TWI770066B - 嗅覺受體輔受體 - Google Patents
嗅覺受體輔受體 Download PDFInfo
- Publication number
- TWI770066B TWI770066B TW106133416A TW106133416A TWI770066B TW I770066 B TWI770066 B TW I770066B TW 106133416 A TW106133416 A TW 106133416A TW 106133416 A TW106133416 A TW 106133416A TW I770066 B TWI770066 B TW I770066B
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- amino acid
- acid sequence
- olfactory receptor
- coreceptor
- insect
- Prior art date
Links
- 102000012547 Olfactory receptors Human genes 0.000 title claims abstract description 203
- 108050002069 Olfactory receptors Proteins 0.000 title claims abstract description 203
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 201
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims abstract description 113
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 64
- 241000894007 species Species 0.000 claims abstract description 11
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims abstract description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims abstract description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 80
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 claims description 57
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 claims description 38
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 claims description 35
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 27
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 27
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 27
- 241000256844 Apis mellifera Species 0.000 claims description 22
- 241000256118 Aedes aegypti Species 0.000 claims description 20
- 241000255601 Drosophila melanogaster Species 0.000 claims description 17
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 claims description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 10
- 241000256182 Anopheles gambiae Species 0.000 claims description 9
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 9
- 241000256843 Apis mellifera ligustica Species 0.000 claims description 8
- 241000255925 Diptera Species 0.000 claims description 8
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 6
- 241000257303 Hymenoptera Species 0.000 claims description 6
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 abstract description 33
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 abstract description 16
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 9
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 7
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 62
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 49
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 36
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 36
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 35
- VSMOENVRRABVKN-UHFFFAOYSA-N oct-1-en-3-ol Chemical compound CCCCCC(O)C=C VSMOENVRRABVKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 29
- 241000256111 Aedes <genus> Species 0.000 description 26
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 22
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 22
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 21
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 20
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 17
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 17
- VSMOENVRRABVKN-MRVPVSSYSA-N 1-Octen-3-ol Natural products CCCCC[C@H](O)C=C VSMOENVRRABVKN-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 15
- YDXQPTHHAPCTPP-UHFFFAOYSA-N 3-Octen-1-ol Natural products CCCCC=CCCO YDXQPTHHAPCTPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 108010000239 Aequorin Proteins 0.000 description 14
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 9
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 8
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 8
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 8
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 7
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 7
- 241000256186 Anopheles <genus> Species 0.000 description 6
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 6
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 5
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 101100295884 Aedes aegypti SGPRor7 gene Proteins 0.000 description 4
- YHIPILPTUVMWQT-UHFFFAOYSA-N Oplophorus luciferin Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1CC(C(N1C=C(N2)C=3C=CC(O)=CC=3)=O)=NC1=C2CC1=CC=CC=C1 YHIPILPTUVMWQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101150041122 Orco gene Proteins 0.000 description 4
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 4
- 108700010039 chimeric receptor Proteins 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 3
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 3
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 3
- XMLSXPIVAXONDL-PLNGDYQASA-N Jasmone Chemical compound CC\C=C/CC1=C(C)CCC1=O XMLSXPIVAXONDL-PLNGDYQASA-N 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- IVLCENBZDYVJPA-ARJAWSKDSA-N cis-Jasmone Natural products C\C=C/CC1=C(C)CCC1=O IVLCENBZDYVJPA-ARJAWSKDSA-N 0.000 description 3
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-M heptanoate Chemical compound CCCCCCC([O-])=O MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 3
- XMLSXPIVAXONDL-UHFFFAOYSA-N trans-jasmone Natural products CCC=CCC1=C(C)CCC1=O XMLSXPIVAXONDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 102100033072 DNA replication ATP-dependent helicase DNA2 Human genes 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000927313 Homo sapiens DNA replication ATP-dependent helicase DNA2 Proteins 0.000 description 2
- 108091069437 Orco family Proteins 0.000 description 2
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- 101100221606 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) COS7 gene Proteins 0.000 description 2
- 229940072049 amyl acetate Drugs 0.000 description 2
- PGMYKACGEOXYJE-UHFFFAOYSA-N anhydrous amyl acetate Natural products CCCCCOC(C)=O PGMYKACGEOXYJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 2
- 230000007436 olfactory function Effects 0.000 description 2
- 210000003370 receptor cell Anatomy 0.000 description 2
- 241000256837 Apidae Species 0.000 description 1
- 241000256845 Apis dorsata Species 0.000 description 1
- 241000256848 Apis florea Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241001415255 Bombus terrestris Species 0.000 description 1
- 241000255794 Bombyx mandarina Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000256057 Culex quinquefasciatus Species 0.000 description 1
- 241000255313 Drosophila pseudoobscura Species 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001599018 Melanogaster Species 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 241000255588 Tephritidae Species 0.000 description 1
- 241000255985 Trichoplusia Species 0.000 description 1
- 241000601317 Trilocha varians Species 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- -1 calcium Cations Chemical class 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000000383 hazardous chemical Substances 0.000 description 1
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000004081 narcotic agent Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000013492 plasmid preparation Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
- C07K14/43563—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from insects
- C07K14/43577—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from insects from flies
- C07K14/43581—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from insects from flies from Drosophila
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/0004—Gaseous mixtures, e.g. polluted air
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
- C12N2015/8527—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic for producing animal models, e.g. for tests or diseases
- C12N2015/859—Animal models comprising reporter system for screening tests
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Combustion & Propulsion (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本發明提供一種與嗅覺受體結合而形成嗅覺受體複合體時對氣味物質可發揮出優異之檢測感度的昆蟲嗅覺受體輔受體。本發明之嗅覺受體輔受體具有以下之第一胺基酸序列、及與第一胺基酸序列之最靠羧基末端側之胺基酸殘基相接之以下之第二胺基酸序列：(1)第一胺基酸序列，其係第一昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之部分胺基酸序列，且係自第一昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之胺基末端至位於第4跨膜區之最靠羧基末端側之胺基酸殘基之前後20個胺基酸殘基之範圍內之任一胺基酸殘基為止的連續之胺基酸序列；及(2)第二胺基酸序列，其係與第一昆蟲不同種類之第二昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之部分胺基酸序列，且係於對第一昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之胺基酸序列與第二昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之胺基酸序列進行比對分析之情形時，於第二昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體中自相當於第一胺基酸序列之最靠羧基末端側之胺基酸殘基之位置的一個羧基末端側之胺基酸殘基至第二昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之羧基末端為止的連續之胺基酸序列。
Description
本發明係關於一種嗅覺受體輔受體。又，本發明係關於一種編碼嗅覺受體輔受體之聚核苷酸、導入有該聚核苷酸之表現質體、及導入有該表現質體之細胞。
近年來，已知有測定揮發性化學物質(氣味物質)之各種技術。此種技術被期待應用於癌診斷等診斷、醫療保健領域、人類探索、麻醉品等之檢測等防災、安全領域、有害物質之檢測等環境領域等。 對氣味物質之檢測有時利用狗或線蟲等生物。然而，利用生物之方法雖能夠高感度地偵測氣味物質，但因身體狀況或個體而存在差異，因此缺乏穩定性，又，由於集中力之持續時間有限，故而亦存在難以長時間利用之方面。 因此，生物所具備之嗅覺功能而非生物本身受到關注。尤其是昆蟲之嗅覺功能被認為對氣味物質之識別特異性較高，業界正摸索將其利用於嗅覺感測器等。對於昆蟲之嗅覺器而言，存在形成有識別氣味物質之嗅覺受體(odorant receptor，以下，有時亦稱為「OR」)及嗅覺受體輔受體(odorant receptor co-receptor，以下有時亦稱為「ORCO」或「輔受體」)之嗅覺受體複合體，其若被氣味物質活化，則上述複合體顯示出離子通道活性，藉此偵測氣味物質(U.Benjamin Kaupp,Nature Reviews Neuroscience,vol 11(2010),p188-200)。
[發明所欲解決之問題] 然而，於欲在現場檢測氣味物質之情形時，存在其濃度非常低之情況。因此，謀求用以檢測氣味物質之嗅覺感測器為高感度。 本發明係鑒於上述情況而完成者，其目的在於提供一種與嗅覺受體結合而形成嗅覺受體複合體時對氣味物質發揮出優異之檢測感度的嗅覺受體輔受體。 [解決問題之技術手段] 本發明者等人對將不同種類之2個昆蟲之嗅覺受體輔受體重組而獲得之嵌合嗅覺受體輔受體進行研究，結果發現，於上述2種嗅覺受體輔受體之重組位置為嗅覺受體輔受體中之第4跨膜區之最靠羧基末端側之胺基酸殘基附近之情形時，具有所獲得之嵌合嗅覺受體輔受體之嗅覺受體複合體相較於具有原(原始之)嗅覺受體輔受體之嗅覺受體複合體，對氣味物質之檢測感度更優異。本發明係基於該等見解而成者。 即，本發明例如係關於以下之[1]至[17]。 [1]一種嗅覺受體輔受體，其具有以下之第一胺基酸序列、及與第一胺基酸序列之最靠羧基末端側之胺基酸殘基相接之以下之第二胺基酸序列： (1)第一胺基酸序列，其係第一昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之部分胺基酸序列，且係自第一昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之胺基末端至位於第4跨膜區之最靠羧基末端側之胺基酸殘基之前後20個胺基酸殘基之範圍內之任一胺基酸殘基為止的連續之胺基酸序列；及 (2)第二胺基酸序列，其係與第一昆蟲不同種類之第二昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之部分胺基酸序列，且係於對第一昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之胺基酸序列與第二昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之胺基酸序列進行比對分析之情形時，於第二昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體中，自相當於第一胺基酸序列之最靠羧基末端側之胺基酸殘基之位置的一個羧基末端側之胺基酸殘基至第二昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之羧基末端為止的連續之胺基酸序列。 [2]如[1]中所記載之嗅覺受體輔受體，其中第一昆蟲及第二昆蟲係選自由內翅總目昆蟲所組成之群中之不同種類之昆蟲。 [3]如[1]或[2]中所記載之嗅覺受體輔受體，其中第一昆蟲及第二昆蟲係選自由雙翅目昆蟲、鱗翅目昆蟲及膜翅目昆蟲所組成之群中之不同種類之昆蟲。 [4]如[1]至[3]中任一項所記載之嗅覺受體輔受體，其中第一昆蟲及第二昆蟲係選自由蚊科昆蟲、果蠅科昆蟲、蠶蛾科昆蟲及蜜蜂科昆蟲所組成之群中之不同種類之昆蟲。 [5]如[1]至[4]中任一項所記載之嗅覺受體輔受體，其中第一昆蟲為埃及斑蚊(Aedes aegypti)、甘比亞瘧蚊(Anopheles gambiae)、或黑腹果蠅(Drosophila melanogaster)之任一種昆蟲。 [6]如[1]至[5]中任一項所記載之嗅覺受體輔受體，其中第一胺基酸序列係與序列編號1、135或136之任一者中所記載之胺基酸序列具有90%以上之同一性的胺基酸序列。 [7]如[1]至[6]中任一項所記載之嗅覺受體輔受體，其中第二昆蟲為埃及斑蚊或意大利蜂(Apis mellifera)之任一種昆蟲。 [8]如[1]至[7]中任一項所記載之嗅覺受體輔受體，其中第二胺基酸序列係與序列編號2或137中所記載之胺基酸序列具有90%以上之同一性之胺基酸序列。 [9]如[1]至[4]中任一項所記載之嗅覺受體輔受體，其中第一昆蟲為黑腹果蠅，第二昆蟲為意大利蜂。 [10]如[9]中所記載之嗅覺受體輔受體，其具有與序列編號100中所記載之胺基酸序列具有90%以上之同一性之胺基酸序列。 [11]如[1]至[4]中任一項所記載之嗅覺受體輔受體，其中第一昆蟲為黑腹果蠅，第二昆蟲為埃及斑蚊。 [12]如技術方案[11]中所記載之嗅覺受體輔受體，其具有與序列編號71中所記載之胺基酸序列具有90%以上之同一性之胺基酸序列。 [13]如[1]至[4]中任一項所記載之嗅覺受體輔受體，其中第一昆蟲為埃及斑蚊，第二昆蟲為意大利蜂。 [14]如[13]中所記載之嗅覺受體輔受體，其具有與序列編號108中所記載之胺基酸序列具有90%以上之同一性之胺基酸序列。 [15]一種聚核苷酸，其編碼如[1]至[14]中任一項所記載之嗅覺受體輔受體。 [16]一種表現質體，其導入有如[15]中所記載之聚核苷酸。 [17]一種細胞，其導入有如[15]中所記載之聚核苷酸或如[16]中所記載之表現質體。 [發明之效果] 根據本發明，可提供於與嗅覺受體結合而形成嗅覺受體複合體時對氣味物質發揮出優異之檢測感度的嵌合嗅覺受體輔受體。具有本發明之嵌合嗅覺受體輔受體之嗅覺受體複合體相較於分別具有該嵌合嗅覺受體輔受體之原本2種嗅覺受體輔受體之嗅覺受體複合體，對氣味物質之檢測感度更優異。又，本發明可提供編碼本發明之嵌合嗅覺受體輔受體之聚核苷酸、導入有該聚核苷酸之表現質體、及導入有該聚核苷酸或該表現質體之細胞。
以下，對用以實施本發明之形態(以下，稱為「本實施形態」)進行詳細說明。再者，本發明並不限定於以下之實施形態。 昆蟲之嗅覺受體係具有7次跨膜結構之G蛋白偶合型受體之一種，其氣味物質之識別特異性較高。已知有若干種氣味物質特異性之嗅覺受體。 昆蟲之嗅覺受體輔受體雖為與嗅覺受體同樣地具有7次跨膜結構之膜蛋白，但其本身不識別氣味物質，而是與嗅覺受體形成異質複合體而發揮功能。上述嗅覺受體輔受體保存於所有昆蟲中，且作為Orco家族而為人所知。多數Orco家族之嗅覺受體輔受體係自其胺基末端(以下，有時亦稱為「N末端」)朝向羧基末端(以下，有時亦稱為「C末端」)依序連結N末端區域(NT)、第1跨膜區(TM1)、第1細胞外環(EC1)、第2跨膜區(TM2)、第1細胞內環(IC1)、第3跨膜區(TM3)、第2細胞外環(EC2)、第4跨膜區(TM4)、第2細胞內環(IC2)、第5跨膜區(TM5)、第3細胞外環(EC3)、第6跨膜區(TM6)、第3細胞內環(IC3)、第7跨膜區(TM7)、及C末端區域(CT)而構成。 包含上述嗅覺受體及上述嗅覺受體輔受體之異質複合體、即嗅覺受體複合體具備藉由氣味物質而活化之離子通道活性，其被活化時，使鈉離子(Na+
)、鈣離子(Ca2+
)等陽離子向細胞內流入。 本實施形態之嗅覺受體輔受體自其N末端依序具有第一昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之部分胺基酸序列即第一胺基酸序列、及與第一昆蟲不同種類之第二昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之部分胺基酸序列即第二胺基酸序列。即，本實施形態之嗅覺受體輔受體具有第一胺基酸序列、及與第一胺基酸序列之最靠C末端側之胺基酸殘基相連之第二胺基酸序列。 於本說明書中，所謂「變異體」係指如下蛋白質，即與成為對象之蛋白質相比，雖然維持作為輔受體之功能，但於其胺基酸序列中，多個胺基酸殘基不同，具體而言，可為1～10個胺基酸殘基不同者，亦可為1～5個不同者，亦可為1個或2個不同者。該胺基酸殘基之不同具體為胺基酸不同之缺失、置換、附加等。該等中，包括因輔受體來源之生物之種差或個體差異等而天然產生之基因變異、或因人為導入之基因變異等而產生之胺基酸之缺失、置換、附加等。作為胺基酸之置換，例如可列舉對疏水性、電荷、pK、立體結構上之特徵等類似之胺基酸之保存性置換。 第一昆蟲及第二昆蟲互為不同種類之昆蟲。第一昆蟲及第二昆蟲亦可為內翅總目昆蟲。作為內翅總目昆蟲，例如可列舉：蚊科、果蠅科等雙翅目、蠶蛾科等鱗翅目、或蜜蜂科等膜翅目。第一昆蟲及第二昆蟲亦可為選自由雙翅目昆蟲、鱗翅目昆蟲及膜翅目昆蟲所組成之群中之不同種類之昆蟲。作為蚊科之昆蟲，例如可列舉：甘比亞瘧蚊(Anopheles gambiae)、埃及斑蚊(Aedes aegypti)、熱帶家蚊(Culex quinquefasciatus)等。作為果蠅科之昆蟲，例如可列舉：黑腹果蠅(Drosophila melanogaster)、擬暗果蠅(Drosophila pseudoobscura)、黑果蠅(Drosophila virillis)等。作為蠶蛾科之昆蟲，例如可列舉：家蠶(Bombyx mori)、野蠶(Bombyx mandarina)、三角斑褐蠶蛾(Trilocha varians)等。作為蜜蜂科之昆蟲，例如可列舉：意大利蜂(Apis mellifera)、小蜜蜂(Apis florea)、大蜜蜂(Apis dorsata)、歐洲熊蜂(Bombus terrestris)等。 作為第一昆蟲，較佳為埃及斑蚊、甘比亞瘧蚊或黑腹果蠅。作為第二昆蟲，較佳為埃及斑蚊或意大利蜂。第一昆蟲及第二昆蟲只要互為不同種類之昆蟲，則可任意組合。作為第一昆蟲與第二昆蟲之具體之組合，例如可為第一昆蟲為黑腹果蠅、第二昆蟲為意大利蜂之組合，亦可為第一昆蟲為黑腹果蠅、第二昆蟲為埃及斑蚊之組合，亦可為第一昆蟲為埃及斑蚊、第二昆蟲為意大利蜂之組合。 於本實施形態之嗅覺受體輔受體中，第一胺基酸序列係自第一昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之N末端至位於第4跨膜區之最靠C末端側之胺基酸殘基之前後20個胺基酸殘基之範圍內之任一胺基酸殘基為止的連續之胺基酸序列。即，第一胺基酸序列係自第一昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之N末端區域(NT)起，經過第1跨膜區(TM1)、第1細胞外環(EC1)、第2跨膜區(TM2)、第1細胞內環(IC1)、第3跨膜區(TM3)及第2細胞外環(EC2)而至位於第4跨膜區(TM4)之最靠C末端側之胺基酸殘基之前後20個胺基酸殘基之範圍內之任一胺基酸殘基為止之胺基酸序列。第一胺基酸序列之最靠C末端側之胺基酸殘基可為第一昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體中之位於第4跨膜區之最靠C末端側之胺基酸殘基之前後20個胺基酸殘基之範圍的任一胺基酸殘基，亦可為位於第4跨膜區之最靠C末端側之胺基酸殘基之前後15個胺基酸殘基之範圍的任一胺基酸殘基，亦可為位於第4跨膜區之最靠C末端側之胺基酸殘基之前後10個胺基酸殘基之範圍的任一胺基酸殘基，亦可為位於第4跨膜區之最靠C末端側之胺基酸殘基之前後5個胺基酸殘基之範圍的任一胺基酸殘基，亦可為第4跨膜區之最靠C末端側之胺基酸殘基。 第一胺基酸序列例如可為與自黑腹果蠅之嗅覺受體輔受體之N末端區域之N末端胺基酸殘基至第4跨膜區之最靠C末端側之胺基酸殘基為止連續之胺基酸序列(序列編號1)具有90%以上之同一性之胺基酸序列，亦可為具有95%以上之同一性之胺基酸序列，亦可為具有98%以上之同一性之胺基酸序列，亦可為具有99%以上之同一性之胺基酸序列，亦可100%一致。 第一胺基酸序列例如可為與自埃及斑蚊之嗅覺受體輔受體之N末端區域之N末端胺基酸殘基至第4跨膜區之最靠C末端側之胺基酸殘基為止連續之胺基酸序列(序列編號135)具有90%以上之同一性之胺基酸序列，亦可為具有95%以上之同一性之胺基酸序列，亦可為具有98%以上之同一性之胺基酸序列，亦可為具有99%以上之同一性之胺基酸序列，亦可100%一致。 第一胺基酸序列例如可為與自甘比亞瘧蚊之嗅覺受體輔受體之N末端區域之N末端胺基酸殘基至第4跨膜區之最靠C末端側之胺基酸殘基為止連續之胺基酸序列(序列編號136)具有90%以上之同一性之胺基酸序列，亦可為具有95%以上之同一性之胺基酸序列，亦可為具有98%以上之同一性之胺基酸序列，亦可為具有99%以上之同一性之胺基酸序列，亦可100%一致。 於本實施形態之嗅覺受體輔受體中，第二胺基酸序列係於對第一昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之胺基酸序列與第二昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之胺基酸序列進行比對分析之情形時，於第二昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體中，自相當於第一胺基酸序列之最靠C末端側之胺基酸殘基之位置之一個C末端側的胺基酸殘基至第二昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之C末端為止的連續之胺基酸序列。第二胺基酸序列例如係自第二昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之位於第2細胞內環(IC2)之最靠N末端側之胺基酸殘基之前後約20胺基酸殘基之範圍之任一胺基酸殘基起，經過第5跨膜區(TM5)、第3細胞外環(EC3)、第6跨膜區(TM6)、第3細胞內環(IC3)、第7跨膜區(TM7)而至C末端區域(CT)為止之胺基酸序列。 即，具有第一胺基酸序列及第二胺基酸序列之本實施形態之嗅覺受體輔受體係於第一昆蟲之嗅覺受體輔受體中，將與第二胺基酸序列對應之位置之胺基酸序列換為第二昆蟲之嗅覺受體輔受體之胺基酸序列者。於第一胺基酸序列與第二胺基酸序列之間，於原本2種嗅覺受體輔受體之胺基酸序列之比對中相當位置之胺基酸殘基不存在重複或缺損。 第二胺基酸序列例如可為與自意大利蜂之嗅覺受體輔受體之第2細胞內環之最靠N末端側之胺基酸殘基至C末端區域之C末端胺基酸殘基為止連續之胺基酸序列(序列編號2)具有90%以上之同一性之胺基酸序列，亦可為具有95%以上之同一性之胺基酸序列，亦可為具有98%以上之同一性之胺基酸序列，亦可為具有99%以上之同一性之胺基酸序列，亦可100%一致。 第二胺基酸序列例如可為與自埃及斑蚊之嗅覺受體輔受體之第2細胞內環之最靠N末端側之胺基酸殘基至C末端區域之C末端胺基酸殘基為止連續之胺基酸序列(序列編號137)具有90%以上之同一性之胺基酸序列，亦可為具有95%以上之同一性之胺基酸序列，亦可為具有98%以上之同一性之胺基酸序列，亦可為具有99%以上之同一性之胺基酸序列，亦可100%一致。 本實施形態之嵌合嗅覺受體輔受體具有第一胺基酸序列及第二胺基酸序列，包含約460個至約500個胺基酸殘基。本實施形態之嵌合嗅覺受體輔受體係自其N末端朝向C末端，依序連結N末端區域(NT)、第1跨膜區(TM1)、第1細胞外環(EC1)、第2跨膜區(TM2)、第1細胞內環(IC1)、第3跨膜區(TM3)、第2細胞外環(EC2)、第4跨膜區(TM4)、第2細胞內環(IC2)、第5跨膜區(TM5)、第3細胞外環(EC3)、第6跨膜區(TM6)、第3細胞內環(IC3)、第7跨膜區(TM7)、及C末端區域(CT)而構成。 本實施形態之嵌合嗅覺受體輔受體具有與昆蟲嗅覺受體偶合而使陽離子向細胞內流入之能力。嗅覺受體輔受體與嗅覺受體偶合而使陽離子向細胞內流入之能力例如可使用共表現測定對象之嗅覺受體輔受體與昆蟲嗅覺受體之培養細胞而進行測定。具體而言，使上述嗅覺受體之配位基與上述培養細胞接觸，並測定細胞內鈣濃度之短暫性變化。若測定對象之嗅覺受體輔受體具有上述能力，則檢測出因嗅覺受體之活化而引起之細胞內鈣濃度之上升。 作為本實施形態之嵌合嗅覺受體輔受體之更具體之例，可列舉： 第一胺基酸序列為黑腹果蠅輔受體之部分胺基酸序列、第二胺基酸序列為意大利蜂輔受體之部分胺基酸序列之嗅覺受體輔受體； 具有與序列編號100中所記載之胺基酸序列具有90%以上之同一性之胺基酸序列的嗅覺受體輔受體； 第一胺基酸序列為黑腹果蠅輔受體之部分胺基酸序列、第二胺基酸序列為埃及斑蚊輔受體之部分胺基酸序列之上述嗅覺受體輔受體； 具有與序列編號71中所記載之胺基酸序列具有90%以上之同一性之胺基酸序列的嗅覺受體輔受體； 第一胺基酸序列為埃及斑蚊輔受體之部分胺基酸序列、第二胺基酸序列為意大利蜂輔受體之部分胺基酸序列之上述嗅覺受體輔受體；及 具有與序列編號108中所記載之胺基酸序列具有90%以上之同一性之胺基酸序列的嗅覺受體輔受體。 此處，作為「90%以上之同一性」，可列舉90%、95%、98%、或99%以上之同一性、或100%之同一性。 本實施形態之嗅覺受體輔受體可藉由如下方法等而製備，即，將編碼具有第一胺基酸序列之多肽之聚核苷酸、及編碼具有第二胺基酸序列之多肽之聚核苷酸以吻合讀碼框而連結其等之方式導入至一個表現用質體，並將該表現用質體導入至細胞使目標蛋白質表現，之後純化表現之蛋白質。使嗅覺受體輔受體於細胞表現之方法並無特別限定，可使用公知之方法。將編碼具有第一胺基酸序列之多肽之聚核苷酸、及編碼具有第二胺基酸序列之多肽之聚核苷酸導入至一個表現用質體時之DNA片段之比率(莫耳比率)較佳為1：1。向細胞導入有表現質體可藉由PCR(polymerase chain reaction，聚合酶鏈反應)等方法進行確認。於細胞表現之嗅覺受體輔受體可藉由在使細胞膜溶解化後，供給至各種純化用管柱而進行純化。 根據本實施形態之嵌合嗅覺受體輔受體，相較於原2種嗅覺受體輔受體，與嗅覺受體結合而形成嗅覺受體複合體時對氣味物質之檢測感度更優異。具有此種特性之嗅覺受體輔受體有效用作能夠檢測更低濃度之氣味物質之嗅覺感測器。 於將本實施形態之嗅覺受體輔受體與嗅覺受體一同使用而製備嗅覺受體複合體之情形時，嗅覺受體之種類可根據設為靶之配位基而適當進行選擇。嗅覺受體具體亦可為埃及斑蚊(Aedes aegypti)之OR8、或OR10、甘比亞瘧蚊(Anopheles gambiae)之OR10、或OR28、家蠶(Bombyx mori)之OR56、或黑腹果蠅(Drosophila melanogaster)之OR47a。 本實施形態之聚核苷酸編碼上述嵌合嗅覺受體輔受體。本實施形態之聚核苷酸具有編碼第一胺基酸序列之第一鹼基序列、及編碼第二胺基酸序列之第二鹼基序列。本實施形態之聚核苷酸可藉由使具有第一鹼基序列之聚核苷酸與具有第二鹼基序列之聚核苷酸鍵結之方法等而製備。使聚核苷酸彼此鍵結之方法並無特別限定，可使用公知之方法，例如亦與表現用質體一同使用In-Fusion HD選殖套組(Cloning Kit)(TAKARA公司製造)等。於該情形時，本實施形態之聚核苷酸能夠以導入至質體之狀態獲得。表現用質體並無特別限定，例如可使用pCDNA3.1等。 本實施形態之細胞中導入有上述本實施形態之聚核苷酸或導入了該聚核苷酸之表現質體，能夠表現上述嗅覺受體輔受體。本實施形態之細胞可藉由將上述本實施形態之聚核苷酸或表現質體導入至細胞而製備。作為細胞，可根據所導入之表現質體之種類適當進行選擇。作為細胞，例如可列舉：埃希氏大腸桿菌K12等大腸桿菌、枯草桿菌MI114等桿菌屬細菌、釀酒酵母AH22等酵母、源自草地夜蛾之Sf細胞系或源自粉紋夜蛾之HighFive細胞系等昆蟲細胞、COS7細胞等動物細胞等。作為動物細胞，較佳為源自哺乳動物之培養細胞，具體可列舉：COS7細胞、CHO細胞、HEK293細胞、HEK293FT細胞、Hela細胞、PC12細胞、N1E-115細胞、SH-SY5Y細胞等。 [實施例] 以下，基於實施例，對本發明進行具體說明。但是，本發明並不限定於以下之實施例。 本實施例中所記載之昆蟲如下。 甘比亞瘧蚊(Anopheles gambiae：以下，有時亦稱為「瘧蚊」或「Ag」) 埃及斑蚊(Aedes aegypti：以下，有時亦稱為「斑蚊」或「Aa」) 黑腹果蠅(Drosophila melanogaster：以下，有時亦稱為「果蠅」或「Dm」) 意大利蜂(Apis mellifera：以下，有時亦稱為「蜜蜂」或「Am」) 家蠶(Bombyx mori：以下，有時亦稱為「蠶」或「Bm」) ＜輔受體之表現質體之製作＞ 果蠅輔受體(以下，有時亦稱為「DmORCO」)之表現質體 將果蠅(Drosophila melanogaster)成蟲RNA(TAKARA公司製造)用於模版，添加Super Script III反轉錄酶(Invitrogen公司製造)，於55℃下保溫50分鐘，繼而於75℃下保溫15分鐘，藉此進行反轉錄反應而獲得cDNA。將1 μL之所獲得之cDNA用於模版，使用10 μM之正向引子DmOrco-5'(5'-caccatgacaacctcgatgcagccgagcaagt；序列編號3)1 μL、10 μM之反向引子DmOrco-3'(5'-ttacttgagctgcaccagcaccataaagt；序列編號4)1 μL及KOD Plus neo DNA聚合酶(東洋紡製造)1 μL進行PCR。PCR反應係以如下條件進行：(1)94℃、2分鐘，(2)98℃、10秒，(3)68℃、1.5分鐘，(2)～(3)之步驟反覆進行35個循環。於對所獲得之PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳後，回收在該凝膠上所檢測到之約1.5 kb之DNA。將所回收之DNA導入至pENTR/D-TOPO載體(Invitrogen公司製造)，而獲得命名為pENTR-DmOrco之質體。將4 μL之pENTR-DmOrco、1 μL之pcDNA6.2V5-DEST及2 μL之LR Clonase II(Invitrogen公司製造)混合並於室溫下保持1小時。將所獲得之混合物導入至大腸桿菌進行培養，藉此獲得命名為pcDNA6.2-DmOrco之表現質體。利用DNA定序儀而解析表現質體pcDNA6.2-DmOrco之鹼基序列，判斷出該質體含有序列編號5所表示之鹼基序列。序列編號5所表示之鹼基序列編碼序列編號6所表示之胺基酸序列。 斑蚊輔受體(以下，有時亦稱為「AaORCO」)之表現質體 於利用液態氮將埃及斑蚊(Aedes aegypti)之頭部冷凍後，加入TRIzol(Invitrogen公司製造)，於液態氮之存在下使用乳缽與杵將其破碎。依照TRIzol試劑所隨附之說明書，自所獲得之破碎物提取RNA。使用RNA純化套組(RNeasy Mini Kit；QIAGEN公司製造)，依照該套組所隨附之說明書將所提取之RNA純化。以所獲得之Total RNA為模版，添加Super Script III反轉錄酶(Invitrogen公司製造)，於55℃下保溫50分鐘，繼而於75℃下保溫15分鐘，藉此進行反轉錄反應而獲得cDNA。將1 μL之所獲得之cDNA用於模版，使用10 μM之正向引子AaOrco-5'(5'-tggaattctgcagatcaccatgaacgtccaaccgacaaagtacc；序列編號7)1 μL、10 μM之反向引子AaOrco-3'(5'-gccactgtgctggatttatttcaactgcaccaacacc；序列編號8)1 μL及KOD Plus neo DNA聚合酶(東洋紡製造)1 μL進行PCR。PCR反應係以如下條件進行：(1)94℃、2分鐘，(2)98℃、10秒，(3)63℃、30秒，(4)68℃、1.5分鐘，(2)～(4)之步驟反覆進行35個循環。使用In-Fusion HD選殖套組(Cloning Kit)(TAKARA公司製造)，將所獲得之PCR產物連結於利用EcoRV進行消化之pcDNA3.1(Invitrogen公司製造)，其後導入至大腸桿菌進行培養，藉此獲得命名為pcDNA3.1-AaOrco之表現質體。利用DNA定序儀而解析表現質體pcDNA3.1-AaOrco之鹼基序列，判斷出該質體含有序列編號9所表示之鹼基序列。序列編號9所表示之鹼基序列編碼序列編號10所表示之胺基酸序列。 蜜蜂輔受體(以下，有時亦稱為「AmORCO」)之表現質體 合成於任一DNA鏈具有序列編號11所表示之鹼基序列的雙鏈DNA。將100 ng之所獲得之DNA用於模版，使用10 μM之正向引子AmOrco-5'(5'-tggaattctgcagatcaccatgaagttcaagcaacaagggctaa；序列編號12)1 μL、10 μM之反向引子AmOrco-3'(5'-gccactgtgctggattcacttcagttgcaccaacaccatgaa；序列編號13)1 μL及KOD Plus neo DNA聚合酶(東洋紡製造)1 μL進行PCR。PCR反應係以如下條件進行：(1)94℃、2分鐘，(2)98℃、10秒，(3)63℃、30秒，(4)68℃、1.5分鐘，(2)～(4)之步驟反覆進行35個循環。使用In-Fusion HD選殖套組(Cloning Kit)(TAKARA公司製造)，將所獲得之PCR產物連結於利用EcoRV進行消化之pcDNA3.1(Invitrogen公司製造)，其後導入至大腸桿菌進行培養，藉此獲得命名為pcDNA3.1-AmOrco之表現質體。利用DNA定序儀而解析表現質體pcDNA3.1-AmOrco之鹼基序列，判斷出該質體含有序列編號11所表示之鹼基序列。序列編號11所表示之鹼基序列編碼序列編號14所表示之胺基酸序列。 瘧蚊輔受體(以下，有時亦稱為「AgORCO」)之表現質體 於利用液態氮將甘比亞瘧蚊(Anopheles gambiae)Kisum系統或G3系統之頭部冷凍後，加入TRIzol(Invitrogen公司製造)，於液態氮之存在下使用乳缽與杵將其破碎。依照TRIzol試劑所隨附之說明書，自所獲得之破碎物提取RNA。使用RNA純化套組(RNeasy Mini Kit；QIAGEN公司製造)，依照該套組所隨附之說明書將所提取之RNA純化。以所獲得之Total RNA為模版，添加Super Script III反轉錄酶(Invitrogen公司製造)，於55℃下保溫50分鐘，繼而於75℃下保溫15分鐘，藉此進行反轉錄反應而獲得cDNA。將1 μL之所獲得之cDNA用於模版，使用10 μM之正向引子AgOrco-5'(5'-caccatgcaagtccagccgaccaagtacgtcggcct；序列編號15)1 μL、10 μM之反向引子AgOrco-3'(5'-ttacttcagctgcaccagcaccatgaagt；序列編號16)1 μL及KOD Plus DNA聚合酶(東洋紡製造)1 μL進行PCR。PCR反應係以如下條件進行：(1)94℃、5分鐘，(2)98℃、10秒，(3)60℃、30秒，(4)68℃、1.5分鐘，(2)～(4)之步驟反覆進行35個循環。於對所獲得之PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳後，回收在該凝膠上所檢測到之約1.4 kb之DNA。將所回收之DNA導入至pENTR/D-TOPO載體(Invitrogen公司製造)，而獲得命名為pENTR-AgOrco之質體。將4 μL之pENTR-AgOrco、1 μL之pcDNA6.2V5-DEST及2 μL之LR Clonase II(Invitrogen公司製造)混合並於室溫下保持1小時。將所獲得之混合物導入至大腸桿菌進行培養，藉此獲得命名為pcDNA6.2-AgOrco之表現質體。利用DNA定序儀而解析表現質體pcDNA6.2-AgOrco之鹼基序列，判斷出該質體含有序列編號17所表示之鹼基序列。序列編號17所表示之鹼基序列編碼序列編號18所表示之胺基酸序列。 果蠅輔受體與斑蚊輔受體之嵌合輔受體之表現質體 將100 ng之上述DmORCO之表現質體用於模版，使用10 μM之正向引子1 μL、10 μM之反向引子1 μL、及KOD Plus neoDNA聚合酶(東洋紡製造)1 μL進行PCR。PCR反應係以如下條件進行：(1)94℃、2分鐘，(2)98℃、10秒，(3)63℃、30秒，(4)68℃、1.5分鐘，(2)～(4)之步驟反覆進行35個循環。將正向引子與反向引子之組合及所獲得之PCR產物示於表1。 又，將1 μL(100 ng)之上述AaORCO之表現質體用於模版，使用10 μM之正向引子1 μL、10 μM之反向引子1 μL、及KOD Plus neoDNA聚合酶(東洋紡製造)1 μL進行PCR。PCR反應係以如下條件進行：(1)94℃、2分鐘，(2)98℃、10秒，(3)63℃、30秒，(4)68℃、1.5分鐘，(2)～(4)之步驟反覆進行35個循環。將正向引子與反向引子之組合及所獲得之PCR產物示於表2。 使用In-Fusion HD選殖套組(Cloning Kit)(TAKARA公司製造)將表1中所記載之PCR產物之一種與表2中所記載之PCR產物之一種以表3所示之組合連結於利用EcoRV消化之pcDNA3.1(Invitrogen公司製造)。將經連結之DNA導入至大腸桿菌進行培養，藉此獲得源自果蠅輔受體及斑蚊輔受體之各種嵌合輔受體之表現質體。利用DNA定序儀而解析所獲得之嵌合受體表現質體之鹼基序列，判斷出各質體分別含有序列編號59～68所表示之鹼基序列之任一者。序列編號59～68所表示之鹼基序列分別編碼序列編號69～78所表示之胺基酸序列。將用於上述嵌合受體表現質體之製作的PCR產物之組合、及嵌合輔受體編碼區域之鹼基序列之序列編號與嵌合輔受體之胺基酸序列的序列編號示於表3。 以下，揭示由所獲得之表現質體所編碼之嵌合輔受體之胺基酸序列之構成。 於Dm(NT-EC1)AaORCO中，自N末端區域(NT)至第1細胞外環(EC1)為止之胺基酸序列係源自果蠅輔受體，自第2跨膜區至C末端區域為止之胺基酸序列係源自斑蚊輔受體。 於Dm(NT-TM3)AaORCO中，自N末端區域(NT)至第3跨膜區(TM3)為止之胺基酸序列係源自果蠅輔受體，自第2細胞外環至C末端區域為止之胺基酸序列係源自斑蚊輔受體。 於Dm(NT-TM4)AaORCO中，自N末端區域(NT)至第4跨膜區(TM4)為止之胺基酸序列(自其N末端胺基酸殘基至第234號胺基酸殘基為止之胺基酸序列)係源自果蠅輔受體(Dm(NT-TM4)，序列編號1)，自第2細胞內環至C末端區域為止之胺基酸序列係源自斑蚊輔受體(Aa(IC2-CT)，序列編號137)。 於Dm(NT-TM5)AaORCO中，自N末端區域(NT)至第5跨膜區(TM5)為止之胺基酸序列係源自果蠅輔受體，自第3細胞外環至C末端區域為止之胺基酸序列係源自斑蚊輔受體。 於Dm(NT-TM6)AaORCO中，自N末端區域(NT)至第6跨膜區(TM6)為止之胺基酸序列係源自果蠅輔受體，自第3細胞內環至C末端區域為止之胺基酸序列係源自斑蚊輔受體。 於Dm(NT-792)AaORCO中，自其N末端胺基酸殘基至第264號胺基酸殘基為止之胺基酸序列係源自果蠅輔受體，自第265號胺基酸殘基至C末端胺基酸殘基為止之胺基酸序列係源自斑蚊輔受體。 於Dm(NT-879)AaORCO中，自其N末端胺基酸殘基至第293號胺基酸殘基為止之胺基酸序列係源自果蠅輔受體，自第294號胺基酸殘基至C末端胺基酸殘基為止之胺基酸序列係源自斑蚊輔受體。 於Dm(NT-969)AaORCO中，自其N末端胺基酸殘基至第323號胺基酸殘基為止之胺基酸序列係源自果蠅輔受體，自第324號胺基酸殘基至C末端胺基酸殘基為止之胺基酸序列係源自斑蚊輔受體。 於Dm(NT-1080)AaORCO中，自其N末端胺基酸殘基至第360號胺基酸殘基為止之胺基酸序列係源自果蠅輔受體，自第361號胺基酸殘基至C末端胺基酸殘基為止之胺基酸序列係源自斑蚊輔受體。 於Dm(NT-636)AaORCO中，自其N末端胺基酸殘基至第212號胺基酸殘基為止之胺基酸序列係源自果蠅輔受體，自第213號胺基酸殘基至C末端胺基酸殘基為止之胺基酸序列係源自斑蚊輔受體。 [表1]
[表2]
[表3]
跨膜區係源自果蠅輔受體，其以外之區域係源自斑蚊輔受體之嵌合輔受體(以下，有時亦稱為「Aa(TM1-4Dm)AaORCO」)之表現質體 合成於任一DNA鏈具有序列編號79所表示之鹼基序列之雙鏈DNA。將100 ng之所獲得之DNA用於模版，使用10 μM之正向引子AaOrco-5'(5'-tggaattctgcagatcaccatgaacgtccaaccgacaaagtacc；序列編號80)1 μL、10 μM之反向引子DmAaOrco(IC2-CT)-3'(5'-gccactgtgctggatttatttcaactgcaccaaca；序列編號81)1 μL及KOD Plus neoDNA聚合酶(東洋紡製造)1 μL進行PCR。PCR反應係以如下條件進行：(1)94℃、2分鐘，(2)98℃、10秒，(3)63℃、30秒，(4)68℃、1.5分鐘，(2)～(4)之步驟反覆進行35個循環。使用In-Fusion HD選殖套組(Cloning Kit)(TAKARA公司製造)，將所獲得之PCR產物連結於利用EcoRV進行消化之pcDNA3.1(Invitrogen公司製造)。將經連結之DNA導入至大腸桿菌進行培養，藉此獲得命名為pcDNA3.1-Aa(TM1-4Dm)AaOrco之表現質體。利用DNA定序儀而解析所獲得之表現質體pcDNA3.1-Aa(TM1-4Dm)AaOrco之鹼基序列，判斷出含有序列編號79所表示之鹼基序列。序列編號79所表示之鹼基序列編碼序列編號82所表示之胺基酸序列。於表現質體pcDNA3.1-Aa(TM1-4Dm)AaOrco所編碼之嵌合輔受體中，第1跨膜區、第2跨膜區、第3跨膜區、及第4跨膜區之胺基酸序列係源自果蠅輔受體，其以外之區域之胺基酸序列係源自斑蚊輔受體。 胺基末端區域、第1細胞外環、第1細胞內環、及第2細胞外環源自果蠅輔受體，其以外之區域源自斑蚊輔受體之嵌合輔受體(以下，有時亦稱為「Dm(TM1-4Aa)AaORCO」)之表現質體 合成於任一DNA鏈具有序列編號83所表示之鹼基序列之雙鏈DNA。將100 ng之所獲得之DNA用於模版，使用10 μM之正向引子DmOrco(NT-TM4)-5'(5'-tggaattctgcagatcaccatgacaacctcgatgcagccgagcaa；序列編號84)1 μL、10 μM之反向引子DmAaOrco (IC2-CT)-3'(5'-gccactgtgctggatttatttcaactgcaccaaca；序列編號85)1 μL及KOD Plus neoDNA聚合酶(東洋紡製造)1 μL進行PCR。PCR反應係以如下條件進行：(1)94℃、2分鐘，(2)98℃、10秒，(3)63℃、30秒，(4)68℃、1.5分鐘，(2)～(4)之步驟反覆進行35個循環。使用In-Fusion HD選殖套組(Cloning Kit)(TAKARA公司製造)，將所獲得之PCR產物連結於利用EcoRV進行消化之pcDNA3.1(Invitrogen公司製造)。將經連結之DNA導入至大腸桿菌進行培養，藉此獲得命名為pcDNA3.1-Dm(TM1-4Aa)AaOrco之表現質體。利用DNA定序儀而解析所獲得之表現質體pcDNA3.1-Aa(TM1-4Dm)AaOrco之鹼基序列，判斷出含有序列編號83所表示之鹼基序列。序列編號83所表示之鹼基序列編碼序列編號86所表示之胺基酸序列。於由表現質體pcDNA3.1-Aa(TM1-4Dm)AaOrco所編碼之嵌合輔受體中，胺基末端區域、第1細胞外環、第1細胞內環、及第2細胞外環之胺基酸序列係源自果蠅輔受體，第1跨膜區、第2跨膜區、第3跨膜區、及第4跨膜區之胺基酸序列係源自斑蚊輔受體，自第2細胞內環至C末端區域為止之胺基酸序列係源自斑蚊輔受體。 果蠅輔受體與蜜蜂輔受體之嵌合輔受體之表現質體 製備表1所示之PCR產物之Dm(NT-TM3)、Dm(NT-TM4)、Dm(NT-TM5)及Dm(NT-Tm6)。 將1 μL(100 ng)之上述AmORCO之表現質體用於模版，使用10 μM之正向引子1 μL、10 μM之反向引子1 μL、及KOD Plus neoDNA聚合酶(東洋紡製造)1 μL進行PCR。PCR反應係以如下條件進行：(1)94℃、2分鐘，(2)98℃、10秒，(3)63℃、30秒，(4)68℃、1.5分鐘，(2)～(4)之步驟反覆進行35個循環。將正向引子與反向引子之組合及所獲得之PCR產物示於表4。 使用In-Fusion HD選殖套組(Cloning Kit)(TAKARA公司製造)將上述PCR產物Dm(NT-TM3)、Dm(NT-TM4)、Dm(NT-TM5)或Dm(NT-Tm6)之一種、及表4中所記載之PCR產物之一種以表5所示之組合連結於利用EcoRV進行消化之pcDNA3.1(Invitrogen公司製造)。將經連結之DNA導入至大腸桿菌進行培養，藉此獲得源自果蠅輔受體及蜜蜂輔受體之各種嵌合輔受體之表現質體。利用DNA定序儀而解析所獲得之嵌合受體表現質體之鹼基序列，判斷出各質體分別含有序列編號95～98所表示之鹼基序列之任一者。序列編號95～98所表示之鹼基序列分別編碼序列編號99～102所表示之胺基酸序列。將用於上述嵌合受體表現質體之製作的PCR產物之組合、及嵌合輔受體編碼區域之鹼基序列之序列編號與嵌合輔受體之胺基酸序列的序列編號示於表5。 以下，揭示由所獲得之表現質體所編碼之嵌合輔受體之胺基酸序列之構成。 於Dm(NT-TM3)AmORCO中，自N末端區域(NT)至第3跨膜區(TM3)為止之胺基酸序列係源自果蠅輔受體，自第2細胞外環至C末端區域為止之胺基酸序列係源自蜜蜂輔受體(Am(IC2-CT)，序列編號2)。 於Dm(NT-TM4)AmORCO中，自N末端區域(NT)至第4跨膜區(TM4)為止之胺基酸序列係源自果蠅輔受體(Dm(NT-TM4)，序列編號1)，自第2細胞內環至C末端區域為止之胺基酸序列係源自蜜蜂輔受體。 於Dm(NT-TM5)AmORCO中，自N末端區域(NT)至第5跨膜區(TM5)為止之胺基酸序列係源自果蠅輔受體，自第3細胞外環至C末端區域為止之胺基酸序列係源自蜜蜂輔受體。 於Dm(NT-TM6)AmORCO中，自N末端區域(NT)至第6跨膜區(TM6)為止之胺基酸序列係源自果蠅輔受體，自第3細胞內環至C末端區域為止之胺基酸序列係源自蜜蜂輔受體。 [表4]
[表5]
斑蚊輔受體與蜜蜂輔受體之嵌合輔受體(以下，有時稱為「Aa(NT-TM4)AmORCO」)之表現質體 將100 ng之上述AaORCO之表現質體用於模版，使用10 μM之正向引子AaOrco(NT-TM4)-5'(5'-tggaattctgcagatcaccatgaacgtccaaccgacaaagtacc；序列編號103)1 μL、10 μM之反向引子AaOrco(NT-TM4)-3'(5'-caaatgttgcagctgttcgcaagtga；序列編號104)1 μL及KOD Plus neo DNA聚合酶(東洋紡製造)1 μL進行PCR。PCR反應係以如下條件進行：(1)94℃、2分鐘，(2)98℃、10秒，(3)63℃、30秒，(4)68℃、1.5分鐘，(2)～(4)之步驟反覆進行35個循環。將100 ng之上述AmORCO之表現質體用於模版，使用10 μM之正向引子AaAmOrco(IC2-CT)-5'(5'-cagctgcaacatttgaagaatatcatgaagcctttgatggaa；序列編號105)1 μL、10 μM之反向引子AaAmOrco (IC2-CT)-3'(5'-gccactgtgctggattcacttcagttgcaccaacaccatgaa；序列編號106)1 μL及KOD Plus neoDNA聚合酶(東洋紡製造)1 μL進行PCR。PCR反應係以如下條件進行：(1)94℃、2分鐘，(2)98℃、10秒，(3)63℃、30秒，(4)68℃、1.5分鐘，(2)～(4)之步驟反覆進行35個循環。使用In-Fusion HD選殖套組(Cloning Kit)(TAKARA公司製造)，將所獲得之2種PCR產物連結於利用EcoRV進行消化之pcDNA3.1(Invitrogen公司製造)。將經連結之DNA導入至大腸桿菌進行培養，藉此獲得命名為pcDNA3.1-AaAmOrco之斑蚊輔受體與蜜蜂輔受體之嵌合輔受體之表現質體。利用DNA定序儀而解析所獲得之表現質體pcDNA3.1-AaAmOrco之鹼基序列，判斷出含有序列編號107所表示之鹼基序列。序列編號107所表示之鹼基序列編碼序列編號108所表示之胺基酸序列。於由表現質體pcDNA3.1-AaAmOrco所編碼之嵌合輔受體中，自其N末端區域(NT)至第4跨膜區(TM4)為止之胺基酸序列係源自斑蚊輔受體(Aa(NT-TM4)，序列編號135)，自第2細胞內環至C末端區域為止之胺基酸序列係源自蜜蜂輔受體(Am(IC2-CT)，序列編號2)。 瘧蚊輔受體與蜜蜂輔受體之嵌合輔受體(以下，有時亦稱為「Ag(NT-TM4)AmORCO」)之表現質體 將100 ng之上述瘧蚊輔受體之表現質體用於模版，使用10 μM之正向引子AgOrco(NT-TM4)-5'(5'-tggaattctgcagatcaccatgcaagtccagccgaccaagtacgt；序列編號109)1 μL、10 μM之反向引子AgOrco (NT-TM4)-3'(5'-caagtgttgcagctgctcgcaggcta；序列編號110)1 μL及KODPlus neoDNA聚合酶(東洋紡製造)1 μL進行PCR。PCR反應係以如下條件進行：(1)94℃、2分鐘，(2)98℃、10秒，(3)63℃、30秒，(4)68℃、1.5分鐘，(2)～(4)之步驟反覆進行35個循環。將100 ng之上述蜜蜂輔受體之表現質體用於模版，使用10 μM之正向引子AgAmOrco (IC2-CT)-5'(5'-cagctgcaacacttgaagaatatcatgaagcctttgatgg；序列編號111)1 μL、10 μM之反向引子AmOrco-3'(5'-gccactgtgctggattcacttcagttgcaccaacaccatgaa；序列編號112)1 μL及KOD Plus neoDNA聚合酶(東洋紡製造)1 μL進行PCR。PCR反應係以如下條件進行：(1)94℃、2分鐘，(2)98℃、10秒，(3)63℃、30秒，(4)68℃、1.5分鐘，(2)～(4)之步驟反覆進行35個循環。使用In-Fusion HD選殖套組(Cloning Kit)(TAKARA公司製造)，將所獲得之2種PCR產物連結於利用EcoRV進行消化之pcDNA3.1(Invitrogen公司製造)。將經連結之DNA導入至大腸桿菌進行選殖，藉此獲得命名為pcDNA3.1-AgAmOrco之瘧蚊輔受體與蜜蜂輔受體之嵌合輔受體之表現質體。利用DNA定序儀而解析所獲得之表現質體pcDNA3.1-AgAmOrco之鹼基序列，判斷出含有序列編號113所表示之鹼基序列。序列編號113所表示之鹼基序列編碼序列編號114所表示之胺基酸序列。於由表現質體pcDNA3.1-AgAmOrco所編碼之嵌合輔受體中，自胺基末端區域(NT)至第4跨膜區(TM4)為止之胺基酸序列係源自瘧蚊輔受體(Ag(NT-TM4)，序列編號136)，自第2細胞內環至C末端區域為止之鹼基序列係源自蜜蜂輔受體(Am(IC2-CT)，序列編號2)。 ＜嗅覺受體表現質體之製作＞ 斑蚊嗅覺受體OR8(以下，有時亦稱為「AaOR8」)之表現質體 將1 μL之藉由上述方法所製備之源自斑蚊頭部之cDNA用於模版，使用10 μM之正向引子AaOR8-5'(5'-tggaattctgcagatcaccatgggaggtaagttctc；序列編號115)1 μL、10 μM之反向引子AaOR8-3'(5'-gccactgtgctggattcacttctgacttggttc；序列編號116)1 μL及KOD Plus neoDNA聚合酶(東洋紡製造)1 μL進行PCR。PCR反應係以如下條件進行：(1)94℃、2分鐘，(2)98℃、10秒，(3)68℃、1分鐘，(2)～(4)之步驟重複進行30個循環。使用In-Fusion HD選殖套組(Cloning Kit)(TAKARA公司製造)，將所獲得之PCR產物連結於利用EcoRV進行消化之pcDNA3.1(Invitrogen公司製造)。將經連結之DNA導入至大腸桿菌進行培養，藉此獲得命名為pcDNA3.1-AaOR8之表現質體。利用DNA定序儀而解析表現質體pcDNA3.1-AaOR8之鹼基序列，判斷出含有序列編號117所表示之鹼基序列。序列編號117所表示之鹼基序列編碼序列編號118所表示之胺基酸序列。 果蠅嗅覺受體OR47a(以下，有時亦稱為「DmOR47a」)之表現質體 將1 μL之藉由上述方法所製備之源自果蠅成蟲之cDNA用於模版，使用10 μL之正向引子DmOR47a-5'(5'-caccatggacagttttctgcaagtacagaa；序列編號119)1 μL、10 μM之反向引子DmOR47a-3'(5'-ttaggagaatgatctcagcattgtgatgta；序列編號120)1 μL及KOD Plus neo DNA聚合酶(東洋紡製造)1 μL進行PCR。PCR反應係以如下條件進行：(1)94℃、2分鐘，(2)98℃、10秒，(3)68℃、1.5分鐘，(2)～(3)之步驟反覆進行35個循環。於對所獲得之PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳後，回收在該凝膠上所檢測到之約1.2 kb之DNA。將所回收之DNA導入至pENTR/D-TOPO載體(Invitrogen公司製造)，而獲得命名為pENTR-DmOR47a之質體。將4 μL之pENTR-DmOR47a、1 μL之pcDNA6.2V5-DEST及2 μL之LR Clonase II(Invitrogen公司製造)混合並於室溫下保持1小時。將所獲得之混合物導入至大腸桿菌進行培養，藉此獲得命名為pcDNA6.2-DmOR47a之表現質體。利用DNA定序儀而解析表現質體pcDNA6.2-DmOR47a之鹼基序列，判斷出含有序列編號121所表示之鹼基序列。序列編號121所表示之鹼基序列編碼序列編號122所表示之胺基酸序列。 家蠶嗅覺受體OR56(以下，有時亦稱為「BmOR56」)之表現質體 合成於任一DNA鏈具有序列編號123所表示之鹼基序列之雙鏈DNA。將100 ng之具有序列編號123所表示之鹼基序列之雙鏈DNA用於模版，使用10 μM之正向引子BmOR56-5'(5'-tggaattctgcagatcaccatgaagctcctggagaagctag；序列編號124)1 μL、10 μM之反向引子BmOR56-3'(5'-gccactgtgctggattcatgttttattcatttgcgactgac；序列編號125)1 μL及KOD Plus neoDNA聚合酶(東洋紡製造)1 μL進行PCR。PCR反應係以如下條件進行：(1)94℃、2分鐘，(2)98℃、10秒，(3)63℃、30秒，(4)68℃、1.5分鐘，(2)～(4)之步驟反覆進行35個循環。使用In-Fusion HD選殖套組(Cloning Kit)(TAKARA公司製造)，將所獲得之PCR產物連結於利用EcoRV進行消化之pcDNA3.1(Invitrogen公司製造)。將經連結之DNA導入至大腸桿菌進行培養，藉此獲得命名為pcDNA3.1-BmOR56之表現質體。利用DNA定序儀而解析表現質體pcDNA3.1-BmOR56之鹼基序列，判斷出含有序列編號123所表示之鹼基序列。序列編號123所表示之鹼基序列編碼序列編號126所表示之胺基酸序列。 ＜水母蛋白(Aequorin)表現質體之製作＞ 將50 ng之質體(pMD19-AEQ)用於模版，該質體(pMD19-AEQ)係將編碼Aequorin之序列編號127所表示之鹼基序列選殖於pMD19載體而成，使用10 μM之正向引子AEQ-5'(5'-caccatgacaagcaaacaatactc；序列編號128)1 μL、10 μM之反向引子AEQ-3'(5'-ttaggggacagctccaccgtag；序列編號129)1 μL及KOD Plus neoDNA聚合酶(東洋紡製造)1 μL進行PCR。PCR反應係以如下條件進行：(1)95℃、3分鐘，(2)95℃、30秒，(3)60℃、30秒，(4)68℃、1分鐘，(2)～(4)之步驟反覆進行35個循環。於對所獲得之PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳後，回收在該凝膠上所檢測到之約600 bp之DNA。將所回收之DNA導入至pENTR/D-TOPO載體(Invitrogen公司製造)，而獲得命名為pENTR-AEQ之質體。序列編號127所表示之鹼基序列編碼序列編號130所表示之胺基酸序列。將4 μL之pENTR-AEQ、1 μL之pcDNA6.2V5-DEST及2 μL之LR Clonase II(Invitrogen公司製造)混合並於室溫下保持1小時。將所獲得之混合物導入至大腸桿菌進行擴增，藉此獲得命名為pcDNA6.2-AEQ之質體。將質體pcDNA6.2-AEQ 100ng用於模版，使用10 μM之正向引子In-Fusion AEQ-5'(5'-gtggcggccgctcgaggccaccatgacaagcaaacaatactc；序列編號131)1 μL、10 μM之反向引子In-Fusion AEQ-3'(5'-gccctctagactcgagttaggggacagctccaccgtag；序列編號132)1 μL及KOD neo Plus DNA聚合酶(東洋紡製造)1 μL進行PCR。PCR反應係以如下條件進行：(1)95℃、3分鐘，(2)95℃、30秒，(3)60℃、30秒，(4)68℃、1分鐘，(2)～(4)之步驟反覆進行35個循環。於對所獲得之DNA進行瓊脂糖凝膠電泳後，回收在該凝膠上所檢測到之約600 bp之DNA，將其設為插入DNA1。使用利用XhoI進行消化之pcDNA3.1(Invitrogen公司製造)作為載體，使用In-Fusion HD選殖套組(Cloning Kit)(TAKARA公司製造)將上述插入DNA1連結於pcDNA3.1。將經連結之DNA導入至大腸桿菌進行培養，藉此獲得命名為pcDNA3.1-AEQ之質體。將100 ng之pcDNA3.1-AEQ用於模版，使用10 μM之正向引子In-Fusion AEQ-5'(5'-gtggcggccgctcgaggccaccatgacaagcaaacaatactc；序列編號133)1 μL、10 μM之反向引子In-Fusion AEQ-3'(5'-gccctctagactcgagttaggggacagctccaccgtag；序列編號134)1 μL及KOD Plus neo DNA聚合酶(東洋紡製造)1 μL進行PCR。PCR反應係以如下條件進行：(1)95℃、3分鐘，(2)95℃、30秒，(3)60℃、30秒，(4)68℃、1分鐘，(2)～(4)之步驟反覆進行35個循環。於對所獲得之DNA進行瓊脂糖凝膠電泳後，回收在該凝膠上所檢測到之約600 bp之DNA，將其設為插入DNA2。使用利用XhoI進行消化之pcDNA3.1(hygro)(Invitrogen公司製造)作為載體，使用In-Fusion HD選殖套組(Cloning Kit)(TAKARA公司製造)將上述插入DNA2連結於該pcDNA3.1(hygro)。將經連結之DNA導入至大腸桿菌進行培養，藉此獲得命名為pcDNA3.1(hygro)-AEQ之表現質體。 ＜表現質體向細胞之導入＞ 將HEK293FT細胞(自Invitrogen公司購買)以3×106
cells/培養皿接種至10 cm培養皿，於包含10%FBS(Fetal Bovine Serum，胎牛血清)之DMEM培養基(Nacalai Tesque公司製造)中，於37℃、5%CO2
條件下培養約24小時。將3 μg之欲製作之任一輔受體表現質體、1.5 μg之欲製作之任一嗅覺受體表現質體、及8 μg之Aequorin表現質體與12.5 μL之Plus試劑及31.25 μL之Lipofectamine LTX(Invitrogen公司製造)混合，並保持30分鐘。其後，將該混合液轉染至上述細胞。於開始轉染起4小時後，以9×104
cells/well接種至96孔培養盤，於包含10%FBS之DMEM培養基(Nacalai Tesque公司製造)中，於37℃、5%CO2
條件下培養約24小時。藉此，獲得瞬間導入有輔受體表現質體、嗅覺受體表現質體及Aequorin表現質體之轉形細胞。 ＜活性測定＞ 水母蛋白於與鈣離子結合時被活化，將腔腸素等受質氧化而發光。因此，表現水母蛋白之細胞之細胞內鈣離子濃度之上升直接顯示為發光量之增大，因此可根據發光量之變化而測定出是否因添加受檢物質使嗅覺受體複合體作為離子通道而發揮功能。 去除上述轉形細胞之培養液，換為緩衝液(包含0.5 μM腔腸素h(Promega公司製造)及0.3%之BSA之Hanks-HEPES(20 mM pH值7.4))，進而於室溫下靜置4小時。然後，使用Flexstation3(Molecular devices公司製造)，將與嗅覺受體對應之受檢物質添加至細胞之培養液中，並且測定細胞之發光量。將添加有作為對照物質之二甲基亞碸的細胞之發光量設為1，作為相對值而算出添加有受檢物質之細胞之發光量。 (試驗例1) 使用導入有嗅覺受體AaOR8之表現質體、 輔受體AaORCO或DmORCO、或重組位置不同之各種嵌合輔受體Dm-AaORCO[Dm(NT-EC1)AaORCO、Dm(NT-TM3)AaOROC、Dm(NT-TM4)AaORCO、Dm(NT-TM5)AaORCO、或Dm(NT-TM6)AaORCO]之任一表現質體、及 Aequorin表現質體 的細胞，以如上所述之方式測定發光量。作為受檢物質，使用1-辛烯-3-醇，以10-4
M、10-5
M、10-6
M、10-7
M、10-8
M、10-9
M、或10-10
M之濃度添加至培養液。將其結果示於圖1。於表現DmORCO與AaORCO之嵌合輔受體中、自N末端區域至第4跨膜區為止之胺基酸序列源自果蠅輔受體且自第2細胞內環至C末端區域為止之胺基酸序列源自斑蚊輔受體之嵌合輔受體[Dm(NT-TM4)AaORCO]及嗅覺受體的細胞中，相較於表現原AaORCO或DmORCO及嗅覺受體之細胞，因添加1-辛烯-3-醇而引起之發光量增加更大。表現自N末端區域至第4跨膜區為止之胺基酸序列源自果蠅輔受體且自第2細胞內環至C末端區域為止之胺基酸序列源自斑蚊輔受體之嵌合輔受體[Dm(NT-TM4)AaORCO]及嗅覺受體的細胞顯示出相較於表現原AaORCO或DmORCO之任一者及嗅覺受體之細胞，更強地應答1-辛烯-3-醇。 (試驗例2) 使用導入有嗅覺受體AaOR8之表現質體、 輔受體AmORCO或DmORCO、或重組位置不同之各種嵌合輔受體Dm-AmORCO[Dm(NT-TM3)AmOROC、Dm(NT-TM4)AmORCO、Dm(NT-TM5)AmORCO、或Dm(NT-TM6)AmORCO]之任一表現質體、及 Aequorin表現質體 的細胞，以如上所述之方式測定發光量。作為受檢物質，使用1-辛烯-3-醇，以10-4
M、10-5
M、10-6
M、10-7
M、10-8
M、10-9
M、或10-10
M之濃度添加至培養液。將其結果示於圖2。於表現DmORCO與AmORCO之嵌合輔受體中、和DmORCO與AaORCO之嵌合輔受體相同地自N末端區域至第4跨膜區為止之胺基酸序列源自果蠅輔受體且自第2細胞內環至C末端區域為止之胺基酸序列源自蜜蜂輔受體之嵌合輔受體[Dm(NT-TM4)AmORCO]及嗅覺受體的細胞中，相較於表現原AmORCO或DmORCO之任一者及嗅覺受體之細胞，因添加1-辛烯-3-醇而引起之發光量增加更大。由試驗例1及2之結果顯示，為了製作與嗅覺受體結合而形成嗅覺受體複合體時對配位基之應答強度較大之嵌合輔受體，重要的是於第4跨膜區之C末端附近，將原2種輔受體之胺基酸序列重組。 (試驗例3) 使用導入有嗅覺受體AaOR8之表現質體、 輔受體AaORCO或DmORCO、或重組位置不同之各種嵌合輔受體Dm-AaORCO[Dm(NT-TM4)AaORCO、Dm(NT-792)AaORCO、Dm(NT-879)AaORCO、Dm(NT-969)AaORCO、Dm(NT-1080)AaORCO、Dm(NT-TM5)AaORCO、或Dm(NT-636)AaORCO]之任一表現質體、及 Aequorin表現質體 的細胞，以如上所述之方式測定發光量。作為受檢物質，使用1-辛烯-3-醇，以10-4
M、10-5
M、10-6
M、10-7
M、10-8
M、10-9
M、或10-10
M之濃度添加至培養液。將其結果示於圖3及4。表現Dm(NT-TM4)AaORCO與嗅覺受體之細胞相較於表現原AaORCO或DmORCO之任一者及嗅覺受體之細胞，對1-辛烯-3-醇之應答強度更高。相對於此，表現源自DmORCO之胺基酸序列於C末端側較Dm(NT-TM4)AaORCO長30個胺基酸殘基之Dm(792)AaORCO及嗅覺受體之細胞相較於表現原AaORCO及嗅覺受體之細胞，對1-辛烯-3-醇之應答強度減少。於表現源自DmORCO之胺基酸序列於N末端側較Dm(NT-TM4)AaORCO短22個胺基酸殘基之Dm(NT-636)AaORCO及嗅覺受體之細胞中，相較於表現原AaORCO或DmORCO之任一者及嗅覺受體之細胞，對1-辛烯-3-醇之應答強度亦減少。由該等結果提示，於嵌合輔受體中，源自第一昆蟲之ORCO之胺基酸序列較佳為自N末端至第4跨膜區之最靠C末端側之胺基酸殘基之前後20個胺基酸殘基程度以內之範圍之任一胺基酸殘基為止。 (試驗例4) 使用導入有嗅覺受體AaOR8之表現質體、 輔受體AaORCO或DmORCO、或者嵌合輔受體Dm(NT-TM4)AaORCO、僅將AaORCO之第一至第四跨膜區重組為DmORCO之Aa(TM1-4Dm)AaORCO、或將AaORCO之N末端區域、第一及第二細胞外區域、第一細胞內區域重組為DmORCO之Dm(TM1-4Aa)AaORCO之任一表現質體、及 Aequorin表現質體 的細胞，以如上所述之方式測定發光量。作為受檢物質，使用1-辛烯-3-醇，以10-4
M、10-5
M、10-6
M、10-7
M、10-8
M、10-9
M、或10-10
M之濃度添加至培養液。將其結果示於圖5。其結果為，於表現僅重組跨膜區或細胞內區域及細胞外區域之嵌合輔受體[Aa(TM1-4Dm)AaORCO或Dm(TM1-4Aa)AaORCO]及嗅覺受體之細胞中，相較於表現原AaORCO或DmORCO之任一者及嗅覺受體之細胞，對1-辛烯-3-醇之應答強度減少。顯示出為了製作與嗅覺受體結合而形成嗅覺受體複合體時對配位基之應答強度較大之嵌合輔受體，需要自N末端至第4跨膜區為止連續源自同種ORCO之區域。 (試驗例5) 使用導入有嗅覺受體DmOR47a之表現質體、 輔受體DmORCO或AmORCO、或嵌合輔受體Dm(NT-TM4)AmORCO之任一表現質體、及 Aequorin表現質體 的細胞，以如上所述之方式測定發光量。作為受檢物質，使用乙酸戊酯，以10-4
M、10-4.5
M、10-5
M、10-5.5
M、10-6
M、10-6.5
M、或10-7
M之濃度添加至培養液。將其結果示於圖6。顯示出表現Dm(NT-TM4)AmORCO及嗅覺受體之細胞相較於表現原DmORCO或AmORCO之任一者及嗅覺受體之細胞，更強地應答戊基乙酸戊酯。 (試驗例6) 使用導入有嗅覺受體AaOR8之表現質體、 輔受體AaORCO或AmORCO、或嵌合輔受體Aa(NT-TM4)AmORCO之任一表現質體、及 Aequorin表現質體 的細胞，以如上所述之方式測定發光量。作為受檢物質，使用1-辛烷-3-醇，以10-4
M、10-5
M、10-6
M、10-7
M、10-8
M、10-9
M、或10-10
M之濃度添加至培養液。將其結果示於圖7。顯示出表現Aa(NT-TM4)AmORCO及嗅覺受體之細胞相較於表現原AaORCO或AmORCO之任一者及嗅覺受體之細胞，更強地應答1-辛烷-3-醇。 (試驗例7) 使用導入有嗅覺受體AaOR8之表現質體、 輔受體AgORCO或AmORCO、或嵌合輔受體Ag(NT-TM4)AmORCO之任一表現質體、及 Aequorin表現質體 的細胞，以如上所述之方式測定發光量。作為受檢物質，使用1-辛烷-3-醇，以10-4
M、10-5
M、10-6
M、10-7
M、10-8
M、10-9
M、或10-10
M之濃度添加至培養液。將其結果示於圖8。顯示出與嗅覺受體結合而形成嗅覺受體複合體時，表現Ag(NT-TM4)AmORCO及嗅覺受體之細胞相較於表現原AaORCO或AmORCO之任一者及嗅覺受體之細胞，應答更低濃度之1-辛烷-3-醇。 (試驗例8) 使用導入有嗅覺受體BmOR56之表現質體、 輔受體BmORCO、或嵌合輔受體Dm(NT-TM4)AmORCO之任一表現質體、及 Aequorin表現質體 的細胞，以如上所述之方式測定發光量。作為受檢物質，使用順式茉莉酮，以10-5
M、10-6
M、10-7
M、10-8
M、10-9
M、10-10
M、或10-11
M之濃度添加至培養液。將其結果示於圖9。顯示出表現Dm(NT-TM4)AmORCO及BmOR56之細胞相較於表現BmORCO及BmOR56之細胞，更強地應答順式茉莉酮。又，由實施例7及8之結果顯示，表現源自與成為構成嵌合輔受體之原ORCO之來源之各昆蟲不同種類之昆蟲之嗅覺受體及本實施形態之嵌合輔受體的細胞相較於表現原嗅覺受體輔受體及上述嗅覺受體之細胞，對配位基更強或感度更良好地應答。
圖1表示對表現作為嗅覺受體之AaOR8、作為輔受體之AaORCO、DmORCO、或重組位置不同之各種嵌合輔受體(Dm-AaORCO)之任一種的細胞添加1-辛烯-3-醇時之發光量之相對值。 圖2表示對表現作為嗅覺受體之AaOR8、作為輔受體之AmORCO、DmORCO、或重組位置不同之各種嵌合輔受體(Dm-AmORCO)之任一種的細胞添加1-辛烯-3-醇時之發光量之相對值。 圖3表示對表現作為嗅覺受體之AaOR8、作為輔受體之AaORCO、DmORCO、或各種嵌合輔受體(Dm-AaORCO)之任一種的細胞添加1-辛烯-3-醇時之發光量之相對值。 圖4表示對表現作為嗅覺受體之AaOR8、作為輔受體之AaORCO、DmORCO、或各種嵌合輔受體(Dm-AaORCO)之任一種的細胞添加1-辛烯-3-醇時之發光量之相對值。 圖5表示對表現作為嗅覺受體之AaOR8、作為輔受體之AaORCO、DmORCO、Dm(NT-TM4)AaORCO、或將跨膜區或細胞內區域及細胞外區域重組而成之各種嵌合輔受體(Dm-AaORCO)之任一種的細胞添加1-辛烯-3-醇時之發光量之相對值。 圖6表示對表現作為嗅覺受體之DmOR47a、作為輔受體之DmORCO、AmORCO、或Dm(NT-TM4)AmORCO之任一種的細胞添加乙酸戊酯時之發光量之相對值。 圖7表示對表現作為嗅覺受體之AaOR8、作為輔受體之AaORCO、AmORCO、或Aa(NT-TM4)AmORCO之任一種的細胞添加1-辛烯-3-醇時之發光量之相對值。 圖8表示對表現作為嗅覺受體之AaOR8、作為輔受體之AgORCO、AmORCO、或Ag(NT-TM4)AmORCO之任一種的細胞添加1-辛烯-3-醇時之發光量之相對值。 圖9表示對表現作為嗅覺受體之BmOR56、作為輔受體之BmORCO、或Dm(NT-TM4)AmORCO之任一種的細胞添加順式茉莉酮時之發光量之相對值。
<110> 住友化學股份有限公司(Sumitomo chemical co.ltd.)
<120> 嗅覺受體輔受體
<130> FP17-0581-00
<150> JP2016-191904
<151> 2016-09-29
<160> 137
<170> PatentIn第3.5版
<210> 1
<211> 234
<212> PRT
<213> 黑腹果蠅
<400> 1
Claims (17)
- 一種嗅覺受體輔受體，其具有以下之第一胺基酸序列、及與上述第一胺基酸序列之最靠羧基末端側之胺基酸殘基相接之以下之第二胺基酸序列：(1)第一胺基酸序列，其係第一昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之部分胺基酸序列，且係自上述第一昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之胺基末端至位於第4跨膜區之最靠羧基末端側之胺基酸殘基之前後20個胺基酸殘基之範圍內之任一胺基酸殘基為止的連續之胺基酸序列；及(2)第二胺基酸序列，其係與上述第一昆蟲為不同種類之第二昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之部分胺基酸序列，且係於對上述第一昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之胺基酸序列與上述第二昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之胺基酸序列進行比對分析之情形時，於上述第二昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體中自相當於上述第一胺基酸序列之最靠羧基末端側之胺基酸殘基之位置的一個羧基末端側之胺基酸殘基至上述第二昆蟲之嗅覺受體輔受體或其變異體之羧基末端為止的連續之胺基酸序列。
- 如請求項1之嗅覺受體輔受體，其中上述第一昆蟲及上述第二昆蟲係選自由內翅總目昆蟲所組成之群中之不同種類之昆蟲。
- 如請求項1之嗅覺受體輔受體，其中上述第一昆蟲及上述第二昆蟲係選自由雙翅目昆蟲、鱗翅目昆蟲及膜翅目昆蟲所組成之群中之不同種類之昆蟲。
- 如請求項1之嗅覺受體輔受體，其中上述第一昆蟲及上述第二昆蟲係選自由蚊科昆蟲、果蠅科昆蟲、蠶蛾科昆蟲及蜜蜂科昆蟲所組成之群中之不同種類之昆蟲。
- 如請求項1之嗅覺受體輔受體，其中上述第一昆蟲為埃及斑蚊(Aedes aegypti)、甘比亞瘧蚊(Anopheles gambiae)、或黑腹果蠅(Drosophila melanogaster)之任一種昆蟲。
- 如請求項1之嗅覺受體輔受體，其中上述第一胺基酸序列係與序列編號1、135或136之任一者中所記載之胺基酸序列具有90%以上之同一性的胺基酸序列。
- 如請求項1之嗅覺受體輔受體，其中上述第二昆蟲為埃及斑蚊或意大利蜂(Apis mellifera)之任一種昆蟲。
- 如請求項1之嗅覺受體輔受體，其中上述第二胺基酸序列係與序列編號2或137中所記載之胺基酸序列具有90%以上之同一性之胺基酸序列。
- 如請求項1至4中任一項之嗅覺受體輔受體，其中上述第一昆蟲為黑腹果蠅，上述第二昆蟲為意大利蜂。
- 如請求項9之嗅覺受體輔受體，其具有與序列編號100中所記載之胺 基酸序列具有90%以上之同一性之胺基酸序列。
- 如請求項1至4中任一項之嗅覺受體輔受體，其中上述第一昆蟲為黑腹果蠅，上述第二昆蟲為埃及斑蚊。
- 如請求項11之嗅覺受體輔受體，其具有與序列編號71中所記載之胺基酸序列具有90%以上之同一性之胺基酸序列。
- 如請求項1至4中任一項之嗅覺受體輔受體，其中上述第一昆蟲為埃及斑蚊，上述第二昆蟲為意大利蜂。
- 如請求項13之嗅覺受體輔受體，其具有與序列編號108中所記載之胺基酸序列具有90%以上之同一性之胺基酸序列。
- 一種聚核苷酸，其編碼如請求項1至14中任一項之嗅覺受體輔受體。
- 一種表現質體，其導入有如請求項15之聚核苷酸。
- 一種細胞，其導入有如請求項15之聚核苷酸或如請求項16之表現質體。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2016191904A JP6875815B2 (ja) | 2016-09-29 | 2016-09-29 | 嗅覚受容体共受容体 |
| JP??2016-191904 | 2016-09-29 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TW201813974A TW201813974A (zh) | 2018-04-16 |
| TWI770066B true TWI770066B (zh) | 2022-07-11 |
Family
ID=61759756
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TW106133416A TWI770066B (zh) | 2016-09-29 | 2017-09-28 | 嗅覺受體輔受體 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11919930B2 (zh) |
| EP (1) | EP3521427A4 (zh) |
| JP (1) | JP6875815B2 (zh) |
| CN (1) | CN109804067B (zh) |
| TW (1) | TWI770066B (zh) |
| WO (1) | WO2018062203A1 (zh) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI835805B (zh) * | 2018-06-13 | 2024-03-21 | 紐西蘭商仙廸恩生物有限公司 | 生物感測器裝置及方法 |
| TW202221013A (zh) | 2020-07-27 | 2022-06-01 | 日商住友化學股份有限公司 | 突變型昆蟲嗅覺受體蛋白質 |
| JPWO2022024903A1 (zh) | 2020-07-27 | 2022-02-03 | ||
| US11760170B2 (en) | 2020-08-20 | 2023-09-19 | Denso International America, Inc. | Olfaction sensor preservation systems and methods |
| US11760169B2 (en) | 2020-08-20 | 2023-09-19 | Denso International America, Inc. | Particulate control systems and methods for olfaction sensors |
| US11881093B2 (en) | 2020-08-20 | 2024-01-23 | Denso International America, Inc. | Systems and methods for identifying smoking in vehicles |
| US11813926B2 (en) | 2020-08-20 | 2023-11-14 | Denso International America, Inc. | Binding agent and olfaction sensor |
| US12017506B2 (en) | 2020-08-20 | 2024-06-25 | Denso International America, Inc. | Passenger cabin air control systems and methods |
| US11932080B2 (en) | 2020-08-20 | 2024-03-19 | Denso International America, Inc. | Diagnostic and recirculation control systems and methods |
| US11828210B2 (en) | 2020-08-20 | 2023-11-28 | Denso International America, Inc. | Diagnostic systems and methods of vehicles using olfaction |
| US11636870B2 (en) | 2020-08-20 | 2023-04-25 | Denso International America, Inc. | Smoking cessation systems and methods |
| CN113504378B (zh) * | 2021-09-08 | 2022-01-04 | 汉王科技股份有限公司 | 嗅觉受体、重组细胞、试剂盒及其用途 |
| CN114921469B (zh) * | 2022-04-12 | 2024-02-27 | 广西壮族自治区蚕业技术推广站 | 家蚕嗅觉受体基因BmOR56的用途 |
| WO2023240153A1 (en) * | 2022-06-09 | 2023-12-14 | Firmenich Incorporated | Arthropod chemosensory receptors and uses thereof |
| CN116286818B (zh) * | 2023-02-16 | 2023-10-13 | 北京林业大学 | 靶向光肩星天牛嗅觉共表达受体基因的dsRNA及应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003016477A2 (en) | 2001-08-14 | 2003-02-27 | Sentigen Corp. | Insect or83b odorant receptor |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1208111B1 (en) * | 1999-02-25 | 2008-10-01 | The Trustees of Columbia University in the City of New York | Genes encoding insect odorant receptors and uses thereof |
| CA2438212A1 (en) * | 2001-02-08 | 2002-09-06 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Biosensor for detecting chemical agents |
| AU2002326834A1 (en) | 2001-09-04 | 2003-03-18 | Sentigen Corp. | Anopheles gambiae odorant receptors and genes |
| WO2009148946A2 (en) * | 2008-05-29 | 2009-12-10 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Cell line, system and method for optical control of secondary messengers |
| JP5747542B2 (ja) | 2010-03-03 | 2015-07-15 | 住友化学株式会社 | 植物病害防除組成物及び植物病害防除方法 |
| WO2012056603A1 (ja) | 2010-10-25 | 2012-05-03 | パナソニック株式会社 | キメラ嗅覚受容体を用いてｃＡＭＰを産生する方法 |
| ITMI20121045A1 (it) | 2012-06-15 | 2013-12-16 | Isagro Ricerca Srl | Composizioni sinergiche per la protezione di colture agrarie e relativo uso |
| JP6106976B2 (ja) | 2012-07-20 | 2017-04-05 | 住友化学株式会社 | 植物病害防除組成物およびその用途 |
| JP6755640B2 (ja) * | 2014-03-28 | 2020-09-16 | 味の素株式会社 | 甘味受容体キメラタンパク質及びその利用 |
-
2016
- 2016-09-29 JP JP2016191904A patent/JP6875815B2/ja active Active
-
2017
- 2017-09-26 CN CN201780060791.9A patent/CN109804067B/zh active Active
- 2017-09-26 WO PCT/JP2017/034792 patent/WO2018062203A1/ja unknown
- 2017-09-26 US US16/338,245 patent/US11919930B2/en active Active
- 2017-09-26 EP EP17856153.6A patent/EP3521427A4/en active Pending
- 2017-09-28 TW TW106133416A patent/TWI770066B/zh active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003016477A2 (en) | 2001-08-14 | 2003-02-27 | Sentigen Corp. | Insect or83b odorant receptor |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20190225659A1 (en) | 2019-07-25 |
| JP6875815B2 (ja) | 2021-05-26 |
| JP2018050556A (ja) | 2018-04-05 |
| WO2018062203A1 (ja) | 2018-04-05 |
| EP3521427A4 (en) | 2020-04-22 |
| US11919930B2 (en) | 2024-03-05 |
| TW201813974A (zh) | 2018-04-16 |
| CN109804067A (zh) | 2019-05-24 |
| CN109804067B (zh) | 2023-05-02 |
| EP3521427A1 (en) | 2019-08-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI770066B (zh) | 嗅覺受體輔受體 | |
| Coast et al. | The Drosophila melanogaster homologue of an insect calcitonin-like diuretic peptide stimulates V-ATPase activity in fruit fly Malpighian tubules | |
| Qi et al. | A new Drosophila octopamine receptor responds to serotonin | |
| Paluzzi et al. | Identification, spatial expression analysis and functional characterization of a pyrokinin-1 receptor in the Chagas’ disease vector, Rhodnius prolixus | |
| WO2018062201A1 (ja) | 嗅覚受容体複合体及びそれを発現する細胞 | |
| Pietrantonio et al. | The mosquito Aedes aegypti (L.) leucokinin receptor is a multiligand receptor for the three Aedes kinins | |
| WO2015086818A1 (en) | Optically activated receptors | |
| Choi et al. | Identification and expression of PBAN/diapause hormone and GPCRs from Aedes aegypti | |
| Lattanzi et al. | Identification and characterization of Prokineticin receptor 2 splicing variant and its modulation in an animal model of Alzheimer's disease | |
| Krasnoperov et al. | Dissociation of the subunits of the calcium-independent receptor of α-latrotoxin as a result of two-step proteolysis | |
| Harada et al. | Identification of two interleukin 17 receptor C (IL-17RC) genes and their binding activities to three IL-17A/F ligands in the Japanese medaka, Oryzias latipes | |
| MXPA03009580A (es) | Tir3, un receptor de sabor novedoso. | |
| JP5754681B2 (ja) | 幼若ホルモン応答エレメント | |
| CA2543127A1 (en) | Primate prokineticin and prokineticin receptor polypeptides, related compositions and methods | |
| Fukuzawa et al. | Multiple processing of Ig-Hepta/GPR116, a G protein–coupled receptor with immunoglobulin (Ig)-like repeats, and generation of EGF2-like fragment | |
| US20230331793A1 (en) | Mutant insect olfactory receptor protein | |
| Bluhm et al. | Molecular cloning, sequence analysis and expression of the snake follicle-stimulating hormone receptor | |
| EP2149606B1 (en) | Nucleic acid molecules and methods for identifying modulators of GPR84 activity | |
| CA2286932A1 (en) | Recombinant bhlh-pas/jhr polypeptide and its use to screen potential insecticides | |
| Ying et al. | Cloning of GLUT1 gene fromwinged pearl oyster Pteria penguin and its expression in response to glucose challenge | |
| WO2020175562A1 (ja) | ナトリウムの作用を調節する物質のスクリーニング方法 | |
| DE102005027557B4 (de) | Koexpression von Chaperonen der Hsp70-Familie zur Verstärkung der Expressionen von G-Protein gekoppelten Rezeptoren | |
| Lynagh et al. | Evolution of Acid-Sensing Ion Channels | |
| Davis et al. | Intragenic Rescue of the Function of Long QT Syndrome-Causing hERG Mutant Channels | |
| JP2005046033A (ja) | 昆虫性フェロモン受容体タンパク質及びその利用 |