TWI788444B - Ｆｇｆｒ４抑制劑晶型及其製備方法 - Google Patents

Ｆｇｆｒ４抑制劑晶型及其製備方法 Download PDF

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Abstract

本發明涉及的FGFR4抑制劑的晶型及其製備方法，以及含有治療有效量的該類化合物醫藥組成物和在治療癌症的應用。本發明製備的晶型穩定性好、不具有引濕性，溶解度良好，在製劑生產過程中具有良好的適應性，能實現藥物良好的溶出行為，確保藥物在體內具有良好的生物利用度。並且晶型製備工藝簡單，收率高，適合工業化生產。

Description

FGFR4抑制劑晶型及其製備方法
本發明涉及藥物合成領域，具體涉及式(I)所示化合物游離鹼不同的晶型及其製備方法和用途。
化合物(R)-N-(5-氰基-4-((1-甲氧基丙烷-2-基)胺基)吡啶-2-基)-7-甲醯基-6-((2-羰基-1,3-噁吖庚環-3-基)甲基)-3,4-二氫-1,8-二氮雜萘-1(2H)-甲醯胺(所示如式I)。式(I)化合物公開於豪森專利PCT/CN2017/084564，式I化合物為成纖維細胞生長因子受體抑制劑，成纖維細胞生長因子受體(FGFR)屬於受體酪胺酸激酶跨膜受體，包括4個受體亞型，分別為FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4。FGFR調節細胞增殖、生存、分化和遷移等多種功能，在人體發育和成人各項機體功能中發揮重要作用。FGFR在多種人類腫瘤中表現異常，包括基因擴增、突變和過表達，是腫瘤靶向治療研究的重要靶點。
Figure 107138367-A0101-12-0002-2
本發明的目的在於提供式(I)化合物的晶型I、II、III、和IV，晶型採用了X-射線粉末衍射表徵，使用的Cu-Ka輻射。
本發明提供的晶型I，其X-射線粉末衍射圖譜在2θ(±0.2°)值為7.810°、6.990°、25.122°、15.717°、11.648°、13.033°處具有特徵峰。
更進一步的，本發明提供的晶型I，其X-射線粉末衍射圖還在2θ(±0.2°)值為20.926°、22.742°、19.111°、29.621°、23.798°、17.619°處具有特徵峰。
更進一步的，本發明提供的晶型I，其X-射線粉末衍射圖基本如第1圖所示。
本發明提供的晶型II，其X-射線粉末衍射圖譜在2θ(±0.2°)值為6.867°、19.300°、7.840°、19.629°、23.828°、14.467°處具有特徵峰。
更進一步的，本發明提供的晶型II，其X-射線粉末衍射圖還在2θ(±0.2°)值為26.894°、17.548°、20.869°、11.726°、20.412°、13.845°處具有特徵峰。
更進一步的，本發明提供的晶型II，其X-射線粉末衍射圖基本如第2圖所示。
本發明提供的晶型III，其X-射線粉末衍射圖譜在2θ(±0.2°)值為7.821°、15.700°、20.579°、13.120°、21.610°、6.985°處具有特徵峰。
更進一步的，本發明提供的晶型III，其X-射線粉末衍射圖還在2θ(±0.2°)值為23.745°、11.758°、19.049°、25.098°、12.087°、8.330°處具有特徵峰。
更進一步的，本發明提供的晶型III，其X-射線粉末衍射圖基本如第3圖所示。
本發明提供的晶型IV，為N-甲基吡咯烷酮溶劑合物，其X-射線粉末衍射圖譜在2θ(±0.2°)值為6.573°、20.866°、20.203°、26.810°、8.848°、13.585°處具有特徵峰。
更進一步的，本發明提供的晶型IV，其X-射線粉末衍射圖還在2θ(±0.2°)值為13.231°、21.926°、5.875°、12.121°、14.534°、17.043°處具有特徵峰。
更進一步的，本發明提供的晶型IV，其X-射線粉末衍射圖基本如第4圖所示。
本發明的另一目的在於提供式(I)化合物晶型I、II、III和IV的製備方法。
本發明提供的晶型I的製備方法，其製備方法包括以下步驟：1.室溫下，將式(I)化合物游離鹼固體溶於有機溶劑中，得到澄清溶液， 2.滴加反溶劑至固體析出，3.過濾樣品即得晶型I。
該正溶劑包括但不侷限於二氯甲烷和三氯甲烷，反溶劑包括但不侷限於正己烷和正庚烷。
本發明提供的晶型II的製備方法，其製備方法包括以下步驟：
1.用有機溶劑將游離鹼固體在加熱條件下溶清，自然降溫析出固體，
2.過濾樣品即得晶型II。
3.該溶劑包括但不侷限於二甲亞碸和丙酮。加熱溫度較佳40℃~60℃。
本發明提供的晶型II的製備方法，其製備方法包括以下步驟：1.用有機溶劑將游離鹼固溶清，2.加入晶種，並加入反溶劑至固體析出，過濾樣品即得晶型II。
該有機溶劑包括但不侷限於二甲亞碸和二氯甲烷，該反溶劑包括但不侷限於乙酸乙酯和正庚烷。
本發明提供的晶型III的製備方法，其製備方法包括以下步驟：1.室溫下，向式(I)化合物游離鹼固體中加入有機溶劑得到懸浮液，2.打漿，過濾樣品即得晶型III。
該有機溶劑包括但不侷限於丙酮和2-丁酮。
本發明提供的晶型IV的製備方法，其製備方法包括以下步驟：1.室溫下，用N-甲基吡咯烷酮溶劑將式(I)化合物游離鹼固體溶清，2.滴加反溶劑至固體析出，3.過濾樣品即得N-甲基吡咯烷酮溶劑合物晶型IV。
該反溶劑包括但不限於異丙醚和甲基第三丁基醚。目前尚無文獻報導式(I)化合物的晶型，本發明公開的晶型為式(I)化合物的游離鹼晶型，這幾個晶型穩定性好、不具有引濕性，溶解度良好，在製劑生產過程中具有良好的適應性，能實現藥物良好的溶出行為，確保藥物在體內具有良好的生物利用度。相應晶型製備工藝簡單，收率高，適合工業化生產。因此，本發明晶型非常適合藥物製劑應用，具有良好的臨床應用前景。
第1圖為實施例二式(I)化合物晶型I的XRPD圖譜。
第2圖為實施例三式(I)化合物晶型II的XRPD圖譜。
第3圖為實施例六式(I)化合物晶型III的XRPD圖譜。
第4圖為實施例七式(I)化合物晶型IV的XRPD圖譜。
實施例一：式(I)化合物的製備
第一步4-(((2-(二甲氧基甲基)-5,6,7,8-四氫-1,8-二氮雜萘-3-基)甲基)胺基)丁烷-1-醇的製備
Figure 107138367-A0101-12-0006-3
室溫下，將2-(二甲氧基甲基)-5,6,7,8-四氫-1,8-二氮雜萘-3-甲醛(1.0g,4.2mmol)，4-胺基丁烷-1-醇(0.45g,5.1mmol)溶於DCE(15mL)，攪拌2小時，然後加入NaBH(OAc)3(1.35g,6.4mmol)，室溫下攪拌過夜。反應液用CH2Cl2(100mL)稀釋，有機相依次用水(10mL)和飽和食鹽水(15mL)洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥，濃縮後管柱層析得到化合物4-(((2-(二甲氧基甲基)-5,6,7,8-四氫-1,8-二氮雜萘-3-基)甲基)胺基)丁烷-1-醇(0.9g,69%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.13(s,1H),5.17(s,1H),4.84(s,1H),3.73(s,2H),3.66-3.49(m,2H),3.42(s,6H),3.40-3.36(m,2H),2.71(t,J=6.3Hz,2H),2.68-2.56(m,2H),1.95-1.81(m,2H),1.74-1.55(m,4H)； MS m/z(ESI)：310.2[M+H]+.
第二步3-((2-(二甲氧基甲基)-5,6,7,8-四氫-1,8-二氮雜萘-3-基)甲基)-1,3-噁吖庚環-2-酮的製備
Figure 107138367-A0101-12-0006-4
冰水浴下，將4-(((2-(二甲氧基甲基)-5,6,7,8-四氫-1,8- 二氮雜萘-3-基)甲基)胺基)丁烷-1-醇(0.6g,1.94mmol)溶於DCE(15mL)，然後加入二(三氯甲基)碳酸酯(0.22g,0.76mmol)，緩慢滴加三乙胺(0.78g,7.76mmol)，然後在室溫下攪拌3小時。將反應溫度升至80℃，在80℃下反應6小時，反應冷卻至室溫後，用CH2Cl2(100mL)稀釋，有機相依次用水(10mL)和飽和食鹽水(15mL)洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥，濃縮後管柱層析得到化合物3-((2-(二甲氧基甲基)-5,6,7,8-四氫-1,8-二氮雜萘-3-基)甲基)-1,3-噁吖庚環-2-酮(0.37g,57%)。
MS m/z(ESI)：336.2[M+H]+.
第三步苯基7-(二甲氧基甲基)-6-((2-羰基-1,3-噁吖庚環-3-基)甲基)-3,4-二氫-1,8-二氮雜萘-1(2H)-羧酸酯的製備
Figure 107138367-A0101-12-0007-6
3-((2-(二甲氧基甲基)-5,6,7,8-四氫-1,8-二氮雜萘-3-基)甲基)-1,3-噁吖庚環-2-酮(670mg,2mmol)，碳酸二苯酯(643mg,3mmol)混合於THF(15mL)中，N2氛圍下，冷卻至-78℃，滴加LiHMDS的THF(4mL,4mmol)溶液，自然升至室溫反應過夜。加入飽和NH4Cl水溶液(100mL)，乙酸乙酯(100mL×2)萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後管柱層析得標題化合物苯基7-(二甲氧基甲基)-6-((3-羰基嗎啉基)甲基)-3,4-二氫-1,8-二氮雜 萘-1(2H)-羧酸酯(432mg,47%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.56(s,1H),7.38(m,2H),7.21(m,3H),5.22(s,1H),4.77(s,2H),4.16(m,2H),3.95(m,2H),3.39(s,6H),3.25(m,2H),2.84(t,J=6.5Hz,2H),1.87(m,2H),1.64(m,4H)； MS m/z(ESI)：456.2[M+H]+.
第四步：(R)-N-(5-氰基-4-((1-甲氧基丙烷-2-基)胺基)吡啶-2-基)-7-(二甲氧基甲基)-6-((2-羰基-1,3-噁吖庚環-3-基)甲基)-3,4-二氫-1,8-二氮雜萘-1(2H)-甲醯胺的合成
Figure 107138367-A0101-12-0008-7
(R)-6-胺基-4-((1-甲氧基丙烷-2-基)胺基)尼古丁腈(30mg,0.14mmol)，苯基7-(二甲氧基甲基)-6-((2-羰基-1,3-噁吖庚環-3-基)甲基)-3,4-二氫-1,8-二氮雜萘-1(2H)-羧酸酯(60mg,0.13mmol)溶於THF(5mL)中，N2氛圍下冷卻至-78℃，滴加LiHMDS的THF(0.3mL,0.3mmol)溶液於反應液中，自然升至室溫反應過夜。加入飽和NH4Cl水溶液(50mL)，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合併有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後管柱層析得標題化合物(R)-N-(5-氰基-4-((1-甲氧基丙烷-2-基)胺基)吡啶-2-基)-7-(二甲氧基甲基)-6-((2-羰基-1,3-噁吖庚環-3- 基)甲基)-3,4-二氫-1,8-二氮雜萘-1(2H)-甲醯胺(65mg,86%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 13.70(s,1H),8.18(s,1H),7.60(s,2H),5.41(s,1H),5.12(d,J=7.8Hz,1H),4.73(s,2H),4.20-4.11(m,2H),4.06-3.99(m,2H),3.93(s,1H),3.52-3.48(m,7H),3.46-3.42(m,1H),3.39(s,3H),3.26-3.21(m,2H),2.83(t,J=6.2Hz,2H),2.03-1.95(m,2H),1.91-1.83(m,2H),1.67-1.62(m,2H),1.31(d,J=6.6Hz,3H)； MS m/z(ESI)：568.3[M+H]+.
第五步：(R)-N-(5-氰基-4-((1-甲氧基丙烷-2-基)胺基)吡啶-2-基)-7-甲醯基-6-((2-羰基-1,3-噁吖庚環-3-基)甲基)-3,4-二氫-1,8-二氮雜萘-1(2H)-甲醯胺的合成
Figure 107138367-A0101-12-0009-8
(R)-N-(5-氰基-4-((1-甲氧基丙烷-2-基)胺基)吡啶-2-基)-7-(二甲氧基甲基)-6-((2-羰基-1,3-噁吖庚環-3-基)甲基)-3,4-二氫-1,8-二氮雜萘-1(2H)-甲醯胺(65mg,0.12mmol)溶於THF/水(體積比：11/4，4.5mL)中，加入濃HCl(0.45mL,5.4mmol)，室溫反應2h。加入飽和NaHCO3水溶液(50mL)，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合併有機相並 用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後管柱層析得標題化合物(R)-N-(5-氰基-4-((1-甲氧基丙烷-2-基)胺基)吡啶-2-基)-7-甲醯基-6-((2-羰基-1,3-噁吖庚環-3-基)甲基)-3,4-二氫-1,8-二氮雜萘-1(2H)-甲醯胺(30mg,51%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 13.57(s,1H),10.26(s,1H),8.17(s,1H),7.71(s,1H),7.63(s,1H),5.27(s,1H),4.95(s,2H),4.19-4.12(m,2H),4.11-4.04(m,2H),3.94(s,1H),3.52(m,1H),3.48-3.37(m,4H),3.33-3.28(m,2H),2.93(t,J=6.3Hz,2H),2.04(m,2H),1.93-1.85(m,2H),1.73(m,2H),1.39-1.28(m,3H)； MS m/z(ESI)：522.2[M+H]+.
實施例二：晶型I的製備
稱取2g式(I)化合物固體樣品於250mL茄形瓶中。加入20mL二氯甲烷至固體溶清，滴加100mL的正庚烷，析出固體後，繼續攪拌2小時，過濾樣品即得晶型I，其XRPD圖譜如第1圖所示。
實施例三：晶型II的製備
稱取2g式(I)化合物固體樣品於50mL茄形瓶中。加入16mL二甲亞碸，油加熱至60℃將固體全部溶清。自然降溫至室溫，析出固體，過濾，即得晶型II，其XRPD圖譜如第2圖所示，HPLC純度為98.7%。
實施例四：晶型II的製備
稱取1g式(I)化合物固體樣品於50mL茄形瓶中。加入5mL二甲亞碸，油加熱至60℃將固體全部溶清。緩慢降溫， 加入晶種，加入乙酸乙酯50ml攪拌，過濾，即得晶型II，其XRPD圖譜基本如第2圖所示，HPLC純度為99.4%。
實施例五：晶型II的製備
稱取25g式(I)化合物固體樣品於1000mL茄形瓶中。加入170mL二氯甲烷至固體全部溶清。加入100mL乙酸乙酯，加入晶種，緩慢加入乙酸乙酯400mL，降至室溫攪拌，過濾，即得晶型II，其XRPD圖譜基本如第2圖所示，HPLC純度為98.9%。
實施例六：晶型III的製備
稱取1g式(I)化合物固體樣品於50mL茄形瓶中。加入10mL丙酮，得到懸浮液。室溫下，磁力攪拌10天，過濾，即得晶型III，其XRPD圖譜如第3圖所示。
實施例七：晶型IV的製備
稱取3g式(I)化合物固體樣品於100mL茄形瓶中。室溫下加入30mL N-甲基吡咯烷酮將固體全部溶清。攪拌條件下緩慢滴加30mL異丙醚，析出大量白色固體。析出固體後過濾樣品，即得N-甲基吡咯烷酮溶劑合物晶型IV，其XRPD圖譜如第4圖所示。
實驗例一：酶學實驗
1．FGFR4酶學實驗
本實驗採用螢光共振能量轉移(TR-FRET)的方法測試化合物對FGFR4激酶活性的抑制作用，並得出化合物對FGFR4激酶活性的半數抑制濃度IC50。
1)在384孔板中加入1~5uL FGFR4酶溶液，酶終濃度為 0.1~5nM。
2)加入1~5uL梯度稀釋好的化合物溶液。
3)加入1~5uL受質混合液包含底物多肽終濃度5~50nM和ATP終濃度10~200uM。
4)室溫孵育0.5~3小時。
5)加入10uL EDTA和含標記抗體的檢測液，室溫孵育1小時。
6)酶標儀測定各板孔的665nm螢光信號值。
7)藉由螢光信號值計算抑制率。
8)根據不同濃度的抑制率藉由曲線擬合得出化合物的IC50，具體實施例酶學活性見表1。
2．FGFR1酶學實驗
本實驗採用螢光共振能量轉移(TR-FRET)的方法測試化合物對FGFR1激酶活性的抑制作用，並得出化合物對FGFR1激酶活性的半數抑制濃度IC50。
1)在384孔板中加入1~5uL FGFR1酶溶液，酶終濃度為0.1~5nM。
2)加入1~5uL梯度稀釋好的化合物溶液。
3)加入1~5uL受質混合液包含受質多肽終濃度5~50nM和ATP終濃度10~200uM。
4)室溫孵育0.5~3小時。
5)加入10uL EDTA和含標記抗體的檢測液，室溫孵育1小時。
6)酶標儀測定各板孔的665nm螢光信號值。
7)藉由螢光信號值計算抑制率。
8)根據不同濃度的抑制率藉由曲線擬合得出化合物的IC50，具體實施例酶學活性見表1。
Figure 107138367-A0101-12-0013-9
3．Hep 3B細胞增殖抑制實驗
本實驗採用CellTiter-Glo的方法測試化合物對Hep 3B細胞增殖的抑制作用，並得出化合物抑制細胞增殖活性的半數抑制濃度IC50。
1)在96孔細胞培養板中接種50~100uL的Hep 3B細胞懸液，密度為1~5×104細胞/mL，將培養板於培養箱培養16~24小時(37℃,5% CO2)。
2)向培養板細胞中加入梯度稀釋的不同濃度的待測化合物溶液，將培養板在培養箱孵育72小時(37℃,5% CO2)。
3)每孔加入50~100uL CellTiter-Glo試劑，室溫振盪或靜置5~30分鐘。
4)酶標儀測定各板的化學發光信號值。
5)藉由化學發光信號值計算抑制率。
6)根據不同濃度的抑制率藉由曲線擬合得出化合物的IC50，具體實施例細胞活性見表2。
4．HuH-7細胞增殖抑制實驗
本實驗採用CellTiter-Glo的方法測試化合物對HuH-7細胞增殖的抑制作用，並得出化合物抑制細胞增殖活性的半數抑制濃度IC50。
1)在96孔細胞培養板中接種50~100uL的HuH-7細胞懸液，密度為1~5×104細胞/mL，將培養板於培養箱培養16~24小時(37℃,5% CO2)。
2)向培養板細胞中加入梯度稀釋的不同濃度的待測化合物溶液，將培養板在培養箱孵育72小時(37℃,5% CO2)。
3)每孔加入50~100uL CellTiter-Glo試劑，室溫振盪或靜置5~30分鐘。
4)酶標儀測定各板的化學發光信號值。
5)藉由化學發光信號值計算抑制率。
6)根據不同濃度的抑制率藉由曲線擬合得出化合物的IC50，具體實施例細胞活性見表2。
5．SK-HEP-1細胞增殖抑制實驗
本實驗採用CellTiter-Glo的方法測試化合物對SK-HEP-1細胞增殖的抑制作用，並得出化合物抑制細胞增殖活性的半數抑制濃度IC50。
1)在96孔細胞培養板中接種50~100uL的SK-HEP-1細胞懸液，密度為1~5×104細胞/mL，將培養板於培養箱培養16~24小時(37℃,5% CO2)。
2)向培養板細胞中加入梯度稀釋的不同濃度的待測化合物溶液，將培養板在培養箱孵育72小時(37℃,5% CO2)。
3)每孔加入50~100uL CellTiter-Glo試劑，室溫振盪或靜置5~30分鐘。
4)酶標儀測定各板的化學發光信號值。
5)藉由化學發光信號值計算抑制率。
6)根據不同濃度的抑制率藉由曲線擬合得出化合物的IC50，具體實施例細胞活性見表2。
Figure 107138367-A0101-12-0015-10
6．大鼠的PK分析
本發明較佳實施例的大鼠藥物代謝動力學試驗採用SD大鼠(上海傑思捷實驗動物有限公司)進行。
■給藥方式：單次灌胃給藥。
■給藥劑量：5毫克/10毫升/千克。
■製劑處方：0.5% CMC和1% Tween 80，超聲溶解。
■取樣點：給藥後0.5、1、2、4、6、8和24小時。
■樣品處理：
1)靜脈採血0.2mL，置於K2EDTA試管中，室溫1000~3000×g離心5~20min分離血漿，於-80℃保存。
2)血漿樣品40uL加入160uL乙腈沉澱，混合後500 ~2000×g離心5~20分鐘。
3)取處理後上清溶液100uL進行LC/MS/MS分析待測化合物的濃度，LC/MS/MS分析儀器：AB Sciex API 4000。
■液相分析：
●液相條件：Shimadzu LC-20AD泵
●色譜管柱：phenomenex Gemiu 5um C18 50×4.6mm
●移動相：A液為0.1%甲酸水溶液，B液為乙腈
●流速：0.8mL/min
●洗脫時間：0-3.5分鐘，洗脫液如下：
Figure 107138367-A0101-12-0016-11
■藥物代謝動力學：
主要參數用WinNonlin 6.1計算得到，大鼠藥物代謝實驗結果見下表3：
Figure 107138367-A0101-12-0017-12
7．體內藥效試驗步驟及結果
7.1 實驗目的
藉由體內藥效實驗篩選出藥效較為明顯且毒副作用較小的化合物。
7.2 實驗主要儀器和試劑
7.2.1 儀器：
1、超淨工作臺(BSC-1300II A2，上海博訊實業有限公司醫療設備廠)
2、CO2培養箱(Thermo)
3、離心機(Centrifuge 5720R，Eppendorf)
4、全自動細胞計數儀(Countess II，Life)
5、移液器(10-20uL，Eppendorf)
6、顯微鏡(TS100，尼康)
6、遊標卡尺(500-196，日本三豐)
7、細胞培養瓶(T25/T75/T225，Corning)
7.2.2 試劑
1、MEM培養基(11095-080，gibico)
2、胎牛血清(FBS)(10099-141，gibico)
3、0.25%胰蛋白酶(25200-056，gibico)
4、青鏈黴素雙抗(SV30010，GE)
5、磷酸鹽緩衝液(PBS)(10010-023，gibico)
7.3 實驗步驟
7.3.1 細胞培養及細胞懸液製備
a，從細胞庫中取出一株Hep 3B細胞，用MEM培養基(MEM+10%FBS+1%Glu+1%SP)復蘇細胞，復蘇後的細胞置細胞培養瓶中(在瓶壁標記好細胞種類、日期、培養人名字等)置於CO2培養箱中培養(培養箱溫度為37℃，CO2濃度為5%)。
b，待細胞鋪滿培養瓶底部80-90%後繼代，繼代後細胞繼續置於CO2培養箱中培養。重複該過程直到細胞數滿足體內藥效需求。
c，收集培養好的細胞，用全自動細胞計數儀計數，根據計數結果用PBS重新懸浮細胞，製成細胞懸液(密度7×107/mL)，置於冰盒中待用。
7.3.2 細胞接種、量瘤：
a，接種前用一次性大小鼠通用耳標標記裸鼠，並用75%醫用酒精消毒接種部位皮膚。
b，接種時混勻細胞懸液，用1mL注射器抽取0.1~1mL細胞懸液、排除氣泡，然後將注射器置於冰袋上待用。
c，依次給試驗裸鼠接種(接種部位位於裸鼠右側背部 靠右肩位置皮下接種0.1mL細胞懸液)。
7.3.3 荷瘤鼠量瘤、分組、給藥
a，根據腫瘤生長情況，在接種後第14-16天量瘤、並計算腫瘤大小。
腫瘤體積計算：腫瘤體積(mm3)=長(mm)×寬(mm)×寬(mm)/2
b，根據腫瘤大小，採用隨機分組的方法進行分組。
c，根據分組結果，開始給予測試藥物(給藥方式：口服給藥，給藥劑量：30mg/kg，給藥體積：10mL/kg，給藥頻率：2次/天，給藥週期：14天，溶媒：0.5%CMC/1%吐溫80)。
d，開始給予測試藥物後每週二次量瘤、稱重。
e，實驗結束後安樂死動物。
7.4 試驗數據：
Figure 107138367-A0101-12-0019-13
實驗例二：晶型II流動性考察
對實施例3-5製備的晶形II進行流動性考察，測量製備晶形的休止角，試驗結果如下：
Figure 107138367-A0101-12-0020-14
試驗結果表明，本發明製備的晶形II粒徑適中，適合製劑的開發。
實驗例三：晶型I和晶形II穩定性考察
1、影響因素試驗考察
分別取實施例二和實施例三的樣品，按照影響因素考察條件進行穩定性研究，試驗結果如下：
Figure 107138367-A0101-12-0020-15
Figure 107138367-A0101-12-0021-18
試驗結果表明，晶型I和晶形II在影響因素條件下放置是穩定的。
2、樣品微粉後的晶型研究
取實施例三的樣品，進行原料微粉，微粉後將上述樣品進行X-射線粉末衍射檢測，數據見表7。
Figure 107138367-A0101-12-0022-19
X-射線粉末衍射譜表明，Ⅱ晶型樣品在微粉前後晶型不變。
Figure 107138367-A0101-11-0003-1

Claims (26)

  1. 一種式(I)化合物游離鹼的晶型I，其特徵在於，其X-射線粉末衍射圖譜在2θ(±0.2°)值為7.810°、6.990°、25.122°、15.717°、11.648°和13.033°處具有特徵峰，
    Figure 107138367-A0305-02-0026-1
  2. 如申請專利範圍第1項所述的晶型I，其中，其X-射線粉末衍射圖譜在2θ(±0.2°)值為7.810°、6.990°、25.122°、15.717°、11.648°、13.033°、20.926°、22.742°、19.111°、29.621°、23.798°和17.619°處具有特徵峰。
  3. 如申請專利範圍第1項所述的晶型I，其中，其X-射線粉末衍射圖譜如第1圖所示。
  4. 一種製備申請專利範圍第1項所述的晶型I的方法，包括以下步驟，(1)將式(I)化合物游離鹼固體溶於有機溶劑中，得到澄清溶液，(2)滴加反溶劑至固體析出，過濾，得晶型I。
  5. 如申請專利範圍第4項所述的製備方法，其中，該有機溶劑選自二氯甲烷或三氯甲烷，該反溶劑選自正己烷或正庚烷。
  6. 一種醫藥組成物，該醫藥組成物包含有效量的申請專 利範圍第1項所述的晶型I及藥學上可接受的賦形劑。
  7. 一種式(I)化合物游離鹼的晶型II，其特徵在於，其X-射線粉末衍射圖譜在2θ(±0.2°)值為6.867°、19.300°、7.840°、19.629°、23.828°和14.467°處具有特徵峰，
    Figure 107138367-A0305-02-0027-2
  8. 如申請專利範圍第7項所述的晶型II，其中，其X-射線粉末衍射圖譜在2θ(±0.2°)值為6.867°、19.300°、7.840°、19.629°、23.828°、14.467°、26.894°、17.548°、20.869°、11.726°、20.412°和13.845°處具有特徵峰。
  9. 一種製備申請專利範圍第7項所述的晶型II的方法，包括以下步驟：(1)用有機溶劑將游離鹼固體在加熱條件下溶清，(2)自然降溫析出固體，過濾即得晶型II。
  10. 如申請專利範圍第9項所述的製備方法，其中，該有機溶劑選自二甲亞碸或丙酮。
  11. 如申請專利範圍第9項所述的製備方法，其中，該加熱溫度選自40℃~60℃。
  12. 如申請專利範圍第11項所述的製備方法，其中，該加熱溫度選自60℃。
  13. 一種醫藥組成物，該醫藥組成物包含有效量的申請專 利範圍第7項所述的晶型II及藥學上可接受的賦形劑。
  14. 一種式(I)化合物游離鹼的晶型III，其特徵在於，其X-射線粉末衍射圖譜在2θ(±0.2°)值為7.821°、15.700°、20.579°、13.120°、21.610°和6.985°處具有特徵峰，
    Figure 107138367-A0305-02-0028-3
  15. 如申請專利範圍第14項所述的晶型III，其中，其X-射線粉末衍射圖譜在2θ(±0.2°)值為7.821°、15.700°、20.579°、13.120°、21.610°、6.985°、23.745°、11.758°、19.049°、25.098°、12.087°和8.330°處具有特徵峰。
  16. 如申請專利範圍第14項所述的晶型III，其中，其X-射線粉末衍射圖譜如第3圖所示。
  17. 一種製備如申請專利範圍第14項所述的式(I)化合物晶型III的方法，包括以下步驟，(1)向式(I)化合物游離鹼固體中加入有機溶劑得到懸浮液，(2)打漿，過濾樣品即得晶型III。
  18. 如申請專利範圍第17項所述的製備方法，其中，該有機溶劑選自丙酮或2-丁酮。
  19. 一種醫藥組成物，該醫藥組成物包含有效量的申請專利範圍第14項所述的晶型III及藥學上可接受的賦形 劑。
  20. 一種式(I)化合物游離鹼的晶型IV，其特徵在於，其X-射線粉末衍射圖譜在2θ(±0.2°)值為6.573°、20.866°、20.203°、26.810°、8.848°和13.585°處具有特徵峰，
    Figure 107138367-A0305-02-0029-4
  21. 如申請專利範圍第20項所述的晶型IV，其中，其X-射線粉末衍射圖譜在2θ(±0.2°)值為6.573°、20.866°、20.203°、26.810°、8.848°、13.585°、13.231°、21.926°、5.875°、12.121°、14.534°和17.043°處具有特徵峰。
  22. 如申請專利範圍第20項所述的晶型IV，其中，其X-射線粉末衍射圖譜如第4圖所示。
  23. 如申請專利範圍第20項所述的晶型IV，其中，該晶型為N-甲基吡咯烷酮溶劑合物。
  24. 一種製備如申請專利範圍第20項所述的式(I)化合物游離鹼晶型IV的方法，包括以下步驟：(1)用N-甲基吡咯烷酮溶劑將式(I)化合物游離鹼固體溶清，(2)滴加反溶劑至固體析出。
  25. 如申請專利範圍第24項所述的製備方法，其中，該反溶劑選自異丙醚或甲基第三丁基醚。
  26. 一種醫藥組成物，該醫藥組成物包含有效量的申請專利範圍第20項所述的晶型IV及藥學上可接受的賦形劑。
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