利用較安全的方式有效提升細胞對EV71之抵抗力，還可以用較容易操控劑量的劑型製造組成物。
101,103,105,107,109,201,203,205,207,209,301,303,305,307,309:直條
為讓本發明之上述和其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之詳細說明如下：
[圖1]是繪示根據本發明一實施例之預防試驗的細胞存活率之直條圖。
[圖2]是繪示根據本發明一實施例之共培養試驗的細胞存活率之直條圖。
[圖3]是繪示根據本發明一實施例之治療試驗的細胞存活
率之直條圖。
承上所述，本發明提供一種乳酸菌用於製備提升對腸病毒71型(Enterovirus 71，EV71)之抵抗力的組成物之用途，其中上述組成物可包含乳酸菌之死菌培養物做為有效成分。
所述「乳酸菌」是指利用碳水化合物進行醱酵而生產多量乳酸之細菌。一般而言，乳酸菌可自乳製品及/或醱酵品分離，可例如乳酸桿菌屬(Lactobacillus)、雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)及/或片球菌屬(Pediococcus)之菌株。在一實施例中，乳酸菌可為寄存於台灣新竹食品路331號財團法人食品工業發展研究所生物資源中心(BCRC)之菌株，其係例如選自於由寄存編號為BCRC 910787之胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)GKM3、寄存編號為BCRC 910788之副乾酪乳酸桿菌(L.paracasei)GKS6、寄存編號為BCRC 910824之發酵乳酸桿菌(L.paracasei)GKF3、寄存編號為BCRC 910825之乾酪乳酸桿菌(L.casei)GKC1、寄存編號為BCRC 910826之乳雙歧桿菌(Bifidobacterium lactis)GKK2、寄存編號為BCRC 910827之洛德乳酸桿菌(L.reuteri)GKR1、寄存編號為BCRC 910828之鼠李醣乳酸桿菌(L.rhamnosus)GKLC1、寄存編號為BCRC 910858之胚
芽乳酸桿菌GK4、寄存編號為BCRC 910877之胚芽乳酸桿菌GKD7、寄存編號為BCRC 910876之乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)GKA4、寄存編號為BCRC 910879之戊醣片球菌(P.pentosaceus)GKP4、寄存編號為BCRC 910919之胚芽乳酸桿菌GKK1、寄存編號為BCRC 910988之長雙歧桿菌(B.longum)GKL7、寄存編號為BCRC 910986之兩歧雙歧桿菌(B.bifidum)GKB2、寄存編號為BCRC 910989之短雙歧桿菌(B.breve)GKV1、寄存編號為BCRC 910920之短乳酸桿菌(L.brevis)GKJOY、寄存編號為BCRC 910917之動物雙歧桿菌(B.animals)GKBA、寄存編號為BCRC 910918之鼠李醣乳酸桿菌(L.rhamnosus)GKY7、寄存編號為BCRC 910859之短乳酸桿菌GKL9及上述任意組合所組成之族群。
補充說明的是，上述胚芽乳酸桿菌GKM3與副乾酪乳酸桿菌GKS6是寄存於2017年07月14日，發酵乳酸桿菌GKF3、乾酪乳酸桿菌GKC1、乳雙歧桿菌GKK2、洛德乳酸桿菌GKR1及鼠李醣乳酸桿菌GKLC1是寄存於2018年02月12日，胚芽乳酸桿菌GK4及短乳酸桿菌GKL9是寄存於2018年11月19日，胚芽乳酸桿菌GKD7、乳酸片球菌GKA4及戊醣片球菌GKP4是寄存於2019年03月06日、胚芽乳酸桿菌GKK1、短乳酸桿菌GKJOY、動物雙歧桿菌GKBA及鼠李醣乳酸桿菌GKY7是寄存於2019年07月18日，且長雙歧桿菌GKL7及兩
歧雙歧桿菌GKB2是寄存於2020年04月10日，且短雙歧桿菌GKV1寄存於2020年04月13日。
所述「死菌培養物」可包含但不限於乳酸菌之死菌菌體及醱酵液。詳細而言，死菌培養物是指乳酸菌經過培養步驟及滅菌步驟後所獲得的產物。培養的方式並無特別限制，可為習知的液態培養，以獲得菌液，其中菌液包含活菌及醱酵液。滅菌的方式沒有特別限制，可為習知的高溫滅菌，例如：以121℃之高溫處理1分鐘上述菌液，以由菌液中的活菌獲得死菌菌體。相較於乳酸菌之活菌或其凍乾粉，死菌培養物較為安全，且較容易製作。
所述「對EV71之抵抗力」可分為「降低體外感染動物細胞的機率」及「於體外降低細胞毒性」。詳細而言，「降低體外感染動物細胞的機率」表示接觸EV71後，體外動物細胞較不容易受到感染，而「於體外降低細胞毒性」表示即使動物細胞感染EV71，也不容易死亡。
經動物細胞實驗證實，在細胞接觸EV71前，或是在細胞接觸EV71時，施予細胞上述乳酸菌之死菌培養物，可提升細胞存活率，表示乳酸菌之死菌培養物可於體外降低EV71對動物細胞之感染機率。在另一實驗中，細胞接觸EV71後，施予細胞上述乳酸菌之死菌培養物，可提升細胞存活率，表示乳酸菌之死菌培養物可於體外降低EV71之細胞毒性。
在一實施例中，死菌培養物對動物細胞之有效劑量可例如小於等於5體積百分比(vol.%)，相當於每毫升的
死菌培養物含有106CFU至109CFU的菌數。
在一實施例中，上述胚芽乳酸桿菌GKM3、洛德乳酸桿菌GKR1、鼠李醣乳酸桿菌GKLC1、胚芽乳酸桿菌GK4、胚芽乳酸桿菌GKD7、戊醣片球菌GKP4、胚芽乳酸桿菌GKK1、長雙歧桿菌GKL7、兩歧雙歧桿菌GKB2、短雙歧桿菌GKV1、短乳酸桿菌GKJOY、動物雙歧桿菌GKBA、鼠李醣乳酸桿菌GKY7及短乳酸桿菌GKL9之有效劑量可例如小於等於1.25vol.%。
在一實施例中，胚芽乳酸桿菌GKM3、鼠李醣乳酸桿菌GKLC1、胚芽乳酸桿菌GK4、戊醣片球菌GKP4、胚芽乳酸桿菌GKK1、長雙歧桿菌GKL7、兩歧雙歧桿菌GKB2、短雙歧桿菌GKV1、短乳酸桿菌GKJOY、動物雙歧桿菌GKBA、鼠李醣乳酸桿菌GKY7及短乳酸桿菌GKL9之死菌培養物對動物細胞之有效劑量可例如小於等於0.3vol.%。
在一實施例中，上述組成物可例如口服組成物，口服組成物的種類並無特別限制，只要含有上述死菌培養物即可。在一實施例中，上述口服組成物是乳製品、醱酵乳品、豆漿、豆漿製品、嬰兒食品、健康食品或膳食補充品等。
本發明組成物之劑型並無特別限制。在一實施例中，組成物之劑型為水溶液、懸浮液、分散液、乳液(單相或多相分散體系、單室或多室脂質體)、水膠、凝膠、固體脂質奈米粒、錠劑、顆粒劑、粉劑及/或膠囊劑等。
在一實施例中，組成物可例如食品組成物或醫藥組成物。在一實施例中，組成物可選擇性地包含食品或藥學上可接受的載體、賦形劑、稀釋劑、輔助劑及/或添加劑，可例如溶劑、乳化劑、懸浮劑、崩解劑、黏合劑、安定劑、螫合劑、稀釋劑、膠凝劑、防腐劑、潤滑劑及/或吸收延緩劑等。
以下利用數個實施例以說明本發明之應用，然其並非用以限定本發明，本發明技術領域中具有通常知識者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾。
實施例一、死菌培養物之製作
首先，自BCRC取得乳酸菌菌株No.1至No.19，並將上述乳酸菌接種於Man Rogosa and Sharp(MRS)瓊脂培養基上，再於37℃進行固態培養達2天，以獲得各菌株之單一菌落，其中菌株No.1至No.19分別為：胚芽乳酸桿菌GKM3、副乾酪乳酸桿菌GKS6、發酵乳酸桿菌GKF3、乾酪乳酸桿菌GKC1、乳雙歧桿菌GKK2、洛德乳酸桿菌GKR1、鼠李醣乳酸桿菌GKLC1、胚芽乳酸桿菌GK4、胚芽乳酸桿菌GKD7、乳酸片球菌GKA4、戊醣片球菌GKP4、胚芽乳酸桿菌GKK1、長雙歧桿菌GKL7、兩歧雙歧桿菌GKB2、短雙歧桿菌GKV1、短乳酸桿菌GKJOY、動物雙歧桿菌GKBA、鼠李醣乳酸桿菌GKY7以及短乳酸桿菌GKL9。
分別將單一菌落接種於20ml之MRS培養液中，
並於37℃下進行液態培養達16小時，以獲得菌液。將上述菌液調整至pH 7.0後，以121℃之溫度進行高溫滅菌達1分鐘，從而獲得死菌培養物。需注意的是，固態培養及液態培養中，菌株No.5、菌株No.13至菌株No.15及菌株No.17需在厭氧的環境下進行，其他菌株則在好氧的環境下進行。此時菌液的菌數約為106CFU/mL至109CFU/mL。
實施例二、Vero細胞及細胞培養步驟
綠猿猴腎臟細胞株(African green monkey kidney cells)Vero細胞(寄存編號：ATCC CCL-81)對多種類型的病毒具有高度敏感性，因此Vero細胞被廣泛應用於病毒感染分子機制研究、疫苗及重組蛋白的研究，例如：狂犬病、水貂犬瘟熱，以及EV71之疫苗的開發。在本實施例中，Vero細胞是取自美國菌種保存中心(American Type Culture Collection，ATCC)。
細胞培養步驟是在溫度為37℃且CO2濃度為5%的環境下以細胞培養液培養Vero細胞，且上述細胞培養液是含2體積%胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)之RPMI-1640。
實施例三、乳酸菌之死菌培養物對於提升細胞對EV71抵抗力之評估
以乳酸菌之死菌培養物對Vero細胞進行前處理(pre-treatment)、共同處理(co-treatment)及後處理(post-treatment)以做為預防試驗、共培養試驗及治療
試驗，從而評估乳酸菌之死菌培養物對Vero細胞對EV17之抵抗力之影響。
在第一控制組中，對Vero細胞僅進行上述細胞培養步驟達48小時。在第二控制組中，先進行病毒接觸處理達1小時，再進行細胞培養步驟達48小時，其中病毒接觸處理是於37℃下以含EV71之細胞培養液培養Vero細胞，且EV71之病毒感染劑量(multiplicity of infection，MOI)為0.25。
利用四唑鹽類3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium(MTS)進行MTS試驗，以評估不同組別中Vero細胞的細胞存活率。
在預防試驗中，依序對Vero細胞進行前處理達1小時、病毒接觸處理達1小時，以及細胞培養步驟達48小時，其中前處理是以含有5vol.%、1.25vol.%或0.3125vol.%之死菌培養物的細胞培養液於37℃培養Vero細胞達1小時。在預防試驗中，使用菌株No.14至菌株No.19之死菌培養物。以MTS試驗分析細胞存活率，如圖1所示。
圖1是繪示根據本發明一實施例之預防試驗的細胞存活率之直條圖，其中縱軸表示以第一控制組為100%之細胞存活率，橫軸表示組別，由左至右分別為第一控制組、第二控制組、菌株No.14組、菌株No.15組、菌株No.16組、菌株No.17組、菌株No.18組及菌株
No.19組，「-」表示Vero細胞未與EV71接觸，「+」表示Vero細胞與EV71接觸，直條101表示第一控制組、直條103表示第二控制組、直條105表示死菌培養物的濃度為5vol.%、直條107表示死菌培養物的濃度為1.25vol.%、直條109表示死菌培養物的濃度0.3125vol.%，「＊＊＊」表示與第二控制組相比具有統計上的顯著差異(p<0.001)。
如圖1所示，相對於第二控制組，經前處理的Vero細胞之細胞存活率顯著上升，其中當死菌培養物之濃度為5vol.%時，相較於第二控制組，菌株No.14組、菌株No.15組、菌株No.16組、菌株No.17組、菌株No.18組及菌株No.19組之細胞存活率分別提升45.39%、35.90%、32.82%、29.39%、28.56%及31.94%，且上述菌株之死菌培養物在濃度為1.25vol.%及0.3125vol.%時，也可以顯著提升細胞存活率。這個結果顯示，菌株No.14至菌株No.19之死菌培養物可降低EV71體外感染動物細胞之機率。
在共培養試驗中，對Vero細胞進行共同處理，其中共同處理是先將Vero細胞進行病毒接觸處理達1小時，再進行細胞培養液培養達48小時，但在病毒接觸處理的過程中，細胞培養液培養不僅包含EV71，還包含5vol.%、1.25vol.%或0.3125vol.%之死菌培養物。在共培養試驗中，使用菌株No.1、菌株No.5至菌株No.9之死菌培養物。以MTS試驗分析共培養試驗之細胞存活率，
如圖2所示。
圖2是繪示根據本發明一實施例之共培養試驗的細胞存活率之直條圖，其中縱軸表示以第一控制組為100%之細胞存活率，橫軸表示組別，由左至右分別為第一控制組、第二控制組、菌株No.1組、菌株No.5組、菌株No.6組、菌株No.7組、菌株No.8及菌株No.9組，「-」表示Vero細胞未與EV71接觸，「+」表示Vero細胞與EV71接觸，直條201表示第一控制組、直條203表示第二控制組、直條205表示死菌培養物的濃度為5vol.%、直條207表示死菌培養物的濃度為1.25vol.%、直條209表示死菌培養物的濃度0.3125vol.%，「＊＊」及「＊＊＊」表示與第二控制組相比具有顯著差異，其中「＊＊」表示p<0.01且「＊＊＊」表示p<0.001。
如圖2所示，相較於第二控制組，共同處理後的Vero細胞之細胞存活率顯著上升，其中相較於第二控制組，菌株No.1組、菌株No.5組、菌株No.6組、菌株No.7組、菌株No.8組及菌株No.9組之細胞存活率分別提升10.63%、8.78%、8.37%、8.58%、12.06%及5.88%。菌株No.1組、菌株No.6組、菌株No.7組、菌株No.8組及菌株No.9組之死菌培養物在濃度為1.25vol.%時，也可顯著提升細胞存活率，其中菌株No.1組、菌株No.7組及菌株No.8組之細胞存活率在濃度為0.3125vol.%時也顯著提昇。這個結果顯示，菌株No.1、菌株No.5至菌株No.9之死菌培養物可降低EV71體外感染
動物細胞之機率。
在治療試驗中，依序進行病毒接觸處理達1小時，後處理達1小時，以及細胞培養步驟達48小時，其中後處理是以含有5vol.%、1.25vol.%或0.3125vol.%之死菌培養物的細胞培養液於37℃培養Vero細胞，在治療試驗中，使用菌株No.1至菌株No.15及菌株No.17至菌株No.19之死菌培養物。以MTS試驗分析治療試驗之細胞存活率，如圖3所示。
圖3是繪示根據本發明一實施例之治療試驗的細胞存活率之直條圖，其中縱軸表示以第一控制組為100%之細胞存活率，橫軸表示組別，由左至右分別為第一控制組、第二控制組、菌株No.1組至菌株No.15組、菌株No.17組至菌株No.19組，「-」表示Vero細胞未與EV71接觸，「+」表示Vero細胞與EV71接觸，直條301表示第一控制組、直條303表示第二控制組、直條305表示死菌培養物的濃度為5vol.%、直條307表示死菌培養物的濃度1.25vol.%、直條309表示死菌培養物的濃度為0.3125vol.%，「＊＊」及「＊＊＊」表示與第二控制組相比具有顯著差異，其中「＊＊」表示p<0.01且「＊＊＊」表示p<0.001。
如圖3所示，相對於第二控制組的Vero細胞，經後處理的Vero細胞之細胞存活率顯著上升，其中當死菌培養物之濃度為5vol.%時，相較於第二控制組，菌株No.1組至菌株No.15組、菌株No.17組至菌株No.
19組之細胞存活率分別提升26.49%、15.27%、10.84%、12.73%、15.55%、11.60%、12.00%、7.55%、15.90%、7.83%、11.93%、7.80%、15.34%、11.30%、5.72%、8.15%、7.48%及16.41%。菌株No.1組、菌株No.9組、菌株No.11組至菌株No.14組及菌株No.19組在死菌培養物之濃度為0.3125vol.%時，相較第二控制組，細胞存活率也顯著上升，其中菌株No.1組、菌株No.11組至菌株No.14組及菌株No.19組在死菌培養物之濃度為0.3125vol.%時，也顯著上升細胞存活率。這個結果顯示，菌株No.1至菌株No.15以及菌株No.17至菌株No.19之死菌培養物可於體外降低EV71之細胞毒性。
由上述結果顯示乳酸菌之死菌培養物可降低EV71體外感染動物細胞之機率及於體外降低細胞毒性，意味著應用本發明之乳酸菌之死菌培養物可確實提升動物細胞對EV71之抵抗力，從而有潛力降低個體感染EV71之機率、降低感染EV71後發病之機率、減輕EV71發病之症狀，或是加快受EV71感染之患者的康復。
由上述實施例可知，本發明之乳酸菌之死菌培養物用於製備抗EV71之組合物的用途，其優點在於使用至少一菌株之死菌培養物，不僅容易製作及控制劑量，還提高了使用安全性。此外，發明之乳酸菌之死菌培養物不僅有效降低EV71體外感染動物細胞之機率，於體外更有效降低EV71之細胞毒性，顯示應用本發明之乳酸菌之死菌培
養物具有提高細胞及/或個體對EV71之抵抗力的功效。
應理解的是，本發明雖使用Vero細胞建立細胞模式，然而，其不應用於限制本發明之乳酸菌之死菌培養物施予之細胞種類。本發明所屬技術領域中任何具有通常知識者可知，上述酸菌之死菌培養物不僅對Vero細胞具有提升對EV71之抵抗力之效果，在其他如腸道細胞、呼吸系統的細胞及/或神經細胞也具有相似或相同的結果。
需補充的是，本發明雖以特定的製程、特定的細胞株、特定的施予方式及/或特定的分析方法做為例示，說明本發明之乳酸菌之死菌培養物用於製備抗EV71之組成物的用途，惟本發明所屬技術領域中任何具有通常知識者可知，本發明並不限於此，在不脫離本發明之精神和範圍內，本發明含有乳酸菌之死菌培養物之組成物亦可使用其他製程或其他的分析方法進行。
雖然本發明已以數個實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，在本發明所屬技術領域中任何具有通常知識者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)GKL7、兩歧雙歧桿菌(B.bifidum)GKB2及短雙歧桿菌(B.breve)GKV1係寄存於台灣新竹食品路331號財團法人食品工業發展研究所生物資源中心(BCRC)，寄存編號分別為BCRC 910988、BCRC 910986及BCRC 910989，其中長雙歧桿菌GKL7及兩歧雙歧桿菌GKB2之寄存日期為2020年04月10日，且短雙歧桿菌GKV1之寄存日期為2020年04月13日。
301,303,305,307,309:直條
Claims (7)
- 一種乳酸菌用於製備提升對腸病毒71型(Enterovirus 71，EV71)之抵抗力的組成物之用途，其中該乳酸菌是選自於由寄存編號是寄存編號是BCRC 910788之副乾酪乳酸桿菌(Lactobacillus paracasei)GKS6、寄存編號是BCRC 910824之發酵乳酸桿菌(L.fermentum)GKF3、寄存編號是BCRC 910825之乾酪乳酸桿菌(L.casei)GKC1、寄存編號是BCRC 910826之乳雙歧桿菌(Bifidobacterium lactis)GKK2、寄存編號是BCRC 910828之鼠李醣乳酸桿菌(L.rhamnosus)GKLC1、寄存編號是BCRC 910876之乳酸片球菌(Pediococcus.acidilactici)GKA4、寄存編號是BCRC 910879之戊醣片球菌(P.Pentosaceus)GKP4、寄存編號是BCRC 910988之長雙歧桿菌(B.longum)GKL7、寄存編號是BCRC 910989之短雙歧桿菌(B.breve)GKV1、寄存編號是BCRC 910917之動物雙歧桿菌(B.animals)GKBA、寄存編號是BCRC 910859之短乳酸桿菌(L.brevis)GKL9及上述任意組合所組成之一族群，該長雙歧桿菌GKL7是在2020年04月10日寄存於台灣新竹食品路331號財團法人食品工業發展研究所生物資源中心(BCRC)，該短雙歧桿菌GKV1是在2020年04月13日寄存於BCRC，且該組成物包含一有效劑量之該乳酸菌之一熱致死菌培養物做為一有效成分，藉以提高一細胞 接觸該EV71後之一細胞存活率，該熱致死菌培養物係以Man Rogosa and Sharp(MRS)培養液於37℃下進行一液態培養後，以121℃之溫度進行高溫滅菌後獲得，該乳雙歧桿菌GKK2、該長雙歧桿菌GKL7、該短雙歧桿菌GKV1及該動物雙歧桿菌GKBA係於一厭氧條件進行該液態培養，且該副乾酪乳酸桿菌GKS6、該發酵乳酸桿菌GKF3、該乾酪乳酸桿菌GKC1、該鼠李醣乳酸桿菌GKLC1、該乳酸片球菌GKA4、該戊醣片球菌GKP4及該短乳酸桿菌GKL9係培養於一好氧條件進行該液態培養。
- 如請求項1所述之乳酸菌用於製備提升對EV71之抵抗力的組成物之用途，其中該組成物用於降低該EV71體外感染一動物細胞之一機率或於體外降低該EV71之一細胞毒性。
- 如請求項1所述之乳酸菌用於製備提升對EV71之抵抗力的組成物之用途，其中該熱致死菌培養物包含該乳酸菌之一死菌菌體及一醱酵液。
- 如請求項1所述之乳酸菌用於製備提升對EV71之抵抗力的組成物之用途，其中該組成物是一口服組成物。
- 如請求項1所述之乳酸菌用於製備提升對EV71之抵抗力的組成物之用途，其中該組成物是一食品組成物或一醫藥組成物。
- 如請求項1所述之乳酸菌用於製備提升對EV71之抵抗力的組成物之用途，其中該組成物更包含一食品或一醫藥上可接受的一載體、一賦形劑、一稀釋劑、一輔助劑及/或一添加劑。
- 如請求項1所述之乳酸菌用於製備提升對EV71之抵抗力的組成物之用途，其中該組合物是一乳製品、一醱酵乳品、一豆漿、一豆漿製品、一嬰兒食品、一健康食品或一膳食補充品。
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|---|
| 期刊 Lei Yin Emily Ang et al. Antiviral activity of Lactobacillus reuteri Protectis against Coxsackievirus A and Enterovirus 71 infection in human skeletal muscle and colon cell lines. Virol J. 13. 2016 Jun 24. 111.; * |
| 期刊 M-F Chen et al. Pretreatment with a heat-killed probiotic modulates monocyte chemoattractant protein-1 and reduces the pathogenicity of influenza and enterovirus 71 infections. Mucosal Immunol. 10(1). Epub 2016 Apr 13. 215-227. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| TW202218676A (zh) | 2022-05-16 |
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