TWI727211B - 紅菽草萃取物用於提升玻尿酸合成酶之基因表現量的用途 - Google Patents
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Abstract
本發明提供一種紅菽草萃取物用於提升尿酸合成酶之基因表現量的用途,能增加皮膚含水量及減少皮膚皺紋,以使皮膚形成更多保濕因子,並維持角質層結構完整,以提升皮膚屏障功能。其中該紅菽草萃取物係紅菽草以水、醇、或醇水混合物之溶劑所萃取而得。
Description
本發明係關於一紅菽草萃取物之用途,尤其是一種紅菽草萃取物用於提升玻尿酸合成酶之基因表現量的用途。
表皮層為皮膚的最外層,由外往內依序為角質層、顆粒層、有棘層及基底層,表皮層主要由基底層中未分化之圓柱型角質細胞持續向上進行分化形成,此過程稱為角質化。角質細胞內含水量高,隨著細胞向上代謝分化,角質細胞形狀會逐漸變成扁平狀,且細胞核及胞器開始退化萎縮,並在角質層形成不具細胞核與胞器之死細胞。表皮層的主要功能為使皮膚保水,並形成皮膚屏障以抵禦各種外來傷害,其中表皮層最外層由一弱酸性的皮脂膜以及如磚牆結構的角質層所構成,此屏障能鎖住皮膚的水分和油脂、抵抗皮膚表面病菌入侵,及對抗外界異物及紫外光等傷害,對人體有非常重要的保護作用。
表皮層中的角質層,其角質細胞雖然為死細胞,但其主要成分為角蛋白(keratin),角蛋白能吸收水分使皮膚保持濕潤,角質細胞也會分泌如玻尿酸等物質作為細胞間質,以維持表皮層皮膚屏障之結構完整,以防止皮膚水分散失及形成完整防護。當皮膚接觸過冷或過熱之環境以及照射紫外光等刺激,會導致角質細胞無法維持正常的代謝循環,且皮膚保水能力也會下降,並 導致皮膚表皮層屏障受損,讓皮膚變得粗糙、乾燥脫屑、脆弱易受刺激、敏感泛紅,因此角質層的健康與保水能力對於抵禦外來傷害著實非常重要。
綜合上面所述,為了改善因角質細胞受損及保水能力下降,導致皮膚變得脆弱、易敏的問題,開發一種能有效使角質細胞分泌更多保濕因子,並維持角質細胞排列、維持角質層結構完整,以提升皮膚屏障功能之組成物,著實有其必要性。
緣此,本發明之一目的在提供一種紅菽草萃取物用於製備提升玻尿酸合成酶(Hyaluronan synthase,HAS)基因表現量之組合物的用途,其中該紅菽草萃取物係以一溶劑萃取一紅菽草所獲得,該溶劑為水、醇、或醇水混合物。
在本發明之一實施例中,該溶劑與該紅菽草之重量比為5~20:1~5,且該萃取步驟係在50℃~100℃進行。
在本發明之又一實施例中,該玻尿酸合成酶基因為玻尿酸合成酶2(Hyaluronan synthase 2,HAS2)基因。
在本發明之又一實施例中,該紅菽草萃取物的濃度為至少0.0039mg/mL。
在本發明之另一實施例中,該紅菽草萃取物係提升皮膚保濕能力,以及減少皮膚皺紋。
本發明以水、醇類、或醇水混合物為溶劑所萃取得之紅菽草萃取物,能有效提升角質細胞中合成玻尿酸之HAS2基因的表現量,並能有效增加皮膚含水量及減少皺紋,以使皮膚形成更多保濕因子,並維持角質層結構完整,以提升皮膚屏障功能。因此,本發明之紅菽草萃取物可用於製備提升皮膚保濕能力之組合物的用途,該組合物可為粉末狀、顆粒狀、液狀、膠狀或膏狀, 且可製成食品、飲品、藥品、試劑或營養補充劑,藉由口服、皮膚塗抹等方式給予一個體。
圖1係為本發明之紅菽草萃取物提升HAS2基因表現量之效果的長條圖。** p<0.01。
圖2係為本發明之紅菽草萃取物提升皮膚含水量之效果的長條圖。* p<0.05;## p<0.01。
圖3係為本發明之紅菽草萃取物減少皮膚皺紋之效果的長條圖。
本文中所使用數值為近似值,所有實驗數據皆表示在20%的範圍內,較佳為在10%的範圍內,最佳為在5%的範圍內。
本發明提供一種紅菽草萃取物用於製備提升玻尿酸合成酶(Hyaluronan synthase,HAS)基因表現量之組合物的用途,本發明之紅菽草萃取物係以一溶劑萃取一紅菽草所獲得,該溶劑為水、醇、或醇水混合物,其可用於增加皮膚含水量及減少皮膚皺紋。
同時,本發明用於製備提升角質細胞中HAS基因表現量之組合物,亦可包含一有效量之紅菽草萃取物及一醫藥上可接受之載體,該組合物係以粉末狀、顆粒狀、液狀、膠狀或膏狀之劑型存在,且其劑型係以食品、飲品、藥品、試劑或營養補充劑之形式提供。
以下將詳細說明本發明紅菽草萃取物之詳細萃取方法,與該紅菽草萃取物於調控角質細胞中TGM1基因、KRT1基因、KRT10基因、KRT14基因、AQP3基因、FLG基因、SMAD1基因、GBA基因、HAS2基因、及HAS3基因表 現量之測試、以及增加皮膚保水度與減少皺紋之測試,以證實該紅菽草萃取物對於提升HAS基因表現量、以及增加皮膚含水量及減少皮膚皺紋之效果。
紅菽草(Trifolium pratense)係為豆科(Fabaceae)菽草屬(Trifolium)之多年生草本植物,原產於歐洲及亞洲北部,台灣早期引進作為牧草、水土保持植物,偶爾也供栽植觀賞。紅菽草莖為直立或斜上升莖,長約15-65公分,具有分枝及散生絨毛;葉則為三出複葉,呈卵形、倒卵形或長橢圓形,長約1.5-3公分,寬則為0.5-2公分;花為粉紅色且密集生長,其排列為一頭狀花序。紅菽草具有清熱止咳、消腫之功效。
在本發明一實施例中,將紅菽草整株清洗,取洗淨後之紅菽草整株與水之萃取溶劑以5-20:1-5之重量比混合,在溶劑中進行萃取0.5-3小時後。萃取後冷卻至室溫,將該粗萃取物經由0.45-0.2 micron之濾網過濾以獲得濾液。最後,將該濾液於45-70℃進行減壓濃縮並加入防腐劑,得到本發明之紅菽草萃取物。
本發明以人類初代皮膚角質細胞(human primary epidermal keratinocytes,HPEK)進行本發明之紅菽草萃取物調控TGM1基因、KRT1基因、KRT10基因、KRT14基因、APQ3基因、FLG基因、SMAD1基因、GBA基因、HAS2基因、及HAS3基因表現量之分析。該人類初級皮膚角質細胞購自CELLnTEC公司(瑞士)編號HPEK-50,將該細胞培養於無血清之角質細胞培養液(keratinocyte-SFM)(Gibco公司,編號為#17005042,美國),並於含有5% CO2之37℃細胞培養箱中進行培養。
將人類初代角質細胞分成兩組:(1)加入0.0039mg/mL本發明之紅菽草萃取物的實驗組以及(2)僅含有細胞培養液之控制組作用24小時,接著將角質細胞以細胞裂解液(RB buffer,購自Geanaid公司,臺灣,Cat No.RBD300)回收細胞後,使用RNA萃取試劑套組(購自Geneaid公司,臺灣,Cat No.RBD300)分別收集兩組細胞內之RNA,接著利用SuperScript® III反轉錄酶(購自Invitrogene公司,美國,編號18080-051)以2000ng之萃取RNA為模板並以引子產生mRNA反轉錄之相應cDNA產物,接著利用ABI StepOnePlusTM Real-Time PCR system(Thermo Fisher Scientific公司,美國),以及KAPA SYBR FAST(購自Sigma公司,美國,編號38220000000)將兩組反轉錄後產物分別以表一之組合引子進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應(quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction)試驗,條件為95℃反應1秒,60℃反應20秒,總共40個迴圈。用以定量TGM1基因、KRT1基因、KRT10基因、KRT14基因、AQP3基因、FLG基因、SMAD1基因、GBA基因、HAS2基因、及HAS3基因之mRNA表現量,其中定量數值係取由閾值循環數(Ct),而目標基因的mRNA相對量係推導自方程式2-△Ct,其中△Ct=Ct目標基因-CtACTB(β-肌動蛋白,beta-actin),再利用Excel軟體進行非成對單尾student t-test以決定變異係數與是否在統計上具有顯著差異(*p值<0.05;**p值<0.01;***p值<0.001)。
本發明之紅菽草萃取物提升HAS2基因表現量之結果如圖1所示。其中玻尿酸合成酶(Hyaluronan synthase,HAS)會促進角質細胞分泌玻尿酸的能力,並使皮膚角質層結構完整且提升皮膚屏障功能,能使皮膚保水力提升。人類初代角質細胞經本發明之紅菽草萃取物處理後,HAS2基因表現量為控制組之1.3倍,TGM1基因、KRT1基因、KRT10基因、KRT14基因、AQP3基因、FLG基因、SMAD1基因、GBA基因、及HAS3則與控制組差異不大,此結果顯示本發明之紅菽草萃取物係藉由提高HAS2基因的表現量,而有效提高玻尿酸的合成,並使皮膚保濕能力上升。
為證實本發明之紅菽草萃取物於增加皮膚含水量及減少皺紋產生之功效,首先,製備添加2%紅菽草萃取物之2%紅菽草精華液;以及不含紅菽草萃取物的精華液作為對照組精華液,其中該精華液成分皆為水、馨鲜酮、己二醇、1,3-丁二醇、三仙膠、增稠劑以及三乙醇胺。接著,募集8位受試者,每位受試者於每日早晚清洗完臉部後,將控制組精華液、含本發明之紅菽草萃取物精華液分別使用於左右半臉之肌膚,並以指腹稍加按摩促進吸收,於使用前與使用後4週以VISIA肌膚檢測儀(CIS-VISIA.7 VISIA Complexion Analysis System,Canfield scientific,美國,序號V71214)進行皮膚含水量及紋路之膚質檢測,其中以VISIA膚質檢測儀進行皮膚紋路檢測,係利用高解析單眼相機搭配三種光源(全光域波長、紫外光及偏光波域的光源),拍攝臉部肌膚,取得清晰圖檔後,利用專業軟體進行紋路分析;含水量檢測則係以CK Cutometer® dual MPA 580多探頭膚質分析儀(CK electronic,德國)進行測定,利用電容測量來測量皮膚水合作用的狀態,其中係利用探頭按壓皮膚進行測量。
本發明之紅菽草萃取物於增加皮膚含水量之結果如圖2所示;於減少皺紋產生之實驗結果如圖3所示。使用含本發明之紅菽草萃取物之精華液後,比使用前提高了皮膚含水量25.8%,未含本發明之紅菽草萃取物之控制組僅提高10%;而使用含本發明之紅菽草萃取物之精華液後,比使用前減少了皮膚紋路深度12.8%,未含本發明之紅菽草萃取物之控制組反而上升20.7%。此二結果顯示本發明之紅菽草萃取物能有效提高皮膚含水量及減少皮膚皺紋深度,具有提升皮膚保濕能力之效果。
綜上所述,本發明之紅菽草萃取物,能有效提升角質細胞中合成玻尿酸之HAS2基因的表現量,並能有效增加皮膚含水量及減少皺紋,以使皮膚形成更多保濕因子,並維持角質層結構完整,以提升皮膚屏障功能。因此, 本發明之紅菽草萃取物可用於製備提升皮膚保濕能力之組合物的用途,該組合物可為粉末狀、顆粒狀、液狀、膠狀或膏狀,且可製成食品、飲品、藥品、試劑或營養補充劑,藉由口服、皮膚塗抹等方式給予一個體。
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<120> 紅菽草萃取物用於提升提升玻尿酸合成酶之基因表現量的用途
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- 一種紅菽草萃取物用於製備提升玻尿酸合成酶(Hyaluronan synthase,HAS)基因表現量之組合物的用途,其中該紅菽草萃取物係以一溶劑萃取一紅菽草所獲得,該溶劑為水,且該玻尿酸合成酶基因為玻尿酸合成酶2(Hyaluronan synthase 2,HAS2)基因,該紅菽草萃取物係提升該玻尿酸合成酶2(HAS2)基因表現量提高玻尿酸的合成。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途,其中該紅菽草萃取物係以水萃取一紅菽草全植株所獲得。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途,其中該溶劑與該紅菽草之重量比為5~20:1~5。
- 如申請專利範圍第1項或第2項所述之用途,其中該萃取溫度係50℃-100℃。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途,其中該紅菽草萃取物的濃度為至少0.0039mg/mL。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途,其中該紅菽草萃取物係提升皮膚保濕能力。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途,其中該紅菽草萃取物係減少皮膚皺紋。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途,其中該組合物進一步包含一皮膚上可接受之載體。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途,其中該組合物之形式為粉末狀、顆粒狀、液狀、膠狀或膏狀之劑型。
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