TWI698250B - 短鏈胜肽組合物於預防或治療乾眼症之應用 - Google Patents

Abstract

本發明係關於一種短鏈胜肽組合物於預防或治療乾眼症之應用。本發明之短鏈胜肽組合物包含一由5~10個胺基酸組成之短鏈胜肽，具有促進角膜修復、增加眼睛濕度及改善乾眼症的功效。

Description

短鏈胜肽組合物於預防或治療乾眼症之應用

本發明係依據專利法第30條第1項主張國內優先權，其國內優先權之申請日期為107年12月20日，申請案號為：107146226號，本案係關於一種用於預防或治療乾眼症之短鏈胜肽組合物。更特別地，本發明係關於一種包含一由5~10個胺基酸組成之寡肽的短鏈胜肽組合物，用於促進角膜修復、增加眼睛濕度及改善乾眼症的用途。

乾眼症(Dry eye disease,DED)，又名乾性角結膜炎(keratoconjunctivitis sicca,KCS)，是一種眼睛乾澀的狀態，主要是因為眼睛淚液分泌量不足夠或是分布不均勻或淚液過度蒸發，造成淚液無法適當的保持眼球表面的濕潤。常見的症狀包括眼睛乾澀、容易疲倦、有異物感、痛灼熱感、眼皮緊繃沉重、分泌物黏稠、怕風、畏光，較嚴重者眼睛會紅、腫、充血、角質化，長期傷害則會造成角結膜病變，並會影響視力。

正常的眼睛表面有一層淚液層，覆蓋在眼角膜及結膜上，形成一個潤滑保護膜，最後經由鼻淚管排除掉。淚液層由外而內又可分為三層：油脂層：由眼瞼之皮脂腺所分泌，可延緩 水層液的蒸發，潤滑眼瞼及眼球表面；水液層：由淚腺所分泌，在中間層，主要功用是提供角膜氧氣、有殺菌作用、以及清除代謝產物之功用；黏液素層：由結膜之杯狀細胞所分泌，在最內層，使淚液水層能均勻分布在角結膜表面。

這三層淚液之組成如果有一層分泌不足或是分布不均勻，都會造成乾眼之症狀。而水液層淚腺淚液分泌不足是最常見之乾眼原因，最近的醫學研究指出，年紀老化淚腺功能降低是主要的問題。而近年電腦成為人們工作上不可或缺的工具及人手不離的手機，抑或空氣汙染PM2.5的問題，更促成乾眼症年齡層的年輕化。根據國際期刊報導，乾眼症目前仍都缺乏有效的治療藥物。乾眼症西醫的治療方法，大都是使用人工淚液藥水及人工淚液藥膏，大都是暫時性有效，而很多患者還是病情愈來愈嚴重。

本發明遂提供一種用於預防或治療乾眼症之短鏈胜肽組合物，經由試驗證明，本發明之短鏈胜肽具有促進角膜修復、增加眼睛濕度及改善急性和長期乾眼症的功效。

於是，本發明係關於一種用於預防或治療乾眼症之短鏈胜肽組合物，其特徵在於包含一由5~10個胺基酸組成之短鏈胜肽，其中構成該短鏈胜肽之胺基酸係選自由絲胺酸、賴胺酸和其他胺基酸的組合，且絲胺酸和賴胺酸須同時存在該短鏈胜肽之序列中。較佳地，所述之短鏈胜肽具有分子量為550~1100Da。

於本發明之一些具體實施態樣，所述之短鏈胜肽具 有促進角膜修復的功效。於本發明之其他具體實施態樣，所述之短鏈胜肽具有增加眼睛濕度以改善急性和長期乾眼症的功效。於本發明之一具體實施態樣，所述之乾眼症為急性乾眼症。

於本發明之另一方面，係關於一種由5~10個胺基酸組成之短鏈胜肽用於製備預防或治療乾眼症之醫藥品的用途，其中構成該短鏈胜肽之胺基酸係選自由絲胺酸、賴胺酸和其他胺基酸的組合，且絲胺酸和賴胺酸須同時存在該短鏈胜肽之序列中。較佳地，所述之短鏈胜肽具有分子量為550~1100Da。

於本發明之一些具體實施態樣，所述之乾眼症為急性乾眼症。於本發明之另一些具體實施態樣，所述之乾眼症為長期乾眼症。

圖1為以鹽酸造成兔子急性乾眼症之14天實驗的眼睛濕度測量結果。其中，控制組(◇)是無施予鹽酸處理的正常眼睛；控制組(■)是施予鹽酸處理的受損眼睛；AE250組(▲)是施予鹽酸處理並滴加短鏈胜肽組合物AE250的用藥眼睛。

圖2為使用孟加拉玫瑰紅鈉鹽染色死亡眼角膜細胞，用以評估AE 250對眼角膜細胞修復作用的眼部拍照圖片。A.為施予0.12N鹽酸處理及滴藥AE250處理第三天及第七天的觀察結果；B.為停止鹽酸處理及滴藥AE250處理後第三天及第十天的觀察結果。

於本發明使用之短鏈胜肽是由5~10個胺基酸組成，分子量較佳為550~1100Da。構成本發明短鏈胜肽結構的胺基酸必定包括絲胺酸與賴胺酸。絲胺酸是一種具有羥基(hydroxyl group)的極性、不帶電氨基酸，是生合成反應中最主要貢獻出一個碳的化合物，可促進脂肪和脂肪酸的新陳代謝，促進肌肉生長，協助體內製造抗體有助於維持，幫助神經纖維形成髓鞘；賴胺酸是一種人體必需的胺基酸，膠原蛋白中含有的羥基賴胺酸是由賴胺酸經羥基化而來，常被用於需要蛋白質修復的患者及需要額外增加肌肉量的運動員。

用於本發明之實施例，係將短鏈胜肽Ala-Asn-Ser-Ile-Lys(SEQ ID No.1)溶於生理食鹽水，製得濃度為250μg/ml之短鏈胜肽溶液(以下簡稱AE250)，再用過濾膜無菌處理後備用。

本發明之其他特色及優點將於下列實施範例中被進一步舉例與說明，而該實施範例僅作為輔助說明，並非用於限制本發明之範圍。

實施例一、短鏈胜肽組合物促進眼睛角膜修復

本實例係使用500μl鹽酸(0.12N,pH=2)腐蝕兔子眼角膜後，造成眼睛濕度降低，進行14天兔子乾眼症實驗，以評估AE 250在乾眼症保護上的功效。藥物是AE250每天滴加4次，200 μl/次只有滴加7天，第8天停止滴加AE250；做左/右眼之眼睛濕度測試。結果如圖1所示。

由圖1之結果顯示，兔子眼睛第8天停止滴加AE250後，與損傷組比較，眼睛濕度增加40~50%確實能改善乾眼症。兔子眼睛第8天停止滴加AE250後，與損傷組比較，AE250確實能持續7天，明顯改善兔子急性的乾眼症。證實AE250具有長時間性改善乾眼症。

角膜修復試驗：用500μl鹽酸(0.12N,pH=2)腐蝕眼角膜1次，再用1%孟加拉玫瑰紅鈉鹽(Rose Bengal sodium salt,500μl)，由上眼瞼滴入，2分鐘後，以10ml無汞配方的生理緩衝液，洗去多餘的染劑，則死亡眼角膜細胞染成紅色，用拍照掃描計算死亡眼角膜細胞面積，用以評估AE 250對眼角膜細胞修復作用。

由圖2之結果顯示，於處理第三天，鹽酸(pH 2.0)會對兔子眼睛造成第二級(輕中度)損傷，經染色呈現紅(上皮細胞死亡)且乾。而點藥AE250(4次/天)之處理組，在間隔最後點藥8小時後觀察，仍呈現良好的角膜狀態，甚至比控制組好，表示本發明之短鏈胜肽組合物具有明顯的角膜細胞修護效果，且由眼睛濕潤程度來看確實具有保濕作用，可於乾眼症急性期產生保護作用。而於處理第七天觀察，可發現鹽酸處理組的損傷程度達到最嚴重，而持續點藥AE250之處理組，仍呈現很好的角膜修護效果。

於鹽酸處理七天後停止施用鹽酸及AE250點藥，之後仍持續觀察十天。在停止鹽酸處理後第3天，發現鹽酸處理組原先 受損傷的角膜產生自癒修補，而稍減緩乾眼症症狀。而停止AE250點藥3天，雖排除保濕作用但仍具很好角膜修護效果。在停止鹽酸處理後第10天觀察，受鹽酸腐蝕之眼角膜已經逐漸自癒，而AE250點藥處理組之角膜呈現最少的上皮死細胞，顯示本發明之短鏈胜肽組合物具有減緩平日正常的上皮代謝凋亡的長期保護效用，對於乾眼症可產生預防性功效。

實施例二、短鏈胜肽組合物改善急性乾眼症

兔子眼睛是動物中最敏感的，因此本實例使用兔子進行急性乾眼症實驗。托平卡胺(Tropicamide)是一種短效性的睫狀肌鬆弛劑，可抑制眼球副交感神經的生理活性。淚液是由副交感神經控制的，所以抑制副交感神經就抑制淚液分泌，可用以造成兔子急性的乾眼症。乾眼症動物試驗模式之建立：使用托平卡胺(Tropicamide)(0.4%溶於生理食鹽水之溶液，用以拮抗副交感蕈毒型M3接受體)在12小時中給予5次滴加兔子眼睛，於最後一次滴加兔子眼睛後1小時，滴加測試藥品：托平卡胺組，滴加不含短鏈胜肽的生理食鹽水；托平卡胺+AE250組，滴加含有AE250短鏈胜肽的生理食鹽水。於滴加測試藥品後1小時，測試兔子左/右眼的眼睛濕度(mm，試紙的水分延伸的距離)。結果列於表1。

正常兔子眼睛滴加人工淚液後，與生理食鹽水滴加組(對照組)的眼睛比較，其眼睛濕度增加42~44%，表示人工淚液能改善乾眼症，因此本實例使用的兔子模式，確實可用於評估測試藥物的乾眼症改善能力。

使用托平卡胺滴加兔子眼睛，與生理食鹽水滴加組比較，眼睛濕度減少36~62%，表示托平卡胺於此動物模式確實能造成兔子急性的乾眼症。而使用AE250滴加兔子眼睛，與托平卡胺滴加組的兔子眼睛比較，眼睛濕度增加71~213%，顯示本發明之短鏈胜肽組合物確實能明顯改善兔子急性的乾眼症。

<110> 三凡生技研發股份有限公司

<120> 短鏈胜肽組合物在預防或治療乾眼症的應用

<160> 1

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Claims (5)

1. 一種由胺基酸序列為Ala-Asn-Ser-Ile-Lys之五肽組成之短鏈胜肽用於製備預防或治療乾眼症之醫藥品的用途，其中該短鏈胜肽具有增加眼睛濕度的功效。
2. 如請求項1所述之用途，其中該短鏈胜肽具有分子量為550~1100Da。
3. 如請求項1所述之用途，其中該乾眼症為急性乾眼症。
4. 如請求項1所述之用途，其中該乾眼症為長期之眼睛乾澀狀態。
5. 如請求項1所述之用途，其中該短鏈胜肽係用於促進角膜修復。

Images