TWI732741B - 包含地骨皮甲素和/或地骨皮乙素的組合物及其使用方法 - Google Patents
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Abstract
本申請描述了包括地骨皮甲素和地骨皮乙素中至少一種的組合物及其在治療或預防骨疾病和病症以及增加骨健康方法中的用途。
Description
本發明係有關於包含地骨皮甲素和/或地骨皮乙素的組合物及其使用方法。
本申請描述了包括地骨皮甲素(kukoamine A)和地骨皮乙素(kukoamine B)中至少一種的組合物及其在改善骨健康以及治療和/或預防骨疾病方法中的用途。
健康骨骼不斷地進行重建過程,通過成骨細胞和破骨細胞的共同作用達到骨吸收和骨形成之間的平衡。骨重建過程中,細胞(如襯細胞)被激活,覆蓋並吸收未礦化骨質,為破骨細胞留出空間,從而再吸收老的礦化骨,並將成骨細胞引導至同一位置。之後,成骨細胞聚攏到有機基質上,充分礦化,形成新骨。因此,破骨細胞骨吸收和成骨細胞骨形成之間的平衡決定了骨量的多少。
大多數骨疾病是由於骨重建過程的平衡被打破所致。例如,骨質疏鬆症是最常見的骨疾病之一。由於骨重建周期中的平衡被打破,骨形成量少於骨吸收量,從而導致骨量減少,易於發生骨折。
因此,用於治療骨疾病的治療製劑主要針對抑制骨吸
收和增加骨形成。有許多不同的分子和信號通路參與了骨重建過程,目前針對不同的分子靶點和信號通路有各種治療製劑。例如,雙磷酸鹽類(如阿侖膦酸鈉和利塞膦酸鹽)可通過抑制破骨細胞活性抑制骨吸收。其它治療製劑通過阻斷TNF受體/配體家族成員(如核因子κ乙配體受體活化劑(RANK-L)-激活參與骨吸收的破骨細胞的細胞因子)來抑制骨吸收。此外,抑制RANK-L的釋放可以防止骨質流失。
還有其它針對增加骨形成的治療製劑。例如,已知活化的骨形態發生蛋白基因能直接觸發成骨細胞分化和促進骨形成。重組骨形態發生蛋白-2(BMP-2)已被證明可誘導骨或軟骨的形成。但是,藥物和生物製劑(如重組BMP-2)的全身給藥可能對腸道和其它組織產生副作用。
此外,已有很多研究表明植物來源提取物與骨健康密切相關。具體來說,對地骨皮(枸杞或寧夏枸杞的根皮)的研究表明,地骨皮提取物能促進成骨細胞增殖。此外,Yin等人報告了地骨皮乙醇粗提取物以及水和乙醇粗提取物的30%乙醇洗脫部分(大孔吸附樹脂層析)對成骨細胞UMR106的促增殖作用(Yin J,Wang DW,et al.,“The effect of the extracts of some crude drugs on proliferation of osteoblast-like UMR 106 cells,”Journal of Shenyang Pharmaceutical University,2001,18(4):279-282)。
兩種精胺生物鹼--地骨皮甲素(Funayama S,Yoshida K,Konno C,et al.,“Structure of kukoamine A,a hypotensive principle of Lyciumchinense root barks,”Tetrahedron Letters,
1980,21(14):1355-1356;圖1A)和地骨皮乙素(Funayama S,Zhang G R,Nozoe S.,Kukoamine B,“A spermine alkaloid from Lyciumchinens,”Phytochemistry,1995,38(6):1529-1531;圖1B)是地骨皮的主要成分,已經成功分離並商品化。
儘管如此,在本領域仍然需要用於藥物或膳食補充劑介入療法(interventions)的天然和植物來源的提取物和/或組分,從而提高骨健康、並通過抑制骨吸收和/或增加骨形成來預防和/或治療骨疾病。
一個實施方案涉及一種組合物,其含有有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種、用在改善受試者骨健康的方法中,其中所述組合物增加了鹼性磷酸酶活性。
另一個實施方案涉及一種組合物,其含有有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種、用在刺激或增加受試者骨生長和強度的方法中,其中所述組合物增加了鹼性磷酸酶的活性。該組合物可進一步包含一種或多種賦形劑、防腐劑、增溶劑、緩衝劑、白蛋白、潤滑劑、填充劑、穩定劑、著色劑、矯味劑、甜味劑或其混合物。所述組合物可配製用於口服給藥。地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可按0.01-1000mg的有效量存在。地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可構成組合物的約1-99%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可構成組合物的約
10-75%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可構成組合物的約50%w/w。
進一步的實施方案涉及一種組合物,其含有有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種、用在治療或預防受試者骨疾病或病症的方法中,其中所述組合物增加鹼性磷酸酶的活性。該組合物可進一步包含一種或多種賦形劑、防腐劑、增溶劑、緩衝劑、白蛋白、潤滑劑、填充劑、穩定劑、著色劑、矯味劑、甜味劑或其混合物。所述組合物可配製用於口服給藥。地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可按0.01-1000mg的有效量存在。地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可構成組合物的約1-99%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可構成組合物的約10-75%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可構成組合物的約50%w/w。
更進一步的實施方案涉及一種組合物,其含有有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種、用在治療或預防受試者骨質疏鬆的方法中,其中所述組合物增加鹼性磷酸酶的活性。該組合物可進一步包含一種或多種賦形劑、防腐劑、增溶劑、緩衝劑、白蛋白、潤滑劑、填充劑、穩定劑、著色劑、矯味劑、甜味劑或其混合物。所述組合物可配製用於口服給藥。地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可按0.01-1000mg的有效量存在。地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可構成組合物的約1-99%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可構成組合物的約
10-75%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可構成組合物的約50%w/w。
另一個實施方案涉及一種組合物,其含有有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種、用在促進受試者的成骨細胞增殖和分化的方法中,其中所述組合物增加鹼性磷酸酶的活性。該組合物可進一步包含一種或多種賦形劑、防腐劑、增溶劑、緩衝劑、白蛋白、潤滑劑、填充劑、穩定劑、著色劑、矯味劑、甜味劑或其混合物。所述組合物可配製用於口服給藥。地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可按0.01-1000mg的有效量存在。地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可構成組合物的約1-99%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可構成組合物的約10-75%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可構成組合物的約50%w/w。
另一個實施方案涉及一種膳食補充劑,其含有有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種、用在改善受試者骨健康方法中,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種增加鹼性磷酸酶的活性。該補充劑可進一步包含一種或多種賦形劑、防腐劑、增溶劑、緩衝劑、白蛋白、潤滑劑、填充劑、穩定劑、著色劑、矯味劑、甜味劑或其混合物。所述補充劑可配製用於口服給藥。地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可按0.01-1000mg的有效量存在。地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可形成補充劑的約1-99%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種
可形成補充劑的約10-75%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可形成補充劑的約50%w/w。
更進一步的一個實施方案涉及一種膳食補充劑,其含有有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種、用在增加受試者骨生長和強度的方法中,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種增加鹼性磷酸酶的活性。該補充劑可進一步包含一種或多種賦形劑、防腐劑、增溶劑、緩衝劑、白蛋白、潤滑劑、填充劑、穩定劑、著色劑、矯味劑、甜味劑或其混合物。所述補充劑可配製用於口服給藥。地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可按0.01-1000mg的有效量存在。地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可形成補充劑的約1-99%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可形成補充劑的約10-75%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可形成補充劑的約50%w/w。
另一個實施方案涉及一種膳食補充劑,其含有有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種、用在治療或預防受試者骨疾病或病症方法中,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種增加鹼性磷酸酶的活性。該補充劑可進一步包含一種或多種賦形劑、防腐劑、增溶劑、緩衝劑、白蛋白、潤滑劑、填充劑、穩定劑、著色劑、矯味劑、甜味劑或其混合物。所述補充劑可配製用於口服給藥。地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可按0.01-1000mg的有效量存在。地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可形成
補充劑的約1-99%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可形成補充劑的約10-75%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可形成補充劑的約50%w/w。
另一個實施方案涉及一種膳食補充劑,其含有有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種、用在治療或預防受試者骨質疏鬆方法中,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種增加鹼性磷酸酶的活性。該補充劑可進一步包含一種或多種賦形劑、防腐劑、增溶劑、緩衝劑、白蛋白、潤滑劑、填充劑、穩定劑、著色劑、矯味劑、甜味劑或其混合物。所述補充劑可配製用於口服給藥。地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可按0.01-1000mg的有效量存在。地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可形成補充劑的約1-99%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可形成補充劑的約10-75%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可形成補充劑的約50%w/w。
更進一步的一個實施方案涉及一種膳食補充劑,其含有有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種、用在促進受試者成骨細胞的增殖和分化的方法中,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種增加鹼性磷酸酶的活性。該補充劑可進一步包含一種或多種賦形劑、防腐劑、增溶劑、緩衝劑、白蛋白、潤滑劑、填充劑、穩定劑、著色劑、矯味劑、甜味劑或其混合物。所述補充劑可配製用於口服給藥。地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可按
0.01-1000mg的有效量存在。地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可形成補充劑的約1-99%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可形成補充劑的約10-75%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可形成補充劑的約50%w/w。
圖1A描述了地骨皮甲素的化學結構。
圖1B描述了地骨皮乙素的化學結構。
圖2描述了地骨皮甲素和地骨皮乙素的提取方法的示意圖。
圖3描述了樣品對原代小鼠成骨細胞鹼性磷酸酶活性的作用的圖。
應當理解,本發明並不限定於本文中所述的特定組合物、方法或方案。此外,除非另有定義,本文使用的所有技術和科學術語都與本發明所屬領域普通技術人員通常的理解具有相同的含義。也應當理解,本文所用的術語僅用於描述特定實施方案的目的,而不是為了限制本發明的範圍,而其範圍僅由權利要求限定。
以下涉及一種增強骨健康以及治療和預防骨疾病(例如骨質疏鬆症)的治療劑的發現,其包含兩種精胺類生物鹼--地骨皮甲素(圖1A)和地骨皮乙素(圖1B)中的至少一種作為活性成分,其更詳細地描述如下。已發現地骨皮甲
素和地骨皮乙素對成骨細胞增殖和分化具有刺激作用。成骨細胞在分化時表現出特異性鹼性磷酸酶(AKP)活性。所述治療劑通過增加或刺激鹼性磷酸酶(AKP)基因和/或蛋白質的表達和/或活性來增加骨生長,導致骨健康的增強。因此,所述治療劑以及包括該治療劑的組合物可用於治療和/或預防骨疾病(例如骨質疏鬆症等)以及用於增強骨健康。
鹼性磷酸酶(AKP)是一種水解酶,其負責通過去磷酸化的過程從許多類型分子(包括核苷酸、蛋白質和生物鹼)中去除磷酸基團。血液中測得的是從這些組織中釋放到血液中的鹼性磷酸酶總量。測定鹼性磷酸酶的主要重要性是檢查骨疾病或肝臟疾病的可能性。顧名思義,這種酶在鹼性pH(pH為10)時效果最好,因此,該酶本身在血液中無活性。鹼性磷酸酶通過分離產生鹼性pH的磷(酸性礦物質)而產生作用。在人體中,鹼性磷酸酶存在於整個身體各處的所有組織中,但尤其集中於肝臟、膽管、腎臟、骨骼和胎盤中。人類和大多數其他哺乳動物包含以下鹼性磷酸酶同工酶:ALP-I(腸);ALP-2(骨)、ALPL(組織非特異性:肝/骨/腎);以及ALPP(胎盤/Regan同工酶)。腸(同工酶ALP-3)、胎盤(同工酶ALPP)和腎臟(腎曲小管近端)內襯細胞也產生少量的同工酶。
已顯示成骨細胞在分化時表現出特異性鹼性磷酸酶(AKP)活性。因此,有效的治療劑可以含有包括刺激或增加鹼性磷酸酶表達和/或活性的組分。
如下面更詳細討論的那樣,以下內容部分基於這樣的
發現:地骨皮的兩種化學成分--地骨皮甲素和地骨皮乙素是鹼性磷酸酶蛋白活性和/或表達的強效活化劑。此外,以下所討論的測定結果表明,當給予包含地骨皮甲素、地骨皮乙素之一或兩者組合的治療劑或組合物時,所述給藥達到了出人意料的效果,即AKP蛋白表達和/或活性超出地骨皮粗提取物甚至陽性對照物導致的AKP蛋白表達和/或活性的增加。
地骨皮甲素和地骨皮乙素能夠從地骨皮(例如,枸杞或寧夏枸杞的根皮)的粗提物中產生,如例如圖2的流程圖中所示。地骨皮中地骨皮甲素和/或地骨皮乙素的含量可分別為約0.05mg/g至約5.79mg/g以及約0.17mg/g至約25.66mg/g(Yuan-Yuan Li等人,Identification of kukoamines as the novel markers for quality assessment of Lycii Cortex.Food Research International 55(2014)373-380)。
提取方法的實例包括溶劑提取、表面流體提取等。餾分可包括通過在具有不同極性的兩種溶劑之間分配粗提取物獲得的那些,以及通過使用疏水性溶劑、親水性溶劑或其組合作為流動相洗脫加載到大孔樹脂或矽膠填充柱的粗提取物獲得的洗脫物。此外,提取物或及其組分在通過冷凍乾燥、真空乾燥、熱風乾燥或噴霧乾燥後除去提取溶劑後可以是濃縮的液相或固相。
在某些實施方案中,溶劑連續分餾可用於獲得本發明中獨特組合物中有用的粗提取物及其化學成分。例如,可使用這種技術獲得地骨皮甲素和地骨皮乙素,所述方法
是:用乙醇和水按順序提取地骨皮的根皮,懸浮在水中,並用石油醚(PE)、乙酸乙酯(EtOAc)和正丁醇(n-BuOH)提取。該順序中每個步驟後獲得的提取物(餾分)將包含極性按升序排列的化合物,極性類似於用於提取它們的溶劑。來自n-BuOH提取物和水殘餘物的餾分進行乾燥,蒸掉溶劑,從而產生濃度較高的地骨皮甲素和地骨皮乙素提取物。本領域的技術人員將認識到,許多其它溶劑可用於實施溶劑連續分餾提取。
本領域的技術人員將認識到,存在許多其他提取過程(無論是本領域已知的還是多種專利及出版物描述的)均可用來獲得用於實施本發明的提取物及其成分。例如,通過引用的方式併入本文中的下列文獻中所述的提取操作可用於實施本發明:Murga等人,“Extraction of natural complex phenols and tannins from grape seeds by using supercritical mixtures of carbon dioxide and alcohol.”J.Agric Food Chem.2000 August:48(8):3408-12;Hong等人,“Microwave-assisted extraction of phenolic compounds from grape seed.”Nat Prod Lett.2001;15(3):197-204;Ashraf-Khorassani等人,“Sequential fractionation of grape seeds into oils,polyphenols,and procyanidins via a single system employing CO2-based fluids.”J.Agric Food Chem.,2004 May 5;52(9):2440-4。
地骨皮甲素和地骨皮乙素也可從各種來源商購。例如,地骨皮甲素和地骨皮乙素購自中國,由成都普瑞法科
技開發有限公司(Chengdu Biopurify Phytochemicals Ltd)提供。
術語“組合物”是指治療、改善、促進、增加、管理、控制、維持、優化、修飾、降低、抑制或預防與自然狀態或生物過程相關聯的特定病症的一種產品。術語組合物包括但不限於藥品(即藥物)、非處方藥品(OTC)、化妝品、食品、食品成分或膳食補充劑組合物,其包含有效量的提取物,它們中的至少一種組分或其混合物。典型的組合物包括膳食補充劑、飲料和飲料混合物。
術語“藥物組合物”是指可用於生產需要醫生或獸醫的處方的藥物產品(即藥物)的一種組合物。
術語“食品組合物”是指可用於生產食品或飲料產品的一種組合物。
本文所使用的術語“膳食補充劑”是指改善、促進、增加、管理、控制、維持、優化、修飾、降低、抑制或防止與自然狀態或生物過程相關聯的特定病症的一種產品(即,不用於診斷、治療、緩解、治癒或預防疾病)。例如,對於骨相關病症,膳食補充劑可用於增強或促進骨健康;增加和/或促進骨生長和強度;促進成骨細胞的增殖和分化,等等。在某些實施方案中,膳食補充劑是一種特殊類型的食品,而不是藥物。
術語“混合物”或“組合物”是指一種提取物的兩種或更多種不同組分的混合物或組合物。該混合物的組分可以為
相等或不同的量或比例。
本文所使用的“提取物”是指一種固體、黏稠物質或液體物質或製劑,其包括植物物質的活性成分,如濃縮形式的地骨皮。術語“提取物”不僅包括通過使用選自水、1-4個碳原子的低級醇(如甲醇、乙醇、丁醇等)、乙烯、丙酮、己烷、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、N,N-二甲基甲醯胺(DMF)、二甲基亞碸(DMSO)、1,3-丁二醇、丙二醇及其組合物的溶劑從地骨皮中產生的粗提取物,並且包括於所述溶劑中的粗提取物的餾分。只要保證了活性成分的提取和保存,任何提取方法均可使用。
本文就一種組合物、提取物、提取物混合物、提取物組分和/或活性劑或成分所使用的術語“有效量”或“治療有效量”是指在給藥時有效並在一定時間內足以達到期望效果的量。例如,“有效量”或“治療有效量”是指本發明的一種組合物、提取物、提取物混合物、提取物組分和/或活性劑或成分,在給予受試者(例如,哺乳動物,諸如人類)時,足以有效治療的量,所述有效治療包括在受試者中的任何一種或多種以下作用:增強骨骼健康;刺激和/或改善骨生長和強度;抑制、降低或預防骨吸收;促進成骨細胞的增殖和分化;治療或預防骨疾病(例如骨質疏鬆症等)。本申請公開內容中構成“治療有效量”的一種組合物、提取物、提取物混合物、提取物組分和/或活性劑或成分的量將取決於活性劑或化合物、所治療的病症及其嚴重程度、給藥方式、治療持續時間、或所治療的受試者的年齡而有所不同,但
常規地可通過擁有相關知識以及與本申請公開內容相關的本領域普通技術人員來確定。
本文所使用的術語“骨疾病或病症”是指由於骨重建過程的平衡被打破而造成的任何骨疾病或病症。這可能由於衰老過程和/或創傷所致。骨疾病或病症的實例包括但不限於骨折、骨質疏鬆症、牙周疾病、轉移性骨病和溶骨性骨病。
本文所使用的術語“治療”或“治療方法”是指在有相關疾病或病症的哺乳動物(如人類)中有關疾病或病症的治療,包括:(i)預防在哺乳動物中發生該疾病或病症,尤其是當該哺乳動物易患所述病症但尚未確診時;(ii)抑制疾病或病症,即阻止其發展;(iii)緩解疾病或病症,即,使疾病或病症消退;或(iv)緩解該疾病或病症產生的症狀(例如,預防骨折),而無需解決基礎疾病或病症。本文所使用的術語“疾病”、“障礙”和“病症”可以互換使用,在特定疾病或病症可能無已知致病因子(因而尚不知道病因)時也可能不同,因此尚未確認為一種疾病,但只是作為一種不期望的狀態或綜合症,其中或多或少的具體的一組症狀由臨床醫生鑑定。
術語“施用”、“給藥”是指通過本領域已知的途徑向受試者提供組合物,包括但不限於靜脈內、動脈內、經口、腸胃外、口腔、局部、經皮、直腸、肌內、皮下、骨內、經粘膜、或腹膜內給藥途徑。在某些實施方案中,組合物的口服給藥途徑可以為優選。或者,優選局部給藥。
本文所使用的術語“受試者”或“個體”包括可以被給予該組合物的哺乳動物。哺乳動物的非限制性實例包括人類、非人類靈長類動物、齧齒類動物(包括轉基因和非轉基因小鼠)等等。本文所述的方法可有助於人體治療、臨床前、營養、獸醫應用。在有些實施方案中,受試者為哺乳動物,而在有些實施方案中,受試者為人。
本發明的組合物可配製在可接受的載體中,可以製備、包裝和標記為增加或刺激骨健康,通過增加或刺激骨生長,增加骨強度,改善骨結構或者治療、預防或管理各種骨疾病,包括但不限於骨折、骨質疏鬆症、牙周疾病、轉移性骨病和溶骨性骨病來實現。
本發明的組合物可配製在可接受的載體中,可以製備、包裝和標記為藥物或用作一種膳食補充劑。
一個實施方案涉及一種在受試者中增加或刺激骨健康的組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種。
一個實施方案涉及一種在受試者中增加或刺激骨生長和/或強度的組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種。
一個實施方案涉及一種在受試者中治療和預防骨疾病或病症的組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種。
一個實施方案涉及一種在受試者中促進成骨細胞增殖
和分化的組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種。
另一個實施方案涉及一種在受試者中增加或刺激骨健康的組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,並且其中所述組合物增加了AKP蛋白活性和/或表達。
另一個實施方案涉及一種在受試者中增加或刺激骨生長的組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,並且其中所述組合物增加了AKP蛋白活性和/或表達。
另一個實施方案涉及一種在受試者中治療和預防骨疾病或病症的組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,並且其中所述組合物增加了AKP蛋白活性和/或表達。
另一個實施方案涉及一種在受試者中促進成骨細胞增殖和分化的組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,並且其中所述組合物增加了AKP蛋白活性和/或表達。
地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可按足以實現治療的量(“有效量”)存在,所述有效治療包括在受試者中的任何一種或多種以下作用:增強骨健康;刺激和/或改善骨生長和強度;促進成骨細胞的增殖和分化;治療或預防骨疾病或病症(例如骨質疏鬆症等),用量範圍約0.01-1000mg;更優選的用量範圍約200-750mg;更優選的
用量範圍約300-700mg;更優選的用量範圍約400-600mg;更優選的用量範圍約500mg。也可使用其他用量。
另一個實施方案涉及一種在受試者中增加或刺激骨健康的組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其中所述組合物增加或刺激了AKP蛋白活性和/或表達,並且進一步地,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可按0.01-1000mg的量存在。
另一個實施方案涉及一種在受試者中增加或刺激骨生長的組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其中所述組合物增加或刺激了AKP蛋白活性和/或表達,並且進一步地,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可按0.01-1000mg的量存在。
另一個實施方案涉及一種在受試者中治療和/或預防骨疾病或病症的組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其中所述組合物增加或刺激了AKP蛋白活性和/或表達,並且進一步地,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可按0.01-1000mg的量存在。
另一個實施方案涉及一種在受試者中促進成骨細胞增殖和分化的組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其中所述組合物增加或刺激了AKP蛋白活性和/或表達,並且進一步地,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種可按0.01-1000mg的量存在。
另一個實施方案涉及一種改善骨健康組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其
中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種構成組合物的約1-99%w/w;更優選地,組合物的約5-95%w/w;更優選地,組合物的約10-75%w/w;更優選地,組合物的約25-50%w/w;更優選地,組合物的約50%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種構成組合物的至少約1%w/w;更優選地,組合物的至少約5%w/w;更優選地,組合物的至少約10%w/w;更優選地,組合物的至少約15%w/w;更優選地,組合物的至少約20%w/w;更優選地,組合物的至少約25%w/w;更優選地,組合物的至少約30%w/w;更優選地,組合物的至少約35%w/w;更優選地,組合物的至少約40%w/w;更優選地,組合物的至少約45%w/w;更優選地,組合物的至少約50%w/w;更優選地,組合物的至少約55%w/w;更優選地,組合物的至少約60%w/w;更優選地,組合物的至少約65%w/w;更優選地,組合物的至少約70%w/w;更優選地,組合物的至少約75%w/w;更優選地,組合物的至少約80%w/w;更優選地,組合物的至少約85%w/w;更優選地,組合物的至少約90%w/w;更優選地,組合物的至少約95%w/w。
另一個實施方案涉及一種增加和刺激骨成長的組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種構成組合物的約1-99%w/w;更優選地,組合物的約5-95%w/w;更優選地,組合物的約10-75%w/w;更優選地,組合物的約25-50%w/w;更優選地,組合物的約50%w/w。或者,
地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種構成組合物的至少約1%w/w;更優選地,組合物的至少約5%w/w;更優選地,組合物的至少約10%w/w;更優選地,組合物的至少約15%w/w;更優選地,組合物的至少約20%w/w;更優選地,組合物的至少約25%w/w;更優選地,組合物的至少約30%w/w;更優選地,組合物的至少約35%w/w;更優選地,組合物的至少約40%w/w;更優選地,組合物的至少約45%w/w;更優選地,組合物的至少約50%w/w;更優選地,組合物的至少約55%w/w;更優選地,組合物的至少約60%w/w;更優選地,組合物的至少約65%w/w;更優選地,組合物的至少約70%w/w;更優選地,組合物的至少約75%w/w;更優選地,組合物的至少約80%w/w;更優選地,組合物的至少約85%w/w;更優選地,組合物的至少約90%w/w;更優選地,組合物的至少約95%w/w。
另一個實施方案涉及一種治療或預防骨疾病或病症的組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種構成組合物的約1-99%w/w;更優選地,組合物的約5-95%w/w;更優選地,組合物的約10-75%w/w;更優選地,組合物的約25-50%w/w;更優選地,組合物的約50%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種構成組合物的至少約1%w/w;更優選地,組合物的至少約5%w/w;更優選地,組合物的至少約10%w/w;更優選地,組合物的至少約15%w/w;更優選地,組合物的至少約20%w/w;更
優選地,組合物的至少約25%w/w;更優選地,組合物的至少約30%w/w;更優選地,組合物的至少約35%w/w;更優選地,組合物的至少約40%w/w;更優選地,組合物的至少約45%w/w;更優選地,組合物的至少約50%w/w;更優選地,組合物的至少約55%w/w;更優選地,組合物的至少約60%w/w;更優選地,組合物的至少約65%w/w;更優選地,組合物的至少約70%w/w;更優選地,組合物的至少約75%w/w;更優選地,組合物的至少約80%w/w;更優選地,組合物的至少約85%w/w;更優選地,組合物的至少約90%w/w;更優選地,組合物的至少約95%w/w。
另一個實施方案涉及一種促進成骨細胞增殖和分化的組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種構成組合物的約1-99%w/w;更優選地,組合物的約5-95%w/w;更優選地,組合物的約10-75%w/w;更優選地,組合物的約25-50%w/w;更優選地,組合物的約50%w/w。或者,地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種構成組合物的至少約1%w/w;更優選地,組合物的至少約5%w/w;更優選地,組合物的至少約10%w/w;更優選地,組合物的至少約15%w/w;更優選地,組合物的至少約20%w/w;更優選地,組合物的至少約25%w/w;更優選地,組合物的至少約30%w/w;更優選地,組合物的至少約35%w/w;更優選地,組合物的至少約40%w/w;更優選地,組合物的至少約45%w/w;更優選地,組合物的至少約50%w/w;更
優選地,組合物的至少約55%w/w;更優選地,組合物的至少約60%w/w;更優選地,組合物的至少約65%w/w;更優選地,組合物的至少約70%w/w;更優選地,組合物的至少約75%w/w;更優選地,組合物的至少約80%w/w;更優選地,組合物的至少約85%w/w;更優選地,組合物的至少約90%w/w;更優選地,組合物的至少約95%w/w。
另一個實施方案涉及一種改善骨健康的組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種構成組合物的約10-75%w/w;更優選地,組合物的約50%w/w,其中,所述組合物增加AKP蛋白活性和/或表達。
另一個實施方案涉及一種刺激或增加骨生長和強度的組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種構成組合物的約10-75%w/w;更優選地,組合物的約50%w/w,其中,所述組合物增加AKP蛋白活性和/或表達。
另一個實施方案涉及一種中治療或預防骨疾病或病症的組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種構成組合物的約10-75%w/w;更優選地,組合物的約50%w/w,其中,所述組合物增加AKP蛋白活性和/或表達。
另一個實施方案涉及一種促進成骨細胞增殖和分化的組合物,其中所述組合物包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中至少一種,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中至少一種構成
組合物的約10-75%w/w;更優選地,組合物的約50%w/w,其中,所述組合物增加AKP蛋白活性和/或表達。
另一個實施方案涉及一種改善骨健康的膳食補充劑,其中所述膳食補充劑包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中至少一種,其中所述組合物增加鹼性磷酸酶的活性。
另一個實施方案涉及一種刺激或增加骨生長和強度的膳食補充劑,其中所述膳食補充劑包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中至少一種,其中所述組合物增加鹼性磷酸酶的活性。
另一個實施方案涉及一種治療或預防骨疾病或病症的膳食補充劑,其中所述膳食補充劑包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中至少一種,其中所述組合物增加鹼性磷酸酶的活性。
另一個實施方案涉及一種治療或預防骨質疏鬆症的膳食補充劑,其中所述膳食補充劑包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中至少一種,其中所述組合物增加鹼性磷酸酶的活性。
進一步的另一個實施方案涉及一種促進成骨細胞增殖和分化的膳食補充劑,其中所述膳食補充劑包含地骨皮甲素和地骨皮乙素中至少一種,其中所述組合物增加鹼性磷酸酶的活性。
在本文所述的膳食補充劑中,如果地骨皮甲素和地骨皮乙素都存在,則該組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為任何比例;例如,組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為約12:100至約1:1。其他比例也可以是
合適的。例如,組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為約1:2;或者組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為約2:1;或者組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為約1:3;或者組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為約3:1;或者組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為約1:4;或者組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為4:1。在某些實施方案中,組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為約1:1至約1:4。在另一個實施方案中,組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為約4:1至約1:1。
另一個實施方案涉及通過施用包括有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中至少一種的組合物來改善骨健康的方法。
另一個實施方案涉及通過施用包括有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中至少一種的組合物來增加或刺激骨生長和/或強度的方法。
另一個實施方案涉及通過施用包括有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中至少一種的組合物來治療或預防骨疾病或病症的方法。
另一個實施方案涉及通過施用包括有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中至少一種的組合物來促進成骨細胞增殖和分化的方法。
另一個實施方案涉及通過施用包括有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中至少一種的組合物來改善骨健康的方
法,其中所述組合物刺激了AKP蛋白活性和/或表達。
另一個實施方案涉及通過施用包括有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中至少一種的組合物來增加或刺激骨生長和/或強度的方法,其中所述組合物刺激了AKP蛋白活性和/或表達。
另一個實施方案涉及通過施用包括有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中至少一種的組合物來治療或防止骨疾病或病症的方法,其中所述組合物刺激了AKP蛋白活性和/或表達。
另一個實施方案涉及通過施用包括有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中至少一種的組合物來促進成骨細胞增殖和分化的方法,其中所述組合物刺激了AKP蛋白活性和/或表達。
在上面所述的方法和組合物中,有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中至少一種包括約0.01-1000mg地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種;更優選地,約10-1000mg地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種;更優選地,約250-750mg;更優選地,約300-700mg;更優選地,約400-600mg;更優選地,約500mg,其中所述組合物增加鹼性磷酸酶的表達和/或活性。
在上面所述的方法和組合物中,如果地骨皮甲素和地骨皮乙素都存在,則地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為任何適當的比例,例如:組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為約12:100至約1:1。在其他的實施方案
中,地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為任何適當的比例,例如:組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為約1:1;或者組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為約1:2;或者組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為約2:1;或者組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為約1:3;或者組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為約3:1;或者組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為約1:4;或者組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為約4:1。在某些實施方案中,組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為約1:1至1:4。在某些實施方案中,組合物中地骨皮甲素與地骨皮乙素的比例可以為約4:1至1:1。
在某些實施方案中,組合物可以包含藥學上可接受的載體,如鹽水、緩衝鹽水、5%葡萄糖溶液,含微量金屬的硼酸鹽緩衝鹽水,等等。
組合物中可包括各種附加組分,包括天然和人工香料、天然和人工著色劑和/或食品級染料。此外,如本領域普通技術人員應當理解的一樣,也可加入各種防腐劑。
在某些其它實施方案中,所述組合物可以進一步包含一種或多種賦形劑。例如,適合於將藥物組合物配製成水懸浮液的賦形劑可以為懸浮劑或分散劑,如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉或聚乙烯吡咯烷酮。當藥物組合物被配製成注射劑時,林格氏溶液或等滲氯化鈉可以用作賦形劑。進一步的實例包括維生素A、
維生素D或鈣;防腐劑;增溶劑;緩衝劑;防止藥瓶表面蛋白損失的白蛋白;潤滑劑;填充劑;穩定劑等。製劑方法為本領域熟知的並已公開在例如Remington's Pharmaceutical Sciences,Gennaro,Mack Publishing Co.,Easton Pa.,1990中,其通過引用併入本文。
在某些實施方案中,組合物可以是無菌、無熱原的液體溶液或懸浮液、包衣膠囊、栓劑、凍乾粉末、透皮貼劑或本領域已知的其他形式。局部給藥可以通過注射在損傷或缺損部位給藥,或通過在該部位插入或附著固體載體給藥,或通過直接、局部施用黏性液體等。對於局部給藥,所述遞送載體優選為正在生長的骨或軟骨提供一種基質,更優選的情況是,載體被細胞吸收而無不良作用。
水性懸浮液可以包含本文所述的與藥學上可接受賦形劑混合的提取組分,如維生素A、維生素D和鈣,助懸劑,如甲基纖維素;以及潤濕劑,如卵磷脂、溶血卵磷脂或長鏈脂肪醇。該水性懸浮液還可以含有符合工業標準的防腐劑、著色劑、矯味劑、甜味劑等。
為了提升該組合物的味道或口味,採用矯味劑,可以是天然的也可以是合成的。優選的是天然矯味劑。如果是天然的矯味劑,除了提升口味外,還可以有營養補充的作用。矯味劑的非限制性實例包括天然或人工香料,並包括巧克力;香草;焦糖;咖啡;水果矯味劑,包括檸檬、酸橙、橘子、黑莓、覆盆子、藍莓、桃、杏、櫻桃、葡萄;奶油(crème)、及其混合物。所述矯味劑可以購買,和/或使
用已知矯味劑技術製備和加入。天然矯味劑可以是液體濃縮物或固體提取物的形式。可以使用合成矯味劑,實例為酯類、醇類、醛類和萜類。
所述組合物可以含有添加劑,如甜味劑。甜味劑用於賦予組合物一種甜味,可以是天然,也可以是合成的。優選的是天然甜味劑。天然甜味劑的實例包括玉米糖漿、蜂蜜、蔗糖、果糖、乳糖、麥芽糖以及其他糖類。
合適著色劑的非限定性實例包括接骨木果、由焦糖製成的焦糖著色劑、胭脂樹紅、葉綠酸、胭脂蟲紅、甜菜苷、薑黃、藏紅花、紅辣椒、番茄紅素、香蘭和蝶豆。
合適防腐劑的非限制性實例包括:苯甲酸鈉、檸檬酸鈉、磷酸鈉、焦亞硫酸鉀、焦亞硫酸鈉、乳酸鈉、亞硫酸鈉、EDTA(乙二胺四乙酸)、對羥基苯甲酸甲酯、檸檬酸、抗壞血酸、蘋果酸、及其混合物。
單一或全部的所述組合物可以包括至少約0.001%(按該組合物的重量計)的矯味劑、著色劑和/或防腐劑組分及其混合物。或者,單一或全部的所述組合物可以包括約0.001%至約10%,或者約0.001%至約5%,或者約0.01%至約4%,或者約0.1%至約3%(按該組合物的重量計)的矯味劑、著色劑和/或防腐劑組分及其混合物。
雖然本發明組合物主要是一種包括地骨皮提取物中至少一種組分或其混合物的組合物,但是,可以預期本發明的實施方案可包括補充劑,例如但不限於維生素、礦物質、草藥、植物、植物來源的補充劑、動物來源的補充劑、治
療性化合物、及其混合物。
其他組分的非限制性實例包括:鈣,鉀,維生素B,維生素A、C、D、E和K,葉酸,其他維生素以及通常本領域已知且用於補充飲食的礦物質(例如,鎂、鉻、鈷、銅、氟化物、鍺、碘、鐵、鋰、鎂、錳、鉬、磷、鈣、硒、矽、鈉、硫、釩和鋅);提取物和活性植物化學物質,包括阿魏酸(來自蘋果),人參,銀杏葉提取物,β-胡蘿蔔素,辣椒素,花青素,生物類黃酮,d-檸檬烯,異硫氰酸鹽,來自大蒜,生薑,葡萄的半胱氨酸,來自茶葉和洋蔥的兒茶素和多酚,植物甾醇,異黃酮,番茄紅素,薑黃素,咖啡因;葡萄糖胺,軟骨素;褪黑激素,五羥色胺;及其混合物。
所述組合物可以至少包括約0.001%(按所述組合物的重量計)補充組分。或者,所述組合物可以包括約0.001%至約25%,或者約0.01%至約10%,或者約0.1%至約5%(按所述組合物的重量計)的補充組分。
製劑如防腐劑、乳化劑等使用盡可能的最小量以實現添加目的。從數值上來說,其量按重量計約為組合物總重量的0.0005%至0.5%。
在某些實施方案中,所述藥物組合物除了活性成分外還包含藥學上可接受的載體或賦形劑,並且可將其配製成口服劑型(片劑、混懸劑、顆粒劑、乳劑、膠囊、糖漿等)、腸胃外劑型(無菌注射劑、水性或油性懸浮液等)。上文已經提供了藥學上可接受載體的實例。根據該藥物組合物的製劑,可以單獨或組合使用這些載體。
食品或藥品口服給藥的組合物可以製成任何適宜的、可吸收形式。組合物形式的非限制性實例包括:軟咀嚼劑,硬咀嚼劑,咀嚼片劑,營養棒,錠劑,粉劑,顆粒劑,集群(cluster),軟凝膠,類似太妃糖的半固體咀嚼劑,口香糖,可吞服片劑,可吞服膠囊,可吞服囊片,個體單位劑量,使用者可配製形式,及其混合物。例如,單位劑量可以是單一的軟咀嚼劑,也可以是可分割的形式,如棒,使用者可切割或折斷以提供單位劑量。
“軟咀嚼劑”意指在室溫下為固體的產品,並且柔軟可咀嚼,由於該產品在口中咀嚼過程中具有一些塑料的質地,因此,其在功能上具有耐嚼性。
在某些實施方案中,所述組合物不含未結合或添加的水。術語“非結合水”是指不作為所使用組合物成分一部分的水。與此相反,“結合水”是指作為所使用組合物成分一部分的水,例如,可以作為濃縮果汁的一部分。
在某些實施方案中,所述口服組合物可以是糖漿、食物(例如食物棒、餅乾、小吃食品和本領域公知的其他標準食品形式)或飲品或飲料。飲品可包含如上所述的矯味劑、緩衝劑等。
本文所述的組合物可以全身或局部給藥。用於全身給藥時,組合物按照常規方法配製成用於腸胃外(例如,靜脈內、皮下、肌內、腹膜內、鼻內或經皮)或經腸(例如口服或直腸)遞送。靜脈內給藥可通過一系列注射或在延長的一段
時間內通過連續輸注。注射給藥或間隔時間的其他給藥方式可以每週一次到每天三次的間隔時間實施。或者,所述組合物可以按循環方式施用(施用所公開的組合物;接著不施用;隨後施用所公開的組合物;等等)。在所期望的結果實現之前,可繼續進行治療。或者,所述組合物的給藥可以是連續的,因此可以是預防性給藥而不是為了治療而給藥。
優選的情況是,本文所述的組合物為口服給藥的丸劑、片劑、粉劑、棒劑,食品、飲料、錠劑形式等。其他藥物或食品形式如前文所述。此外,本發明的組合物可以為乾燥或粉狀產品,可以在使用前用水或其他適宜的載體重新配製。液體製劑可通過常規方法製備,加入藥學上可接受的添加劑,如懸浮劑(如山梨醇糖漿、纖維素衍生物或氫化食用脂肪);乳化劑(例如,卵磷脂或阿拉伯樹膠);非水載體(如杏仁油、油酯或者分餾的植物油);以及防腐劑(例如,對羥基苯甲酸甲酯或乙酯或山梨酸)。
當以飲料形式施用時,本發明的組合物可以是水基的、乳基的、茶基的、果汁基的或其某種組合。
在某些實施方案中,組合物也可以是經口服的固體形式,通過常規方法製備,使用藥學上可接受的賦形劑,如結合劑(例如,預膠化玉米澱粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素);填充劑(例如,乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣);潤滑劑(例如,硬脂酸鎂、滑石或矽石);崩解劑(例如,馬鈴薯澱粉或澱粉乙醇酸鈉);或潤濕劑(例如,月桂基硫酸
鈉)。該固體可通過本領域熟知的方法進行包衣。在一個優選的實施方案中,本發明的組合物可採取兩片硬殼膠囊、軟明膠膠囊或在液體中溶解用於口服的粉末形式。口服給藥製劑可適當地配製以使活性化合物的釋放得到控制。
口服給藥的組合物可以進一步包括增稠劑,包括黃原膠,羧甲基纖維素,羧乙基纖維素,羥丙基甲基纖維素,甲基纖維素,微晶纖維素,澱粉,糊精,發酵乳清,豆腐,麥芽糊精,多元醇(包括糖醇(如山梨糖醇和甘露糖醇)),糖類(如乳糖),丙二醇藻酸鹽,結冷膠,瓜爾膠,果膠,黃蓍膠,阿拉伯樹膠(gum acacia),刺槐豆膠,阿拉伯膠(gum arabic),明膠,以及這些增稠劑的混合物。這些增稠劑通常包含於濃度高達約0.1%的製劑中,濃度取決於所涉及的特定增稠劑以及所需的黏度效果。
口服給藥的組合物可以、並且通常將包含一種或多種甜味劑(包括碳水化合物甜味劑和天然和/或人工無/低卡路里甜味劑)的有效量。本發明製劑中使用甜味劑的量將有所不同,但通常取決於所使用甜味劑的類型以及所需的甜度。
除了前述製劑外,化合物還可配製成緩釋和/或定時釋放的製劑。常規定時和/或控制釋放遞送系統包括但不僅限於,澱粉、滲透泵或明膠微膠囊。
如有需要,該組合物可存在於包裝或分配器裝置中,其可包括含有本發明組合物的一個或多個單位劑量形式。例如,包裝可以包括金屬或塑料箔,如泡罩包裝。該包裝或分配器裝置可附有施用說明書。
外用和局部應用的本發明組合物的製劑可以包括化妝品上或藥學上合適的載體形式的噴霧劑、洗劑、凝膠和軟膏,其可以包括低級脂族醇、聚乙二醇(如甘油)、聚乙二醇、脂肪酸酯、油和脂肪、以及矽酮。該製劑可進一步包含抗氧化劑(如抗壞血酸或生育酚)以及防腐劑(如對羥基苯甲酸酯)。
腸胃外製劑特別包括無菌或滅菌的產品。
可注射組合物可以含有:地骨皮甲素和地骨皮乙素中至少一種,兩者組合,或包含本發明地骨皮甲素和地骨皮乙素中至少一種的提取物,以及任何已知的可注射載體。這些組合物可以含有用於調節滲透壓的鹽。
其他有用的劑型可通過本領域技術人員熟知的方法和技術來製備,並且可以包括在生產片劑、膠囊或液體劑型中使用額外的成分。雖然本文討論了示例性的劑量、劑量頻率和給藥方法,但是這些僅僅是示例性的,應當理解的是,劑量、給藥頻率和給藥方式可以根據年齡、體重、病情和個體消費者或患者的反應以及本發明使用的特定組合物而有所不同。
分別用80%EtOH、50%EtOH、20%EtOH和水依次提取原料藥地骨皮根皮(1.4kg)四次,每次2小時。合併溶劑並蒸發,然後首先將殘餘物(140g)懸浮於水中,然後依次用石油醚(PE)、乙酸乙酯(EtOAc)、正丁醇(n-BuOH)分別提取。
地骨皮甲素和地骨皮乙素提取方法的一般方案如圖2所示。
HPLC分析表明,地骨皮甲素和地骨皮乙素分別為n-BuOH提取物和水殘餘物的主要組分。
生物測定結果顯示,n-BuOH提取物和水殘餘物對AKP活性有陽性作用。
進行了一項研究,以確定使用地骨皮粗提取物、從地骨皮粗提取物提取的不同餾分以及地骨皮甲素和地骨皮乙素處理後的AKP活性。成骨細胞在分化後顯示出特定的AKP活性。因此,AKP是成骨細胞分化的早期標誌物。
研究使用了人骨肉瘤細胞系Saos-2細胞。Saos-2細胞以5000個細胞/孔的密度接種於96孔板中。將細胞用PBS溶液洗滌兩次,用10ug/ml的化合物處理,並自測試第一天起用含1%FBS的培養基進行培養,處理劑和培養基每3天更換一次。
在培養的第5天進行針對成骨細胞分化的AKP測定。細胞中的AKP使用市售的AKP測定試劑盒測定(Nanjing JiangCheng,China)。通過在37℃下歷時15分鐘時間於520nm處讀取吸收值來檢測樣品。增加的AKP活性%通過下式計算(Hsieh T P,Sheu S Y,Sun J S,et al.,“Icariin isolated from Epimedium pubescens regulates osteoblasts anabolism through BMP-2,SMAD4,and Cbfa1 expression,”Phytomedicine 2010,17(6):414-423;Yin X,Chen Z,Liu Z,et
al.,“Icariine stimulates proliferation and differentiation of human osteoblasts by increasing production of bone morphogenetic protein,”Chin Med 2007,120(3):204):
粗提物、不同餾分以及濃度為10μg/mL的地骨皮甲素和地骨皮乙素給藥後為生物測定指導的活性成分分離和鑑定提供了清晰的線路圖。
具體而言,地骨皮甲素和地骨皮乙素與陰性對照相比,最高分別將Saos-2細胞AKP活性增加115.5%、109%,且優於陽性對照組(柚皮苷),如下面的表1所示。
結果表明,地骨皮甲素和地骨皮乙素可以適用於治療骨質疏鬆症,這通過其對成骨細胞的分化和增殖的促進作用證實。成骨細胞在分化後表現出特定的AKP活性。
進行了一項研究,以確定使用地骨皮粗提取物、地骨皮甲素和地骨皮乙素治療後的AKP活性。成骨細胞在分化後顯示出特定的AKP活性。因此,AKP是成骨細胞分化的另一早期標誌物。
在一天內將源自小鼠顱蓋中的原代成骨細胞以1×105細胞/mL的濃度置於96孔板中。培養基包含α-MEM(含有10%胎牛血清)、100U/ml青黴素和50μg/mL鏈黴素。40ng/mL的BMP-2用作陽性對照。將細胞用PBS溶液洗滌兩次,分別用20μM地骨皮甲素、20μM地骨皮乙素和40μg/ml地骨皮粗提物處理。處理劑和培養基每3天更換一次。在培養的第7天進行針對成骨細胞分化的AKP測定。細胞向培養基中釋放的AKP使用市售的AKP測定試劑盒測定。相對於陽性對照BMP的AKP活性百分率%通過下式計算(Hsieh T P,Sheu S Y,Sun J S,et al.“Icariin isolated from Epimediumpubescens regulates osteoblasts anabolism through BMP-2,SMAD4,and Cbfa1 expression,”Phytomedicine,17(6):414-423(2010)以及Yin X,Chen Z,Liu Z,et al.“Icariine stimulates proliferation and differentiation of human osteoblasts by increasing production of bone morphogenetic protein,”Chin Med,120(3):204(2007)):
結果如表2所示。
如圖3所示,與粗提取物相比,用含20μM地骨皮甲素和地骨皮乙素的處理成骨細胞在培養7天之後顯著增加AKP水平。
結果表明,地骨皮甲素和地骨皮乙素可以適用於治療骨質疏鬆症,這通過其對成骨細胞的分化和增殖的促進作用證實。
因此,前述詳細描述應視為說明性的而非限制性的,並且應當理解,正是以下的申請專利範圍,包括所有等價物,意在定義本發明的精神和範圍。
Claims (28)
- 一種組合物在製備用於改善受試者骨健康的藥物中的用途,其中所述組合物含有有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其中所述組合物增加鹼性磷酸酶的活性。
- 一種組合物在製備用於刺激或增加受試者骨生長和強度的藥物中的用途,其中所述組合物含有有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其中所述組合物增加鹼性磷酸酶的活性。
- 一種組合物在製備用於治療或預防受試者骨疾病或病症的藥物中的用途,其中所述組合物含有有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其中所述組合物增加鹼性磷酸酶的活性。
- 一種組合物在製備用於治療或預防受試者骨質疏鬆症的藥物中的用途,其中所述組合物含有有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其中所述組合物增加鹼性磷酸酶的活性。
- 一種組合物在製備用於促進受試者成骨細胞的增殖和分化的藥物中的用途,其中所述組合物含有有效量的地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其中所述組合物增加鹼性磷酸酶的活性。
- 如請求項1-5中任一項所述的用途,其中所述組合物進一步包含一種或多種賦形劑、防腐劑、增溶劑、緩衝劑、 白蛋白、潤滑劑、填充劑、穩定劑、著色劑、矯味劑、甜味劑或其混合物。
- 如請求項1-5中任一項所述的用途,其中所述組合物被配製用於口服施用。
- 如請求項1-5中任一項所述的用途,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種的有效量為約0.01-1000mg。
- 如請求項1-5中任一項所述的用途,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種構成該組合物的約1-99% w/w。
- 如請求項1-5中任一項所述的用途,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種構成該組合物的約10-75% w/w。
- 如請求項1-5中任一項所述的用途,其中地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種構成該組合物的約50% w/w。
- 一種地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種在製備用於改善受試者骨健康的藥物中的用途,其中所述地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種增加鹼性磷酸酶的活性。
- 一種地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種在製備用於刺激或增加受試者骨生長和強度的藥物中的用途,其中所述地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種增加鹼性磷酸酶的活性。
- 一種地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種在製備用於治療或預防受試者骨疾病或病症的藥物中的用途,其 中所述地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種增加鹼性磷酸酶的活性。
- 一種地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種在製備用於治療或預防受試者骨質疏鬆症的藥物中的用途,其中所述地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種增加鹼性磷酸酶的活性。
- 一種地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種在製備用於促進受試者成骨細胞的增殖和分化的藥物中的用途,其中所述地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種增加鹼性磷酸酶的活性。
- 如請求項1-5中任一項所述的用途,其中所述藥物是使用作為膳食補充劑。
- 如請求項17所述的用途,其中該膳食補充劑進一步包含一種或多種賦形劑、防腐劑、增溶劑、緩衝劑、白蛋白、潤滑劑、填充劑、穩定劑、著色劑、矯味劑、甜味劑或其混合物。
- 如請求項17所述的用途,其中所述膳食補充劑被配製用於口服施用。
- 如請求項17所述的用途,其中所述地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種的量為約0.01-1000mg。
- 如請求項17所述的用途,其中所述地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種構成該補充劑的約1-99% w/w。
- 如請求項17所述的用途,其中所述地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種構成該補充劑的約10-75% w/w。
- 如請求項17所述的用途,其中所述地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種構成該補充劑的約50% w/w。
- 一種組合物在製備用於改善骨健康的藥物中的用途,其中所述組合物含有地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其中所述地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種的有效量為約0.01-1000mg。
- 一種組合物在製備用於刺激或增加骨生長和/或強度的藥物中的用途,其中所述組合物含有地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其中所述地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種的有效量為約0.01-1000mg。
- 一種組合物在製備用於促進成骨細胞增殖和分化的藥物中的用途,其中所述組合物含有地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其中所述地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種的有效量為約0.01-1000mg。
- 一種組合物在製備用於治療或預防骨疾病或病症的藥物中的用途,其中所述組合物含有地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種,其中所述地骨皮甲素和地骨皮乙素中的至少一種的有效量為約0.01-1000mg。
- 如請求項27之用途,其中所述骨疾病或病症為骨質疏鬆症。
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