TWI678204B

TWI678204B - 急性骨髓性白血病(aml)之新穎組合治療

Info

Publication number: TWI678204B
Application number: TW107105068A
Authority: TW
Inventors: 席金斯布萊恩; Brian Higgins; 尼可斯關; Gwen Nichols; E 派克曼凱薩琳; Kathryn E. Packman
Original assignee: 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司; F. Hoffmann-La Roche Ag
Priority date: 2013-12-05
Filing date: 2014-12-03
Publication date: 2019-12-01
Also published as: MX370618B; TWI627954B; JP6918724B2; WO2015082384A1; CN105792847A; US9956243B2; CR20160173A; SG11201604504VA; US20200253999A1; IL244888A0; EP3077004A1; AU2014359422B2; AU2014359422A1; PL3077004T3; BR112016009669B1; US20220031726A1; BR112016009669A8; HUE049434T2; US20150157603A1; ZA201602829B

Abstract

本發明係關於一種醫藥產物，其包括a)作為第一組份之MDM2-p53相互作用抑制劑；及b)作為第二組份之阿糖胞苷(cytarabine)；該醫藥產物作為組合製劑用以依序或同時用於治療癌症、尤其是AML。

Description

急性骨髓性白血病(AML)之新穎組合治療

本發明係關於用於治療增殖性病症(例如癌症、尤其急性骨髓性白血病(AML))之組合療法。更尤其而言，本發明揭示AML當前主要療法、化合物阿糖胞苷(cytarabine) (Ara-C)以及用作MDM2-p53相互作用抑制劑之化合物之組合。令人吃驚地發現，該等組合展示大於加和(協同)效應之效應。

p53係在防止癌症發生中發揮主要作用之腫瘤阻抑蛋白。其保護細胞完整性且藉由誘導生長停滯或細胞凋亡來防止細胞之永久性損害純系之繁殖。在分子層面上，p53係可活化一組涉及調控細胞週期及細胞凋亡之基因之轉錄因子。p53係由MDM2在細胞層面上精確調控之強力細胞週期抑制劑。MDM2及p53形成反饋控制環。MDM2可結合p53且抑制其反式活化p53調控基因之能力。此外，MDM2調介p53之泛素依賴性降解。p53可活化MDM2基因之表現，由此升高MDM2蛋白之細胞濃度。此反饋控制環確保MDM2及p53以低濃度保持於正常增殖細胞中。MDM2亦係在細胞週期調控中發揮主要作用之E2F之輔因子。 MDM2對p53之比率在許多癌症中失調。舉例而言，通常出現於p16INK4/p19ARF基因座中之分子缺陷展示會影響MDM2蛋白降解。使用功能p53抑制腫瘤細胞中之MDM2-p53相互作用應引起p53累積、細胞週期停滯及/或細胞凋亡。因此，MDM2拮抗劑可提供以單一藥劑或與寬範圍其他抗腫瘤療法之組合形式治療癌症之新穎方式。此策略之可能性已藉由使用用於抑制MDM2-p53相互作用之不同大分子工具(例如抗體、反義寡核苷酸、肽)來展示。MDM2亦如p53一樣經由保守結合區域結合E2F且活化細胞週期蛋白A之E2F依賴性轉錄，從而表明MDM2拮抗劑可在具有功能p53信號傳導之p53突變體細胞中具有效應。 MDM2-p53相互作用抑制劑已展示會誘導過度表現MDM2之已確立人類AML細胞系MOLM-13中之細胞凋亡(K. Kojima等人，Blood 2005 , 106(9):3150-9)。現已發現，式(I)化合物以及Ara-C之組合在免疫妥協小鼠之彌散性MOLM-13 AML模型中提供大於加和效應之效應。式(I)化合物及其製備揭示於WO2013/135648中。該等化合物用作以下化合物之前藥：(A) 4-{[(2R,3S,4R,5S)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯啶-2-羰基]-胺基}-3-甲氧基-苯甲酸(本文之化合物A)。化合物A係(例如)揭示於美國專利第8,354,444號及WO2011/098398中。

本發明係關於一種醫藥產物，其包括a)作為第一組份之MDM2-p53相互作用抑制劑(亦「MDM2抑制劑」)；及b)作為第二組份之阿糖胞苷；該醫藥產物作為組合製劑用以依序或同時用於治療癌症。本發明另外係關於治療患有癌症之患者之方法，其包括向該患者投與如上文所提及之組合。本發明亦係關於一種套組，其包括a)第一組份，其包括MDM2-p53相互作用抑制劑作為活性劑；及b)第二組份，其包括化合物阿糖胞苷作為活性劑。此外，本發明係關於MDM2抑制劑及阿糖胞苷用於治療癌症之用途。本發明之又一態樣係MDM2抑制劑及阿糖胞苷用以製備用於治療癌症之醫藥之用途。在一實施例中，MDM2-p53相互作用抑制劑係選自式(I)化合物：(I)，其中式(I)化合物進一步指定於本文中。

如本文所揭示之式(I)化合物及尤其I-A及I-B係化合物(A)之聚乙二醇(PEG)前藥，其經合成以提供活性母體分子化合物(A)之靜脈內(iv)調配物所需之溶解性。期望靜脈內調配物改善劑量限制性胃腸道不耐受性及暴露可變性，以及提供用於治療血液學惡性腫瘤及用於兒科應用之可接受投與途徑。以單一療法形式及以與AML標準護理阿糖胞苷(Ara-C)之組合形式在MOLM-13模型中比較每週一次經靜脈內投與化合物I-B及經口(po)投與化合物(A)之抗腫瘤活性。化合物I-B及(A)以單一療法形式皆誘發顯著壽命增加(ILS)，其中與媒劑對照動物相比觀察到最高37%之ILS。儘管Ara-C缺乏單一療法活性，但其在與化合物I-B或(A)組合時顯著延長存活，其中分別觀察到54%或68%之最大ILS。由本發明數據顯示之協同效應表明，使用MDM2抑制劑靶向MDM2-p53與使用阿糖胞苷(Ara-C)誘導S期停滯之組合可為用於治療AML之有效治療策略。該等數據亦顯示，可藉由前藥方式使用式(I)化合物及尤其I-A及/或I-B來維持化合物(A)之效能。因此，在一實施例中，本發明係關於一種醫藥產物，其包括a) MDM2-p53相互作用抑制劑作為第一組份；及b)阿糖胞苷作為第二組份；該醫藥產物作為組合製劑用以依序或同時用於治療AML。在另一實施例中，MDM2-p53相互作用抑制劑係選自式(I)化合物：(I) 其中n為3至70。在一實施例中，n為30至60。在另一實施例中，n為40至50。在又一實施例中，n為41、42、43、44、46、47、48或49。在另一實施例中，式(I)化合物係： 4-{[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯啶-2-羰基]-胺基}-3-甲氧基-苯甲酸1-mPEG-羰基氧基-乙基酯(mPEG平均MW為約2000)。此化合物在本文中指定為化合物I-A。在另一實施例中，式(I)化合物係： 4-{[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯啶-2-羰基]-胺基}-3-甲氧基-苯甲酸1-mPEG-羰基氧基-乙基酯(mPEG平均MW為約2200)。此化合物在本文中指定為化合物I-B。在又一實施例中，本發明之MDM2抑制劑可為化合物(A)。在此實施例內，較佳地以包括化合物(A)及將化合物(A)穩定於其非晶型形成之聚合物、較佳地HPMCAS之經口投與製劑形式來提供化合物(A)，包括非晶型固體分散液、較佳地微沈澱散裝粉末(MBP)。在即將以存於Klucel/ Tween中之懸浮液形式投與之前重構口服製劑。可根據(例如)揭示於美國專利第8,354,444號或WO2011/098398中之方法來製備化合物(A)。當前研究中之劑量選擇係基於先前在臨床前(動物)及臨床(階段1)試驗中測得之用於化合物(A)之最佳劑量。本發明之醫藥產物或方法尤其可用於治療或控制血液學腫瘤(例如白血病)，且尤其用於治療急性骨髓性白血病(AML)。其亦可用於治療其他由MDM2-p53相互作用失調引起之細胞增殖性病症，例如癌症、更尤其而言實體腫瘤，例如乳癌、結腸癌、肺癌、黑素瘤、前列腺癌、腎臟癌、頭頸癌或肉瘤。在一實施例中，本發明提供用於治療急性骨髓性白血病(AML)之本發明醫藥產物及/或方法。在另一實施例中，本發明提供用於治療由MDM2-p53相互作用失調引起之細胞增殖性病症之本發明醫藥產物及/或方法，該等細胞增殖性病症係(例如)癌症、更尤其而言實體腫瘤，例如乳癌、結腸癌、肺癌、黑素瘤、前列腺癌、腎臟癌、頭頸癌或肉瘤。式(I)化合物之調配物包含彼等適於經口、經鼻及/或非經腸或經靜脈內投與者。調配物可以便捷方式存於單位劑型中且可藉由醫藥領域熟知之任何方法來製備。在一實施例中，將式(I)化合物提供於用於靜脈內投與之穩定凍乾調配物中，該穩定凍乾調配物包括約0.1 mg至約100 mg化合物(I)、約10mM至約100mM緩衝劑、約25 mg至約125 mg凍乾增積劑及等滲性構建劑。所得調配物應經由使用HCl或NaOH調節具有約5之pH-7。在另一實施例中，藉由渦旋將式(I)化合物溶於存於無菌水中之0.9%氯化鈉中，然後經由過濾器過濾至隔膜密封之小瓶中用於靜脈內投與。本文所用之術語「緩衝劑」表示穩定醫藥製劑之pH之醫藥上可接受之賦形劑。適宜緩衝劑已為業內所熟知且可參見文獻。較佳醫藥上可接受之緩衝劑包括但不限於組胺酸緩衝劑、檸檬酸鹽緩衝劑、琥珀酸鹽緩衝劑、乙酸鹽緩衝劑及磷酸鹽緩衝劑、尤其琥珀酸(20-50 mM)及磷酸(10-50 mM)。最佳緩衝劑包括檸檬酸鹽、L-組胺酸或L-組胺酸及L-組胺酸鹽酸鹽之混合物。其他較佳緩衝劑係乙酸鹽緩衝劑。獨立於所用緩衝劑，可使用業內已知之酸或鹼(例如鹽酸、乙酸、磷酸、硫酸及檸檬酸、氫氧化鈉及氫氧化鉀)來調節pH。較佳「增積劑」係二水合海藻糖，但亦可利用乳糖、蔗糖、山梨醇、葡萄糖、棉子糖、甘露醇、右旋糖酐及較低分子量胺基酸(例如甘胺酸、纈胺酸及精胺酸等)及其他闡述於科技文獻中之增積劑。作為用於來自凍乾粉末之調配溶液或重構溶液之稀釋劑，亦可使用下列稀釋劑，例如氯化鈉(0.9%)、5%右旋糖、注射用水、乳酸鹽林格氏溶液(Lactated Ringers solution)或半生理鹽水。應瞭解，增積劑亦可用作等滲性構建劑。可與載劑材料組合產生單一劑型之活性成份之量將端視所治療主體以及特定投與方式而有所變化。可與載劑材料組合產生單一劑型之活性成份之量通常為產生治療效應之式I之量。通常，除100%外，此活性成份之量將介於約1%至約99%、較佳約5%至約70%、最佳約10%至約30%之間。典型調配物係藉由將本發明化合物與載劑或賦形劑混合來製備。適宜載劑及賦形劑已為彼等熟習此項技術者所熟知且詳細闡述於例如以下文獻中：Ansel, Howard C.Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems . Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2004；Gennaro, Alfonso R.等人Remington: The Science and Practice of Pharmacy. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2000；及Rowe, Raymond C.Handbook of Pharmaceutical Excipients 。Chicago, Pharmaceutical Press, 2005。自Hospira公司，Lake Forest, IL 60045 USA以用於靜脈內(iv)注射之無菌溶液形式(100 mg/ml)購買阿糖胞苷。以治療有效量投與式(I)化合物以及阿糖胞苷。更尤其而言，投用式(I)、尤其式I-A及I-B之化合物以將治療活性量之化合物A遞送至患者。本發明化合物之治療有效量意指有效預防、緩解或改善疾病症狀或延長所治療個體之存活之化合物量。熟習醫藥科學者已熟知測定前藥(例如式(I)化合物，例如I-A或I-B)之量以將期望量之活性成份(例如化合物A)遞送至患者。在本發明之一實施例中，437 mg/kg之式I-B前藥之劑量等效於100 mg/kg之化合物(A)之母體MDM2抑制劑，此乃因前藥具有22.88%之活性化合物載量。本發明化合物之治療有效量或劑量可在寬限值內有所變化且可業內已知方式來測定。根據每一特定情形來將該劑量調節至個體需求，包含所投與具體化合物、投與途徑、所治療病狀以及所治療患者。一般而言，在經口或非經腸投與重大約70 Kg之成人之情形下，約10 mg至約3,000 mg、較佳地約80 mg至約1600 mg化合物(A)之日劑量應較為適當，但在指示時可超過上限。日劑量可以單一劑量形式或以分開劑量形式投與，或用於非經腸投與；其可以連續輸注形式給予。在一實施例中，本發明醫藥產物包括式(I)化合物，其特徵在於其經投用以在28天治療週期之第1-7天或較佳地第1-5天經至多約7天、較佳地至多約5天之投與時段以約50 mg/天至約3000 mg/天或約80 mg/天至約2500 mg/天或約80 mg/天至約1600 mg/天或約200 mg/天至約1600 mg/天或約400 mg/天至約1600 mg/天或約400 mg/天至約1200 mg/天或約400 mg/天至約1000 mg/天或約400 mg/天至約800 mg/天或約400 mg/天至約600 mg/天之量來遞送化合物(A)，隨後係約21天至約23天、較佳地至多約23天之停藥期。可以單一劑量形式(qd)或以兩個劑量形式(BID)投與日劑量(亦即以mg/天表示之化合物(A)之量)。在給予兩個劑量時，其較佳地以相等量投與，上午一次且下午一次。在另一實施例中，本發明醫藥產物包括式(I)、I-A或I-B之化合物，其特徵在於其經投用以在28天治療週期之第1-5天經至多5天之投與時段以約120 mg/天至約1200 mg/天之量來遞送化合物A，隨後係23天之停藥期。以單一劑量形式(qd)或以兩個劑量形式(BID)來投與劑量。在此實施例內，化合物I-B較佳。在另一實施例中，本發明醫藥產物包括式(I)、I-A或I-B之化合物，其特徵在於其經投用以在28天治療週期之第1-5天經至多5天之投與時段以約400 mg/天至約1200 mg/天之量來遞送化合物A，隨後係23天之停藥期。以單一劑量形式(qd)或以兩個劑量形式(BID)來投與劑量。在此實施例內，化合物I-B較佳。在另一實施例中，本發明醫藥產物包括式(I)、I-A或I-B之化合物，其特徵在於其經投用以在28天治療週期之第1-5天經至多5天之投與時段以約400 mg/天至約800 mg/天之量來遞送化合物A，隨後係23天之停藥期。以單一劑量形式(qd)或以兩個劑量形式(BID)來投與劑量。在此實施例內，化合物I-B較佳。在另一實施例中，本發明醫藥產物包括式(I)、I-A或I-B之化合物，其特徵在於其經投用以在28天治療週期之第1-5天經至多5天之投與時段以約400 mg/天至約600 mg/天之量來遞送化合物A，隨後係23天之停藥期。以單一劑量形式(qd)或以兩個劑量形式(BID)來投與劑量。在此實施例內，化合物I-B較佳。在另一實施例中，本發明醫藥產物包括式(I)、I-A或I-B之化合物，其特徵在於其經投用以在28天治療週期之第1-5天經至多5天之投與時段以約120 mg/天至約800 mg/天之量來遞送化合物A，隨後係23天之停藥期。以單一劑量形式(qd)或以兩個劑量形式(BID)來投與劑量。在此實施例內，化合物I-B較佳。在另一實施例中，本發明醫藥產物包括式(I)、I-A或I-B之化合物，其特徵在於其經投用以在28天治療週期之第1-5天經至多5天之投與時段以約120 mg/天至約600 mg/天之量來遞送化合物A，隨後係23天之停藥期。以單一劑量形式(qd)或以兩個劑量形式(BID)來投與劑量。在此實施例內，化合物I-B較佳。在另一實施例中，本發明醫藥產物包括式(I)、I-A或I-B之化合物，其特徵在於其經投用以在28天治療週期之第1-5天經至多5天之投與時段以約120 mg/天至約400 mg/天之量來遞送化合物A，隨後係23天之停藥期。以單一劑量形式(qd)或以兩個劑量形式(BID)來投與劑量。在此實施例內，化合物I-B較佳。在另一實施例中，本發明醫藥產物包括式(I)、I-A或I-B之化合物，其特徵在於其經投用以在28天治療週期之第1-5天經至多5天之投與時段以約120 mg/天之量來遞送化合物A，隨後係23天之停藥期。以單一劑量形式(qd)或以兩個劑量形式(BID)來投與劑量。在此實施例內，化合物I-B較佳。本發明阿糖胞苷之治療有效量(或「有效量」)意指可有效達成協同(亦即大於加和)效應之量，如藉由本文中揭示之數據所顯示(例如參見圖1)。因使用阿糖胞苷作為用於AML之主要療法已多年，故熟習此項技術者(例如臨床醫師)可獲得大量關於人類中之有效及耐受劑量之資訊。已(例如)發現，可以單一藥劑形式以較高量(例如至多3 g/m² 之量(靜脈內))在第1至6天每12小時經2小時投用阿糖胞苷以治療AML (誘導方案)。關於使用阿糖胞苷治療白血病之綜述(例如)提供於「Nicholas D. Reese, Gary J. Schiller；Curr Hematol Malig Rep ,2013 , 8:141-148」中。在某些組合療法(例如急性非淋巴球性白血病之誘導療法)中，與其他抗癌藥組合之常用阿糖胞苷劑量為100 mg/m² /天、藉由連續靜脈內輸注(第1-7天)或100 mg/m² 、靜脈內、每12小時(第1-7天)。(例如參見www.hospira.com)。因此，在一實施例中，本發明提供一種醫藥產物，其包括a)作為MDM2抑制劑，式(I)、I-A或I-B之化合物，其中在28天治療週期之第1至5天每天一次或兩次經靜脈內(iv)投與該化合物，隨後係23天停藥期；及b)作為第二組份之有效量之化合物阿糖胞苷；該醫藥產物作為組合製劑用於同時或依序治療癌症、較佳地AML。在此實施例內，化合物I-A及I-B較佳且經投用以以下量遞送化合物(A)：約50 mg/天至約3000 mg/天或約80 mg/天至約2500 mg/天或約80 mg/天至約1600 mg/天或約200 mg/天至約1600 mg/天或約400 mg/天至約1600 mg/天或約400 mg/天至約1200 mg/天或約400 mg/天至約1000 mg/天或約400 mg/天至約800 mg/天或約400 mg/天至約600 mg/天。以單一劑量形式(qd)或以兩個劑量形式(BID)來投與劑量。在此實施例內，化合物I-B較佳。另外，在此實施例內，式(I)、I-A或I-B之化合物經投用以在28天治療週期之第1-5天經至多5天之投與時段以約120 mg/天至約1200 mg/天之量來遞送化合物A，隨後係23天之停藥期；或式(I)、I-A或I-B之化合物經投用以在28天治療週期之第1-5天經至多5天之投與時段以約400 mg/天至約1200 mg/天之量來遞送化合物A，隨後係23天之停藥期；或式(I)、I-A或I-B之化合物經投用以在28天治療週期之第1-5天經至多5天之投與時段以約400 mg/天至約800 mg/天之量來遞送化合物A，隨後係23天之停藥期；或式(I)、I-A或I-B之化合物經投用以在28天治療週期之第1-5天經至多5天之投與時段以約400 mg/天至約600 mg/天之量來遞送化合物A，隨後係23天之停藥期；或式(I)、I-A或I-B之化合物經投用以在28天治療週期之第1-5天經至多5天之投與時段以約120 mg/天至約800 mg/天之量來遞送化合物A，隨後係23天之停藥期；或式(I)、I-A或I-B之化合物經投用以在28天治療週期之第1-5天經至多5天之投與時段以約120 mg/天至約600 mg/天之量來遞送化合物A，隨後係23天之停藥期；或式(I)、I-A或I-B之化合物經投用以在28天治療週期之第1-5天經至多5天之投與時段以約120 mg/天至約400 mg/天之量來遞送化合物A，隨後係23天之停藥期；或式(I)、I-A或I-B之化合物經投用以在28天治療週期之第1-5天經至多5天之投與時段以約120 mg/天之量來遞送化合物A，隨後係23天之停藥期；或以600 mg劑量每天兩次(BID)來投用式(I)、I-A或I-B之化合物以將約1200 mg化合物(A)之總日劑量遞送至患者。另外，在該等實施例內且若未另外明確陳述，則以單一劑量形式(qd)或以兩個劑量形式(BID)投與劑量，且化合物I-A或I-B係較佳化合物。在另一實施例中，視兩個特定患者群體之需要根據下列方案組合阿糖胞苷與式(I)、I-A或I-B之化合物，亦即： 1)患有復發/難治性AML或患有根據歐洲白血病網絡導則(European LeukemiaNet guideline)具有不良特徵之新生AML之患者；或患有已轉變成AML之先前血液學病症之患者。在此實施例內，以1 g/m² 及單一劑量(qd)在6天期間以1-3小時靜脈內(i.v.)輸注形式投用阿糖胞苷。 2)根據歐洲白血病網絡導則具有不良特徵之患者，其可視為使用標準劑量之阿糖胞苷及蒽環抗生素(anthracycline) (柔紅黴素(daunorubicin)或伊達比星(idarubicin))方案(「7+3誘導方案」)進行強化化學療法治療之候選者。在此實施例內，以100-200 mg/m² 在7天期間每天以連續靜脈內輸注+ 45 mg/m² 至60 mg/m² 柔紅黴素或+伊達比星(12 mg/m² ，經靜脈內，每天，經3天)投用阿糖胞苷。在上述實施例1)或2)中之任一者中，如上文所定義來投用式(I)、I-A或I-B之化合物。另外，在上述實施例1)或2)中之任一者內，式(I)、I-A或I-B之化合物經投用以在28天治療週期之第1-5天經至多5天之投與時段以約120 mg/天至約1200 mg/天或約400 mg/天至約1200 mg/天之量來遞送化合物A，隨後係23天之停藥期。在此實施例內，化合物I-B較佳。在又一實施例中，本發明提供治療癌症之方法，其包括向需要治療之患者投與如前文所定義之醫藥產物。在此實施例內，MDM2抑制劑較佳地選自化合物I-A或I-B。用於化合物I-A或I-B及阿糖胞苷之劑型、劑量及治療時間表較佳地如上文所闡述。另外，在此實施例內，癌症係實體或非實體腫瘤，較佳地，癌症係急性骨髓性白血病(AML)。在另一實施例中，本發明提供式(I)、較佳地I-A或I-B之化合物及阿糖胞苷之用途，其用以製造用於治療癌症、尤其急性骨髓性白血病(AML)之醫藥。在另一實施例中，本發明提供一種醫藥產物，其包括a)作為第一組份之式(I)化合物；及b)作為第二組份之化合物阿糖胞苷，二者每天一次或兩次經靜脈內投與，該醫藥產物作為組合製劑用以同時或依序用於治療癌症；其特徵在於式(I)化合物之劑量對應於以下範圍內之化合物(A)之劑量：約50 mg/天至約3000 mg/天或約80 mg/天至約2500 mg/天或約80 mg/天至約1600 mg/天或約200 mg/天至約1600 mg/天或約400 mg/天至約1600 mg/天或約400 mg/天至約1200 mg/天或約400 mg/天至約1000 mg/天或約400 mg/天至約800 mg/天或約400 mg/天至約600 mg/天。。在此實施例內，式(I)化合物較佳係化合物I-A或I-B，癌症係AML，日劑量為約200至約1600 mg且每天給予一次或兩次，且用於化合物I-A或I-B之劑量方案為在28天治療週期之第1至5天投藥，隨後係23天停藥期。更佳地，在此實施例內，式(I)化合物係化合物I-B，癌症係AML，日劑量為約1200 mg且每天給予一次或兩次(BID, 600 mg)，在28天治療週期之第1至5天投藥，隨後係23天停藥期。現將藉由下列隨附工作實例進一步闡釋本發明。實例 材料及方法 動物使用自Charles River實驗室(Wilmington, DE)獲得之雌性SCID灰棕色小鼠(10只/組)，其中其大約為8-12週齡且重大約20-25克。每日藉由肉眼觀察及分析自共用擱板架上之前哨動物獲取之血樣來評價小鼠之健康。使所有動物在實驗應用之前適應並自任一運輸相關應力恢復最少72小時。隨意提供高壓滅菌之水及輻照食品(5058-ms Pico Lab小鼠食物，Purina Mills, Richmond, IN)，且將動物維持於12小時明亮及黑暗循環中。在使用之前將籠、襯墊及水瓶高壓滅菌且每週皆進行更換。根據實驗動物護理與使用指南(Guide for the Care and Use of Laboratory Animals)、本地規章及由羅氏動物管理及使用委員會(Roche Animal Care and Use Committee)批准之協議在AAALAC認證設施中來實施所有動物實驗。腫瘤使用Luc2慢病毒顆粒在聚凝胺(8 ug/ml)存在下將親代MOLM-13人類AML細胞穩定轉染24 hr且然後在殺稻瘟菌素(Blasticidin)存在下選擇3週。隨後，藉由在0.1 mg/mL G418存在下進行單一細胞平鋪來選擇一種純系且指定為MOLM-13.luc.c4。藉由將Luc2基因(Promega)納入pLOC慢病毒質粒骨架(Thermo Fisher Scientific)中來構築慢病毒Luc2表現質粒。藉由如所推薦使用反式慢病毒包裝系統(Trans-Lentiviral Packaging System) (Thermo Fisher Scientific)來製備Luc2慢病毒顆粒。使用RPMI 1640與補充有10%熱失活胎牛血清(HI-FBS；GIBCO/Invitrogen, Carlsbad, CA)及1% 100mM丙酮酸鈉之L-麩醯胺酸(2 mM)培養基(GIBCO/Invitrogen, Carlsbad, CA)維持MOLM-13.luc.c4。然後將懸浮於磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中之新解離MOLM13-Luc.c4細胞(1 × 10⁶ 或5 × 10⁶ 個)經由尾靜脈經靜脈內接種至雌性SCID灰棕色小鼠中。測試藥劑 藉由渦旋將4-{[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯啶-2-羰基]-胺基}-3-甲氧基-苯甲酸1-mPEG-羰基氧基-乙基酯(mPEG平均MW為約2200) (亦即化合物I-B)溶於存於無菌水中之0.9%氯化鈉中。然後將其經由0.22微米過濾器過濾至隔膜密封小瓶中用於靜脈內投與。437 mg/kg之藥物劑量等效於100 mg/kg母體MDM2抑制劑，此乃因前藥具有22.88%之活性化合物載量。根據製造商說明將原料阿糖胞苷(Ara-C注射，100 mg/ml)在無菌0.9%氯化鈉中稀釋至44 mg/ml且以200 mg/kg每週兩次經靜脈內投用。使用1cc注射器及26號針分別以437 mg/kg (9 ml/kg)每週(q7d)及200 mg/kg (4.5 ml/kg) 每週兩次(2×/週)來經靜脈內投與化合物I-B及阿糖胞苷。在並行投與之日，在上午投用化合物I-B且在6小時後根據用於靜脈內體積投與之IACUC條例投與阿糖胞苷。治療持續時間為3週。監測對於壽命增加(ILS)評價而言，每週量測動物體重二至三次，且每天監測動物之毒性或過量腫瘤負荷之任一臨床體徵(亦即後肢癱瘓或發病率)。此外，藉由活體內生物發光成像(BLI)使用IVIS®光譜系統監測疾病進展。對於每一BLI時段而言，小鼠經由腹膜腔內注射接收100 mg/kg D-螢光素(Caliper Life Sciences/Perkin-Elmer)且在螢光素注射後20 min以5s或10s暴露時間成像。藉由IVIS®光譜系統捕獲影像且收集數據並使用Living Image 4.2.0軟體(Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA)分析。測定代表覆蓋個別小鼠之整個腫瘤之每一固定目標區域(ROI)內之螢光素酶活性的總光子通量(ph/s)。小鼠之實際影像並未揭示於本文中。源自此監測之生物發光之量化數據提供於圖1中。計算及統計學分析 使用下式將重量損失以圖解形式表示為平均組體重之變化百分比：((W - W₀ )/W₀ ) × 100，其中「W」表示在特定日期治療組之平均體重，且「W₀ 」表示在開始治療時相同治療組之平均體重。亦使用上式來表示最大重量損失，且指示對於特定組在整個實驗期間之任一時間所觀察之最大體重損失百分比。毒性定義為給定組中≥20%之小鼠顯示≥20%體重損失及/或死亡。生物發光量化使得可直接縱向對比在達到替代死亡端點之前治療組之間之腫瘤負荷。將腫瘤負荷以圖解形式表示為平均BLI光子通量+平均值標準誤差(SEM)，且利用Kaplan Meier存活分析測定中值存活。藉由二因子變異數分析(two-way ANOVA)及事後包法隆尼測試(post-hoc Bonferroni test) (GraphPad Prism，第4.3版)分析組間對比之統計學分析。在概率值(p)≤0.05時，將各組之間之差值視為顯著。對於存活評價而言，以端點形式監測發病率或後肢癱瘓且將結果繪圖為存活百分比對腫瘤移植後天數(GraphPad Prism，第4.3版)。使用後肢癱瘓、發病率或≥20%體重損失代替死亡。將ILS%計算為100 × [(治療組中值存活天數-對照組中值存活天數)/對照組中值存活天數]。利用Kaplan Meier存活分析來測定中值存活。藉由Log-rank (Mantel-Cox)測試(GraphPad Prism，第4.3版)對治療組存活與媒劑組進行比較。在概率值(p)≤0.05時，將各組之間之差值視為顯著。結果毒性在當前研究中並未觀察到如藉由動物體重損失或肉眼臨床體徵所評價之毒性。然而，在經靜脈內投用化合物I-B之後會立即產生未測得病因(可能係技術原因，但未證實，參見表1)之散發性死亡。表1：毒性數據匯總存活 / 壽命增加 (ILS) 之抗腫瘤效能及評價 向小鼠接種500萬個細胞且在第3天開始藥物治療。BLI顯示接收化合物I-B單一療法之小鼠之光子計數顯著減小，而單獨之阿糖胞苷(Ara-C)展示與媒劑治療之對照小鼠相比並無差異(參見圖1)。腫瘤負荷之該等明顯減小(如藉由BLI所評價)可轉變為壽命顯著增加，其中在使用q7d 437 mg/kg化合物I-B治療之組中觀察到37% ILS。阿糖胞苷(Ara-C)顯示缺乏抗腫瘤活性，如藉由腫瘤負荷(BLI)或ILS所評價。另一方面，與媒劑對照或單一療法組相比，Ara-C及化合物I-B之組合誘發統計學顯著之ILS%，從而顯示組合對抗腫瘤活性之顯著增強。該等數據匯總於下表2中，亦包含與經口投與之化合物(A)之對比。表2：效能數據之匯總 *與媒劑對照相比，p＜0.05 †與單一療法組相比，p＜0.05 Cpd =化合物

圖 1 藉由量化生物發光來圖解說明化合物I-B與阿糖胞苷之組合對SCID灰棕色小鼠中之MOLM-13-luc.c4 (AML)腫瘤負荷之抗腫瘤效能。

Claims

一種醫藥產物，其包括a)作為第一組份之MDM2-p53相互作用抑制劑；及b)作為第二組份之阿糖胞苷(cytarabine)用於同時或依序投與，其中該MDM2-p53相互作用抑制劑係式(A)化合物：
一種如請求項1之醫藥產物之用途，其用以製造用於治療實體腫瘤之藥劑。
如請求項2之用途，其中在28天治療週期之第1至5天投與該式(A)化合物，隨後係23天停藥期。
如請求項3之用途，其中每天一次(qd)或每天兩次(BID)投與該式(A)化合物。
如請求項2之用途，其中在28天治療週期之第1至5天每天一次(qd)或每天兩次(BID)投與該式(A)化合物，隨後係23天停藥期。