TWI760373B - 用於檢測樣本之方法及分析系統 - Google Patents
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Abstract
本發明提出一種用於檢測特定而言生物樣本之方法及分析系統,核酸產物在不同溫度下與感測器裝置之捕獲分子雜交。
Description
US 5,096,669揭示一種用於檢測生物樣本(特定而言血液樣本)之定點照護(point-of-care)系統。系統包括一次性匣體及分析器件。一旦已接納樣本,便將匣體插入至分析器件中以便實行檢測。匣體包括微流體系統及包括電極之感測器裝置,該裝置憑藉校準液體進行校準且接著用於檢測樣本。 此外,WO 2006/125767 A1揭示一種用於整合及自動化DNA或蛋白質分析之定點照護系統,其包括一次性匣體及用於使用該一次性匣體完全自動地處理並評估分子診斷分析之分析器件。匣體經設計以接納樣本(特定而言血液),且特定而言允許細胞破碎、PCR及PCR擴增產物之偵測,PCR擴增產物鍵結至捕獲分子且提供有標籤酶,以便可在稱為氧化還原循環程序之程序中偵測鍵結PCR擴增產物或核序列作為目標分析物。 US 2014/0377852 A1揭示一種用於執行蛋白質分析及/或核酸分析之微流體器件,其中藉由功能化微長度導管形成之玻璃奈米反應器用於光學偵測。玻璃奈米反應器可提供有與所關注序列互補之捕獲股。可使用特定於不同DNA目標群體的多個不同群體玻璃奈米反應器。
本發明係關於一種根據技術方案1之前序之方法且係關於一種根據技術方案22之前序之分析系統。 較佳地,本發明涉及分析及檢測特定而言來自人類或動物之樣本,特別較佳地用於(舉例而言)關於疾病及/或病原體之存在之分析及診斷及/或用於測定血球計數、抗體、激素、類固醇或類似者。因此,本發明特定而言屬於生物分析領域內。亦可視情況檢測食物樣本、環境樣本或另一樣本,特定而言用於環境分析或食物安全及/或用於偵測其他物質。 特定而言,憑藉本發明,可測定或偵測樣本之至少一個分析物(目標分析物),較佳地核酸產物,諸如特定核酸序列。特定而言,樣本可經檢測以定性或定量地測定至少一個分析物,舉例而言以便可偵測疾病及/或病原體。 本發明特定而言涉及稱為定點照護系統之系統,即,涉及系統、器件及其他裝置,且涉及用於在取樣位點處及/或獨立或遠離中心實驗室或類似者對樣本實行檢測之方法。 藉由本發明解決之問題係欲提供一種用於檢測樣本之經改良方法及經改良分析系統,其中樣本之高效、快速、可靠及/或具成本效益檢測及/或不同分析物之量測或偵測成為可能或被輔助。 藉由根據技術方案1之方法或藉由根據技術方案22之分析系統解決上述問題。有利發展係附屬技術方案之標的。 本發明之一個態樣涉及:在不同雜交溫度下使樣本之不同核酸序列及/或產物鍵結至對應捕獲分子;及/或改變較佳地擴增分析物及/或擴增產物之雜交溫度以便鍵結至捕獲分子(特定而言感測器裝置上或中的捕獲分子);及/或在不同雜交溫度下連續鍵結不同的較佳地擴增分析物及/或擴增產物。 特別較佳地,第一群組擴增產物(特定而言第一分析物)、第二群組其他擴增產物(特定而言第二分析物)及又可選第三群組其他擴增產物(特定而言第三分析物)在不同雜交溫度下鍵結至感測器裝置之對應捕獲分子。 較佳地,感測器裝置包括感測器隔間且擴增產物及/或不同群組在不同雜交溫度下於(相同)感測器隔間中鍵結至對應捕獲分子。此允許特定而言憑藉一個感測器裝置或感測器隔間或在一個感測器裝置或感測器隔間內非常緊湊且簡單實現及/或偵測或識別大量分析物、擴增產物及/或群組。 在不同雜交溫度下鍵結之分析物及/或擴增產物較佳係在單一或共同偵測程序中加以偵測。 特別較佳地,感測器裝置僅單次用於偵測該等分析物及/或擴增產物之程序,較佳地針對全部鍵結擴增產物特定而言同時進行電化學測定。此允許非常快速且高效檢測。 提出不同分析物及/或不同分析物之擴增產物可依雜交溫度非常高效地連續鍵結至(較佳地)固定捕獲分子(特別較佳地在感測器裝置上或中的固定捕獲分子),以便可特定而言在單一或共同偵測程序中同時量測及/或測定或偵測特別大數目之不同擴增產物。 在本發明之背景內容中,因此,可在單一偵測程序中且同時以高特異性檢測並行產生及/或擴增且具有不同雜交溫度之分析物及/或擴增產物。 較佳地,不同分析物及/或其擴增產物或群組最初係在(較佳地)不同PCR腔室及/或反應腔體中憑藉擴增反應(特定而言PCR)產生(特定而言同時及/或並行產生),且接著在不同雜交溫度下連續鍵結至捕獲分子。 特定而言,提出:第一、第二及可選第三群組係在不同反應腔體中產生。然而,亦可提出:分析物係在共同PCR腔室及/或反應腔體中憑藉擴增反應(特定而言PCR)擴增,及/或提出:擴增產物係在共同反應腔體中產生,及與捕獲分子之隨後雜交係在不同(特定而言遞減)雜交溫度下實行。 較佳地,複數個擴增反應(特定而言PCR)在檢測期間同時、並行或彼此獨立地運行。 較佳地,提供或實行不同擴增反應(特定而言使用不同引物之PCR)。 在本發明之含義內,擴增反應特定而言係分子生物學反應,其中分析物經擴增/複製及/或其中產生分析物之擴增產物(特定而言核酸產物)。特別較佳地,PCR係本發明之含義內之擴增反應。 「PCR」代表聚合酶鏈式反應且係分子生物學方法,該方法使用聚合酶或酶使樣本之某些分析物(特定而言RNA或DNA之部分)擴增(較佳數個循環),特定而言以便接著檢測及/或偵測擴增產物或核酸產物。若意欲檢測及/或擴增RNA,則在實行PCR之前,特定而言使用逆轉錄酶從RNA開始產生cDNA。使用cDNA作為用於隨後PCR之模板。 較佳地,在PCR期間,首先藉由加熱使樣本變性以便分離DNA或cDNA股。較佳地,接著將引物或核苷酸沈積在分離的單股DNA或cDNA上,且所要DNA或cDNA序列憑藉聚合酶複製及/或丟失股憑藉聚合酶替換。此程序較佳重複複數個循環,直至獲得所要數量之DNA或cDNA序列。 對於PCR而言,較佳使用標記引物,即,在擴增分析物上(額外地)產生標記或標籤(特定而言生物素)之引物。此允許或促進偵測。較佳地,使用之引物經生物素化及/或包括或形成特定而言共價鍵結生物素作為標籤。 用於檢測特定而言生物樣本之所提出分析系統較佳包括用於偵測核酸序列及/或特定而言擴增分析物及/或擴增產物之感測器裝置,該感測器裝置較佳包括用於鍵結序列、分析物及/或擴增產物之固定捕獲分子。 根據本發明之亦可獨立地實施之另一態樣,捕獲分子具有不同雜交溫度及/或該等捕獲分子經設計以在不同雜交溫度下與對應序列、分析物及/或擴增產物雜交。此導致對應優勢。 較佳地,感測器裝置包括感測器隔間,其中捕獲分子經配置或固定在感測器裝置之(相同)感測器隔間中使得不同分析物、擴增產物及/或群組可在不同雜交溫度下於(相同)感測器裝置或感測器隔間內鍵結。此允許特定而言憑藉一個感測器裝置或感測器隔間或在一個感測器裝置或感測器隔間內非常緊湊且簡單地實現及/或偵測或識別大量分析物、擴增產物及/或群組。 雜交溫度較佳地係使(擴增)分析物(特定而言RNA或DNA之部分)及/或擴增產物鍵結至對應捕獲分子及/或與對應捕獲分子雜交的(平均)溫度。 最佳雜交溫度較佳係使鍵結至對應捕獲分子之擴增產物之數目最大化及/或彼此鍵結之擴增產物之數目最小化之溫度。 較佳地,(最佳)雜交溫度針對不同分析物及/或擴增產物變化。 一組不同分析物及/或擴增產物較佳僅包含(至少大體上)具有類似(最佳)雜交溫度之分析物及/或擴增產物。因此,此導致群組之平均及/或最佳雜交溫度或(最佳)雜交溫度之溫度範圍。在此溫度下或在群組之此溫度範圍中,兩者亦簡稱為「群組溫度」,鍵結至捕獲分子之此群組中之分析物及/或擴增產物之總數(可能)最大。溫度範圍較佳係低於8℃,特定而言低於5℃。 較佳地,形成具有不同群組溫度之不同群組。群組溫度較佳地相差或間隔約1℃或以上、較佳地至少2℃、特定而言3℃以上。 特定而言,第一群組之群組溫度大於第二群組之群組溫度。 較佳地,(最佳)雜交溫度取決於DNA或cDNA之GC含量、DNA或cDNA之長度、DNA或cDNA序列之熔解點或熔解溫度及/或溶劑、環境介質及/或緩衝液之調節或鹽濃度而變化。 熔解點或熔解溫度較佳係使DNA或cDNA變性及/或雙股DNA或cDNA之股彼此分離之溫度。熔解點或熔解溫度較佳取決於DNA或cDNA之GC含量、DNA或cDNA之長度及/或溶劑、環境介質及/或緩衝液之調節或鹽濃度。較佳地,熔解點或熔解溫度係至少85℃或90℃,特別較佳地92℃或94℃,及/或至多99℃或98℃,特別較佳地至多97℃或96℃。 較佳地,雜交溫度係低於熔解點或熔解溫度,較佳低至少2℃或5℃,特別較佳地低8℃或10℃,特定而言低15℃或20℃或以上。 捕獲分子特定而言係寡核苷酸探針,其等較佳係藉由間隔件(特定而言C6間隔件)較佳固定在感測器、感測器陣列及/或電極上。可藉由間隔件對捕獲分子之較佳鍵結來防止形成破壞雜交之結構(例如,髮夾結構)。 在本發明之含義內,術語「偵測器分子」較佳理解為意謂特異性鍵結至用於擴增分析物之引物及/或隨其提供之分析物或擴增產物之標記或標籤且因此允許其偵測之分子。 特定而言,偵測器分子可為酶軛合物及/或免疫軛合物,其等特異性鍵結至標記或標籤(特定而言生物素)且包括用於轉化受質之報導酶。 在本發明之背景內容中,偵測器分子較佳係基於鏈霉親和素(其具有對生物素之高親和力)及/或鹼性磷酸酶(其可將非反應性磷酸單酯轉化成電化學活性分子及磷酸鹽)。 較佳地,使用偵測系統,其中標籤係基於生物素且其中偵測器分子係基於鏈霉親和素/鹼性磷酸酶。然而,亦可使用其他偵測器分子。 分析系統特定而言係攜帶型、行動型及/或係定點照護系統及/或可特定而言在取樣位點處及/或遠離中心實驗室使用。 分析系統較佳包括用於檢測樣本之分析器件及/或至少一個匣體。 術語「分析器件」較佳地理解為意謂儀器,其特定而言係行動型及/或可在原位使用,及/或其經設計以較佳地在匣體中及/或憑藉匣體化學、生物及/或物理檢測及/或分析樣本或其組分。特定而言,分析器件控制匣體中之樣本之檢測。 特別較佳地,分析器件經設計以接納匣體或經設計以連接該匣體。 術語「匣體」較佳地理解為意謂結構裝置或單元,其經設計以接納、儲存、物理、化學及/或生物處理及/或製備及/或量測樣本,較佳地以便可偵測、識別或測定樣本之至少一個分析物。 本發明之含義內之匣體較佳包括流體系統,其具有複數個通道、腔體及/或用於控制通過該等通道及/或腔體之流量之閥。 特定而言,在本發明之含義內,匣體經設計為至少大致平坦及/或卡狀,特定而言經設計為(微)流體卡及/或經設計為較佳可閉合之主體或容器及/或該匣體可在其裝納樣本時插入及/或插塞至所提出分析器件中。 本發明之上述態樣及特徵及本發明之將從申請專利範圍及以下描述明白之態樣及特徵原則上可彼此獨立地實施,但亦以任何組合或順序實施。
圖1係較佳憑藉裝置或匣體100或在裝置或匣體100中檢測特定而言生物樣本P之所提出分析系統1及分析器件200之高度示意圖。 圖2係用於檢測樣本P之所提出裝置或匣體100之一較佳實施例之示意圖。裝置或匣體100特定而言形成手持單元,且在下文中僅稱為匣體。 術語「樣本」較佳地理解為意謂待檢測樣本材料,其特定而言從人類或動物獲取。特定而言,在本發明之含義內,樣本係較佳地來自人類或動物之流體,諸如唾液、血液、尿液或另一液體,或其組分。在本發明之含義內,樣本必要時可經預處理或製備,或可能直接來自人類或動物或類似者,舉例而言。食物樣本、環境樣本或另一樣本亦可視情況檢測,特定而言用於環境分析、食物安全及/或用於偵測其他物質,較佳地天然物質,但亦生物或化學戰劑、毒物或類似者。 較佳地,分析系統1或分析器件200控制特定而言匣體100中或上之樣本P之檢測及/或用於評估檢測或來自檢測之量測值之收集、處理及/或儲存。 憑藉所提出分析系統1或分析器件200或憑藉匣體100及/或使用用於檢測樣本P之所提出方法,可測定、識別或偵測較佳地樣本P之一分析物A (特定而言核酸產物,諸如某一核酸序列)或特別較佳地樣本P之複數個分析物A。該等分析物特定而言不但定性地偵測及/或量測,而且特別較佳地亦定量地偵測及/或量測。 因此,樣本P可特定而言經檢測用於定性或定量地測定至少一個分析物A,舉例而言以便可偵測疾病及/或病原體或可測定對於診斷而言重要之其他值,舉例而言。 特別較佳地,分子生物學檢測憑藉分析系統1及/或分析器件200及/或憑藉匣體100而變得可行。 特別較佳地,分子及/或PCR分析(特定而言用於偵測DNA及/或RNA (即,核酸產物及/或序列))變得可行及/或實行。 較佳地,樣本P或樣本P之個別組分或分析物A必要時可特定而言憑藉PCR擴增,且在分析系統1、分析器件200中及/或在匣體100中檢測、識別或偵測。較佳地,因此產生一或若干分析物A之擴增產物V。 樣本P之分析物A及/或擴增產物V (特定而言核酸產物,其等特定而言憑藉PCR擴增)特定而言具有至少20或50,特別較佳地80或100,及/或至多300或280,特別較佳地250或220個核苷酸長度。然而,亦可提出特定而言憑藉PCR產生較短或較長擴增產物V。 在下文中,首先關於匣體100之一較佳構造給出進一步細節,其中匣體100之特徵較佳亦直接表示分析系統1之特徵,特定而言甚至無任何進一步明確說明。 匣體100較佳係至少大致平坦、平面及/或板形及/或卡狀。 匣體100較佳包括特定而言至少大致平面、平坦、板形及/或卡狀主體101,該主體101特定而言由塑膠材料(特別較佳地聚丙烯)製成及/或自塑膠材料(特別較佳地聚丙烯)射出成型。 匣體100較佳包括用於至少部分(特定而言在前端100A上)覆蓋主體101及/或形成在其中之腔體及/或通道及/或用於形成閥或類似者之至少一個膜或罩蓋102,如藉由圖2中之虛線展示。 分析系統1或匣體100或其主體101特定而言連同罩蓋102較佳形成及/或包括流體系統103,其在下文中被稱為流體系統103。 匣體100及/或其流體系統103在操作位置中及/或在檢測期間、特定而言在分析器件200中較佳地至少大致垂直定向,如圖1中示意性地展示。特定而言,匣體100之主平面或表面延伸部因此在操作位置中至少大致垂直地延伸。 匣體100及/或流體系統103較佳包括複數個腔體,特定而言至少一個接納腔體104、至少一個計量腔體105、至少一個中間腔體106、至少一個混合腔體107、至少一個儲存腔體108、至少一個反應腔體109、至少一個中間溫度控制腔體110及/或至少一個收集腔體111,如圖1中展示。 匣體100及/或流體系統103亦較佳包括至少一個泵裝置112及/或至少一個感測器裝置113。 一些、大多數或全部腔體較佳由匣體100及/或主體101中之腔室及/或通道或其他凹部形成,且特別較佳地由膜或罩蓋102覆蓋或閉合。然而,其他結構解決方案亦可行。 在展示之實例中,匣體100或流體系統103較佳包括兩個計量腔體105A及105B、複數個中間腔體106A至106G、複數個儲存腔體108A至108E及/或複數個反應腔體109,其等較佳可彼此獨立地裝載,特定而言第一反應腔體109A、第二反應腔體109B及可選第三反應腔體109C,如圖2中可見。 (若干)反應腔體109特定而言用於實行一擴增反應(特定而言PCR)或數個(較佳地不同)擴增反應(特定而言PCR)。較佳地並行及/或獨立及/或在不同反應腔體109中實行數個(較佳地不同) PCR,即,具有不同引物組合或引物對之PCR。 樣本P之在一或多個反應腔體109中形成之擴增產物V及/或其他部分可特定而言憑藉泵裝置112引導或饋送至連接感測器裝置113。 感測器裝置113係特定而言用於偵測、特別較佳地定性及/或定量地測定樣本P之一或若干分析物A,在此情況中特別較佳地分析物A之擴增產物V。然而,替代地或額外地,亦可收集或測定其他值。 特定而言,泵裝置112特定而言憑藉膜或罩蓋102特別較佳地在匣體之背部包括或形成一管狀或珠狀凸起部分,如圖1中示意性地展示。 匣體100、主體101及/或流體系統103較佳包括複數個通道114及/或閥115,如圖2中展示。 憑藉通道114及/或閥115,腔體104至111、泵裝置112及/或感測器裝置113可根據需要及/或視情況或選擇性地彼此暫時及/或永久連接及/或分離,特定而言使得其等由分析系統1或分析器件200控制。 腔體104至111較佳地各自藉由複數個通道114流體連結。特別較佳地,各腔體藉由至少兩個關聯通道114連結或連接,以便使流體可根據需要填充、流過各自腔體及/或從各自腔體汲取。 流體輸送或流體系統103較佳不基於毛細力,或不排外地基於該等力,而特定而言基本上基於產生之重力及/或泵抽力及/或壓縮力及/或吸力之作用,其等特別較佳地由泵或泵裝置112產生。在此情況中,流體之流量或流體輸送及計量係藉由相應地敞開及閉合閥115及/或藉由相應地特定而言憑藉分析器件200之泵驅動器202操作泵或泵裝置112加以控制。 較佳地,腔體104至110之各者在操作位置中具有位於頂部之進口及位於底部之出口。因此,若需要,則僅來自各自腔體之液體可經由出口移除。 特定而言,裝納液體之腔體(特別較佳地(若干)儲存腔體108、混合腔體107及/或接納腔體104)各自經定尺寸使得在該等腔體用液體填充時,可能潛在形成之氣體或空氣之氣泡在操作位置中向上升起,使得液體收集在出口上方而無氣泡。然而,其他解決方案在此處亦可行。 較佳地,至少一個閥115經指派於各腔體、泵裝置112及/或感測器裝置113及/或經配置在各自進口之上游及/或各自出口之下游。 較佳地,腔體104至111或腔體序列104至111(舉例而言,流體串聯或連續流過其等)可選擇性地釋放及/或流體可藉由致動指派閥115而選擇性地流過其等,及/或該等腔體可流體連接至流體系統103及/或連接至其他腔體。 特定而言,閥115係藉由主體101及膜或罩蓋102形成及/或以另一方式(舉例而言藉由額外層、凹部或類似者)形成。 特別較佳地,提供一或多個閥115A,其等較佳地最初或在儲存時緊密閉合,特別較佳地以便以儲存穩定方式從敞開接納腔體104密封定位在儲存腔體108之液體或液體試劑F及/或流體系統103。 較佳地,最初閉合閥115A經配置在各儲存腔體108之上游及下游。該等閥較佳僅在匣體100實際上使用時及/或在將匣體100插入至分析器件200中時敞開(地特定而言自動敞開)。 當除進口104B及出口104C以外亦提供可選中間連接件104D時,複數個閥115A (在此情況中特定而言三個閥)較佳地指派於接納腔體104,舉例而言以便可視情況排出或移除樣本P之上清液,諸如血清或類似者。取決於使用,除進口104B上之閥115A以外,接著較佳地僅敞開出口104C處或中間連接件104D處之閥115A。 指派於接納腔體104之閥115A特定而言流體地及/或以氣密方式密封流體系統103及/或匣體100,直至插入樣本P且閉合接納腔體104或該接納腔體104之連接件104A。 作為閥115A (其等最初閉合)之替代品或除閥115A以外,較佳提供一或多個閥115B,其等未以儲存穩定方式閉合及/或其等最初敞開及/或其等可藉由致動閉合。此等閥特定而言用於在檢測期間控制流體之流量。 匣體100較佳地經設計為微流體卡及/或流體系統103較佳地經設計為微流體系統。在本發明中,術語「微流體」較佳地理解為意謂個別腔體、一些腔體或全部腔體104至111及/或通道114之各自體積分別或累積地小於5 ml或2 ml,特別較佳地小於1 ml或800 μl,特定而言小於600 μl或300 μl,更特別較佳地小於200 μl或100 μl。 特別較佳地,可將具有最大體積5 ml、2 ml或1 ml之樣本P引入至匣體100及/或流體系統103、特定而言接納腔體104中。 需要較佳地在檢測之前以如液體或液體試劑F之液體形式及/或以如乾燥試劑S之乾燥形式引入或提供之試劑及液體用於檢測樣本P,如根據圖2之示意圖中展示。 此外,其他液體F (特定而言呈洗滌緩衝液、乾燥試劑S之溶劑或受質SU之形式,舉例而言以便形成偵測分子及/或氧化還原系統)亦較佳地需要用於檢測、偵測程序及/或用於其他目的且特定而言提供在匣體100中,即,同樣在使用之前、特定而言在遞送之前引入。在下文中之某些時刻,液體試劑與其他液體之間不作區分,且因此各自說明相應地亦相互適用。 分析系統1或匣體100較佳裝納實行一或多個擴增反應或PCR及/或實行檢測所必需之全部試劑及液體,且因此特別較佳地,僅需接納視情況預處理之樣本P。 匣體100及/或流體系統103較佳包括旁路114A,其可視情況使用,以便必要時可將樣本P或其組分引導或輸送通過反應腔體109且藉由使可選中間溫度控制腔體110旁通,亦將樣本P或其組分直接引導或輸送至感測器裝置113,及/或以便可在旁路114A敞開時,更明確而言在旁路114A之閥115B敞開時,特定而言在與分析物A及/或擴增產物V相反之方向上將液體或液體試劑F2至F5輸送或泵抽離開儲存腔體108B至108E至感測器裝置113中。 匣體100或流體系統103或通道114較佳包括感測器部分116或用於偵測液體前端及/或流體之流量之其他裝置。 應注意,各種組件(諸如通道114、閥115 (特定而言最初閉合之閥115A及最初敞開之閥115B)及圖2中之感測器部分116)為了清楚起見僅在一些情況中標註,但相同符號在圖2中用於此等組件之各者。 收集腔體111較佳地用於接納過量的或使用的試劑及液體及樣本之體積。其較佳地給定適當大尺寸及/或僅提供有輸入端或進口,特定而言使得液體無法在操作位置中再次移除或泵出。 接納腔體104較佳包括用於引入樣本P之連接件104A。在將樣本P引入至接納腔體104中之後,閉合該腔體及/或連接件104A。 接著,匣體100可插入至所提出分析器件200中及/或藉此接納,如圖1中展示,以便檢測樣本P。替代地,亦可隨後饋入樣本P。 圖1展示處於即用型狀態以對接納於匣體100中之樣本P實行檢測之分析系統1。在此狀態下,匣體100因此連結至分析器件200、由分析器件200接納及/或插入至分析器件200中。 在下文中,首先更詳細地說明分析器件200之一些特徵及態樣。關於該器件之特徵及態樣較佳地亦係所提出分析系統1之直屬特徵及態樣,特定而言甚至無任何進一步明確說明。 分析系統1或分析器件200較佳包括用於安裝及/或接納匣體100之安裝座或容槽201。 較佳地,匣體100與分析器件200流體地(特定而言液壓地)分離或隔離。特定而言,匣體100形成用於樣本P及試劑及其他液體之較佳獨立且特定而言閉合的流體及/或液壓系統103。 較佳地,分析器件200經設計以特定而言憑藉感測器裝置113及/或感測器部分116而致動泵裝置112及/或閥115,以具有熱效應及/或偵測量測資料。 分析系統1或分析器件200較佳包括泵驅動器202,該泵驅動器202特定而言經設計用於機械致動泵裝置112。 較佳地,泵驅動器202之一頭可經旋轉以便旋轉地軸向按壓泵裝置112之較佳珠狀凸起部分。特別較佳地,泵驅動器202及泵裝置112一起特定而言以軟管泵或蠕動泵及/或計量泵之方式形成用於流體系統103及/或匣體100之泵。 特別較佳地,該泵係如DE 10 2011 015 184 B4中描述般構造。然而,其他結構解決方案亦可行。 較佳地,泵之容量及/或排放速率可經控制及/或泵及/或泵驅動器202之輸送方向可經切換。較佳地,流體可因此根據需要向前或向後泵抽。 分析系統1或分析器件200較佳包括用於特定而言電及/或熱連接匣體100及/或感測器裝置113之連接裝置203。 如圖1中展示,連接裝置203較佳包括複數個電接觸元件203A,匣體100 (特定而言感測器裝置113)較佳藉由接觸元件203A電連接或可連接至分析器件200。 分析系統1或分析器件200較佳包括用於對匣體100進行溫度控制及/或對匣體100具有熱效應(特定而言用於加熱及/或冷卻)之一或多個溫度控制裝置204,特定而言加熱元件或珀爾帖元件。 個別溫度控制裝置204、一些此等裝置或全部此等裝置可較佳地經定位抵靠匣體100、主體101、罩蓋102、感測器裝置113及/或個別腔體及/或可熱耦合至其等及/或可整合在其中及/或特定而言可藉由分析器件200電操作或控制。在展示之實例中,特定而言提供溫度控制裝置204A、204B及/或204C。 較佳地,將在下文中稱為反應溫度控制裝置204A之溫度控制裝置204A指派於反應腔體109或複數個反應腔體109,特定而言以便可在其中實行一或多個擴增反應及/或PCR。 反應腔體109特定而言憑藉一個共同反應溫度控制裝置204A或兩個反應溫度控制裝置204A而較佳地同時及/或均勻地加以溫度控制。 更特別較佳地,(若干)反應腔體109可從兩個不同側及/或憑藉較佳地配置在相對側上之兩個反應溫度控制裝置204A加以溫度控制。 替代地,對於反應腔體109而言,各反應腔體109可獨立及/或個別加以溫度控制。 下文中稱為中間溫度控制裝置204B之溫度控制裝置204B較佳地指派於中間溫度控制腔體110及/或經設計以將中間溫度控制腔體110或定位在其中之流體(特定而言擴增產物V)較佳地溫度控制至預熱溫度TV。 中間溫度控制腔體110及/或溫度控制裝置204B較佳配置在感測器裝置113之上游或(緊接)在感測器裝置113之前,特定而言以便可以所要方式對待饋送至感測器裝置113之流體(特定而言分析物A及/或擴增產物V)進行溫度控制或預加熱,特別較佳地緊接在饋送該等流體之前。 特別較佳地,中間溫度控制腔體110及/或溫度控制裝置204B經設計或意欲使樣本P或分析物A及/或產生之擴增產物V變性,及/或將任何雙股分析物A或擴增產物V分成單股及/或特定而言藉由加熱抵消擴增產物V之過早鍵結及/或雜交。 中間溫度控制腔體110較佳係長形及/或經設計為特定而言在剖面上蜿蜒或曲折及/或平坦之通道。有利地,因此獲取足夠長的流體保留時間及/或與中間溫度控制腔體110中之流體之足夠大的熱耦合以便舉例而言在不改變流速之情況下或亦在流體流過該腔體時達成所要溫度控制。然而,其他解決方案在此處亦可行,特定而言其中中間溫度控制腔體110中之流體流動停止之解決方案。 較佳地,中間溫度控制腔體110之長度係至少10 mm或15mm,特別較佳地至少20 mm或25 mm,特定而言30 mm或40 mm,及/或至多80 mm或75 mm,特別較佳地至多70 mm或65 mm,特定而言至多60 mm。 較佳地,中間溫度控制腔體110具有至少10 μl或20 μl、特別較佳地至少25 μl或30 μl,及/或至多500 μl或400 μl、特別較佳地至多350 μl或300 μl之體積。 中間溫度控制腔體110包括進口110A及出口110B、閥115,特定而言最初敞開閥115A,其較佳地指派於進口110A及/或出口110B (之各者),如圖1中展示。以此方式,可控制流體流過中間溫度控制腔體110。舉例而言,因此,可在流過中間溫度控制腔體110之流體正流過時對該流體進行溫度控制及/或最初用待溫度控制之流體填充中間溫度控制腔體110且閉合輸入側及/或輸出側閥115A以便出於溫度控制之目的而停止中間溫度控制腔體110中之流體且僅隨後傳遞該流體。 較佳地,中間溫度控制腔體110 (流體地)配置在(若干)反應腔體109與感測器裝置113之間及/或(全部)反應腔體109(較佳地排外地)憑藉中間溫度控制腔體110而流體連接或可流體連接至感測器裝置113。 較佳地,中間溫度控制腔體110經配置在更接近感測器裝置113而非靠近(若干)反應腔體109。特定而言,中間溫度控制腔體110 (特定而言其出口110B)與感測器裝置113之間之距離或流動路徑比中間溫度控制腔體110 (特定而言其進口110A)與(若干)反應腔體109之間之距離或流動路徑更短。 中間溫度控制腔體110較佳地經設計為對流體(特定而言擴增產物V)進行主動溫度控制(特別較佳地加熱)較佳至熔解點或熔解溫度,如下文中更詳細地說明。 指派於中間溫度控制腔體110之中間溫度控制裝置204B較佳經設計以對中間溫度控制腔體110進行(主動)溫度控制(特定而言加熱)。 較佳地,中間溫度控制裝置204B包括加熱元件(特定而言加熱電阻器或珀爾帖元件),或藉此形成。 中間溫度控制裝置204B較佳係平坦及/或具有較佳地係長形及/或矩形的接觸表面,從而允許中間溫度控制裝置204B與中間溫度控制腔體110之間之熱傳遞。 較佳地,中間溫度控制裝置204B可在中間溫度控制腔體110之區域中或在中間溫度控制腔體110上(較佳地在其整個表面上方)在外部定位抵靠(特定而言擠壓抵靠)匣體100、主體101及/或罩蓋102。 特定而言,分析器件200包括中間溫度控制裝置204B。然而,其他結構解決方案亦可行,其中中間溫度控制裝置204B經配置在匣體100中或整合在匣體100中,特定而言在中間溫度控制腔體110中。 較佳地,分析系統1、分析器件200及/或匣體100及/或一個或各溫度控制裝置204包括溫度偵測器及/或溫度感測器(未展示),特定而言以便使控制及/或回饋控制溫度成為可能。 一或多個溫度感測器可舉例而言指派於感測器部分116及/或指派於個別通道部分或腔體,即,可熱耦合至其等。 特別較佳地,溫度感測器係指派於各溫度控制裝置204A、204B及/或204C,舉例而言以便量測各自溫度控制裝置204及/或其接觸表面之溫度。 在下文中稱為感測器溫度控制裝置204C之溫度控制裝置204C特定而言係指派於感測器裝置113及/或經設計為依所要方式對定位在感測器裝置113中或上之流體(特定而言分析物A及/或擴增產物V、試劑或類似者)進行溫度控制至較佳雜交溫度TH。 感測器溫度控制裝置204C較佳包括加熱元件(特定而言加熱電阻器或珀爾帖元件),或藉此形成。 感測器溫度控制裝置204C較佳係平坦及/或具有較佳係矩形及/或對應於感測器裝置113之尺寸之接觸表面,該接觸表面允許感測器溫度控制裝置204C與感測器裝置113之間之熱傳遞。 較佳地,分析器件200包括感測器溫度控制裝置204C。然而,其他結構解決方案亦可行,其中感測器溫度控制裝置204C經整合在匣體100中,特定而言在感測器裝置113中。 特別較佳地,連接裝置203包括感測器溫度控制裝置204C,及/或連接裝置203連同感測器溫度控制裝置204C可連結至(特定而言擠壓抵靠)匣體100,特定而言感測器裝置113。 更特別較佳地,連接裝置203及感測器溫度控制裝置204C (一起)可朝向及/或相對於匣體100 (特定而言感測器裝置113)移動,及/或可經定位抵靠該匣體,較佳地以便使分析器件200電及熱耦合至匣體100,特定而言感測器裝置113或其支撐件113D。 較佳地,感測器溫度控制裝置204C經配置在連接裝置203或其支撐件上之中心及/或配置在接觸元件203A之間。 特定而言,接觸元件203A經配置在連接裝置203或其支撐件之邊緣區域中或配置在感測器溫度控制裝置204C周圍,較佳地使得連接裝置203熱連接或可熱連接至感測器裝置113的中心且電連接或可電連接至感測器裝置113的外部或邊緣區域。然而,其他解決方案在此處亦可行。 分析系統1或分析器件200較佳包括用於致動閥115之一或多個致動器205。特別較佳地,提供不同(類型或群組之)致動器205A及205B,其等分別指派於不同(類型或群組之)閥115A及115B以致動該等閥之各者。 分析系統1或分析器件200較佳包括一或多個感測器206。特定而言,感測器206A經設計或意欲偵測流體系統103中之液體前端及/或流體之流量。特別較佳地,感測器206A經設計以(舉例而言光學及/或電容地)量測或偵測液體前端及/或通道及/或腔體中(特定而言在分別指派感測器部分116(其特定而言由流體系統103之平坦及/或拓寬通道部分形成)中)之流體之存在、速度、質量流率/體積流率、溫度及/或另一值。 特別較佳地,感測器部分116各自定向及/或併入流體系統103中及/或流體流動經過或通過感測器部分116使得在匣體100之操作位置中,流體在垂直方向上及/或從底部至頂部流過感測器部分116,以便使可靠地偵測液體成為可能或更容易。 替代地或額外地,分析器件200較佳包括用於偵測環境溫度、內部溫度、空氣濕度、位置及/或對準(舉例而言憑藉GPS感測器)及/或分析器件200及/或匣體100之定向及/或傾斜之(其他或額外)感測器206B。 分析系統1或分析器件200較佳包括控制裝置207,特定而言包括用於控制檢測之順序及/或用於收集、評估及/或輸出或提供特定而言來自感測器裝置113,及/或來自檢測結果及/或其他資料或值之量測值之一內部時脈或時基。 控制裝置207較佳控制或回饋控制泵驅動器202、溫度控制裝置204及/或致動器205,特定而言考量或取決於所要檢測及/或來自感測器裝置113及/或感測器206之量測值。 通常,應注意,匣體100、流體系統103及/或流體之輸送較佳不基於毛細力操作,而至少基本上或主要在重力之作用及/或泵或泵裝置112之作用下操作。 在操作位置中,來自各自腔體之液體較佳經由在各情況中處於底部之出口移除(特定而言汲取出),氣體或空氣可經由特定而言處於頂部之進口流動及/或泵抽至各自腔體中。特定而言,因此,在輸送液體時可防止或至少最小化腔體中之相關真空。 流體之流量係特定而言藉由相應地啟動泵或泵裝置112且致動閥115加以控制。 特別較佳地,泵驅動器202包括步進馬達或以另一方式校準之驅動器,使得可至少原則上憑藉適當啟動達成所要計量。 額外地或替代地,感測器206A較佳用於特定而言與指派之感測器部分116合作偵測液體前端或流體之流量,以便藉由相應地控制泵或泵裝置112且相應地啟動閥115而達成所要流體順序及所要計量。 視情況,分析系統1或分析器件200包括輸入裝置208 (諸如鍵盤、觸控螢幕或類似者)及/或顯示裝置209 (諸如螢幕)。 分析系統1或分析器件200較佳包括舉例而言用於控制、用於傳遞及/或用於輸出量測資料或檢測結果及/或用於連結至其他器件(諸如印表機、外部電力供應器或類似者)之至少一個介面210。此特定而言可為有線或無線介面210。 分析系統1或分析器件200較佳包括電力供應器211,較佳為電池或累積器,其特定而言係整合的及/或外部連接的或可連接的。 較佳地,整合累積器經提供作為電力供應器211且藉由外部充電器件(未展示)經由連接件211A (重新)充電及/或可互換。 分析系統1或分析器件200較佳包括外殼212,全部組件及/或一些或全部裝置較佳整合在外殼212中。特別較佳地,匣體100可經插入或滑入至外殼212中,及/或可由分析器件200透過可特定而言閉合之開口213 (諸如狹槽或類似者)接納。 分析系統1或分析器件200較佳係攜帶型或行動型。特別較佳地,分析器件200重量少於25 kg或20 kg,特別較佳地少於15 kg或10 kg,特定而言少於9 kg或6 kg。 在下文中,參考圖3至圖6關於感測器裝置113之一較佳構造給出進一步細節。 感測器裝置113較佳允許電化學量測及/或氧化還原循環。 特定而言,感測器裝置113經設計以識別、偵測及/或測定鍵結至捕獲分子M之(相同或不同)分析物A或自其衍生之產物,特定而言分析物A或不同分析物A之擴增產物V。 感測器裝置113較佳包括含有複數個感測器區域或感測器場113B之感測器陣列113A,如圖3中示意性地展示,圖3示意性地展示感測器裝置113及/或感測器陣列113A之量測側。圖4係來自圖3之放大細節。圖5展示連接側且圖6係感測器裝置113之示意性截面。 較佳地,感測器裝置113或感測器陣列113A包括10個或20個以上,特別較佳地50個或80個以上,特定而言100個或120個以上及/或1000個或800個以下感測器場113B。 較佳地,感測器裝置113或感測器陣列113A包括複數個電極113C。至少兩個電極113C較佳地配置在各感測器區域或感測器場113B中。特定而言,各情況中之至少兩個電極113C形成感測器場113B。 電極113C較佳由金屬製成,特定而言由貴金屬(諸如鉑或金)製成,及/或該等電極特定而言用硫醇塗覆。 較佳地,電極113C係指狀及/或彼此接合,如從根據圖4之感測器場113B之放大細節可見。然而,其他結構解決方案或配置亦可行。 感測器裝置113較佳包括支撐件113D,特定而言晶片,電極113C較佳配置在支撐件113D上及/或整合在支撐件113D中。 量測側包括電極113C及/或係面向流體、樣本P、擴增產物V及/或感測器隔間之側,及/或係感測器裝置113及/或支撐件113D之包括捕獲分子M (如圖6中展示)之側,分析物A及/或擴增產物V鍵結至捕獲分子M。 感測器裝置113及/或支撐件113D之連接側較佳地與量測側相對及/或係面向遠離流體、樣本P及/或擴增產物V之側。 特別較佳地,感測器裝置113及/或支撐件113D之量測側及連接側各自形成特定而言平坦及/或板狀支撐件113D之一個平面側。 感測器裝置113 (特定而言支撐件113D)較佳包括複數個(在此情況中八個)電接觸點或接觸表面113E,接觸點113E較佳配置在連接側上及/或形成連接側,如圖5中展示。 較佳地,感測器裝置113可在連接側上及/或憑藉接觸點113E接觸及/或可電連接至分析器件200。特定而言,可藉由將接觸點113E電連接至接觸元件203A而在匣體100 (特定而言感測器裝置113)與分析器件200 (特定而言控制裝置207)之間建立電連接。 較佳地,接觸點113E橫向配置在邊緣區域中及/或在圍繞電極113C及/或感測器陣列113A之平面圖或投射中,及/或接觸點113E延伸直至感測器裝置113之邊緣區域,特定而言使得支撐件113D可如已說明般較佳憑藉連接裝置203或接觸元件203A在邊緣區域中及/或圍繞感測器溫度控制裝置204C橫向地電接觸,感測器溫度控制裝置204C較佳可定位在支撐件113D中心或中部。 較佳地,感測器場113B彼此分離,如來自圖6之示意圖中展示。特定而言,感測器裝置113包括介於感測器場113B之各者之間之障壁或分區,其等較佳由具有用於感測器場113B之對應凹部之特定而言疏水層113F形成。然而,其他結構解決方案亦可行。 匣體100及/或感測器裝置113包括或形成感測器隔間118。特定而言,感測器隔間118形成在感測器陣列113A、感測器裝置113及/或支撐件113D之間,或形成在一側上之量測側與另一側上之感測器罩蓋117之間。 感測器裝置113較佳憑藉其量測側及/或感測器陣列113A界定感測器隔間118。因此,電極113C在感測器隔間118中。 較佳地,匣體100及/或感測器裝置113包括感測器罩蓋117,感測器隔間118特定而言藉由感測器罩蓋117界定或定界在平面側上。 特別較佳地,感測器罩蓋117可降低至分區及/或層113F上以供實際量測。 感測器裝置113或感測器隔間118較佳藉由連接件(例如進口119及出口120)流體連結至流體系統103,特定而言連結至(若干)反應腔體109,使得(經處理)樣本P、分析物A或擴增產物V可進入感測器裝置113或感測器陣列113A之量測側。 因此,感測器隔間118可用流體裝載及/或該等流體可流過該感測器隔間118。 感測器裝置113較佳包括複數個特定而言不同捕獲分子M,不同捕獲分子M較佳配置及/或固定在(相同)感測器隔間118中及/或在不同感測器場113B中或上及/或較佳地指派於不同感測器場113B。 特別較佳地,電極113C在此情況中經由鍵B (特定而言硫醇鍵)提供有捕獲分子M,特定而言以便鍵結及/或偵測或識別適合分析物A及/或擴增產物V。 針對不同感測器場113B及/或不同電極對及/或電極113C較佳提供不同捕獲分子M1至M3,以便在感測器場113B中特異性鍵結不同分析物A及/或擴增產物V (在圖6中擴增產物V1至V3)。 特別較佳地,感測器裝置113或感測器陣列113A允許定性或定量地測定各感測器場113B中所鍵結之擴增產物V。 較佳地,感測器裝置113包括具有不同雜交溫度TH之捕獲分子M,較佳地以便在不同雜交溫度TH下將擴增產物V鍵結至對應捕獲分子M。 較佳地,具有不同雜交溫度TH之不同捕獲分子M經配置或固定在感測器裝置113之(相同)感測器隔間118中或內。此允許特定而言憑藉一個感測器裝置113或感測器隔間118或在一個感測器裝置113或感測器隔間118內非常緊湊且簡單實現及/或偵測或識別大量分析物A、擴增產物V及/或群組。 為達成不同雜交溫度TH下之雜交,可較佳憑藉分析器件200 (特定而言感測器溫度控制裝置204B及/或204C)至少間接地控制或設定感測器裝置113之溫度(特定而言電極113C、支撐件113D、感測器隔間118及/或感測器罩蓋117之溫度),如已說明。 較佳地,感測器溫度控制裝置204C係用於在此情況中藉由與連接側接觸而對感測器隔間118進行溫度控制,特定而言使得在量測側上、在感測器隔間118中及/或在流體中達到所要或所需雜交溫度TH。 較佳地,在操作狀態中,感測器溫度控制裝置204C以平坦方式及/或中心地擱置在支撐件113D上及/或以便與感測器陣列113A相對及/或至少部分擱置在一或多個接觸點113E上。此使對感測器隔間118及/或擴增產物V進行特別迅速且高效的溫度控制成為可能。 感測器裝置113 (特定而言支撐件113D)較佳包括至少一個(較佳地複數個)電子或積體電路,該等電路特定而言經設計以偵測較佳地在感測器場113B處根據氧化還原循環原理產生之電流或電壓。 特別較佳地,來自不同感測器場113B之量測信號分別藉由感測器裝置113及/或電路收集或量測。 特別較佳地,感測器裝置113及/或積體電路將量測信號直接轉換成數位信號或資料,其等特定而言可藉由分析器件200讀出。 特別較佳地,感測器裝置113及/或支撐件113D係如EP 1 636 599 B1中描述般構造。 在下文中,藉由實例更詳細地說明使用所提出分析系統1及/或分析器件200及/或所提出匣體100及/或根據所提出方法之檢測或分析之一較佳順序。 分析系統1、匣體100及/或分析器件200較佳地經設計以實行所提出方法。 在用於檢測樣本P之所提出方法期間,樣本P之至少一個分析物A特定而言憑藉PCR較佳地擴增或複製。接著,以此方式產生之擴增分析物A及/或擴增產物V鍵結及/或雜交至對應捕獲分子M。接著,特定而言憑藉電子量測偵測鍵結擴增產物V。 方法可用於特定而言醫學(特定而言獸醫醫學)領域中,以便偵測疾病及/或病原體。 在根據本發明之方法之背景內容內,具有基於來自人類或動物身體之流體或液體(特定而言血液、唾液或尿液)之至少一個分析物A之樣本P通常首先經由連接件104A引入至接納腔體104中,以便偵測疾病及/或病原體,可預處理樣本P。 一旦已接納樣本P,接納腔體104及/或其連接件104A便特定而言以液密及/或氣密方式流體閉合。 較佳地,匣體100連同樣本P接著連結或連接至分析器件200,特定而言插入或滑入至分析器件200中。 方法順序(特定而言流體之流動及輸送、混合及類似者)係藉由分析器件200或控制裝置207,特定而言藉由相應地啟動且致動泵驅動器202或泵裝置112及/或致動器205或閥115加以控制。 較佳地,樣本P或一些樣本P或樣本P之上清液係經由出口104C及/或中間連接件104D從接納腔體104移除且以計量方式饋送至混合腔體107。 較佳地,匣體100中之樣本P在引入至混合腔體107中之前特定而言在第一計量腔體105A及/或第二計量腔體105B中或憑藉該兩者進行計量。此處,特定而言上游及/或下游感測器部分116連同指派感測器206使用以便使所要計量成為可能。然而,其他解決方案亦可行。 在混合腔體107中,樣本P經製備以供進一步分析及/或與試劑混合,較佳地與來自第一儲存腔體108A之液體試劑F1及/或與一或多個乾燥試劑S1、S2及/或S3混合,該等乾燥試劑較佳地提供在混合腔體107中。 液體及/或乾燥試劑可在樣本P之前及/或之後引入至混合腔體107中。在展示之實例中,乾燥試劑S1至S3較佳地在先前引入至混合腔體107中且視情況藉由樣本P及/或液體試劑F1溶解。 液體試劑F1可特定而言係用於擴增反應或PCR之試劑,特定而言PCR主混合物。較佳地,PCR主混合物含有無核酸酶之水、用於實行PCR之酶(特定而言至少一種DNA聚合酶)、核苷三磷酸(NTP) (特定而言去氧核苷酸(dNTP))、鹽(特定而言氯化鎂)及/或反應緩衝液。 乾燥試劑S1、S2及/或S3同樣可為實行擴增反應或PCR所需之試劑,其等呈乾燥(特定而言凍乾)形式。較佳地,乾燥試劑S1、S2及/或S3特定而言選自凍乾酶(較佳地DNA聚合酶)、NTP、dNTP及/或鹽(較佳地氯化鎂)。 混合腔體107中之溶解或混合發生或特定而言藉由特定而言從底部引入及/或吹入氣體或空氣加以輔助。此特定而言藉由憑藉泵或泵裝置112相應地泵抽回路中的氣體或空氣而實行。 隨後,在混合腔體107中混合及/或預處理之所要體積之樣本P較佳地饋送至一或多個反應腔體109,特別較佳地經由上游可選中間腔體106A至106C之(各自)一者及/或添加或溶解不同試劑或引物(在此情況中乾燥試劑S4至S6)。 特別較佳地,(預混合)樣本P分成數個樣本部分(較佳地具有相等大小),及/或在中間腔體106A至106C及/或反應腔體109之間劃分,較佳地均勻及/或分成相等大小之樣本部分。 不同試劑(在目前情況中乾燥試劑S4至S6,特別較佳地引物,特定而言一或若干PCR所需之引物,特定而言在此情況中之不同引物之群組)較佳地分別添加至中間腔體106A至106C及/或不同反應腔體109中之(預混合)樣本P。 不同群組中之引物特定而言在藉由各自引物產生之擴增產物V之雜交溫度方面不同。因此,特定而言產生分析物A及/或擴增產物V之群組之不同群組溫度,如一開始已提及。 特別較佳地,在一開始已指定之意義上使用標記引物。 在展示之實施例中,試劑或引物S4至S6裝納在中間腔體106A至106C中。然而,其他解決方案亦可行,特定而言其中試劑或引物S4至S6裝納在反應腔體109中之解決方案。 根據一較佳實施例,中間腔體106A至106C各自裝納用於擴增/複製一個分析物A (較佳地兩個不同分析物A且更佳地三個不同分析物A)之引物。然而,每一反應腔體109亦可擴增/複製四個或四個以上不同分析物A。 特別較佳地,反應腔體109用指定體積之(預處理)樣本P或用各自樣本部分經由各自配置於上游之中間腔體106A至106C連續填充。舉例而言,第一反應腔體109A在第二反應腔體109B之前用指定體積之預處理樣本P填充及/或第二反應腔體109B在第三反應腔體109C之前用該指定體積之預處理樣本P填充。 在反應腔體109中,實行擴增反應或PCR以複製/擴增分析物A。此特定而言憑藉經指派(較佳地共同)反應溫度控制裝置204A及/或較佳地針對全部反應腔體109同時(即,特定而言使用相同循環及/或溫度(曲線/量變曲線))實行。 一或若干PCR係基於熟習此項技術者基本上已知之協定或溫度量變曲線而實行。特定而言,定位在反應腔體109中之混合物或樣本體積較佳循環加熱及冷卻。 較佳地,在(若干)反應腔體109中自分析物A產生核酸產物作為擴增產物V。 在預處理、反應及/或PCR或擴增期間,標籤L係直接產生(在各情況中)及/或附接至擴增產物V。此特定而言藉由使用對應(較佳地生物素化)引物而達成。然而,標籤L亦可單獨或隨後(視情況亦僅在感測器隔間118中及/或在雜交之後)產生及/或鍵結至擴增產物V。 標籤L係特定而言用於偵測鍵結擴增產物V。特定而言,可偵測標籤L或可在偵測程序中識別該標籤L,如下文中更詳細地說明。 根據本發明,複數個擴增反應或PCR可使用不同引物S4至S6及/或引物對並行及/或彼此獨立地實行,使得大量(不同)分析物A可並行複製或擴增且隨後進行分析。 特定而言,相同或不同分析物A1係在第一反應腔體109A中擴增,相同或不同分析物A2係在第二反應腔體109B中擴增且相同或不同分析物A3係在第三反應腔體109C中擴增,較佳憑藉並行運行之擴增反應,特定而言PCR。 特別較佳地,分析物A1至A3彼此不同,特定而言使得大量不同分析物A可憑藉該方法擴增及/或檢測。較佳地,2個或4個以上、特別較佳地8個或11個以上、特定而言14個或17個以上分析物A可特定而言同時檢測及/或擴增。 特定而言,分析物A之複數個群組之擴增產物V較佳並行及/或彼此獨立地及/或在反應腔體109中形成及/或產生。因此,舉例而言,分析物A1之第一群組擴增產物V1係在第一反應腔體109A中形成及/或產生,分析物A2之第二群組擴增產物V2係在第二反應腔體109B中形成及/或產生,且分析物A3之第三群組擴增產物V3係在可選第三反應腔體109C中形成及/或產生。 特別較佳地,形成(擴增)分析物A及/或擴增產物V之群組,其等在一開始提及之意義上具有不同群組溫度。因此,群組較佳地具有不同(最佳)雜交溫度TH及/或雜交溫度之範圍。 較佳地,不同群組的分析物A及/或擴增產物V (即,特定而言核酸產物及/或序列)因此經擴增及/或形成以供檢測,不同群組可特定而言在不同反應腔室109A至109C中,但替代地亦以不同方式擴增及/或形成及/或提供。 在實行PCR及/或擴增之後,對應流體體積及/或擴增產物V及/或群組特定而言經由群組特定及/或獨立中間腔體106E、106F或106G (分別)及/或經由可選(共同)中間溫度控制腔體110連續引導離開反應腔體109至感測器裝置113及/或至感測器隔間118。 中間腔體106E至106G可裝納用於製備用於雜交之擴增產物V之其他試劑(在此情況中分別為乾燥試劑S9及S10),例如,緩衝液(特定而言SSC緩衝液)及/或用於進一步調節之鹽。在此基礎上,可實行擴增產物V之進一步調節,特定而言以便改良隨後雜交(鍵結至捕獲分子M)之效率。特別較佳地,樣本P之pH在中間腔體106E至106G中及/或憑藉乾燥試劑S9及S10設定或最佳化。 較佳地,樣本P或分析物A及/或擴增產物V或藉此形成之群組係(特定而言緊接在饋送至感測器裝置113之前及/或在反應腔體109與感測器裝置113之間)特定而言憑藉中間溫度控制腔體110及/或在中間溫度控制腔體110中及/或憑藉中間溫度控制裝置204B加以主動溫度控制(特定而言提前及/或在感測器裝置113中加以溫度控制之前),較佳地預加熱。 較佳地,個別反應腔體109之群組及/或分析物A或擴增產物V經主動溫度控制(特定而言提前及/或在感測器裝置113中加以溫度控制之前)及/或連續饋送至中間溫度控制腔體110。群組係特定而言以溫度受控之方式連續饋送至感測器裝置113及/或感測器隔間118,特定而言提前及/或在感測器裝置113中加以溫度控制之前。 圖7展示樣本P之溫度T隨匣體100中或上之位置X而變化之例示性示意性曲線或量變曲線。 樣本P較佳在或以舉例而言近似20℃之環境溫度TU饋送至匣體100及/或接納腔體104。接著,在反應腔體109中實行擴增反應,製備之樣本P較佳循環加熱及冷卻(圖7中未展示)。 如已說明,較佳產生具有特定而言不同分析物A及/或擴增產物V及/或群組溫度或雜交溫度TH之複數個群組。 接著,群組及/或擴增產物V較佳饋送至所指派中間腔體106E至106G及/或饋送至隨後中間溫度控制腔體110 (較佳連續)。 較佳地,群組及/或擴增產物V在反應腔體109中按不同速率及/或連續地冷卻,及/或群組及/或擴增產物V連續及/或在不同溫度下離開反應腔體109,如圖7中示意性地展示。然而,其他方法變體亦可行,其中群組及/或擴增產物V亦係溫度受控及/或在PCR結束之後在反應腔體109中保持恆定溫度,較佳地使得群組及/或擴增產物V在相同溫度下離開反應腔體109。 較佳地,群組及/或擴增產物V在通往中間溫度控制腔體110之路上冷卻。在此程序中,群組及/或擴增產物V可在中間腔體106B至106G中藉由吸收裝納在該等腔體中之試劑S9及S10而特別顯著及/或額外地冷卻,如圖7中藉由在反應腔體109與中間溫度控制腔體110之進口110A之間及/或反應腔體106處之溫度曲線或溫度量變曲線中之跳躍展示。 較佳地,特定而言若群組及/或擴增產物V已在不同溫度下離開反應腔體109A至109C,則該等群組及/或擴增產物V在中間溫度控制腔體110之進口110A處具有不同進口溫度TE,如圖7中在進口110A處展示。然而,進口溫度TE亦可為實質上相同的。 進口110A處之進口溫度TE較佳至少大致對應於環境溫度TU或超過環境溫度TU至多10℃或5℃。然而,進口溫度TE必要時亦可較高。 較佳地,群組及/或擴增產物V在中間溫度控制腔體110中(連續)加熱至預熱溫度TV及/或熔解點或熔解溫度,較佳地(最遲)在中間溫度控制腔體110之出口110B處達到預熱溫度TV。 較佳地,預熱溫度TV比雜交溫度TH更高,且特定而言至少與各自群組及/或擴增產物V之熔解點或熔解溫度一樣高。特定而言,群組及/或擴增產物V緊接在饋送至感測器裝置113之前及/或在反應腔體109與感測器裝置113之間經加熱至預熱溫度TV,特定而言以便使群組及/或擴增產物V變性,如已說明。 如圖7中展示,全部群組及/或擴增產物V較佳地加熱至相同預熱溫度TV,舉例而言,至少95℃。 然而,其他方法變體亦可行,其中群組及/或擴增產物V係溫度受控(特定而言提前及/或在感測器裝置113中加以溫度控制之前)及/或(預)加熱至不同預熱溫度TV。特定而言,預熱溫度TV可針對各群組及/或取決於所需雜交溫度TH及/或群組溫度而變化。特定而言,第一群組之預熱溫度TV可大於第二及/或第三群組之預熱溫度TV及/或預熱溫度TV可隨群組降低。 熔解點或熔解溫度及/或預熱溫度TV較佳超過各自雜交溫度TH及/或係至少70℃或80℃及/或至多99℃或96℃,特定而言使得分析物A及/或同時產生之擴增產物V之鍵溶解,及/或使得分析物A及/或擴增產物V可在變性及/或溶解狀態下饋送至感測器裝置113。 視情況,分析物A及/或擴增產物V及/或擴增產物V之群組係溫度受控(特定而言提前及/或在感測器裝置113中加以溫度控制之前),特定而言在饋送至感測器裝置113之前(預)加熱至對應雜交溫度TH,較佳地使得其等可在饋送至感測器裝置113之後直接鍵結至對應捕獲分子M。 在一替代方法變體中,群組及/或擴增產物V較佳地僅憑藉感測器溫度控制裝置204C(排外地)在感測器裝置113中或上加以主動溫度控制(特定而言加熱),及/或達到對應雜交溫度TH。特定而言,任何雜交擴增產物V之變性及擴增產物V與對應捕獲分子M之(隨後)雜交兩者可發生在感測器裝置113中或上。在此情況中,因此可省略在感測器裝置113之前之先前(中間)溫度控制。 在較佳方法變體中,然而,樣本P及/或群組或分析物A及/或擴增產物V係(特定而言緊接在饋送至感測器裝置113之前及/或在反應腔體109與感測器裝置113之間)較佳憑藉中間溫度控制裝置204B加以主動溫度控制(特定而言提前及/或在感測器裝置113中加以溫度控制之前)及/或達到預熱溫度TV,且(在饋送至感測器裝置113之後及/或在感測器裝置113中)較佳憑藉感測器溫度控制裝置204C而隨後及/或再次加以溫度控制(特定而言在中間溫度控制腔體110中加以溫度控制之後)及/或達到對應雜交溫度TH及/或群組溫度。在此情況中,任何雜交擴增產物V因此在饋送至感測器裝置113之前及/或在感測器裝置113外部變性。 特定而言,在較佳方法變體中,樣本P及/或群組及/或擴增產物V係在離開(若干)反應腔體109之後以多個階段或更迅速地達到各自雜交溫度TH及/或群組溫度,較佳地,擴增產物V係在第一階段中特定而言在中間溫度控制腔體110中及/或提前或在感測器裝置113中加以溫度控制之前溫度控制至超過雜交溫度TH之溫度及/或至預熱溫度TV及/或在熔解點或熔解溫度下變性,且在第二階段中,特定而言在感測器裝置113中及/或在中間溫度控制腔體110中加以溫度控制之後隨後及/或再次加以溫度控制(特定而言加熱及/或冷卻)至對應雜交溫度TH及/或群組溫度。 憑藉感測器溫度控制裝置204C,感測器裝置113特定而言經預加熱使得特定而言可防止預加熱(在此情況中在中間溫度控制腔體110中預加熱)之樣本P及/或群組非所要冷卻至特定而言低於各自雜交溫度TH及/或群組溫度。 特別較佳地,感測器裝置113在各情況中至少大致預加熱至各自分析物A及/或擴增產物V之雜交溫度TH,及/或至各自群組溫度或至一稍高或稍低溫度。由於感測器裝置113之相對較大熱質量,因此在較佳地較暖樣本P及/或群組饋送至感測器裝置113及/或其感測器隔間118中時,可(迅速)達到雜交之所要及/或最佳溫度。 來自反應腔體109之擴增產物V、核酸產物及/或群組經連續引導至感測器裝置113,特定而言以便在其中進行偵測或測定。 較佳地,來自第一反應腔體109A之第一群組及/或擴增產物V1係在來自第二反應腔體109B之第二群組及/或擴增產物V2之前饋送至感測器裝置113及/或鍵結至對應捕獲分子M1,特定而言來自第二反應腔體109B之第二群組及/或擴增產物V2係在來自第三反應腔體109C之第三群組及/或擴增產物V3之前鍵結至對應捕獲分子M2。 在將樣本P及/或擴增產物V饋送至感測器裝置113之後,擴增產物V與捕獲分子M雜交。 在本發明之背景內容中,已證明使擴增產物V及/或該等擴增產物V之群組在各情況中明確選擇之雜交溫度TH及/或群組溫度下雜交係特別有利的。 特別較佳地,來自不同PCR及/或來自不同反應腔體109之樣本部分及/或擴增產物V在不同雜交溫度TH下及/或在遞減雜交溫度TH及/或群組溫度下特定而言連續鍵結至捕獲分子M。 較佳地,群組中之分析物A及/或擴增產物V各自具有類似(較佳地至少大致相同) (最佳)雜交溫度TH,其等在該溫度下鍵結至適合捕獲分子M。然而,群組中之分析物A及/或擴增產物V亦可各自具有稍微不同(最佳)雜交溫度TH,即,一系列雜交溫度,如一開始已說明。因此,此導致群組之平均及/或最佳雜交溫度TH或此群組之(最佳)雜交溫度之溫度範圍。群組之此雜交溫度TH或此溫度範圍亦簡稱為「群組溫度」。 群組及/或擴增產物V可在遞減或漸增(較佳遞減)群組溫度及/或雜交溫度TH下雜交。若使用遞減雜交溫度TH,則可防止已鍵結之擴增產物V因隨後溫度升高而再次從捕獲分子M卸離。 特別較佳地,第一群組、擴增產物V1及/或分析物A1之群組溫度及/或雜交溫度TH1係大於第二群組、擴增產物V2及/或分析物A2之群組溫度及/或雜交溫度TH2,且此溫度繼而大於第三群組、擴增產物V3及/或分析物A3之第三群組溫度及/或雜交溫度TH3。 「雜交溫度」理解為意謂特定而言平均各自群組中之大多數分析物A及/或擴增產物V鍵結至適合捕獲分子M之溫度。 不同群組之群組溫度及/或雜交溫度TH較佳地相差約1℃或以上,較佳地3℃以上,特定而言4℃以上,更佳地達近似5℃或以上。 較佳地,群組溫度及/或雜交溫度TH係至少40℃或45℃及/或至多75℃或70℃。 較佳地,第一群組及/或擴增產物V1之第一群組溫度及/或雜交溫度TH1係至少55°C或58°C,特別較佳地至少60°C或62°C,及/或至多80°C或78°C,特別較佳地至多75°C或72°C。 較佳地,第二群組及/或擴增產物V2之第二群組溫度及/或雜交溫度TH2係至少40°C或45°C,特別較佳地至少48°C或52°C,及/或至多70°C或65°C,特別較佳地至多60°C或58°C。 較佳地,第三群組及/或擴增產物V3之第三群組溫度及/或雜交溫度TH3係至少35°C或40°C,特別較佳地至少42°C或45°C,及/或至多65°C或62°C,特別較佳地至多60°C或55°C。 在第一群組溫度及/或雜交溫度TH1 (舉例而言近似60℃)下,第一群組特別好地鍵結至對應或適合捕獲分子M1。在第二群組溫度及/或雜交溫度TH2 (舉例而言近似55°C)下,第二群組特別好地鍵結至對應或適合捕獲分子M2。在第三群組溫度及/或雜交溫度TH3 (舉例而言近似50°C)下,第三群組特別好地鍵結至對應或適合捕獲分子M3。 如圖7中展示,群組及/或擴增產物V在從中間溫度控制腔體110至感測器裝置113之路上冷卻。取決於提前及/或在中間溫度控制腔體110中之溫度控制、預熱溫度TV及/或在流體進入感測器裝置113時盛行之溫度,及/或取決於群組溫度及/或最佳雜交溫度TH,因此可能需要憑藉感測器溫度控制裝置204C將個別或全部群組及/或擴增產物V或感測器裝置113溫度控制至不同程度。 舉例而言,相較於來自第二反應腔體109B之第二群組及/或擴增產物V2及/或來自第三反應腔體109C之第三群組及/或擴增產物V3,來自第一反應腔體109A之第一群組及/或擴增產物V1經溫度控制(特定而言加熱)至更大程度或冷卻至更小程度。 特定而言,針對各群組及/或不同擴增產物V調適感測器裝置113之溫度控制(特定而言支撐件113D之溫度控制)以便達到各自群組溫度及/或雜交溫度TH。舉例而言,感測器裝置113或支撐件113D可較佳地憑藉珀爾帖元件或感測器溫度控制裝置204C而加熱(或冷卻)至不同群組之不同溫度。此加熱(或冷卻)可藉由簡單控制或回饋控制實現。 在展示之實例中,第一群組之雜交溫度TH1係超過第一群組之在其進入感測器裝置113時之溫度,較佳地使得來自第一反應腔體109A之第一群組及/或擴增產物V1必須經加熱以供雜交,舉例而言高2℃或5℃以上。 然而,雜交溫度TH亦可對應於進口溫度TE或進入感測器裝置113時之溫度。在此情況中,各自群組及/或擴增產物V在感測器裝置113中或上保持一恆定溫度以供雜交。特定而言,群組及/或擴增產物V可能已在對應雜交溫度TH下饋送至感測器裝置113,如圖7中針對來自第二反應腔體109B之第二群組及/或擴增產物V2展示。 此外,進口溫度TE或進入感測器裝置113時之溫度可能大於各自群組及/或擴增產物V之雜交溫度TH。在此情況中,各自群組及/或擴增產物V在感測器裝置113中或上經冷卻或(略微)溫度控制以供雜交,使得溫度特定而言按一指定速度降低至所需雜交溫度TH,如圖7中針對來自第三反應腔體109C之第三群組及/或擴增產物V3展示。 根據本發明,可提出:雜交溫度TH分級(舉例而言以攝氏幾度之增量及/或以5℃增量)改變,且雜交溫度TH在群組或至少一個分析物A及/或擴增產物V之雜交期間連續及/或逐漸地改變(特定而言降低)。 在另一方法變體中,可提出:各自群組及/或各自群組中之擴增產物V係不同地溫度受控,及/或溫度在感測器裝置113中或上變化以供群組之一者中之擴增產物V之雜交,較佳地以便在各自不同雜交溫度TH下使各自群組中之不同擴增產物V鍵結至對應捕獲分子M。 一旦樣本P、群組、分析物A及/或擴增產物V已雜交及/或鍵結至捕獲分子M,便特定而言憑藉較佳提供之標籤L或以另一方式進行偵測。 在下文中,更詳細地描述偵測之一特別較佳變體(明確而言電化學偵測),但亦可實行其他類型之偵測,舉例而言光學偵測、電容偵測或類似者。 在各自鍵結/雜交之後,較佳地發生可選洗滌程序及/或視情況饋入特定而言來自儲存腔體108B至108E之額外試劑或液體。 特定而言,可提出:移除樣本殘留物及/或未鍵結擴增產物V、試劑及/或PCR之殘留物及可能破壞方法順序之剩餘部分之其他物質。 洗滌或沖洗可特定而言使用流體及/或試劑F3(特定而言洗滌緩衝液,特別較佳地檸檬酸緩衝液或SSC緩衝液,其較佳地裝納在儲存腔體108C中)進行。未鍵結分析物A及/或擴增產物V及可能破壞隨後偵測之物質較佳地從感測器裝置113移除及/或藉由洗滌緩衝液饋送至收集腔體111。 隨後及/或在洗滌程序之後,根據方法之一較佳變體,進行鍵結至捕獲分子M之擴增產物V之偵測。 為偵測鍵結至捕獲分子M之擴增產物V,將試劑F4及/或偵測器分子D (特定而言鹼性磷酸酶/鏈霉親和素)較佳地從儲存腔體108D饋送至感測器裝置113。 試劑F4及/或偵測器分子D可鍵結至鍵結擴增產物V,特定而言可鍵結至鍵結擴增產物V之標籤L,特別較佳地可鍵結至生物素標記,如圖6中展示。 在偵測之背景內容中,亦可提出:將額外液體試劑F3及/或F5從儲存腔體108C及/或108E饋送至感測器裝置113。 視情況,隨後或在試劑F4及/或偵測器分子D已鍵結至擴增產物V及/或標籤L之後,較佳憑藉流體及/或試劑F3及/或洗滌緩衝液進行(額外)洗滌程序及/或沖洗,特定而言以便從感測器裝置113移除未鍵結試劑F4及/或偵測器分子D。 較佳地,將特定而言來自儲存腔體106D之用於偵測之試劑S7及/或S8及/或受質SU最後較佳連同流體或試劑F2 (特定而言緩衝液) (其適於受質SU,特別較佳地用於溶解試劑S7及/或S8及/或受質SU)饋送至感測器裝置113,流體或試劑F2係特定而言從儲存腔體106B獲取。特定而言,試劑S7及/或S8可形成或可包括受質SU。 在添加受質SU之後,感測器罩蓋117較佳降低以便使感測器場113B彼此隔離及/或最小化其間之物質之交換。 較佳地,使用對胺基苯基磷酸酯(pAPP)作為受質SU。 受質SU較佳地對及/或與鍵結擴增產物V及/或偵測器分子D反應及/或允許此等進行電化學量測。 較佳地,受質SU藉由鍵結偵測器分子D (特定而言鍵結偵測器分子D之鹼性磷酸酶)較佳地分成第一物質SA (諸如對胺基苯酚,其特定而言係電化學活性及/或氧化還原活性)及第二物質SP (諸如磷酸鹽)。 較佳地,第一或電化學活性物質SA係在感測器裝置113中或在個別感測器場113B中藉由電化學量測及/或氧化還原循環偵測。 特別較佳地,憑藉第一物質SA,明確而言在電極113C處發生氧化還原反應,第一物質SA較佳地將電子放電至電極113C或從電極113C接收電子。 特定而言,藉由相關聯氧化還原反應偵測各自感測器場113B中之第一物質SA之存在及/或各自數量。以此方式,可定性且特定而言亦定量地測定分析物A及/或擴增產物V是否鍵結至各自感測器場113B中之捕獲分子M及分析物A及/或擴增產物V之數量。此相應地給出關於哪些分析物A存在於樣本P中之資訊,且特定而言亦給出關於該等分析物A之數量之資訊。 特定而言,憑藉與第一物質SA之氧化還原反應,在指派電極113C處產生電流信號或電力信號,該電流信號或電力信號較佳係憑藉指派電子電路偵測。 取決於以此方式產生之來自電極113C之電流信號或電力信號,測定是否已發生與捕獲分子M之雜交及/或發生之位置。 量測較佳地僅發生一次及/或針對整個感測器陣列113A及/或針對全部感測器場113B特定而言同時或並行進行。特定而言,來自全部群組及/或反應腔體109之鍵結群組及/或擴增產物V係在單一或共同偵測程序中同時或並行地加以偵測、識別或測定。 換而言,在不同及/或明確選擇之雜交溫度TH下鍵結之來自個別反應腔體109之擴增產物V一起及/或並行偵測,使得快速量測可行,且仍亦基於在各情況中以標定方式設定之雜交溫度TH而達成關於分析物A及/或擴增產物V與捕獲分子M之雜交之高特異性。 然而,原則上,亦可在感測器裝置113中或在複數個感測器裝置113中連續或獨立地量測複數個樣本部分。 檢測結果或量測結果較佳憑藉電連接裝置203而特定而言電傳輸至分析器件200或其控制裝置207,且相應地特定而言藉由顯示裝置209及/或介面210製備、分析、儲存、顯示及/或輸出。 在已實行檢測之後,匣體100與分析器件200斷開連接及/或從其釋放或彈出,且特定而言丟棄。 本發明之個別態樣及特徵及個別方法步驟及/或方法變體可彼此獨立地實施,但亦以任何所要組合及/或順序實施。 特定而言,本發明亦係關於可獨立地或以任何組合、亦結合上文中描述之任何態樣實現之以下態樣之任一者: 1.一種用於檢測特定而言生物樣本(P)之方法, 其中擴增產物(V)係由該樣本(P)之分析物(A)形成, 其中使該等擴增產物(V)鍵結至感測器裝置(113)之對應捕獲分子(M)且在偵測程序中偵測該等鍵結擴增產物(V), 其特徵在於 至少一個第一分析物(A1)之第一群組擴增產物(V1)及至少一個第二分析物(A2)之第二群組擴增產物(V2)係在不同雜交溫度(TH)下鍵結至該等對應捕獲分子(M)。 2.如態樣1之方法,其中該第一群組之該等擴增產物(V1)係不同於該第二群組之該等擴增產物(V2)。 3.如態樣1或2之方法,其中不同分析物(A)係並行、彼此獨立地及/或在不同反應腔體(109)中擴增,及/或該第一群組及該第二群組係並行、彼此獨立地及/或在不同反應腔體(109)中形成,特定而言以便在偵測程序中偵測核酸產物及/或擴增產物(V)。 4.如前述態樣中任一項之方法,其中該等分析物(A)係憑藉擴增反應(特定而言PCR)擴增,及/或從該等分析物(A)產生核酸產物作為擴增產物(V)。 5.如前述態樣中任一項之方法,其中該第一群組及該第二群組經饋送至該感測器裝置(113)及/或連續鍵結至該等對應捕獲分子(M)。 6.如前述態樣中任一項之方法,其中該第一群組之該雜交溫度(TH)係大於該第二群組之該雜交溫度(TH),該第一群組較佳係在該第二群組之前饋送至該感測器裝置(113)及/或鍵結至該等對應捕獲分子(M)。 7.如前述態樣中任一項之方法,其中該等群組各自包括不同分析物(A)之擴增產物(V),該第一群組及/或該第二群組之該等不同擴增產物(V)較佳係在各自共同雜交溫度(TH)下或在各自不同雜交溫度(TH)下鍵結至該等對應捕獲分子(M)。 8.如前述態樣中任一項之方法,其中該第一群組及/或該第二群組係在至少40℃或50℃、特定而言至少55℃或60℃,及/或至多75℃或70℃、特定而言至多65℃或60℃之雜交溫度(TH)下鍵結至適合捕獲分子(M)。 9.如前述態樣中任一項之方法,其中該等群組及/或擴增產物(V)係在單一或共同偵測程序中加以偵測或測定。 10.如前述態樣中任一項之方法,其中該等群組及/或擴增產物(V)在該感測器裝置(113)及/或該雜交之前、特定而言再次或在流體正流過時經主動溫度控制(較佳地預加熱)特定而言至超過該雜交溫度(TH)之溫度及/或至至少70℃或80℃及/或至多99℃或95℃。 11.如前述態樣中任一項之方法,其中該感測器裝置(113)及/或該等群組及/或擴增產物(V)係在該感測器裝置(113)中或上經主動溫度控制(特定而言加熱及/或冷卻)至該雜交溫度(TH)。 12.一種用於檢測特定而言生物樣本(P)之分析系統(1), 該分析系統(1)包括具有用於鍵結該樣本(P)之分析物(A)及/或該等分析物(A)之擴增產物(V)以便在偵測程序中偵測該等分析物及/或擴增產物之捕獲分子(M)之感測器裝置(113), 其特徵在於 該等捕獲分子(M)具有不同雜交溫度(TH)以便在該等不同雜交溫度(TH)下使該等分析物(A)及/或擴增產物(V)鍵結至該等對應捕獲分子(M),及/或 該分析系統(1)經設計以實行如前述態樣中任一項之方法。 13.如態樣12之分析系統,其中該感測器裝置(113)包括複數個感測器場(113B),用於鍵結及/或偵測不同分析物(A)及/或擴增產物(V)之不同捕獲分子(M)經配置在不同感測器場(113B)中及/或其中該等捕獲分子(M)經設計為特定而言具有至少10或20個核苷酸及/或至多40或30個核苷酸長度之寡核苷酸探針。 14.如態樣12或13之分析系統,其中該分析系統(1)包括用於產生該等擴增產物(V)之一反應腔體(109)或用於並行及/或獨立地產生不同擴增產物(V)之複數個反應腔體(109)。 15.如態樣12至14中任一項之分析系統,其中該分析系統(1)包括用於接納該樣本(P)之匣體(100)及用於接納該匣體(100)之分析器件(200),較佳地,該匣體(100)包括該感測器裝置(113)及/或(若干)反應腔體(109),及/或該分析器件(200)包括用於對該感測器裝置(113)進行溫度控制之感測器溫度控制裝置(204C)及/或用於在該感測器裝置(113)之前對該等擴增產物(V)進行溫度控制之中間溫度控制裝置(204B)。
1‧‧‧分析系統100‧‧‧匣體100A‧‧‧前端101‧‧‧主體102‧‧‧罩蓋103‧‧‧流體系統104‧‧‧接納腔體104A‧‧‧連接件104B‧‧‧進口104C‧‧‧出口104D‧‧‧中間連接件105‧‧‧計量腔體105A‧‧‧第一計量腔體105B‧‧‧第二計量腔體106(A-G)‧‧‧中間腔體107‧‧‧混合腔體108(A-E)‧‧‧儲存腔體109‧‧‧反應腔體109A‧‧‧第一反應腔體109B‧‧‧第二反應腔體109C‧‧‧第三反應腔體110‧‧‧中間溫度控制腔體110A‧‧‧進口110B‧‧‧出口111‧‧‧收集腔體112‧‧‧泵裝置113‧‧‧感測器裝置113A‧‧‧感測器陣列113B‧‧‧感測器場113C‧‧‧電極113D‧‧‧支撐件113E‧‧‧接觸點113F‧‧‧層114‧‧‧通道114A‧‧‧旁路115‧‧‧閥115A‧‧‧最初閉合閥115B‧‧‧最初敞開閥116‧‧‧感測器部分117‧‧‧感測器罩蓋118‧‧‧感測器隔間119‧‧‧進口120‧‧‧出口200‧‧‧分析器件201‧‧‧容槽202‧‧‧泵驅動器203‧‧‧連接裝置203A‧‧‧接觸元件204‧‧‧溫度控制裝置204A‧‧‧反應溫度控制裝置204B‧‧‧中間溫度控制裝置204C‧‧‧感測器溫度控制裝置205‧‧‧(閥)致動器205A‧‧‧用於115A之(閥)致動器205B‧‧‧用於115B之(閥)致動器206‧‧‧感測器206A‧‧‧流體感測器206B‧‧‧另一感測器207‧‧‧控制裝置208‧‧‧輸入裝置209‧‧‧顯示裝置210‧‧‧介面211‧‧‧電力供應器211A‧‧‧連接件212‧‧‧外殼213‧‧‧開口A(1-3)‧‧‧分析物B‧‧‧鍵D‧‧‧偵測器分子F(1-5)‧‧‧液體試劑L‧‧‧標籤M(1-3)‧‧‧捕獲分子P‧‧‧樣本S(1-10)‧‧‧乾燥試劑SA‧‧‧第一物質SP‧‧‧第二物質SU‧‧‧受質T‧‧‧溫度TE‧‧‧進口溫度TH(1-3)‧‧‧雜交溫度TU‧‧‧環境溫度TV‧‧‧預熱溫度V(1-3)‧‧‧擴增產物X‧‧‧位置
將參考圖式從申請專利範圍及一較佳實施例之以下描述明白本發明之其他態樣、優勢、特徵及性質,其中: 圖1係包括接納在其中之所提出匣體之所提出分析系統或分析器件之示意性截面; 圖2係匣體之示意圖; 圖3係分析系統及/或匣體之所提出感測器裝置之示意性前視圖; 圖4係圖解說明感測器裝置之感測器場之來自圖3之放大細節; 圖5係感測器裝置之示意性後視圖; 圖6係感測器裝置之示意性截面圖;及 圖7係樣本及/或擴增產物之溫度隨匣體中之位置而變化之示意性曲線或量變曲線。 在僅係示意性且有時未按比例繪製之圖中,相同元件符號用於相同或類似部分及組件,即使此等未重複描述,仍達成對應或可比較性質及優勢。
104‧‧‧接納腔體
105‧‧‧計量腔體
106‧‧‧中間腔體
107‧‧‧混合腔體
109‧‧‧反應腔體
110A‧‧‧進口
110B‧‧‧出口
111‧‧‧收集腔體
113‧‧‧感測器裝置
P‧‧‧樣本
T‧‧‧溫度
TE‧‧‧進口溫度
TH1‧‧‧雜交溫度
TH2‧‧‧雜交溫度
TH3‧‧‧雜交溫度
TU‧‧‧環境溫度
TV‧‧‧預熱溫度
V1‧‧‧擴增產物
V2‧‧‧擴增產物
V3‧‧‧擴增產物
X‧‧‧位置
Claims (24)
- 一種用於檢測一樣本(P)之方法,其中擴增產物(V)係由該樣本(P)之分析物(A)形成,其中使該等擴增產物(V)鍵結至包括感測器隔間(118)之感測器裝置(113)之對應捕獲分子(M)且在偵測程序中偵測或識別該等鍵結擴增產物(V),其特徵在於至少一個第一分析物(A1)之第一群組擴增產物(V1)及至少一個第二分析物(A2)之第二群組擴增產物(V2)係在不同雜交溫度(TH)下於該感測器隔間(118)中鍵結至該等對應捕獲分子(M),且該第一群組及該第二群組經連續饋送至該感測器隔間(118)及連續鍵結至該等對應捕獲分子(M)。
- 如請求項1之方法,其中該第一群組之該等擴增產物(V1)係不同於該第二群組之該等擴增產物(V2)。
- 如請求項1或2之方法,其中不同分析物(A)係並行、彼此獨立地及/或在不同反應腔體(109)中擴增。
- 如請求項1或2之方法,其中該第一群組及該第二群組係並行、彼此獨立地及/或在不同反應腔體(109)中形成。
- 如請求項3之方法,其中該等不同分析物(A)及/或該第一群組及該第二群組經擴增及/或形成以便在偵測程序中偵測或識別該等核酸產物及/或擴增產物(V)。
- 如請求項1或2之方法,其中該等分析物(A)係憑藉擴增反應、特定而言PCR擴增,及/或從該等分析物(A)產生核酸產物作為擴增產物(V)。
- 如請求項1或2之方法,其中該感測器裝置(113)或其感測器陣列(113A)或支撐件(113D)經加熱至該等不同群組之不同溫度。
- 如請求項1或2之方法,其中該等群組係以遞減雜交溫度(TH)雜交。
- 如請求項1或2之方法,其中該第一群組之該雜交溫度(TH)係大於該第二群組之該雜交溫度(TH),較佳地其中該第一群組係在該第二群組之前饋送至該感測器裝置(113)及/或鍵結至該等對應捕獲分子(M)。
- 如請求項1或2之方法,其中該等不同群組之該等雜交溫度(TH)相差約1℃或以上。
- 如請求項1或2之方法,其中該等群組各自包括不同分析物(A)之擴增產物(V)。
- 如請求項11之方法,其中該第一群組及第二群組之各自該等不同擴 增產物(V)係在共同雜交溫度(TH)下分別鍵結至該等對應捕獲分子(M)。
- 如請求項11之方法,其中該等不同群組之該等共同雜交溫度係不同,較佳地相差至少1℃。
- 如請求項1或2之方法,其中該等群組及/或擴增產物(V)係在單一或共同偵測程序中加以偵測、識別或測定。
- 如請求項1或2之方法,其中該等群組及/或擴增產物(V)係特定而言再次或在流體正流過時在該感測器裝置(113)及/或該雜交之前經主動溫度控制或預加熱,及/或該等群組及/或擴增產物(V)係在饋送至該感測器隔間(118)之前預加熱至超過該雜交溫度(TH)之溫度及/或至至少70℃。
- 如請求項1或2之方法,其中該感測器裝置(113)及/或該等群組及/或擴增產物(V)係在該感測器裝置(113)中或上經主動溫度控制、特定而言加熱及/或冷卻至該雜交溫度(TH)。
- 如請求項1或2之方法,其中相較於該第二群組,該第一群組經溫度控制、特定而言加熱至更大程度或冷卻至更小程度。
- 如請求項1或2之方法,其中針對各群組不同地調適該感測器裝置(113)之溫度控制或加熱以便達到該等各自雜交溫度(TH)。
- 如請求項1或2之方法,其中該擴增產物(V)形成於一反應腔體(109)且自該反應腔體(109)饋送至該感測器裝置(113)。
- 一種用於檢測一樣本(P)之分析系統(1),該分析系統(1)包括具有具用於鍵結該樣本(P)之分析物(A)及/或該等分析物(A)之擴增產物(V)以便在偵測程序中偵測或識別該等分析物(A)及/或擴增產物(V)之捕獲分子(M)之感測器隔間(118)之感測器裝置(113),其特徵在於該分析系統(1)包括用於並行及/或獨立地產生不同擴增產物(V)之複數個反應腔體(109),該感測隔間(118)係流體連結至該等反應腔體(109),及配置在相同感測器隔間(118)中之該等捕獲分子(M)具有不同雜交溫度(TH)以便在該等不同雜交溫度(TH)下使該等分析物(A)及/或擴增產物(V)鍵結至該等對應捕獲分子(M)。
- 如請求項20之分析系統,其中該感測器裝置(113)或感測器隔間(118)包括複數個感測器場(113B),其中用於鍵結及/或偵測不同分析物(A)及/或擴增產物(V)之不同捕獲分子(M)經配置在不同感測器場(113B)中。
- 如請求項20或21之分析系統,其中該等捕獲分子(M)經設計為特定而言具有至少10個核苷酸及/或至多40個核苷酸長度之寡核苷酸探針,及/或該分析系統(1)經設計以實行如請求項1至19中任一項之方法。
- 如請求項20之分析系統,其中該分析系統(1)包括用於接納該樣本(P)之匣體及用於接納該匣體(100)之分析器件(200),較佳地其中該匣體(100)包括該感測器裝置(113)及/或該/該等反應腔體(109)。
- 如請求項23之分析系統,其中該分析器件(200)包括用於對該感測器裝置(113)進行溫度控制之感測器溫度控制裝置(204C)及/或用於在該感測器裝置(113)之前對該等擴增產物(V)進行溫度控制之中間溫度控制裝置(204B)。
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