TWI645038B - 可提升幹細胞存活率之胎盤活性成分製備方法 - Google Patents
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Abstract
本發明係提供一種可提升幹細胞存活率之胎盤活性成分製備方法，係於預定操作條件下，利用超臨界流體技術去除胎盤粉末之雌激素，繼而檢測去除雌激素的胎盤粉末之脂肪組織來源幹細胞之活性，當活性高於100%，表示幹細胞具有增生效果，可將胎盤粉末製成膠囊食品，若活性低於100%，表示幹細胞無增生效果，則再將去除雌激素的胎盤粉末與生理食鹽水以預定比例混合成胎盤液後予以純化，用以可獲得胎盤中胜肽與蛋白質等活性成分。
Description
本發明係人體胎盤運用技術有關，更詳而言之是指一種可提升幹細胞存活率之胎盤活性成分製備方法者。
胎盤含有必需氨基酸及具生理活性的胜肽、維生素、礦物質和各種生長因子，可延緩細胞衰老，調節自主神經系統、女性內分泌，改善心血管循環，促進傷口組織癒合，增強神經再生能力，平衡多種荷爾蒙分泌，調節免疫功能(抗過敏)，鎮痛作用(抗發炎)和改善腸道健康等功能。胎盤萃取物可廣泛應用於生醫、醫美等美白、保濕與促進細胞癒合與再生之用途，可全面有效地改善人體皮膚老化、促進肌膚美白、增強皮膚彈性、防止皺紋產生、增強細胞活力、抗過敏、抗腫瘤與改善記憶等強化身體健康之機能性。
雖然胎盤含有甚多對人體有益的成分，不過，更含有致癌疑慮之雌激素，世界多國皆已將雌激素列為一級致癌物而逐漸禁用。習知去除胎盤中雌激素之技術甚多，如美國第47849360號、第4423151號、第5565199號等專利，及第20070087001號、第20040132086號等公開案所示，大多採用強酸、強鹼、酵素或是加熱與添加有機溶劑等方式，將雌
激素從胎盤粉中分離去除，例如，以酸、鹼與酵素分解或以有機溶劑分離雌激素成分，均需使用100~1000倍水溶液或溶劑進行去雌激素的加工程序，去雌激素後還需進行繁複的濃縮、分離及純化步驟，且需考慮酸、鹼破壞有效機能成分與酵素活性等缺點，無法大量應用於商業化。
此外，亦可利用萃取、純化等方式取得胎盤中有益之成分，例如，可從胎盤中萃取生物活性胜肽成分，如美國專利US3409605，係以離子交換樹脂吸附、濃縮和純化胎盤中生長因子，美國專利US4169139，則以丙酮、稀醋酸鉛和稀硫酸銨分離沉澱組織中的蛋白質成分，亦有如中國CN101658534 A專利，其採用液態氮冷凍解凍法，高速研磨後，再經過透析脫鹽與超過濾膜澄清處理，以離子交換樹脂吸附和洗脫條件下，得到活性胜肽成分。
由於現有萃取、純化胎盤中之胜肽、蛋白質與活化因子等相關機能成分之技術，不是製程繁雜、耗時，且需使用大量的有機溶劑，有機溶劑可能會於製作過程中與機能成分產生化學反應，不僅製作完成後溶劑去除與濃縮過程中，加熱蒸發溶劑易造成部分機能成分被破壞，且溶劑易殘留於分離物或純化物中，造成機能成分純度不足之情形，顯有改進之處。
本發明之主要目的即在提供一種可提升幹細胞
存活率之胎盤活性成分製備方法，其以無毒無害的安全技術可幾乎完全去除胎盤的雌激素，將胎盤的好處極大化，更可提升幹細胞之活性，供製成食品或化妝品，甚具實用價值者。
緣是，為達成前述之目的，本發明係提供一種可提升幹細胞存活率之胎盤活性成分製備方法，至少包含以下步驟：製備胎盤粉末：將新鮮胎盤以預定溫度殺菌後，經冷凍乾燥處理並研磨而得到胎盤粉末；去除雌激素：在壓力20~30MPa、溫度40℃之操作條件下，將50~100g胎盤粉末放置於一萃取槽內，以體積流速比為10~20：1之超臨界狀態溶劑通入該萃取槽，用以去除胎盤粉末中之大部分雌激素，超臨界狀態溶劑係飽和超臨界流體CO2與乙醇之混合液，再於相同操作條件下，將前述胎盤粉末與相同體積流速比之超臨界狀態溶劑流入一吸附槽，用以使胎盤粉末中剩餘之雌激素被該吸附槽吸附，獲致去除雌激素之胎盤粉末；檢測幹細胞活性：檢測去除雌激素的胎盤粉末之脂肪組織來源幹細胞之活性，當活性高於一預定值時，表示幹細胞具有增生效果，可將胎盤粉末製成食品或化妝品，若活性低於該預定值，表示幹細胞無增生效果，則進行下一純化步驟，係將去除雌激素的胎盤粉末與生理食鹽水以1：20~25的比例混合成胎盤液再予以純化，用以獲得胎盤中胜肽與蛋白質等活性成分。
進一步地，製備胎盤粉末之步驟中，係將新鮮
胎盤以溫度121℃滅菌30分鐘，再冷凍乾燥處理後磨成胎盤粉末。
進一步地，製備胎盤粉末之步驟中，新鮮胎盤係人體或動物胎盤。
進一步地，去除雌激素之步驟中，最適之操作條件壓力為24~26MPa，溫度為40℃，超臨界狀態溶劑之體積流速比例為15：1，可達到90%之雌激素去除率。
進一步地，檢測幹細胞活性之步驟中，該幹細胞係脂肪組織來源幹細胞(adipose derived stem cells；ADSC)。
進一步地，檢測幹細胞活性之步驟中，係以MTT比色法分析幹細胞之活化能力，活化能力之單位以%表示，該預定值係100%。
進一步地，純化之步驟中，係包含一分餾之步驟與一純化之步驟，分餾之步驟係在壓力2000~4000psi、溫度40至60℃、超臨界狀態溶劑流速3~9mL/min與胎盤液流速1~3mL/min之操作條件下，將胎盤液與超臨界狀態溶劑連續通入一分餾槽內，用以可於該分餾槽之頂端與底端分別萃取出胜肽與蛋白質等機能成分，純化之步驟係在溫度40℃或60℃下，將該分餾槽內萃取出之胜肽與蛋白質等機能成分，連續地依序輸送經過連接之三個分離槽，分別以3000、2000、1000psi之壓力逐步降壓，亦即，第一分離槽係3000psi
之壓力、第二分離槽係2000psi之壓力、最後之第三分離槽係1000psi之壓力，用以可分離超臨界狀態溶劑、可選擇性分離、區分與純化胎盤胜肽與蛋白質之含量與純度於不同分離槽，以獲得胎盤液中之胜肽、蛋白質與活化因子等機能成分。
進一步地，純化之步驟中，係在5kg/cm2、25℃之操作條件下，使用一過濾膜過濾胎盤液為透流液，用以將胜肽、蛋白質與活化因子等機能成分保留於透流液中。
進一步地，該過濾膜可為微過濾膜(0.2μm)或超過濾膜(分子量分割：500,000)之一。
此外，本發明更提供一種可提升人體內超氧化物歧化酶(SOD)之食品，係以前述方法所製備。
100‧‧‧胎盤活性成分製備方法
110‧‧‧製備胎盤粉末
120‧‧‧去除雌激素
130‧‧‧檢測幹細胞活性
140‧‧‧純化
141‧‧‧超臨界流體分離純化
142‧‧‧薄膜分離純化
圖一係本發明一較佳實施例之流程圖。
圖二係本發明一較佳實施例所製備之胎盤粉末與原始胎盤之雌激素含量HPLC圖譜圖。
圖三係本發明一較佳實施例所製備之胎盤粉末與原始胎盤之ADSC幹細胞存活率比較圖。
圖四係本發明一較佳實施例胎盤粉末所製備之食用膠囊供12位女性使用後與控制組之幹細胞存活率比較圖。
圖五係比較不同濃度(25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL)
的本發明原始胎盤液(增生效果小於100%的胎盤液)與經純化處理後的ADSC幹細胞存活率比較圖。
圖六(A)、(B)係微過濾膜(MF)與超過濾膜(UF)於不同濃度(25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL)下透流液(permeate)、保留液(retentate)及原始胎盤液之ADSC幹細胞存活率比較圖。
圖七(A)、(B)、(C)係分別經微過濾膜純化、超過濾膜純化後蛋白在保留液中之比例圖。
圖八係使用本發明一較佳實施例胎盤粉末所製備之食品前後之SOD活性變化圖。
圖九係4名使用者使用本發明一較佳實施例胎盤粉末所製備之食品前後之端粒酶活性變化圖。
以下，茲舉本發明若干較佳實施例，並配合圖式做進一步之詳細說明如後：首先，請參閱圖一所示，本發明一較佳實施例可提升幹細胞存活率之胎盤活性成分製備方法100，其第一步驟係製備胎盤粉末110：：將新鮮胎盤以殺菌釜於溫度121℃滅菌30分鐘後，經冷凍乾燥處理並研磨而得到胎盤粉末，新鮮胎盤可為人體或動物胎盤，本實施例係新鮮人體胎盤。
本發明之第二步驟係去除雌激素120：在壓力
20~30MPa、溫度40℃之操作條件下，將50~100g胎盤粉末放置於一萃取槽內，以體積流量比為10~20：1之超臨界狀態溶劑通入該萃取槽，萃取時間為2~3小時，用以去除胎盤粉末中之大部分雌激素，超臨界狀態溶劑係飽和超臨界流體CO2與乙醇之混合液，該萃取槽係內徑40mm、與高度120mm的不鏽鋼槽體，其內充填有不鏽鋼單體片，最適之操作條件壓力為24~26MPa，溫度為40℃，超臨界狀態溶劑之體積流量比例為15：1，可達到90%之雌激素去除率。再於相同操作條件下，將前述胎盤粉末與相同體積流量比之超臨界狀態溶劑流入一吸附槽，用以使胎盤粉末中剩餘之雌激素被該吸附槽吸附，獲致去除雌激素之胎盤粉末，該吸附槽係內徑60mm與高度150mm的不鏽鋼槽體，內部充填有如矽膠Silica gel、Sephadex(聚醯胺)或Resin(樹脂)等可吸附雌激素之吸附劑。
本發明之第三步驟係判斷幹細胞有無增生效果130：係檢測去除雌激素的胎盤粉末之脂肪組織來源幹細胞(adipose derived stem cells；ADSC)之活性，當活性高於一預定值時，表示幹細胞具有增生效果，可將胎盤粉末製成食品或化妝品，若活性低於該預定值，表示幹細胞無增生效果，則進行下一純化步驟，活化能力之測量以MTT法分析，單位以%表示，該預定值係100%。
本發明之第四步驟係純化140：係將去除雌激素
的胎盤粉末與生理食鹽水以1：20~25的比例混合成胎盤液再予以純化，用以獲得胎盤中胜肽與蛋白質等活性成分，其方式有二：
a)係超臨界流體分離純化141，包含一分餾之步驟與一純化之步驟，分餾之步驟係在壓力2000~4000psi、溫度40至60℃、超臨界狀態溶劑流速3~9mL/min與胎盤液流速1~3mL/min之操作條件下，將胎盤液與超臨界狀態溶劑連續通入一分餾槽內，用以可於該分餾槽之頂端與底端分別萃取出胜肽與蛋白質等機能成分，該分餾槽係內徑60mm、高度300mm的不鏽鋼槽體，其內充填有不鏽鋼單體片。純化之步驟係在溫度40℃或60℃下，將該分餾槽內萃取出之胜肽與蛋白質等機能成分，連續地依序輸送經過連接之三個分離槽，分別以3000、2000、1000psi之壓力逐步降壓，亦即，第一分離槽係3000psi之壓力、第二分離槽係2000psi之壓力、最後之第三分離槽係1000psi之壓力，三個分離槽皆係內徑60mm、高度150mm的不鏽鋼槽體，用以可分離超臨界狀態溶劑、可選擇性分離、區分與純化胎盤胜肽與蛋白質之含量與純度於不同分離槽，以獲得胎盤液中之胜肽、蛋白質與活化因子等機能成分。
b)係薄膜分離純化142，係在5kg/cm2、25℃之操作條件下，使用一過濾膜過濾胎盤液為透流液(permeate)，該過濾膜可為微過濾膜(microfiltration
membrane；MF)(0.2μm)或超過濾膜(ultrafiltration membranes；UF)(分子量分割：500,000)之一，用以將胜肽、蛋白質與活化因子等機能成分保留於透流液中。使用微過濾膜處理胎盤液，較使用超過濾膜處理有較高的透流液流速，與較低的膜沉積層阻力。以微過濾膜處理胎盤液後，所得透流液較原胎盤液澄清且呈淡淡、微黃色，胎盤液成分中之胜肽與幹細胞活性幾乎可以完全保留於透流液中。其次，可利用超過濾膜達到濃縮的目的，選擇超過濾膜膜孔隙小者，可保留胜肽之生長因子於保留液中。
以下，茲說明本發明可提升幹細胞存活率之胎盤活性成分製備方法之特色與功效：首先，如圖二所示，利用HPLC進行胎盤粉末雌激素含量之分析，經HPLC圖譜顯示，胎盤粉末在經過超臨界流體萃取(Supercritical fluid extraction；SFE)前原始胎盤(original placenta)的雌激素(Ethinyl Estradiol)含量很高，胎盤粉末經過本發明製程超臨界流體萃取處理後，HPLC圖譜中曲線低且平穩，雌激素的含量幾乎為零，表示本發明可幾乎完全去除雌激素，達99%以上。相較於習知其他去除雌激素的方法，本發明採用安全無毒的超臨界狀態溶劑，配合物理方式之高壓、低溫萃取方法與低壓、低溫分離方法，可製備去除雌激素之胎盤素成品，不需再經繁複的溶劑去除與濃縮、分離程序，且無溶劑殘留等安全疑慮，環保、安全，且
可回收超臨界狀態溶劑再利用，甚具實用價值者。
其次，本發明檢測幹細胞活性步驟所得幹細胞活化能力大於100%之胎盤粉末所製成之食品(可為食用膠囊)，可給12名女性使用者使用，每顆500mg，飯前每次2顆，一天三次，使用產品三個月後，抽血檢測產品使用前後之老化指標-端粒酶(Telomerase)及血液生化指標-超氧化物歧化酶(SOD)活性變化，相關檢測如後述：如圖三所示，係將本發明製備的胎盤粉末(add 2% SFE placenta extract in essence)與一般市售胎盤粉(add 2% original placenta extract in essence)比較幹細胞的增生效果，由圖可知，本發明胎盤粉末的幹細胞存活率高達120%，比一般市售的胎盤粉幹細胞存活率75%還多了45%，一般市售胎盤粉的幹細胞存活率不只無法再生細胞，還有毒殺細胞的可能性，因此，可證明本發明製備的胎盤粉末具有提高幹細胞存活率的能力，達到細胞再生的效果。
如圖四，係12位女性使用本發明胎盤粉末所製成之食用膠囊後，與控制組比較其幹細胞之細胞存活率的情形，由圖可知，12位女性使用者中，有66%的人幹細胞之細胞存活率是100%以下，沒有達到最佳效果，但還是有33%的人有達到100%以上的幹細胞存活率，表示本發明製備的胎盤粉末具有提升幹細胞存活率的效果，較一般市售的胎盤粉效果更佳。
再者，如本發明之第四步驟中，可將幹細胞活化能力小於100%的胎盤粉製成胎盤液，利用a)技術(超臨界流體分離純化技術)提高ADSC幹細胞的存活率：
如圖五所示，比較不同濃度(25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL)的本發明原始胎盤液(增生效果小於100%的胎盤液)與經a)方式處理後的ADSC幹細胞存活率，從圖中可知，經a)方式處理後的幹細胞存活率明顯高於原始胎盤液，隨著濃度的提高，幹細胞存活率更高。
由上可證明，幹細胞活化能力小於100%的胎盤液，經本發明第四步驟之a)技術處理後可提高細胞再生的能力，且再生能力隨著濃度的提高而增加，本發明所使用的超臨界流體技術採用安全無毒的超臨界狀態溶劑，在超臨界CO2高溶解度、低黏度與高質傳效率下，提高分餾物的純度，且無溶劑殘留等安全疑慮，環保、安全，超臨界狀態溶劑更可回收再利用，相較於習知以酸、鹼與酵素分解再配合大量有機溶劑水解之方式，導致有殘留溶劑之安全疑慮之缺點，本發明顯然更具進步性，甚具實用價值。
其次，如本發明之第四步驟中，亦可利用b)技術(薄膜分離純化技術)提高幹細胞的存活率：如圖六(A)所示，係經微過濾膜後比較不同濃度下的幹細胞存活率，由圖可知，因為生長因子可以通過微過濾膜的膜，所以在透流液中，濃度愈高細胞的存活率愈高，
且存活率大於100%，具有再生細胞的能力。如圖六(B)所示，係經超過濾膜後比較不同濃度下幹細胞存活率，由圖可知，因為生長因子無法通過超過濾膜，所以在保留液中，濃度愈高，細胞的存活率愈高，且存活率大於100%，也比原始胎盤液高出許多。
再者，如圖七(A)所示，經微過濾膜分離純化後，有99%的蛋白(Protein)在保留液(Retentate)中，只有極少量的蛋白通過微過濾膜，這是因為大分子量的蛋白質無法通過膜。如圖七(B)所示，經微過濾膜分離純化後，有51%的蛋白在保留液中，有49%的蛋白在透流液(Permeate)中。如圖七(C)所示，再經過超過濾膜分離純化後，顯示有86%的蛋白在保留液中，有14%的蛋白在透流液中，這是因為更小分子的蛋白會通過。
由上可證明，幹細胞活化能力小於100%的胎盤液，經本發明第四步驟之b)技術處理後可提高細胞再生的能力，而人體胎盤液之組成成分分析結果：人體胎盤液之蛋白質與胜肽含量分別為91.63與7.44mg/gdw。理論上胎盤液中胜肽成分經過b)技術處理後，在透流液與保留液中之濃度應相等，排拒率應接近0。但因過濾膜表面易堆積蛋白質等物質，阻塞過濾膜之孔隙，使得胜肽與生長因子等成分通過過濾膜之阻力增加。
而使用本發明製備之食品一段時間後，檢測各
種指標，各項指標皆顯示本發明對人體有許多好處，如增加SOD、增加端粒酶活性：如圖八所示，血液生化指標-超氧化物歧化酶(SOD)分析，比較使用本發明之食品前後的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase；SOD)值，由圖八可知，使用後SOD值明顯增加，表示可以增加體內SOD，減少ROS造成的傷害，而達到抗氧化和抗老化的作用。
其次，老化指標-端粒酶(Telomerase)，端粒酶在細胞分裂、複製過程中，扮演重要角色，人體內仍有少數細胞，例如組織的幹細胞，因大量表現可複製、合成端粒片段的端粒酶，而能維持端粒長度，不讓細胞走向老化、死亡，如圖九所示，比較使用本發明之產品前後的端粒酶活性，顯示使用後的端粒酶活性平均增加23%，端粒酶適當活化，可維持端粒長度，阻止細胞進入老化、甚至淍亡的過程。
綜上所述，本發明可提升幹細胞存活率之胎盤活性成分製備方法，其以無毒無害的安全技術可幾乎完全去除胎盤的雌激素，將胎盤的好處極大化，更可提升幹細胞活性，且本發明所使用之新鮮胎盤亦可為動物胎盤，如羊胎，本發明製備之胎盤粉末可製成食品或化妝品，食品如食用膠囊、飲品等，化妝品如精華液、面膜、晚霜等，甚具實用價值者。
Claims (5)
- 一種可提升幹細胞存活率之胎盤活性成分製備方法，至少包含以下步驟：製備胎盤粉末：將新鮮胎盤以預定溫度殺菌後，經冷凍乾燥處理並研磨而得到胎盤粉末；去除雌激素：在壓力24~26MPa、溫度40℃之操作條件下，將50~100g胎盤粉末放置於一萃取槽內，以體積流量比為15：1之超臨界狀態溶劑通入該萃取槽內萃取2~3小時，用以去除胎盤粉末中90%雌激素，超臨界狀態溶劑係飽和超臨界流體CO2與乙醇之混合液，再於相同操作條件下，將前述胎盤粉末與相同體積流量比之超臨界狀態溶劑流入一吸附槽，用以使胎盤粉末中剩餘之雌激素被該吸附槽吸附，獲致去除雌激素之胎盤粉末，該吸附槽內充填有可吸附雌激素之吸附劑，該吸附劑係矽膠(Silica gel)、聚醯胺(Sephadex)或樹脂(Resin)等可吸附雌激素之吸附劑之一；判斷幹細胞有無增生效果：檢測去除雌激素的胎盤粉末之幹細胞活性，並藉由幹細胞活性是否高於一預定值判斷幹細胞有無增生效果，當活性高於一預定值時，表示幹細胞具有增生效果，可將胎盤粉末製成食品或化妝品，若活性低於該預定值，表示幹細胞無增生效果，則進行下一純化步驟，以獲得胎盤中胜肽與蛋白質等活性成分；活化能力之測量係利用細胞存活率分析(MTT)法，該預定值單位以%表示，該預定值係100%；及純化：將去除雌激素的胎盤粉末與生理食鹽水以1：20~25的比例混合成胎盤液再予以純化，係包含一分餾之步驟與一純化之步驟，分餾之步驟係在壓力2000~4000psi、溫度40至60℃、超臨界狀態溶劑流速3~9mL/min與胎盤液流速1~3mL/min之操作條件下，將胎盤液與超臨界狀態溶劑連續通入一分餾槽內，用以可於該分餾槽之頂端與底端分別萃取出胜肽與蛋白質等機能成分，純化之步驟係在溫度40℃或60℃下，將該分餾槽內萃取出之胜肽與蛋白質等機能成分，連續地依序輸送經過連接之三個分離槽，分別以3000、2000、1000psi之壓力逐步降壓，用以可分離超臨界狀態溶劑、可選擇性分離、區分與純化胎盤胜肽與蛋白質之含量與純度於不同分離槽，以獲得胎盤液中之胜肽、蛋白質與活化因子等機能成分，用以可獲得胎盤中胜肽與蛋白質等活性成分。
- 一種可提升幹細胞存活率之胎盤活性成分製備方法，至少包含以下步驟：製備胎盤粉末：將新鮮胎盤以預定溫度殺菌後，經冷凍乾燥處理並研磨而得到胎盤粉末；去除雌激素：在壓力24~26MPa、溫度40℃之操作條件下，將50~100g胎盤粉末放置於一萃取槽內，以體積流量比為15：1之超臨界狀態溶劑通入該萃取槽內萃取2~3小時，用以去除胎盤粉末中90%雌激素，超臨界狀態溶劑係飽和超臨界流體CO2與乙醇之混合液，再於相同操作條件下，將前述胎盤粉末與相同體積流量比之超臨界狀態溶劑流入一吸附槽，用以使胎盤粉末中剩餘之雌激素被該吸附槽吸附，獲致去除雌激素之胎盤粉末，該吸附槽內充填有可吸附雌激素之吸附劑，該吸附劑係矽膠(Silica gel)、聚醯胺(Sephadex)或樹脂(Resin)等可吸附雌激素之吸附劑之一；判斷幹細胞有無增生效果：檢測去除雌激素的胎盤粉末之幹細胞活性，並藉由幹細胞活性是否高於一預定值判斷幹細胞有無增生效果，當活性高於一預定值時，表示幹細胞具有增生效果，可將胎盤粉末製成食品或化妝品，若活性低於該預定值，表示幹細胞無增生效果，則進行下一純化步驟，以獲得胎盤中肽肽與蛋白質等活性成分；活化能力之測量係利用細胞存活率分析(MTT)法，該預定值單位以%表示，該預定值係100%；及純化：將去除雌激素的胎盤粉末與生理食鹽水以1：20~25的比例混合成胎盤液再予以純化，係在5kg/cm2、25℃之操作條件下，使用一過濾膜過濾胎盤液為透流液，用以將胜肽、蛋白質與活化因子等機能成分保留於透流液中，用以可獲得胎盤中胜肽與蛋白質等活性成分。
- 如申請專利範圍第1或2項所述可提升幹細胞存活率之胎盤活性成分製備方法，其中，製備胎盤粉末之步驟中，新鮮胎盤係人體或動物胎盤。
- 如申請專利範圍第1或2項所述可提升幹細胞存活率之胎盤活性成分製備方法，其中，判斷幹細胞有無增生效果之步驟中，該幹細胞係脂肪組織來源幹細胞(adipose derived stem cells；ADSC)。
- 如申請專利範圍第2項所述可提升幹細胞存活率之胎盤活性成分製備方法，其中，該過濾膜可為微過濾膜(0.2μm)或超過濾膜(分子量分割：500,000)之一。
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