TWI718431B - 蛀牙因子檢測試片、檢測方法及檢測裝置 - Google Patents

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一種蛀牙因子檢測試片包含承載件以及設於承載件上之蛀牙因子檢測基改細菌,其中蛀牙因子檢測基改細菌為已轉殖有第一質體與第二質體之枯草芽孢桿菌及/或已轉殖有第三質體之大腸桿菌,其中第一質體與第二質體已分別接有第一合成基因與第二合成基因,藉以使得枯草芽孢桿菌接觸感受態刺激肽時產生反應後表達第一螢光蛋白,其中第三質體係已轉殖有黏接之第三合成基因與第四合成基因,藉以使得大腸桿菌接觸乳酸時產生反應後表達第二螢光蛋白。本發明更揭露一種蛀牙因子檢測方法及裝置,藉以檢測蛀牙因子之濃度,以評估蛀牙風險。

Description

蛀牙因子檢測試片、檢測方法及檢測裝置
本發明是有關於一種檢測試片、檢測方法及檢測裝置,特別是有關於一種利用基改細菌之發螢光機制來偵測唾液中蛀牙因子量的檢測試片、檢測方法及檢測裝置。
根據世界衛生組織的評估,全世界近所有成年人在某程度上都患有齲齒的問題,而臺灣罹患蛀牙的比例更高達99.2%。齲齒在初期階段,無痛也無特殊症狀,因此常被患者忽略,往往要到病情嚴重時才會感到疼痛,但此時症狀可能已嚴重到需要植牙,患者可能面臨到耗時且耗費金錢的治療療程。
蛀牙雖然不會立即性危害人體,但是隨著病灶加重,仍會影響患者生活品質,更甚者會造成身體機能下降。雖然大多臺灣民眾已有基本的牙齒保健知識,但是仍有民眾因為牙醫與民眾的供需不平衡、難以預約看診、住家交通位置不便、或者是工作生活忙碌等因素,無法定期做牙齒健康檢測,而造成蛀牙發生。
有鑑於上述習知技藝之問題,本發明之一目的就是在提供一種蛀牙因子檢測試片、檢測方法及檢測裝置,以解決民眾無法定期檢測牙齒健康而易造成齲齒的問題。
為達前述目的,本發明提出一種蛀牙因子檢測試片,至少包含:至少一承載件;以及至少一蛀牙因子檢測基改細菌設於承載件上,其中蛀牙因子檢測基改細菌為已轉殖有第一質體與第二質體之枯草芽孢桿菌及/或已轉殖有第三質體之大腸桿菌,其中第一質體與第二質體已分別接有第一合成基因與第二合成基因,藉以使得枯草芽孢桿菌接觸感受態刺激肽(CSP)時產生反應後表達第一螢光蛋白,其中第三質體係已轉殖有黏接之第三合成基因與第四合成基因,藉以使得大腸桿菌接觸乳酸時產生反應後表達第二螢光蛋白。
在本發明之一些實施例中,第一合成基因係常態表達啟動子接ComE及ComD基因,第二合成基因係comE反應啟動子接第一螢光蛋白基因,第三合成基因係LldPRD操縱子之啟動子接第二螢光蛋白基因,第四合成基因係常態表達啟動子接LldR基因。
本發明更提出一種蛀牙因子的檢測方法,包含下列步驟:將第一合成基因與第二合成基因分別接入第一質體與第二質體;將第一質體與第二質體同時轉殖進枯草芽孢桿菌中,藉以使得枯草芽孢桿菌接觸感受態刺激肽(CSP)時產生反應後表達第一螢光蛋白;以及檢測第一螢光蛋白所發散之螢光強度,藉以獲得感受態刺激肽(CPS)之濃度。
在本發明之一些實施例中,本發明之蛀牙因子的檢測方法,更包含下列步驟:將第三合成基因與第四合成基因黏接後再轉殖進第三質體中;將第三質體轉殖進大腸桿菌中,藉以使得大腸桿菌接觸乳酸時產生反應後表達第二螢光蛋白;以及檢測第二螢光蛋白所發散之螢光強度,藉以獲得乳酸之濃度。
在本發明之一些實施例中,第一合成基因係常態表達啟動子接ComE及ComD基因,第二合成基因係comE反應啟動子接第一螢光蛋白基因,第三合成基因係LldPRD操縱子之啟動子接第二螢光蛋白基因,第四合成基因係常態表達啟動子接LldR基因。
本發明還提出一種蛀牙因子檢測裝置,至少包含:一基座,其上設有一轉動裝置及一固定裝置;一玻片架,玻片架可拆式設於固定裝置上,其中玻片架包含一架體、一隔板設於架體之底部及至少兩檢測試片分設於隔板之兩側,其中轉動裝置係於一預定時間令固定裝置轉動至少一角度,藉以釋出回溶液至兩檢測試片上;一容器,容器係盛裝待測試液,藉以使得兩檢測試片經由毛細現象吸起待測試液;以及一螢光感測系統,藉由發出激發光分別照射兩檢測試片,以感測兩檢測試片所發出的螢光強度。
在本發明之一些實施例中,本發明之蛀牙因子檢測裝置更包含一電子裝置接收螢光感測系統所測得之螢光強度之數據。
在本發明之一些實施例中,預定時間係經由電子裝置設定。
在本發明之一些實施例中,玻片架之架體具有一定位孔,固定裝置係具有一彈簧復位桿用以選擇性卡固架體之定位孔。
在本發明之一些實施例中,本發明之蛀牙因子檢測裝置更包含一升降裝置,升降裝置係承載容器,以藉由升起升降裝置而令容器中之待測試液接觸兩檢測試片。
承上所述,依本發明之蛀牙因子檢測試片、檢測方法及檢測裝置,其可具有一或多個下述優點:
(1) 藉由本發明之蛀牙因子檢測試片、檢測方法及檢測裝置,可以讓民眾以居家檢測方式自行評估蛀牙風險,來達到定期觀察且追蹤口腔狀況之目的。
(2) 利用基因改造細菌與感受態刺激肽(competence-stimulating peptide,CSP)及/或乳酸產生反應,來啟動下游螢光蛋白基因來表達螢光蛋白,再以激發光激發螢光蛋白,並檢測螢光強度,搭配已知濃度的CSP及/或乳酸的標準曲線,可以推得唾液中CSP及/或乳酸的濃度,以令使用者自行評估蛀牙風險。
(3) 本發明的蛀牙因子檢測裝置,更可以搭配使用酸鹼度試紙,藉由將酸鹼度試紙設於玻片架上,可以於檢測CSP及/或乳酸的濃度時,一併檢測唾液的pH值,提供酸鹼度評估的數據參考。
(4) 透過冷凍乾燥程序,可以讓本發明的蛀牙因子檢測試片易於儲存,並能夠保存很長的時間。當使用者欲進行檢測前,可以先將檢測試片置於檢測裝置的玻片架中,並透過手機等電子裝置來設定欲檢測時間,讓玻片架上的回溶液可以提前數小時流至檢測試片,以活化檢測試片上的基改細菌。因此,使用者可以在欲檢測時間來臨時,將唾液置於檢測裝置中的的容器內,透過毛細現象而讓唾液與檢測試片接觸,使得唾液中的CSP及乳酸可以與檢測試片上的基改細菌進行反應而表達螢光蛋白。最後透過螢光感測系統來量測螢光蛋白量,以推知唾液中CSP及/或乳酸的濃度值,藉以評估使用者的齲齒程度。
茲為使鈞審對本發明的技術特徵及所能達到的技術功效有更進一步的瞭解與認識,謹佐以較佳的實施例及配合詳細的說明如後。
為利瞭解本創作之技術特徵、內容與優點及其所能達成之功效,茲將本創作配合圖式,並以實施例之表達形式詳細說明如下,而其中所使用之圖式,其主旨僅為示意及輔助說明書之用,未必為本創作實施後之真實比例與精準配置,故不應就所附之圖式的比例與配置關係解讀、侷限本創作於實際實施上的權利範圍。此外,為使便於理解,下述實施例中的相同元件係以相同的符號標示來說明。且圖式所示的組件的尺寸比例僅為便於解釋各元件及其結構,並非用以限定。
另外,在全篇說明書與申請專利範圍所使用的用詞,除有特別註明外,通常具有每個用詞使用在此領域中、在此揭露的內容中與特殊內容中的平常意義。某些用以描述本創作的用詞將於下或在此說明書的別處討論,以提供本領域技術人員在有關本創作的描述上額外的引導。
關於本文中如使用“第一”、“第二”、“第三”等,並非特別指稱次序或順位的意思,亦非用以限定本創作,其僅僅是為了區別以相同技術用語描述的組件或操作而已。
其次,在本文中如使用用詞“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等,其均為開放性的用語,即意指包含但不限於。
於蛀牙的過程中,主要由兩大類細菌所主導,前期(尚未侵蝕到牙本質)主要為鏈球菌(以轉醣鏈球菌,Streptococcus mutans ,為主要菌種,簡稱為S. mutans )會貼附在牙齒表面形成牙菌斑,後期(已經侵蝕到牙本質)則主要由乳酸桿菌所主導,造成進一步的侵蝕。本發明藉由檢測S. mutans 以及乳酸桿菌於口腔內的生存狀況,以了解口腔內面臨蛀牙的風險。
於每次清洗牙齒完畢後,口中的細菌會隨著進食提供糖分等緣故,口腔中的細菌會逐漸增加,某些前驅細菌便會開始黏附在牙齒表面,造成牙齒表面不平滑而易使其他細菌沾附在牙齒表面,此時S. mutans 就可以沾附到牙齒上。於S. mutans 開始沾附上牙齒,其為要增強其生存能力便會運用一種稱為群聚效應之程序來驅逐非本族之細菌。S. mutans 利用一種溝通因子,名為感受態刺激肽(competence-stimulating peptide,CSP),此溝通因子會引導S. mutans 產生生物膜,慢慢的便會形成牙菌斑。本發明藉由檢測唾液中CSP的含量,來推估牙齒上S. mutans 產生生物膜的情況,藉以供使用者評估自身的蛀牙風險。
本發明之蛀牙因子的檢測方法至少包含下列步驟:將第一合成基因與第二合成基因分別接入第一質體與第二質體;將第一質體與第二質體同時轉殖進枯草芽孢桿菌中,藉以使得枯草芽孢桿菌接觸感受態刺激肽(CSP)時產生反應後表達第一螢光蛋白;以及檢測第一螢光蛋白所發散之螢光強度,藉以獲得感受態刺激肽(CPS)之濃度。
在本發明之一些實施例中,本發明之蛀牙因子的檢測方法更可以包含下列步驟:將第三合成基因與第四合成基因黏接後再轉殖進第三質體中;將第三質體轉殖進大腸桿菌中,藉以使得大腸桿菌接觸乳酸時產生反應後表達第二螢光蛋白;以及檢測第二螢光蛋白所發散之螢光強度,藉以獲得乳酸之濃度。
詳細來說,本發明檢測CSP濃度的作用機制請參閱圖1。如圖1所示,首先,合成兩段合成基因(即第一合成基因10及第二合成基因20),第一合成基因10為常態表達啟動子接ComE及ComD基因,第二合成基因20為comE反應啟動子接第一螢光蛋白基因21。將第一合成基因10接入第一質體,第一質體可例如為pSBBS 1C(詳見序列表SEQ ID NO:1),而將第二合成基因20接入第二質體,第二質體可例如為pSBBS 4S(詳見序列表SEQ ID NO:2)。隨後將第一質體及第二質體同時轉殖進枯草芽孢桿菌中。經轉殖進枯草芽孢桿菌中的第一合成基因10會於枯草芽孢桿菌中產生可以接受CSP分子的接受器comD,此蛋白為跨膜蛋白。當環境中(例如所接觸到的唾液)存在有CSP時,則另一個轉殖之基因comE所產生之蛋白comE,會與接收到CSP之comD產生能量之轉移,促使comE磷酸化。磷酸化之comE會啟動下游基因之啟動子,經由轉錄轉譯之過程而讓第一螢光蛋白基因21產生綠色螢光蛋白。利用此綠色螢光蛋白可以發散特定波長之特性,可以利用螢光感測系統等光學儀器來分析CSP的濃度含量。
而檢測乳酸桿菌的作用機制則請參閱圖2。如圖2所示,首先,合成兩段合成基因(即第三合成基因30及第四合成基因40),第三合成基因30為LldPRD操縱子之啟動子接第二螢光蛋白基因31,第四合成基因40為常態表達啟動子接LldR基因。將第三合成基因30及第四合成基因40以限制酶黏接後,再接入第三質體中,第三質體可例如為pSB1A2(詳見序列表SEQ ID NO:3)。隨後將第三質體轉殖進大腸桿菌中。由於LldR基因會不斷的產生LldR直到細菌本身的系統已達平衡狀態,並於所設計之下游基因之啟動子作用產生結構上之改變,以至於下游基因無法做轉錄轉譯,使下游基因(第二螢光蛋白基因31)之產物綠色螢光蛋白無法表達。而當環境中(例如所接觸到的唾液)存在有乳酸(L-lactate)時,LldR便會與乳酸結合,暫時性使第二螢光蛋白基因31可以進行轉錄轉譯,使其可以產生綠色螢光蛋白,利用此綠色螢光蛋白可以發散特定波長之特性,可以利用螢光感測系統等光學儀器來分析乳酸的濃度含量。
透過上述兩種作用機制,可以用來作為CSP及乳酸濃度的檢測原理。且本發明將蛀牙因子檢測基改細菌藉由塗抹等方式設置於承載件上,搭配後文提及的檢測裝置及方法,可以輕易地達到居家檢測牙齒健康程度之目的。
請參閱圖3,圖3為本發明之蛀牙因子檢測試片之剖面示意圖。如圖3所示,本發明之蛀牙因子檢測試片100至少包含:至少一承載件70;以及至少一蛀牙因子檢測基改細菌50設於承載件70上。其中,蛀牙因子檢測基改細菌50為已轉殖有第一質體與第二質體之枯草芽孢桿菌及/或已轉殖有第三質體之大腸桿菌,其中第一質體與第二質體已分別接有第一合成基因與第二合成基因,藉以使得枯草芽孢桿菌接觸感受態刺激肽(CSP)時產生反應後表達第一螢光蛋白。第三質體係已轉殖有黏接之第三合成基因與第四合成基因,藉以使得大腸桿菌接觸乳酸時產生反應後表達第二螢光蛋白。第一螢光蛋白及第二螢光蛋白的表達機制請參閱前文所述的檢測CSP濃度及乳酸桿菌的作用機制,在此不多贅述。
在本發明之一些實施例中,蛀牙因子檢測基改細菌50可例如與培養液60等適當的液體一併塗抹於承載件70上。承載件70可例如為試紙等具吸水性的試片。如圖3所示,蛀牙因子檢測基改細菌50可均勻地散布於培養液60中,並單面塗抹於承載件70上。在其他實施例中,使用者也可以視實際需求將蛀牙因子檢測基改細菌50連同培養液60雙面地塗抹於承載件70上。將蛀牙因子檢測基改細菌50連同培養液60塗抹於承載件70後,再經冷凍乾燥,可以讓試片以及蛀牙因子檢測基改細菌50易於儲存且能夠長時間保存。
另外,本發明還提出一種蛀牙因子檢測裝置D。請參閱圖4,圖4為本發明之蛀牙因子檢測裝置之立體示意圖。如圖4所示,本發明之蛀牙因子檢測裝置至少包含:一基座S,其上設有轉動裝置R及固定裝置F;一玻片架H,玻片架H可拆式設於固定裝置F上,其中玻片架H包含架體H1、隔板H2設於架體H1之底部及至少兩檢測試片H3分設於隔板H2之兩側,其中轉動裝置R係於一預定時間令固定裝置F轉動至少一角度,藉以釋出回溶液(relieve liquid)至兩檢測試片H3上;一容器C,容器C係盛裝待測試液,藉以使得兩檢測試片H3經由毛細現象吸起待測試液;以及一螢光感測系統P,藉由發出激發光分別照射兩檢測試片H3,以感測兩檢測試片H3所發出的螢光強度。
基座S可例如為內有容置空間之一殼體,藉以容納轉動裝置R、固定裝置F、玻片架H、容器C、螢光感測系統P以及後文將提及的升降裝置B。基座S之外表面或內表面可貼附有黑色吸光紙,藉以阻絕外界光線,避免外界光線影響螢光強度的量測。基座S可設有一可啟閉之置物口,以方便使用者將玻片架H置入以及取出。
如圖5所示,玻片架H可例如包含有架體H1、隔板H2設於架體H1之底部及至少兩檢測試片H3分設於隔板H2之兩側。隔板H2可例如為一字型或者是T型隔板。若是檢測試片H3之數量為二,則可以選用一字型的隔板H2;而若是檢測試片H3之數量為三,則可以選用T字型的隔板H2。請參閱圖6,檢測試片H3可例如由兩透明玻片H31、一圓柱管H32及試片所組成,此試片可例如為前述之蛀牙因子檢測試片100或者是酸鹼度試紙,藉由將試片置於兩透明玻片H31之夾層間,可以固定試片且能夠避免試片汙染(見圖6)。兩透明玻片H31之間隙可例如為0.33+ 0.1 mm,但不限定於此。使用者可以將設有蛀牙因子檢測基改細菌50之蛀牙因子檢測試片100以及酸鹼度試紙分別設置於不同的透明玻片H31之夾層間,且可以依據蛀牙因子檢測試片100及酸鹼度試紙的厚度調整改變兩透明玻片H31之間隙。
舉例來說,於一實施例中,若是欲檢測CSP及乳酸濃度,可以將具有已轉殖有第一質體與第二質體之枯草芽孢桿菌的蛀牙因子檢測試片100以及具有已轉殖有第三質體之大腸桿菌的蛀牙因子檢測試片100分別置於兩組不同的透明玻片H31之夾層間,且搭配使用一字型隔板H2,以避免兩蛀牙因子檢測試片100所產生的螢光蛋白互相干擾。於另一實施例中,若是欲檢測CSP、乳酸濃度以及pH值,可以將具有已轉殖有第一質體與第二質體之枯草芽孢桿菌的蛀牙因子檢測試片100、具有已轉殖有第三質體之大腸桿菌的蛀牙因子檢測試片100以及酸鹼度試紙分別置於三組不同的透明玻片H31之夾層間,且將此三組透明玻片H31以ㄇ字型排列,搭配使用T字型隔板H2,可以避免兩個蛀牙因子檢測試片100所產生的螢光蛋白互相干擾。且藉由轉動裝置R來將固定裝置F轉動特定角度(例如90度),則可以帶動玻片架H連同檢測試片H3一併轉動,以便於逐一檢測CSP、乳酸濃度以及pH值。
在本發明之一些實施例中,玻片架H之架體H1可例如具有一定位孔H4,固定裝置F可例如具有一彈簧復位桿F1用以選擇性卡固架體H1之定位孔H4。請參閱圖5,藉由移動彈簧復位桿F1,使得彈簧復位桿F1之前端與固定裝置F之內壁產生一間隙,再將架體H1置於此間隙中,且讓彈簧復位桿F1之前端穿設於架體H1之定位孔H4中,隨後鬆開彈簧復位桿F1,即可讓架體H1穩固地與固定裝置F結合在一起。而在檢測完畢後,也可以將架體H1透過同樣方式與固定裝置F分離開來,以便更換試片。在本發明中,整個玻片架H為一種可拋棄式的消耗性材料,方便使用者取用檢測。
另外,圓柱管H32可設置於兩透明玻片H31以及試片之上方,圓柱管H32可例如為中空圓柱管,其內可裝設回溶液。回溶液可例如為LB培養基(Lysogeny broth),但不限定於此。圓柱管H32內徑可例如為2 mm,但不限定於此。另外,在圓柱管H32前端更可以設置有封口件H33。封口件H33可例如為熱熔膠,但不限定於此。在轉動裝置R帶動固定裝置F轉動時,可以一併帶動檢測試片H3轉動,且因為在基座S內可以額外設置一凸塊(凸塊的設置位置對應於封口件H33的高度),因此當檢測試片H3轉動時,封口件H33會被凸塊推動而掉落(即與圓柱管H32分離開來),此時圓柱管H32內的回溶液受重力而朝下流動至蛀牙因子檢測試片100,藉以活化蛀牙因子檢測試片100上的枯草芽孢桿菌及/或大腸桿菌。
於一實施例中,在蛀牙因子檢測試片100與回溶液反應後約數小時(例如4小時),即可以開始進行唾液中CSP及/或乳酸濃度的檢測。因此,使用者可以透過計時裝置來讓轉動裝置R能夠在欲檢測時間(例如早上8點)前數小時(例如4小時)作動,使得回溶液可以預先活化蛀牙因子檢測試片100上的大腸桿菌及/或枯草芽孢桿菌(即在清晨4點時讓回流液流至試片),以便使用者能夠在早上起床後檢測第一口唾液(未盥洗前),以確實評估蛀牙風險。
在本發明之一些實施例中,預定時間可例如經由手機等電子裝置E來進行設定。舉例來說,使用者可以透過手機來設定欲檢測時間(例如早上8點),手機可以依據欲檢測時間運算出細菌須活化的時間,而讓轉動裝置R可以在適當時間(例如清晨4點)轉動來讓活化液活化細菌。
在本發明之一些實施例中,本發明之蛀牙因子檢測裝置更包含有升降裝置B,升降裝置B用以承載容器C,以藉由升起升降裝置B而令容器C中之待測試液接觸兩檢測試片H3。升降裝置B可例如包含有馬達以及升降平台,以透過馬達的轉動帶動升降平台上下移動。因此,在枯草芽孢桿菌及/或大腸桿菌活化後,使用者可以先將唾液(待測試液)置於容器C中並置於升降裝置B上,隨後升降裝置B會將容器C升起直到唾液接觸檢測試片H3。當唾液接觸到檢測試片H3時,兩檢測試片H3可以透過毛細現象吸起唾液,使得唾液可以與檢測試片H3中的蛀牙因子檢測試片100及/或酸鹼度試紙反應。
請參閱圖7,本發明中的螢光感測系統P可例如包含有激發光源P1、濾光透鏡組P2以及光感測器P3。濾光透鏡組P2可例如包含有濾光片(波長為510 nm)以及兩個凸透鏡。當激發光源P1發出波長例如為485 nm的激發光至蛀牙因子檢測試片100上時,激發光會激發試片上的第一螢光蛋白基因21或者是第二螢光蛋白基因31發出螢光。螢光通過濾光透鏡組P2以濾掉雜訊並讓螢光可以聚焦於光感測器P3上。光感測器P3可例如為光敏電阻(TSL235R),透過光感測器P3,可以測得螢光蛋白的強度。在本發明中,由於第一螢光蛋白基因21以及第二螢光蛋白基因31之產物綠色螢光所需檢測儀器與方法相同,因此可以使用同一套螢光感測系統P來進行檢測。
另外,唾液的酸鹼度的檢測則可以透過顏色感測器。當唾液與酸鹼度試紙接觸後,酸鹼度試紙會依據唾液的酸鹼度改變顏色,再透過顏色感測器量測得到的RGB值,即可以推斷唾液的pH值。
在本發明之一些實施例中,本發明之蛀牙因子檢測裝置更包含一電子裝置E接收螢光感測系統P所測得之螢光強度之數據。電子裝置可例如為手機、平板、電腦或者是其他可攜式或家用電子設備。請參閱圖8,圖8為本發明中蛀牙因子檢測裝置與手機及伺服器之示意圖。如圖8所示,在蛀牙因子檢測裝置D檢測唾液中CSP、乳酸濃度及/或pH值後,可以透過藍芽等無線傳輸方式來將檢測數據傳送至電子裝置E(手機)。蛀牙因子檢測裝置D所測得之檢測數據也可以透過socket等方式經由電子裝置E或者是直接傳送至伺服器A。伺服器A在接收到檢測數據後,可以運算出口腔蛀牙風險值,再將風險值回傳至手機並顯示於APP上,以便使用者查看評估。
在本發明中,伺服器A運算口腔蛀牙風險值的方式可例如是採用下列方式:以前述方法取得CSP及/或乳酸的螢光強度後,再與已知濃度的CSP及/或乳酸的標準曲線作比較,即可透過對照標準曲線圖得知CSP及/或乳酸的濃度。其中,CSP及/或乳酸的標準曲線可以透過將已知濃度的CSP及/或乳酸進行螢光強度檢測後,製作螢光強度對濃度圖,即可得一標準曲線。
本發明透過前述裝置及方法,可以建立出一套蛀牙風險評估的預設模型,以便使用者居家檢測牙齒健康程度,並能夠提供追蹤個人口腔狀況並顯示齲齒的風險值。
綜上所述,藉由本發明之蛀牙因子檢測試片、檢測方法及檢測裝置,可以讓民眾以居家檢測方式自行評估蛀牙風險,來達到定期觀察且追蹤口腔狀況之目的。本發明利用基因改造細菌與CSP及/或乳酸產生反應,來啟動下游螢光蛋白基因來表達螢光蛋白,再以激發光激發螢光蛋白,並檢測螢光強度,搭配已知濃度的CSP及/或乳酸的標準曲線,可以推得唾液中CSP及/或乳酸的濃度,以令使用者自行評估蛀牙風險。本發明的蛀牙因子檢測裝置,更可以搭配使用酸鹼度試紙,藉由將酸鹼度試紙設於玻片架上,可以於檢測CSP及/或乳酸的濃度時,一併檢測唾液的pH值,提供酸鹼度評估的數據參考。透過冷凍乾燥程序,可以讓本發明的蛀牙因子檢測試片易於儲存,並能夠保存很長的時間。當使用者欲進行檢測前,可以先將檢測試片置於檢測裝置的玻片架中,並透過手機等電子裝置來設定欲檢測時間,讓玻片架上的回溶液可以提前數小時流至檢測試片,以活化檢測試片上的基改細菌。因此,使用者可以在欲檢測時間來臨時,將唾液置於檢測裝置中的的容器內,透過毛細現象而讓唾液與檢測試片接觸,使得唾液中的CSP及乳酸可以與檢測試片上的基改細菌進行反應而表達螢光蛋白。最後透過螢光感測系統來量測螢光蛋白量,以推知唾液中CSP及/或乳酸的濃度值,藉以評估使用者的齲齒程度。
以上所述僅為舉例性,而非為限制性者。任何未脫離本發明之精神與範疇,而對其進行之等效修改或變更,均應包含於後附之申請專利範圍中。
D:蛀牙因子檢測裝置S:基座R:轉動裝置F:固定裝置F1:彈簧復位桿H:玻片架H1:架體H2:隔板H3:檢測試片H31:透明玻片H32:圓柱管H33:封口件H4:定位孔C:容器P:螢光感測系統P1:激發光源P2:濾光透鏡組P3:光感測器B:升降裝置10:第一合成基因20:第二合成基因21:第一螢光蛋白基因30:第三合成基因31:第二螢光蛋白基因40:第四合成基因100:蛀牙因子檢測試片50:蛀牙因子檢測基改細菌60:培養液70:承載件E:電子裝置A:伺服器
圖1為本發明檢測CSP濃度的作用機制示意圖。
圖2為本發明檢測乳酸桿菌濃度的作用機制示意圖。
圖3為本發明之蛀牙因子檢測試片之剖面示意圖。
圖4為本發明之蛀牙因子檢測裝置之立體示意圖。
圖5為本發明之蛀牙因子檢測裝置中固定裝置及玻片架之示意圖。
圖6為本發明中檢測試片之示意圖。
圖7為本發明中螢光感測系統及檢測試片之示意圖。
圖8為本發明中蛀牙因子檢測裝置與手機及伺服器之示意圖。
<110> 國立中正大學 <120> 蛀牙因子檢測試片、檢測方法及檢測裝置 <160> 3 <210> 1 <211> 6062bp <212> DNA <213> 人工序列 <220> <221> pSBBS 1C-lacZ <223> 枯草桿菌質體,pDG1662之優化。 J Biol Eng. 2013 Dec 2;7(1):29. doi: 10.1186/1754-1611-7-29 Gene. 1996 Nov 21;180(1-2):57-61. <400> 1 tccggcaaaa aagggcaagg tgtcaattct catgtttgac agcttatcat cggcaatagt 60 tacccttatt atcaagataa gaaagaaaag gatttttcgc tacgctcaaa tcctttaaaa 120 aaacacaaaa gaccacattt tttaatgtgg tctttattct tcaactaaag cacccattag 180 ttcaacaaac gaaaattgga taaagtggga tatttttaaa atatatattt atgttacagt 240 aatattgact tttaaaaaag gattgattct aatgaagaaa gcagacaagt aagcctccta 300 aattcacttt agataaaaat ttaggaggca tatcaaatga actttaataa aattgattta 360 gacaattgga agagaaaaga gatatttaat cattatttga accaacaaac gacttttagt 420 ataaccacag aaattgatat tagtgtttta taccgaaaca taaaacaaga aggatataaa 480 ttttaccctg catttatttt cttagtgaca agggtgataa actcaaatac agcttttaga 540 actggttaca atagcgacgg agagttaggt tattgggata agttagagcc actttataca 600 atttttgatg gtgtatctaa aacattctct ggtatttgga ctcctgtaaa 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1500 cgggagtgct ttatttgaag atcaggctat cactgcggtc aatagatttc acaatgtgat 1560 ggctggacag cctgaggaac tctcgaaccc gaatggaaac aaccagatat ttatgaatca 1620 gcgcggctca catggcgttg tgctggcaaa tgcaggttca tcctctgtct ctatcaatac 1680 ggcaacaaaa ttgcctgatg gcaggtatga caataaagct ggagcgggtt catttcaagt 1740 gaacgatggt aaactgacag gcacgatcaa tgccaggtct gtagctgtgc tttatcctga 1800 tgatattgca aaagcgcctc atgttttcct tgagaattac aaaacaggtg taacacattc 1860 tttcaatgat caactgacga ttaccttgcg tgcagatgcg aatacaacaa aagccgttta 1920 tcaaatcaat aatggaccag acgacaggcg tttaaggatg gagatcaatt cacaatcgga 1980 aaaggagatc caatttggca aaacatacac catcatgtta aaaggaacga acagtgatgg 2040 tgtaacgagg accgagaaat acagttttgt taaaagagat ccagcgtcgg ccaaaaccat 2100 cggctatcaa aatccgaatc attggagcca ggtaaatgct tatatctata aacatgatgg 2160 gagccgagta attgaattga ccggatcttg gcctggaaaa ccaatgacta aaaatgcaga 2220 cggaatttac acgctgacgc tgcctgcgga cacggataca accaacgcaa aagtgatttt 2280 taataatggc agcgcccaag tgcccggtca gaatcagcct ggctttgatt acgtgctaaa 2340 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tatacctctt ttacctaaag agcatgtaac tttactggat atagctagaa aaggctatcg 3240 gggagagtgt gatgataagt gggaaggact atattcaaag gtgaaagcac tcgttaagta 3300 tatgaaaaat tctatagaaa cttctctcaa ttaggctaat tttattgcaa taacaggtgc 3360 ttacttttct ggagttcttt agcaaatttt tttattagct gaacttagta ttagtggcca 3420 tactcctcca atccaaagct atttagaaag attactatat cctcaaacag gcggtaaccg 3480 gcctcttcat cgggaatgcg cgcgaccttc agcatcgccg gcatgtcccc ctggcggacg 3540 ggaagtatcc agctcgaggt cgggccgcgt tgctggcgtt tttccatagg ctccgccccc 3600 ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat 3660 aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc 3720 cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct 3780 cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg 3840 aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc 3900 cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag cagccactgg taacaggatt agcagagcga 3960 ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc taactacggc tacactagaa 4020 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gttcaatacg ttaaaacaca atatgaagga tattcatgat gcaggatata cagccattca 5760 gacatctccg attaaccaag taaaggaagg gaatcaagga gataaaagca tgtcgaactg 5820 gtactggctg tatcagccga catcgtatca aattggcaac cgttacttag gtactgaaca 5880 agaatttaaa gaaatgtgtg cagccgctga agaatatggc ataaaggtca ttgttgacgc 5940 ggtcatcaat cataccacca gtgattatgc cgcgatttcc aatgaggtta agagtattcc 6000 aaactggaca catggaaaca cacaaattaa aaactggtct gatcggatcc tagaagctta 6060 tc                                                                                                                               6062   <210> 2 <211> 4530bp <212> DNA <213> 人工序列 <220> <221> pSBBS 4S <223> pDG1731之優化,大腸桿菌會表達抗Ampicillin 抗生素的基因,在bacillus subtilis會表達抗spectinomycine的基因。質體會以同元重組的方式嵌進bacillus subtilis的基因裡使其無法產生threonine。經人工優化過,使其具有ampicillin 和 spectinomycine <400> 2 gataaaaaat ttagaagcca atgaaatcta taaataaact aaattaagtt tatttaatta 60 acaactatgg atataaaata ggtactaatc aaaatagtga ggaggatata tttgaataca 120 tacgaacaaa ttaataaagt gaaaaaaata cttcggaaac atttaaaaaa taaccttatt 180 ggtacttaca tgtttggatc aggagttgag agtggactaa aaccaaatag tgatcttgac 240 tttttagtcg tcgtatctga accattgaca gatcaaagta aagaaatact tatacaaaaa 300 attagaccta tttcaaaaaa aataggagat aaaagcaact tacgatatat tgaattaaca 360 attattattc agcaagaaat ggtaccgtgg aatcatcctc ccaaacaaga atttatttat 420 ggagaatggt tacaagagct ttatgaacaa ggatacattc ctcagaagga attaaattca 480 gatttaacca taatgcttta ccaagcaaaa cgaaaaaata aaagaatata cggaaattat 540 gacttagagg aattactacc tgatattcca ttttctgatg tgagaagagc cattatggat 600 tcgtcagagg aattaataga taattatcag gatgatgaaa ccaactctat attaacttta 660 tgccgtatga ttttaactat ggacacgggt aaaatcatac caaaagatat tgcgggaaat 720 gcagtggctg aatcttctcc attagaacat agggagagaa ttttgttagc agttcgtagt 780 tatcttggag agaatattga atggactaat gaaaatgtaa atttaactat aaactattta 840 aataacagat taaaaaaatt ataaaaaaat tgaaaaaatg gtggaaacac ttttttcaat 900 ttttttgttt tattatttaa tatttgggaa atattcattc taattggtaa tcagatttta 960 gaaaacaata aacccttgca tagggggatc tcgaggcctt ccgaaaatgc gcggctttga 1020 agctgagggt gcggcggcaa tcgtgcgcaa tgaagtgatt gaaaatccgg aaacaatagc 1080 gacagccatt cgtatcggaa acccggcaag ctgggacaaa gctgtaaagg cagccgagga 1140 atccaatggg aaaattgacg aagtcactga tgatgaaatc cttcacgcat atcagctgat 1200 cgcccgtgta gaaggcgtgt ttgcagaacc aggttcttgc gcgtctatcg caggagtgct 1260 gaaacaggtg aaatccggag aaattccgaa aggcagcaag gtcgtagctg tgttaacagg 1320 aaacggactg aaagatccga acacagcggt cgacatttca gaaatcaagc ctgtcacatt 1380 gccgactgat gaagacagca tccttgaata tgtaaaagga gcggcccgtg tatgaacgaa 1440 gccgacatgc tgttctctgt cactgttccc ggaagcacag ctaacctagg ccccggcttt 1500 gattcagtcg gaatggcgct cagcagatat ttgaagctga ccgtctttga aagcgacaaa 1560 tggtcttttg aggctgaaac agaaacagtc gccggaatta attcgagctc ctttaacttc 1620 ctcaccagta gttgtatcgg taccataagt agaagcagca acccaagtag ctttaccagc 1680 atccggttca accagcatag taagaatctt actggacatc ggcagttctt cgaacagtgc 1740 gccaactacc agctctttct acagttcatt cagggcaccg gagaacctgc gtgcaatcca 1800 tcttgttcaa tcatgcgaaa cgatcctcat cctgtctctt gatccatgga ttacgcgcga 1860 ccttcagcat cgccggcatg tccccctggc ggacgggaag tatccagctc gaggtcgggc 1920 cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg 1980 ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg 2040 aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt 2100 tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt 2160 gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg 2220 cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact 2280 ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt 2340 cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaaggaca gtatttggta tctgcgctct 2400 gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tgatagctct tgatccggca aacaaaccac 2460 cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc 2520 tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg 2580 ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta 2640 aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca 2700 atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc 2760 ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc 2820 tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc 2880 agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat 2940 taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt 3000 tgccattgct gccggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt cattcagctc 3060 cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa aagcggttag 3120 ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat cactcatggt 3180 tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac 3240 tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga gttgctcttg 3300 cccggcgtca acacgggata ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag tgctcatcat 3360 tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga gatccagttc 3420 gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc 3480 tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa 3540 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gagattatcg caattgacgg aaactttgac gatgcgctta aaattgtccg ttccatctgt 4440 gagaaatcac cgattgccct tgtcaactca gtcaaccctt accgcattga aggccaaaaa 4500 actgctgcct tcggatccta gaagcttatc                                                                                4530   <210> 3 <211> 2079bp <212> DNA <213> 人工序列 <220> <221> pSB1A2 <223>用於大腸桿菌,具Ampicillin 抗抗生素基因的質體。作用在Entamoeba coli . 但部分基因的片段經人工優化,為一有高複製數的有AmpR 的質體,其複製起點來自pUC19-derived pMB1。 <400> 3 tactagtagc ggccgctgca ggcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg 60 ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg 120 gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag 180 gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga 240 cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct 300 ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc 360 tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac gctgtaggta tctcagttcg 420 gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc 480 tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca 540 ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag 600 ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagga cagtatttgg tatctgcgct 660 ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc 720 accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga 780 tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca 840 cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat 900 taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttac 960 caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt 1020 gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc tggccccagt 1080 gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca ccggctccag atttatcagc aataaaccag 1140 ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc catccagtct 1200 attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt 1260 gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc 1320 tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt 1380 agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg 1440 gttatggcag cactgcataa ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg 1500 actggtgagt actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct 1560 tgcccggcgt caatacggga taataccgcg ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc 1620 attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt 1680 tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt 1740 tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg 1800 aaatgttgaa tactcatact cttccttttt caatattatt gaagcattta tcagggttat 1860 tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg 1920 cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgac gtctaagaaa ccattattat catgacatta 1980 acctataaaa ataggcgtat cacgaggcag aatttcagat aaaaaaaatc cttagctttc 2040 gctaaggatg atttctggaa ttcgcggccg cttctagag                                                               2079
D:蛀牙因子檢測裝置
S:基座
R:轉動裝置
F:固定裝置
H:玻片架
C:容器
P:螢光感測系統
B:升降裝置

Claims (5)

  1. 一種蛀牙因子檢測裝置,至少包含:一基座,其上設有一轉動裝置及一固定裝置;一圓柱管,其內裝設一回溶液,該圓柱管之前端更設有一封口件;一玻片架,該玻片架可拆式設於該固定裝置上,其中該玻片架包含一架體、一隔板設於該架體之底部及至少兩檢測試片分設於該隔板之兩側,其中該圓柱管設於該兩檢測試片之上方,且該轉動裝置係於一欲檢測時間之前一預定時間令該固定裝置轉動至少一角度,使得該封口件脫離該圓柱管藉以釋出該回溶液至該兩檢測試片上以活化該兩檢測試片上之已轉殖有第一質體與第二質體之枯草芽孢桿菌及/或已轉殖有第三質體之大腸桿菌,其中該第一質體與該第二質體已分別接有第一合成基因與第二合成基因,藉以使得該枯草芽孢桿菌接觸感受態刺激肽(CSP)時產生反應後表達第一螢光蛋白,其中該第三質體係已轉殖有黏接之第三合成基因與第四合成基因,藉以使得該大腸桿菌接觸乳酸時產生反應後表達第二螢光蛋白;一容器,該容器係盛裝待測試液且位於該兩檢測試片下方,藉以使得該容器於該欲檢測時間時升起藉以使得該兩檢測試片經由毛細現象吸起該容器中的該待測試液;以及一螢光感測系統,藉由發出激發光分別照射該兩檢測試片,使得該第一螢光蛋白及該第二螢光蛋白發出螢光,以感測該兩檢測試片所發出的螢光強度。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之蛀牙因子檢測裝置,更包含一電子裝置接收該螢光感測系統所測得之螢光強度之數據。
  3. 如申請專利範圍第2項所述之蛀牙因子檢測裝置,其中該待測試液為唾液,該玻片架更包含酸鹼度試紙,該欲檢測時間及該預定時間係經由該電子裝置設定,且該預定時間係該大腸桿菌及/或枯草芽孢桿菌活化所須的時間。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之蛀牙因子檢測裝置,其中該玻片架之該架體具有一定位孔,該固定裝置係具有一彈簧復位桿用以選擇性卡固該架體之該定位孔。
  5. 如申請專利範圍第4項所述之蛀牙因子檢測裝置,更包含一升降裝置,該升降裝置係承載該容器,以藉由升起該升降裝置而令該容器中之該待測試液接觸該兩檢測試片。
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