TWI801925B - 用於調節免疫恆定性之含有多醣及多酚之蘆薈基底組合物 - Google Patents

用於調節免疫恆定性之含有多醣及多酚之蘆薈基底組合物 Download PDF

Info

Publication number
TWI801925B
TWI801925B TW110125260A TW110125260A TWI801925B TW I801925 B TWI801925 B TW I801925B TW 110125260 A TW110125260 A TW 110125260A TW 110125260 A TW110125260 A TW 110125260A TW I801925 B TWI801925 B TW I801925B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
cells
extract
composition
immune
hmgb1
Prior art date
Application number
TW110125260A
Other languages
English (en)
Other versions
TW202214284A (zh
Inventor
米斯芬 伊美
平 趙
泰瑞莎 霍姆
莉迪亞 布羅尼爾
梅芬 洪
亞力山卓雅 歐尼爾
齊 賈
Original Assignee
美商優力竟股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商優力竟股份有限公司 filed Critical 美商優力竟股份有限公司
Publication of TW202214284A publication Critical patent/TW202214284A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI801925B publication Critical patent/TWI801925B/zh

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/886—Aloeaceae (Aloe family), e.g. aloe vera
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
    • A61K31/05—Phenols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4375—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having nitrogen as a ring heteroatom, e.g. quinolizines, naphthyridines, berberine, vincamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/69—Boron compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/695—Silicon compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/32—Bones; Osteocytes; Osteoblasts; Tendons; Tenocytes; Teeth; Odontoblasts; Cartilage; Chondrocytes; Synovial membrane
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A61K36/07—Basidiomycota, e.g. Cryptococcus
    • A61K36/076—Poria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/53—Lamiaceae or Labiatae (Mint family), e.g. thyme, rosemary or lavender
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/906—Zingiberaceae (Ginger family)
    • A61K36/9068—Zingiber, e.g. garden ginger
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/37—Extraction at elevated pressure or temperature, e.g. pressurized solvent extraction [PSE], supercritical carbon dioxide extraction or subcritical water extraction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/45—Ericaceae or Vacciniaceae (Heath or Blueberry family), e.g. blueberry, cranberry or bilberry

Abstract

本發明揭示用於調節免疫恆定性之所用組合物及方法，其包括富集一或多種多醣之蘆薈萃取物；富集一或多種多醣之 Poria萃取物；及富集一或多種多酚化合物之迷迭香萃取物之組合。揭示藉由調節HMGB1維持免疫恆定性之組合物，其包含一或多種多醣及一或多種多酚化合物之組合。揭示用於治療、管理、促進調節哺乳動物之免疫恆定性之方法，其包括投與有效量之0.01 mg/kg至500 mg/kg該哺乳動物體重之組合物。

Description

用於調節免疫恆定性之含有多醣及多酚之蘆薈基底組合物
百合科(Liliaceae family)之成員巴巴多斯蘆薈( Aloe barbadensisM.) (真蘆薈( Aloe vera))數世紀來被用作食品或局部凝膠，以及民俗醫療。蘆薈的最早醫用記錄可追溯至公元前2200年，蘆薈植物已知具有巨大治癒能力。現今，充分記載之有益作用，諸如傷口癒合加速、抗微生物作用、消炎作用、皮膚保護、毛髮生長刺激及免疫刺激特性等，使得真蘆薈成為類藥劑營養品及化妝品中之重要成分，並且在調配成食品、飲料、膳食補充劑、皮膚護理產品等之後具有許多應用。(Wynn等人，2005; Djuv及Nilsen, 2012; Shimpo等人，2002)。
在各種蘆薈組分中，乙醯化多醣(ACP)被視為最重要的活性組分中之一者。儘管關於多醣之結構、化學及物理特性存在相當大的差異，但蘆薈凝膠之主要多醣報導為乙醯化甘露聚糖(醋孟南(acemannan)，ACM或AP)，其由分子量在3,000 Da至2,000,000 Da範圍內之O-乙醯基取代的β-1,4-連接甘露糖之直鏈組成。已報導蘆薈多醣具有強抗氧化能力。舉例而言，已報導當在DPPH、羥基及烷基自由基清除分析中測試時來自巴巴多斯蘆薈凝膠之純化多醣的強抗氧化活性(Kang等人, 2014)。類似地，在蘆薈植物年齡及功能相關研究中，經由DPPH分析，在100 mg/L之相同濃度下，發現來自三年蘆薈葉萃取物之多醣展示出最強的自由基清除活性(72.19%)，其顯著高於合成抗氧化劑丁基化羥基甲苯(70.52%)及α-生育酚(65.20%) (Hu等人，2003)。亦已發現自真蘆薈分離之多醣具有高抗氧化功效，如藉由在小鼠慢性酒精誘導肝毒性中，活體內氧化應激生物標記物丙二醛(MDA)減少及肝非酶抗氧化GSH及酶抗氧化SOD增加所表明(Cui等人, 2014)。
真蘆薈已被臨床研究用於皮膚衰老、皮膚保護、傷口癒合、牙齦炎、癌症治療、糖尿病治療、維生素C及維生素E生物可用性增強，治療前期糖尿病、大腸急躁症、肝保護、治療胃及口腔潰瘍。尚未進行很多免疫相關人類臨床試驗，但許多活體外及活體內研究展示真蘆薈葉萃取物及蘆薈多醣之免疫保護或刺激作用。蘆薈多醣減少在紫外輻射之後皮膚細胞中之IL-10 (Byeon等人, 1998)，且經口及局部投與真蘆薈凝膠及分子量在80至200 KDa之間的純化多醣恢復了由UV暴露抑制之動物皮膚免疫功能(Qiu等人2000, Im, 2005)。正常小鼠中靜脈內注射白色念珠菌( C. albicans)之後，經口投與蘆薈多醣顯著減少脾臟及腎臟中之白色念珠菌之生長(Im, 2010)。在來自環磷醯胺(Endoxan)處理之小鼠之派伊爾氏淋巴集結細胞(Peyer's Patch cell)中，蘆薈多醣亦增加細胞介素，包括IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IFN-γ及GM-CSF產生(Im, 2014)。在細胞模型(Budai 2013)中，真蘆薈以劑量依賴型方式顯著減少IL-8、TNFα、IL-6及IL-1β細胞介素產生。抑制性作用在初級細胞中實質上更明顯。在LPS誘導之初級巨噬細胞中，真蘆薈抑制IL-1β前體(pro-IL-1β)、Nlrp3、凋亡蛋白酶-1及P2X7受體之表現，減少炎性體活化。此外，此等細胞中如NF-κB、p38、JNK及ERK之信號傳導路徑之LPS誘導之活化受真蘆薈抑制。經修飾之蘆薈多醣(MAP)藉由恢復淋巴球之增殖活性；卵白蛋白(OVA)特異性T細胞增殖；抗體產生；及細胞毒性T淋巴球之細胞殺滅活性來恢復小鼠中之長期應激誘導之免疫抑制(Lee 2016)。
多孔菌科(family Polyporaceae)真菌 Poria cocosWolf為生長於中國紅松樹及其他針葉樹之根部上的藥用蕈類，其常見名稱為諸如中國之茯苓(Fuling)，及日本之松塊(matsuhodo)，且亦稱為玉靈(hoelen)、poria、萬靈桂(tuckahoe)或茯菟(China root)。其拉丁命名法已經修訂若干次，其中 Wolfiporia extensa為當前植物名稱。茯苓作為中國食品及傳統中醫(TCM)之雙用途成分已被納入許多古代湯劑及方子中，此等湯劑及方子甚至現今仍被廣泛使用。茯苓之特性定義為利尿、鎮靜及滋補(tunic)。茯苓之傳統用途係用於治療噁心、嘔吐、腹瀉、食慾不振及胃潰瘍以及失眠及健忘症(Ríos 2011; Feng等人2013)。已報導此真菌及真菌萃取物之多種生物活性，包括抗微生物、抗真菌、抗氧化、神經保護、消炎、抗血管生成及抗癌活性。
茯苓之主要活性組分為 Poria cocos多醣(PCP)，呈β-葡聚糖形式，其為經乾燥之真菌子實體之主要組分，分子量範圍為41 KDa至5 MDa。在PCP中偵測到葡萄糖、岩藻醣、阿拉伯糖、木糖、甘露糖及半乳糖，具有β‐(1→3)連接的葡萄糖主鏈及β‐(1→6)連接的葡萄糖側鏈。已報導 Poria cocos多醣之不同生物功能，諸如抗氧化、抗高血糖、胃痛緩解、抗發炎、抗癌及免疫調節(Sun 2014)。據報導，多醣在活體內與活體外模型均具有針對不同癌症之抗腫瘤活性。 Poria cocos多醣已展示減少血管平滑肌細胞(VSMC)中之ox-LDL誘導之發炎及氧化應激。PCP顯著減弱ox-LDL誘導之氧化應激，如藉由VSMC中活性含氧物(ROS)及MDA含量降低以及SOD活性增加所證明。PCP亦實質上抑制VSMC形成泡沫細胞(foam cell)及細胞內脂質積聚。作用機制研究表明PCP可能活化ERK1/2信號傳導路徑，增加Nrf2自細胞質易位至細胞核且增加血基質加氧酶-1 (HO-1)表現，有可能作為治療動脈粥樣硬化之治療劑。
正研究抗癌、消炎及潛在免疫功能之三萜類物亦鑑別為 Poria cocos中之活性組分(Ríos 2011; Li等人2011)。分離自 Poria之大部分三萜衍生自羊毛甾烷或裂環羊毛甾烷(secolanostane)骨架。儘管並未完全理解 Poria cocos之消炎機制，但已藉由若干研究證實對磷脂酶A酶之抑制(Ríos 2011; Giner-Larza等人2000)。在脂多醣(LPS)刺激之RAW 264.7巨噬細胞中， P. cocos乙醇萃取物之消炎機制展示出係藉由使NF-κB信號傳導路徑不活化來抑制iNOS、COX-2、IL-1β及TNF-α (Jeong等人2014)。已經在不同活體外及活體內模型中清楚地證實 Poria cocos萃取物及羊毛甾烷三萜對磷脂酶A2 (PLA2)之抑制性作用(Giner-Larza等人2000)。 Poria cocos萃取物具有抗PLA2誘導之小鼠爪水腫的活性，藉由經口或非經腸給與。兩種分離自 Poria cocos之羊毛甾烷三萜類物，茯苓酸(pachymic acid)及去氫土莫酸(dehydrotumulosic acid)被鑑別為強力蛇毒磷脂酶A2抑制劑，其中經測定去氫土莫酸的IC 50值為0.845 mM (Cuéllar等人1996)。茯苓酸及氫土莫酸亦分別以4.7及0.68 nmol/耳之IC 50值抑制由十四醯基佛波醇乙酸酯(TPA)誘導之急性耳水腫。此等兩種化合物亦對角叉菜膠及花生四烯酸誘導之急性水腫起作用，指示此等三萜類物作為消炎治療劑之潛能(Cuéllar等人1997)。已報導了來自 Poria cocos之各種分離的三萜對由TPA或花生四烯酸誘導之耳水腫的類似抑制作用(Giner, 2000; Yasukawa, 1998; Kaminaga, 1996)。
Poria cocos通常包括於免疫調節傳統草藥中。 Poria cocos50%乙醇萃取物以劑量依賴型方式活體外增加人類末梢血液單核球中介白素(IL)-1β及IL-6之分泌。在0.4 mg/mL下處理6小時之後，萃取物可增加細胞介素含量，包括腫瘤壞死因子(TNF)-α；同時在0.2 mg/mL下處理3小時之後抑制轉化生長因子(TGF)-β分泌(Yu及Tseng, 1996)。因為 Poria cocos萃取物增強活化巨噬細胞免疫刺激因子(IL-1β、IL-6及TNF-α)之分泌，同時抑制免疫抑制因子(TGF-β)，所以其可充當免疫刺激劑。 Poria cocos多醣(PCP)之潛在機制可能經由T細胞活化。測試PCP在同種異體反應性鼠類細胞毒性T淋巴球之活體內誘導上的免疫佐劑活性。脾臟細胞及腸系膜淋巴結細胞內之增強的細胞毒性T淋巴球(CTL)活性保持超過25天(Hamuro, 1978)。PCP可顯著改良巨噬細胞吞噬作用、胸腺指數及脾臟指數(Zhang等人及Peng等人)，且增加血清中IgA、IgG及IgM之含量。研究亦展示PCP之免疫調節活性可經由TLR4/TRAF6/NF-κB信號傳導，在活體外RAW 264.7巨噬細胞及活體內小鼠路易肺癌(Lewis lung carcinoma，LLC)腫瘤中展現(Tian, 2019)。佐劑為疫苗接種策略之重要組分，因為其增強且促進免疫反應。已報導包括狂犬病疫苗及B型肝炎疫苗的動物中不同疫苗下PCP之佐劑活性，指示PCP為增強非活性疫苗之極佳佐劑候選物(Wu, 2016; Zhang, 2019)。
迷迭香(Rosemary) ( Salvia Rosmarinus， Rosmarinus officinalis)為長至兩公尺高的多年生灌木(woody, perennial herb)。葉常青，類似於松針，具有刺激性的氣味。其為唇形花科(Lamiaceae)薄荷科成員，原生於地中海區域，且在世界範圍內在許多國家，包括美國、英國、法國、西班牙、葡萄牙、摩洛哥、中國等培養。新鮮及乾燥之葉子經常用於傳統地中海菜肴作為香辛料以給各種食品諸如烤肉調味。迷迭香葉及藉由蒸餾自新鮮花梢或莖及葉製備之迷迭香油均可廣泛用於食品及飲料中，包括酒精飲料、冷凍乳製品、甜點、烘焙食品及肉類產品(Leung及Foster, 1996)。迷迭香為最古老的已知藥用植物之一，因為其收斂、滋補、驢風、抗痙攣、利膽、黏液分解、鎮痛及發汗特性。數世紀來，咸信迷迭香增強記憶及頭腦清晰度。其可刺激、活化及振奮精神、頭腦及身體(Zimmermann, 1980; Newall, 1996)。迷迭香葉經批准用於治療消化不良病症、血壓問題、食慾不振及風濕(PDR for Herbal Medicines, 第2版)。其亦可用作民俗醫療用於消化不適、頭痛及偏頭痛、月經問題、疲憊、眩暈及記憶力差。
經口服用迷迭香用於消化不良、胃腸積氣、誘發墮胎、月經流量增加、痛風、咳嗽、頭痛、肝及膽囊問題、食慾不振及諸如高血壓之心臟血管病狀(Natural Medicines Comprehensive Database, 2010)。迷迭香傳統上用於草藥中作為順勢療法以幫助減輕與風濕相關之肌肉及關節疼痛(Leung及Foster, 1996; ESCOP 2003)。其可幫助改良循環，此有益於肌肉緊張及風濕。迷迭香芳香療法亦可緩解頭痛，減少壓力且幫助減輕哮喘及支氣管炎症狀。迷迭香報導有抗微生物、抗真菌及抗病毒活性(Newall, 1996)。粉末狀葉片用作有效天然跳蚤及壁蝨驅蟲劑。迷迭香油亦展示顯著的抗細菌、抗真菌及抗病毒特性。研究報導迷迭香之抗氧化活性(Al-Sereiti，1999)。咖啡酸、迷迭香酸及酚系二萜鼠尾草酸及鼠尾草醇為與迷迭香萃取物之抗氧化特性相關之化合物。
迷迭香酸(RA)為水溶性咖啡醯基酚系酸化合物，一種由咖啡酸及3-(3,4-二羥苯基)乳酸構成之酯。迷迭香酸已報導為迷迭香及鼠尾草屬( Salviaspecies)中之主要組分之一，具有廣泛範圍的生物活性，主要為抗氧化、抗微生物、抗病毒、抗癌、抗細胞凋亡及消炎作用等。14個鼠尾草植物物種之強抗氧化活性與迷迭香酸含量相關(Adimcilar，2019)。在非細胞及細胞抗氧化分析中，迷迭香酸及其兩種代謝物咖啡酸及3-(3,4-二羥苯基)乳酸皆展示與陽性對照組槲皮素(quercetin)相當之強力自由基清除活性(Adomako-Bonsu, 2017)。
迷迭香酸(RA)之消炎作用與其在一系列發炎性疾病，如關節炎、大腸炎、哮喘及過敏性鼻炎中之潛在用途已在不同活體外及活體內模型中研究(Amoah, 2016; Luo, 2020)。發現IL-1β誘導之大鼠軟骨細胞中RA抑制IL-6分泌且抑制ADAMTS-4及ADAMTS-5之基因表現及蛋白質含量(Hu，2018)。在此研究中，RA亦減少ACAN及COL2基因表現增強其用於治療骨關節炎之用途。據報導RA抑制小鼠哮喘模型中卵白蛋白(Ova)刺激之氣道發炎(Liang, 2016)。RA顯著減少支氣管肺泡灌洗液(BALF)中發炎細胞及Th2細胞介素，降低總IgE及Ova特異性IgE濃度，且顯著改良氣道高反應性。用RA預處理可顯著減少肺組織中之AMC酶、CCL11、CCR3、Ym2及E-選滯蛋白mRNA含量且減少NF-kB及MAPK活化，指示RA可為潛在地經由抑制ERK、JNK及p38磷酸化且經由NF-kB不活化，用於哮喘治療之有前景的候選物。發現經口RA在12-十四醯基佛波醇13-乙酸酯(TPA)刺激之小鼠耳水腫模型中有效(Osakabe, 2004)，顯著減少鼻灌洗流體中嗜中性白血球及嗜酸性球之數目。
在培養之RAW264.7巨噬細胞樣細胞中及大鼠盲腸結紮穿孔誘導之敗血症模型中研究迷迭香酸(RA)之防腐作用(Jiang, 2009)，其中廣泛範圍之發炎性介體之局部及全身性含量降低。RA以劑量依賴型方式下調TNF-α、IL-6及高速泳動群盒1蛋白質(HMGB-1)之含量。RA之消炎機制可係經由藉由抑制IκB激酶活性調節NF-κB路徑。RA展示大腸癌HT-29細胞株及非惡性乳上皮細胞株MCF10A中促炎性基因環加氧酶-2 (COX-2)之顯著下調(Scheckel, 2008)。RA之抗病毒作用在日本腦炎病毒感染小鼠中報導，在RA處理組中死亡率降低(Swarup, 2007)。與未處理之經感染動物的含量相比，RA可顯著降低病毒負荷及促炎性細胞介素含量，尤其IL-6及12、TNF-α、IFN-γ及MCP-1。
在H22-異種移植模型中，迷迭香酸藉由抑制發炎性細胞介素及NF-κB路徑、降低腫瘤微環境中之發炎性信號傳導展現對肝細胞癌(HCC)之抗腫瘤作用(Cao, 2016)。RA經由調節CD4+/CD8+ T細胞之比率及IL-2及IFN-γ分泌，降低IL-6、IL-10及STAT3之表現、上調Bax及凋亡蛋白酶-3，及下調Bcl-2來有效地抑制腫瘤生長。此等活性牽涉RA調節免疫反應及誘導HCC細胞凋亡(Cao, 2019)。
脂多醣(LPS)為革蘭氏陰性細菌之外膜之整體組分，且為起始可引起內毒素休克之廣泛性發炎過程的主要促成因子。敗血症可引起危及生命之器官功能異常，其由宿主感染反應失調引起且導致器官衰竭。內毒素休克為主要由巨噬細胞/單核球介導，且歸因於若干早期細胞介素，諸如TNF-α、IL-1、IL-6及IFN-γ以及後期介體，諸如HMGB1之過度產生的狀態。高速泳動群盒蛋白質1 (HMGB1)為敗血症之關鍵介體。其回應於內源性及外源性發炎性信號而自活化巨噬細胞及單核球釋放(Wang等人, 1999)。免疫信號傳導之過度活性可引起細胞介素風暴，其可能導致多種器官衰竭及最終死亡。存活患者可具有可藉由HMGB1之遲延及持續釋放充分驅動之持續發炎反應(Gentile及Moldawer，2014)。
一旦自受刺激之單核細胞主動釋放且被動地自壞死細胞釋放，HMGB1便充當用於活化宿主免疫反應之報警素(危險信號)。其係藉由充當促進免疫細胞移動至感染部位之趨化因子，及充當使其他免疫細胞活化以分泌促炎性細胞介素之損傷相關分子模式(DAMP)而在先天性免疫反應活化中發揮關鍵作用(Yang等人,2001)。當產生較低及最佳含量之促炎性細胞介素時，其將產生針對病毒或細菌侵襲之保護性免疫反應；然而若其如在『細胞介素風暴』之情況中過度產生，則其藉由介導有害發炎反應變得對宿主有害。在大多數情況下，對於患有潛在健康病狀，免疫缺乏症或免疫性損壞之個體且在老年人中，細胞介素風暴似乎會造成急性全身性發炎症候群；存活之個體可產生延遲之發炎介導，此可引起持續發炎性、免疫抑制性及/或分解代謝性反應。除充當多種細胞類型，包括所有發炎細胞之化學吸引因子以外，HMGB1使得發炎細胞分泌更多TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8及巨噬細胞發炎蛋白(MIP)，表明其參與『細胞介素風暴』(Bianchi及Manfredi，2007)。大量研究亦報導，細胞外HMGB1可觸發破壞性發炎反應且促進敗血症及急性肺損傷進展(Entezari等人,2014)。相比於在內毒素刺激幾分鐘內分泌之TNF-α及IL-1β，HMGB1在若干小時之後在活體外及活體內分泌，表明其後期發炎介導。實際上，當在敗血症發作之後24小時投與HMGB1中和抗體，可保護免於致死性內毒血症，表明HMGB1作為致死性敗血症之後期介體之關鍵作用(Wang等人,1999)。臨床上，持續高含量HMGB1與處於敗血症晚期或死於敗血症之個體之間亦已建立較強聯繫(Angus等人,2007)。
衰老為隨時間推移影響身體及頭腦功能之複雜的衰退過程，且不良的免疫反應為老年人中最多觀測到之變化之一。理解老年人中發生之免疫反應下降之潛在機制為其緩和之關鍵第一步驟。化學誘導之加速衰老模型，諸如D-半乳糖誘導之胸腺損傷及免疫老化小鼠模型為研究衰老對免疫系統之影響的較佳選項。在化學誘導之動物衰老模型中，動物展現模擬老年人中時常觀測到之免疫反應下降之免疫老化(Azman 2019)。D-半乳糖誘導之衰老模型為抗衰老研究中常用且經過充分驗證之動物模型中之一者。儘管其在動物體內正常濃度下轉化成葡萄糖，但高濃度D-半乳糖可容易地轉化成醛醣及氫過氧化物，從而產生氧源性自由基。其可亦與蛋白質及肽之游離胺反應以經由非酶糖基化產生後期糖基化終產物(AGE)。此模型中此等活性含氧物(ROS)之積聚及增加的AGE將使得正常器官及免疫系統恆定性不平衡，其隨後可造成最終加快衰老過程之氧化應激、發炎、免疫反應減少、粒線體功能障礙及細胞凋亡(例如胸腺細胞之細胞凋亡)。此等變化在老化及衰老之天然存在之病理學特徵當中。
所考慮之主題描述一種新穎的蘆薈基底組合物，其包含多醣及多酚，用於調節免疫恆定性。關於當前考慮之主題，已自宿主防禦機制之兩種不同反應觸發子角度試圖實現免疫恆定性。為簡單起見，此等反應觸發子基於其攻擊來源歸類為內源性/內因性及外源性/外來性。在此考慮之主題中，暴露於污染、感染、慢性疾病及任何外來侵襲屬於外源性來源類別；發炎、氧化應激、應激激素、衰老及其相關變化屬於內源性來源類別。不管起因如何，自所揭示之內源性及/或外源性攻擊觸發子中之任一者的恢復、保護及/或預防均視宿主免疫反應恢復恆定性之能力而定。
在一些實施例中，考慮之方法包括哺乳動物藉由使免疫反應最佳化或平衡來維持免疫恆定性；改良衰老及免疫器官老化損壞之免疫性；預防慢性發炎及發炎損壞之免疫性；幫助維持針對流感疫苗接種或COVID-19疫苗接種之健康免疫反應；幫助維持針對病毒感染及細菌感染之健康免疫功能；保護免疫系統免受由空氣污染誘導的氧化應激損傷。
當前考慮之主題中所描述的包含多醣及多酚之蘆薈基底新穎組合物UP360展示解決內源性及外源性攻擊情境。對於考慮之組合物，脂多醣(LPS)誘導之敗血症、LPS誘導之急性肺損傷、高氧及微生物感染之小鼠模型及免疫接種模型用於模擬外源性影響，而免疫接種及無免疫接種之D-半乳糖誘導之加速衰老模型用於模擬內源性作用。在兩種情況下，當前考慮之主題展示宿主之免疫反應之統計學上顯著之改良，表明新穎組合物恢復恆定性之積極驅動力。考慮之組合物的功效係基於觀測到的關鍵免疫及/或發炎反應生物標記物，諸如HMGB1變化及與免疫老化相關的變化來評估。藉由調節HMGB1，包含多醣及多酚之蘆薈基底組合物UP360展現顯著減低促炎性細胞介素TNF-α、IL-1β、IL-6、CRP及CINC3，同時提高存活率，指示其用作能夠恢復、調節及維持免疫恆定性之免疫調節劑的用途。類似地，亦發現蘆薈基底組合物UP360展示逆轉免疫老化，如藉由以下所證明：刺激先天性及後天性免疫反應(IgA增加，CD3+ T細胞、CD4+輔助T細胞、CD8+細胞毒性T細胞、NKp46+自然殺手細胞、TCRγδ+ γ δ T細胞及CD4+TCRγδ+輔助γ δ T細胞增加)，增強抗氧化能力(SOD及Nrf2增加)且保護關鍵免疫器官，諸如胸腺免於衰老相關之損傷。
在額外類別，諸如隨機分組雙盲安慰劑對照人類臨床試驗中，包含多醣及多酚之新穎的蘆薈基底組合物UP360展現激活(priming)及活化宿主免疫系統以提高免疫監視及/或強烈反應。特定言之，在每日補充UP360 28天之後的個體中，且在補充總共56天且第28天進行流感疫苗接種免疫挑戰之個體中，TCRγδ+ γ δ T細胞增加。增加之循環TCRγδ+ γ δ T細胞暗示具有較高百分比之TCRγδ+ γ δ T細胞的外周組織，諸如皮膚、腸及肺中加強的免疫監視。亦在活體內LPS誘導之敗血症模型及活體外LPS挑戰之巨噬細胞中測試組合當前考慮之主題中之來自藥用植物之此等標準化及富集萃取物之優點，且發現出人意料的協同效應，如所考慮之主題內文中所描述。一般而言，將免疫系統表示為槓桿，且將包含多醣及多酚之蘆薈基底組合物表示為樞軸點，藉由調節槓桿一側的HMGB1作用及另一側的γ δ T細胞計數作用來實現免疫恆定性。
揭示用於調節免疫恆定性之組合物，其包括富集一或多種多醣之蘆薈萃取物；富集一或多種多醣之 Poria萃取物；及富集一或多種多酚化合物之迷迭香萃取物之組合。
揭示藉由調節HMGB1維持免疫恆定性之組合物，其包含一或多種多醣及一或多種多酚化合物之組合，其中該組合物藉由抑制HMGB1釋放或抵消其作用來調節HMGB1，如藉由阻斷細胞質易位或藉由阻斷囊泡介導之釋放靶向HMGB1主動或被動釋放；或抑制細胞核中之分子內二硫鍵形成；或在釋放時直接靶向HMGB1且中和其作用；或阻斷HMGB1模式識別受體，諸如鐸樣受體(TLR)-2/4/7/9，及後期糖基化終產物受體(RAGE)或抑制其信號轉導；或改變生理化學微環境，且防止HMGB1四聚體形成且干擾HMGB1對TLR及RAGE之結合親和力；或防止HMGB1之集群形成或自締合。
揭示用於治療、管理、促進調節哺乳動物之免疫恆定性之方法，其包括投與有效量之0.01 mg/kg至500 mg/kg該哺乳動物體重之組合物。
此臺灣申請案係基於2020年7月9日申請且標題為「用於調節免疫恆定性之含有多醣及多酚之蘆薈基底組合物(Aloe based Compositions Comprising Polysaccharides and Polyphenols for Regulation of Homeostasis of Immunity)」之美國臨時專利申請案序列號：63049871，其共同擁有且以全文引用之方式併入本文中。
能夠調節、抑制及刺激後天性或先天性免疫性之任何組分的天然化合物已知為免疫調節劑、免疫恢復劑、免疫增強劑或生物反應調節劑。在臨床實踐中，免疫調節劑一般分類成免疫佐劑、免疫刺激劑及免疫抑制劑。免疫佐劑係增強疫苗功效之特異性免疫刺激劑。活化或誘導免疫系統之介體或組分之藥劑稱為免疫刺激劑。針對自體免疫性、癌症、過敏及感染之保護藉由免疫刺激劑增強。另一方面，免疫抑制劑為抑制免疫系統且可用於諸如在器官移植之後控制病理性免疫反應的分子。
維持嚴格的免疫恆定性對防禦外部侵襲性微生物、病毒、真菌、污染物，清除死細胞，及起始呼吸及胃腸功能之重建及更新之生理功能至關重要。過度刺激之免疫功能可導致過敏性反應及自體免疫破壞性疾病。衰老、氧化應激、心理壓力、全身性發炎及許多慢性疾病，諸如糖尿病、肥胖及代謝症候群可轉移恆定性傾斜點，從而造成免疫功能受損。健康生活方式，包括每日平衡營養、鍛煉、壓力管理及補充抗氧化、消炎及免疫調節(免疫抑制及/或免疫刺激，視特定情況而定)之天然化合物及抗病毒、抗生素、類固醇及NTHE處方或OTC藥物可為平衡免疫功能提供有益的作用。經由此等手段，全身性及慢性發炎可減少。
不幸地，對以下之知識及關注要少得多：是否存在作為傾斜點因子起關鍵作用之關鍵生物、生理及病理學路徑及生物標記物，其在過度活化時可促進免疫反應自健康水準轉移向惡性循環(downward spiral)且引起細胞介素風暴。找到此類傾斜點係重要的。更必不可少的為找到用於製造成可移動傾斜點遠離破壞性方向且恢復免疫恆定性之組合物的活性化合物。吾人咸信HMGB1係可充當對引起受損及破壞性免疫反應之病毒，諸如冠狀病毒SARS-CoV-2，細菌感染及PM2.5污染物之生物反應上升之傾斜點的此類生物標記物。包含多醣及多酚之蘆薈基底組合物可藉由控制HMGB1來轉移傾斜點以恢復、調節及維持免疫恆定性(圖1)。
HMGB1最初鑑別為藉由使核小體結構穩定化且介導DNA構形變化而調節轉錄之核蛋白。相比於其在細胞核中之作用，細胞外HMGB1誘導顯著的發炎反應。彙集之證據展示，一系列動物肺部感染模型中高含量之細胞外HMGB1在氣道中之積聚可以經由損壞巨噬細胞功能直接損壞針對細菌及病毒感染之宿主防禦機制。在暴露於長期氧化應激之動物及人類之氣道中，細胞核HMGB1蛋白質之含量極高(相比於健康對照組100倍)。因此，降低氣道中HMGB1之含量及/或阻斷其活性可為越來越多的經歷由細胞介素風暴，諸如COVID-19感染產生之氧化應激之群體及患有發炎病症之群體提供重要治療性及預防性策略。
揭示用於調節免疫恆定性之組合物，其包括富集一或多種多醣之蘆薈萃取物；富集一或多種多醣之 Poria萃取物；及富集一或多種多酚化合物之迷迭香萃取物之組合。在考慮實施例中且如本文中將詳細展示，該組合物中之該蘆薈萃取物或該 Poria萃取物或該迷迭香萃取物在各萃取物1重量%至98重量%範圍內，其中蘆薈: Poria:迷迭香(APR)之最佳化重量比為3:2:1 (50%:33.3%:16.7%)或1:1:1 (33.3%:33.3%:33.3%)或3:6:1 (30%:60%:10%)。
在一些實施例中，考慮的多酚化合物包含以下，且在一些實施例中選自由以下組成之群：迷迭香酸；結合之兒茶素，諸如EGCG、ECG、表沒食子兒茶素(epigallocatechin)等；木蝴蝶素(Oroxylin)、番鬱金黃素(Kaempferol)、金雀異黃酮(genistein)、槲皮素(quercetin)、紫鉚因(Butein)、葉黃酮(Luteolin)、金黃素(chrysin)、芹菜素(Apigenin)、薑黃素(curcumin)、白藜蘆醇(resveratrol)、辣椒鹼(capsaicin)、球腺糖A (glomeratose A)、6-薑烯酚(6-shogaol)、薑油(gingerol)、小蘖鹼(berberine)、胡椒鹼(Piperine)或其組合。
揭示藉由調節HMGB1維持免疫恆定性之組合物，其包含一或多種多醣及一或多種多酚化合物之組合，其中該組合物藉由抑制HMGB1釋放或抵消其作用來調節HMGB1，如藉由阻斷細胞質易位或藉由阻斷囊泡介導之釋放靶向HMGB1主動或被動釋放；或抑制細胞核中之分子內二硫鍵形成；或在釋放時直接靶向HMGB1且中和其作用；或阻斷HMGB1模式識別受體，諸如鐸樣受體(TLR)-2/4/7/9，及後期糖基化終產物受體(RAGE)或抑制其信號轉導；或改變生理化學微環境，且防止HMGB1四聚體形成且干擾HMGB1對TLR及RAGE之結合親和力；或防止HMGB1之集群形成或自締合。 圖 1展示蘆薈基底組合物(此圖中之UP 360)藉由轉移傾斜點-HMGB1來維持免疫功能之恆定性的新穎性。
揭示用於治療、管理、促進調節哺乳動物之免疫恆定性之方法，其包括投與有效量之0.01 mg/kg至500 mg/kg該哺乳動物體重之組合物。在一些實施例中，考慮之組合物包含富集一或多種多醣之蘆薈萃取物；富集一或多種多醣之 Poria萃取物；及富集一或多種多酚化合物之迷迭香萃取物之組合。
公開及正在進行之研究已證實，可減弱細胞外HMGB1積聚之試劑藉由增強針對空氣污染物、細菌及病毒感染之先天性免疫性及經由改良巨噬細胞功能抑制發炎反應而有效改良呼吸功能。該模型需要使小鼠經歷高氧，其常用於COVID-19患者及肺感染之氧氣療法期間，且測試潛在處理以確定其是否可用作藉由改良先天性免疫性及呼吸功能且抑制細胞外HMGB1在氣道中且在循環中之積聚來達成較佳臨床結果，包括存活率之有效工具。當前考慮之主題揭示了包含多醣及多酚之獨特蘆薈基底組合物，其在此等模型中藉由轉移HMGB1來改良先天性免疫性且緩解損壞之呼吸功能(實例12至17)。如實例51中所詳述，對於暴露於高氧且用綠膿桿菌(pseudomonas aeruginosa)挑戰之動物，補充蘆薈基底組合物顯著減少氣道中之細菌負荷，且降低死亡率，指示其有益施用抵消高氧及微生物感染之作用。
考慮之主題藉由包含多醣及多酚之蘆薈基底組合物，藉由靶向HMGB1至血流之分泌，一個免疫反應中之天然後期事件，而調節免疫恆定性。活體外，用蘆薈基底組合物的個別組分處理高氧巨噬細胞，且展示減少HMGB1分泌(實例12)。因為氧化應激為HMGB1自細胞核釋放之最強力誘導因子之一，吾人證實蘆薈組合物及其個別組分展示UVA及UVB誘導之人類角質細胞中活性含氧物(ROS)減少(實例13-14)，且保護人類纖維母細胞中之過氧化氫誘導之DNA損傷(實例15)。此等細胞分析展示自藥用植物萃取之此等生物活性化合物藉由抑制自由基產生而降低HMGB1含量及修復DNA損傷的統計學上顯著之影響，表明其標準化調配物對於涉及疾病病理學中所揭示之機制的病狀之增強結果。除顯著地及協同地降低LPS誘導之存活率研究中動物之死亡率以外(實例20至22)，UP360亦顯著增加高氧誘導之綠膿桿菌感染小鼠中動物之存活率且減少氣道中之細菌負荷(實例51)。關鍵促炎性細胞介素及趨化因子，諸如IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10、CRP及CINC-3以及HMGB1 (實例12至31)已由活體內分析評價，且由於免疫恆定性中轉移傾斜點HMGB1，相比於媒劑處理組，用包含多醣及多酚之蘆薈基底組合物UP360處理之動物此等生物標記物統計學上顯著減少。
如考慮之主題之內文所述在多個活體內研究(諸如LPS誘導之敗血症模型、高氧誘導之綠膿桿菌感染小鼠存活模型及急性肺損傷模型)中評估客觀處理及反應效果(實例18至31，51)。此考慮之主題之實例中所描繪之資料展示當在敗血症高氧誘導之綠膿桿菌感染小鼠或急性肺損傷研究個體中經口投與時，蘆薈基底組合物顯著的免疫恆定性作用。來自血清、支氣管肺泡灌洗液(BAL)及肺部勻漿之生物標記物含量的此等顯著變化以及BAL中總蛋白質之減少展現藉由轉移HMGB1-傾斜點提高免疫恆定性，且此等發現稍後由組織學檢查證實。對於用蘆薈基底組合物處理之動物，觀測到肺損傷及肺水腫之整體嚴重程度的統計學上顯著降低。當在LPS誘導之敗血症模型中評價調配含有兩種不同類別之天然活性化合物：免疫刺激多醣及免疫抑制多酚之蘆薈基底植物萃取物的優點時，亦觀測到出人意料之協同效應(實例22)。此當前考慮之主題之資料表明，由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物藉由轉移傾斜點-HMGB1幫助維持免疫恆定性。因此，可在需要平衡的免疫反應以保護呼吸及肺功能免於敗血症及/或呼吸系統之急性及/或慢性損傷的空氣污染、季節性流感及/或病毒及細菌感染時利用蘆薈基底組合物。
共同地，來自此研究之資料展示蘆薈基底組合物，其中此等考慮之組合物中之一者在本文中可稱為UP360，具有出人意料的協同活性，藉由抵消HMGB1引起氣管內LPS誘導之急性肺損傷顯著減輕，如指示疾病病變之關鍵生物標記物所證明(實例23至29)。已知直接將LPS裝入肺中經由肺泡巨噬細胞釋放大量HMGB1活化固有先天性免疫反應，使得初級細胞介素，諸如TNF-α、IL-1β及IL-6，以及發炎性蛋白質CRP之產生增加。此等細胞介素可單獨或協同造成顯著肺部病變，觸發對疾病病變有害的細胞介素及趨化因子級聯活化。舉例而言，LPS誘導之急性肺損傷中，在急性發炎反應時，趨化性細胞介素誘導之嗜中性白血球化學吸引因子(CINC-3)在嗜中性白血球募集至肺方面發揮重要作用。抑制HMGB1，免疫恆定性之關鍵傾斜點，以控制涉及肺中急性發炎反應之此等主要細胞介素及趨化性因子，在細胞介素風暴干預及緩解急性呼吸窘迫症候群(ARDS)之嚴重程度方面具有顯著臨床相關性。
蛋白質及/或纖維蛋白滲漏進入間質空間為肺水腫中之關鍵組分，其中分泌物增加為呼吸系統疾病嚴重程度之指示標誌。用由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物處理減少來自支氣管肺泡灌洗液(BAL)之總蛋白質，指示其在緩解肺部病變方面的顯著性(實例28)。來自血清、BAL及勻漿之生物標記物的此等顯著變化已證明投與蘆薈基底多醣及多酚組合物的策略引起肺損傷及肺水腫之整體嚴重程度統計學上顯著之降低，其已藉由組織病理學評價證實。基於本文所描繪之細胞介素及組織病理學資料，蘆薈基底組合物，在此情況下UP360，調節免疫恆定性傾斜點，從而抑制細胞介素風暴及緩解急性發炎性肺損傷嚴重程度。
吾人使小鼠暴露於D-半乳糖以誘導免疫老化表型，用兩種濃度之包含多醣及多酚之蘆薈基底組合物(UP360)處理小鼠，且隨後引入作為免疫挑戰之流感疫苗且在多種分析中量測免疫功能，以確定考慮之蘆薈基底組合物是否保護免疫器官且維持免疫系統之恆定性(實例32)。正常對照組及兩個UP360+D-gal處理組之胸腺指數顯著高於D-gal組，其表明此免疫器官藉由蘆薈基底組合物保護免於老化(實例33及35)。儘管與D-gal組相比僅正常對照組具有顯著較高的脾臟指數，但UP360+D-gal處理之動物展示保護脾臟免於氧化應激之正面趨勢(實例34)。
吾人發現免疫接種組間體液免疫性之顯著變化。與D-gal組相比，UP360+D-gal組具有增加之血清IgA抗體(實例36)。血清中IgA之此含量增加指示黏膜由於UP360處理而實現較高水準之免疫保護。
在量測來自不同組之全血中之白血球且表示變化為細胞群體之百分比時，吾人發現免疫接種小鼠組間的重要差異(實例37至42)。與任何其他免疫接種組相比CD45+細胞(所有白血球)在D-gal組中占活細胞之更高百分比。相較於免疫接種僅D-gal組，免疫接種UP360+D-gal組中CD3+ T細胞、CD45+輔助T細胞、NKp46+自然殺手細胞及TCRγδ+ γ δ T細胞全部增加。此等資料表明，由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物UP360幫助擴增免疫細胞群體，引起作為免疫恆定性之關鍵介體的先天性及後天性免疫細胞之較高百分比。
表示為總細胞/μL全血，吾人發現非免疫接種小鼠組之間存在顯著差異(實例43-48)。與免疫功能不全僅D-gal組相比，400 mg/kg UP360+D-gal組增加CD3+ T細胞、CD4+輔助T細胞、CD8+細胞毒性T細胞、NKp46+自然殺手細胞、TCRγδ+ γ δ T細胞及CD4+TCRγδ+輔助γ δ T細胞。此等資料暗示由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物UP360激活不活化免疫系統且引起免疫細胞群體擴增，增加非免疫接種小鼠中的免疫「就緒度」。
自然殺手細胞之活化及擴增為保持免疫恆定性之關鍵免疫調節模式。自然殺手細胞為已知在無任何激活或先前活化之情況下迅速回應於廣泛多種病理性挑戰；空氣污染物；病毒、微生物及真菌感染；及細胞氧化及激素失調(distress)之先天性免疫系統的重要組分。自然殺手細胞進行細胞完整性的監視以偵測細胞表面分子之變化以部署其細胞毒性效應機制。自然殺手(NK)細胞充當細胞毒性淋巴球且充當免疫調節細胞介素之生產者。在刺激之後，NK細胞產生大量細胞介素，主要干擾素-γ (IFN-γ)及腫瘤壞死因子(TNF)。由NK細胞產生之此等細胞介素及其他者在早期免疫反應期間具有直接作用且為經由T細胞及B細胞介導之後續後天性免疫反應之重要調節劑。由於經口投與考慮之由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物(UP360)，當前考慮之主題中NK細胞之顯著增加(實例41及45)為考慮之主題對先天性免疫性調節具有顯著影響之明顯指示標誌，表明其即時且有效之免疫觸發活性涉及為免疫恆定性打下基礎。
包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物之人類臨床試驗亦展現在免疫挑戰之前及之後，經處理之群體中特定免疫細胞之富集(實例52)。健康且中年個體每日補充UP360或安慰劑28天，隨後其免疫系統用流感疫苗挑戰。其繼續再服用UP360 28天，其中免疫細胞量測係在基線、28天處理之後及56天處理之後(疫苗接種後28天)進行。發現第56天γδ (Gamma delta) T細胞群體顯著增加(疫苗接種後28天)，高於基線含量及第28天之含量。與安慰劑組相比，UP360處理組在第56天具有顯著較高的循環γδ (Gamma delta) T細胞，且與安慰劑組相比，UP360處理組第0天-第56天及第28天-第56天之γδ (Gamma delta) T細胞數目變化顯著較高。來自此臨床試驗初步資料之可能最顯著主要結果為此等γ δ T細胞中觀測到之變化。補充過程中，給與由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物的個體展示自第28天至第56天此等T細胞之含量逐漸增加，其中蘆薈基底組合物在投與後第28天及第56天分別展示21.5%及24.5% TCRγδ+細胞群體百分比增加。相比之下，在相同時間範圍安慰劑組展示此等細胞群體減少，其中在投與後第28天及第56天分別觀測到TCRγδ+細胞百分比減少10.5%及5.6%。相比於安慰劑，接受由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物的個體在處理投與後第28天及第56天分別展示TCRγδ+細胞群體百分比增加23.5%及38.9%。此等發現指示，包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物能夠增加γδ (Gamma delta) T細胞群體，一種在針對病原體之第一道防線中起作用的細胞類型。
基本上，當前考慮之主題之免疫調節、監視及恆定性活性已經藉由已知用於免疫調節、促進免疫監視及免疫恆定性之γδ (Gamma delta) T細胞中所觀測到之誘導水準(臨床及臨床前研究兩者中)來證實。γδ T細胞為主要存在於體內許多入口，包括腸及肺之獨特T細胞亞群，其中其在其發育早期遷移且作為固有細胞存留。歸因於其策略解剖學位置(胃腸道及呼吸系統之黏膜內層)，γδ T細胞基於其先天樣反應提供第一道防線，其直接殺滅受感染細胞，募集其他免疫細胞，活化吞噬作用及限制病原體或污染物易位至全身性隔室。已知此等細胞經歷快速群體擴增且提供對二級挑戰之病原體特異性保護。其在腸及呼吸道中之理想位置亦有助於維持腸及呼吸道上皮完整性。一般而言，γδ T細胞之生理作用包括針對細胞外及細胞內病原體或污染物之保護性免疫性、監視、先天性及後天性免疫反應之調節、組織癒合及上皮細胞維持及生理器官功能之調節。γδ T細胞與自然殺手(NK)細胞共有一些特徵，如兩者均：通常被視為先天性免疫性之組分，識別轉化/失調細胞，在抗病毒保護中起顯著作用，促進下游後天性免疫反應且為強效溶胞淋巴球。另外，γδ T細胞提供抗原呈現細胞之作用(Ribot等人，2021; Bonneville等人，2010)。當前考慮之主題中，此等快速反應免疫細胞(γδ T細胞及NK細胞)已由包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物誘導(實例42及48)，得到該組合物產生之此等T細胞實現免疫調節、監視及恆定性之增強特徵。
吾人檢驗抗氧化酶及生物標記物以便檢驗D-半乳糖誘導之免疫老化模型中的抗氧化路徑。藉由D-gal模型誘導之衰老表型係基於後期糖基化終產物增加引起氧化應激及免疫器官損傷，類似於將存在於大齡動物中之水準(Azman KF，2019)。增加抗氧化路徑將對抗氧化應激之有害作用。吾人發現相比於單獨D-gal，來自免疫接種UP360 (兩種濃度) +D-gal組之小鼠血清中的超氧化歧化酶(SOD)增加(實例49)。此指示包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物增強抗氧化路徑，其使動物能夠比未處理之衰老動物更佳地中和自由基。
在考慮之主題中，吾人亦檢查來自免疫接種組之動物之脾臟中的蛋白質含量。脾臟為免疫系統之主要器官之一。其含有高含量白血球且控制血液中免疫細胞類型之含量。吾人量測Nrf2，一種涉及回應於發炎及長期氧化應激活化抗氧化路徑之轉錄因子，且發現與單獨D-gal相比，來自UP360+D-gal組之脾臟勻漿之Nrf2顯著增加(實例50)。
總而言之，在D-半乳糖誘導之免疫老化模型中，吾人見到用包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物處理之動物中，指示免疫系統激活及活化增加的免疫細胞群體、抗氧化應激路徑及免疫器官保護之顯著變化，其展現正常小鼠之表型之逆轉。免疫接種UP360+D-gal組中之胸腺指數、血清抗體、T細胞及自然殺手細胞及抗氧化因子比單獨D-gal高，指示UP360處理組中之免疫系統能夠比單獨D-gal組更佳地對疫苗接種作出反應。非免疫接種UP360+D-gal組中之胸腺指數、T細胞及自然殺手細胞高於單獨D-gal。此等資料指示，即使在未挑戰之免疫系統中，UP360亦激活及活化免疫系統，引起免疫細胞擴增。此等發現證明包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物能夠幫助在活躍感染期間活化及維持免疫系統之恆定性，及預防性地針對感染激活免疫系統。
組合蘆薈、poria及迷迭香酸萃取物，尤其已經富集特定組分之彼等萃取物之關鍵值藉由對獲自LPS誘導之存活研究及LPS挑戰之巨噬細胞的HMGB1及TNF-α分泌之資料使用常用方程式(考爾比氏方程式(Colby's equation))來評價及確認。藉由考爾比氏方法，在觀測值低於預期值(亦即降低死亡率、HMGB1及TNF-α分泌)時假定具有兩種或更多種材料之標準化調配物具有出人意料的協同作用，存在出人意料的抑制作用。在當前考慮之主題中，意欲證實包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物對降低死亡率具有出人意料的協同作用，及對HMGB1及TNF-α分泌具有出人意料的抑制作用。如實例20中所說明，自此等萃取物之組合兩種終點量測觀測到降低死亡率之出人意料的協同作用。在使用考慮之組合物處理之情況下發現的有益效果超過在給定比率下對其組分中之每一者觀測到的預測效果。僅蘆薈基底組合物在LPS挑戰6天之後達成死亡率降低之統計顯著性。事實上，在處理之後36小時，蘆薈基底組合物未觀測到動物死亡，而發現單獨投與組分(亦即，蘆薈、poria及迷迭香酸)中之每一者少數動物死亡。與個別組分相比，蘆薈基底組合物觀測到來自LPS挑戰之巨噬細胞之HMGB1及TNF-α分泌最低(實例16及17)，此事實亦成立。如在此考慮之主題之先前技術中所詳述，個別地，存在關於此等藥用植物之有益用途的報導，然而，據吾人所知，此為第一次此等藥用植物一起調配以產生包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物，從而產生出人意料的結果，諸如，敗血症動物之死亡率降低及抑制巨噬細胞HMGB1及TNF-α分泌。此等結果連同其他有利的先天性及後天性免疫反應，特定言之，在人類臨床研究中觀測到且記錄於此考慮之主題中的γ δ T細胞增加，賦予多醣及多酚組合物視需要導引宿主免疫反應之方向，以達成平衡之刺激及/或抑制活性，從而產生整體免疫恆定性之獨特身分。
在以上及以下描述中，闡述某些特定細節以便提供對本發明之各種實施例的透徹理解。然而，熟習此項技術者應理解，所考慮之主題可在無此等細節之情況下實踐。
在本說明書中，除非另外指明，否則任何濃度範圍、百分比範圍、比率範圍或整數範圍均理解為包括所述範圍內之任何整數值，且適當時包括其分數(諸如整數之十分之一及百分之一)。此外，除非另外指明，否則本文中所述之與諸如多醣次單元、大小或厚度之任何物理特徵相關之任何數字範圍應理解為包括所述範圍內之任何整數。如本文所用，除非另外指明，否則術語「約」及「基本上由……組成」意謂指示範圍、值或結構之±20%。應理解，如本文中所使用之術語「一(a/an)」係指「一或多個」所列舉之組分。替代物(例如，「及/或」)之使用應理解為意謂替代物之一者、兩者或其任何組合。除非上下文另外要求，否則在本說明書及申請專利範圍通篇中，字組「包含(comprise)」及其變化形式，諸如「包含(comprises)」及「包含(comprising)」以及同義術語，如「包括」及「具有」及其變體，應以開放性包括性意義解釋；即，解釋為「包括但不限於」。
在整個本說明書中提及「一個實施例」或「一實施例」意謂結合該實施例描述的特定特點、結構、組合物或特徵包括於本發明所考慮主題的至少一個實施例中。因此，片語「在一個實施例中」或「在一實施例中」在本說明書通篇中各處之出現未必皆指同一實施例。
術語「前藥」亦意欲包括任何共價鍵結的載劑，其當向哺乳動物個體投與此類前藥時，活體內釋放本發明之活性化合物。本發明化合物之前藥可藉由修飾本發明化合物中存在之官能基來製備，修飾方式為使得修飾在常規操縱中或在活體內裂解成本發明之母體化合物。前藥包括本發明化合物，其中羥基、胺基或巰基鍵結於任何基團，其當向哺乳動物個體投與本發明化合物之前藥時分別裂解形成游離羥基、游離胺基或游離巰基。前藥之實例包括本發明化合物中之胺官能基之醇或醯胺衍生物的乙酸鹽、甲酸鹽及苯甲酸鹽衍生物及其類似物。
「穩定化合物」及「穩定結構」意指足夠穩固，能經受住由反應混合物分離至有用純度且調配成有效治療劑的化合物。
「生物標記物」或「標記物」組分或化合物意指用於控制所考慮之組合物之品質、一致性、完整性、穩定性及/或生物功能的所揭示之植物、植物萃取物或2至3種植物萃取物組合之組合物中之一或多種原生化學組分或化合物。
「哺乳動物」包括人類及馴養動物，諸如實驗室動物或家養寵物(例如貓、犬、豬、牛、綿羊、山羊、馬、兔)及非馴養動物，諸如野生動物或其類似動物。
「視情況(optional/optionally)」意謂隨後描述之要素、組分、事件或情形可發生或可不發生，且該描述包括其中要素、組分、事件或情形發生之情況及其不發生之情況。舉例而言，「視情況經取代之芳基」意謂芳基可經取代或可未經取代且該描述包括經取代之芳基及無取代之芳基。
「醫藥學上或類藥劑營養品上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑」包括任何佐劑、載劑、賦形劑、滑動劑、甜味劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、增香劑、界面活性劑、濕潤劑、分散劑、懸浮劑、穩定劑、等張劑、溶劑、媒劑或乳化劑，其已經美國食品藥物管理局(the United States Food and Drug Administration)批准為可接受用於人類或馴養動物。
「醫藥學上或類藥劑營養品上可接受之鹽」包括酸加成鹽及鹼加成鹽。「醫藥學上或類藥劑營養品上可接受之酸加成鹽」係指保留游離鹼之生物學有效性及特性，合乎生物學或其他需要，且由以下形成之鹽：無機酸，諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及其類似酸；及有機酸，諸如乙酸、2,2-二氯乙酸、己二酸、海藻酸、抗壞血酸、天冬胺酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙醯胺基苯甲酸、樟腦酸、樟腦-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、碳酸、肉桂酸、檸檬酸、環己胺磺酸、十二基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羥基乙磺酸、甲酸、反丁烯二酸、半乳糖二酸、龍膽酸、葡糖庚酸、葡萄糖酸、葡糖醛酸、麩胺酸、戊二酸、2-側氧基-戊二酸、甘油磷酸、乙醇酸、馬尿酸、異丁酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、順丁烯二酸、蘋果酸、丙二酸、杏仁酸、甲磺酸、黏液酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、1-羥基-2-萘甲酸、菸鹼酸、油酸、乳清酸、草酸、棕櫚酸、雙羥萘酸、丙酸、焦麩胺酸、丙酮酸、水楊酸、4-胺基水楊酸、癸二酸、硬脂酸、丁二酸、酒石酸、硫氰酸、對甲苯磺酸、三氟乙酸、十一碳烯酸及其類似酸。
「醫藥學上或類藥劑營養品上可接受之鹼加成鹽」係指保留游離酸之生物學有效性及特性，合乎生物學或其他需要之鹽。此等鹽係由無機鹼或有機鹼與游離酸加成來製備。衍生自無機鹼之鹽包括鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、錳鹽、鋁鹽及其類似鹽。在某些實施例中，無機鹽為銨鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽或鎂鹽。衍生自有機鹼之鹽包括以下之鹽：一級胺、二級胺及三級胺；經取代之胺，包括天然存在之經取代之胺；環胺及鹼性離子交換樹脂，諸如氨、異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、二乙醇胺、乙醇胺、丹醇(deanol)、2二甲胺基乙醇、2二乙胺基乙醇、二環己胺、離胺酸、精胺酸、組胺酸、普魯卡因(procaine)、海卓胺(hydrabamine)、膽鹼、甜菜鹼、苄苯乙胺、苯乍生(benzathine)、乙二胺、葡糖胺、甲基還原葡糖胺、可可豆鹼、三乙醇胺、緩血酸胺、嘌呤、哌𠯤、哌啶、N乙基哌啶、多元胺樹脂及其類似物。尤其有用之有機鹼為異丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二環己胺、膽鹼及咖啡鹼。
結晶常常產生本發明化合物之溶劑合物。如本文所用，術語「溶劑合物」係指包含本發明化合物之一或多個分子與一或多個溶劑分子之聚集物。溶劑可為水，在此情況下溶劑合物可為水合物。或者，溶劑可為有機溶劑。因此，本發明所考慮之主題之化合物可以水合物，包括單水合物、二水合物、半水合物、倍半水合物、三水合物、四水合物及其類似物，以及相應溶合形式存在。本發明之化合物可為真正溶劑合物，而在其他情況下，本發明之化合物可僅保留偶然(adventitious)水或為水與一些偶然溶劑之混合物。
「醫藥組合物」或「類藥劑營養組合物」係指本發明化合物之調配物及此項技術中一般接受用於將生物活性化合物遞送至哺乳動物，例如人類之介質。舉例而言，本發明之醫藥組合物可經調配為或作為獨立組合物使用，或作為處方藥物、非處方(OTC)藥物、植物藥物、草藥藥品、天然藥品、順勢藥劑或由政府機構審查且批准之任何其他形式之健康護理產品中的組分。本發明之例示性類藥劑營養組合物可經調配為或作為獨立組合物使用，或作為食品、功能性食品、飲料、棒、食品調味劑、醫療食品、膳食補充劑或草藥產品中之營養或生物活性組分。此項技術中普遍認可之介質包括用於其的所有醫藥學上或類藥劑營養品上可接受之載劑、稀釋劑或其賦形劑。
如本文所用，「富集」係指相比於在萃取或其他製備之前植物材料或其他來源之重量中發現的一或多種活性化合物之量，植物萃取物或其他製劑的一或多種活性化合物增加至少兩倍至多約1000倍。在某些實施例中，在萃取或其他製備之前植物材料或其他來源之重量可為乾重、濕重或其組合。在一些所考慮實施例中，多醣個別地及/或組合地藉由溶劑沈澱、超過濾、酶消化、利用矽膠、XAD、HP20、LH20、C-18、氧化鋁、聚醯胺、CG161及尺寸排阻管柱樹脂之管柱層析富集。在一些所考慮實施例中，一或多種多酚個別地或組合地藉由溶劑分配、沈澱、蒸餾、蒸發、超過濾、利用矽膠、XAD、HP20、LH20、C-18、氧化鋁、聚醯胺、尺寸排阻管柱及CG161樹脂之管柱層析富集。
如本文所用，「主要活性成分」或「主要活性組分」係指植物萃取物或其他製劑中發現或植物萃取物或其他製劑中富集的一或多種活性化合物，其具有至少一種生物活性。在某些實施例中，富集萃取物之主要活性成分將為該萃取物富集之一或多種活性化合物。一般而言，相較於其他萃取物組分，一或多種主要活性組分將直接或間接賦予一或多種可量測生物活性或作用中之大部分(亦即，大於50%、30%或20%或10%)。在某些實施例中，主要活性成分可為萃取物之重量百分比次要組分(例如，萃取物中所含之組分之小於50%、25%或10%或5%或1%)但仍提供大部分所要生物活性。含有主要活性成分之本發明之任何組合物亦可含有可或可不有助於富集組合物之醫藥或類藥劑營養活性，但不達到主要活性組分之水準的次要活性成分，且單獨次要活性組分在不存在主要活性成分之情況下可無效。
「有效量」或「治療有效量」係指當向諸如人類之哺乳動物投與時足以使免疫恆定性之傾斜點轉移從而引起免疫功能改良的本發明之化合物或組合物之量，免疫功能改良包括以下中之任何一或多者：(1)刺激先天性免疫性；(2)增強後天性免疫性，尤其增加CD3+、CD4+、CD8+、NKp46+自然殺手細胞、TCRγδ+ γ δ T細胞及CD4+TCRγδ+輔助γ δ T細胞；(3)抑制慢性全身發炎及氧化應激；(4)保護免疫及肺細胞免於HMGB1誘導之細胞介素風暴損傷；(5)提供作為強效抗氧化劑之功能以減少氧化應激及增加超氧化歧化酶(SOD)及Nrf2；(6)維持先天性及後天性免疫反應之恆定性；(7)增強體液及細胞介導之免疫反應中巨噬細胞之吞噬細胞指數；(8)抑制轉錄因子，諸如NF-kB、NFAT及STAT3之活化；(9)抑制淋巴球活化及促炎性細胞介素基因及/或蛋白質表現(IL-2、iNOS、TNF-α、COX-2及IFN-γ)，(10)減少促炎性細胞介素，諸如HMGB1、IL-1β、IL-6及TNF-α之含量，(11)下調HMGB1、COX-2、NOS-2及NF-κB之基因及/或蛋白質表現；(12)藉由抑制磷脂酶A2及TXA2合成酶COX1、COX2、5-LOX、12-LOX、13-LOX活性來抑制類廿烷酸產生；(13)降低Th1及Th17細胞之反應；(14)降低ICAM及VCAM之表現，引起嗜中性白血球趨化性降低；(15)抑制MAPK磷酸化、黏附分子表現、信號轉導子及轉錄活化因子3 (STAT-3)；(16)活化轉錄因子NRF2及誘導血基質加氧酶1 (HO-1)；及抑制HMGB1自細胞核之易位；減少HMGB1單體之二聚體及三聚體形成。
藉由當前考慮之包含多醣及多酚之主題調節HMGB1可為抑制HMGB1釋放及/或抵消其作用。蘆薈基底組合物之HMGB1調節作用可為以下之結果：a)藉由阻斷細胞質易位及/或藉由阻斷囊泡介導之釋放靶向HMGB1主動及/或被動釋放；及/或抑制細胞核中之分子內二硫鍵形成；b)在釋放時直接靶向HMGB1且中和其作用；c)阻斷HMGB1模式識別受體，諸如鐸樣受體(TLR)-2/4/7/9，及後期糖基化終產物受體(RAGE)及/或抑制其信號轉導。抑制感染、發炎及細胞死亡中之氧化應激介導之HMGB1釋放可靶向：1)活化免疫細胞中HMGB1之CRM1介導之細胞核輸出；2)壞死中PARP1介導之HMGB1釋放；3)細胞凋亡中凋亡蛋白酶3/7介導之HMGB1釋放；4)自噬中ATG5介導之HMGB1釋放；5)細胞焦亡中PKR介導之HMGB1釋放；及6)嗜中性白血球死亡(netosis)中PAD4介導之HMGB1釋放。蘆薈基底組合物之作用亦可產生於防止HMGB1之集群形成或自締合，其可經由靶向諸如以下之特定生理化學因素達成：離子強度(增加離子強度降低HMGB1四聚體之強度)、pH (自締合之最高速率，pH 4.8)、金屬離子尤其鋅(包括低劑量Zn2+促進HMGB1四聚體形成)及氧化還原環境(在模擬細胞外環境之更氧化條件下，HMGB1主要以四聚體形式存在，而在更還原之條件下，諸如在細胞內環境中，存在更多二聚體物種)。藉由改變生理化學微環境，包含多醣及多酚之蘆薈基底組合物防止HMGB1四聚體形成且干擾HMGB1對TLR及RAGE之結合親和力。
由所考慮的蘆薈基底組合物所調節之免疫功能及肺部結構完整性及功能相關「生物標記物」，包括但不限於IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-17、GM-CSF、G-CSF、CCL2/3/5、IP-10、CXCL10、CRP、HMGB1、INF-α/β/γ、NF-κB、PDGF-BB、MIP-1α、D-二聚體、血管緊張素II、肌鈣蛋白、VEGF、PDGF、白蛋白、Nrf2、SOD、MDA、iNOS、COX1、COX2、LO5、LO12、LO13；該蘆薈基底組合物包括UP360，包含多醣及多酚，且在一些實施例中由多醣及多酚所組成，以用於在本發明中之UP360 (例如但不限於)與2至3種植物萃取物之各種組合下調節免疫恆定性。
如本文所用，「病毒」包括但不限於高病原性禽流感病毒(H5N1病毒株A)、A型流感病毒(H1N1)、A型肝炎病毒、B型肝炎病毒、C型肝炎病毒及D型肝炎病毒；SARS-CoV、SARS-CoV-2 (COVID-19) MERS-CoV (MERS)、呼吸道融合病毒(RSV)、腸病毒A71 (EV71)。
構成「治療有效量」之本發明之化合物、萃取物或組合物之量將視以下而變化：生物活性化合物或所治療病狀之生物標記物及該病狀之嚴重程度、投與方式、治療持續時間或待治療個體之年齡，但可由一般熟習此項技術者鑒於其自身知識及本發明常規地確定。在某些實施例中，「有效量」或「治療有效量」可展現為相對於哺乳動物體重之多醣及多酚組合物的數量(亦即0.005 mg/kg、0.01 mg/kg、或0.1 mg/kg、或1 mg/kg、或5 mg/kg、或10 mg/kg、或20 mg/kg、或50 mg/kg、或100 mg/kg、或200 mg/kg或500 mg/kg)。考慮到動物與人類總身體面積及體重的差異，人類等效日劑量可藉由利用FDA指南自動物研究中之「有效量」或「治療有效量」外推。
如本文所用，「膳食補充劑」為一種產品，其改良、促進、增加、管理、控制、維持、最佳化、修改、減少、抑制或防止恆定性、平衡、與天然狀態或生物過程相關之特定條件，或結構及功能完整性、失衡或損壞或抑制或過度刺激之生物功能或表型條件(亦即，不用於診斷、治療、緩和、治癒或預防疾病)。舉例而言，就免疫性而言，膳食補充劑可為用於調節、維持、管理、平衡、抑制或刺激後天性或先天性免疫性之任何組分，可作為對免疫刺激劑具有特異性之免疫佐劑，該等免疫刺激劑增強疫苗之功效，增強巨噬細胞之吞噬活性，提高NK細胞之自然殺滅活性，調節促炎性細胞介素之產生量，緩和發炎及組織損傷，誘導抗體之反應及產生，增強抗體依賴性細胞毒性，刺激T細胞增殖，促進免疫抑制調節T細胞產生，且保護免疫及肺細胞免於HMGB1誘導之細胞介素風暴損傷，且保護器官及/或組織免受氧化應激。在某些實施例中，膳食補充劑為特殊類別之食品、功能性食品、醫療食品、養分、營養產品且不為藥物。
如本文所用，「治療(treating/treatment)」係指治療患有所關注之疾病或病狀之哺乳動物，諸如人類中的所關注之疾病或病狀，且包括：(i)預防哺乳動物中出現該疾病或病狀，尤其當此類哺乳動物易患該病狀但尚未診斷為患有該病狀時；(ii)抑制該疾病或病狀，亦即遏制其發展；(iii)緩解或改善該疾病或病狀，亦即引起該疾病或病狀消退；或(iv)在不解決潛在疾病或病狀之情況下緩解由疾病或病狀引起之症狀(例如緩解咳嗽及發熱、緩解疼痛、減少發炎、減少肺水腫、緩和肺炎)；(v)平衡免疫恆定性調節或改變疾病或病狀之表型。
如本文所用，術語「疾病」及「病狀」可互換使用，或其不同之處可在於特定不適(malady)或病狀可不具有已知病原體(使得病因尚未研究出來)且因此其尚未被視為疾病而僅被視為不當病狀或症候群，其中一組或多或少特定之症狀已由臨床醫師鑑別出。疾病或病狀可為急性的，諸如病毒感染(SARS、COVID-19、MERS、肝炎、流感)或微生物感染；且可為慢性的，諸如由暴露於空氣污染及煙霧引起之肺損傷。來自恆定性失衡之損壞之免疫功能可引起疾病或病狀，或可使哺乳動物更易感傳染病、更易於細胞突變，或可直接或間接引起與來自病毒或微生物或空氣污染物之感染相關的更多繼發性器官及組織損傷。
如本文所用，「統計顯著性」係指在使用斯圖登氏t檢定(Students t-test)進行計算時0.05或更小的p值且指示所量測的特定事件或結果不大可能係偶然出現。
出於投與之目的，本發明所考慮之主題之化合物可作為原始成分投與或可調配為醫藥或類藥劑營養組合物。本發明所考慮之主題之醫藥或類藥劑營養組合物包含此所考慮之主題中所描述之結構的化合物及醫藥學上或類藥劑營養品上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。本文所述之結構的化合物以可有效治療所關注之特定疾病或病狀的量存在於組合物中，亦即，以一般足以促進先天性或後天性免疫性或免疫恆定性或用於本文所述之其他相關適應症中之任一者，且一般對患者具有可接受之毒性及/或安全概況的量存在於組合物中。
可經由投與用於提供類似效用之藥劑的公認模式中之任一者進行以純形式或以適當醫藥或類藥劑營養組合物形式投與本發明之化合物或組合物或其醫藥學上或類藥劑營養品上可接受之鹽。本發明之醫藥或類藥劑營養組合物可藉由組合本發明化合物與適當醫藥學上或類藥劑營養品上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑製備，且可調配成固體、半固體、液體或氣體形式之製劑，諸如錠劑、膠囊、散劑、粒劑、軟凝膠、軟糖、軟膏、溶液、飲料、栓劑、注射劑、吸入劑、凝膠、乳膏、乳劑、酊劑、小藥囊劑、即用型飲料、遮罩、微球體及霧劑。投與此類醫藥或類藥劑營養組合物之典型途徑包括經口、局部、經皮、吸入、非經腸、舌下、經頰、經直腸、經陰道或鼻內。如本文所用，術語非經腸包括皮下注射、靜脈內、肌肉內、胸骨內注射或輸注技術。在所考慮之實施例中，組合物投與選自包含以下之群：經口投與、局部投與、栓劑投與、皮內投與、胃內投與、肌肉內投與、腹膜內投與及靜脈內投與。
調配本發明之醫藥或類藥劑營養組合物以便允許其中所含之活性成分在向患者投與組合物時為生物可用的。將向個體或患者或哺乳動物投與之組合物呈一或多個劑量單元之形式，其中例如錠劑可為單一劑量單元，且呈霧劑形式之本發明之化合物或萃取物或2至3種植物萃取物的組合物之容器可容納複數個劑量單元。製備此類劑型之實際方法對熟習此項技術者為已知的或將顯而易見；例如參見Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第20版(Philadelphia College of Pharmacy and Science, 2000)。在任何情況下，待投與之組合物將含有治療有效量之本發明化合物或其醫藥學上或類藥劑營養品上可接受之鹽，以用於根據此考慮之主題之教示內容治療所關注之疾病或病狀。
本發明之醫藥或類藥劑營養組合物的組成，其中活性劑、佐劑、賦形劑或載劑係選自以下中之一或多者：大麻( Cannabis sativa)油或萃取物或CBD或THC、薑黃萃取物或薑黃素、欖仁萃取物、柳樹皮萃取物、南非鉤麻根萃取物、辣椒粉萃取物或辣椒鹼、花椒皮萃取物、蔓綠絨皮萃取物、蛇麻子萃取物、乳香(Boswellia)萃取物、玫瑰果萃取物、綠茶萃取物、槐(Sophora)萃取物、薄荷(Mentha)或胡椒薄荷(Peppermint)萃取物、薑或黑薑萃取物、綠茶或葡萄籽多酚、ω-3及/或ω-6脂肪酸、磷蝦油、γ-次亞麻油酸、柑橘類生物類黃酮、針葉櫻桃(Acerola)濃縮物、還原蝦紅素(astaxanthin)、花旗參、亞洲人參、接骨木果、大蒜萃取物、蒜油、紫花馬藺菊(echinacea)萃取物、龍舌蘭花蜜、桉油、抗壞血酸、碧蘿芷(pycnogenol)、維生素C、維生素D、維生素E、維生素K、維生素B、維生素A、L-離胺酸、鈣、錳、鋅、礦物質胺基酸螯合劑、胺基酸、硼及甘胺酸硼、二氧化矽、益生菌、樟腦、薄荷醇、基於鈣之鹽、二氧化矽、組胺酸、葡糖酸銅、CMC、β-環糊精、纖維素、右旋糖、生理食鹽水、水、油、鯊魚及牛軟骨。
本發明之醫藥或類藥劑營養組合物可呈固體或液體形式。在一個態樣中，一或多種載劑為微粒，使得組合物例如呈錠劑形式或呈散劑形式。一或多種載劑可為液體，並且組合物為例如經口糖漿、可注射液體或可用於例如吸入投與之霧劑。
當意欲用於經口投與時，醫藥或類藥劑營養組合物呈固體或液體形式，其中半固體、半液體、懸浮液及凝膠形式包括在本文視為固體或液體之形式內。
作為用於經口投與之固體組合物，醫藥或類藥劑營養組合物可調配成散劑、粒劑、壓縮錠劑、丸劑、膠囊、橡皮糖、軟糖、軟凝膠、小藥囊劑、粉片、棒或類似形式。此類固體組合物將通常含有一或多種惰性稀釋劑或可食用載劑。另外，可存在以下中之一或多者：黏合劑，諸如羧基甲基纖維素、乙基纖維素、環糊精、微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑，諸如澱粉、乳糖或糊精；崩解劑，諸如海藻酸、海藻酸鈉、澱粉羥基乙酸鈉、玉米澱粉及其類似物；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂或Sterotex；滑動劑，諸如膠態二氧化矽；甜味劑，諸如蔗糖或糖精；調味劑，諸如胡椒薄荷、水楊酸甲酯或橙味調味劑；及著色劑。
當醫藥或類藥劑營養組合物呈膠囊，例如明膠膠囊形式時，除以上類型之材料以外，其可含有諸如聚乙二醇或油之液體載劑。
醫藥或類藥劑營養組合物可呈液體形式，例如酏劑、酊劑、糖漿、溶液、乳液或懸浮液。舉兩個例子，液體可用於經口投與或用於藉由注射遞送。當意欲用於經口投與時，有用組合物除本發明化合物之外亦含有甜味劑、防腐劑、乳化劑、染料/著色劑及增香劑中之一或多者。在意欲藉由注射投與之組合物中，可包括界面活性劑、防腐劑、濕潤劑、分散劑、懸浮劑、緩衝劑、穩定劑及等張劑中之一或多者。
本發明之液體醫藥或類藥劑營養組合物，無論其為溶液、懸浮液或其他類似形式，均可包括以下佐劑中之一或多者：無菌稀釋劑，諸如注射用水，生理食鹽水溶液，諸如生理鹽水，林格氏溶液(Ringer's solution)，等張氯化鈉，不揮發性油，諸如可充當溶劑或懸浮介質之合成單酸甘油酯或二酸甘油酯，聚乙二醇，丙三醇，丙二醇或其他溶劑；抗細菌劑，諸如苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，諸如乙二胺四乙酸；緩衝劑，諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；及張力調節劑，諸如氯化鈉或右旋糖。非經腸製劑可封裝於由玻璃或塑膠製成的安瓿、拋棄式注射器或多劑量小瓶中。生理鹽水係通常有用之佐劑。可注射醫藥或類藥劑營養組合物為無菌的。
意欲用於非經腸或經口投與之本發明之液體醫藥或類藥劑營養組合物應含有一定量之本發明化合物，使得將獲得適合劑量。
本發明之醫藥或類藥劑營養組合物可意欲用於局部投與，在此情況下載劑可適合地包含溶液、乳液、乳膏、乳劑、軟膏或凝膠基質。舉例而言，基質可包含以下中之一或多者：石蠟脂、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蠟、礦物油、稀釋劑，諸如水及醇，及乳化劑及穩定劑。增稠劑可存在於用於局部投與之醫藥或類藥劑營養組合物中。若意欲用於經皮投與，則組合物可包括經皮貼片或離子導入療法裝置。
本發明之醫藥或類藥劑營養組合物可意欲用於以例如栓劑形式經直腸投與，該栓劑將在直腸中熔融且釋放藥物。用於經直腸投與之組合物可含有油性基質作為適合的無刺激性賦形劑。此類基質包括羊毛脂、可可脂及聚乙二醇。
本發明之醫藥或類藥劑營養組合物可包括各種材料，其改變固體或液體劑量單元之物理形式。舉例而言，組合物可包括圍繞活性成分形成包覆殼層之材料。形成包覆殼層之材料通常為惰性的，且可選自例如糖、蟲膠及其他腸溶包覆劑。或者，活性成分可裝入明膠膠囊中。
呈固體或液體形式之本發明之醫藥或類藥劑營養組合物可包括結合於本發明化合物且藉此幫助遞送化合物之藥劑。可起此能力作用之適合藥劑包括單株或多株抗體、蛋白質或脂質體。
呈固體或液體形式的本發明之醫藥或類藥劑營養組合物可包括減小粒子之大小以例如提高生物可用性。在存在或不存在賦形劑之情況下，組合物中之粉末、顆粒、粒子、微球體或其類似物的大小可為巨型(例如，眼睛可見或至少100 µm大小)、微米(例如，可在約100 µm至約100 nm大小範圍內)、奈米(例如，大小可不超過100 nm)及其間之任何大小或其任何組合，以改良大小及容積密度。
本發明之醫藥或類藥劑營養組合物可由可作為氣溶膠投與之劑量單元組成。術語氣溶膠用於表示範圍介於膠態性質之彼等系統至由加壓封裝組成之系統的多種系統。遞送可藉由液化或壓縮氣體或藉由分配活性成分的適合之泵系統。本發明化合物之氣溶膠可以單相、雙相或三相系統形式遞送以遞送一或多種活性成分。氣溶膠之遞送包括必需的容器、活化劑、閥、次容器及其類似物，其可共同形成套組。熟習此項技術者無需過度實驗即可確定一或多種最適當氣溶膠。
本發明之醫藥或類藥劑營養組合物可藉由醫藥或類藥劑營養技術中熟知之方法製備。舉例而言，意欲藉由注射投與之醫藥或類藥劑營養組合物可藉由將本發明化合物與無菌蒸餾去離子水組合以便形成溶液來製備。可添加界面活性劑以促進形成均勻溶液或懸浮液。界面活性劑為與本發明化合物非共價相互作用以促進化合物溶解或均質懸浮於水性遞送系統中之化合物。
本發明化合物或其醫藥學上或類藥劑營養品上可接受之鹽以治療有效量投與，該治療有效量將視包括以下的多種因素而變化：所用特定化合物之活性；化合物之代謝穩定性及作用時長；患者之年齡、體重、一般健康狀況、性別及飲食；投與模式及時間；排泄速率；藥物組合；特定病症或病狀之嚴重程度；及經受療法之個體。
本發明化合物或其醫藥學上或類藥劑營養品上可接受之衍生物亦可與食品、水及一或多種其他治療劑之投與同時、在其之前或之後投與。此類組合療法包括投與含有本發明之化合物或萃取物或具有2至3種植物萃取物之組合物及一或多種額外活性劑的單一醫藥或類藥劑營養劑量調配物，以及以其自身個別醫藥或類藥劑營養劑量調配物形式投與本發明之化合物或萃取物或具有2至3種植物萃取物之組合物及各活性劑。舉例而言，本發明之化合物或萃取物或具有2至3種植物萃取物之組合物及另一活性劑可以單一經口劑量組合物，諸如錠劑或膠囊一起向患者投與，或各試劑可以個別經口劑量調配物形式投與。當使用個別劑量調配物時，本發明化合物及一或多種額外活性劑可在基本上相同的時間，亦即同時投與，或在分別錯開之時間，亦即依序投與；組合療法應理解為包括所有此等方案。
應理解，在本說明書中，所描繪之式之取代基或變數之組合僅當此類作用產生穩定化合物時才容許。
熟習此項技術者亦應瞭解，在本文所描述之製程中，中間化合物之官能基可能需要由適合的保護基保護。此類官能基包括羥基、胺基、巰基及羧酸。適用於羥基之保護基包括三烷基矽烷基或二芳基烷基矽烷基(例如三級丁基二甲基矽烷基、三級丁基二苯基矽烷基或三甲基矽基)、四氫哌喃基、苯甲基及其類似基團。適用於胺基、甲脒基及胍基的保護基包括三級丁氧羰基、苯甲氧羰基及其類似基團。適用於巰基的保護基包括C(O) R'' (其中R"為烷基、芳基或芳基烷基)、對甲氧基苯甲基、三苯甲基及其類似基團。適用於羧酸之保護基包括烷基、芳基或芳基烷基酯。保護基可根據熟習此項技術者已知且如本文所描述之標準技術添加或移除。保護基之使用詳細描述於Green, T.W.及P.G.M. Wutz, Protective Groups in Organic Synthesis (1999), 第3版, Wiley中。如熟習此項技術者將瞭解，保護基亦可為聚合物樹脂，諸如王樹脂(Wang resin)、林克樹脂(Rink resin)或2-氯三苯甲基氯樹脂。
熟習此項技術者亦應瞭解，儘管此考慮之主題之化合物之此類受保護衍生物可能本身不具有藥理學活性，但其可投與哺乳動物且隨後在體內代謝而形成具有藥理學活性之本發明化合物。因此，此類衍生物可描述為「前藥」。此考慮之主題之化合物之所有前藥包括在本發明之範疇內。
此外，以游離鹼或酸形式存在的本發明之所有化合物或萃取物可藉由熟習此項技術者已知之方法用適當無機或有機鹼或酸處理而轉化成其醫藥學上或類藥劑營養品上可接受之鹽。本發明化合物之鹽可藉由標準技術轉化為其游離鹼或酸形式。
所考慮之化合物、藥用組合物及組合物可包含或另外包含至少一種活性成分或由至少一種活性成分組成。在一些實施例中，至少一種生物活性成分可包含以下或由以下組成：植物粉末或植物萃取物或其類似物。
在前述實施例中之任一者中，包含萃取物或化合物之混合物的組合物可以特定重量比混合。舉例而言，可以1:2重量比摻合分別含有多醣的蘆薈葉凝膠粉末及含有迷迭香酸之迷迭香萃取物。在某些實施例中，兩種本發明萃取物或化合物之重量比在約0.5:5至約5:0.5範圍內。當使用超過兩種萃取物或化合物(例如三種、四種、五種)時，類似範圍適用。實例10中所展現之例示性比率包括0.5:1、0.5:2、0.5:3、0.5:4、0.5:5、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、2:1、2:2、2:3、2:4、2:5、3:1、3:2、3:3、3:4、3:5、4:1、4:2、4:3、4:4、4:5、5:1、5:2、5:3、5:4、5:5、1:0.5、2:0.5、3:0.5、4:0.5或5:0.5。在某些實施例中，所揭示之蘆薈及/或Poria及/或迷迭香之個別萃取物摻合至組合物中，其中3種個別萃取物在實例9及10中分別展現為1:1:1、2:1:1、3:1:1、4:1:1、5:1:1、1:2:1、1:3:1、1:4:1、1:5:1、1:1:2、1:1:3、1:1:4、1:1:5、1:2:3、1:2:4、1:2:5、1:2:6、1:2:6、1:2:8、1:2:9或1:2:10等之重量比。在其他實施例中，所揭示之蘆薈、Poria及迷迭香之個別萃取物已組合至考慮之組合物中，其稱為UP360，摻合比率例如但不限於3:6:1或1:1:1或3:2:1蘆薈: Poria:迷迭香。
在其他實施例中，包含多醣及多酚，例如但不限於UP360，呈2至3種蘆薈、poria及迷迭香之個別萃取物之各種組合的彼等萃取物的此類組合在活體外及/或離體及/或活體內模型上評價優勢/缺點及所感知生物功能之出人意料的協同作用/拮抗作用及免疫功能之恆定性之有效調節及細胞介素風暴、氧化應激及敗血症所引起之器官損傷的緩和。基於歸因於各萃取物中化學組分之多樣性及來自各萃取物中不同類型之生物活性化合物的不同作用機制及組合物中天然化合物之ADME的潛在增強的活體外及/或離體及/或活體內模型上量測到之出人意料的協同作用，選擇具有特定摻合比率的蘆薈或Poria或白樺茸(Chaga)或迷迭香之個別萃取物之最佳組合物，以最大化生物輸出。
在前述實施例中之任一者中，包含萃取物或化合物之混合物的組合物可以一定百分比水準或比率存在。在某些實施例中，包含蘆薈全葉或內葉凝膠粉末(實例3及4)及/或迷迭香萃取物(實例6)之組合物可包括0.1%至49.9%、或約2%至約40%、或約0.5%至約10%之多醣、0.1%至99.9%、或約1%至約10%、或約5%至約50%之迷迭香酸或其組合。在某些實施例中，包含真蘆薈凝膠粉末(實例3及4)或Poria水性萃取物(實例5)或迷迭香萃取物(實例6)之組合物可包括約0.01%至約99.9%多醣或包括至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%或90%迷迭香酸。
在某些實例(實例9)中，本發明之組合物可經調配以進一步包含醫藥學上或類藥劑營養品上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑，其中醫藥或類藥劑營養調配物包含約0.05重量百分比(重量%)、或0.5重量百分比(重量%)、或5%、或25%至約95重量%之萃取物混合物之活性或主要活性成分。在其他實施例(實例9)中，醫藥或類藥劑營養調配物包含約0.05重量百分比(重量%)至約90重量%多醣、約0.5重量%至約80重量%迷迭香酸、約0.5重量%至約75重量%總多酚、約0.5重量%至約70重量%、約0.5重量%至約50重量%、約1.0重量%至約40重量%、約1.0重量%至約20重量%、約1.0重量%至約10重量%、約3.0重量%至約9.0重量%、約5.0重量%至約10重量%、約3.0重量%至約6重量%萃取物混合物中之主要活性成分，或其類似者。在前述調配物中之任一者中，本發明之組合物調配為錠劑、硬膠囊、軟凝膠膠囊、散劑或粒劑。
本文亦考慮所揭示之化合物之藥劑。此類產物可例如由所投與化合物之氧化、還原、水解、醯胺化、酯化及其類似作用產生，主要由於酶過程產生。因此，考慮之化合物為藉由包含向哺乳動物投與考慮之化合物或組合物持續足以產生其代謝產物之時段的過程產生的化合物。此類產物通常藉由以可偵測劑量向動物，諸如大鼠、小鼠、天竺鼠、狗、貓、豬、綿羊、馬、猴或人類投與放射性標記或非放射性標記之本發明化合物，允許足以發生代謝之時間，且隨後自尿液、血液或其他生物樣品分離其轉化產物來鑑別。
所考慮之化合物、藥用組合物及組合物可包含或另外包含以下或由以下組成：至少一種醫藥學上或類藥劑營養品上或化妝品上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。如本文所用，片語「醫藥學上或類藥劑營養品上或化妝品上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑」包括任何佐劑、載劑、賦形劑、滑動劑、甜味劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、增香劑、界面活性劑、濕潤劑、分散劑、懸浮劑、穩定劑、等張劑、溶劑或乳化劑，其已經美國食品藥物管理局批准為可接受用於人類或馴養動物。所考慮之化合物、藥用組合物及組合物可包含或另外包含以下或由以下組成：至少一種醫藥學上或類藥劑營養品上或化妝品上可接受之鹽。如本文所用，片語「醫藥學上或類藥劑營養品上或化妝品上可接受之鹽」包括酸加成鹽及鹼加成鹽。
天然免疫抑制劑為抑制免疫系統、抑制慢性全身發炎及氧化應激、保護免疫及肺細胞免於HMGB1誘導之細胞介素風暴損傷、提供強效抗氧化劑以減少氧化應激且減少NF-kb且減少促炎性路徑(COX/LOX及細胞介素-IL-1、IL-6、TNF-a)之分子，因此可用於控制生理及/或病理免疫反應以便達成免疫功能的恆定性，如當前考慮之主題中所展現。上文所說明之彼等酚系天然化合物包括但不限於迷迭香酸、番鬱金黃素、金雀異黃酮、槲皮素、紫鉚因、葉黃酮、金黃素、芹菜素、薑黃素、白藜蘆醇、辣椒鹼、球腺糖A、6-薑烯酚、薑油、薑酮、小蘖鹼、胡椒鹼、表沒食子兒茶素、秋水仙鹼、石蒜鹼，
經考慮迷迭香酸來源自、獲自或選自以下中之至少一者-單獨或與以下的所有植物部分中之一者組合： Rosmarinus officinalis、柏蜂草( Melissa officinalis)、香苦瓜( Momordica balsamina)、西洋薄荷( Mentha piperita)、紫蘇( Perilla frutescens)、藥用鼠尾草( Salvia officinalis)、鼠尾苦草( Teucrium scorodonia)、歐洲變豆菜( Sanicula europaea)、彩葉草( Coleus blumei)、麝香草屬( Thymus spp.)、輪生山香( Hyptis verticillata)、紫草( Lithospermum erythrorhizon)及金魚藻(hornwort Anthoceros agrestis)或其組合。
含有以上免疫抑制天然酚系化合物的植物物種包括但不限於蓽拔( Piper longumLinn)、黃連( Coptis chinensisFranch)、當歸( Angelica sinensis(Oliv.) Diels)、苦參( Sophora flavescensAit)、漆樹( Toxicodendron vernicifluum)、甘草( Glycyrrhiza glabra)、薑黃( Curcuma longa)、 Salvia Rosmarinus、 Rosmarinus officinalis、薑( Zingiber officinalis)、遠志( Polygala tenuifolia)、蛇麻( Humulus lupulus)、忍冬( Lonicera Japonica)、藥用鼠尾草( Salvia officinalis L.)、雷公根( Centella asiatica)、乳香樹( Boswellia carteri)、歐薄荷( Mentha longifolia)、青海雲杉( Picea crassifolia)、柑( Citrus nobilis Lour)、酸橙( Citrus aurantium L.)、茶樹( Camellia sinensis L.)、野葛根( Pueraria mirifica)、葛麻姆( Pueraria lobata)、大豆( Glycine max)、石蒜( Lycoris radiate)、秋水仙( Colchicum autumnale)、辣椒屬( Capsicum species)、虎杖( Fallopia japonica)，許多酚系化合物亦可發現於各種水果及蔬菜中，例如茶、番茄、十字花科蔬菜、葡萄、藍莓、接骨木果、覆盆子、蔓越莓、桑葚、蘋果、紅辣椒等。
藉由與包括但不限於甘露聚糖、乙醯基甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡聚糖、β-葡聚糖(例如來自poria萃取物)、α-1,6及α-1,4葡聚糖、β-1,3-葡聚糖、褐藻醣膠(fucoidan)、聚果糖(frucan)及果膠(pectin)的免疫抑制酚系天然化合物調配，刺激先天性免疫性，增強後天性免疫性尤其CD3+、CD4+、CD8+、NKp46+自然殺手細胞、TCRγδ+ γ δ T細胞及CD4+TCRγδ+輔助γ δ T細胞的天然多醣保護免疫及肺細胞免於HMGB1誘導之細胞介素風暴破壞，維持先天性及後天性免疫反應的恆定性。
含有以上免疫刺激天然多醣化合物的植物物種包括但不限於真蘆薈、巴巴多斯蘆薈、好望角蘆薈( Aloe ferox)、樹蘆薈( Aloe arborescens)、膜莢黃蓍( Astragalus membranaceus)、靈芝( Ganoderma lucidum)、大麥( Hordeum vulgare)、巴西蘑菇( Agaricus (A. blazei) subrufescens)、紫馬藺菊( Echinacea purpurea)、狹葉紫錐菊( Echinacea angustifolia)、烏頭( Aconitum Napellus/Monkshood)、西洋接骨木( Sambucus nigra)、 Poria cocos Wolf、 Wolfiporia extensa、催眠睡茄( Withania somnifera)、阿爾泰柴胡( Bupleurum falcatum)、柴胡( Radix Bupleuri)、甘草( Radix Glycyrrhiza)、連翹( Fructus Forsythiae)、西洋參( Panax quinquefolium)、人參( Panax ginsengC. A. Meyer)、韓國紅參(Korea red ginseng)、香菇( Lentinula edodes/shiitake)、白樺茸( Inonotus obliquus/Chaga mushroom)、香菇、寧夏枸杞( Lycium barbarum)、裂蹄木層孔菌( Phellinus linteus) (子實體)、雲芝( Trametes versicolor) (子實體)、瓜爾( Cyamopsis tetragonolobus) (瓜爾膠)、雲芝、岡村枝管藻( Cladosiphon okamuranusTokida)、裙帶菜( Undaria pinnatifida)。許多多醣化合物亦可見於各種水果及蔬菜中，例如蘑菇、海藻、酵母、褐藻(brown algae)、龍舌蘭花蜜、褐藻(brown seaweed)、可醱酵纖維、穀類、海參、龍舌蘭、朝鮮薊、蘆筍、韭蔥(leek)、大蒜、洋蔥、黑麥、大麥仁、小麥、梨、蘋果、番石榴、榅桲(quince)、李、醋栗、橙及其他柑橘屬果實。
乙醯化多醣係植物細胞壁聚合物之一部分。相較於常規多醣，乙醯化多醣經報導具有更高抗氧化特性、更佳免疫調節特性。O-乙醯化程度可視物種、部分及發育狀態而變化。已證明一些天然多醣中之乙醯基含量在其生物活性中起重要作用，不過仍未完全理解o-乙醯化機制。
在一些實施例中，本發明之多醣及/或酚系化合物或萃取物可自植物及/或海洋來源，例如自實例1至8中及整個申請案中其他地方包括之彼等植物分離出。用於分離化合物之適合之植物部分包括葉、樹皮、樹幹、樹幹皮、莖、莖皮、嫩枝、塊莖、根、根莖、根皮、皮表面、幼芽、種子、果實、子實體、雄花器、雌花器、花萼、雄蕊、花瓣、萼片、心皮(雌蕊)、花或其任何組合。在一些相關實施例中，化合物或萃取物自植物來源分離，全部合成，用植物或真菌組織、幹細胞及轉殖基因微生物劑生物合成及經合成修飾以含有所述取代基中之任一者。就此而言，自植物分離之化合物之合成修飾可使用任何數目之此項技術中已知且完全在一般熟習此項技術者之知識範圍內的技術實現。
考慮之主題之其他實施例係關於在本發明中例如但不限於UP360，呈2至3種植物萃取物之各種組合，用於調節免疫恆定性之包含多醣及多酚的蘆薈基底組合物的使用方法，包括但不限於：最佳化及/或平衡免疫反應；幫助維持針對病毒感染及細菌感染之健康免疫功能；保護免疫系統免於由空氣污染及吸菸誘導之氧化應激損傷；保護正常健康肺功能免於病毒感染、細菌感染及空氣污染；支援健康發炎反應；維持健康之細胞介素含量及針對感染之細胞介素反應水準；升高及維持諸如IL-10之消炎細胞介素；控制氧化反應及緩解氧化應激；維持肺清潔及去毒能力；保護肺結構完整性及氧交換能力；維持呼吸通路且增強肺泡之氧吸收能力；緩和氧化應激引起的肺部損傷；促進肺之微循環且保護正常凝血功能；增加白血球之活性及計數，增強自然殺手(NK)細胞功能；增加T及B淋巴球之計數；增加CD3+、CD4+ NKp46+自然殺手細胞、TCRγδ+ γ δ T細胞及CD4+TCRγδ+輔助γ δ T細胞及CD8+細胞計數；保護及促進巨噬細胞吞噬活性；支援及/或促進正常抗體產生；維持健康肺部微生物群及/或呼吸器官中之共生系統；緩解及/或減少感冒/流感樣症狀，包括但不限於身體疼痛、喉嚨痛、咳嗽、輕微咽喉及支氣管刺激、鼻充血、鼻竇充血、鼻竇壓力、流鼻涕、打噴嚏、喪失嗅覺、喪失味覺、肌肉酸痛、頭痛、發熱及發冷；幫助使痰(黏液)散開及使支氣管分泌物變稀以使得能咳出更多；降低支氣管刺激之嚴重程度；降低由病毒感染、微生物感染及空氣污染引起的肺損傷及/或水腫及/或發炎性細胞浸潤之嚴重程度；支援支氣管系統及舒適呼吸度過感冒/流感及/或污染季節；預防及/或治療肺纖維化；降低普通感冒/流感之持續時間及/或嚴重程度；降低呼吸系統之病毒及細菌感染之嚴重程度及/或持續時間；預防及/或治療及/或治癒由病毒、微生物及空氣污染物引起之呼吸系統感染；管理及/或治療及/或預防及/或逆轉呼吸系統感染之進展；促進及強化肺及整個呼吸系統之修復及更新功能及使其恢復，或其類似者。
實例 實例 1. 有機及水性萃取物之製備將各植物之經乾燥研磨植物粉末(20 g)裝載至100 ml不鏽鋼管中且使用ASE 300自動萃取器在80℃及1500 psi下用有機溶劑混合物(二氯甲烷/甲醇，比率為1:1)萃取兩次。萃取物溶液經自動過濾且收集，隨後用新鮮溶劑沖洗且用氮氣吹掃至乾，隨後切換至在50℃下水萃取。將合併之有機萃取物溶液用旋轉式蒸發器蒸發，得到粗有機萃取物(OE)。生物質經風乾且用DI水萃取一次。將水性溶液過濾且冷凍乾燥，得到水性萃取物(AE)。
使用同一程序獲得類似結果，但其中有機溶劑混合物替換成甲醇或乙醇以分別提供甲醇萃取物(ME)或乙醇萃取物(EE)、乙醇:H 2O (7:3)萃取物、乙醇:H 2O (1:1)萃取物、乙醇:H 2O (3:7)萃取物及水萃取物。
實例 2. 真蘆薈葉凝膠粉末的樣品製備洗滌真蘆薈植物之新鮮葉片，且移除外皮。葉凝膠之泌出物用纖維素酶處理且經由活性木炭過濾。濾液藉由低壓蒸發濃縮且藉由冷凍乾燥、展佈乾燥或Qmatrix®加工來脫水至乾燥。以200:1至100:1之比率在不低於8%多醣下產生呈凍乾物形式之真蘆薈葉凝膠粉末。
實例 3. 藉由乙醇沈澱法之蘆薈多醣製備將蘆薈葉凝膠粉末以40 g/L之濃度溶解於水中，且在藉由磁性攪拌棒不斷攪拌期間將乙醇緩慢添加至溶液中，以使溶液達至80%乙醇。沈澱物藉由離心機以2500 rpm與上清液分離且藉由Speedvac乾燥。總共可加工1 kg蘆薈葉凝膠粉末(批次WM 180141)，得到379 g沈澱物。對沈澱物及上清液進行尺寸排阻管柱(SEC)層析以及HPLC分析，其揭露上清液中未偵測到高於10K之多醣且沈澱物含有40.5%分子量大於10 KD之多醣(表1)。 表1. 蘆薈沈澱物及上清液中之多醣含量
   多醣分子量分佈(KD)
樣品 10-50 50-200 200-500 500-1,000 1,000-2,000 ›2,000 ›10
沈澱物 22.26% 33.45% 17.78% 10.02% 7.51% 8.99% 40.5%
上清液 nd nd nd nd nd nd nd
nd = 未偵測到
實例 4. 藉由超過濾之三個蘆薈多醣部分製備將379 g蘆薈沈澱物以20 g/L之濃度溶解於水中。以每小時0.5-10 L之流動速率使水溶液經歷超過濾(來自Jinan Bona Biotechnology之BONA-GM-18)，依序穿過具有不同孔隙尺寸之有機超過濾膜以分別過濾出具有分子量1 KD、5 KD、50 KD、300 KD及500 KD之多醣。收集三個多醣部分：＞500 kD (45.7 g)、50-500 kD (30.1 g)及5-50 KD (19.8g)且其用冷凍乾燥凍乾器乾燥。用SEC HPLC&NMR方法分析分子量分佈及多醣純度。
實例 5. Poria cocos 萃取物之製備將經乾燥研磨植物 Poria cocos菌核粉末(20 g)裝載至100 ml不鏽鋼管中且使用ASE 300自動萃取器在80℃及1500 psi下用有機溶劑混合物(二氯甲烷/甲醇，比率為1:1)萃取兩次。萃取物溶液經自動過濾且收集，隨後用新鮮溶劑沖洗且用氮氣吹掃至乾，隨後切換至在50℃下水萃取。合併之有機萃取物溶液用旋轉式蒸發器蒸發，得到0.82 g粗有機萃取物(OE) (4.10%產率)。生物質經風乾且用水萃取一次。將水性溶液過濾且冷凍乾燥，得到0.51 g水性萃取物(AE) (2.55%產率)。
將經乾燥研磨植物 Poria cocos菌核粉末(20 g)裝載至100 ml不鏽鋼管中且使用ASE 300自動萃取器在80℃及1500 psi下用乙醇萃取兩次。萃取物溶液經自動過濾且收集，隨後用新鮮溶劑沖洗且用氮氣吹掃至乾，隨後切換至在50℃下水萃取。合併之有機萃取物溶液用旋轉式蒸發器蒸發，得到0.3893 g粗乙醇萃取物(1.95%產率)。生物質經風乾且用水萃取一次。將水性溶液過濾且冷凍乾燥，得到0.3581 g水性萃取物(AE) (1.79%產率)。
使用同一程序獲得類似結果，但其中有機溶劑替換成甲醇或乙醇以分別提供甲醇萃取物(ME)或乙醇萃取物(EE)、乙醇:H 2O (7:3)萃取物、乙醇:H 2O (1:1)萃取物、乙醇:H 2O (3:7)萃取物及水萃取物。
藉由水萃取 Poria cocos之經乾燥研磨子實體粉末以得到批次號210317之 Poria水萃取物，萃取產率為15:1。藉由比色方法使用酚-硫酸方法以490 nm之UV波長相對於葡萄糖測定 Poria萃取物中之多醣。藉由香草精-硫酸方法以548 nm之UV波長相對於丁香油素定量 Poria萃取物中之總三萜類物。藉由比色方法之多醣含量在10%至40%範圍內之不同 Poria萃取物的活性內含物(表2)。 表2. Poria cocos萃取物之活性內含物
材料 樣品ID 藉由UV方法定量之活性內含物
Poria coccos萃取物 L0761 20%多醣
Poria coccos萃取物 L0770 21.73%多醣 3.56%三萜
Poria coccos萃取物 L501 多醣7.22% 三萜16.2%
Poria cocos萃取物 L0784 39.72%多醣 4.32%三萜
Poria cocos萃取物 L0501-2 20%多醣 10%三萜
Poria cocos萃取物 L696 30%多醣
表3. 基於SEC HPLC分析之Poria多醣之分子量分佈
Poria萃取物樣品ID L784 L770 P00482 201109-2
多醣(＞5kD) 33.05% 38.21% 8.71% 7.67%
＞2000K 0% 0% 0% 0.00%
2000K-1000K 0.03% 0% 0% 0.00%
1000K-500K 0.29% 0% 0% 0.00%
500K-200K 0.95% 0.11% 0% 0.10%
200K-50K 5.02% 2.23% 0% 1.18%
50K-5K 69.77% 75.17% 11.91% 15.63%
5K-0.5K 23.93% 22.48% 88.00% 83.09%
具有多醣之 Poria萃取物樣品以20 mg/mL濃度製備，且在50℃下利用PolySep-SEC-P5000管柱(Phenomenex OOH-3145KO，30×0.78 cm)，用0.7 mg/min之流動速率之100 mM NaCl溶液之等度溶離，使用一系列9.9 KDa至2,285 KDa之分子量範圍的聚葡萄糖分子量標準物藉由RI偵測器偵測，藉由尺寸排阻層析(SEC) HPLC分析。多醣用基於各分子量截止值(視需要由標準校準預先計算)的目標峰上之垂直游標積分。如表3中所示，計算各樣品之多醣分佈及總多醣含量。
藉由此SEC-HPLC方法，在 Poria萃取物L784中分子量高於5 KDa之總多醣含量計算為33.05%，主要在5至2000 KDa範圍內。藉由此SEC-HPLC方法， Poria多醣含量在5%至40%之間的範圍內變化。
實例 6. 迷迭香萃取物之製備將經乾燥研磨植物 Rosmarinus officinalis地上部分(aerial part)粉末(20 g)裝載至100 ml不鏽鋼管中且使用ASE 300自動萃取器在80℃及1500 psi下用有機溶劑混合物(二氯甲烷/甲醇，比率為1:1)萃取兩次。萃取物溶液經自動過濾且收集，隨後用新鮮溶劑沖洗且用氮氣吹掃至乾，隨後切換至在50℃下水萃取。合併之有機萃取物溶液用旋轉式蒸發器蒸發，得到2.19 g粗有機萃取物(OE) (10.95%產率)。生物質經風乾且用水萃取一次。將水性溶液過濾且冷凍乾燥，得到1.26 g水性萃取物(AE) (6.31%產率)。
用乙醇/水萃取經乾燥迷迭香葉，且濃縮濾液。將上部液體分離且進一步藉由真空乾燥且藉由管柱富集，得到具有在5%至95%範圍內之迷迭香酸含量之迷迭香萃取物。
使用同一程序獲得類似結果，但其中有機溶劑混合物替換成甲醇或乙醇以分別提供甲醇萃取物(ME)或乙醇萃取物(EE)、乙醇:H 2O (7:3)萃取物、乙醇:H 2O (1:1)萃取物、乙醇:H 2O (3:7)萃取物及水萃取物。
經乾燥迷迭香葉藉由乙醇及水之混合溶劑萃取且進一步藉由乙酸乙酯萃取，以100:1之萃取比率，得到具有約30%迷迭香酸之迷迭香酸富集迷迭香萃取物。迷迭香酸萃取物藉由HPLC偵測且定量具有10%至90%範圍內之含量(表4)。 表4. 迷迭香萃取物之活性內含物
材料 樣品ID 用HPLC定量之活性內含物
迷迭香葉萃取物 L0753 30.14%迷迭香酸
迷迭香葉萃取物 L0780 30.11%迷迭香酸
迷迭香葉萃取物 L0781 30.6%迷迭香酸
迷迭香萃取物 L0752 迷迭香酸30%
有機迷迭香萃取物 L0785 迷迭香酸30%
迷迭香葉萃取物 L752-1 10%迷迭香酸
迷迭香葉萃取物 L752-2 25%迷迭香酸
迷迭香葉萃取物 L752-3 40%迷迭香酸
迷迭香葉萃取物 L752-4 40%迷迭香酸
迷迭香葉萃取物 L752-5 90%迷迭香酸
實例 7. 白樺茸萃取物之製備將經乾燥研磨植物白樺茸粉末(20 g)裝載至100 ml不鏽鋼管中且使用ASE 300自動萃取器在80℃及=1500 psi下用有機溶劑混合物(二氯甲烷/甲醇，比率為1:1)萃取兩次。萃取物溶液經自動過濾且收集，隨後用新鮮溶劑沖洗且用氮氣吹掃至乾，隨後切換至在50℃下水萃取。合併之有機萃取物溶液用旋轉式蒸發器蒸發，得到粗有機萃取物(OE)。生物質經風乾且用水萃取一次。將水性溶液過濾且冷凍乾燥，得到水性萃取物(AE)。
以4:1比率用水萃取經研磨乾燥白樺茸粉末，獲得水萃取物，其中多醣含量在5至95%範圍內。使用同一程序獲得類似結果，但其中有機溶劑混合物替換成甲醇或乙醇以分別提供甲醇萃取物(ME)或乙醇萃取物(EE)、乙醇:H 2O (7:3)萃取物、乙醇:H 2O (1:1)萃取物、乙醇:H 2O (3:7)萃取物及水萃取物。
實例 8. 膜莢黃蓍萃取物之製備將經乾燥研磨植物膜莢黃蓍根粉末(20 g)裝載至100 ml不鏽鋼管中且使用ASE 300自動萃取器在80℃及1500 psi下用有機溶劑混合物(二氯甲烷/甲醇，比率為1:1)萃取兩次。萃取物溶液經自動過濾且收集，隨後用新鮮溶劑沖洗且用氮氣吹掃至乾，隨後切換至在50℃下水萃取。合併之有機萃取物溶液用旋轉式蒸發器蒸發，得到1.68 g粗有機萃取物(OE) (8.42%產率)。生物質經風乾且用水萃取一次。將水性溶液過濾且冷凍乾燥，得到2.93 g水性萃取物(AE) (14.68%產率)。
經研磨乾燥膜莢黃蓍根粉末以1:8之比率用水萃取兩次，得到水萃取物，萃取產率為4:1且多醣不低於10%。使用同一程序獲得類似結果，但其中有機溶劑混合物替換成甲醇或乙醇以分別提供甲醇萃取物(ME)或乙醇萃取物(EE)、乙醇:H 2O (7:3)萃取物、乙醇:H 2O (1:1)萃取物、乙醇:H 2O (3:7)萃取物及水萃取物。
實例 9. 蘆薈基底組合物 UP360 及其他組合之製備如以上實例中所展現，以200:1之比率在不低於10%多醣下產生呈凍乾物形式之真蘆薈葉凝膠粉末。藉由水萃取在不低於20%多醣下製成Poria cocos萃取物。迷迭香葉萃取物藉由乙醇/水萃取製造，得到不低於30%迷迭香酸。以按重量計3:6:1之比率摻合三種成分，得到包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物之最終組合。批次號APR-05012020-1及APR-05012020-2之兩批UP360 (表5)藉由用YUCHENGTECH 10L Lab乾燥粉末混合器混合三種成分1小時產生，其中藉由如實例5中所描述之SEC-HPLC方法測定多醣含量(＞5 KDa)為12.07%。
以按重量計1:1:1之比率摻合真蘆薈內部凝膠粉末、Poria cocos萃取物及迷迭香葉萃取物，得到批次號UP0319之組合物UP360組合。
真蘆薈內部凝膠粉末、Poria cocos萃取物、迷迭香葉萃取物及賦形劑-Litesse® (Gillco)以按重量計3:2:1:4之比率摻合，得到批次號UP360-APR-09012020之組合物UP360之另一組合(4.011 kg)，其中藉由SEC-HPLC方法測定多醣含量(＞5 KDa)為11.01% (表6)。
真蘆薈內部凝膠粉末、Poria cocos萃取物、迷迭香葉萃取物及賦形劑-Litesse® (Gillco)以按重量計3:3:1:3之比率摻合，得到批次號UP360-Lit-1之組合物UP360之另一組合。藉由SEC-HPLC方法測定多醣含量(＞5 KDa)為16.73% (表6)。 表5. UP360批次號APR-05012020-1及APR-05012020-2之摻合記錄.
   批次號 材料名稱 規格 理論數量 (kg) 實際數量 (kg) 批號
1 L0765/L768 真蘆薈凝膠粉末 10%多醣 1.350 1.350 APR-05012020-1
2 L0761/L0770 Poria cocos萃取物 20 %多醣 2.700 2.702
3 L0753 迷迭香萃取物 30%迷迭香酸 0.450 0.451
最終組合物數量(kg) 4.494
   批次號 材料名稱 規格 理論數量 (kg) 實際數量 (kg) 批號
1 L0765/L768 真蘆薈凝膠粉末 10%多醣 1.350 1.352 APR-05012020-2
2 L076/L0770 Poria cocos萃取物 20 %多醣 2.700 2.702
3 L0753 迷迭香萃取物 30%迷迭香酸 0.450 0.453
最終組合物數量(kg) 4.503
表6：藉由SEC HPLC測定之UP360中之多醣之分子量分佈
批次號 APR-05012020-1 APR-09012020 UP360-Lit-1
多醣(＞5kD) 12.07% 11.01% 16.73%
＞2000K 0.00% 0.79% 1.14%
2000K-1000K 0.00% 1.37% 1.33%
1000K-500K 0.00% 1.18% 0.93%
500K-200K 0.00% 1.26% 1.41%
200K-50K 0.05% 1.53% 2.97%
50K-5K 11.75% 8.77% 14.41%
5K-0.5K 88.20% 85.49% 77.81%
實例 10. 組合 1 及組合 2 之製備 .組合1為各個別成分按重量計1:1:1比率之真蘆薈葉凝膠粉末(L0765，10%多醣)、 Poria cocos萃取物(L0761，20%多醣)及迷迭香萃取物(L0762，30%迷迭香酸)之混合物。
組合2為按重量計1:1比率之白樺茸萃取物(L0762，30%多醣)及膜莢黃蓍萃取物(L0759，黃芪甲苷(Astragaloside) ＞0.3%，多醣＞10%)之混合物。組合2可藉由以1:99至99:1之比率混合白樺茸萃取物及膜莢黃蓍萃取物來製造。
實例 11. 多醣富集樣品與 α - 澱粉酶之酶反應及藉由尺寸排阻層析之 Poria cocos 萃取物、真蘆薈凝膠粉末及 UP360 之多醣定量pH值為6.87之10 mL NaH 2PO 4·H 2O及Na 2HPO 4·7H 2O緩衝溶液中的200 mg植物萃取物在室溫下用200 µL α-澱粉酶溶液(2 mg/mL)處理隔夜。反應混合物在SpeedVac中乾燥且藉由尺寸排阻層析分析。
具有多醣之樣品以20 mg/mL濃度製備，且在50℃下利用PolySep-SEC-P5000管柱(Phenomenex OOH-3145KO，30×0.78 cm)，用0.7 mg/min之流動速率之100 mM NaCl溶液之等度溶離，使用一系列9.9 KDa至2,285 KDa之分子量範圍的聚葡萄糖分子量標準物藉由RI偵測器偵測，藉由尺寸排阻層析HPLC分析。多醣用基於各分子量截止值(視需要由標準校準預先計算)的目標峰上之垂直游標積分。計算各樣品之多醣分佈及總多醣含量。
Poria多醣(對此酶具有抗性，其中在澱粉酶處理之前及之後極輕微自33.50%變化為30.04%。反應之前及之後最終UP360組合物(APR-09012020)中之多醣同樣如此。而主要由α型多醣構成之麥芽糊精則幾乎完全經澱粉酶消化，反應之前的64.1%中處理之後僅展示0.97%多醣(＞5 Ka)。 表7. α-澱粉酶水解之前及之後藉由HPLC方法之Poria萃取物、UP360及麥芽糊精中之多醣定量
樣品 Poria 萃取物(L0784) UP360 (APR-09012020) 麥芽糊精
多醣大小 之前 之後 之前 之後 之前 之後
(＞5kD) 33.50% 30.04% 11.01% 8.59% 64.01% 0.97%
＞2000K 0.86% 0% 0.79% 0% 0% 0%
2000K-1000K 0.14% 0.12% 1.37% 0% 0% 0%
1000K-500K 0.30% 0.36% 1.18% 0.17% 0.01% 0%
500K-200K 0.83% 1.00% 1.26% 0.34% 0.52% 0%
200K-50K 3.39% 3.35% 1.53% 1.52% 10.91% 0%
50K-5K 35.68% 34.09% 8.77% 10.01% 52.88% 1.08%
5K-0.5K 58.80% 61.09% 85.49% 87.96% 35.69% 98.92%
實例 12. 高氧誘導之功能障礙巨噬細胞之 HMGB1 釋放之 抑制在高氧條件下培養之巨噬細胞經歷氧化應激，使得其將HMGB1分泌至細胞培養基。為測定蘆薈基底組合物及其組分在減少所培養巨噬細胞之細胞外HMGB1積聚方面的功效，在存在或不存在25 µg/mL濃度之測試物質下，將RAW 264.7細胞暴露於21% O 2(室內空氣(RA))或95% O 224小時。藉由ELISA在單一濃度之測試物質下一式兩份地測定細胞培養物上清液中之HMGB1含量。資料表示為一式兩份地分析之一個實驗之平均值±SEM。與僅用媒劑在高氧下處理之巨噬細胞相比，*p＜0.05，**p＜0.01，****p＜0.0001。對照細胞用水楊酸鈉(SS)處理作為陽性對照組，其使高氧損壞之巨噬細胞功能及氧化應激誘導之HMGB1釋放減弱。 表8. RAW 264.7細胞中之抗HMGB1作用
拉丁名稱 樣品ID 樣品描述 HMGB1 抑制 P 值
真蘆薈( Aloe vera) P00104 蘆薈萃取物 水性萃取物 30.95 0.0867
真蘆薈( Aloe vera) P00104 蘆薈凝膠粉末 內部凝膠1:200 87.84 ＜ 0.0001
真蘆薈( Aloe vera) 蘆薈苦素(Aloesin) ＞95% HPLC純度 52.47 0.0038
真蘆薈( Aloe vera) 蘆薈沈澱物 35%多醣 91.16 ＜ 0.0001
Poria coccos L501 20%多醣 83.75 ＜ 0.0001
Rosmarinus officinalis 迷迭香酸 ＞98% HPLC純度 72.97 ＜ 0.0001
Rosmarinus officinalis P02630-AE 水性萃取物 75.45 ＜ 0.0001
實例 13. 高氧誘導之功能障礙巨噬細胞之吞噬分析研究已揭露所培養巨噬細胞中HMGB1之細胞外積聚含量與其吞噬能力相關。RAW 264.7細胞在測試物質或其媒劑存在下保持在室內空氣(21% O 2)下或暴露於95% O 224小時。藉由MTT分析測定細胞存活率。各值表示4個一式三份獨立實驗之平均值±SEM。相較於T24 (21% O 2；0 μg/ml)對照組，*, P≤0.05。 表9. 培養之RAW 264.7細胞中之MTT分析
樣品名稱 12 µg/mL 25 µg/mL 50 µg/mL 100 µg/mL
MTT (減少%) P值 MTT (減少%) P值 MTT (減少%) P值 MTT (減少%) P值
迷迭香酸 5.63% 0.2092 13.47% 0.0036 20.03% ＜0.0001 20.53% ＜0.0001
白樺茸 2.10% 0.6378 4.97% 0.2676 0.97% 0.8283 5.57% 0.2146
組合1 1.03% 0.8167 -2.33% 0.601 -0.40% 0.9285 6.93% 0.1235
組合2 -6.20% 0.1676 -10.13% 0.026 -4.53% 0.3111 -3.30% 0.46
表10. 培養之RAW 264.7細胞中之吞噬分析
樣品名稱 12 µg/mL 25 µg/mL 50 µg/mL
吞噬 P值 吞噬 P值 吞噬 P值
迷迭香酸 51.00% 0.0467 74.35% 0.0066** / /
白樺茸 / / 33.74% 0.226 29.27% 0.293
組合1 / / 41.42% 0.124 22.31% 0.422
組合2 / / 33.13% 0.2343 99.28% 0.0006 **
RAW 264.7細胞在測試物質存在下保持在室內空氣(21% O 2)下或暴露於95% O 224小時。細胞隨後與FITC標記之乳膠微型珠粒一起培育1小時且用鬼筆環肽(phalloidin)及DAPI染色以分別視覺化肌動蛋白細胞骨架及細胞核。對於吞噬活性之定量，對每組至少200個細胞進行計數且每個細胞珠粒之數目表示為與21% O 2(0 μg/ml)對照組相比之增加百分比。各值表示各組3個一式兩份獨立實驗之平均值±SEM。相較於21% O2 (0 μg/ml)對照組，*, P≤0.05。
測試純迷迭香酸(實例6)、白樺茸之水性萃取物(實例7)及兩種組合物(實例10)，且結果概述於表9及10中。
實例 14. HaCaT 細胞中之 UVA 及 UVB 誘導之 ROS 分析以8,000個細胞/孔之密度將HaCaT細胞(人類永生角質細胞)接種於96孔組織培養盤中且用25 µg/mL之測試物質處理24小時。評價細胞毒性以移除假陽性(CCK＞80%存活率)。將DCFH-DA (螢光探針)添加至細胞中以偵測ROS產生且在37℃下培育25分鐘。在太陽模擬器(Sol-UV-6太陽模擬器)以及紫外線濾光器下暴露於UV照射10分鐘之後，藉由多模式讀取器在488 nm (激發)及525 nm (發射)下量測螢光值。維生素C用作40 µg/mL處理之陽性對照組，其中ROS產生減少43%。在25 µg/mL下，與UV暴露之HaCaT細胞的含量相比，迷迭香酸減少ROS產生24%。有機萃取物(OE)在50 µg/mL下測試，而水性萃取物在100 µg/mL下測試。在此分析中在25 µg/mL下測試部分或純化合物。 表11. 針對HaCaT細胞中之UV-ROS產生之抑制
拉丁名稱 樣品ID 樣品描述 ROS (%) 存活率(%) ROS (%) 存活率(%) ROS (%) 存活率(%)
100 µg/mL 50 µg/mL 25 µg/mL
巴巴多斯蘆薈( Aloe barbadensis) P01594-OE 有機萃取物 / / 27 97 / /
真蘆薈( Aloe vera) P00104-AE 水性萃取物 44 97 / / / /
Poria coccos P02207-OE 有機萃取物 / / 18 83 / /
Rosmarinus officinalis P02630-AE 水性萃取物 42 103 / / / /
Rosmarinus officinalis P02630-10M 10% MeOH部分 / / / / 24 93
Rosmarinus officinalis 迷迭香酸 ＞98% HPLC純度 / / / / -6 57
實例 15. 藉由 30% 過氧化氫誘導之人類纖維母細胞之 DNA 損傷分析將HSF細胞(人類纖維母細胞)接種於96孔組織培養盤中且與測試物質一起在37℃及5% CO 2及95%空氣中培育。經處理之HSF細胞藉由與濃度為1 mM之H 2O 2一起培育4小時而經歷DNA損傷，隨後針對γH2AX，一種為DNA雙股斷裂之標記物的磷酸化組蛋白進行免疫染色。使用DAPI對細胞核進行染色。圖像藉由Image Xpress取得且用Meta Xpress分析。如藉由γH2AX染色之定量所評估，使用兒茶素(100 µg/ml)作為陽性對照組，其中DNA損傷減少70%。迷迭香酸在25 µg/mL下減少DNA損傷24%。
實例 16： 包含多醣及多酚之蘆薈基底組合物 (UP360) 展示 LPS 挑戰之巨噬細胞中 HMGB1 及 TNF 之劑量相關抑制將一百萬RAW264.7小鼠巨噬細胞樣細胞塗鋪於具有1 μg/mL脂多醣(LPS) (除了對照組)之60 mm皿中之無血清培養基中。在以下濃度下一式兩份地添加實例9中製成之包含多醣及多酚之UP360組合物：UP360-125、250及500 μg/mL。處理細胞24小時，隨後抽吸培養基且在10,000 MWCO過濾器中離心以濃縮。培養基在SDS-PAGE上操作且轉移至PVDF膜以用於HMGB1及TNF-α之墨點法。墨點用麗春紅S染色，且密度測定法相對於總蛋白質量正規化。
蘆薈基底組合物-UP360展示LPS挑戰之巨噬細胞中HMGB1及TNF-α之劑量相關顯著抑制。根據西方墨點法半定量資料發現，當巨噬細胞用LPS挑戰時，對於媒劑對照組，HMGB1及TNF-α分別存在1.1±0.17及9.8±0.33相對條帶強度。相比之下，用UP360處理LPS挑戰之巨噬細胞將HMGB1條帶強度水準分別針對125、250及500 μg/mL濃度降低至0.48±0.02、0.27±0.01及0.17±0.01。類似地，發現分別對於250及500 μg/mL濃度之UP360，TNF-α之分泌顯著減少，亦即0.54±0.01及0.37±0.01。
一式兩份巨噬細胞未經處理(對照組)，僅用LPS (媒劑)處理，或用LPS及萃取物或組合物以指定濃度(左)處理24小時，隨後收集培養基且在10,000 MWCO過濾器上濃縮。濃縮培養基在SDS-PAGE上操作且針對指定蛋白質(頂部)進行墨點法。對墨點進行密度測定法，相對於總麗春紅染色正規化，且相對於對照組計算蛋白質表現。 表12：相對於麗春紅S染色正規化且相對於對照組之來自UP360西方墨點法之HMGB1及TNF-α的半定量：
   LPS (1 μg/mL) HMGB1 TNF-α
對照組 - 1.0 +/- 0.07 1.0 +/- 0.005
媒劑 + 1.1 +/- 0.17 9.8 +/- 0.33
UP360 HMGB1 TNF-α
125 μg/mL + 0.48 +/- 0.02 6.6 +/- 0.49
250 μg/mL + 0.27 +/- 0.01 0.54 +/- 0.01
500 μg/mL + 0.17 +/- 0.01 0.37 +/- 0.01
實例 17 ： 包含多醣及多酚之蘆薈基底組合物 (UP360) 展示 HMGB1 及 TNF- α 之出人意料的協同抑制活性將一百萬RAW264.7小鼠巨噬細胞樣細胞塗鋪於具有1 μg/mL脂多醣(LPS) (除了對照組)之60 mm皿中之無血清培養基中。在以下濃度下一式兩份地添加用於製造實例9中之UP360的植物萃取物：蘆薈葉凝膠粉末-37.5、75及150 μg/mL， Poria萃取物-75、150及300 μg/mL，及迷迭香萃取物-12.5、25及50 μg/mL。蘆薈、Poria及迷迭香之三個濃度等於其在以上實例中125、250及500 μg/mL UP360中之濃度。處理細胞24小時，隨後抽吸培養基且在10,000 MWCO過濾器中離心以濃縮。培養基在SDS-PAGE上操作且轉移至PVDF膜以用於HMGB1及TNF-α之墨點法。墨點用麗春紅S染色，且密度測定法相對於總蛋白質量正規化。
使用考爾比氏方法使用來自隔夜LPS挑戰之巨噬細胞的上清液來評價來自蘆薈、Poria及RA之萃取物當以特定比率調配在一起時的可能的出人意料的抑制作用。在此方法中，若某終點量測之觀測值大於假設計算之預期值，則假定具有兩種或更多種材料之調配物具有出人意料的協同作用。當預期值及觀測值相等時，存在累加效應。然而，當觀測值低於預期值時，存在出人意料的抑制作用。在當前情境下，意欲在此分析中監測之兩種發炎標記物(HMGB1及TNF-α)之含量降低以獲得所要有意義的消炎結果。 表13：相對於麗春紅S染色正規化且相對於對照組之蘆薈、Poria及迷迭香西方墨點法之半定量：
   LPS (1 μg/mL) HMGB1 TNF-α
對照組 - 1.0 +/- 0.03 1.0 +/- 0.23
媒劑 + 1.8 +/- 0.07 2.9 +/- 0.16
蘆薈葉凝膠粉末 HMGB1 TNF-α
37.5 μg/mL + 0.36 +/- 0.05 0.38 +/- 0.07
75 μg/mL + 0.28 +/- 0.004 0.42 +/- 0.02
150 μg/mL + 0.37 +/- 0.008 0.53 +/- 0.02
Poria 萃取物 HMGB1 TNF-α
75 μg/mL + 0.33 +/- 0.007 0.49 +/- 0.02
150 μg/mL + 0.44 +/- 0.009 0.47 +/- 0.01
300 μg/mL + 0.48 +/- 0.15 0.52 +/- 0.16
迷迭香萃取物 HMGB1 TNF-α
12.5 μg/mL + 1.7 +/- 0.21 2.2 +/- 0.34
25 μg/mL + 1.3 +/- 0.007 2.1 +/- 0.01
50 μg/mL + 1.6 +/- 0.16 1.7 +/- 0.22
表14. 蘆薈基底組合物(UP360)減少HGMB1及TNF-α之出人意料的協同作用
劑量 µg/mL UP360 125 µg/mL 劑量 µg/mL UP360 250µg/mL 劑量 µg/mL UP360 500µg/mL
HMGB1 密度測定法
      強度 強度 強度
38 3蘆薈(x) 0.36 75 3蘆薈(x) 0.28 150 3蘆薈(x) 0.37
75 6 Poria (y) 0.33 150 6 Poria (y) 0.44 300 6 Poria (y) 0.48
150 1迷迭香酸(z) 1.70 25 1迷迭香酸(z) 1.30 50 1迷迭香酸(z) 1.60
   x+y+Z 2.39    x+y+Z 2.02    x+y+Z 2.45
   (xyz)/10000 0.00    (xyz)/10000 0.00    (xyz)/10000 0.00
   ((xy)+(xz)+(yz))/100 0.01    ((xy)+(xz)+(yz))/100 0.01    ((xy)+(xz)+(yz))/100 0.02
125 預期(3A6P1RA) 2.38 250 預期(3A6P1RA) 2.01 500 預期(3A6P1RA) 2.43
觀測(3A6P1RA) 0.48 觀測(3A6P1RA) 0.27 觀測(3A6P1RA) 0.17
TNF-α 密度測定法
      強度 強度 強度
38 3蘆薈(x) 0.38 75 3蘆薈(x) 0.42 150 3蘆薈(x) 0.53
75 6 Poria (y) 0.49 150 6 Poria (y) 0.47 300 6 Poria (y) 0.52
150 1迷迭香酸(z) 2.20 25 1迷迭香酸(z) 2.10 50 1迷迭香酸(z) 1.70
   x+y+Z 3.07    x+y+Z 2.99    x+y+Z 2.75
   (xyz)/10000 0.00    (xyz)/10000 0.00    (xyz)/10000 0.00
   ((xy)+(xz)+(yz))/100 0.02    ((xy)+(xz)+(yz))/100 0.02    ((xy)+(xz)+(yz))/100 0.02
125 預期(3A6P1RA) 3.05 250 預期(3A6P1RA) 2.97 500 預期(3A6P1RA) 2.73
觀測(3A6P1RA) 6.60 觀測(3A6P1RA) 0.54 觀測(3A6P1RA) 0.37
X=蘆薈，Y=Poria，Z=迷迭香酸；預期值之考爾比氏方程式：(X+Y+Z) - (XY+XZ+YZ/100) + XYZ/10000
一式兩份巨噬細胞未經處理(對照組)，僅用LPS (媒劑)處理，或用LPS及萃取物或組合物以指定濃度(左)處理24小時，隨後收集培養基且在10,000 MWCO過濾器上濃縮。濃縮培養基在SDS-PAGE上操作且針對指定蛋白質(頂部)進行墨點法。對墨點進行密度測定法，相對於總麗春紅染色正規化，且相對於對照組計算蛋白質表現。
如表中所記錄，吾人觀測到HMGB1及TNF-α之含量均顯著降低，指示組合此等藥用植物材料產生UP360之出人意料的抑制作用。當萃取物以將構成125、250及500 µg/mL UP360之劑量的個別濃度培育時，除125 μg/mL觀測TNF-α值高於預期值以外，兩種標記物對於各劑量標準化組合物UP360抑制作用大於理論上計算之預期值。此等值在125、250及500 µg/mL下分別為對於HMGB1 為0.48相對於2.38、0.27相對於2.01及0.17相對於2.43，及對於TNF為 6.6相對於3.05、0.54相對於2.97及0.37相對於2.73。因此，對於減少HMGB1及TNF-α分泌至培養基，包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之所考量的蘆薈基底組合物(包括UP360)處理之有益的出人意料的抑制作用超過預期結果。
實例 18. 動物及圈養CD-1小鼠係購自USDA批准供應商。8週齡雄性CD-1小鼠係購自Charles River Laboratories公司(Wilmington, MA)。動物在到達後適應環境且在11週齡時用於研究。在研究時，動物平均體重33.6±2.4公克。其圈養於12小時光-暗循環之溫度受控房間(71至72℉)中且提供任食之飼料及水。
動物以3至5隻/聚丙烯小鼠籠來圈養，且藉由在其尾部上特徵編號來個別地鑑別。各籠覆蓋有小鼠絲桿蓋(mouse wire bar lid)及過濾小鼠頂(filtered mouse top) (Allentown, NJ)。個別籠用指示項目編號、測試物品、劑量水準、組、動物數目及性別之籠卡鑑別。使用Harlan T7087軟玉米穗墊料且每週更換至少兩次。小鼠提供有任食之淡水及來自Harlan (Harlan Teklad, 370W, Kent, WA)之嚙齒動物飲食編號T2018。
實例 19 ： 脂多醣 (LPS) 誘導之敗血症模型作為外源性攻擊觸發反應此模型使用動物之存活/死亡率作為終點量測(Wang等人, 1999)。LPS，一種外源性攻擊觸發子，為革蘭氏陰性細菌之外膜之整體組分，且為起始可引起內毒素休克之廣泛性發炎過程的主要促成因子。內毒素休克為主要由巨噬細胞/單核球介導，歸因於若干早期細胞介素，諸如TNF、IL-1、IL-6及γ干擾素以及後期介體HMGB1之過度產生的狀態。在投與溶解於磷酸鹽緩衝鹽水(PBS；Lifeline，批次號07641)中的中值致命劑量LPS (25 mg/kg)之後，動物罹患內毒血症且HMGB1將在血清中在8小時時偵測到且在LPS之後16至32小時達到峰值及平台含量。若未處理，則小鼠將在24小時內開始死亡。在當前研究中，吾人在LPS注射之後監測小鼠4天。存活/死亡率比較LPS+丁酸鈉(SB; Aldrich, St. Louis, MO；批次號MKCG7272)、LPS+媒劑(0.5% CMC; Spectrum, New Brunswick, NJ；批次號1IJ0127)及LPS+UP360 (實例9中所製成之包含多醣及多酚之蘆薈基底組合物)。以下組包括於研究中： 表15. 處理組之細節
組 處理 劑量(mg/kg) N
G1 正常對照組 0 8
G2 媒劑對照組(0.5% CMC) 0 8
G3 丁酸鈉(SB) 500 8
G4 蘆薈基底組合物(UP360) 500 8
在此模型中，小鼠用實例9中所說明之UP360預處理一週(7天)，接著以25 mg/kg以及10 mL/kg PBS體積來致命劑量腹膜內注射LPS (大腸桿菌，055:B5; Sigma, St. Louis, MO；批次號081275)。每小時觀測動物。鑒於丁酸鈉經由抑制HMGB1釋放而改良小鼠中之LPS誘導之損傷之事實，吾人選擇此化合物作為吾人研究之陽性對照物(Li等人, 2018)。
實例 20 ： 蘆薈基底組合物 (UP360) 在致命劑量之毒素下提高動物存活率LPS之腹膜內注射後三小時，小鼠開始展示內毒血症之早期病徵。小鼠之探索性行為逐漸減少且伴隨有亂毛(豎毛)、活動性減少、嗜睡及腹瀉。儘管此等病徵及症狀似乎存在於所有處理組中，但嚴重程度在媒劑處理組中更明顯。
在LPS注射之後24小時發現來自媒劑處理組之兩隻小鼠及來自陽性對照丁酸鈉(SB)組之一隻小鼠死亡。如 表 16中所見，測定此等組之存活率且分別發現為62.5%及75%。用蘆薈基底組合物(UP360)處理之小鼠在LPS注射24小時之後具有100%存活率。在LPS注射之後34小時，對於用包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物、丁酸鈉(SB)及媒劑處理之小鼠，分別觀測到存活率為87.5%、62.5%及50%。蘆薈基底組合物(UP360)處理之小鼠的可能最顯著觀測結果在LPS注射之後48小時觀測到。在此時間點，經媒劑處理之小鼠存活率僅12.5%，而蘆薈基底組合物(UP360)處理之小鼠展示62.5%存活率。即使對於陽性對照組-SB，在此時間點亦有一半動物死亡。在第三天(LPS注射後72小時)，各組之存活率分別為UP360、丁酸鈉及媒劑62.5%、50%及12.5%。
媒劑對照組中之所有小鼠在LPS注射82小時之後死亡，使此組存活率為0%。另一方面，用蘆薈基底組合物(UP360)及陽性對照物丁酸鈉(SB)處理之小鼠展示62.5%及50%存活率且在LPS注射之後96小時及120小時保持相同。此等存活率對於蘆薈基底組合物(UP360)及陽性對照組均為統計學上顯著的 ( 表 16)。此等組中之存活動物在其健康方面展示漸進性改善。小鼠身體上表現變好且逐漸恢復展示正常行為。此等資料表明，包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物可能用作預防及/或干預膳食補充劑以克服在敗血症時細胞介素及HMGB1之突然上升。 表16：蘆薈基底組合物(UP360)提供LPS誘導之內毒血症及敗血症之62.5%存活率
組 N LPS 之後死亡數 存活率(%) P 值
24hr 32hr 34hr 48hr 58hr 72hr 82hr 總
對照組 8 0 0 0 0 0 0 0 0 100 -
媒劑 8 3 4 4 7 7 7 8 8 0 -
UP360 8 0 1 1 3 3 3 3 3 62.5 0.001315
丁酸鈉 8 2 3 3 4 4 4 4 4 50 0.014806
存活率計算為：100-[(死亡小鼠/小鼠總數)×100]%。
實例 21 ： 在 LPS 誘導之敗血症模型中蘆薈基底組合物 (UP360) 與其組分之比較在脂多醣(LPS)誘導之內毒血症中評價組合蘆薈、Poria及迷迭香酸(RA)以產生實例9中展現之包含特定比率之多醣及多酚的UP360之優點。在LPS注射之前，分別用150 mg/kg、300 mg/kg及50 mg/kg用於製造實例9中之UP360的蘆薈、Poria及迷迭香酸(RA)處理雄性CD-1小鼠(n=13)，持續7天。在第8天，小鼠腹膜內注射溶解於10 mL/kg PBS中之25 mg/kg LPS。UP360處理組中之小鼠接受500 mg/kg日劑量之UP360。在研究持續時間內，所有小鼠每天繼續接受各別處理。在腹膜內投與中值致命劑量LPS (25 mg/kg)之後，預期動物在數小時內罹患敗血症。若未處理，則小鼠將在24小時內開始死亡。每小時觀測動物。在當前研究中，吾人在LPS注射之後監測小鼠6天。存活率比較LPS+丁酸鈉(SB)、LPS+媒劑(0.5% CMC)、LPS+UP360、LPS+蘆薈、LPS+Poria及LPS+迷迭香酸。正常對照動物僅接受腹膜內PBS且僅管飼載體媒劑0.5% CMC。鑒於丁酸鈉(SB)經由抑制HMGB1釋放而改良小鼠中之LPS誘導之損傷之事實，吾人選擇此化合物作為吾人研究之陽性對照物(Li等人, 2018)。
包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物的存活率及死亡率與如出現在調配物中的彼等劑量之個別萃取物，結合使用考爾比氏方程式相比較，來找出潛在累加、拮抗或協同效應(Colby, 1967)。為摻合此等植物萃取物具有出人意料的協同作用，所觀測到之抑制需要大於計算值。
LPS腹膜內注射後數小時，小鼠開始展示敗血症之早期病徵。小鼠之探索性行為逐漸減少且伴隨有亂毛(豎毛)、活動性減少、嗜睡、腹瀉及顫抖且一些伴隨著眼瞼閉合。儘管此等病徵及症狀存在於所有處理組中，但嚴重程度在媒劑處理組中更嚴重。
如 表 17 、 18 及 19中所見，對於用蘆薈基底組合物(UP360)處理之小鼠，模型誘導後前36小時未觀測到死亡。用蘆薈基底組合物(UP360)處理產生前36小時100%存活率。另一方面， 表17：LPS誘導之敗血症中存活及死亡之時程
組 劑量 (mg/kg) N LPS 後的死亡動物數 死亡 存活 MR (%) SR (%) P 值
24 hpi 36 hpi 48 hpi 60 hpi 72 hpi 96 hpi 120hpi 144hpi               
對照組 0 13 0 0 0 0 0 0 0 0 0 13 0.0 100 0.000
媒劑 0 13 4 2 5 0 0 0 0 0 11 2 84.6 15.4 -
SB 500 13 2 4 1 1 0 1 0 0 9 4 69.2 30.8 0.27
UP360 500 13 0 0 2 0 1 1 0 0 4 9 30.8 69.2 0.001
蘆薈 150 13 2 2 4 1 0 0 0 1 10 3 76.9 23.1 0.35
Poria 300 13 1 2 3 1 0 0 0 0 7 6 53.9 46.2 0.06
RA 50 13 2 2 4 0 0 0 0 0 8 5 61.5 38.5 0.18
•存活率計算為：100-[(死亡小鼠/小鼠總數)×100]%。 RA-迷迭香酸。 表18：用蘆薈基底組合物UP360處理之LPS誘導之敗血症小鼠的存活率
組 存活率(%)
0hr 24hr 36hr 48hr 60hr 72hr 96hr 120hr 144hr
正常對照組 100 100 100 100 100 100 100 100 100
媒劑 100 69.2 53.8 15.4 15.4 15.4 15.4 15.4 15.4
丁酸鈉500 mg/kg 100 84.6 53.8 46.2 38.5 38.5 30.8 30.8 30.8
UP360 500 mg/kg 100 100.0 100.0 84.6 84.6 76.9 69.2 69.2 69.2
蘆薈150 mg/kg 100 84.6 69.2 38.5 30.8 30.8 30.8 30.8 23.1
Poria 300 mg/kg 100 92.3 76.9 53.8 46.2 46.2 46.2 46.2 46.2
RA 50 mg/kg 100 84.6 69.2 38.5 38.5 38.5 38.5 38.5 38.5
•存活率計算為：100-[(死亡小鼠/小鼠總數)×100]%。 RA-迷迭香酸 表19：用蘆薈基底組合物UP360處理之LPS誘導之敗血症小鼠的死亡率
組 死亡率(%)
0hr 24hr 36hr 48hr 60hr 72hr 96hr 120hr 144hr
正常對照組 0 0 0 0 0 0 0 0 0
媒劑 0.0 30.8 46.2 84.6 84.6 84.6 84.6 84.6 84.6
丁酸鈉500 mg/kg 0.0 15.4 46.2 53.8 61.5 61.5 69.2 69.2 69.2
UP360 500 mg/kg 0.0 0.0 0.0 15.4 15.4 23.1 30.8 30.8 30.8
蘆薈150 mg/kg 0.0 15.4 30.8 61.5 69.2 69.2 69.2 69.2 76.9
Poria 300 mg/kg 0.0 7.7 23.1 46.2 53.8 53.8 53.8 53.8 53.8
RA 50 mg/kg 0.0 15.4 30.8 61.5 61.5 61.5 61.5 61.5 61.5
•死亡率計算為：100-存活率。RA-迷迭香酸
諸如蘆薈、Poria及迷迭香酸之組分處理之小鼠分別經歷69.2%、76.9%及69.2%存活率。在此時間範圍(注射後36小時-hpi)中，媒劑組展示53.8%存活率。各組之最高死亡率在LPS後第2天(48hpi)觀測到。
在LPS 48小時後觀測到蘆薈、Poria及迷迭香酸處理之小鼠之死亡率分別為61.5%、46.2%及61.5%。蘆薈基底組合物(UP360)組中之小鼠僅經歷15.4%死亡率。在LPS後48小時媒劑處理之小鼠展示84.6%死亡率，且在研究階段之其餘時間保持相同。在第三天(LPS注射後72小時)，處理組之存活率對於蘆薈組合物(UP360)、蘆薈、Poria及迷迭香酸分別為76.9%、30.8%、46.2%及38.5%。陽性對照組在此時間範圍內展示38.5%存活率。
在第6天結束(144hpi)時，蘆薈基底組合物(UP360)展示69.2%存活率，而蘆薈、Poria及RA組中之小鼠分別展示23.1%、46.2%及38.5%存活率 ( 表 17 、 18 、 19)。與媒劑處理組相比，蘆薈基底組合物所觀測到的存活率在統計學上顯著提高。SB組研究結束時存活率為30.8%。該等組中之存活動物在其健康方面展示漸進性改善。小鼠身體上表現變好且逐漸恢復展示正常探索性行為。
實例 22 ： 包含多醣及多酚之蘆薈基底組合物 (UP360) 觀測到的降低死亡率之出人意料的協同作用此LPS誘導之存活研究用以使用考爾比氏方法評價來自蘆薈、Poria及迷迭香酸(RA)之萃取物當以特定比率調配在一起時的可能的協同作用或出人意料的作用。當小鼠以500 mg/kg之劑量給與蘆薈基底組合物(UP360)組合物時，各分析時間點死亡率低於理論上計算的預期值( 表 20)。舉例而言，LPS注射後24小時及60小時之預期死亡率分別為33.9%及94.5%，而蘆薈基底組合物(UP360)之實際觀測死亡率分別為0%及15.4%。此等發現表明，對於在敗血症時延長研究個體之壽命，以3:6:1之特定比率調配此等三種來自蘆薈、poria及RA之標準化萃取物具有比單獨使用蘆薈、Poria或RA萃取物大得多的益處。 表20：蘆薈基底組合物UP360觀測到的降低死亡率之出人意料的協同作用
LPS 後的小時數 死亡率(%)
X Y Z 預期 觀測 (UP360)
24 15.4 7.7 15.4 33.9 0
36 30.8 23.1 30.8 63.2 0
48 61.5 46.2 61.5 92 15.4
60 69.2 53.9 61.5 94.5 15.4
72 69.2 53.9 61.5 94.5 23.1
96 69.2 53.9 61.5 94.5 30.8
120 69.2 53.9 61.5 94.5 30.8
144 76.9 53.9 61.5 95.9 30.8
X=蘆薈，Y=Poria，Z=迷迭香酸；預期死亡率之考爾比氏方程式： (X+Y+Z) - (XY+XZ+YZ/100) + XYZ/10000
預期在觀測期結束時95.9%研究個體死亡，而蘆薈基底組合物(UP360)的實際死亡率發現為30.8%。
按此，此LPS誘導之存活研究中使用考爾比氏方程式評價及確認組合蘆薈、Poria及RA萃取物之優點。在此方法中，若某終點量測之觀測值大於假設計算之預期值，則假定具有兩種或更多種材料之調配物具有出人意料的協同作用。在LPS注射之後24、36、48、60、72、96、120及144小時此等藥用植物之死亡率值用於確定計算之功效值，且與指定時間點蘆薈基底組合物(UP360)的觀測死亡率值相比。在本發明研究中，吾人發現蘆薈、Poria及RA萃取物之組合得到的出人意料的協同作用。與單獨給與之萃取物相比，蘆薈基底組合物(UP360)處理之有益作用超出死亡率之預期結果。在觀測期結束時，對於蘆薈基底組合物(UP360)，存在30.8%死亡率，而對於各蘆薈、Poria及RA萃取物處理組分別存在76.9%、53.9%及61.5%死亡率，表明包含多醣及多酚之此等植物萃取物在保護細胞介素風暴且因此在敗血症時降低患者之死亡率中之出人意料的協同活性 ( 表 20)。
實例 23 ： 蘆薈基底組合物 (UP360) 緩和大鼠中脂多醣 (LPS) 誘導之急性發炎性肺損傷 - 作為外源性攻擊觸發反應 - 的功效研究經設計以評價以500 mg/kg及250 mg/kg經口投與之實例9中製造之蘆薈基底組合物(UP360)在緩解LPS誘導之急性肺損傷中的直接影響。急性肺損傷為以肺泡上皮細胞及毛細管內皮細胞損傷為特徵之臨床症候群，其造成如急性呼吸窘迫症候群(ARDS)中所見之彌漫性肺損傷。在此研究中，吾人用測試材料經口處理大鼠持續7天，隨後用LPS誘導模型。在第8天，經口處理後一小時，以溶解於0.1 mL/100 g PBS中的10 mg/kg LPS氣管內(i.t.)滴注至各大鼠。正常對照大鼠僅接受相同體積i.t. PBS。 表21. 研究組
組 處理 劑量(mg/kg) N
G1 正常對照組 0 7
G2 媒劑對照組 0 10
G3 丁酸鈉 500 10
G4 UP360 -高劑量 500 10
G5 UP360-低劑量 250 10
已知LPS誘導全身性及肺部反應，引起促炎性細胞，包括嗜中性白血球及巨噬細胞，及促炎性細胞介素，諸如IL-1、IL-8、IL-6、MIP-2/CINC-3及TNF-α積聚。此引起肺間質及肺泡水腫及上皮細胞損傷，其中HMGB1由巨噬細胞及單核球主動分泌及/或被動地自壞死細胞釋放。
吾人在大鼠氣管內LPS投與之後24小時處死存活動物。屍體剖檢時，藉由向右葉內氣管內注射1.5 mL PBS，接著平緩抽吸至少3次，進行支氣管肺泡灌洗液(BAL)收集。混合回收流體，在4℃下以1500 rpm離心10分鐘，且用於量測細胞介素(例如IL-6)及肺蛋白質含量。自各大鼠此同一右葉收集以進行組織均質化，用於MIP-2/CINC-3蛋白質分析。左葉用福馬林固定且提交Nationwide Histology以供認證病理學家分析，以進行組織病理學評價。在屍體剖檢時收集之血清用於量測細胞介素，諸如TNF-α及IL-1β。在10 mg/kg下氣管內滴注LPS之後，所有動物在挑戰後存活24小時。此處，吾人已彙集咸信涉及急性肺部感染之病理學的關鍵細胞介素及化學吸引因子及來自以下實例中之組織病理學分析的資料。
實例 24 ： 蘆薈基底組合物 (UP360) 展示血清 TNF- α 之劑量相關統計學上顯著減少來自實例23之未稀釋大鼠血清中TNF-α之存在使用來自R&D Systems之大鼠TNF-α Quantikine ELISA套組(產品編號：RTA00)如下量測：將未稀釋血清添加至用TNF-α抗體塗佈之微量盤中。在室溫下2小時之後，血清中之TNF-α結合於盤且將盤充分洗滌。將酶結合之TNF-α抗體添加至盤中且使其在室溫下結合2小時。重複洗滌，且將酶受質添加至盤中。在室溫下發展30分鐘後，添加停止溶液，且在450 nm下讀取吸光度。基於TNF-α標準曲線之吸光度讀數計算TNF-α之濃度。
如 表 22中所見，對於經媒劑處理之用LPS挑戰之大鼠，觀測到血清TNF-α中之統計學上顯著之上升。當用包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物處理大鼠時，此增加顯著減少。對於用經口500 mg/kg及250 mg/kg蘆薈基底組合物(UP360)處理之大鼠，觀測到統計學上顯著及劑量相關減少。血清TNF-α含量之此等減少相對於媒劑對照組計算，且500 mg/kg及250 mg/kg蘆薈基底組合物(UP360)處理組分別發現為91.9%及73.6%。陽性對照物丁酸鈉(SB)展示血清TNF-α含量之統計學上顯著(67.9%)降低。 表22：蘆薈基底組合物(UP360)對血清TNF-α含量之影響.
組 劑量(mg/kg) N 平均值±SD (pg/mL) p 值
正常對照組 0 7 -1.27 ± 0.93 0.000001
媒劑對照組 0 10 10.43 ± 2.48 -
丁酸鈉 500 10 3.35 ± 1.73 0.000001
UP360 500 10 0.85 ± 1.08 0.000001
UP360 250 10 2.75 ± 1.22 0.000001
實例 25 ： 蘆薈基底組合物 (UP360) 展示血清 IL-1β 之劑量相關統計學上顯著減少來自實例23之未稀釋大鼠血清中IL-1β之存在使用來自R&D Systems之大鼠IL-1β Quantikine ELISA套組(產品編號：RLB00)如下量測：將未稀釋血清添加至用IL-1β抗體塗佈之微量盤中。在室溫下2小時之後，血清中之IL-1β結合於盤且將盤充分洗滌。將酶結合之IL-1β抗體添加至盤中且使其在室溫下結合2小時。重複洗滌，且將酶受質添加至盤中。在室溫下發展30分鐘後，添加停止溶液，且在450 nm下讀取吸光度。基於IL-1β標準曲線之吸光度讀數計算IL-1β之濃度。
此處同樣，用包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物處理的大鼠觀測到IL-1β之劑量相關及統計學上顯著之減少。對於用媒劑處理之LPS誘導之急性肺損傷大鼠，觀測到IL-1β血清含量之統計學上顯著增加。以500 mg/kg及250 mg/kg之經口劑量投與時用蘆薈基底組合物(UP360)處理之大鼠分別展示IL-1β含量降低80.0%及63.0% ( 表 23)。丁酸鈉(SB)組展示血清IL-1β減少65.3%。蘆薈基底組合物(UP360)及丁酸鈉(SB)組所展現之血清IL-1β減少均在統計學上顯著 表23：蘆薈基底組合物(UP360)對血清IL-1β含量之影響.
組 劑量(mg/kg) N 平均值±SD (pg/mL) p 值
正常對照組 0 7 -0.14 ± 4.20 0.000001
媒劑對照組 0 10 65.09 ± 13.24 -
丁酸鈉 500 10 22.58 ± 9.46 0.000001
UP360 500 10 13.01 ± 4.79 0.000001
UP360 250 10 24.07 ± 7.74 0.000001
實例 26 ： 蘆薈基底組合物 (UP360) 展示支氣管肺泡灌洗液 (BAL) 中劑量相關及統計學上顯著之 IL-6 含量降低來自實例23之未稀釋大鼠支氣管肺泡灌洗液(BAL)中IL-6之存在使用來自R&D Systems之大鼠IL-6 Quantikine ELISA套組(產品編號：R6000B)如下量測：將未稀釋BAL添加至用IL-6抗體塗佈之微量盤中。在室溫下2小時之後，BAL中之IL-6結合於盤且將盤充分洗滌。將酶結合之IL-6抗體添加至盤中且使其在室溫下結合2小時。重複洗滌，且將酶受質添加至盤中。在室溫下發展30分鐘後，添加停止溶液，且在450 nm下讀取吸光度。基於IL-6標準曲線之吸光度讀數計算IL-6之濃度。
與以上TNF-α及IL-1β資料一致，蘆薈基底組合物(實例9中製造之UP360)展示BAL IL-6含量之劑量相關統計學上顯著降低。較高劑量(500 mg/kg)引起BAL IL-6含量降低82.0%，而較低劑量(250 mg/kg)展示BAL IL-6含量降低51.0% ( 表 24)。當與媒劑處理之急性肺損傷大鼠相比時，高劑量下包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物的降低為統計學上顯著的。對於低劑量之蘆薈基底組合物(UP360)亦觀測到強趨勢(亦即p=0.087)。相對於媒劑處理之疾病模型，丁酸鈉(SB)組展示在統計上非顯著的BAL IL-6 37.7%減少。 表24：蘆薈基底組合物(UP360)對BAL IL-6含量之影響.
組 劑量(mg/kg) N 平均值±SD (pg/mL) p 值
正常對照組 0 7 66.41 ± 4.86 0.000001
媒劑對照組 0 10 3103.95 ± 3057.13 -
丁酸鈉 500 10 1933.30 ± 1744.23 0.27
UP360 500 10 558.94 ± 354.88 0.0005
UP360 250 10 1522.03 ± 1407.62 0.087
實例 27 ： 蘆薈基底組合物 (UP360) 處理產生 CINC-3 之統計學上顯著減少CINC-3/巨噬細胞發炎蛋白2 (MIP-2)屬於稱為趨化因子之趨化性細胞介素家族。MIP-2屬於CXC趨化因子家族，被命名為CXCL2且經由CXCR1與CXCR2之結合起作用。其主要由巨噬細胞、單核球及上皮細胞產生且負責發炎源及嗜中性白血球活化趨化性。
將50 µL來自實例23之各大鼠肺部勻漿樣品(媒劑，丁酸鈉(SB)，UP360低劑量，UP360高劑量10個/組，對照組7個/組)及50 µL分析稀釋緩衝液添加至用單株CINC-3抗體塗佈之96孔微量盤之孔中，且使其結合2小時。盤經歷5次洗滌，隨後添加酶聯多株CINC-3且使其結合2小時。再洗滌孔5次，隨後將受質溶液添加至孔中，且使酶反應在室溫下避光進行30分鐘。酶反應產生經由添加停止溶液而變成黃色之藍色染料。在450 nm下讀取各孔之吸光度(伴隨580 nm校正)且與CINC-3之標準曲線進行比較，以估計各大鼠肺部勻漿樣品中CINC-3之量。
500 mg/kg之包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物(實例9中製造之UP360)的一週每日經口處理，引起LPS誘導之急性肺損傷中之細胞介素誘導之嗜中性白血球化學吸引因子的統計學上顯著減少 ( 表 25)。僅氣管內接受PBS之正常對照大鼠中CINC-3之含量接近零。相比之下，經載體媒劑處理之氣管內LPS誘導之急性肺損傷大鼠展示563.7±172.9 pg/mL的CINC-3之平均肺部勻漿含量。對於500 mg/kg蘆薈基底組合物(UP360)處理之大鼠，此含量降低至280.92±137.84 pg/mL之平均值。當與媒劑處理之疾病模型相比時，用500 mg/kg蘆薈基底組合物(UP360)處理之大鼠的CINC-3含量之此50.2%降低為統計學上顯著的。與媒劑對照組相比，較低劑量之蘆薈基底組合物(UP360)產生CINC3含量之中度(亦即27.6%)減少。相比於媒劑處理之大鼠，丁酸鈉(SB)組僅具有肺部勻漿CINC-3含量之較小(亦即17.7%)減少。 表25：蘆薈基底組合物(UP360)對肺部勻漿MIP-2/CINC-3活性水準之影響.
組 劑量(mg/kg) N 平均值±SD (pg/mL) p 值
正常對照組 0 7 -4.21 ± 2.38 0.0000
媒劑對照組 0 10 563.71 ± 194.81 -
丁酸鈉 500 10 464.00 ± 220.32 0.2980
UP360 500 10 280.92 ± 137.84 0.0020
UP360 250 10 408.29 ± 209.20 0.1028
實例 28 ： 蘆薈基底組合物 (UP360) 減少支氣管肺泡灌洗液 (BAL) 中之總蛋白質來自實例23之支氣管肺泡灌洗(BAL)樣品中總蛋白質的量使用來自ThermoFisher Scientific之Pierce BCA蛋白質分析套組(產品編號：23225)如下量測：將BAL 1:5稀釋，於微量盤中與二喹啉甲酸(BCA)試劑混合，且在37℃下培育30分鐘。在580 nm下讀取吸光度，且基於牛血清白蛋白標準曲線之吸光度讀數計算BAL中之蛋白質濃度。
相較於正常對照大鼠，用媒劑處理之LPS誘導之急性肺損傷大鼠中可見來自BAL之肺總蛋白質含量增加3倍。當相比於經媒劑處理之LPS誘導之急性肺損傷大鼠時，用500 mg/kg及250 mg/kg之包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物(實例9中製造之UP360)每日經口處理大鼠一週，引起BAL總蛋白質之含量分別減少40.1% (p=0.12相對於媒劑)及38.3% (p=0.17) ( 表 26)。相對於經媒劑處理之LPS誘導之急性肺損傷大鼠，陽性對照丁酸鈉(SB)組BAL總蛋白質含量降低30.2% (p=0.27)。 表26：蘆薈基底組合物(UP360)對BAL蛋白質含量之影響.
組 劑量(mg/kg) N 平均值±SD (µg/mL) p 值
正常對照組 0 7 1488.88 ± 322.01 0.00367209
媒劑對照組 0 10 4214.86 ± 3311.32 -
丁酸鈉 500 10 2940.14 ± 2092.32 0.265745965
UP360 500 10 2526.23 ± 1497.78 0.124589339
UP360 250 10 2599.89 ± 691.39 0.168377963
實例 29 ： 蘆薈基底組合物 (UP360) 展示支氣管肺泡灌洗液 (BAL) 中 C 反應蛋白統計學上顯著之減少1:1,000稀釋之大鼠BAL中C反應蛋白(CRP)的存在使用來自Abcam之C反應蛋白(PTX1)大鼠ELISA套組(產品編號：ab108827)如下量測：將1:1,000稀釋之BAL添加至塗佈有CRP抗體之微量盤中。在室溫下在盤振盪器上2小時之後，BAL中之CRP結合於盤且將盤充分洗滌。將經生物素標記之C反應蛋白抗體添加至盤中且使其在室溫下在盤振盪器上結合1小時。重複洗滌，且向盤中添加抗生蛋白鏈菌素-過氧化酶結合物。在室溫下培育30分鐘之後，重複洗滌，且添加色素原受質。在室溫下發展10分鐘後，添加停止溶液，且在450 nm下讀取吸光度。基於CRP標準曲線之吸光度讀數計算CRP之濃度。
相較於正常對照大鼠，用媒劑處理之LPS誘導之急性肺損傷大鼠中觀測到BAL CRP含量統計學上顯著之5.6倍增加。相對於經媒劑處理之疾病模型，用500 mg/kg之實例9中製造之包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物經口處理大鼠一週，使BAL CRP含量降低38.2% (p=0.06) (表27)。相較於媒劑處理之患病大鼠，陽性對照丁酸鈉(SB)及低劑量UP360組引起極小CRP含量變化。 表27：蘆薈基底組合物(UP360)對BAL CRP含量之影響
組 劑量(mg/kg) N 平均值±SD (pg/mL) p 值
正常對照組 0 7 4344.5 ± 3321.6 0.0002
媒劑對照組 0 10 24302.8 ± 8826.1 -
丁酸鈉 500 10 20093.5 ± 8826.1 0.35
UP360 500 10 15012.0 ± 9274.3 0.06
UP360 250 10 20999.6 ± 6421.2 0.42
實例 30 ： 蘆薈基底組合物 (UP360) 展示支氣管肺泡灌洗液中 IL-10 統計學上顯著之減少來自實例23之未稀釋支氣管肺泡灌洗(BAL)樣品中IL-10之存在使用來自R&D Systems之大鼠IL-10 Quantikine ELISA套組(產品編號：R1000)如下量測：將未稀釋BAL添加至用IL-10抗體塗佈之微量盤中。在室溫下2小時之後，血清中之IL-10結合於盤且將盤充分洗滌。將酶結合之IL-10抗體添加至盤中且使其在室溫下結合2小時。重複洗滌，且將酶受質添加至盤中。在室溫下發展30分鐘後，添加停止溶液，且在450 nm下讀取吸光度。基於IL-10標準曲線之吸光度讀數計算IL-10之濃度。
量測誘導前用500 mg/kg及250 mg/kg之包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物(實例9中製造之UP360)每日經口處理7天之後，氣管內滴注LPS後24小時處死之患病大鼠之BAL中的消炎IL-10含量。通常，IL-10之含量對應於在感染或損傷時感染嚴重程度及宿主之發炎反應需求。如 表 28中所見，媒劑處理大鼠之IL-10含量發現顯著增加(亦即與正常對照大鼠相比80倍)，表明急性肺損傷之較高嚴重程度。相比之下，包含多醣及多酚且在一些情況下由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物(UP360)組中的大鼠展示BAL中IL-10之劑量相關減少。分別對於500 mg/kg及250 mg/kg蘆薈基底組合物(UP360)計算此等減少且測定為73.2%及41.0%。高劑量(500 mg/kg)蘆薈基底組合物(UP360)的減少係統計學上顯著的，p≤0.05。至少對於此特定模型，作為蘆薈基底組合物(UP360)處理之結果的消炎細胞介素之減少可藉由歸因於疾病嚴重程度減輕，可存在宿主發炎反應之抑制作用來解釋。強化此假設，包含多醣及多酚且在一些情況下由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物(UP360)引起發炎性細胞介素，諸如IL-1β、IL-6及TNF-α統計學上顯著之減少，引起強烈發炎反應，使得對於消炎細胞介素，諸如IL-10的需求對於宿主而言不太重要。實際上，正常對照組之IL-10含量幾乎為零，表明消炎細胞介素之誘導係基於急性肺損傷之存在及/或嚴重程度。 表28：蘆薈基底組合物(UP360)對BAL IL-10含量之影響
組 劑量(mg/kg) N 平均值±SD (pg/mL) p 值
正常對照組 0 7 2.63 ± 8.35 0.004
媒劑對照組 0 10 207.77 ± 171.33 -
丁酸鈉 500 10 154.84 ± 159.63 0.48
UP360 500 10 55.64 ± 40.53 0.02
UP360 250 10 122.6 ± 83.76 0.18
實例 31. 蘆薈基底組合物 (UP360) 降低肺水腫及整體肺損傷嚴重程度實例23中由於氣管內LPS之肺損傷的嚴重程度使用H&E染色肺組織評估。肺之左葉用於組織病理學分析。如下文 表 29 及圖 2中所見，媒劑處理組中之大鼠展示肺損傷(3.5倍增加)、肺水腫(2.5倍增加)及多形核(PMN/PMC)細胞浸潤(2.4倍增加)之嚴重程度之統計學上顯著增加。與媒劑處理之LPS誘導之急性肺損傷大鼠相比，用500 mg/kg高劑量之蘆薈基底組合物(實例9中製造之UP360)每日經口處理大鼠一週引起整體肺損傷嚴重程度之統計學上顯著37.9%降低 ( 表 29 ，圖 2)。類似地，當相比於媒劑處理之大鼠時，高劑量之蘆薈基底組合物(UP360)觀測到肺水腫較強的統計學上顯著之減少(37%減少)。亦觀測到用高劑量之包含多醣及多酚且在一些情況下由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物(UP360)處理之大鼠的PMN浸潤減少的正面趨勢。相對於經媒劑處理之患病大鼠，陽性對照丁酸鈉(SB)組引起極小組織病理學評價變化。 表29：來自大鼠中急性肺損傷之蘆薈基底組合物(UP360)的組織病理學資料
組 劑量(mg/kg) N 整體肺組織嚴重程度 a 肺水腫 b PMC 之浸潤 c
正常對照組 0 7 0.93 ± 0.49*** 1.21 ± 0.52*** 1.14 ± 0.58**
媒劑 0 9 3.22 ± 0.58 3.00 ± 0.67 2.72 ± 0.82
SB 500 10 3.05 ± 0.42 2.35 ± 0.95 2.75 ± 0.78
UP360 500 9 2.00 ± 0.94* 1.89 ± 0.57** 2.06 ± 0.83
UP360 250 10 3.30 ± 0.60 2.75 ± 0.75 3.30 ± 0.60
*P ≤0.05 ；**P ≤0.001 ；***P ≤0.00001 ；SB- 丁酸鈉 ；PMN- 多形核細胞 a 整體嚴重程度 ： 正常、極小- 輕微、中度、重度、極重度、局灶(Focal) 、中度局灶(m-focal) 、局部(regional) 、局部極度聚集(reg. ext coalesing) 、彌漫性、評分0-4 。 b 急性滲出性變化 ：肺泡(alv) 、 肺 管(duct) 及支氣管(bronch) 、 肺泡 壁及 間質 水腫 (Int edema) 、充血、 血管周 出血(hemorrhage perivasc) 、 肺泡囊(alv sac) 、水腫、纖維性滲出物(fibr exud) 、 肺泡囊 出血(hemorr alv sac) 、 肺泡 管變厚 管透明質酸酶 膜I 型缺失(alv duct thicken dt Hyal membrane type I loss) 、凋亡細胞、特定參數評分0 至4 。 c 發炎性浸潤性階段 ： 中性(Neutr) 、 其他多晶型物MNC 主要 組織細胞(histiocyt) 及巨噬細胞、支氣管相關淋巴組織 (BALT) 肺泡(BALT alv) 、間質性、 肺泡 管、細支氣管彌漫性、斑狀細胞凝集(patch cellular consol) 、特定參數評分0 至4 。
實例 32 ： D- 半乳糖 誘導之加速免疫老化模型作為內源性及外源性攻擊觸發反應全身性投與D-半乳糖在挑戰時誘發加速的影響免疫反應之與衰老小鼠類似的免疫細胞老化。假定此等現象模擬老年人之免疫反應概況。在此實驗老化之小鼠模型中測試包含多醣及多酚之新穎考慮之主題(實例9中製造之UP360)以展現其免疫刺激作用。購買目的育種CD-1小鼠(12週齡)且適應環境2週之後用於加速衰老研究。將小鼠隨機分配至4個免疫接種組及3個非免疫接種組。免疫接種組包括G1=正常對照物+媒劑(0.5% CMC)，G2=D-半乳糖+媒劑，G3=D-半乳糖+UP360 400 mg/kg且G4=D-半乳糖+UP360 200 mg/kg。非免疫接種處理組包括G1=正常對照物+媒劑(0.5% CMC)，G2=D-半乳糖+媒劑，且G3=D-半乳糖+UP360 400 mg/kg。免疫接種組各處理組中分配10隻動物，而非免疫接種組各組中包括八隻動物。
每日向小鼠皮下注射500 mg/kg之D-半乳糖，持續9週，以誘導老化。在誘導之第4週，開始用2次經口劑量之懸浮於0.5% CMC中之UP360 (200 mg/kg-低劑量及400 mg/kg-高劑量)開始處理。包括400 mg/kg UP360之額外一組用作非免疫接種小鼠之對照組。在第7週，除非免疫接種組中之小鼠外，各小鼠肌肉內注射3 μg四價夫拉瑞絲(Fluarix quadrivalent) (來自GSK之2020-2021年流感季節疫苗。其含有60 μg血球凝集素-HA/0.5 mL單人劑量。疫苗經調配以含有15 μg之4種流感病毒株，諸如H1N1、H3N2、B-維多利亞(Victoria)譜系及B-山形(Yamagata)譜系中之每一者)，以單次劑量免疫接種。
在第4週至第9週之持續時間內進行包含多醣及多酚且在一些情況下由多醣及多酚組成之UP360之每日經口管飼。屍體剖檢時(亦即免疫接種之後14天)，收集全血(1 mL)且等分-110 μL用於流式細胞量測術免疫性小組(在冰上送至Flow Contract Site Laboratory, Bothell, WA)，自剩餘血液分離血清(約400 μL血清產量)用於抗體ELISA及酶分析(Unigen, Tacoma WA)，且60 μL在兩個試管中經由Fedex隔夜運送至Sirona DX, Portland, OR用於細胞介素分析。量測各動物之胸腺及脾臟之重量以測定胸腺及脾臟指數。自各組獲得胸腺及脾臟之代表性影像。在屍體剖檢時將脾臟保持在乾冰上且轉移至-80℃以供未來使用。將多聚甲醛及蔗糖固定之胸腺送至Nationwide histology進行老化相關β-半乳糖苷酶染色及分析。
實例 33 ： UP360 產生胸腺指數統計學上顯著之增加向小鼠中反覆皮下投與D-半乳糖產生不良免疫反應，類似於正常老化過程中發生之變化。胸腺係最重要免疫器官之一，其將受長期暴露於D-gal影響。胸腺指數為身體免疫功能之強度之良好指示標誌。較高胸腺指數對應於較強非特異性免疫反應。在免疫接種小鼠中，用媒劑處理之D-gal小鼠與正常對照小鼠相比展示胸腺指數顯著降低(54.5%)。此胸腺指數之降低由兩種劑量之包含多醣及多酚之UP360逆轉。當相比於媒劑處理之D-gal組時，用UP360經口以400 mg/kg及200 mg/kg處理之小鼠分別展示52.9%及50.6%之胸腺指數提高。對於UP360之兩種劑量，此逆轉相比於媒劑處理之D-gal小鼠為統計學上顯著的。類似地，用UP360以400 mg/kg處理之非免疫接種小鼠亦展示胸腺指數之統計學上顯著提高。當相比於媒劑處理之D-gal小鼠時，此增加發現為26.9%。在此研究中觀測到不管免疫接種狀態如何，UP360補充似乎均保護小鼠免於年齡相關之胸腺退化。 表30：胸腺保護之活體內處理組
組 胸腺指數
免疫接種 非免疫接種
平均值±Sd P 值 平均值±Sd P 值
正常對照組 + 媒劑 1.764 ± 0.389 0.00001 1.830 ± 0.535 0.00001
D-Gal. 500 mg/kg + 媒劑 0.803 ± 0.279 - 0.980 ± 0.150 -
D.gal + UP360 400 mg/kg 1.702 ± 0.347 0.00001 1.341 ± 0.200 0.002
D.gal + UP360 200 mg/kg 1.623 ± 0.297 0.00001 - -
實例 34 ： UP360 補充展示恢復健康脾臟指數之趨勢脾臟為免疫系統中之另一重要器官，因此其指數對於健康免疫功能至關重要。注射500 mg/kg之D-半乳糖在吾人之研究中產生統計學上顯著之25.4%免疫接種小鼠之脾臟指數降低。非免疫接種小鼠展示脾臟指數下降16.3%。
對於免疫接種及非免疫接種組中以400 mg/kg及免疫接種組中以200 mg/kg用UP360經口處理之小鼠，觀測到脾臟指數之極小至中等增加。雖然此等改善未能達到統計顯著性，但UP360處理展示抑制組織萎縮之趨勢，如由脾臟指數之增加證明。 表31：脾臟保護之活體內處理組
組 脾臟指數
免疫接種 非免疫接種
平均值±Sd P 值 平均值±Sd P 值
正常對照組 + 媒劑 3.473 ± 0.877 0.015 3.186 ± 0.726 0.104
D-Gal. 500mg/kg + 媒劑 2.586 ± 0.458 - 2.671 ± 0.292 -
D.gal + UP360 400mg/kg 2.624 ± 0.413 0.852 2.800 ± 0.488 0.560
D.gal + UP360 200mg/kg 2.761 ± 0.399 0.399 - -
實例 35 ： UP360 補充保護小鼠免於年齡相關之胸腺退化在屍體剖檢時，自各小鼠剝離胸腺且在預冷卻之多聚甲醛中固定24小時，隨後將其轉移至30%蔗糖溶液，再持續24小時。固定組織隨後在液氮中速凍且封裝在乾冰中運送至Nationwide histology以進行分析。將組織在低溫保護劑中快速冷凍且以10微米厚度切片置於Superfrost Plus載片上。隨後在PBS中沖洗組織且遵循來自Cell Signaling Technologies之β-半乳糖苷酶染色套組的方案。添加淺曙紅對比染色劑以對比，且用非水性封固劑封固載片。老化細胞隨後分象限計數以測定陽性細胞之總百分比。使用具有操作cellSens Standard 1.9軟體之Olympus DP26攝影機的Olympus BH2, Nikon Eclipse 800顯微鏡進行細胞計數及成像。
SA-β-Gal染色偵測各胸腺中之老化細胞以評價包含多醣及多酚之UP360之免疫器官保護作用。發現SA-β-Gal陽性細胞染藍色(表現高度衰老特異性β-半乳糖苷酶)且隨機分散於整個皮質及髓質中。針對較低劑量之UP360胸腺組織學觀測到之變化與胸腺指數資料一致。如表32中所見，用UP360 (200 mg/kg)處理之免疫接種小鼠在與媒劑處理之D-gal小鼠相比時展示老化細胞之比例統計學上顯著之減少。此等發現進一步證實包含多醣及多酚之新穎組合物UP360之免疫細胞及/或器官保護能力。當相比於正常對照小鼠時，皮下投與D-gal產生157.8%的老化細胞增加，而用UP360以200 mg/kg處理之小鼠相比於媒劑處理之D-gal小鼠展示老化細胞減少42.7%。 表32：老化細胞變化之活體內處理組
組 SA-β -gal 陽性細胞 (%)
平均值 SD p 值
對照組 8.92 3.16 0.005
D-gal對照組 23.00 11.40 …
D-gal+UP360低 13.17 7.99 0.035
實例 36 ： 蘆薈基底組合物 UP360 增加 D-gal 誘導之血清 IgA在研究結束時收集血清且評估體液免疫性之標記物，包括IgG。對於IgA抗體含量，免疫接種對照組與非免疫接種對照組無顯著差異。D-gal+200 mg/kg UP360組傾向於高於D-gal組(p=0.06)，而D-gal+400 mg/kg UP360組血清IgA比D-gal組顯著更高。 表 33 ：用UP360處理之D-gal誘導之小鼠血清中之IgA抗體
IgA 抗體 (μg/mL 血清) 非免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 49 +/- 12 - -
D-Gal 56 +/- 10 0.97 -
D-Gal + 400 mg/kg UP360 67 +/- 54 0.16 0.16
免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 48 +/- 20 - -
D-Gal 39 +/- 15 0.50 -
D-Gal + 200 mg/kg UP360 71 +/- 16 0.30 0.06
D-Gal + 400 mg/kg UP360 91 +/- 16 0.21 *0.03
*指示統計顯著性
實例 37 ： 蘆薈基底組合物 UP360 對 CD45+ 細胞 ( 白血球 ) 之影響在研究開始之後九週，收集全小鼠血液以評估一般白血球群體，且特定地免疫細胞亞群。使用兩種方法分析資料，對特定標記物呈陽性之細胞的百分比，及每μL血液之細胞(Alvarez DF) (Vera EJ)。因為經D-gal處理之小鼠具有高含量CD45+細胞(白血球)，所以報導研究結果為CD45+細胞之百分比相較於報導研究結果為每μL血液之細胞突出顯示不同之研究結果。兩種資料集均告知UP360作為免疫輔助劑之效能。 表34：全小鼠血液中之CD45+細胞白血球
全血中之CD45+淋巴球 (總細胞群體之% ) 非免疫 接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 86 +/- 6.0 - -   
D-Gal 89 +/- 4.7 0.62 -   
D-Gal + 400 mg/kg UP360 90 +/- 2.2 0.36 0.65   
免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal p 值 相對於非免疫接種
對照組 72 +/- 7.3 - - *0.04
D-Gal 92 +/- 3.5 *0.002 - 0.45
D-Gal + 200 mg/kg UP360 77 +/- 6.1 0.48 *0.004 N/A
D-Gal + 400 mg/kg UP360 85 +/- 4.4 *0.03 0.08 0.13
*指示統計顯著性
在自全血移除紅血球之後，使用7-胺基-放線菌素D區分活細胞及死細胞，且使用CD45標記白血球。 表 34展示來自各組之活細胞群體中CD45+細胞(白血球)之量。與非免疫接種對照組相比，免疫接種對照組白血球百分比顯著減少，潛在地表明其他細胞類型在流感疫苗接種後之擴增。相較於免疫接種對照組，D-gal組在每個活細胞群體血液中白血球百分比顯著較高，其在200 mg/kg UP360+D-gal組(UP360低)中減少至對照組含量。
實例 38 ： 蘆薈基底組合物對全血中之 CD3+ T 細胞 ( 淋巴球群體之 %) 的影響CD3+CD45+細胞為T細胞群體。表示為所有白血球(CD45+細胞)之百分比，吾人發現在流感疫苗接種之後兩週，與非免疫接種對照組相比，免疫接種對照動物中循環T細胞存在減少趨勢(p=0.07)。用400 mg/kg UP360+D-gal處理之免疫接種動物的循環T細胞百分比顯著高於D-gal組，指示包含多醣及多酚之UP360回應於流感疫苗接種而增加CD3+ T細胞擴增或分化。 表35：全小鼠血液中之CD3+ T細胞
全血中的CD3+ T細胞 (淋巴球群體之% ) 非免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 26 +/- 5.9 - -   
D-Gal 19 +/- 2.7 0.13 -   
D-Gal + 400 mg/kg UP360 21 +/- 0.8 0.25 0.28   
免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal p 值 相對於非免疫接種
對照組 17 +/- 2.3 - - 0.07
D-Gal 16 +/- 2.4 0.48 - 0.23
D-Gal + 200 mg/kg UP360 19 +/- 2.2 0.42 0.14 N/A
D-Gal + 400 mg/kg UP360 22 +/- 2.2 *0.048 *0.01 0.81
*指示統計顯著性
實例 39 ： 蘆薈基底組合物對全血中之 CD4+ 輔助 T 細胞 ( 淋巴球群體之 %) 的影響CD45+CD3+CD4+細胞為輔助T細胞，該等細胞識別抗原呈現細胞上之抗原且以細胞分裂及細胞介素分泌作出反應。表示為所有白血球(CD45+細胞)之百分比，吾人發現在流感疫苗接種之後兩週，用200及400 mg/kg UP360+D-gal處理之免疫接種動物的循環輔助T細胞百分比顯著高於D-gal組，指示包含多醣及多酚之UP360回應於流感疫苗接種而增加輔助T細胞擴增或分化。 表36：全小鼠血液中之CD3+CD4+輔助T細胞.
全血中之CD4+輔助T細胞 (淋巴球群體之% ) 非免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 17 +/- 4.1 - -   
D-Gal 13 +/- 1.8 0.25 -   
D-Gal + 400 mg/kg UP360 14 +/- 0.6 0.40 0.37   
免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal p 值 相對於非免疫接種
對照組 11 +/- 1.9 - - 0.12
D-Gal 10 +/- 1.7 0.37 - 0.11
D-Gal + 200 mg/kg UP360 12 +/- 1.7 0.59 0.14 N/A
D-Gal + 400 mg/kg UP360 14 +/- 1.4 0.09 *0.009 0.95
*指示統計顯著性
實例 40 ： 蘆薈基底組合物對全血中之 CD8+ 細胞毒性 T 細胞 ( 淋巴球群體之 %) 的影響CD45+CD3+CD8+細胞為細胞毒性T細胞，該等細胞對免疫挑戰以細胞分裂及促細胞凋亡酶分泌以殺滅受感染之細胞作出反應。表示為所有白血球(CD45+細胞)之百分比，吾人發現在流感疫苗接種之後兩週，用200及400 mg/kg UP360 + D-Gal處理之免疫接種動物傾向於循環細胞毒性T細胞百分比高於D-gal組，且免疫接種對照組及非免疫接種D-gal組中循環細胞毒性T細胞百分比顯著低於非免疫接種對照組。 表37：全小鼠血液中之CD3+CD8+細胞毒性T細胞.
全血中之CD8+細胞毒性T細胞 (淋巴球群體之% ) 非免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 8.6 +/- 2.0 - -   
D-Gal 5.1 +/- 0.8 *0.049 -   
D-Gal + 400 mg/kg UP360 6.1 +/- 0.6 0.12 0.22   
免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal p 值 相對於非免疫接種
對照組 4.7 +/- 0.6 - - *0.03
D-Gal 4.9 +/- 1.1 0.82 - 0.82
D-Gal + 200 mg/kg UP360 5.7 +/- 0.7 0.12 0.35 N/A
D-Gal + 400 mg/kg UP360 6.4 +/- 0.9 *0.04 0.13 0.68
*指示統計顯著性
實例 41 ： 蘆薈基底組合物對全血中之 NKp46+ 自然殺手細胞 ( 淋巴球群體之 %) 的影響吾人利用兩種不同自然殺手細胞標記物小鼠CD49b及NKp46來鑑別白血球群體中自然殺手細胞之百分比。自然殺手細胞涉及先天性免疫系統。當活化時，其分泌細胞介素及顆粒以募集免疫細胞且直接引起感染病原體之細胞的細胞死亡，因此其對於對病原體之即刻免疫反應為重要的且在全身性感染早期活躍。CD49b為特異性存在於大部分自然殺手細胞以及可為自然殺手T (NKT)細胞之T細胞子集上的整合素。NKp46為僅僅存在於自然殺手細胞上且不標記NKT細胞之自然細胞毒性受體。NKT及NK樣T細胞亦基於其CD3表現排除，因為NK一般為CD45+CD3-CD49b+NKp46+ (Goh W) (Narni-Mancinelli E)。表示為所有白血球(CD45+細胞)之百分比，吾人發現在流感疫苗接種之後兩週，在各組中之任一者中，CD3-CD49b+群體無顯著差異。然而，當吾人檢查CD3-NKp46+群體時，用D-gal處理之免疫接種動物具有比免疫接種對照組顯著更低百分比之自然殺手細胞，且免疫接種200及400 mg/kg UP360+D-gal處理組均具有比免疫接種D-gal組顯著更高百分比之循環自然殺手細胞。非免疫接種400 mg/kg UP360+D-gal組亦具有比非免疫接種D-gal組顯著更高百分比之循環自然殺手細胞。 表38：全小鼠血液中之CD3-NKp46+自然殺手細胞.
全血中之NKp46+自然殺手細胞(淋巴球群體之% ) 非免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 41 +/- 6.0 - -   
D-Gal 38 +/- 4.2 0.68 -   
D-Gal + 400 mg/kg UP360 51 +/- 6.0 0.11 *0.03   
免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal p 值 相對於非免疫接種
對照組 45 +/- 8.4 - - 0.51
D-Gal 27 +/- 7.8 *0.02 - 0.06
D-Gal + 200 mg/kg UP360 43 +/- 5.7 0.70 *0.02 N/A
D-Gal + 400 mg/kg UP360 42 +/- 3.0 0.65 *0.01 0.11
*指示統計顯著性
此等結果令人困惑，因為兩種自然殺手細胞標記物提供極不同的結果。自然殺手細胞標記物視小鼠品系而極大地變化。因為NKp46為大部分小鼠品系中對自然殺手細胞極具特異性之標記物，且CD49b可標記其他細胞類型，所以NKp46可為更可靠的。然而，相較於CD49b，CD45+細胞中NK細胞之百分比對於NKp46較高，其與末梢血液中之人類NK數目更相符(Angelo LS)。外周小鼠血液中之NK細胞可類似於人類，或其可與對於NKp46所偵測到的一樣高。
實例 42 ： 蘆薈基底組合物對全血中之 TCRγδ+ γ δ T 細胞 ( 淋巴球群體之 %) 的影響CD45+CD3+TCRγδ+細胞為γ δ T細胞，其為可具有多樣活性且影響先天性及後天性免疫反應之小T細胞群體。其定位於黏膜以引發對抗病原體之第一道防線且幫助建立後天性免疫反應。 表39：全小鼠血液中之CD3+TCRγδ+ γ δ T細胞
全血中之TCRγδ+ γ δ T細胞(淋巴球群體之% ) 非免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 0.39 +/- 0.08 - -   
D-Gal 0.26 +/- 0.05 0.09 -   
D-Gal + 400 mg/kg UP360 0.33 +/- 0.05 0.38 0.22   
免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal p 值 相對於非免疫接種
對照組 0.32 +/- 0.07 - - 0.34
D-Gal 0.28 +/- 0.05 0.48 - 0.69
D-Gal + 200 mg/kg UP360 0.39 +/- 0.06 0.25 *0.03 N/A
*指示統計顯著性
表示為所有T細胞(CD3+細胞)之百分比，吾人發現在流感疫苗接種之後兩週，用200 mg/kg UP360+D-gal處理之免疫接種動物的循環γ δ T細胞百分比顯著高於D-gal組，且400 mg/kg UP360+D-gal組的循環γ δ T細胞百分比傾向於高於D-gal。此可指示，包含多醣及多酚之UP360處理組能夠較佳地建立針對黏膜中遇到之病原體的免疫反應。
實例 43 ： 蘆薈基底組合物對全血中之 CD45+ 淋巴球 ( 細胞 /μL) 之影響吾人亦以細胞/μL全血分析來自非免疫接種及流感接種之小鼠群組之全血中的細胞群體。此等資料不考慮CD45+細胞及CD3+細胞中之差異地表示免疫細胞群體，該等差異可混淆根據對彼等標記物呈陽性之細胞百分比表示的資料。一般而言，吾人發現獲自以此方式分析資料的顯著差異關於非免疫接種小鼠組而非免疫接種組。 表40：全小鼠血液中之CD45+白血球.
全血中之CD45+淋巴球 (細胞/μL) 非免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 3462 +/- 941 - -   
D-Gal 5778 +/- 764 0.53 -   
D-Gal + 400 mg/kg UP360 8025 +/- 1673 *0.006 0.12   
免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal p 值 相對於非免疫接種
對照組 5040 +/- 1622 - - 0.22
D-Gal 5473 +/- 1214 0.74 - 0.75
D-Gal + 200 mg/kg UP360 5059 +/- 781 0.99 0.66 N/A
D-Gal + 400 mg/kg UP360 4281 +/- 582 0.50 0.18 *0.02
*指示統計顯著性
在非免疫接種及免疫接種小鼠組中，CD45+細胞/μL血液無顯著差異，但在非免疫接種400 mg/kg UP360+D-gal組中之CD45+細胞數目高於非免疫接種單獨D-gal。
實例 44 ： 蘆薈基底組合物對全血中之 CD3+ T 細胞、 CD4+ 輔助 T 及 CD8+ 細胞毒性 T 細胞 ( 細胞 /μL) 之影響相較於D-gal非免疫接種組，非免疫接種400 mg/kg UP360+D-gal組具有顯著較高的CD3+細胞/μL全血。CD3+CD4+輔助T細胞及CD3+CD8+細胞毒性T細胞發現相同增加。此等發現指示與僅D-gal組相比，UP360+D-gal非免疫接種組中之輔助T細胞、細胞毒性T細胞及一般而言T細胞之較高含量，其可指示UP360處理組中之較佳免疫監視及「就緒度」。 表41：全小鼠血液中之CD3+ T細胞
全血中的CD3+ T 細胞 ( 細胞/μL) 非免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 921 +/- 401 - -
D-Gal 1053 +/- 156 0.68 -
D-Gal + 400 mg/kg UP360 1656 +/- 281 0.054 *0.02
*指示統計顯著性 表42：全小鼠血液中之CD3+CD4+輔助T細胞
全血中之CD4+ 輔助T 細胞( 細胞/μL) 非免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 576 +/- 245 - -
D-Gal 722 +/- 112 0.46 -
D-Gal + 400 mg/kg UP360 1108 +/- 184 *0.03 *0.03
*指示統計顯著性 表43：全小鼠血液中之CD3+CD8+細胞毒性T細胞
全血中之CD8+ 細胞毒性T 細胞( 細胞/μL) 非免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 309 +/- 150 - -
D-Gal 283 +/- 45 0.82 -
D-Gal + 400 mg/kg UP360 474 +/- 101 0.22 *0.03
*指示統計顯著性
實例 45 ： 蘆薈基底組合物對全血中之 CD49b+ 自然殺手細胞 ( 細胞 / μ L) 的影響用以偵測自然殺手細胞之兩種標記物產生類似結果，其中與非免疫接種單獨D-gal相比，非免疫接種400 mg/kg U360+D-gal組中CD49b+ NK細胞有增加傾向且NKp46+ NK細胞顯著增加。各標記物之細胞計數大幅度變化，類似於如先前所分析之CD45+細胞之百分比變化。兩種標記物均指示相較於非免疫接種單獨D-gal，非免疫接種UP360+D-gal組中之NK細胞之富集，其可能亦指示UP360處理組中之免疫監視及免疫「就緒度」。 表44：全小鼠血液中之CD3-CD49b+自然殺手細胞
全血中之CD49b+ 自然殺手細胞( 細胞/μL) 非免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 516 +/- 156 - -
D-Gal 939 +/- 152 *0.02 -
D-Gal + 400 mg/kg UP360 1323 +/- 355 *0.02 0.19
*指示統計顯著性 表45：全小鼠血液中之CD3-NKp46+自然殺手細胞
全血中之NKp46+ 自然殺手細胞( 細胞/μL) 非免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 1457 +/- 433 - -
D-Gal 2221 +/- 388 0.08 -
D-Gal + 400 mg/kg UP360 4233 +/- 1092 *0.008 *0.04
*指示統計顯著性
實例 46 ： 蘆薈基底組合物對全血中之 Ly6C+ 粒細胞 ( 細胞 /μL) 之影響在處理組及D-gal組中，CD3-Ly6C+粒細胞/μL無顯著差異。相較於非免疫接種對照組，非免疫接種D-gal組及非免疫接種400 mg/kg UP360+D-gal組中粒細胞顯著增加，且相較於免疫接種D-gal及對照組，免疫接種UP360+D-gal組中粒細胞/μL有減少傾向。相較於非免疫接種400 mg/kg UP360+D-gal組，免疫接種400 mg/kg UP360+D-gal組中粒細胞統計學上顯著之減少。 表 46 ：全小鼠血液中之CD3-Ly6C+粒細胞
全血中之Ly6C+ 粒細胞( 細胞/μL) 非免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 495 +/- 168 - -   
D-Gal 1774 +/- 600 *0.02 -   
D-Gal + 400 mg/kg UP360 1721 +/- 363 *0.002 0.92   
免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal p 值 相對於非免疫接種
對照組 1622 +/- 968 - - 0.10
D-Gal 1725 +/- 717 0.89 - 0.94
D-Gal + 400 mg/kg UP360 861 +/- 133 0.25 0.09 *0.01
*指示統計顯著性
實例 47 ： 蘆薈基底組合物對全血中之 B220+ B 細胞 ( 細胞 / μ L) 的影響如由細胞/μL全血表示，處理組中CD3-B220+ B細胞無顯著差異，但相較於非免疫接種單獨D-gal，非免疫接種400 mg/kg UP360+D-gal組中B細胞有增加傾向。 表47：全小鼠血液中之CD3-B220+ B細胞
全血中之B220+ B 細胞( 細胞/μL) 非免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 1649 +/- 446 - -
D-Gal 2365 +/- 553 0.18 -
D-Gal + 400 mg/kg UP360 3889 +/- 1130 *0.03 0.12
*指示統計顯著性
實例 48 ： 蘆薈基底組合物對全血中之 TCRγδ+ γ δ T 細胞、 CD4+TCRγδ+ γ δ 輔助 T 細胞 、 CD8+TCRγδ+ γ δ 細胞毒性 T 細胞 ( 細胞 / μ L) 的影響相較於非免疫接種單獨D-gal，非免疫接種400 mg/kg UP360+D-gal組中CD3+TCRγδ+ γ δ T細胞/μL全血增加。發現CD3+CD4+TCRγδ+輔助γ δ T細胞群體亦如此。CD3+CD8+TCRγδ+細胞毒性γ δ T細胞群體無顯著差異。此等發現指示黏膜之T細胞群體之免疫監視及免疫「就緒度」增加。 表48：全小鼠血液中之CD3+TCRγδ+ γ δ T細胞
全血中之TCRγδ+ γ δ T 細胞( 細胞/μL) 非免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 13 +/- 4.2 - -
D-Gal 14 +/- 2.3 0.67 -
D-Gal + 400 mg/kg UP360 25 +/- 5.2 *0.02 *0.02
*指示統計顯著性 表49：全小鼠血液中之CD3+CD4+TCRγδ+ γ δ輔助T細胞
全血中之CD4+TCRγδ+ γ δ 輔助T 細胞( 細胞/μL) 非免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 11 +/- 3.3 - -
D-Gal 12 +/- 2.4 0.51 -
D-Gal + 400 mg/kg UP360 21 +/- 4.2 *0.02 *0.04
*指示統計顯著性 表50：全血中之CD8+TCRγδ+ γ δ細胞毒性T細胞(細胞/μL)
全血中之CD8+TCRγδ+ γ δ 細胞毒性T 細胞( 細胞/μL) 非免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 1.1 +/- 0.24 - -   
D-Gal 1.9 +/- 0.55 0.09 -   
D-Gal + 400 mg/kg UP360 2.3 +/- 0.78 0.59 0.55   
免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal p 值 相對於非免疫接種
對照組 1.3 +/- 0.39 - - 0.51
D-Gal 2.1 +/- 0.71 0.15 - 0.76
D-Gal + 200 mg/kg UP360 2.7 +/- 0.86 *0.04 0.43 N/A
*指示統計顯著性
實例 49 ： 蘆薈基底組合物顯著增加超氧化歧化酶 (SOD)D-gal引起衰老表型之機制係經由產生自由基，尤其後期糖基化終產物。吾人試圖量測抗氧化酶濃度及自由基含量以確定UP360是否影響小鼠模型之此態樣(Azman KF)。 表51：小鼠血清樣品之超氧化歧化酶含量
血清中之超氧化歧化酶 (SOD) (U/mL) 非免疫接種 p 值，相對於對照組 p 值，相對於 D-Gal
對照組 11.9 +/- 1.0 - -   
D-Gal 9.6 +/- 1.1 *0.04 -   
D-Gal + 400 mg/kg UP360 10.8 +/- 1.3 0.34 0.32   
免疫接種 p 值，相對於對照組 p 值，相對於 D-Gal p 值，相對於非免疫接種
對照組 7.7 +/- 1.2 - - *0.0005
D-Gal 7.2 +/- 1.2 0.66 - *0.02
D-Gal + 200 mg/kg UP360 10.1 +/- 0.9 *0.01 *0.003 N/A
D-Gal + 400 mg/kg UP360 9.2 +/- 0.7 *0.05 *0.01 0.17
SOD之單位為展現50%之超氧自由基岐化所需之量。*指示統計顯著性
超氧化歧化酶中和氧自由基以防止對細胞結構、蛋白質及核酸之氧化損傷。活性含氧物用作免疫信號傳導之二級信使(Ighodaro OM)。抗氧化酶之表現增加指示中和過量活性含氧物之能力。吾人測試免疫接種小鼠血清樣品之超氧化歧化酶含量，且發現UP360+D-gal組比D-gal組具有顯著更高含量的超氧化歧化酶。
實例 50 ： 蘆薈基底組合物對 Nrf2 之蛋白質表現的影響Nrf2為在氧化應激條件下活化且上調，涉及抗氧化反應之轉錄因子。長期免疫系統活化或氧化應激引起Nrf2上調。脾臟勻漿在SDS-PAGE上操作，轉移且針對所提及之蛋白質進行墨點法。藉由密度測定法量測條帶強度且各所關注之蛋白質相對於β-肌動蛋白內參考物正規化。比較各組之各所關注之蛋白質之半定量，且發現免疫接種200 mg/kg UP360+D-gal及400 mg/kg UP360+D-gal組具有顯著高於單獨D-gal之Nrf2，指示UP360組中之抗氧化路徑活化增加。 表52：相對於β-肌動蛋白正規化且相對於對照組的免疫接種小鼠脾臟勻漿的Nrf2蛋白質含量
相對於β-肌動蛋白正規化且相對於對照組的Nrf2蛋白質表現 非免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal
對照組 1.0 +/- 0.14 - -   
D-Gal 1.0 +/- 0.23 0.99 -   
D-Gal + 400 mg/kg UP360 0.7 +/- 0.11 *0.03 0.12   
免疫接種 p 值 相對於對照組 p 值 相對於D-Gal p 值 相對於非免疫接種
對照組 1.0 +/- 0.23 - - *0.0002
D-Gal 1.2 +/- 0.43 0.58 - *0.003
D-Gal + 200 mg/kg UP360 2.5 +/- 0.57 *0.002 *0.01 N/A
D-Gal + 400 mg/kg UP360 4.9 +/- 1.55 *0.003 *0.004 *0.01
*指示統計顯著性
實例 51 ： 蘆薈基底組合物 (UP360) 對緩和氧化應激加肺部感染誘導之小鼠死亡率及急性發炎性肺損傷的作用使用高氧及微生物(綠膿桿菌(PA))感染誘導之小鼠評價實例9中製造之包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物對死亡率的影響。
在誘導之前使小鼠適應一週。為了研究UP360是否可減少動物死亡且增加其存活，在用UP360處理七天之後使小鼠暴露於高氧(＞90%氧，持續72小時)且在接種PA之前持續此等3天。在細菌接種之後觀測小鼠48小時。與保持在室內空氣(RA，表53)下之小鼠相比，預暴露於高氧會引起顯著較高死亡率(O 2)。有趣的是，吾人意外地發現，剛好在PA接種之前暴露於高氧下48小時之小鼠中PA接種後24小時之相當大死亡率。與保持在室內空氣(RA)中且接受相同量之PA小鼠之9%死亡率相比，在PA接種之前用高氧處理2天之小鼠中觀測到64%死亡率。另一方面，暴露於高氧下2天之前用白藜蘆醇(RES)及包含多醣及多酚之UP360預防性處理7天且之後接種PA之小鼠之接種後24小時死亡率分別為27%及31%。此等結果表明UP360在減少動物死亡率方面提供改良之優勢。包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物所觀測到之此等存活率資料符合實例20至22之LPS誘導之存活研究所記錄之資料，其中UP360補充在動物之死亡率中產生統計學上顯著之減少。 表53：PA感染小鼠中UP360對高氧誘導之死亡率之影響
   RA O2 RES (50 mg/kg) UP360 (500 mg/kg)
死動物 1 9 3 4
總動物 11 14 11 13
死亡% 9.09% 64.29% 27.27% 30.77%
在確認蘆薈基底組合物在降低高氧及PA誘導之動物之死亡率中的有益作用之後，進行由細菌感染誘導之氧化應激加劇急性肺損傷。使小鼠適應一週。在高氧暴露之前藉由經口投與UP360 (500 mg/kg)及白藜蘆醇(50 mg/kg)處理動物7天。將小鼠暴露於＞99% O 248小時，同時維持每日測試材料經口投與。經鼻內抽吸小鼠接種PA (5×10 8CFU)，仍然維持測試材料之每天處理。接種後將小鼠返回至21% O 2。在感染之後24小時收集支氣管肺泡灌洗液(BAL)，收集血液樣品及肺組織。量測BAL中之總蛋白質含量且測定BAL及肺中之活細菌之數目。進行分析以測定表54中所列之生物標記物，諸如TNF-α、IL-1、IL-6、CRP、IL-8、IL-10、HMGB-1、MPO、MIP-2、NF-κB、Nrf2，巨噬細胞計數、嗜中性白血球計數、組織學疾病嚴重程度。
如表54中所見，蘆薈基底組合物在高氧及微生物感染小鼠中展示對氣道中之細菌清除的統計學上顯著之作用。先前，已展示暴露於高氧可損害針對細菌感染之宿主防禦，產生氣道中之較高細菌負荷(Patel等人, 2013)。表54中之結果指示相比於保持在室內空氣(RA)下之小鼠，預暴露於高氧(O2)之小鼠氣道中之細菌負荷顯著升高。對應於經白藜蘆醇處理之小鼠中肺損傷顯著減少，氣道細菌負荷在此等小鼠中顯著較低(RES)。 表54：蘆薈基底組合物在高氧及微生物感染小鼠中展示對氣道中之細菌清除的統計學上顯著之作用.
組 劑量(mg/kg) N x10 5CFU/mL ( 平均值 ±SE) P 值，相對於O2
RA 0 8 71.7±67.2 0.0128
O2 0 7 2592.7±1316.1 -
RES 50 5 2.4±0.7 0.0259
UP360 500 8 505.9±174.2 0.0195
統計分析：鄧奈特氏多重比較測試(Dunnett's multiple comparisons test) 表55：來自BAL、血清及肺部勻漿之生物標記物的分析優先次序
優先次序 樣品 生物標記物
1 BAL 白血球、HMGB1、TNF-α、IL-1、IL-6
勻漿 MPO、NFκB、HMGB1、(可能Nrf2)
2 BAL MIP-2
血清 HMGB1、TNF-α、IL-1、IL-6、CRP、Il-8、IL-10
類似地，相比於暴露於高氧且用單獨媒劑處理之小鼠，用UP360處理之小鼠氣道中具有顯著較低量之細菌負荷。與用高氧及媒劑對照物處理之小鼠(O2)相比，氣道中細菌負荷之差異在統計學上顯著。此等結果表明UP360可實際上減少氣道中之細菌負荷。
實例 52 ： 人類臨床試驗中包含多醣及多酚之蘆薈基底組合物之評價方案：隨機分組、三盲、安慰劑對照、平行臨床試驗，用以研究支援健康成人之免疫功能的產物。此研究之目標為研究研究性產物(IP)，在實例9中製得之包含多醣及多酚且在一些情況下由多醣及多酚組成之UP360支援健康成人之免疫功能的功效。
在隨機分組、三盲、安慰劑對照、平行研究中，評價疫苗接種之前28天及之後28天內研究性產物對於支援健康成人群體之免疫功能的功效。該研究包括40歲與80歲之間(包括端點)的男性及女性，其尚未但願意接受流感疫苗，同意口頭提供流感疫苗接種史，同意在整個研究期間儘可能地維持當前生活習慣，視其維持以下之能力：飲食、藥品、補充劑、鍛煉及睡眠且避免服用新補充劑、健康狀況，如藉由病史及實驗室結果所確定，如藉由合格研究者(QI)所評估，願意完成與研究相關之問卷及日記且完成所有臨床訪視，且提供自願書面知情同意書來參與該研究。
排除以下個體：1. 在研究期間懷孕、哺乳或準備受孕之女性。2. 對於UP360、安慰劑或流感疫苗中之活性或非活性成分已知過敏之參與者。3. 自2020年9月基線之前或第28天疫苗接種之前患有流感之未經疫苗接種參與者。4. 在基線之前或在第28天疫苗接種之前自行報導COVID-19診斷的參與者。5. 接受COVID-19疫苗之參與者。6. 距基線4週內當前使用處方免疫調節劑(包括皮質類固醇)，諸如免疫抑制劑或免疫刺激劑。7. 當前使用與強化或調節免疫系統相關之膳食補充劑或草藥藥品，除非願意清除(washout)。 研究隊組                    參與者數目 UP360 + 流感疫苗       N = 25 安慰劑+流感疫苗         N = 25 總                             N = 50
預期研究個體參與研究至多56天之最大值。加入研究之個體在第1次訪視(篩選，第-45天至第-4天)時簽署知情同意書且在第2次訪視(基線，第0天)時確認合格性及隨機分組。
在第2次訪視(第0天)、第3次訪視(第28天)及第4次訪視(第56天)評估研究之主要及次要功效及安全性終點。在篩選訪視時記錄人口統計資訊及病史。研究個體每天服用UP360，直至流感疫苗接種(第28天)，隨後持續每天服用UP360再持續4週(直至第56天)。
主要研究結果為UP360與安慰劑之間在免疫參數變化方面的差異，如藉由第28天及第56天血液中之淋巴球群體(CD3+、CD4+、CD8+、CD45+、TCRγδ+、CD3-CD16+56+)及免疫球蛋白(IgG、IgM及IgA)相對於基線所評估。
進行統計分析且獲得概括統計量，包括整體樣品及研究組之平均值、中值、標準差、最小值、最大值、人口統計特徵之比例(若分類)及結果量測值。當滿足正態分佈假設時變異數分析(ANOVA)用於檢驗兩個處理組(UP360及安慰劑)之間的連續變數之平均值的差異，且當不滿足正態分佈假設時使用克拉斯卡-瓦立斯測試(Kruskal-Wallis test)。按需要卡方(Chi-square)及飛世爾精準測試(Fisher exact test) (當細胞具有小於5之計數時)用於研究分類變數之差異。重複量測變異數分析(線性混合模型)用於檢驗處理組之間隨時間推移結果之平均值的差異。基線值作為共變數包括在各模型中。重複量測變異數分析(線性混合模型)亦用於檢驗兩個處理組之間隨時間推移(相對於基線28天、56天，及相對於第28天第56天)結果變化之平均值的差異，基線值作為共變數包括在各模型中。來自LMM之成對統計顯著性(組間及組內)。使用邦弗朗尼修正(Bonferroni adjustment)進行成對比較。統計顯著性定義為p值≤0.05。使用統計分析系統軟體版本9.4 (SAS Institute公司, Cary, NC, USA)來進行分析。
在初步臨床資料報導中觀測到主要終點(TCRγδ+及CD45+細胞)之統計學上顯著結果。如表56中所見，接受包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物的個體與接受安慰劑之個體相比，在多個時間點展示γ δ T細胞的細胞群體百分比統計學上顯著之增加。在投與後第28天及第56天，分別，安慰劑組中之個體展示TCRγδ+細胞百分比降低10.5%及5.6%，而包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物展示TCRγδ+細胞群體百分比增加21.5%及24.5%。相比於安慰劑，接受蘆薈基底組合物的個體在處理投與後第28天及第56天分別展示TCRγδ+細胞群體百分比增加23.5%及38.9% ( P≤0.001)。相比於安慰劑，在實例9中製造之蘆薈基底組合物(UP360)在第0天至第56天(p=0.0002)及第28天至第56天(p＜0.0108)觀測到的TCRγδ+細胞群體變化百分比之此等增加在統計學上顯著。類似地，組內蘆薈基底組合物相同時間範圍之此等變化在統計學上顯著。 表56：UP360相對於安慰劑TCRγδ+細胞的變化%
   UP360 (細胞群體之% ) 安慰劑 (細胞群體之% ) 差異 (%) p值
第0天 2.0 +/- 1.1 1.9 +/- 1.7 +0.1 0.3411
第28天 2.1 +/- 1.3 1.7 +/- 1.6 +0.4 0.3003
第56天 2.5 +/- 1.4 1.8 +/- 1.7 +0.5316 p ＜ 0.001
第0天至第56天 + 0.4896 P ＜ 0.0001 -0.2 +0.5311 p = 0.0002
第28天至第56天 + 0.4520 P ＜ 0.0001 -0.1 + 0.3587 p ＜ 0.0108
表57. UP360相對於安慰劑CD45+細胞的變化%
   UP360 (細胞群體之% ) 安慰劑 (細胞群體之% ) 差異(%) p值
第0天 33.3 +/-7.3 34.4 +/- 8.1 -1.1 0.5718
第28天 33.9 +/- 7.6 35.6 +/- 8.1 -1.7 0.6606
第56天 32.5 +/- 8.2 37.1 +/- 8.0 -3.761 p = 0.0066
第0天至第56天 -0.8 2.7 -3.811 p = 0.0175
第28天至第56天 -1.4 1.5 -3.220 p = 0.0422
對應於臨床前資料，包括UP360的考慮之包含多醣及多酚且在一些實施例中由多醣及多酚組成之蘆薈基底組合物展示統計學上顯著之γ δ T細胞誘導。基於描述於論述中之此獨特T細胞亞群之特徵，其中此等資料清楚地展示蘆薈基底組合物在免疫調節、監視及恆定性中之主要活性歸因於此等細胞之誘導。
由於補充蘆薈基底組合物，觀測到CD45+細胞含量之類似但逆向模式。如表57中所見，在第56天，與接受安慰劑之參與者相比，接受UP360之參與者CD45+細胞%平均低3.761 (p=0.0066)。第0天至第56天，與接受安慰劑之參與者相比，接受UP360之參與者CD45+細胞%變化平均低3.811 (p=0.0175)。類似地，第28天至第56天，與接受安慰劑之參與者相比，接受UP360之參與者CD45+細胞%變化平均低3.220 (p=0.0442)。
次要結果為在第28天及第56天UP360與安慰劑之間以下的差異：1. 確認COVID-19感染之數目；2. 確認流感病例之數目；3. 藉由COVID-19 QoL影響問卷評估之COVID-19對生活品質的影響；4. 非處方感冒及流感藥品使用。在第56天UP360與安慰劑之間以下的差異：1. 由COVID-19所致之住院數目；2. 由流感所致之住院數目。
UP360與安慰劑之間自基線至第28天及第56天彼等量測值變化之差異：1. 紅血球沈降率(ESR)及C反應蛋白(CRP)；2. 血液學參數：白血球(WBC)分類計數(嗜中性白血球、淋巴球、單核球、嗜酸性球、嗜鹼性球)、網狀紅血球計數、紅血球(RBC)計數、血紅素、血容比、血小板計數、RBC指數(平均紅血球體積(MCV)、平均紅血球血紅素(MCH)、平均紅血球血紅素濃度(MCHC)及紅血球分佈寬度(RDW)；3. 補體C3及C4蛋白質；4. 平均整體嚴重程度指數，如藉由改良威斯康辛州上呼吸道症狀調查(Modified Wisconsin Upper Respiratory Symptom Survey，WURSS)-24每日症狀評分之曲線下面積(AUC)所量測。5. 平均症狀嚴重程度評分，如藉由WURSS-24每日嚴重程度症狀評分之AUC所量測；6. 良好天數(定義為問題「你今天感覺有多難受？ (How sick do you feel today?)」評分為0 (不難受)之天數)，如藉由改良WURSS-24問卷所評估；7. 病態天數(定義為問題「你今天感覺有多難受？」評分為1-7之任何數值(難受)之天數)，如藉由改良WURSS-24問卷所評估；8. 常見上呼吸道感染(UTRI)症狀的頻率，如藉由改良WURSS-24問卷所評估；9. 常見UTRI症狀之持續時間，如藉由改良WURSS-24問卷所評估；10. 常見UTRI症狀之嚴重程度，如藉由改良WURSS-24問卷所評估；11. 活力及生活品質，如藉由活力及生活品質(QoL)問卷評估。
所考慮之方法進一步包含用於以下之方法：支援健康發炎反應；維持健康之補體C3及C4蛋白質、細胞介素含量及針對感染之細胞介素反應水準；減低、調節及維持TNF-α、IL-1β、IL-6、GM-CSF；IFN-α；IFN-γ；IL-1α；IL-1RA；IL-2；IL-4；IL-5；IL-7；IL-9；IL-10；IL-12 p70；IL-13；IL-15；IL17A；IL-18；IL-21；IL-22；IL-23；IL-27；IL-31；TNF-β/LTA、CRP及CINC3。
收集樣品且儲存以供未來分析，以分析UP360與安慰劑之間自基線、在第28天及第56天以下之變化差異： 1. 細胞介素(GM-CSF；IFN-α；IFN-γ；IL-1α；IL-1β；IL-1RA；IL-2；IL-4；IL-5；IL-6；IL-7；IL-9；IL-10；IL-12 p70；IL-13；IL-15；IL17A；IL-18；IL-21；IL-22；IL-23；IL-27；IL-31；TNF-α；TNF-β/LTA 150) 2. 高速泳動群盒1 (HMGB1)蛋白、核因子κ B (NF-κB)、核因子紅血球系2相關因子2 (Nrf-2) 3. 氧化應激，如藉由8-異前列腺素F2α、過氧化氫酶(CAT)、麩胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)、超氧化歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及後期糖基化終產物(AGE)所評估 4. 特定病毒株之血球凝集素抑制(HI)效價
除了功效分析之外，亦將進行安全性評價。1. 臨床化學參數：丙胺酸轉胺酶(ALT)、天冬胺酸轉胺酶(AST)、鹼性磷酸酶(ALP)、總膽紅素、肌酐、電解質(Na+、K+、Cl-)、估計腎小球濾過率(eGFR)、葡萄糖；2. 出現前及出現後不良事件之發生率；3. 生命徵象(血壓(BP)及心率(HR)
實例 53 ： UP360 快速免疫調節作用的臨床概念驗證研究 .此臨床概念驗證研究之目標為比較在實例9中製造之包含多醣及多酚之新穎類藥劑營養摻合物UP360與安慰劑的急性免疫作用。此資料對於驗證免疫相關作用很重要。
此臨床概念驗證研究旨在經由評價免疫細胞活化、細胞遷移及細胞介素至促炎及消炎細胞介素之變化、抗病毒肽及恢復生長因子來記錄攝入測試產物之急性作用。
收集關於免疫細胞遷移及監視之資料。該測試展示攝入包含多醣及多酚之新穎組合物是否使免疫系統之機警性快速變化，以搜尋且試圖消除微生物侵入者，且在免疫細胞類型之間進行有效協作。
對於此臨床研究，遵循已確立安慰劑對照、隨機分組、雙盲、交叉研究設計測試人類個體。特定言之，研究設計已用於先前臨床研究中，關於免疫調節產物對淋巴球遷移的改變，特定言之幹細胞子集。個體隨機分為活性或安慰劑組，在給藥之前收集基線樣品，在攝入研究性產物之後，在給藥後1、2、3小時收集血液樣品。在7天清除之後個體返回臨床且將以交叉方式服用相反產物，重複研究程序。
吾人評價之測試參數即使數小時內亦未必保持恆定，此係由於其與人之代謝、個別晝夜節律及其他一般生理參數有關。因此，此性質之研究必須包括安慰劑測試日，允許各人之測試日之間變化之個體內分析。此在很大程度上強化了此類型之先導研究之資料分析。在不存在安慰劑測試日下，吾人認為資料不確定，因為變化無法解釋為與產物攝入相關。
主要結果量度：免疫監視：活體內免疫細胞遷移及活化。研究經設計以藉由免疫監視及免疫機警性展示快速免疫支援。
對於此研究，在IRB-批准書面知情同意書之後招收任一性別之12名健康個體。此性質之研究的納入/排除概況並非無足輕重，且在招收之前需謹慎地評價各潛在研究參與者。為了使研究之初始臨床訪視期間預期壓力及憂懼降至最低，各研究參與者必須已經參與過吾人機構之先前研究或在臨床研究日之前必須參加吾人介紹研究程序之訪視。
該研究包括健康成人；年齡18-75歲(包括端點)；BMI在18.0與34.9之間(包括端點)；願意遵守研究程序，包括：在整個研究期間維持恆定飲食及生活規律，在臨床訪視日維持清淡早餐之恆定習慣，在研究訪視之上午避免鍛煉及服用營養補充劑，在臨床訪視之前至少一小時內不飲用咖啡、茶及軟飲料；在臨床訪視期間不聽音樂、不吃糖果、不吃口香糖、不使用電腦/蜂巢式電話。
排除滿足此等準則之個體：先前大型胃腸手術(測試產物之吸收率可變化) (小手術沒關係，包括先前移除闌尾及膽囊)；每天服用消炎藥品；當前經歷劇烈壓力事件/生活變化；當前正在進行強化運動訓練(諸如馬拉松選手)；在過去12個月期間有癌症；在過去12個月期間進行化學療法；當前用免疫抑制藥品治療；經診斷患有自體免疫病症，例如全身性紅斑狼瘡、溶血性貧血；在研究期間或在研究開始之前的4週內獻血；在過去12週內接受皮質酮注射；在過去一個月期間免疫接種；當前服用抗焦慮、催眠或抗抑鬱處方藥品；進行中急性感染(包括牙齒、鼻竇、耳等)；此試驗期間參與另一臨床試驗研究，其涉及研究性產物或生活方式變化；反常睡眠規律(實例：大夜班、頻繁熬夜、學習、派對而睡眠不規律)；不願意在研究期間維持恆定攝入補充劑；有生育能力之女性：懷孕、哺乳或準備受孕；已知與活性測試產物或安慰劑中之成分相關之食物過敏。處方藥品將逐例評價。
可攝入測試產物：將提供在實例9中製造之包含多醣及多酚之測試產物活性UP360及安慰劑。在各臨床日，緊接在基線抽血之後，在臨床工作人員在場時給與個體單次劑量之活性測試產物UP360或安慰劑。個體伴著水及幾塊淡蘇打餅乾攝入膠囊以刺激消化功能。
所提出之臨床研究程序解釋：在監測免疫活化事件之臨床試驗中，吾人預期一系列事件，開始為腸道中之免疫細胞活化、細胞介素含量之全身性變化、免疫細胞遷移之變化(增強之免疫監視)，繼之以整個身體組織中之免疫監視及可能的活化免疫細胞再進回至血液循環中。
血液樣品提供觀察在攝入產物之後發生之免疫事件的便利窗口。吾人沒有觀察在初始腸道活化時可能發生什麼的便利窗口，但吾人設想其如同活體外事件一樣。吾人沒有觀察組織之窗口且因此無法監測在免疫細胞自血液遷移至組織中以清除微生物侵襲者並進行先天性及後天性類型之免疫反應之後的下游事件。因此，吾人藉由獲取一些血液樣品且用微生物模擬物離體(身體外部)挑戰免疫細胞來模擬。
所描述之測試旨在監測在血液循環中可見之免疫細胞之類型及活化狀態的快速變化。血液中免疫細胞數目的增加相對於減少為血流中細胞遷移進出的度量。
吾人尋找細微的事件，其中在大部分研究參與者中在攝入相同測試產物之後觀測到之任何全身性變化表明誘導了免疫活化事件。此為產物已觸發增加之免疫感知之良好指示標誌。
在免疫監視中，免疫細胞移動進出組織，此可藉由量測循環血液中之細胞數目來量測。免疫機警性中，吾人量測循環血液中特定細胞之功能。
免疫細胞遷移及免疫機警性狀態 該分析允許吾人活體內偵測測試產物之攝入是否引起循環中之細胞數目之快速變化及/或活化細胞。新鮮抽取之血液樣品用於測試免疫細胞數目及活化狀態之變化。一式三份地分析來自各抽血之細胞。
細胞用T細胞標記物CD3及CD56及CD57標記物，以及兩種活化標記物CD69及介白素-2受體CD25染色。此允許分析研究中各時間點血液循環中之以下類型免疫細胞的數目：CD3-陰性、CD56-陽性NK細胞；CD3+ CD56+ NKT細胞；CD3+ CD56- T淋巴球；CD3-CD56-非NK、非T淋巴球；CD3-CD57+ NK細胞；CD3- CD56+CD57+ NK細胞；單核球(藉由前/側散射概況鑑別)。
在分析期間，將針對上文所列之細胞群體之表面上的活化分子CD69及生長因子受體CD25確定表現量。
注意：免疫監視涉及淋巴球子集，包括NK及T細胞之不斷再循環。遷移展示獨特晝夜節律且受個人代謝狀態影響。當比較可攝入免疫調節產物對免疫監視之急性作用時，安排安慰劑對照測試日為重要的，以考慮到既定個人之代謝狀態。
添加更多流式細胞量測術小組係可行的。下文包括可供選擇選項。額外小組包括以下之附加小組：γδ (gamma-delta) T細胞(γδTCR+ CD5- CD8-)：CD3/ γδ T細胞受體；CD5；CD56 - γδ T細胞上可為+或-；CD69, CD25的數目。
以下之附加小組：B及T淋巴球子集及CD45同功異型物表現：CD4 T細胞子集、CD8 T細胞子集、CD19 B淋巴球、CD45RA-在初始T及B細胞上表現，CD45R0-在活化及記憶T及B細胞上表現之數目。
參考文獻1.     Adomako-Bonsu AG, Chan SL, Pratten M, Fry JR.  Antioxidant activity of Rosmarinic acid and its principal metabolites in chemical and cellular systems: Importance of physico-chemical characteristics. Toxicol In Vitro. 2017 Apr;40:248-255. doi: 10.1016/j.tiv.2017.01.016. Epub 2017 Jan 22. 2.     Al-Sereiti M, et al. Pharmacology of Rosemary ( Rosmarinus officinalis Linn.) and its Therapeutic Potentials. Indian J. Exp. Biol.1999, 37, 124-130 3.     Alvarez DF, Helm K, DeGregori J, Roederer M, Majka S. "Publishing flow cytometry data." Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol298.2 (2010): L127-L130. 4.     Amoah SK, Sandjo LP, Kratz JM, Biavatti MW. Rosmarinic Acid-Pharmaceutical and Clinical Aspects. Planta Med. 2016 Mar;82(5):388-406. doi: 10.1055/s-0035-1568274. Epub 2016 Feb 4. 5.     Angelo LS, Banerjee PP, Monaco-Shawver L, Rosen JB, Makedonas G, Forbes LR, Mace EM, Orange JS. "Practical NK cell phenotyping and variability in healthy adults." Immunol Res62.3 (2015): 341-356. 6.     Azman KF, Zakaria R. "D-Galactose-induced accelerated aging model: an overview." Biogerontology20.6 (2019): 763-782. 7.     Barnes J, Anderson, LA, Philipson, J.D. Herbal Medicines, 3rd edition. London (UK): The Pharmaceutical Press; 2007. 8.     BHP 1983: British Herbal Pharmacopoeia. Cowling (UK): British Herbal Medical Association; 1983. 9.     Bianchi ME, Manfredi AA. High-mobility group box 1 (HMGB1) protein at the crossroads between innate and adaptive immunity. Immunol Rev. 2007 Dec;220:35-46. 10.   Blumenthal M, Goldberg A, Brinkmann J. Herbal Medicine: Expanded Commission E Monographs. Boston (MA): Integrative Medicine Communications; 2000. 11.   Bonneville M, O'Brien RL, Born WK. Gammadelta T cell effector functions: a blend of innate programming and acquired plasticity. Nat Rev Immunol. 2010 Jul;10(7):467-78. 12.   Cao W, et al. Effects of rosmarinic acid on immunoregulatory activity and hepatocellular carcinoma cell apoptosis in H22 tumor-bearing mice. Korean J Physiol Pharmacol. 2019 Nov;23(6):501-508. doi: 10.4196/kjpp.2019.23.6.501. Epub 2019 Oct 24. 13.   Cao W, Hu C, Wu L, Xu L, Jiang W. Rosmarinic acid inhibits inflammation and angiogenesis of hepatocellular carcinoma by suppression of NF-κB signaling in H22 tumor-bearing mice. J Pharmacol Sci. 2016;132:131-137 14.   Cheng S, Eliaz I, Lin J, Thyagarajan-Sahu A, Sliva D. Triterpenes from Poria cocos suppress growth and invasiveness of pancreatic cancer cells throµgh the downregulation of MMP-7. Int J Oncol. 2013; 42(6):1869-74. 15.   Chow, J.T., Willamson, D.A., Yates, K.M., & Groux, W.J. (2005) Carbohydr. Res. 340, 1131-1142 16.   Chuan-Xin Wu , Hang Sun, Qi Liu, Hui Guo, Jian-Ping Gong. LPS Induces HMGB1 Relocation and Release by Activating the NF-κB-CBP Signal Transduction Pathway in the Murine Macrophage-Like Cell Line RAW264.7. J Surg Res. 2012 Jun 1;175(1):88-100. 17.   Colica C, Di Renzo L, Aiello V, De Lorenzo A, Abenavoli. Rosmarinic Acid as Potential Anti-Inflammatory Agent. L. Rev Recent Clin Trials. 2018;13(4):240-242. doi: 10.2174/157488711304180911095818. 18.   Cuéllar MJ, Giner RM, Recio MC, Just MJ, Máñez S, Ríos JL. Effect of the basidiomycete Poria cocos on experimental dermatitis and other inflammatory conditions. Chem Pharm Bull. 1997; 45: 492-494 19.   Cuéllar MJ, Giner RM, Recio MC, JustMJ, Máñez S, Ríos JL.Two fungal lanostane derivatives as phospholipase A2 inhibitors. J Nat Prod 1996; 59: 977-979 20.   Davis, R.H. (1997) Aloe Vera, a Scientific Approach, Vantage Press, New York, NY, pp 8-46 21.   Derek C Angus, Lihong Yang, Lan Kong, John A Kellum, Russell L Delude, Kevin J Tracey, Lisa Weissfeld, GenIMS Investigators. Circulating High-Mobility Group Box 1 (HMGB1) Concentrations Are Elevated in Both Uncomplicated Pneumonia and Pneumonia With Severe Sepsis. Crit Care Med. 2007 Apr;35(4):1061-7. 22.   Feng YL, Zhao YY, Ding F, Xi ZH, Tian T, Zhou F, Du X, Chen DQ, Wei F, Cheng XL, Lin RC. Chemical constituents of surface layer of Poria cocos and their pharmacological properties (I). Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 2013; 38(7): 1098-102. 23.   Fuchs SM, Heinemann C, Schliemann-Willers S, Härtl H, Fluhr JW, Elsner P. Assessment of anti-inflammatory activity of Poria cocos in sodium lauryl sulphate-induced irritant contact dermatitis. Skin Res Technol. 2006; 12(4):223-7. 24.   Gardner Z and McGuffin M. Astragalus membranaceus. American Herbal Products Association's Botanical Safety Handbook. CRC press LLC; 1997: 17-17 25.   Gardner Z and McGuffin M. Wolfiporia cocos. American Herbal Products Association's Botanical Safety Handbook. CRC press LLC; 1997: 124-124 26.   Gentile LF, Moldawer LL. HMGB1 as a therapeutic target for sepsis: it's all in the timing! Expert Opin Ther Targets. 2014 Mar;18(3):243-5. 27.   Giner-Larza EM, Máñez S, Giner-Pons RM, Carmen Recio M, Ríos JL. On the anti-inflammatory and anti-phospholipase A(2) activity of extracts from lanostane-rich species. J Ethnopharmacol. 2000; 73(1-2): 61-9. 28.   Goh W, Huntinton ND. "Regulation of Murine Natural Killer Cell Development." Front Immunol8 (2017): 130. 29.   Hamman, J.H. (2008) Molecules, 13, 1599-1616 30.   Hauge S, Madhun A, Cox RJ, Haaheim LR. "Quality and kinetics of the antibody response in mice after three different low-dose influenza virus vaccination strategies." Clin Vaccine Immunol14.8 (2007): 978-83. 31.   Ighodaro OM, Akinloye OA. "First line defence antioxidants-superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GPX): Their fundamental role in the entire antioxidant defence grid." Alexandria Journal of Medicine54.4 (2018): 287-293. 32.   Im SA, Lee YR, Lee YH, Lee MK, Park YI, Lee S, Kim K, Lee CK. In vivo evidence of the immunomodulatory activity of orally administered Aloe vera gel. Arch Pharm Res. 2010 Mar;33(3):451-6. doi: 10.1007/s12272-010-0315-1. Epub 2010 Mar 30. 33.   Jeong JW, Lee HH, Han MH, Kim GY, Hong SH, Park C, Choi YH. Ethanol extract of Poria cocos reduces the production of inflammatory mediators by suppressing the NF-kappaB signaling pathway in lipopolysaccharide-stimulated RAW 264.7 macrophages. BMC Complement Altern Med. 2014;14: 101 34.   Jiang WL, Chen XG, Qu GW, et al. Rosmarinic acid protects against experimental sepsis by inhibiting proinflammatory factor release and ameliorating hemodynamics. Shock. 2009; 32(6): 608-613. 35.   Kaminaga T, Yasukawa K, Takido M, Tai T, Nunoura Y. Inhibitory effects of Poria cocos on 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate-induced edema and tumour promotion in mouse skin. Phytother Res 1996; 10: 581-584 36.   Lee KY, Jeon YJ. Polysaccharide isolated from Poria cocos sclerotium induces NF-kappaB/Rel activation and iNOS expression in murine macrophages. Int Immunopharmacol. 2003; 3(10-11):1353-62. 37.   Lee KY, You HJ, Jeong HG, Kang JS, Kim HM, Rhee SD, Jeon YJ. Polysaccharide isolated from Poria cocos sclerotium induces NF-kappaB/Rel activation and iNOS expression throµgh the activation of p38 kinase in murine macrophages. Int Immunopharmacol. 2004; 4(8):1029-38. 38.   Lee SM, Lee YJ, Yoon JJ, Kang DG, Lee HS: Effect of Poria cocos on hypertonic stress-induced water channel expression and apoptosis in renal collecting duct cells. J Ethnopharmacol 2012, 141:368-376. 39.   Leung AT and Foster S. Poria. Encyclopedia of Common Natural Ingredients Used in Food, Drµgs, and Cosmetics, 2nd edition. John Wiley& Sons, Inc. New York; 1996: 425-427 40.   Li N, Liu XX, Hong M, Huang XZ, Chen H, Xu JH, Wang C, Zhang YX, Zhong JX, Nie H, Gong Q. Sodium butyrate alleviates LPS-induced acute lung injury in mice via inhibiting HMGB1 release. Int Immunopharmacol. 2018 Mar;56:242-248. 41.   Li TH, Hou CC, Chang CL, Yang WC. Anti-Hyperglycemic Properties of Crude Extract and Triterpenes from Poria cocos. Evid Based Complement Alternat Med. 2011; 2011. pii: 128402. 42.   Luan H, Kan Z, Xu Y, Lv C, Jiang W. Rosmarinic acid protects against experimental diabetes with cerebral ischemia: relation to inflammation response. J Neuroinflammation 2013; 10: 28. 43.   Luo C, et al. A Review of the Anti-Inflammatory Effects of Rosmarinic Acid on Inflammatory Diseases. Front Pharmacol. 2020 Feb 28;11:153. doi: 10.3389/fphar.2020.00153. 44.   Maria Entezari, Mohammad Javdan , Daniel J Antoine, et al. Inhibition of Extracellular HMGB1 Attenuates Hyperoxia-Induced Inflammatory Acute Lung Injury. Redox Biol. 2014 Jan 20;2:314-22. 45.   Martins A, Han J, Kim SO. "The Multifaceted Effects of Granulocyte Colongy-Stimulating Factor in Immunomodulation and Potential Roles in Intestinal Immune Homeostasis." IUBMB Life62.8 (2010): 611-617. 46.   Miao H, Hollenbaugh JA, Zand MS, Holden-Wiltse J, Mosmann TR, Perelson AS, Wu H, Topham DJ. "Quantifying the early immune reponse and adaptive immune response kinetics in mice infected with influenza A virus." J Virol84.13 (2010): 6687-98. 47.   Narni-Mancinelli E, Chaix J, Fenis A, Kerdiles YM, Yessaad N, Reynders A, Gregoire C, Luche H, Ugolini S, Tomasello E, Walzer T, Vivier E. "Fate mapping analysis of lymphoid cells expressing the NKp46 cell surface receptor." Proc Natl Acad Sci U.S.A.108.45 (2011): 18324-18329. 48.   Park YH, Son IH, Kim B, Lyu YS, Moon HI, Kang HW: Poria cocos water extract (PCW) protects PC12 neuronal cells from beta-amyloid-induced cell death throµgh antioxidant and antiapoptotic functions. Pharmazie 2009, 64:760-764. 49.   Park, Y.I., & Lee, S.K. (2006) New Perspectives on Aloe, Springer, Science+Busines Media, LLC., New York, NY, pp 1-17 50.   Park, Y.I., & Lee, S.K. (2006) New Perspectives on Aloe, Springer, Science+Busines Media, LLC., New York, NY, pp 7-62 51.   Qiu, Z., Jones, K., Wylie, M., Jia, Q., & Orndorff, S. (2000) Planta Med. 66, 152-156 52.   Raphael I, Nalawade S, Eagar TN, Forsthuber TG. "T cell subsets and their signature cytokines in autoimmune and inflammatory diseases." Cytokine74.1 (2015): 5-17. 53.   Ribot JC, Lopes N, Silva-Santos B. γδ T cells in tissue physiology and surveillance. Nat Rev Immunol. 2021 Apr;21(4):221-232. 54.   Ríos JL. Chemical constituents and pharmacological properties of Poria cocos. Planta Med. 2011; 77(7):681-91. 55.   Ross, S.A., EISohly, M.A., & Wilkins, S.P. (1997) J. AOAC int. 80, 455-457 56.   Scheckel KA, Degner SC, Romagnolo DF. Rosmarinic acid antagonizes activator protein-1-dependent activation of cyclooxygenase 2 expression in human cancer and nonmalignant cell lines. cell lines. J Nutr. 2008; 138(11): 2098-105. 57.   Song EJ, Espano E, Nam JH, Kim J, Shim KS, Shin E, Park YI, Lee CK, Kim JK. "Adjuvanticity of Processed Aloe vera gel for Influenza Vaccination in Mice." Immune Netw20.4 (2020): e31. 58.   Sun P, Kim Y, Lee H, Kim J, Han BK, Go E, Kwon S, Kang JG, You S, Kwon J. "Carrot Pomace Polysaccharide (CPP) Improves Influenza Vaccine Efficacy in Immunosuppressed Mice via Dendritic Cell Activation." Nutrients12.9 (2020): E2740. 59.   Sun Y. Biological activities and potential health benefits of polysaccharides from Poria cocos and their derivatives. Int J Biol Macromol. 2014; 68: 131-4. 60.   Swarup V, Ghosh J, Ghosh S, Saxena A, Basu A. Antiviral and anti-inflammatory effects of rosmarinic acid in an experimental murine model of Japanese encephalitis. Antimicrob Agents Chemother 2007; 51(9): 3367-70. 61.   Torrado E, Cooper AM. "Cytokines in the balance of protection and pathology during mycobacterial infections." Adv Exp Med Biol783 (2013): 121-140. 62.   Tseng J, Chang JG. Suppression of tumor necrosis factor-α, interleukin- 1β, interleukin-6 and granulocyte-monocyte colony stimulating factor secretion from human monocytes by an extract of Poria cocos. Chin J Microbiol Immunol 1992; 1: 1-10 63.   Vera EJ, Chew YV, Nicholson L, Burns H, Anderson P, Chen HT, Williams L, Keung K, Zanjani NT, Dervish S, Patrick E, Want XM, Yi S, Hawthorne W, Alexander S, O'Connell PJ, Hu M. "Standardisation of flow cytometry for whole blood immunophenotyping of islet transplant and transplant clinical trial recipients." PLoS One14.5 (2019): e0217163. 64.   Wang H, Bloom O, Zhang M, et al. HMG-1 as a late mediator of endotoxin lethality in mice. Science 1999;285:248-51. 65.   Wang WJ, Cheng MH, Lin JH, Weng CS. Effect of a rosmarinic acid supplemented hemodialysis fluid on inflammation of human vascular endothelial cells. Braz J Med Biol Res 2017; 50(12):e6145. 66.   Wu Y, et al. Effect of a polysaccharide from Poria cocos on humoral response in mice immunized by H1N1 influenza and HBsAg vaccines. Int J Biol Macromol. 2016 Oct;91:248-57. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2016.05.046. Epub 2016 May 13. 67.   Xu J Wei K, Zhang G, Lei L, Yang D, Wang W, Han Q, Xia Y, Bi Y, Yang M, Li M. Ethnopharmacology, phytochemistry, and pharmacology of Chinese Salvia species: A review. J Ethnopharmacol. 2018 Oct 28;225:18-30. doi: 10.1016/j.jep.2018.06.029. Epub 2018 Jun 20. 68.   Yang H, Wang H, Tracey KJ. HMG-1 rediscovered as a cytokine. Shock 2001;15:247-53. 69.   Yasukawa K, Kaminaga T, Kitanaka S, Tai T, Nunoura Y, Natori S, Takido. M. 3β-p-hydroxybenzoyldehydrotumulosic acid from Poria cocos, and its anti-inflammatory effects. Phytochemistry 1998; 48: 1357-1360 70.   Yu SJ, Tseng J. Fu-Ling, a Chinese herbal drug, modulates cytokine secretion by human peripheral blood monocytes. Int J Immunopharmacol 1996; 18: 37-44 71.   Zhang W, et al. Adjuvant activity of PCP-II, a polysaccharide from Poria cocos, on a whole killed rabies vaccine. Virus Res. 2019 Sep;270:197638. doi: 10.1016/j.virusres.2019.06.001. Epub 2019 Jun 4. 72.   Zhao J, et al. Poria cocos polysaccharides attenuated ox-LDL-induced inflammation and oxidative stress via ERK activated Nrf2/HO-1 signaling pathway and inhibited foam cell formation in VSMCs. Int Immunopharmacol. 2020 Mar;80:106173. doi: 10.1016/j.intimp.2019.106173. Epub 2020 Jan 13 73.   Zimmermann V. Rosemary as a Medicinal Plant and Wonder-Drug. A Report on the Medieval Drug Monographs. Sudhoffs Arch; 1980, 64:351-370.
圖 1展示蘆薈基底組合物(此圖中之UP 360)藉由轉移傾斜點-HMGB1來維持免疫功能之恆定性的新穎性。 圖 2展示來自用UP360以500 mg/kg處理之LPS誘導之大鼠之肺組織的H&E染色。A=正常對照組，B=媒劑對照組，C=丁酸鈉，D=UP360 (500 mg/kg)。放大100×。

Claims (41)

  1. 一種用於調節免疫恆定性(homeostasis)之組合物，其包含富集一或多種多醣之蘆薈(真蘆薈(Aloe vera))萃取物，富集一或多種多醣之Poria(Poria cocos Wolf)萃取物，及富集一或多種多酚化合物之迷迭香(Salvia Rosmarinus，Rosmarinus officinalis))萃取物之組合。
  2. 如請求項1之組合物，其中該組合物中之該蘆薈萃取物或該Poria萃取物或該迷迭香萃取物在各萃取物1重量%至98重量%範圍內，其中蘆薈：Poria：迷迭香(APR)之重量比為3：2：1或1：1：1或3：6：1。
  3. 如請求項1之組合物，其進一步包含來自巴巴多斯蘆薈(Aloe barbadense)之全葉凝膠或內葉凝膠之蘆薈萃取物，來自Wolfiporia extensa之蘑菇(mushroom)或子實體之Poria萃取物，及來自Rosmarinus officinalis葉之迷迭香萃取物。
  4. 如請求項1之組合物，其中該蘆薈萃取物包含0.01%至99.9%之多醣。
  5. 如請求項1之組合物，其中該Poria萃取物包含0.01%至99.9%之多醣。
  6. 如請求項1之組合物，其中該迷迭香萃取物包含0.01%至99.9%之迷 迭香酸。
  7. 如請求項1之組合物，其中來自該蘆薈萃取物之該一或多種多醣為乙醯化多醣或醋孟南(acemannan)或其組合。
  8. 如請求項1之組合物，其中來自該Poria萃取物之多醣為β-葡聚糖。
  9. 如請求項1之組合物，其進一步包含選自由以下組成之群之植物物種或其組合富集之一或多種多醣：巴巴多斯蘆薈、好望角蘆薈(Aloe ferox)、樹蘆薈(Aloe arborescens)、膜莢黃蓍(Astragalus membranaceus)、靈芝(Ganoderma lucidum)、大麥(Hordeum vulgare)、巴西蘑菇(Agaricus(A.blazei)subrufescens)、紫馬藺菊(Echinacea purpurea)、狹葉紫錐菊(Echinacea angustifolia)、烏頭(Aconitum Napellus/Monkshood)、西洋接骨木(Sambucus nigra)、Wolfiporia extensa、催眠睡茄(Withania somnifera)、阿爾泰柴胡(Bupleurum falcatum)、甘草屬(Glycyrrhiza spp)、西洋參(Panax quinquefolium)、人參(Panax ginseng C.A.Meyer)、韓國紅參(Korea red ginseng)、香菇(Lentinula edodes/shiitake)、白樺茸(Inonotus obliquus/Chaga mushroom)、香菇、寧夏枸杞(Lycium barbarum)、枸杞(Lycium chinense)、裂蹄木層孔菌(Phellinus linteus)(子實體)、雲芝(Trametes versicolor)(子實體)、瓜爾(Cyamopsis tetragonolobus)(瓜爾膠)、雲芝、岡村枝管藻(Cladosiphon okamuranus Tokida)、裙帶菜(Undaria pinnatifida)、蘑菇、海藻、酵母、褐藻(brown algae)、龍舌蘭花蜜、褐 藻(brown seaweed)、可醱酵纖維、穀類、海參、龍舌蘭、朝鮮薊、蘆筍、韭蔥(leek)、大蒜、洋蔥、黑麥、大麥仁、小麥、梨、蘋果、番石榴、榅桲(quince)、李、醋栗、橙及其他柑橘屬果實。
  10. 如請求項1之組合物，其進一步包含選自由以下組成之群之植物物種或其組合富集之多酚化合物：柏蜂草(Melissa officinalis)、香苦瓜(Momordica balsamina)、西洋薄荷(Mentha piperita)、紫蘇(Perilla frutescens)、藥用鼠尾草(Salvia officinalis)、鼠尾苦草(Teucrium scorodonia)、歐洲變豆菜(Sanicula europaea)、彩葉草(Coleus blumei)、麝香草屬(Thymus spp.)、輪生山香(Hyptis verticillata)、紫草(Lithospermum erythrorhizon)、金魚藻(hornwort Anthoceros agrestis)、蓽拔(Piper longum Linn)、黃連(Coptis chinensis Franch)、當歸(Angelica sinensis(Oliv.)Diels)、漆樹(Toxicodendron vernicifluum)、甘草(Glycyrrhiza glabra)、烏拉爾甘草(Glycyrrhiza uralensis)、薑黃(Curcuma longa)、薑(Zingiber officinalis)、遠志(Polygala tenuifolia)、蛇麻(Humulus lupulus)、忍冬(Lonicera Japonica)、藥用鼠尾草(Salvia officinalis L.)、雷公根(Centella asiatica)、乳香樹(Boswellia carteri)、歐薄荷(Mentha longifolia)、青海雲杉(Picea crassifolia)、柑(Citrus nobilis Lour)、酸橙(Citrus aurantium L.)、茶樹(Camellia sinensis L.)、野葛根(Pueraria mirifica)、葛麻姆(Pueraria lobata)、大豆(Glycine max)、辣椒屬(Capsicum species)、虎杖(Fallopia japonica)、茶、番茄(tomato)、十字花科蔬菜、葡萄、藍莓、覆盆子、桑葚、蘋果、紅辣椒。
  11. 如請求項1之組合物，其中該等多酚化合物包含迷迭香酸、結合之兒茶素、木蝴蝶素(oroxylin)、番鬱金黃素(Kaempferol)、金雀異黃酮(genistein)、槲皮素(quercetin)、紫鉚因(Butein)、葉黃酮(Luteolin)、金黃素(chrysin)、芹菜素(Apigenin)、薑黃素(curcumin)、白藜蘆醇(resveratrol)、辣椒鹼(capsaicin)、球腺糖A(glomeratose A)、6-薑烯酚(6-shogaol)、薑油(gingerol)、小蘖鹼(berberine)、胡椒鹼(Piperine)或其組合。
  12. 如請求項1之組合物，其中該等多醣及多酚係富集自植物部分或真菌。
  13. 如請求項1之組合物，其中該組合物中之該蘆薈萃取物、該Poria萃取物及該迷迭香萃取物用超臨界流體CO2、水、丙酮、醇或其組合萃取。
  14. 如請求項13之組合物，其中該醇為甲醇或乙醇。
  15. 如請求項1之組合物，其中來自該蘆薈萃取物或該Poria萃取物之各該等多醣個別地及/或組合地藉由乙醇沈澱或超過濾而富集。
  16. 如請求項1之組合物，其中一或多種多酚個別地或組合地藉由乙醇沈澱或超過濾而富集。
  17. 如請求項1之組合物，其中該組合物進一步包含醫藥學上或類藥劑營 養品上可接受之活性劑、佐劑、載劑、稀釋劑或賦形劑，且其中醫藥或類藥劑營養調配物包含0.1重量百分比至99.9重量%之活性化合物。
  18. 如請求項17之組合物，其中該活性劑、佐劑、賦形劑或載劑包含大麻(Cannabis sativa)油或CBD/THC、薑黃萃取物或薑黃素、欖仁萃取物、柳樹皮萃取物、南非鉤麻根萃取物、辣椒粉萃取物或辣椒鹼、花椒皮萃取物、蔓綠絨皮萃取物、蛇麻子萃取物、乳香(Boswellia)萃取物、玫瑰果萃取物、綠茶萃取物、槐(Sophora)萃取物、薄荷(Mentha)或胡椒薄荷(Peppermint)萃取物、薑或黑薑萃取物、綠茶或葡萄籽多酚、ω-3或ω-6脂肪酸、魚油、磷蝦油、γ-次亞麻油酸、柑橘類生物類黃酮、針葉櫻桃(Acerola)濃縮物、還原蝦紅素(astaxanthin)、碧蘿芷(pycnogenol)、維生素C、維生素D、維生素E、維生素K、維生素B、維生素A、L-離胺酸、鈣、錳、鋅、礦物質胺基酸螯合劑、胺基酸、硼及甘胺酸硼、二氧化矽、益生菌、樟腦、薄荷醇、二氧化矽、組胺酸、葡糖酸銅、CMC、麥芽糊精、β-環糊精、纖維素、右旋糖、生理食鹽水、水、油、鯊魚及牛軟骨或其組合。
  19. 如請求項1之組合物，其中該組合物調配為錠劑、硬膠囊、軟凝膠膠囊、散劑或粒劑、軟糖、橡皮糖、小藥囊劑、粉片、棒或液體形式、空中擴散劑、半固體或半液體。
  20. 一種呈0.01mg/kg至500mg/kg哺乳動物體重之量之如請求項1至19中任一項之組合物的用途，其用於製造用於經由減少HGMB1及TNF-α以 治療、管理、促進調節該哺乳動物之免疫恆定性之藥劑。
  21. 如請求項20之用途，其中該藥劑具有選自包含以下之群的投與途徑：經口投與、局部投與、栓劑投與及靜脈內投與。
  22. 如請求項21之用途，其中該局部投與為皮內(intradermic)投與、胃內投與、肌肉內投與或腹膜內投與。
  23. 如請求項20之用途，其中該藥劑用於哺乳動物藉由使免疫反應最佳化或平衡來維持免疫恆定性；改良衰老及免疫器官老化損壞之免疫性；預防慢性發炎及發炎損壞之免疫性；幫助維持針對流感疫苗接種或COVID-19疫苗接種之健康免疫反應；幫助維持針對病毒感染及細菌感染之健康免疫功能；保護免疫系統免受由空氣污染誘導的氧化應激損傷。
  24. 如請求項20之用途，其中該藥劑進一步用於作為內源性或外源性反應攻擊觸發子調節HMGB1且轉移宿主免疫反應以恢復恆定性，其係藉由抑制HMGB1釋放或抵消其作用，如藉由阻斷細胞質易位或藉由阻斷囊泡介導之釋放靶向HMGB1主動或被動釋放；或抑制細胞核中之分子內二硫鍵形成；在釋放時直接靶向HMGB1且中和其作用；阻斷HMGB1模式識別受體，及後期糖基化終產物受體(RAGE)或抑制其信號轉導；改變生理化學微環境，且防止HMGB1四聚體形成且干擾HMGB1對TLR及RAGE之結合親和力，防止HMGB1之集群形成或自締合。
  25. 如請求項20之用途，其中該藥劑進一步用於支援健康發炎反應；維持健康之補體C3及C4蛋白質、細胞介素含量及針對感染之細胞介素反應水準；減低、調節及維持TNF-α、IL-1β、IL-6、GM-CSF；IFN-α；IFN-γ；IL-1α；IL-1RA；IL-2；IL-4；IL-5；IL-7；IL-9；IL-10；IL-12 p70；IL-13；IL-15；IL17A；IL-18；IL-21；IL-22；IL-23；IL-27；IL-31；TNF-β/LTA、CRP及CINC3。
  26. 如請求項20之用途，其中該藥劑進一步用於哺乳動物控制氧化反應及緩解氧化應激；藉由增加過氧化氫酶(CAT)、麩胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)、超氧化歧化酶(SOD)及Nrf2來增強抗氧化能力；減少或維持丙二醛(MDA)、8-異前列腺素F2α及後期糖基化終產物(AGE)；中和活性含氧物；保護免於UV及化學氧化應激引起之DNA損傷。
  27. 如請求項20之用途，其中該藥劑進一步用於哺乳動物改良先天性免疫性；改良後天性免疫性；提高白血球之活性及計數，增強自然殺手(NK)細胞功能；增加、調節、維持T及B淋巴球、嗜中性白血球、淋巴球、單核球、嗜酸性球、嗜鹼性球之計數；增加CD3+、CD3- CD56+ NK細胞、CD3+ CD56+ NKT細胞、CD3+ CD56- T淋巴球、CD3-CD56-非NK、非T淋巴球、CD3-CD57+ NK細胞、CD3- CD56+CD57+ NK細胞、CD4+ NKp46+自然殺手細胞、TCRγδ+ γ δ T細胞及CD4+TCRγδ+輔助γ δ T細胞及CD8+細胞計數；調節CD45+細胞、CD45RA初始T及B細胞、CD45R0活化及記憶T及B細胞；保護及促進巨噬細胞吞噬活性；及支援或促進針對特定病毒株之正常抗體IgG、IgM、IgA產生、血球凝集素抑制 (HI)效價。
  28. 如請求項20之用途，其中該藥劑進一步用於哺乳動物維持健康肺部微生物群或呼吸器官中之共生系統；維持肺清潔及去毒能力；保護肺結構完整性及氧交換能力；維持呼吸通路且增強肺泡之氧吸收能力；保護正常健康肺功能免於病毒感染、細菌感染、吸菸及空氣污染影響；緩和氧化應激引起的肺部損傷；及促進肺微循環且保護正常凝血功能。
  29. 如請求項20之用途，其中該藥劑進一步用於哺乳動物緩解或減少包含以下之感冒/流感樣症狀：身體疼痛、喉嚨痛、咳嗽、輕微咽喉及支氣管刺激、鼻充血、鼻竇充血、鼻竇壓力、流鼻涕、打噴嚏、喪失嗅覺、喪失味覺、肌肉酸痛、頭痛、發熱及發冷；幫助使痰(黏液)散開及使支氣管分泌物變稀以使得能咳出更多；降低支氣管刺激之嚴重程度；降低由病毒感染、微生物感染及空氣污染引起的肺損傷或水腫或發炎性細胞浸潤之嚴重程度；支援支氣管系統及舒適呼吸度過感冒/流感或污染季節；預防或治療肺纖維化；降低普通感冒/流感之持續時間或嚴重程度；降低呼吸系統之病毒及細菌感染之嚴重程度或持續時間；預防或治療或治癒由病毒、微生物及空氣污染物引起之呼吸系統感染；管理或治療或預防或逆轉呼吸系統感染之進展；及管理或治療或預防或逆轉肺炎之進展，促進及強化肺及整個呼吸系統之修復及更新功能及使其恢復。
  30. 如請求項1至19中任一項之組合物，其用於藉由調節HMGB1以維持免疫恆定性，其中該組合物藉由抑制HMGB1釋放或抵消其作用來調節 HMGB1，如藉由阻斷細胞質易位或藉由阻斷囊泡介導之釋放靶向HMGB1主動或被動釋放；或抑制細胞核中之分子內二硫鍵形成；或在釋放時直接靶向HMGB1且中和其作用；或阻斷HMGB1模式識別受體，及後期糖基化終產物受體(RAGE)或抑制其信號轉導；或改變生理化學微環境，且防止HMGB1四聚體形成且干擾HMGB1對TLR及RAGE之結合親和力；或防止HMGB1之集群形成或自締合。
  31. 如請求項30之組合物，其中該組合物中之該等多醣及酚化合物在1重量%：99重量%與99重量%：1重量%各類型之化合物範圍內。
  32. 如請求項30之組合物，其中該組合物具有包含以下之投與途徑：經口投與、局部投與、栓劑投與及靜脈內投與。
  33. 如請求項32之組合物，其中該局部投與為皮內(intradermic)投與、胃內投與、肌肉內投與或腹膜內投與。
  34. 一種如請求項30之組合物之用途，其用於製造用於治療、管理、促進調節哺乳動物之免疫恆定性之藥劑，其中該組合物呈0.01mg/kg至500mg/kg該哺乳動物體重之量。
  35. 一種如請求項30之組合物之用途，其用於製造用於藉由使免疫反應最佳化或平衡來維持免疫恆定性；幫助維持針對病毒感染及細菌感染之健康免疫功能；保護免疫系統免受由空氣污染誘導的氧化應激損傷；保護正 常健康肺功能免於病毒感染、細菌感染及空氣污染之藥劑，其中該組合物呈0.01mg/kg至500mg/kg該哺乳動物體重之量。
  36. 一種如請求項30之組合物之用途，其用於製造用於將HMGB1作為內源性或外源性反應攻擊觸發子調節及轉移宿主免疫反應以恢復恆定性之藥劑，其中該組合物呈0.01mg/kg至500mg/kg該哺乳動物體重之量。
  37. 一種如請求項30之組合物之用途，其用於製造用於支援健康發炎反應；維持健康之補體C3及C4蛋白質、細胞介素含量及針對感染之細胞介素反應水準；減低、調節及維持TNF-α、IL-1β、IL-6、GM-CSF；IFN-α；IFN-γ；IL-1α；IL-1RA；IL-2；IL-4；IL-5；IL-7；IL-9；IL-10；IL-12 p70；IL-13；IL-15；IL17A；IL-18；IL-21；IL-22；IL-23；IL-27；IL-31；TNF-β/LTA、CRP及CINC3之藥劑，其中該組合物呈0.01mg/kg至500mg/kg該哺乳動物體重之量。
  38. 一種如請求項30之組合物之用途，其用於製造用於控制氧化反應及緩解氧化應激；藉由增加過氧化氫酶(CAT)、麩胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)、超氧化歧化酶(SOD)及Nrf2來增強抗氧化能力；減少或維持丙二醛(MDA)、8-異前列腺素F2α及後期糖基化終產物(AGE)；中和活性含氧物；保護使得UV及化學氧化應激不引起DNA損傷之藥劑，其中該組合物呈0.01mg/kg至500mg/kg該哺乳動物體重之量。
  39. 一種如請求項30之組合物之用途，其用於製造用於改良先天性免疫 性；改良後天性免疫性；提高白血球之活性及計數，增強自然殺手(NK)細胞功能；增加、調節、維持T及B淋巴球、嗜中性白血球、淋巴球、單核球、嗜酸性球、嗜鹼性球之計數；增加CD3+、CD3- CD56+ NK細胞、CD3+ CD56+ NKT細胞、CD3+ CD56- T淋巴球、CD3-CD56-非NK、非T淋巴球、CD3-CD57+ NK細胞、CD3- CD56+CD57+ NK細胞、CD4+ NKp46+自然殺手細胞、TCRγδ+ γ δ T細胞及CD4+TCRγδ+輔助γ δ T細胞及CD8+細胞計數；調節CD45+細胞、CD45RA初始T及B細胞、CD45R0活化及記憶T及B細胞；保護及促進巨噬細胞吞噬活性；支援或促進針對特定病毒株之正常抗體IgG、IgM、IgA產生、血球凝集素抑制(HI)效價之藥劑，其中該組合物呈0.01mg/kg至500mg/kg該哺乳動物體重之量。
  40. 一種如請求項30之組合物之用途，其用於製造用於維持健康肺部微生物群或呼吸器官中之共生系統；維持肺清潔及去毒能力；保護肺結構完整性及氧交換能力；維持呼吸通路且增強肺泡之氧吸收能力；緩和氧化應激引起的肺部損傷；促進肺微循環且保護正常凝血功能之藥劑，其中該組合物呈0.01mg/kg至500mg/kg該哺乳動物體重之量。
  41. 一種如請求項30之組合物之用途，其用於製造用於哺乳動物緩解或減少包含以下之感冒或流感樣症狀：身體疼痛、喉嚨痛、咳嗽、輕微咽喉及支氣管刺激、鼻充血、鼻竇充血、鼻竇壓力、流鼻涕、打噴嚏、喪失嗅覺、喪失味覺、肌肉酸痛、頭痛、發熱及發冷；幫助使痰(黏液)散開及使支氣管分泌物變稀以使得能咳出更多；降低支氣管刺激之嚴重程度；降低由病毒感染、微生物感染及空氣污染引起的肺損傷或水腫或發炎性細胞浸 潤之嚴重程度；支援支氣管系統及舒適呼吸度過感冒/流感或污染季節；預防或治療肺纖維化；降低普通感冒/流感之持續時間或嚴重程度；降低呼吸系統之病毒及細菌感染之嚴重程度或持續時間；預防或治療或治癒由病毒、微生物及空氣污染物引起之呼吸系統感染；管理或治療或預防或逆轉呼吸系統感染之進展；及管理或治療或預防或逆轉肺炎之進展，促進及強化肺及整個呼吸系統之修復及更新功能及使其恢復之藥劑，其中該組合物呈0.01mg/kg至500mg/kg該哺乳動物體重之量。
TW110125260A 2020-07-09 2021-07-09 用於調節免疫恆定性之含有多醣及多酚之蘆薈基底組合物 TWI801925B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063049871P 2020-07-09 2020-07-09
US63/049,871 2020-07-09

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW202214284A TW202214284A (zh) 2022-04-16
TWI801925B true TWI801925B (zh) 2023-05-11

Family

ID=77543580

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW112112854A TW202339785A (zh) 2020-07-09 2021-07-09 用於調節免疫恆定性之含有多醣及多酚之蘆薈基底組合物
TW110125260A TWI801925B (zh) 2020-07-09 2021-07-09 用於調節免疫恆定性之含有多醣及多酚之蘆薈基底組合物

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW112112854A TW202339785A (zh) 2020-07-09 2021-07-09 用於調節免疫恆定性之含有多醣及多酚之蘆薈基底組合物

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20220016196A1 (zh)
EP (1) EP4178601A1 (zh)
JP (1) JP2023533971A (zh)
KR (1) KR20230035638A (zh)
CN (1) CN116490198A (zh)
AU (1) AU2021310189A1 (zh)
BR (1) BR112023000300A2 (zh)
CA (1) CA3185416A1 (zh)
MX (1) MX2023000257A (zh)
TW (2) TW202339785A (zh)
WO (1) WO2022015559A1 (zh)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114557938B (zh) * 2022-02-09 2024-03-26 珠海伊斯佳科技股份有限公司 一种兼具提亮、紧致、抗皱功能的组合物及其制备方法和应用
TWI818466B (zh) * 2022-03-15 2023-10-11 高雄醫學大學 用於治療砷誘發之肺功能損傷之類黃酮藥物
CN114698845B (zh) * 2022-04-11 2023-08-18 湖北工业大学 茯苓多糖egc组合物在抑制胃肠道精氨嘧啶形成中的应用
WO2023235511A1 (en) * 2022-06-01 2023-12-07 Sens Research Foundation Targeted elimination of senescent cells by gamma-delta t cells
WO2024062164A1 (fr) * 2022-09-23 2024-03-28 A2P Sciences Acide sagerinique et compositions le contenant pour utilisation dans la prevention et/ou le traitement des troubles lies a la senescence chez un etre humain ou animal
CN115611994B (zh) * 2022-11-01 2023-08-04 安徽大学 一种睡茄多糖及其制备方法和在降糖中的应用
CN116606352B (zh) * 2023-07-14 2023-09-29 诺赛联合(北京)生物医学科技有限公司 一种抗菌修复功能的组合物凝胶在妇科疾病中的应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105454372A (zh) * 2015-11-17 2016-04-06 张立涛 一种壳寡糖保健饼干及其制备方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11106347A (ja) * 1997-08-07 1999-04-20 Shiseido Co Ltd 免疫賦活剤
US6800292B1 (en) * 1999-04-22 2004-10-05 Howard Murad Pomegranate fruit extract compositions for treating dermatological disorders
US8604187B2 (en) * 2010-01-14 2013-12-10 North Texas Medical Associates Compositions and methods of aloe polysaccharides
CN102399299B (zh) * 2011-12-05 2013-05-22 湖北泱盛生物科技有限公司 一种茯苓酸性多糖提取物的制备方法及应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105454372A (zh) * 2015-11-17 2016-04-06 张立涛 一种壳寡糖保健饼干及其制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
期刊 Christaki, E. V., "Aloe vera: a plant for many uses" Journal of Food, Agriculture & Environment, Vol 8, No 2, April 2010, pages 245-249.
期刊 Solomon K. S. Amoah et al., "Rosmarinic Acid-Pharmaceutical and Clinical Aspects", Planta Med, Vol 82(05), 2016, pages 388-406.;期刊 José-Luis Ríos, "Chemical Constituents and Pharmacological Properties of Poria cocos", Planta Med, Vol 77(7), 20110223, pages 681-691.;期刊 Christaki, E. V., "Aloe vera: a plant for many uses" Journal of Food, Agriculture & Environment, Vol 8, No 2, April 2010, pages 245-249. *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2021310189A1 (en) 2023-02-09
WO2022015559A1 (en) 2022-01-20
TW202214284A (zh) 2022-04-16
CN116490198A (zh) 2023-07-25
MX2023000257A (es) 2023-06-01
KR20230035638A (ko) 2023-03-14
CA3185416A1 (en) 2022-01-20
BR112023000300A2 (pt) 2023-03-28
JP2023533971A (ja) 2023-08-07
TW202339785A (zh) 2023-10-16
US20220016196A1 (en) 2022-01-20
EP4178601A1 (en) 2023-05-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI801925B (zh) 用於調節免疫恆定性之含有多醣及多酚之蘆薈基底組合物
Niu et al. Polysaccharides from natural resources exhibit great potential in the treatment of ulcerative colitis: A review
Riaz et al. Ginseng: A dietary supplement as immune-modulator in various diseases
Xie et al. Advances on bioactive polysaccharides from medicinal plants
Saeed et al. The promising pharmacological effects and therapeutic/medicinal applications of punica granatum L.(Pomegranate) as a functional food in humans and animals
Bhardwaj et al. Suppression of inflammatory and allergic responses by pharmacologically potent fungus Ganoderma lucidum
Thakur et al. Rasayana properties of Ayurvedic herbs: Are polysaccharides a major contributor
Basak et al. Immunity boosting nutraceuticals: Current trends and challenges
Gasmi et al. Natural ingredients to improve immunity
Horie et al. The potency of a novel fermented unripe banana powder as a functional immunostimulatory food ingredient
Loría Gutiérrez et al. General aspects about Allium sativum-a review
CN112641097A (zh) 一种对胃粘膜损伤有辅助保护作用的组合物及应用
Mosleh et al. Potentials of Antitussive traditional Persian functional foods for COVID-19 therapy
US20220031654A1 (en) Standardized Bioflavonoid Composition for Regulation of Homeostasis of Host Defense Mechanism
Boscaro et al. Evidence-based anti-diabetic properties of plant from the Occitan Valleys of the Piedmont Alps
AYDIN et al. A review: Momordica charantia L.'s biological active components and its potential use in traditional therapies
Daoudi et al. Screening of fourteen, Moroccan medicinal plants for immunomodulating activities
Ali et al. Immunogenetic disorders: Treatment with phytomedicines
Choi et al. Korean Ginseng Berry Polysaccharide Enhances Immunomodulation Activities of Peritoneal Macrophages in Mice with Cyclophosphamide-Induced Immunosuppression
Abuarab et al. Immunomodulatory and anticancer activities of barley bran grown in Jordan: An in vitro and in vivo study
Abdel-Aziz et al. Fortified foods and medicinal plants as immunomodulators
KR102206870B1 (ko) 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 복합제제 및 그 제조방법
Pushpakaran et al. Immunomodulatory effect of ashwagandha (Withania somnifera (L.) Dunal) and its impact on COVID-19
Gutiérrez et al. General aspects about Allium sativum–
Meena et al. Biomolecules and Therapeutics of Plantago ovata Forssk.