TWI701041B

TWI701041B - 在c5相關疾病之治療或預防中使用的醫藥組成物與治療或預防c5相關疾病的方法

Info

Publication number: TWI701041B
Application number: TW108127358A
Authority: TW
Inventors: 四宮賢治; 五反田圭介; 西村純一; 艾瑞卡溫特; 家瑜許
Original assignee: 日商中外製藥股份有限公司; 瑞士商Ｆ霍夫曼拉羅公司; 國立大學法人大阪大學
Priority date: 2018-08-01
Filing date: 2019-08-01
Publication date: 2020-08-11
Also published as: KR20200033225A; EP3829628A1; MX2021000516A; CR20210103A; CA3107618A1; EP3829628C0; DE112019003835T5; IL280475A; US20210301004A1; SG10202002898RA; EP3829628B1; AU2019315213B2; JP2020079331A; KR20210037743A; PH12021550226A1; WO2020027279A1; JP6672533B1; TWI704157B; JP2020019769A; JP6672516B2

Abstract

[欲解決的問題] 本發明的目的係提供用於治療及/或預防C5相關疾病的抗C5抗體之更有效且更安全的劑量及施用，其也可降低患者的負擔。 [解決問題的手段] 本發明提供用於治療或預防C5相關疾病的醫藥組合物、用於治療或預防C5相關疾病的方法、抗C5抗體或包含抗C5抗體的醫藥組合物的劑量及施用。

Description

在C5相關疾病之治療或預防中使用的醫藥組成物與治療或預防C5相關疾病的方法

本發明係關於抗C5抗體的劑量及施用。

補體系統在免疫複合物之清除中及在對於傳染媒介、外來抗原、病毒感染細胞及腫瘤細胞的免疫反應中扮演重要角色。大約有25至30種補體蛋白，其被發現為血漿蛋白及膜輔因子之複雜集合。補體成分藉由與一系列交錯複雜的酶切割及膜結合反應達成它們的免疫防禦功能，造成之補體級聯(complement cascade)導致具有調理素(opsonic)、免疫調節及細胞溶解功能之產物的產生。

目前，普遍接受補體系統可藉由三種不同的途徑被活化:經典途徑、凝集素(lectin)途徑和替代途徑。這些途徑共享許多補體，雖然它們在起始步驟不同，但它們會合及共享負責目標細胞的活化及破壞之相同的末端補體成分(C5至C9)。

經典途徑通常藉由抗原-抗體複合物的形成被活化。獨立地，活化凝集素途徑的第一個步驟為特定凝集素的結合，例如甘露醣結合凝集素(mannan-binding lectin, MBL)、H-纖維膠凝蛋白(H-ficolin)、M-纖維膠凝蛋白、L-纖維膠凝蛋白以及C型凝集素CL-11。相反地，替代途徑自發地經歷低水平的轉換活化(turnover activation)，其可容易地在外來或其它異常的表面(細菌、酵母菌、經病毒感染的細胞或受損組織)上擴張。這些途徑會合在補體成分C3被活性蛋白分解酶切割而產生C3a及C3b的位置。

C3a為一種過敏毒素(anaphylatoxin)，C3b結合至細菌及其它細胞，也結合至特定的病毒及免疫複合物，且標記它們以從循環中移除之(已知為調理素(opsonin)的作用)。C3b亦與其它成分形成複合物以形成C5轉化酶，其切割C5成C5a及C5b。

C5是在正常血清中發現之190 kDa的蛋白，其濃度約為80μg/ml(80mirco g/ml) (0.4μM) (0.4mirco M)。C5係經醣基化，其約1.5至3%的質量屬於醣。成熟的C5為115 kDa的α鏈(alpha鏈)以雙硫鍵連接至75 kDa的β鏈(beta鏈)之異二聚體(heterodimer)。C5被合成作為1676個胺基酸的單鏈前驅物蛋白(pro-C5前驅物)(請參照，例如專利文獻1及專利文獻2)。pro-C5前驅物被切割以產生作為胺基末端片段的β鏈以及作為羧基末端片段的α鏈。α鏈及β鏈多肽片段係藉由雙硫鍵彼此連接並構成成熟的C5蛋白。

當補體途徑活化時，成熟的C5被切割成C5a及C5b片段。C5a被C5轉化酶自C5的α鏈切割作為胺基末端片段，包括α鏈的前74個胺基酸。成熟的C5的剩餘部分為片段C5b，其包含剩下的α鏈以雙硫鍵鍵結至β鏈。C5a的11 kDa的質量之大約20%屬於醣。

C5a為另一種過敏毒素，C5b與C6、C7、C8及C9結合以形成膜攻擊複合物(membrane attack complex, MAC，C5b-9，末端補體複合物(membrane attack complex, TCC))於目標細胞的表面。當數量充足的MAC插入至目標細胞膜中，MAC孔洞被形成以調節目標細胞快速的滲透性細胞溶解。

承前述，C3a及C5a為過敏毒素，它們可觸發肥大細胞去顆粒作用(degranulation)，其釋放組織胺及其它發炎反應的媒介，造成平滑肌收縮、血管滲透性上升、白血球活化及其它發炎反應現象，包括細胞增生導致的細胞過多(hypercellularity)。C5a亦可當作趨向性(chemotactic)肽，其用於吸引顆粒細胞，例如：嗜中性球、嗜酸性球、嗜鹼性球及單核球至補體活化的位置。

C5a的活性係藉由血漿酶羧肽酶N(carboxypeptidase N)調節，其從C5a移除羧基末端的精胺酸形成C5a-des-精胺酸(C5a-des-Arg)衍生物，C5a-des-精胺酸僅顯示1%的過敏毒素活性及未經修飾之C5a的多形核(polymorphonuclear)趨向活性。

雖然適當發揮功能的補體系統提供針對感染性微生物的穩固防禦，但補體的不當調控或活化已牽連到多種疾病之致病性，包含，例如：類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis，RA)；狼瘡腎炎(lupus nephritis)；局部缺血-再灌注損傷(ischemia-reperfusion injury)；陣發性夜間血紅素尿症(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria，PNH)；非典型性溶血性尿毒症候群(atypical hemolytic uremic syndrome，aHUS)；緻密沉積物疾病(dense deposit disease，DDD)；黃斑部病變(例如：老年性黃斑部病變(age-related macular degeneration，AMD))；溶血、肝酶提高及血小板低下(hemolysis, elevated liver enzymes, and low platelets，HELLP)症候群；血栓性血小板減少性紫癜症(thrombotic thrombocytopenic purpura，TTP)；自發性流產；寡免疫性血管炎(Pauci-immune vasculitis)；表皮溶解水疱症(epidermolysis bullosa)；復發性流產；多發性硬化症(multiple sclerosis，MS)；創傷性腦損傷；以及由心肌梗塞、心肺繞通(cardiopulmonary bypass)及血液透析所導致的損傷(請參照，例如，非專利文獻1)。因此，抑制補體級聯過度或不受控制的活化可提供臨床益處給患有這些疾病的患者。

陣發性夜間血紅素尿症(PNH)是一種罕見血液疾病，其中紅血球細胞受損(compromised)，因此與正常紅血球細胞相比，其更快地被破壞。PNH起因於具有體細胞突變於PIG-A(磷脂醯肌醇多醣A型(phosphatidylinositol glycan class A))基因之造血幹細胞的克隆增殖，PIG-A基因位於X染色體上。於PIG-A的突變造成初期阻礙於醣基磷脂醯肌醇(glycosylphosphatidylinositol，GPI)的合成，其為許多蛋白錨定至細胞表面所需之分子。因此，PNH血球細胞缺乏GPI錨定蛋白，其包含補體調節蛋白CD55及CD59。在正常情況下，這些補體調節蛋白阻礙MAC形成於細胞表面上，因而防止紅血球細胞溶解。GPI錨定蛋白的缺失導致PNH中的補體調節溶血反應。

PNH的特徵為溶血性貧血(紅血球細胞數量減少)、血紅素尿症(血紅蛋白出現於尿中，睡眠後特別明顯)以及血紅素血症(血紅蛋白出現於血液中)。患有PNH的個體已知具有陣發，其在本文定義為黑尿的發生率。溶血性貧血歸因於補體成分對紅血球細胞的血管內破壞。其它已知的症狀包括吞咽困難、疲勞、勃起功能障礙、血栓形成及復發性腹痛。

Eculizumab為針對對抗補體蛋白C5之人類單株抗體，且為第一個批准可用於陣發性夜間血紅素尿症(PNH)及非典型性溶血性尿毒症候群(aHUS)的治療之療法(請參照，例如，非專利文獻2)。Eculizumab抑制C5轉化酶將C5切割成C5a及C5b，其防止末端補體複合物C5b-9的產生。C5a及C5b-9均導致末端補體調節現象，其為PNH及aHUS的特徵(請亦參照，專利文獻3；專利文獻4；專利文獻5及專利文獻6)。

許多報導已描述抗C5抗體，例如，專利文獻7描述抗C5抗體其結合至C5的α鏈但不結合至C5a，且阻止C5的活化。而專利文獻8描述一種抗C5單株抗體，其抑制C5a的形成。另一方面，專利文獻9描述一種抗C5抗體，其辨識C5轉化酶之蛋白水解位置於C5的α鏈上，且抑制C5轉化為C5a及C5b。專利文獻10描述一種抗C5抗體，其具有至少為1 x10⁷ M^-1 的親和常數。

抗體(IgGs)結合至新生Fc受體(FcRn)，且具有長的血漿滯留時間(retention time)。IgG結合至FcRn通常是在酸性環境(例如，pH 6.0)下觀測，且很少在中性環境(例如，pH 7.4)下觀測。一般而言，IgG非特定地藉由胞吞作用(endocytosis)併入細胞中，且藉由在胞內體的酸性環境下結合至胞內的(endosomal)FcRn返回細胞表面。接著，IgG在血漿的中性環境下自FcRn解離。未結合至FcRn的IgG在溶酶體中被分解。當IgG在酸性環境下的FcRn結合能力藉由導入突變於其Fc區中而消除時，IgG將不會自胞內體再循環至血漿中，導致IgG的血漿滯留顯著受損。為了改善IgG的血漿滯留，一種增加其在酸性環境下與FcRn的結合之方法已被報導，當IgG在酸性環境下的FcRn結合能力藉由導入一胺基酸取代至其Fc區中而提升時，IgG較有效率地自胞內體再循環至血漿，因而顯示改善的血漿滯留。其間，亦有報導指出在中性環境下具有提升之FcRn結合的IgG，在中性環境血漿中不會自FcRn解離，甚至當它藉由在酸性環境下結合至FcRn而返回細胞表面時，因此它的血漿滯留維持不變，或應該說是較差(請參照，例如，非專利文獻3；非專利文獻4；及非專利文獻5)。

近來，以pH依賴性方式結合至抗原的抗體已被報導(請參照，例如，專利文獻11及專利文獻12)。這些抗體在血漿中性環境下強烈地結合至抗原，以及在胞內的酸性環境下自抗原解離。在自抗原解離後，當藉由FcRn再循環至血漿時，抗體變得可再次與抗原結合，因此，單一個抗體分子可重複地結合至多個抗原分子。一般而言，抗原的血漿滯留較具有上述FcRn調節的再循環機制之抗體短得多，因此，當抗原結合至抗體時，抗原通常顯示延長的血漿滯留，導致抗原的血漿濃度的增加。另一方面，已有報導顯示上述抗體，其以pH依賴性方式結合至抗原，比起典型抗體，可較快速地自血漿消除抗原，因為在FcRn調節的再循環步驟中，它們在胞內體內自抗原解離。專利文獻13亦描述電腦模擬分析顯示具有針對抗C5之pH依賴性結合的抗體可延長抗原消減(knockdown)。 [引用列表]

[專利文獻] [專利文獻1] US Patent No. 6,355,245 [專利文獻2] US Patent No. 7,432,356 [專利文獻3] WO 2005/074607 [專利文獻4] WO 2007/106585 [專利文獻5] WO 2008/069889 [專利文獻6] WO 2010/054403 [專利文獻7] WO 95/29697 [專利文獻8] WO 2002/30985 [專利文獻9] WO 2004/007553 [專利文獻10] WO 2010/015608 [專利文獻11] WO 2009/125825 [專利文獻12] WO 2011/122011 [專利文獻13] WO 2011/111007

[非專利文獻] [非專利文獻1] Holers等人，Immunol. Rev. 223:300-316 (2008) [非專利文獻2] Dmytrijuk等人，The Oncologist 13(9):993-1000 (2008) [非專利文獻3] Yeung等人，J Immunol. 182(12): 7663-7671 (2009) [非專利文獻4] Datta-Mannan等人，J Biol. Chem. 282(3):1709-1717 (2007) [非專利文獻5] Dall'Acqua等人，J. Immunol. 169(9):5171-5180 (2002)

本發明提供用於治療或預防C5相關疾病的醫藥組合物以及用於治療或預防C5相關疾病的方法。本發明亦提供抗C5抗體或包含抗C5抗體的醫藥組合物的劑量及施用。

本發明的發明人研究用於治療及/或預防C5相關疾病的抗C5抗體之更有效且更安全的劑量及施用(administration)，其也可降低患者的負擔。就此觀點，發明人發現，藉由皮下施用抗C5抗體，以長間隔在高劑量施用前施用較低劑量至少一次，有利於治療或預防C5相關疾病。

本發明人亦發現合適的給藥條件，包含抗體的劑量、皮下施用的頻率及間隔。

具體而言，本發明係關於： [1]一種用於C5相關疾病治療或預防方法的醫藥組合物，其係配製用於皮下注射並包括抗C5抗體，其中組合物係以兩階段進行皮下施用，其中於兩階段中每兩次皮下施用間具有一間隔，其中各階段包括至少一間隔，且其中於第一階段中 i. 至少一間隔短於第二階段中的至少一間隔；以及 ii. 每次施用之抗體的劑量低於或等於第二階段中每次施用之抗體的劑量； [2]如第[1]項所述之醫藥組合物，其中第一階段中的至少一間隔為1天至2個月； [3]如第[1]或[2]項所述之醫藥組合物，其中第一階段中的至少一間隔為5天至14天； [4]如第[1]至[3]項中任一項所述之醫藥組合物，其中第二階段中的至少一間隔為2天至6個月；[5]如第[1]至[4]項中任一項所述之醫藥組合物，其中第二階段中的至少一間隔為15天至3個月； [6]如第[1]至[5]項中任一項所述之醫藥組合物，其中第一階段的皮下施用中的抗體劑量為50mg至350mg； [7]如第[1]至[6]項中任一項所述之醫藥組合物，其中第一階段之皮下施用的抗體劑量為150mg至200mg，且低於第二階段之皮下施用的抗體劑量，其中第一階段中的抗體劑量較佳為170mg； [8]如第[1]至[6]項中任一項所述之醫藥組合物，其中第一階段之皮下施用的抗體劑量為300mg至350mg，且與第二階段之皮下施用的抗體劑量相同； [9]如第[1]至[8]項中任一項所述之醫藥組合物，其中第一階段中皮下施用的次數為1至12次； [10]如第[1]至[9]項中任一項所述之醫藥組合物，其中第一階段中之皮下施用的次數為5至10次，其中次數較佳為8次； [11]如第[1]至[10]項中任一項所述之醫藥組合物，其中第二階段中每次施用的抗體劑量為350mg至1000mg，或650mg至700mg； [12]如第[1]至[7]及[9]至[11]項中任一項所述之醫藥組合物，其中第一階段中每次施用的抗C5抗體劑量比該第二階段中每次施用的抗C5抗體劑量低3至5倍； [13]如第[1]至[12]項中任一項所述之醫藥組合物，其中在第一階段的第一次皮下施用前，靜脈內施用配製用以靜脈內施用並包括抗C5抗體的醫藥組合物； [14] 如第[13]項所述之醫藥組合物，其中第一階段的第一次皮下施用是在最後一次施用靜脈內施用的醫藥組合物後0天至1個月進行； [15] 如第[13]或[14]項所述之醫藥組合物，其中靜脈內施用的抗體劑量為100mg至2000mg； [16]如第[1]至[15]項中任一項所述之醫藥組合物，其中該C5相關疾病係擇自由下列所組成之群組的任一者：類風濕性關節炎(RA)；狼瘡腎炎；局部缺血-再灌注損傷；陣發性夜間血紅素尿症(PNH)；非典型性溶血性尿毒症候群(aHUS)；緻密沉積物疾病(DDD)；黃斑部病變；溶血、肝酶提高及血小板低下(HELLP)症候群；血栓性血小板減少性紫癜症(TTP)；自發性流產；寡免疫性血管炎(Pauci-immune vasculitis)；表皮溶解水疱症；復發性流產；多發性硬化症(MS)；創傷性腦損傷；以及由心肌梗塞、心肺繞通及血液透析所導致的損傷； [17]一種治療或預防C5相關疾病的方法，其中方法包括對一受試者皮下施用醫藥組合物，其係配製用於皮下注射並包括抗C5抗體，其中組合物係以兩階段進行皮下施用，其中在兩階段中每兩次皮下施用間具有一間隔，其中各階段包括至少一間隔，且其中於第一階段中 i. 至少一間隔短於該第二階段中的至少一間隔；以及 ii. 每次施用之抗體的劑量低於或等於第二階段中每次施用之抗體的劑量； [18]一種抗C5抗體在製備治療或預防C5相關疾病之醫藥組合物的用途，其中組合物係配製用於皮下注射並包括抗C5抗體，且其中組合物係以兩階段進行皮下施用，其中在兩階段中每兩次皮下施用間具有一間隔，其中各階段包括至少一間隔，且其中於第一階段中 i. 至少一間隔短於該第二階段中的至少一間隔；以及 ii. 每次施用之抗體的劑量低於或等於第二階段中每次施用之抗體的劑量；及 [19]一種用於治療或預防C5相關疾病的產品，包括（a）容器；（b）該容器中的醫藥組合物，其該組合物係配製用於皮下注射並包括抗C5抗體；以及（c）文件，指示醫藥組合物係以兩階段進行皮下施用，其中在兩階段中每兩次皮下施用間具有一間隔，其中各階段包括至少一間隔，且其中於該第一階段中 i. 至少一間隔短於第二階段中的至少一間隔；以及 ii. 每次施用之抗體的劑量低於或等於第二階段中每次施用之抗體的劑量。

在本文所述或引用之技術或步驟通常為所屬領域之技術人員熟知且常使用的傳統方法，例如，舉例而言，如Sambrook等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3d edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.；Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel等人編輯(2003))；the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.): PCR 2: A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames及G.R. Taylor編輯(1995)), Harlow 及Lane編輯(1988) Antibodies, A Laboratory Manual, and Animal Cell Culture (R.I. Freshney編輯(1987))；Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait編輯，1984)；Methods in Molecular Biology, Humana Press；Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis編輯，1998) Academic Press；Animal Cell Culture (R.I. Freshney)編輯，1987)；Introduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather及P.E. Roberts，1998) Plenum Press；Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths及D.G. Newell編輯，1993-8) J. Wiley及Sons；Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir及C.C. Blackwell編輯)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller及M.P. Calos編輯，1987)；PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis等人編輯，1994)；Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan等人編輯，1991)；Short Protocols in Molecular Biology (Wiley及Sons，1999)；Immunobiology (C.A. Janeway及P. Travers, 1997)；Antibodies (P. Finch, 1997)；Antibodies: A Practical Approach (D. Catty.編輯，IRL Press, 1988-1989)；Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd及C. Dean編輯，Oxford University Press, 2000)；Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow及D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999)；The Antibodies (M. Zanetti及J. D. Capra編輯，Harwood Academic Publishers, 1995)；以及Cancer: Principles and Practice of Oncology (V.T. DeVita等人編輯，J.B. Lippincott Company，1993)中所述被廣泛利用的方法。

I. 定義 “間隔(interval)”(各別的施用之間的間隔)表示第n個劑量的施用(n為1或更大的整數)與第(n+1)個劑量的施用之間的間隔。

II. 用於皮下注射的醫藥組合物提供一種用於C5相關疾病治療或預防方法的醫藥組合物。該醫藥組合物係配製用於皮下注射並包括抗C5抗體，其中組合物係以兩階段進行皮下施用，其中於兩階段中每兩次皮下施用間具有一間隔，其中各階段包括至少一間隔，且其中於第一階段中 i. 至少一間隔短於第二階段中的至少一間隔；以及 ii. 每次施用之抗體的劑量低於或等於第二階段中每次施用之抗體的劑量。

皮下注射可利用一般裝置及方法進行，可藉由注射將醫藥組合物施用於皮下組織。亦可選擇用於皮下注射的特定裝置及方法。

示例性抗C5抗體抗C5抗體不受限於特定實施例，並且可適當地選自已知為抗C5抗體的抗體。術語“抗C5抗體”或“與C5結合的抗體”代表能夠以足夠的親和力結合C5的抗體，使得所述抗體可用作標靶C5的治療劑。

在一態樣中，抗C5抗體抑制C5的活化。在一些特定實施例中，抗C5抗體防止C5裂解形成C5a及C5b，因此防止與C5a有關的過敏毒素活性(anaphylatoxic activity)之產生，亦防止與C5b有關的C5b-9膜攻擊複合物(membrane attack complex，MAC)之組合。在一些特定實施例中，抗C5抗體阻礙C5轉化酶(convertase)將C5轉化成C5a及C5b。在一些特定實施例中，抗C5抗體阻礙C5轉化酶接近C5上的裂解位置。在一些特定實施例中，抗C5抗體阻礙由C5的活化所造成之溶血活性。在又一些實施例中，抗C5抗體藉由經典途徑(classical pathway)及/或替代途徑(alternative pathway)抑制C5的活化。

在一態樣中，至少部分地以上述抗C5抗體可抑制C5活化的活性為依據，本發明的醫藥組合物可用於治療或預防C5相關疾病。

在一些特定實施例中，C5活性可被測量作為它在受試者的體液中的細胞溶解能力的函數。可藉由發明所屬技術領域習知的方法，例如，常規的溶血分析，像是Kabat及Mayer(編輯)，Experimental Immunochemistry, 2nd Edition, 135-240, Springfield, IL, CC Thomas (1961), pages 135-139所述的溶血分析、或該分析的常規變異，像是如Hillmen等人，N. Engl. J. Med . 350(6): 552-559 (2004)中描述的雞紅血球溶血方法，測量C5的細胞溶解能力或其下降。在一些特定實施例中，利用CH50eq分析定量C5活性或其抑制。CH50eq分析是用於測量血清中的總經典補體活性的方法。此測試為細胞溶解分析(lytic assay)，其利用抗體敏化的(antibody-sensitized)紅血球作為經典補體途徑的活化劑，並利用測試血清的多種稀釋以判斷得到50%細胞溶解(CH50)所需的量。例如，可使用分光光度計，測定溶血的百分比。CH50eq分析提供末端補體複合物(TCC)形成的間接測量，由於TCC本身直接地負責測量到的溶血。亦可使用操作實施例中所述及示例的方法偵測及/或測量C5活化的抑制。利用這些或其它類型的分析，可篩選能出夠抑制C5的活化之候選抗體。在一些特定實施例中，在相似的條件下相較於負控制組的效果，C5活化的抑制包含在分析中至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、或40%、或更多C5活性的減少。在一些實施例中，其代表至少45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、或95%、或更多的C5活化的抑制。

在一些優選的實施例中，抗C5抗體的抗原決定基(epitope)不同於eculizumab的抗原決定基。

在一些特定實施中，用於本發明的抗C5抗體結合至C5的β鏈內的抗原決定基。在一些特定實施中，抗C5抗體結合至C5的β鏈的MG1-MG2域內的抗原決定基。在一些特定實施中，抗C5抗體結合至由C5的β鏈的胺基酸19至180所組成的片段內的抗原決定基。在一些特定實施中，抗C5抗體結合至C5的β鏈的MG1域(序列辨識號：1的胺基酸20至124)內的抗原決定基。在一些特定實施中，抗C5抗體結合至由C5的β鏈(序列辨識號：1)的胺基酸33至124所組成的片段內的抗原決定基。

在一些特定實施例中，用於本發明的抗C5抗體結合至C5的β鏈內的抗原決定基，其由MG1域所組成。在一些特定實施例中，抗C5抗體結合至C5的β鏈(序列辨識號:1)內的抗原決定基，其包括擇自於胺基酸47-57、70-76以及107-110所組成之群組的至少一片段。在一些特定實施例中，抗C5抗體結合至C5的β鏈(序列辨識號:1)的片段內的抗原決定基，其包括擇自於Thr47、Glu48、Ala49、Phe50、Asp51、Ala52、Thr53、Lys57、His70、Val71、His72、Ser74、Glu76、Val107，Ser108、Lys109及His110所組成之群組的至少一胺基酸。在一些特定實施例中，抗C5抗體結合至C5的β鏈(序列辨識號:1)的片段內的抗原決定基，其包括擇自於Glu48、Asp51、His70、His72、Lys109及His110所組成之群組的至少一胺基酸。在一些特定實施例中，相較於其對野生型C5的結合，抗C5抗體對C5突變體的結合降低，其中C5突變體具有至少一胺基酸取代在擇自於Glu48、Asp51、His72及Lys109所組成之群組的位置。在另一實施例中，相較於其對野生型C5的pH依賴性結合，抗C5抗體對C5突變體的pH依賴性結合(如下所述)降低，其中C5突變體具有至少一胺基酸取代在擇自於His70、His72及His110所組成之群組的位置。在又一實施例中，在C5突變體中，在擇自於Glu48、Asp51及Lys109的位置之胺基酸經丙胺酸取代，以及在擇自於His70、His72及His110的位置之胺基酸經酪胺酸取代。

在另一態樣中，用於本發明的抗C5抗體可具有pH依賴性結合特性。如本文中所使用，術語“pH依賴性結合”是指抗體顯示“相較於在中性pH，其在酸性pH與C5之結合降低”(就本揭露之目的，兩種表達方式可互換使用)。例如，“具有pH依賴性結合特性”的抗體包含相較於在酸性pH，在中性pH以較高親和性結合至C5的抗體。在一些特定實施例中，相較於在酸性pH，抗體在中性pH以至少2、3、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、200、400、1000、10000或更多倍之親和性結合至C5。在一些實施例中，相較於在pH5.8，抗體在pH7.4以較高親和性結合至C5。在又一些實施例中，相較於在pH5.8，抗體在pH7.4以至少2、3、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、200、400、1000、10000或更多倍之親和性結合至C5。

抗體對C5的“親和性”，就本揭露之目的而言，是以抗體的KD之形式表示。抗體的KD代表抗體-抗原相互作用的平衡解離常數(equilibrium dissociation constant)。一抗體結合至其抗原的KD值越大，其對那特定抗原的結合親和性越弱。因此，如本文中所使用，“相較於酸性pH，在中性pH具有較高的親和性”(或等同於“pH依賴性結合”的表達)是指抗體在酸性pH下結合至C5的KD大於所述抗體在中性pH下結合至C5的KD。例如，在本發明的內容中，若抗體在酸性pH下結合至C5的KD比抗體在中性pH下結合至C5的KD大至少兩倍，則抗體被視為相較於酸性pH，在中性pH以較高親和性結合至C5。因此，用於本發明的抗C5抗體包含在酸性pH結合至C5的KD至少大於抗體在中性pH結合至C5的KD之2、3、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、200、400、1000、10000或更多倍之抗體。在另一實施例中，抗體在中性pH的KD值可為10^-7 M、10^-8 M、10^-9 M、10^-10 M、10^-11 M、10^-12 M或更小。在另一實施例中，抗體在酸性pH的KD值可為10^-9 M、10^-8 M、10^-7 M、10^-6 M或更大。

在又一些實施例中，若抗體在pH5.8下結合至C5的KD至少大於抗體在pH7.4下結合至C5的KD之兩倍，抗體被視為相較於酸性pH，在中性pH以較高親和性結合至C5。在一些實施例中，抗體在pH5.8結合至C5的KD至少大於抗體在pH7.4結合至C5的KD之3、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、200、400、1000、10000或更多倍。在另一實施例中，抗體在pH7.4的KD值可為10^-7 M、10^-8 M、10^-9 M、10^-10 M、10^-11 M、10^-12 M或更小。在另一實施例中，抗體在pH5.8的KD值可為10^-9 M、10^-8 M、10^-7 M、10^-6 M或更大。

抗體對於特定抗原之結合特性亦可以抗體的kd之形式表示。抗體的kd指抗體對於特定抗原之解離速率常數(dissociation rate constant)，以秒的倒數表示(即，sec^-1 )。kd值增加表示抗體對其抗原之結合較弱。本發明因此包含，相較於中性pH，在酸性pH以較高kd值與C5結合的抗體。本發明的抗體包含在酸性pH結合至C5的kd至少大於在中性pH結合至C5的kd之2、3、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、200、400、1000、10000或更多倍之抗體。在另一實施例中，抗體的kd值在中性pH可為10^-2 1/s、10^-3 1/s、10^-4 1/s、10^-5 1/s、10^-6 1/s或更小。在另一實施例中，抗體的kd值在酸性pH可為10^-3 1/s、10^-2 1/s、10^-1 1/s或更大。本發明的抗體亦包含相較於在pH7.4，在pH5.8以較大kd值結合至C5的抗體。本發明的抗體包含在pH5.8結合至C5的kd至少大於在pH7.4結合至C5的kd之3、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、200、400、1000、10000或更多倍之抗體。在另一實施例中，抗體在pH7.4的kd值可為10^-2 1/s、10^-3 1/s、10^-4 1/s、10^-5 1/s、10^-6 1/s或更小。在另一實施例中，抗體在pH5.8的kd值可為10^-3 1/s、10^-2 1/s、10^-1 1/s或更大。

在一些特定例子中，“相較於在中性pH之結合，在酸性pH與C5之結合降低”以在酸性pH抗體結合至C5之KD值比上在中性pH抗體結合至C5之KD值的比值來表示(或反之亦然)。例如，就本發明之目的而言，若抗體具有2或更大的酸性/中性KD比值，則該抗體可被視為“相較於在中性pH之結合，在酸性pH與C5之結合降低”。在一些特定示例性實施例中，抗體的pH5.8/pH7.4的KD比值可為2或更大。在一些特定示例性實施例中，抗體的酸性/中性KD比值可為2、3、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、200、400、1000、10000或更大。在另一實施例中，抗體在中性pH的KD值可為10^-7 M、10^-8 M、10^-9 M、10^-10 M、10^-11 M、10^-12 M或更小。在另一實施例中，抗體在酸性pH的KD值可為10^-9 M、10^-8 M、10^-7 M、10^-6 M或更大。在進一步的例子中，就本發明之目的而言，若抗體顯示pH5.8/pH7.4的KD比值為2或更大，則抗體可被視為“相較於在中性pH之結合，在酸性pH與C5之結合降低”。在一些特定示例性實施例中，抗體的pH5.8/pH7.4的KD比值可為3、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、200、400、1000、10000或更大。在另一實施例中，抗體在pH7.4的KD值可為10^-7 M、10^-8 M、10^-9 M、10^-10 M、10^-11 M、10^-12 M或更小。在另一實施例中，抗體在pH5.8的KD值可為10^-9 M、10^-8 M、10^-7 M、10^-6 M或更大。

在一些特定例子中，“相較於在中性pH之結合，在酸性pH與C5之結合降低”以在酸性pH抗體結合至C5之kd值比上在中性pH抗體結合至C5之kd值的比值來表示(或反之亦然)。例如，就本發明之目的而言，若抗體具有2或更大的酸性/中性kd比值，則該抗體可被視為“相較於在中性pH之結合，在酸性pH與C5之結合降低”。在一些特定示例性實施例中，抗體的pH5.8/pH7.4的kd比值可為2或更大。在一些特定示例性實施例中，抗體的酸性/中性kd比值可為2、3、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、200、400、1000、10000或更大。在又一些實施例中，抗體的pH5.8/pH7.4的kd比值可為2、3、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、200、400、1000、10000或更大。在另一實施例中，抗體在中性pH的kd值可為10^-2 1/s、10^-3 1/s、10^-4 1/s、10^-5 1/s、10^-6 1/s或更小。在又一實施例中，抗體在pH7.4的kd值可為10^-2 1/s、10^-3 1/s、10^-4 1/s、10^-5 1/s、10^-6 1/s或更小。在另一實施例中，抗體在酸性pH的kd值可為10^-3 1/s、10^-2 1/s、10^-1 1/s或更大。在又一實施例中，抗體在pH5.8的kd值可為10^-3 1/s、10^-2 1/s、10^-1 1/s或更大。

如本文中所使用，術語“酸性pH”是指4.0至6.5的pH。術語“酸性pH”包含4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4以及6.5中任一之pH值。在一些特定態樣中，“酸性pH”為5.8。

如本文中所使用，術語“中性pH”是指6.7至約10.0的pH。術語“中性pH”包含6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9以及10.0中任一之pH值。在一些特定態樣中，“中性pH”為7.4。

KD值及kd值，如本文中所表示，可利用以表面電漿共振為基礎(surface plasmon resonance-based)之生物感測器加以測定，以表徵抗體-抗原的相互作用。KD值及kd值可於25℃(度C)或37℃測定。

在另一態樣中，抗C5抗體包括重鏈可變域(VH)序列，其對於序列辨識號:2之胺基酸序列，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%之序列相同性。在一些特定實施例中，VH序列為序列辨識號:2之胺基酸序列。在一些特定實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%之相同性的VH序列，相對於參考序列，包含取代(例如，保守取代)、插入或刪除，但包括那序列的抗C5抗體保有結合至C5的能力。在一些特定實施例中，在序列辨識號:2中，總計1至10個胺基酸是經取代、插入及/或刪除。在一些特定實施例中，取代、插入或刪除發生於HVR外的區域中(即，在FR中)。可選地，抗C5抗體包括序列辨識號:2中的VH序列，其包含那序列的轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包括擇自於:(a) 包括序列辨識號:3之胺基酸序列的HVR-H1、(b) 包括序列辨識號:4之胺基酸序列的HVR-H2、及(c) 包括序列辨識號:5之胺基酸序列的HVR-H3之一個、兩個或三個HVR。

如本文中所使用，術語“HVR”表示“高變異區(hypervariable region)”以及術語“FR”表示“框架(framework)”。

“框架”或“FR”指高變異區(HVR)殘基以外的可變域殘基。可變域的FR一般由四個FR域所組成：FRl、FR2、FR3及FR4。因此，HVR及FR序列一般按以下順序出現在VH(或VL)中：FRl-Hl(LI)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。

本文所使用的術語“高變異區”或“HVR”指抗體可變域在序列上高變異(“互補決定區(complementarity determining region)”或“CDR”)、及/或形成結構上定義的環(“高變異環”)、及/或包含抗原接觸殘基(“抗原接觸”)的每一區域。一般而言，抗體包括六個HVR：三個在VH中(H1、H2、H3)，三個在VL中(L1、L2、L3)。本文中示例性HVR包含：(a) 出現於胺基酸殘基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(Hl)、53-55(H2)以及96-101(H3) (Chothia,J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))的高變異環；(b) 出現於胺基酸殘基24-34(L1)、50-56(L2)、89-97(L3)、31-35b(H1)、50-65(H2)以及95-102(H3) (Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest , 5th Ed. Public Health Service, NIH, Bethesda, MD (1991))的CDR；(c) 出現於胺基酸殘基27c-36(L1)、46-55(L2)、89-96(L3)、30-35b(H1)、47-58(H2)以及93-101(H3) (MacCallum等人，J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996))的抗原接觸；以及(d) (a)、(b)及/或(c)之組合，包含HVR胺基酸殘基46-56(L2)、47-56(L2)、48-56(L2)、49-56(L2)、26-35(H1)、26-35b(H1)、49-65(H2)、93-102(H3)以及94-102(H3)。可變域中的HVR殘基及其它殘基(例如，FR殘基)於本文中是根據Kabat等人，supra進行編號。

在另一態樣中，抗C5抗體包括輕鏈可變域(VL)，其對於序列辨識號: 6之胺基酸序列，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%之序列相同性。在一些特定實施例中，VL序列為序列辨識號：6之胺基酸序列。在一些特定實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%之相同性的VL序列，相對於參考序列，包含取代(例如，保守取代)、插入或刪除，但包括那序列的抗C5抗體保有結合至C5的能力。在一些特定實施例中，在序列辨識號:6中，總計1至10個胺基酸是經取代、插入及/或刪除。在一些特定實施例中，取代、插入或刪除發生於HVR外的區域(即，在FR中)。可選地，抗C5抗體包括序列辨識號: 6，其包含那序列的轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包括擇自於:(a) 包括序列辨識號:7之胺基酸序列的HVR-L1、(b) 包括序列辨識號:8之胺基酸序列的HVR-L2、及(c) 包括序列辨識號:9之胺基酸序列的HVR-L3之一個、兩個或三個HVR。

在另一實施例中，抗體可為全長抗體，例如，完整的IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗體，或藉由重組在IgG亞類(subclass)之間的同源區域內改造(engineered)成具有選自IgG1、IgG2、IgG3及IgG4中的兩種或更多種的IgG的區域的抗體。抗體可包括任一合適的Fc區，所述Fc區包括人類Fc區序列(例如，人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc區)。

Fc區變異體在一些特定實施例中，用於本發明的抗C5抗體包括Fc區變異體，其中一或多個胺基酸修飾導入至抗體的天然序列Fc區中。Fc區變異體可包括人類Fc區序列(例如，人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc區)，其在一或多個胺基酸位置包括胺基酸修飾(例如，取代)。

在一些特定實施例中，本發明設想具有一些但並非全部效應物(effector)功能的抗體變異體，這使得其為應用的理想的候選者，所述應用中抗體的體內(in vivo )半生期是重要的，然而特定效應物功能(像是補體及ADCC)為不必要或有害的。可進行試管內及/或體內細胞毒性分析以確認CDC及/或ADCC活性的降低/耗盡。例如，可進行Fc受體(FcR)結合分析以確保抗體缺少FcγR(Fc gamma R)結合(因此可能缺少ADCC活性)，但保留FcRn結合能力。調節ADCC的主要細胞，NK細胞，僅表達FcγRIII，然而單核細胞表達FcγRI、FcγRII及FcγRIII。造血細胞上的FcR表達總結於Ravetch及Kinet,Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)第464頁的表3中。用於評估感興趣的分子的ADCC活性的試管內(in vitro )分析的非限制性例子描述於美國專利號5,500,362 (請參照，例如Hellstrom等人，Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986))及Hellstrom等人，Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)；美國專利號5,821,337(請參照，Bruggemann等人，J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987))中。或者，可採用非放射性分析(請參照，例如，流式細胞術的ACTI^™ 非放射性細胞毒性分析(CellTechnology, Inc. Mountain View, CA)；及CytoTox 96 (註冊商標)非放射性細胞毒性測定法(Promega, Madison, WI))。用於此類分析之有用的效應物細胞包含周邊血液單核細胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)及自然殺手(Natural Killer，NK)細胞。替代地、或額外地，感興趣的分子的ADCC活性可在體內(in vivo )評估，例如在動物模型中，如Clynes等人，Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)中所公開。也可進行Clq結合分析以確定抗體不能結合Clq並因此缺少CDC活性。請參照，例如，WO 2006/029879及WO 2005/100402中的Clq及C3c結合的ELISA。為了評估補體活化，可進行CDC分析(請參照，例如，Gazzano-Santoro等人，J. Immunol. Methods 202:163 (1996)；Cragg等人，Blood 101:1045-1052 (2003)；及Cragg等人，Blood 103:2738-2743 (2004))。FcRn結合及體內清除/半生期測定也可使用發明所屬技術領域已知的方法進行(請參照，例如，Petkova等人，Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006))。

具有降低的效應物功能的抗體包含在Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329中的一或多個具有取代的那些抗體(美國專利號6,737,056)。此類Fc突變體包含在胺基酸位置265、269、270、297及327中的兩個或更多個具有取代的Fc突變體，包含具有殘基265及297取代為丙胺酸的所謂的“DANA”Fc突變體(美國專利號7,332,581)。

對FcR具有改善或減弱的結合之特定抗體變異體已被描述。(請參照，例如美國專利號6,737,056；WO 2004/056312；及Shields等人，J. Biol. Chem. 9(2):6591-6604 (2001))。

在一些特定實施例中，抗體變異體包括具有改善ADCC的一個或多個胺基酸取代的Fc區，例如，在Fc區的位置298、333及/或334(殘基的EU編號)的取代。

在一些實施例中，在Fc區中形成改變，其導致改變的(即，改善或減弱的)Clq結合及/或補體依賴性細胞毒性(Complement Dependent Cytotoxicity，CDC)，例如，如美國專利號6,194,551、WO 1999/51642，及Idusogie等人，J. Immunol. 164:4178-4184 (2000)中所述。

對新生兒Fc受體(neonatal Fc receptor，FcRn)具有增加的半生期及改善的結合之抗體描述於US2005/0014934(Hinton等人)中，所述新生兒Fc受體負責將母體IgG傳送至胎兒(Guyer等人，J. Immunol. 117:587 (1976)及Kim等人，J. Immunol. 24:249 (1994))。那些抗體包括具有一個或多個取代於其中的Fc區，其改善Fc區對FcRn的結合。此類Fc變異體包含在Fc區殘基：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、 376、378、380、382、413、424或434的一或多個具有取代的那些，例如，Fc區殘基434的取代(美國專利號7,371,826)。

關於Fc區變異體的其它例子，請亦參照Duncan，Nature 322:738-40 (1988)；美國專利號US 5,648,260；美國專利號US 5,624,821；及WO 1994/29351。

在一些特定實施例中，用於本發明的抗C5抗體包括如上文提供的任一實施例中的VH，以及包括序列辨識號：10、11、12、13、14及15中任一者的胺基酸序列的重鏈恆定區。在一些特定實施例中，抗C5抗體包括如上文提供的任一實施例中的VL，以及包括序列辨識號：16、17及18中任一者的胺基酸序列的輕鏈恆定區。

在一些特定實施例中，用於本發明的抗C5抗體為WO2016/098356、WO2017/123636及WO2017/132259中所描述的任一抗體。

皮下施用用於本發明的醫藥組合物係以兩階段進行皮下施用。在兩階段中，每兩次皮下施用間具有一間隔。各階段包括至少一間隔。第一階段的最終間隔係於第一階段的最後一次皮下施用與第二階段的第一次皮下施用之間。

在一些特定實施例中，第一階段中的至少一間隔為1天至2個月。根據受試者或患者的症狀，可以在合適的範圍內決定第一階段中的適當間隔。皮下注射之間的具體施用間隔為3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、32天、33天、34天、35天、36天、37天、38天、39天、40天、41天或42天。在一些優選實施例中，第一階段中的間隔為4天至35天。在一些更優選實施例中，第一階段中的間隔為5天至14天。在一些最優選實施例中，第一階段中的間隔為7或14 天。醫藥組合物在第一階段中可每週施用一次(每週的(weekly))或每兩週施用一次(每兩週的(two-weekly)或每兩週的(biweekly))。

在一些特定實施例中，第二階段中的至少一間隔為2天至6個月。根據受試者或患者的症狀，可以在合適的範圍內決定第二階段中的至少一間隔的適當長度。第二階段中至少一間隔的例示性長度為2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、32天、33天、34天、35天、36天、37天、38天、39天、40天、41天、42天、43天、44天、45天、46天、47天、48天、49天、50天、51天、52天、53天、54天、55天、56天、57天、58天、59天、60天、61天、62天、63天、64天、65天、66天、67天、68天、69天、70天、71天、72天、73天、74天、75天、76天、77天、78天、79天、80天、81天、82天、83天、84天、85天、86天、87天、88天、89天、90天、91天、92天、93天、94天、95天、96天、97天、98天、99天、100天、101天、102天、103天、104天、105天、106天、107天、108天、109天、110天、111天、112天、113天、114天、115天、116天、117天、118天、119天、120天、121天、122天、123天、124天、125天、126天、127天、128天、129天、120天、121天、122天、123天、124天、125天、126天、127天、128天、129天、130天、131天、132天、133天、134天、135天、136天、137天、138天、139天、140天、141天、142天、143天、144天、145天、146天、147天、148天、149天、150天、151天、152天、153天、154天、155天、156天、157天、158天、159天、160天、161天、162天、163天、164天、165天、166天、167天、168天、169天、170天、171天、172天、173天、174天、175天、176天、177天、178天、179天、180天、181天、182天、183天或184天。在一些優選實施例中，第二階段之至少一間隔的長度為15天至3個月。在第二階段中，醫藥組合物可每月施用一次(每月的(monthly))、每兩月施用一次(每兩月的(two-monthly)或每兩月的(bimonthly))或每三月施用一次(每三月的(three-monthly)或每三月的(trimonthly))。較長的期間可以降低患者的負擔或痛苦。

在一些特定實施例中，醫藥組合物在第一與第二階段中以17至6,000 mg的抗體的劑量被皮下施用。根據受試者或患者的症狀，可以在合適的範圍內決定適當的劑量。在醫藥組合物重複地皮下施用於受試者的情況下，劑量不須一直相同，可在合適的範圍內決定劑量。舉例而言，劑量可逐漸減少。

在一些特定的實施例中，第一階段的皮下施用中的抗體劑量為50mg至350mg。當第一階段中的每次皮下施用的抗體劑量低於第二階段中的每次皮下施用的抗體劑量時，第一階段中的每次皮下施用的抗體劑量較佳為150至200mg。在此情況下，具體的優選劑量包括170mg。當第一階段中的每次皮下施用的抗體劑量等於第二階段中的每次皮下施用的抗體劑量時，第一階段中的每次皮下施用的劑量較佳為300至350mg的抗體。在此情況下，具體的優選劑量包括340mg。當醫藥組合物在第一階段是每週進行施用(以約7天的間隔)時，優選的劑量為170mg或340mg。當醫藥組合物在第一階段是每兩週進行施用(以約14天的間隔)時，優選的劑量為340mg。

在一些特定實施例中，第二階段中的每次施用的抗體劑量為350mg至1,000mg。在一些優選實施例中，劑量為650至700mg。當醫藥組合物是每四週(以約28天的間隔)或每月進行施用時，優選的劑量為680mg。每四週或每月一次皮下施用680mg的抗體之給藥方案將為特別優選的，由於其可降低患者的負擔或痛苦。

在一些特定實施例中，第一階段中每次施用的抗C5抗體劑量比第二階段中每次施用的抗C5抗體劑量低3至5倍。在一些優選的實施例中，第一階段中每次皮下施用的抗體劑量比第二階段中每次皮下施用的抗體劑量低4倍。

在一些特定實施例中，第一階段中皮下施用的次數為1至12次。在一些優選的實施例中，次數為5至10次。在一些更優選實施例中，第一階段中有8次皮下施用。

在一些特定實施例中，可用於皮下注射的一般組合物的任一醫藥上可接受的載體可被包含於醫藥組合物中。用於皮下注射的載體的種類可從發明所屬技術領域習知的載體中適當地選擇。

在一些特定實施例中，醫藥組合物的配方(formulation)可擇自由液體、半固體及固體所組成的群組中的任一者。固體組合物通常是由液體配方，藉由冷凍乾燥(lyophilization)製備。冷凍乾燥的組合物通常在皮下注射注射之前，才會使用水或生理食鹽水復原。

當組合物被皮下施用時，組合物的液體配方中的抗C5抗體的濃度經測定是在發明所屬技術領域的一般範圍內。在一些特定實施例中，用於皮下注射的組合物的體積經測定是在發明所屬技術領域的一般範圍內。

在一些特定實施例中，C5相關疾病為涉及過量或不受控制的C5活化之補體調節的疾病或症狀(condition)。在一些特定實施例中，C5相關疾病為擇自由下列所組成之群組的至少一者：類風濕性關節炎(RA)；狼瘡腎炎；局部缺血-再灌注損傷；陣發性夜間血紅素尿症(PNH)；非典型性溶血性尿毒症候群(aHUS)；緻密沉積物疾病(DDD)；黃斑部病變；溶血、肝酶提高及血小板低下(HELLP)症候群；血栓性血小板減少性紫癜症(TTP)；自發性流產；寡免疫性血管炎(Pauci-immune vasculitis)；表皮溶解水疱症；復發性流產；多發性硬化症(MS)；創傷性腦損傷；以及由心肌梗塞、心肺繞通及血液透析所導致的損傷；難治性全身重症肌無力(refractory generalized myasthenia gravis，gMG)；視神經脊髓炎(neuromyelitis optica，NMO)。在一優選的實施例中，C5相關疾病為擇自由PNH、aHUS、gMG及NMO所組成之群組的至少一者。在一些更優選實施例中，C5相關疾病為PNH。

在一些特定態樣中，在第一階段的第一皮下施用前，施用配製用以靜脈內施用並包括抗C5抗體的醫藥組合物。優選的是，靜脈內施用的組合物的抗C5抗體與皮下施用的組合物的抗C5抗體相同。靜脈內施用的醫藥組合物與下文中提到的相同。

在一些特定實施例中，用於皮下注射的組合物是在靜脈內地施用用於靜脈內注射的組合物的劑量的同一天或一天或更多天之後進行皮下施用。在施用用於皮下注射的組合物的第一劑量之前，可施用用於靜脈內注射的組合物的一或多個劑量於受試者或患者。在一優選的實施例中，用於皮下注射的組合物的第一劑量是在用於靜脈內注射的組合物的最終劑量之後進行施用。

在一些特定實施例中，第一階段的第一次皮下施用是在最後一次施用靜脈內施用的醫藥組合物後0天至1個月進行。具體而言，第一皮下施用與最後一次靜脈內施用之間的期間(period)為0天(即，在24小時內)、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天或31天。在一些優選的實施例中，期間為0天(即，在24小時內)至14天。在一些更優選的實施例中，期間為0天(即，在24小時內)至10天。在一些最優選的實施例中，期間為0天(即，在24小時內)至8天。

III. 用於靜脈內注射的醫藥組合物在本發明的一些特定態樣中，於本發明使用的醫藥組合物之第一階段中的第一次皮下施用是在用於靜脈內施用的組合物的最後一次施用後施用。

因此，在本發明一實施例中，在第一階段的第一皮下施用前，靜脈內施用配製用以靜脈內施用並包括抗C5抗體的醫藥組合物。在一優選實施例中，靜脈內組合物的抗C5抗體與皮下組合物的抗C5抗體相同。

優選的是，在第一次皮下施用後不進行靜脈內施用。因此，在更一實施例中，最後一次靜脈內施用是在第一次皮下施用前。

本發明中被配製(formulated)用於靜脈內注射的醫藥組合物是用於治療或預防C5相關疾病，包括抗C5抗體，且是靜脈內地進行施用。靜脈內注射可使用一般裝置及方法進行，可藉由注射將醫藥組合物施用於靜脈。亦可選擇用於皮下注射的特定裝置及方法。亦可選擇用於靜脈內注射的特定裝置及方法。

用於靜脈內注射的抗C5抗體可為如上所述用於皮下注射的醫藥組合物的任一抗體。用於靜脈內注射的醫藥組合物及用於皮下注射的醫藥組合物可包含相同的抗C5抗體或可包含不同的抗C5抗體。在一些優選的實施例中，用於靜脈內注射的抗C5抗體與前述用於皮下注射的抗體相同。

在一些特定實施例中，醫藥組合物是以50至5,000 mg的抗體的劑量靜脈內施用。根據受試者或患者的症狀，可以在合適的範圍內決定適當的劑量。在醫藥組合物重複地靜脈內施用於受試者或患者的情況下，劑量不須一直相同，可任意決定只要劑量在合適的範圍內即可。舉例而言，劑量可逐漸減少。在一些優選的實施例中，劑量的範圍可為55至4,000 mg的抗體。在一些更優選的實施例中，劑量的範圍可為60至2,500 mg的抗體。在一些最優選的實施例中，劑量的範圍可為100至2,000 mg的抗體。具體優選的劑量為為75 mg、125 mg、150 mg、300 mg、375 mg、500 mg及1,000 mg。更優選的劑量為375 mg、500 mg及1,000 mg，且在這些劑量中，最優選的為1,000 mg。

在一些特定實施例中，藉由靜脈內注射的醫藥組合物的施用次數並未特別限定，且可為一次或多次。在一些優選的實施例中，次數為一次、兩次或三次。在一些更優選的實施例中，次數為一次或兩次。在最優選的實施例中，次數為一次。較少的次數可降低患者的負擔或痛苦。

在一些特定實施例中，在醫藥組合物重複地靜脈內施用於受試者或患者的情況下，組合物是每小時施用一次至每14天施用一次。根據受試者或患者的症狀，可在合適的範圍內決定靜脈內注射之間的適當施用間隔。靜脈內注射之間的具體施用間隔為1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、11小時、12小時、13小時、14小時、15小時、16小時、17小時、18小時、19小時、20小時、21小時、22小時、23小時、24小時、25小時、26小時、27小時、28小時、29小時、30小時、31小時、32小時、33小時、34小時、35小時、36小時、37小時、38小時、39小時、40小時、41小時、42小時、43小時、44小時、45小時、46小時、47小時、48小時、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、或14天。在一些優選的實施例中，施用間隔為24小時至10天。在一些更優選的實施例中，施用間隔為48小時至7天。在一些最優選的實施例中，施用間隔為3至5天。

在一些特定實施例中，可用於靜脈內注射的一般組合物的任一醫藥上可接受的載體可被包含於醫藥組合物中。用於靜脈內注射的載體的種類可從發明所屬技術領域習知的載體中適當地選擇。

在一些特定實施例中，醫藥組合物的配方可擇自由液體、半固體及固體所組成的群組中的任一者。固體組合物通常是由液體配方，藉由冷凍乾燥製備。冷凍乾燥的組合物通常在靜脈內注射之前，才會使用水或生理食鹽水復原。用於靜脈內注射的醫藥組合物的配方可與用於皮下注射的醫藥組合物的配方相同或不同。在一些優選的實施例中，用於靜脈內注射的醫藥組合物的配方與用於皮下注射的醫藥組合物的配方相同，以降低製造成本。

當組合物被靜脈內施用時，組合物的液體配方中的抗C5抗體的濃度經測定是在發明所屬技術領域的一般範圍內。在一些特定實施例中，用於靜脈內注射的組合物的體積經測定是在發明所屬技術領域的一般範圍內。

在一些特定態樣中，用於靜脈內注射的劑量是在另一醫藥組合物的初始劑量皮下地注射之前進行施用。用於皮下注射的醫藥組合物與前述的醫藥組合物相同。

在一些特定實施例中，用於靜脈內注射的組合物是在皮下地施用用於皮下注射的組合物的第一劑量的同一天或一天或更多天之前進行靜脈內施用。在施用用於皮下注射的組合物的第一劑量之前，可施用用於靜脈內注射的組合物的一或多個劑量於受試者或患者。在一優選的實施例中，用於靜脈內注射的組合物的最終劑量是在用於皮下注射的組合物的第一劑量之前進行施用。

在一些特定實施例中，用於靜脈內注射的組合物的劑量是在用於皮下注射的組合物的第一劑量的同一天或1天至1個月之前進行施用。用於靜脈內注射的組合物的劑量與用於皮下注射的組合物的第一劑量之間的具體間隔為0天(即，在24小時內)、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天或31天。在一些優選的實施例中，間隔為0天(即，在24小時內)至14天。在一些更優選的實施例中，間隔為0天(即，在24小時內)至10天。在一些最優選的實施例中，間隔為0天(即，在24小時內)至8天。

IV. 從其它藥理產品(pharmacological product)的轉換在另一態樣中，前述用於皮下或靜脈內注射的醫藥組合物對於在已經以至少一種用於治療或預防疾病的藥理產品治療一次或多次的受試者的C5相關疾病的治療或預防是有用的。舉例而言，本發明的醫藥組合物對於治療已經以至少一種用於治療或預防疾病的藥理產品的具有C5相關疾病的患者是有用的，但藉由本發明的醫藥組合物的治療預期具有更佳的反應。在這種情況下，藥物治療可從藥理產品轉換至本發明的醫藥組合物。在一些優選的實施例中，本發明中用於靜脈內注射的組合物的初始劑量是在已用於先前治療的藥理產品的最終劑量之後進行施用。

在一些特定實施例中，藥理產品包括與前述用於皮下及靜脈內注射的組合物中的抗C5抗體不同的活性物質。在一些實施例中，藥理產品的活性物質為標靶C5 mRNA的siRNA，或與前述用於皮下及靜脈內注射的組合物中包括的抗C5抗體不同的抗C5抗體。在一些優選的實施例中，藥理產品包括與前述用於皮下及靜脈內注射的組合物中的抗體不同的抗體。在最優選的實施例中，包括於已經用於先前治療的藥理產品中的抗體為eculizumab或其衍生物。

在一些特定實施例中，本發明中用於靜脈內注射的組合物的初始劑量是在施用藥理產品的最終劑量的同一天或1天或更多天之後進行施用。藥理產品的最終劑量與本發明之用於靜脈內注射的組合物的初始劑量之間的具體間隔為0天(代表用於靜脈內注射的組合物的初始劑量與藥理產品的最終劑量在同一天施用)、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、或21天。在一些優選的實施例中，本發明之用於靜脈內注射的組合物是在藥理產品的最終劑量的3天或更多天之後進行施用。在一些較優選的實施例中，本發明之用於靜脈內注射的組合物是在藥理產品的最終劑量的7天或更多天之後進行施用。在一些更優選的實施例中，本發明之用於靜脈內注射的組合物是在藥理產品的最終劑量的14天或更多天之後進行施用。在一些最優選實施例中，本發明之用於靜脈內注射的組合物是在藥理產品的最終劑量的21天或更多天之後進行施用。

V.用於治療或預防的方法在一些其它態樣中，本發明涵蓋用於治療或預防C5相關疾病的方法。

在一實施例中，方法包括對受試者皮下施用醫藥組合物，其係配製用於皮下注射並包括抗C5抗體，其中組合物係以兩階段進行皮下施用，其中在兩階段中每兩次皮下施用間具有一間隔，其中各階段包括至少一間隔，且其中於第一階段中 i.至少一間隔短於第二階段中的至少一間隔；以及 ii. 每次施用之抗體的劑量低於或等於第二階段中每次施用之抗體的劑量。皮下施用的醫藥組合物與上文中提到的相同。

在一些特定實施例中，在第一階段的第一皮下施用前，施用配製用於靜脈內施用並包括抗C5抗體的醫藥組合物。靜脈內施用的醫藥組合物與上文中提到的相同。

方法中使用的用於皮下或靜脈內注射的醫藥組合物的症狀及標靶疾病與前述“II. 用於皮下注射的醫藥組合物”及“III. 用於靜脈內注射的醫藥組合物”部分中提及的相同。

VI. 接種免疫(vaccination) 傳染病(例如，腦膜炎球菌感染(meningococcal infection))可發生在經施用抗C5抗體的受試者中。為了預防這種感染性疾病，在前述用於皮下及靜脈內注射的組合物施用之前、之後或期間，可用已知用於治療或預防疾病的疫苗對受試者接種免疫。

VII. 製品(article of manufacture) 在本發明的另一態樣中，提供包含對於前述C5相關疾病的治療或預防有用的材料的製品或產品。製品或產品包括一或多個容器，以及在容器上或與容器相關的標籤或仿單(package insert)。合適的容器包含，例如，瓶子(bottle)、小瓶(vial)、注射器、SC溶液注射器等。容器可由各種材料如玻璃或塑膠製成。容器可由多種材料製成，例如玻璃或塑膠。容器容納一種組合物，所述組合物為其本身或與另一種有效治療或預防疾病的組合物組合，且可具有無菌入孔(access port)(例如，容器可以是具有可被皮下注射針刺穿的塞子的小瓶)。組合物中的至少一種活性劑為前述的抗C5抗體。標籤、仿單或此類文件指示組合物用於治療選擇的症狀，例如，上述的任何C5相關疾病。

在一些特定實施例中，包含於製品或產品的容器中的組合物是用於皮下注射。此實施例中的製品或產品可進一步包括指示下述施用方法的仿單。醫藥組合物係以兩階段進行皮下施用，其中於兩階段中每兩次皮下施用間具有一間隔。各階段包括至少一間隔。在第一階段中(i)至少一間隔短於第二階段中的至少一間隔，以及(ii)每次施用之抗體劑量低於或等於第二階段中每次施用之抗體劑量。

在一些特定實施例中，製品或產品更包括包含組合物於其中的額外的容器，其中組合物包括另外的治療劑。此實施例的製品可進一步包括指示組合物可用於治療特定症狀的仿單。可選地或額外地，製品可進一步包括另一額外的容器，其包括醫藥上可接受的緩衝劑，例如，注射用抑菌水(bacteriostatic water for injection，BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格溶液(Ringer's solution)及葡萄糖溶液。製品可進一步包括從商業及使用者的觀點所需的其它材料，包含其它緩衝液、稀釋劑、過濾器、針頭及注射器。

[實施例] 以下為本發明的方法及組合物的實施例。應理解的是，在以上提供的一般性描述之前提下，可以實行各種其它的實施例。

實施例1 抗C5抗體的產生藉由一般方法製備WO2016/098356中的抗C5抗體305LO15。簡言之，將編碼為305LO15的重鏈可變域(VH)的基因與編碼為經修飾的人類IgG1重鏈恆定域(CH)變異體SG115(序列辨識號：13)的基因結合。將編碼為305LO15的輕鏈可變域(VL)的基因與編碼為人類輕鏈恆定域(CL) (SK1，序列辨識號：18)的基因結合。在以重鏈及輕鏈表達載體的組合共轉染(co-transfected)的HEK293細胞中表達抗體，並藉由蛋白質A純化。

實施例2 因為蛋白質難以濃縮，因此蛋白質藥物(例如，抗體藥物)通常靜脈內地施用。實際上，目前唯一被批准可用於治療的抗體eculizumab，便為靜脈內施用的。若皮下注射變成可用的，則自我注射為可能的，將能減輕患者的負擔，例如，移動治療及在醫院進行靜脈內注射耗費的漫長時間。

為了試驗皮下施用抗C5抗體的可能性，選擇WO2016/098356中公開的305LO15，因為其具有高溶解度。較高的溶解度被認為可提供蛋白質藥物可以以較小體積被施用的可能性，允許皮下注射。用於靜脈注射與皮下注射的醫藥配方配製為以下一般配方。 170mg/mL 305LO15 30mM 組胺酸/天門冬胺酸 100mM精氨酸鹽酸 0.05%波洛莎姆188(Poloxamer 188) pH 5.8

為了比較305LO15在皮下注射或靜脈內注射之後的藥物動力學(pharmacokinetics)，將石蟹獼猴分成兩組，皮下注射組及靜脈內注射組。皮下施用305LO15於第一組的動物(3隻雄性及3隻雌性)，每週一次，總共22次，每次給藥40 mg/kg的抗體。在如第1A圖所示的時間點，使用ELISA分析測量這些動物的血漿305LO15濃度。靜脈內施用305LO15於第二組的動物(6隻雄性及6隻雌性)，每週一次，總共5次，每次給藥40 mg/kg的抗體。在如第1b圖所示的時間點，使用ELISA分析測量動物的血漿305LO15濃度。

如第1A圖所示，皮下注射增加石蟹獼猴的血漿305LO15濃度，證實可藉由皮下注射施用305LO15用於治療。在初始劑量之後，皮下施用(第1A圖)的血漿濃度初始上升的速率低於靜脈內注射的(第1B圖)。

實施例3 接著，研究是否可以藉由靜脈內注射305LO15來補償在皮下注射的初始劑量之後血漿濃度上升相對緩慢的速率。對五隻雄性及五隻雌性的石蟹獼猴，以100 mg/kg的抗體的劑量靜脈內施用305LO15的初始劑量一次。從最初的靜脈內施用一周之後，開始305LO15的皮下注射。總共給予26次的皮下注射，以每次給藥為40 mg/kg的抗體的劑量、每週一次的進度給予。

如第2圖所示，與不具有靜脈內注射的初始劑量的情況相比，在藉由皮下注射的維持劑量之前以靜脈內注射施用抗體的初始劑量的情況下，305LO15的血漿濃度上升的速率較快。305LO15的血漿濃度達到並維持在與第1A圖所示相當的水平。血漿305LO15濃度此種較快的上升被認為有助於藥物更快地達到治療效果。

實施例4 為了預估305LO15的有效血漿濃度，在石蟹獼猴中測定游離抗原的血漿濃度(C5)或補體活性與抗體的血漿濃度(305LO15)之間的關係。靜脈內地(0.8 mg/kg、4 mg/kg或20 mg/kg)或皮下地(4 mg/kg)施用305LO15。藉由ELISA測量抗體及游離C5的血漿濃度。藉由RBC溶血分析測量補體活性。如第3圖所示，當305LO15的血漿濃度維持在40 μg/mL以上的305LO15時，游離C5的濃度被抑制至小於亞微克/毫升(sub μg/mL)的水平(第3A圖)，且40 μg/mL或更高的305LO15的血漿濃度將補體活性(溶血)抑制至小於基線的20%(即，沒有抗體作用)(第3B圖)。當血漿中維持40μg/mL或更高濃度的305LO15時，估計補體活性被抑制至小於基線的20%(即，未注射抗體)。

實施例5 為了測定305LO15的合適劑量及施用以維持臨床試驗中有效的血漿305LO15濃度，藉由模擬預測人體中血漿305LO15濃度的時間進程。首先，在每次給藥以0.8、4、20 mg/kg的抗體施用抗體於石蟹獼猴之後，隨時間的過去測量血漿305LO15濃度。使用2-隔室模型(2-compartment model)分析數據以估計石蟹獼猴PK參數。使用異速生長尺度(allometric scaling)，根據石蟹獼猴PK參數估計人類PK參數。經估計的人類PK參數如表1所示(表1中的參數縮寫：BW，體重；CL，藥物的總清除率；F，生物可利用率，或成為系統可用的藥物的施用劑量的部分；Ka，吸收速率常數；mAb，單株抗體；PK，藥物動力學；Q，隔室間清除率(intercompartmental clearance)；SC，皮下的；Vc，中央隔室的分佈體積(volume of distribution for the central compartment)；Vp，周邊隔室的分佈體積(volume of distribution for the peripheral compartment)

[表1]

*Dirks NL, Meibohm B. Population pharmacokinetics of therapeutic monoclonal antibodies. Clin Pharmacokinet 2010;49:633-59

估計每個群組(cohort)預期的1/2期研究的人類PK曲線圖(profile)(第4圖)。研究的第1部分被設計用以包含3組受試者。第一組是以75毫克/個體(mg/body)的劑量靜脈內施用305LO15一次的一組受試者。第二組是以150毫克/個體的劑量靜脈內施用305LO15一次的一組受試者。第三組是以170毫克/個體的劑量皮下施用305LO15一次的一組受試者。接受上述任一種劑量的受試者的血漿305LO15濃度被預測未維持超過閾值(40 μg/mL)超過一周(第4A圖)。

研究的第2部分被設計用以包含靜脈內施用305LO15三次的一組受試者(最初以300毫克/個體的劑量，接著在初始施用後一周以500毫克/個體的劑量，且最後在第二次施用後兩周以1000毫克/個體的劑量)，以及從最後一次靜脈內施用後兩周開始，以170毫克/個體的劑量每週一次皮下施用305LO15。藉由第2部分研究的給藥方案，305LO15濃度被預測維持高於PD閾值(40 μg/mL)(第4B圖)。

研究的第3部分被設計用以包含三組受試者。最初以500毫克/個體的劑量靜脈內施用305LO15於所有組別的受試者一次。從初始施用後的隔天開始，以170毫克/個體的劑量每週一次皮下施用305LO15於第一組的受試者，以340毫克/個體的劑量每兩週一次皮下施用305LO15於第二組的受試者，以及以600毫克/個體的劑量每四週一次皮下施用305LO15於第三組的受試者。在第3部分研究的全部三組中，305LO15濃度被預期均維持在高於PD閾值(40 μg/mL)(第4C圖)。

實施例6 Eculizumab已被使用於治療具有PNH或aHUS的患者。在預期305LO15比eculizumab對PNH或aHUS患者具有更理想的效果的情況下，對患者的藥物治療可從eculizumab轉換至305LO15。同時，由於305LO15的抗原決定基與eculizumab的抗原決定基不同，305LO15可能會與C5及eculizumab於體內形成免疫複合物，亦即，305LO15與C5的β鏈結合，同時eculizumab與C5的α鏈結合。此種免疫複合物的形成可能造成異常活化，因此盡可能避免為理想的。

為了研究305LO15是否與eculizumab (ECZ，序列辨識號：19顯示的重鏈序列以及序列辨識號：20顯示的輕鏈序列)及人類C5(hC5，序列辨識號：21)形成免疫複合物，使用尺寸排阻層析法(size-exclusion chromatography，SEC)進行試管內分析。根據WO2016/098356公開的方法製備hC5。將ECZ、hC5及305LO15以DPBS pH7.4透析(dialyze)以進行緩衝液交換。接著，將ECZ及hC5混合並於37℃培養3~4小時。在培養之後，添加305LO15於包含ECZ及hC5的此混合液中。將ECZ及hC5的最終濃度調整至200 μg/mL，以及將305LO15濃度調整至0、25、125、250或1250 μg/mL。將這些混合液於37℃培養3~4小時之後，在pH7.4及pH6.0進行SEC分析。SEC的具體條件如下。 HPLC系統：Waters Alliance e2695 HPLC系統管柱：TSKgel G4000SWXL 管柱溫度：25℃ 洗提液(eluent)；50mM Na-PB/300mM NaCl，pH7.4或pH6.0 流速：0.5 mL/分鐘偵測：220nm UV吸收注射：10 μL(micro L)

結果，在125至1250μg/ mL濃度的305LO15在pH6.0時不影響SEC曲線圖，但在pH7.4時會影響曲線圖。更具體而言，當305LO15與ECZ及hC5混合時，除了小的複合物的波峰之外(請參照第5圖中的波峰“2Ag+Ab”及“Ag+Ab”，上圖)，在pH7.0檢測到未在pH6.0檢測到的大的ECZ/hC5/305LO15免疫複合物的波峰(請參照第5圖箭頭指示的波峰，上圖)。在pH6.0僅檢測到小的複合物的波峰(請參照第5圖下圖，對應於第5圖上圖中的“2Ag+Ab”及“Ag+Ab”)。根據305LO15的結合特性(在pH7.4與hC5結合，但在pH6.0未與hC5結合)，這代表305LO15在pH7.4與ECZ/hC5複合物結合，但在pH6.0未與ECZ/hC5複合物結合。由這些結果可知，同時施用305LO15及ECZ於受試者可導致大的免疫複合物於血漿中的形成。

實施例7 研究BP39144，適應性(adaptive)第I/II期研究，於健康志願者及患有陣發性夜間血紅素尿症(PNH)的患者中，評估305LO15的安全性、療效、藥物動力學(PK)及藥物藥效學(pharmacodynamics，PD)。

研究BP39144的第1部分(隨機、研究者/受試者雙盲試驗(blinded)、適應性(adaptive)、安慰劑控制(placebo-controlled)、平行組研究)評估於健康志願者中305LO15的單一劑量的安全性及耐受性。在每個劑量-水平/群組中，共有5名健康志願者隨機接受單一靜脈內(IV；群組1及2)或皮下(SC；群組3)的305LO15或安慰劑的施用。研究具有適應性設計，在開始下一次施用之前持續評估可得的安全性、耐受性、PK及PD數據。組群1、2及3的計劃劑量水平分別為75mg IV、150mg IV及170mg SC(第4A圖)。根據對群組1的PK及PD數據的初步檢視，群組2及群組3的劑量降低至125mg IV(群組2)及100mg SC(群組3)。

對於IV輸注，在給藥前(pre-dose)、IV輸注結束時(1小時)、給藥後(post-dose)2、6、12、24、48、72、96及144小時，以及在第14、21、28、35、42、56、84及91天收集血液樣本。對於SC施用，在給藥前、在給藥後12、24、48、72、96及144小時，以及第14、21、28、35、42、56、84及91天收集血液樣本。

研究BP39144的第1部分的初步安全性結果顯示，在評估的所有劑量水平(75及125mg IV及100mg SC)下，305LO15的耐受性良好。可用的臨床安全性訊息未發生重大的安全性疑慮，也沒有證據顯示不良事件(adverse event)或實驗室測試異常的模式存在。於任一治療組別中，生命徵象(vital sign)或12導程心電圖(12-lead electrocardiogram)中沒有顯著的發現或趨勢。

305LO15的血清中的初步的PK結果及模擬濃度-時間曲線圖呈現於第6圖、第7圖及第8圖中。根據這些數據，健康受試者中的305LO15 PK與以石蟹獼猴PK數據為根據的人類PK的最初預測一致(實施例5)。在IV劑量之後，暴露量似乎與75至125mg的劑量成正比。估計體重70kg的一般患者的末端半生期(t_1/2 )約為25天。在SC施用之後，初步的PK結果顯示305LO15的暴露在約第7天達到峰值，且生物可利用率約為90%。在吸收之後，t_1/2 與IV輸注的t_1/2 相當。

暴露-反應關係的初步評估支持最初的預測，即，每毫升(mL)的血液需要大約40μg的305LO15以達到完全補體抑制(第9圖)。

實施例8 研究BP39144的第2部分(開放式(open-label)、多劑量、全球多中心(global multicenter)、個體內劑量遞增研究)評估安全性及耐受性共5個月的持續期間，以及多劑量的305LO15對未受治療的PNH患者(treatment naïve PNH patient)的補體活性的藥物藥效學效果。在此研究中，納入(enroll)6名PNH患者。納入的患者並未接受任何補體抑制劑治療或先前曾接受治療但因為基於單一錯義(missense)C5雜合突變造成缺乏療效而停止治療，且在篩選時顯示增加的血清LDH水平(> 1.5×ULN)(ULN：正常上限)。

6名患者中的一名患者(患者X)為PNH患者及以補體抑制劑治療的候選人。患者X接受三次單一上升的(single-ascending)IV劑量；在第1天375mg的305LO15的單一輸注，接著在第8天500mg的305LO15的單一輸注，以及進一步在第22天1000mg的305LO15的單一輸注。第一次SC施用(170mg)在第36天開始，接著每週地(QW)SC注射(170mg)305LO15，其將持續總共5個月的治療期間。

來自患者X的初步藥物藥效學的結果如表2及第10圖所示。LDH水平，作為溶血的藥物藥效學的指標(marker)，在第15天下降至正常範圍限制內的水平，在第36天進一步下降，並在第43天維持在正常的(normalized)水平(表2及第10A圖)。如表2及第10B圖所示，脂質體免疫分析(liposome immunoassay，LIA）的結果顯示補體活性在研究開始日輸注結束時(第1天)被完全抑制。第1天375mg 305LO15的劑量維持完全補體抑制，直到第8天的500mg 305LO15的下一次劑量。第8天500mg 305LO15的劑量維持完全補體抑制，直到第22天的1000mg 305LO15的下一次劑量。第22天1000mg 305LO15的劑量維持完全補體抑制，直到第36天的170 mg 305LO15的下一次SC劑量。第36天的SC劑量在第43天維持完全補體抑制。

305LO15耐受性良好，僅有與治療無關的輕微腹痛。

[表2]

實施例9 研究BP39144的第3部分(開放式、多劑量、全球多中心研究)評估安全性及耐受性共5個月的持續期間，以及多劑量的305LO15對目前接受eculizumab治療的PNH患者的補體活性的藥物藥效學效果。在此研究中，納入18名PNH患者。納入的患者在納入前接受eculizumab治療至少3個月，且患者必須接受定期的eculizumab輸注。

18名患者中的一名患者(患者Y)為經eculizumab治療的PNH患者，其中eculizumab在第一次IV輸注305LO15之前的14天進行最終施用。患者Y接受單一IV負荷劑量(loading dose)；在第1天1000mg的305LO15的單一輸注。第一次SC施用(680 mg)在第8天給予，接著每四週地(Q4W)SC注射(680 mg)305LO15，其將持續總共5個月的治療期間。

來自患者Y的初步藥物藥效學的結果如表3所示。LDH水平，作為溶血的藥物藥效學的指標，從第一劑量至第43天維持在基線水平(表3)。如表3所示，脂質體免疫分析(LIA）的結果顯示補體活性在研究開始日輸注結束時(第1天)被完全抑制。第1天1000mg 305LO15的劑量維持完全補體抑制，直到第8天的680mg 305LO15 SC的SC劑量。第8天的SC劑量在第43天維持完全補體抑制。

[表3]

實施例10 PNH患者中給藥方案的發現此為在經eculizumab治療的PNH患者中進行的開放式、多劑量、全球多中心研究(請亦參照實施例9)。此研究納入約18名經eculizumab治療的成年男性與女性PNH患者。第3部分的目的在於決定最佳SC給藥方案，而此給藥方案對於患者具有低治療負擔。各個研究的給藥方案的目的是於全程給藥期間，達到能抑制末端補體途徑活化的305LO15暴露量。目標暴露量是根據第二部分可用的藥物動力學、藥物藥效學與藥效資料所定義。對於第3部分中的所有患者，最遲在最後一次eculizumab給藥的兩星期後便開始進行305LO15給藥。在IV負荷劑量後接著重複的SC維持劑量給藥。

第3部分期間，改變一部分的原始SC給藥方案以進一步地改善安全性。評估305LO15SC不同的三種SC給藥方案(包括每週[QW]、每兩週[Q2W]或每月[Q1M]給藥，參照第11圖)。第一階段中被分派至A組的患者接受8次每週[QW]170mg劑量的SC給藥。A組中的患者在第9次SC給藥(研究第64天)，即為第二階段中的第一施用，開始進行每四週[Q4W]680mg的維持方案。例如，在患者第一次SC給藥約24小時前施用IV負荷劑量。第3部分中，患者接受至多5個月的治療。假如患者發生其潛在疾病如突破性溶血(breakthrough hemolysis)的徵象與症狀，可施用一或更多額外IV劑量的305LO15，突破性溶血可由急性事件如急症、外傷或手術等所導致。在此IV劑量前，應採集未排程的生物標記藥物藥效學樣品，以評估突破性溶血潛在的原因。

A組中患者Z1與Z2初步的藥物藥效學結果如表4所示。LDH水平，作為溶血的藥物藥效學的指標，從第一次給藥到第106天維持在基線水平(表4)。如表4所示，脂質體免疫分析的結果顯示補體活性在研究開始日輸注結束時(第1天)被完全抑制。第1天1000mg 305LO15的劑量維持完全補體抑制，直到第8天的170mg 305LO15的第一SC劑量。自第9次SC劑量起(研究第64天)，這些患者接受每四週[Q4W]680mg的維持方案。患者Z2在SC劑量期間(第64至106天)維持完全補體抑制(LIA [U/mL]>10)。患者Z1中的補體在SC劑量期間(第64至106天)被完全或有效抑制。A組方案的耐受性良好，僅有與治療無關的輕微副作用(患者Z1肩部麻痺(paresthesia)，患者Z2普通感冒)。

[表4]

實施例11 PNH患者中的開放式試驗延伸(Open Label Extension, OLE) 此為參與第3部分且從305LO15治療獲得益處之患者的開放式試驗延伸。納入的患者數量不會超過實施例10第3部分研究中所納入的患者數量。從第3部分過渡而來的患者一開始仍維持他們在第3部分所接受的相同SC給藥方案。根據第3部分研究所得之最新的安全性、藥物動力學與藥物藥效學資料，納入開放式試驗延伸的患者所接受的SC給藥方案也隨之作調整。治療持續時間從開放式試驗延伸開始起最多可至2年。

無。

[第1圖]第1圖中的A與B部分顯示藉由皮下注射(A)或靜脈內注射(B)抗體305LO15於石蟹獼猴(cynomolgus monkey)中血漿305LO15濃度隨時間的變化。血漿305LO15濃度是藉由ELISA進行測量。於(A)中每個點顯示來自三位男性或三位女性的平均值，以及於(B)中每個點顯示來自六位男性或六位女性的平均值。 [第2圖]第2圖顯示石蟹獼猴中血漿305LO15濃度隨時間的變化，其中石蟹獼猴經抗體305LO15的初始靜脈內注射以及隨後的皮下注射的施用。血漿305LO15濃度是藉由ELISA進行測量。每個點顯示來自五位男性或五位女性的平均值。 [第3A圖]第3A圖為各個指定劑量及途徑之游離的C5(free C5)的血漿濃度對抗體的各個血漿濃度作圖之座標圖。IV，靜脈內注射；SC，皮下注射。 [第3B圖]第3B圖為各個指定劑量及途徑之測量的補體活性對抗體的各個血漿濃度作圖之座標圖。IV，靜脈內注射；SC，皮下注射。 [第4A圖]第4A圖顯示為第1部分的臨床研究所設計的給藥方案(dosing regimen)中，血漿305LO15濃度的模擬時間進程。IV，靜脈內注射；SC，皮下注射。 [第4B圖]第4B圖顯示為第2部分的臨床研究所設計的給藥方案中，血漿305LO15濃度的模擬時間進程。SC，皮下注射；QW，每週一次的施用。 [第4C圖]第4C圖顯示為第3部分的臨床研究所設計的給藥方案中，血漿305LO15濃度的模擬時間進程。SC，皮下注射；QW，每週一次的施用；Q2W，每兩週一次的施用; Q4W，每四周一次的施用。 [第5圖]第5圖顯示在pH7.4(上)及pH6.0(下)藉由試管內(in vitro )尺寸排阻層析法，分析eculizumab(ECZ)、人類C5(hC5)及/或305LO15所形成的免疫複合物之曲線圖(profile)。 [第6圖]第6圖顯示接受75 mg IV輸注(infusion)(超過60分鐘)的健康受試者中個別觀察及模擬的血漿305LO15濃度-時間曲線圖。灰色陰影區域為模擬的305LO15濃度-時間曲線圖的95%預測區間。由箭頭指示的實線為模擬的中位數305LO15濃度-時間曲線圖。虛線表示40 μg/mL的PD閾值(threshold)。 [第7圖]第7圖顯示接受125 mg IV輸注(超過60分鐘)的健康受試者中個別觀察及模擬的血漿305LO15濃度-時間曲線圖。灰色陰影區域為模擬的305LO15濃度-時間曲線圖的95%預測區間。由箭頭指示的實線為模擬的中位數305LO15濃度-時間曲線圖。虛線表示40μg/mL的PD閾值(threshold)。 [第8圖]第8圖顯示接受100 mg SC的健康受試者中個別觀察及模擬的血漿305LO15濃度-時間曲線圖。灰色陰影區域為模擬的305LO15濃度-時間曲線圖的95%預測區間。由箭頭指示的實線為模擬的中位數305LO15濃度-時間曲線圖。對於單一劑量為100 mg SC進行的模擬，預期的生物可利用率(bioavailability)為90%。虛線表示40μg/mL的PD閾值(threshold)。 [第9圖]第9圖顯示單一IV輸注或SC注射至健康受試者後，血漿305LO15濃度及溶血活性(hemolytic activity，LIA)之間的關係。離體(ex vivo )LIA劑量-反應曲線是藉由使用加入不同濃度的305LO15的人類血漿樣品而產生。 [第10A圖]第10A圖顯示在第2部分研究中的第1天接受IV劑量375 mg的305LO15、在第8天接受IV劑量500 mg的305LO15、在第22天接受IV劑量1000 mg的305LO15、在第36天接受SC劑量170 mg的305LO15以及在第43天接受SC劑量170 mg的305LO15之PNH患者(X患者)的血清LDH水平之時間曲線圖。 [第10B圖]第10B圖顯示在第2部分研究中的第1天接受IV劑量375 mg的305LO15、在第8天接受IV劑量500 mg的305LO15、在第22天接受IV劑量1000 mg的305LO15、在第36天接受SC劑量170 mg的305LO15以及在第43天接受SC劑量170 mg的305LO15之PNH患者(X患者)的溶血活性(LIA)之時間曲線圖。 [第11圖] 第11圖顯示研究BP39144的第3部分中最佳化的SC給藥方案。

無。

Claims

一種抗C5抗體的用途，其係製造用於治療或預防C5相關疾病的醫藥組合物，其中該組合物係配製用於皮下注射且包括該抗C5抗體，其中在靜脈內施用一劑量的另一醫藥組合物後，以兩階段皮下施用該組合物，其中該另一醫藥組合物係配製用於靜脈內施用且包括該抗C5抗體的一醫藥組合物，其中i.在該靜脈內施用後，進行一第一階段的第一皮下施用，且該第一階段的第一皮下施用是在施用靜脈內施用的該醫藥組合物的0天(即，24小時內)、1天或2天其中一者後進行；以及ii.該靜脈內施用的抗體劑量為100mg至2000mg；其中對於兩階段的該皮下施用，於兩階段中的每兩次皮下施用間皆具有一間隔；其中每個階段各包括至少一間隔；其中於該第一階段中i.該間隔短於該第二階段中的該間隔，且為5至14天；以及ii.每次施用之該抗體的劑量低於該第二階段中每次施用之該抗體的劑量，且為50mg至350mg；且其中於該第二階段中i.每次施用之該抗體的劑量為650mg至700mg；以及ii.該間隔為15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、32天、33天、34天或35 天；且進一步地，其中該抗C5抗體包括：包括HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3的一重鏈可變域，該HVR-H1包括序列辨識號：3之胺基酸序列，該HVR-H2包括序列辨識號：4之胺基酸序列，且該HVR-H3包括序列辨識號：5之胺基酸序列；以及包括HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3的一輕鏈可變域，該HVR-L1包括序列辨識號：7之胺基酸序列，該HVR-L2包括序列辨識號：8之胺基酸序列，且該HVR-L3包括序列辨識號：9之胺基酸序列。
一種抗C5抗體的用途，其係製造用於治療或預防C5相關疾病的醫藥組合物，其中該組合物係配製用於靜脈內施用並包括該抗C5抗體；其中在靜脈內施用一劑量的該組合物後，以兩階段皮下施用另一醫藥組合物；其中該另一醫藥組合物係配製用以皮下注射並包括該抗C5抗體的一醫藥組合物；其中i.在該靜脈內施用後，進行一第一階段的第一皮下施用，且該第一階段的第一皮下施用是在施用靜脈內施用的該醫藥組合物的0天(即，24小時內)、1天或2天後進行；以及ii.該靜脈內施用的抗體劑量為100mg至2000mg；其中對於兩階段的該皮下施用，於兩階段中的每兩次皮下施用間皆具有一間隔，每個階段各包括至少一間隔；其中於該第一階段中i.該間隔短於該第二階段中的該間隔，且為5至14天；以及 ii.每次施用之該抗體的劑量低於該第二階段中每次施用之該抗體的劑量，且為50mg至350mg；且其中於該第二階段中i.每次施用之該抗體的劑量為650mg至700mg；以及ii.該間隔為15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、32天、33天、34天或35天；且進一步地，其中該抗C5抗體包括：包括HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3的一重鏈可變域，該HVR-H1包括序列辨識號：3之胺基酸序列，該HVR-H2包括序列辨識號：4之胺基酸序列，且該HVR-H3包括序列辨識號：5之胺基酸序列；以及包括HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3的一輕鏈可變域，該HVR-L1包括序列辨識號：7之胺基酸序列，該HVR-L2包括序列辨識號：8之胺基酸序列，且該HVR-L3包括序列辨識號：9之胺基酸序列。
如專利申請範圍第1或2項所述之用途，其中該第一階段中的該間隔為5天、6天、7天或8天其中一者。
如申請專利範圍第1或2項所述之用途，其中每週一次(每週地，weekly)進行該第一階段中的皮下施用。
如申請專利範圍第1或2項所述之用途，其中該第二階段中的該間隔為27天、28天或29天其中一者。
如申請專利範圍第1或2項所述之用途，其中以340mg之該抗體的劑量每週一次(每週地，weekly)進行該第一階段中的皮下施用。
如申請專利範圍第1或2項所述之用途，其中該第一階段中的皮下施用次數為5至10次。
如申請專利範圍第1或2項所述之用途，其中以680mg之該抗體的劑量每四週地或每月地進行該第二階段中的皮下施用。
如申請專利範圍第1或2中所述用途，其中該靜脈內施用之該抗體的劑量為1000mg。
如申請專利範圍第1或2中所述之用途，其中該醫藥組合物係用於治療或預防一受試者中之該疾病，該受試者已經以用於治療或預防該C5相關疾病的至少一種藥理產品進行治療，且用於靜脈內施用的該醫藥組合物的該一劑量是在施用該藥理產品的一最終劑量之後施用。
如申請專利範圍第10項所述之用途，其中用於靜脈內施用的該醫藥組合物的該一劑量是在該藥理產品的該最終劑量3天或3天以上後施用。
如申請專利範圍第10項所述之用途，其中該藥理產品包括標靶C5 mRNA的siRNA，或與包含於該醫藥組合物中的該抗C5抗體不同的抗C5抗體，包含於該醫藥組合物中的該抗C5抗體包括：包括HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3的一重鏈可變域，該HVR-H1包括序列辨識號：3之胺基酸序列，該HVR-H2包括序列辨識號：4之胺基酸序列，且該HVR-H3包括序列辨識號：5之胺基酸序列；以及包括HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3的一輕鏈可變域，該HVR-L1包括序列辨識號：7之胺基酸序列，該HVR-L2包括序列辨識號：8之胺基酸序列，且該HVR-L3包括序列辨識號：9之胺基酸序列。
如申請專利範圍第10項所述之用途，其中該藥理產品包括eculizumab。
如申請專利範圍第1或2項所述之用途，其中該抗C5抗體具有pH依賴性結合特性。
如申請專利範圍第1或2項所述之用途，其中配製用於皮下注射且包含於該醫藥組合物中的該抗C5抗體以及配製用於靜脈內施用的該醫藥組合物包括：由序列辨識號：2之胺基酸序列所組成的重鏈可變域；以及由序列辨識號：6之胺基酸序列所組成的該輕鏈可變域。
如申請專利範圍第15項所述之用途，其中該抗C5抗體更包括：經修飾的人類IgG1重鏈恆定域，其係由序列辨識號：13所組成；以及人類輕鏈恆定域，其係由序列辨識號：18所組成。
如申請專利範圍第1或2項所述之用途，其中該C5相關疾病係擇自由下列所組成之群組的任一者：類風濕性關節炎(RA)；狼瘡腎炎；局部缺血-再灌注損傷；陣發性夜間血紅素尿症(PNH)；非典型性溶血性尿毒症候群(aHUS)；緻密沉積物疾病(DDD)；黃斑部病變；溶血、肝酶提高及血小板低下(HELLP)症候群；血栓性血小板減少性紫癜症(TTP)；自發性流產；寡免疫性血管炎(Pauci-immune vasculitis)；表皮溶解水疱症；復發性流產；多發性硬化症(MS)；創傷性腦損傷；由心肌梗塞、心肺繞通及血液透析所導致的損傷；難治性全身重症肌無力(gMG)；以及視神經脊髓炎(NMO)。
如申請專利範圍第17項所述之用途，其中該C5相關疾病為陣發性夜間血紅素尿症(PNH)。
如申請專利範圍第17項所述之用途，其中該C5相關疾病為非典型性溶血性尿毒症候群(aHUS)。