TWI644094B - 凝血酶原時間的測定方法 - Google Patents

Abstract

一種凝血酶原時間(Prothrombin Time，PT)的測定方法，包括下述步驟：首先提供血液樣本以及光源，並獲取光源光線對應於血液樣本的光學特徵函數。後續，決定光學特徵函數中的最小值、最大值以及導數極值，其中最大值係出現在最小值之後；導數極值係出現在最大值之後。再根據導數極值決定凝血酶原時間。

Description

凝血酶原時間的測定方法

本揭露書是有關於一種血液凝固時間的測定方法。特別是有關於一種以光學原理來測定凝血酶原時間(Prothrombin Time，PT)的方法。

凝血酶原時間是一種藉由測定體外血液凝固的時間來模擬體內外源性凝血途徑，用以反映外源性凝血途徑和共同凝血途徑凝血因子是否異常，是篩檢止凝血功能最常用的試驗之一。

檢測凝血時間的典型方法，係以分析血液凝固時，血清中可溶性蛋白質轉變為不可溶性蛋白質所產生的凝聚現象，並利用如顏色變化、反射、折射、冷光和螢光等光學方法進行檢測。然而，習知的光學分析方法，需要大量的血液樣本及高純度的試劑，並且需要對血液樣本進行分離處理，耗費的時間較長、耗材成本較高，且操作不便。

目前業界尚有採用電化學檢測方法，利用血液凝固前後黏滯度的不同，會導致血液的阻抗(impedance)或電阻(resistance)產生對應變化的機制，來作為判斷凝血程度的依據。此舉雖然大大提高檢測的簡便性，卻容易因為血球容積比及個體間血液中的電解質濃度不同，而導致測試的誤差。

因此，有需要提供一種快速檢測、方便操作及準確性高的凝血酶原時間測定方法，以改善習知技術所面臨的問題。

根據本說明書的一實施例提供一種凝血酶原時間的測定方法，此凝血酶原時間的測定方法包括下述步驟：首先提供一血液樣本以及一光源，並獲取光源對應於血液樣本的光學特性函數。之後，決定光學特性函數中的最小值、最大值以及導數極值，其中最大值係出現在最小值之後；導數極值係出現在最大值之後。後續，根據導數極值決定凝血酶原時間。

根據本說明書的另一實施例提供一種凝血酶原時間的測定方法，此凝血酶原時間的測定方法包括下述步驟：首先提供一血液樣本和一光源。再獲取光源相對於血液樣本的光學特性函數。然後，決定光學特性函數中的最大值與導數極值，其中最大值係出現在一延遲時間之後；且導數極值係出現在最大值之後。後續，根據導數極值決定凝血酶原時間。

根據本說明書的又一實施例提供一種凝血酶原時間 的測定方法，此凝血酶原時間的測定方法包括下述步驟：首先提供一血液樣本和一光源。再獲取光源相對於血液樣本的光學特徵函數。之後，決定光學特徵函數中的一第一導數極值以及一第二導數極值，其中第一導數極值係出現在一延遲時間之後；且第二導數極值係出現在第一導數極值之後；第一導數極值及第二導數極值之一者為正數另一者為負數。後續，根據第二導數極值來決定凝血酶原時間。

根據上述實施例，本說明書提供一種凝血酶原時間的測定方法，其係透過光學法量測血液在凝血反應時產生之光學參數變化，再進一步分析數據判定凝血酶原時間。詳細而言，本說明書提供一種凝血酶原時間的測定方法，其係透過光學法量測血液樣本在凝血反應中產生之穿透率或反射率函數，再進一步找出函數中之導數極值以判定凝血酶原時間。在數學分析中，所謂極值是指函數中最大值及/或最小值之統稱，而不論是在給定函數範圍內產生的最大值及/或最小值[稱為區域(local)極值或相對(relative)極值]，或是在全函數範圍中產生的最大值及/或最小值[稱為全域(global)極值或絕對(absolute)極值]均屬其範疇。

在一實施例中，本說明書提供之凝血酶原時間的測定方法，係藉由光學感測裝置，先量測自樣品上樣至凝血反應結束期間光線穿過待測區域及/或血液樣本產生之穿透率函數，再根據穿透率函數求得最小導數值來決定凝血酶原時間。在另一實施例中，本說明書提供之凝血酶原時間的測定方法，係藉由光學感 測裝置，先量測自樣品上樣至凝血反應結束期間光線經待測區域及/或血液樣本產生之反射率函數，再根據反射率函數求得最大導數值來決定凝血酶原時間。

由於，本說明書的實施例所提供的方法僅需要少量的血液樣本，且不需要對血液樣本進行分離處理，即可藉由光學檢測及數據分析來決定凝血酶原時間。因此，具有操作簡便、耗費時間較短、耗材成本較低等優勢，可達到快速檢測、方便操作及準確性高等其中之一發明目的。

10、20、30‧‧‧凝血酶原時間的測定方法

11、21、31、41‧‧‧穿透率函數

51、61、71‧‧‧反射率函數

22、32、42‧‧‧穿透率導數函數

62、72‧‧‧反射率導數函數

100、500‧‧‧光學檢測裝置

101‧‧‧血液樣本

102、502‧‧‧光源

103、503‧‧‧光線

104‧‧‧容器

105、505‧‧‧光感測器

106、506‧‧‧控制器

507‧‧‧反射片

301、401‧‧‧延遲時間

PK‧‧‧偏離峰值

t_s‧‧‧起始時間點

t_b2、t_b3、t_b4、t_b6、t_b7‧‧‧基準時間點

t₀‧‧‧將血液樣本注入量測區的時間點

t₁‧‧‧穿透率區域最低點的時間點

t₂‧‧‧穿透率區域最高點的時間點

t_r1‧‧‧反射率區域最高點的時間點

t_r2‧‧‧反射率區域最低點的時間點

t_MIN1‧‧‧最小穿透值出現的時間點

t_MIN2‧‧‧最小導數值出現的時間點

t_MAX1‧‧‧最大穿透值出現的時間點

t_MAX2‧‧‧最大導數值出現的時間點

t_MINr1‧‧‧最小反射值出現的時間點

t_MAXr1‧‧‧最大反射值出現的時間點

t_MAXr2‧‧‧最大導數值出現的時間點

t_MINr2‧‧‧最小導數值出現的時間點

△t₂、△t₃、△t₄、△t₆、△t₇‧‧‧時間長度

S21‧‧‧提供血液樣本和光源

S22‧‧‧量測光線穿過血液樣本後所產生的穿透率函數

S23‧‧‧決定穿透率函數中的最小穿透值

S24‧‧‧決定穿透率函數中的最大穿透值

S25‧‧‧決定穿透率函數中的最小導數值

S26‧‧‧根據最小導數值來決定凝血酶原時間

S31‧‧‧提供血液樣本和光源

S32‧‧‧量測光線穿過血液樣本後所產生的穿透率函數

S33‧‧‧在一段延遲時間之後，決定穿透率函數中的最大穿透值

S34‧‧‧決定穿透率函數中的最小導數值

S35‧‧‧根據最小導數值來決定凝血酶原時間

S41‧‧‧提供血液樣本和光源

S42‧‧‧量測光線穿過血液樣本後所產生的穿透率函數

S43‧‧‧在一段延遲時間之後，決定穿透率函數中的最大導數值

S44‧‧‧決定穿透率函數中的最小導數值

S45‧‧‧根據最小導數值來決定凝血酶原時間

S61‧‧‧提供血液樣本和光源

S62‧‧‧量測光線穿過血液樣本後所產生的反射率函數

S63‧‧‧決定反射率函數中的最反射透值

S64‧‧‧決定反射率函數中的最大反射值

S65‧‧‧決定反射率函數中的最大導數值

S66‧‧‧根據最大導數值來決定凝血酶原時間

S71‧‧‧提供血液樣本和光源

S72‧‧‧量測光線穿過血液樣本後所產生的反射率函數

S73‧‧‧決定反射率函數中的最反射透值

S74‧‧‧決定反射率函數中的最小導數值

S75‧‧‧根據最大導數值來決定凝血酶原時間

為了對本發明之上述實施例及其他目的、特徵和優點能更明顯易懂，特舉數個較佳實施例，並配合所附圖式，作詳細說明如下：第1A圖係繪示一種用來實施穿透式凝血酶原時間測定方法之光學檢測裝置的簡單示意圖；第1B圖係繪示由穿透式光學檢測裝置量測所得的穿透率函數示意圖；第2A圖係根據本發明的一實施例所繪示的一種凝血酶原時間測定方法的流程方塊圖；第2B圖係根據本說明書的一實施例繪示採用光學檢測裝置量測所得的穿透率函數與穿透率導數函數；第3A圖係根據本發明的另一實施例所繪示的一種凝血酶原 時間測定方法的流程方塊圖；第3B圖係根據本說明書另一實施例繪示採用光學檢測裝置量測所得的穿透率函數與穿透率導數函數；第4A圖係根據本發明的又一實施例所繪示的一種凝血酶原時間測定方法的流程方塊圖；以及第4B圖係根據本說明書又一實施例繪示採用光學檢測裝置量測所得的穿透率函數與穿透率導數函數；第5A圖係繪示一種用來實施反射式凝血酶原時間測定方法之光學檢測裝置的簡單示意圖；第5B圖係繪示採用反射式光學檢測裝置量測所得的反射率函數示意圖；第6A圖係根據本發明的再一實施例所繪示的凝血酶原時間測定方法的流程方塊圖；第6B圖係根據本說明書的一實施例繪示採用光學檢測裝置量測所得的反射率函數與反射率導數函數；第7A圖係根據本發明的另一實施例所繪示的一種凝血酶原時間測定方法的流程方塊圖；以及第7B圖係根據本說明書的一實施例繪示採用第5A圖之光學檢測裝置以及第7A圖之方法量測所得的反射率函數與反射率導數函數。

本發明提供一種凝血酶原時間的測定方法。為了對本發明之上述實施例及其他目的、特徵和優點能更明顯易懂，下文特舉數個較佳實施例，並配合所附圖式作詳細說明。

但必須注意的是，這些特定的實施案例與方法，並非用以限定本發明。本發明仍可採用其他特徵、元件、方法及參數來加以實施。較佳實施例的提出，僅係用以例示本發明的技術特徵，並非用以限定本發明的申請專利範圍。該技術領域中具有通常知識者，將可根據以下說明書的描述，在不脫離本發明的精神範圍內，作均等的修飾與變化。在不同實施例與圖式之中，相同的元件，將以相同的元件符號加以表示。

本發明所述凝血酶原時間之光學檢測方法可為穿透式或反射式檢測，以下搭配附圖做詳細說明。請參照第1A圖至第1B圖，第1A圖繪示一種用來實施穿透式凝血酶原時間測定之光學檢測裝置100的示意圖。第1B圖係繪示採用穿透式光學檢測裝置量測所得的穿透率函數示意圖，其中穿透率函數11係一種光穿透率(transmittance)與時間(t)的關係曲線。

根據本說明書的一些實施例，如第1A圖所繪示，用以實施穿透式光學檢測之光學檢測裝置100包括：血液樣本101、光源102、容器104、光感測器105和控制器106，其中光源102及光感測器105分別位於裝載血液樣本101之容器104的相反兩側。光感測器105係用以接收穿過容器104中血液樣本101之後的一部份光線103，以量測光線103穿過血液樣本101後所 產生的穿透率，並得到如第1B圖所示之穿透率函數11。

在本說明書的一些實施例中，血液樣本101可以是一種直接自活體中採集後，未經過(離心)分離或濃縮處理，而包含有各種血球及血漿等基本成分的全血(whole blood)樣本；也可以是一種經過(離心)分離或濃縮處理之後的血漿樣本，例如：缺血小板血漿(Platelet-Poor Plasma，PPP)或多血小板血漿(Platelet-Rich Plasma，PRP)。容器104係用來承載血液樣本101及凝血反應試劑，容器104提供血液樣本101及凝血試劑進行反應的空間，具體實施方式可以例如是：試管、毛細管、溝槽、試片流道或待測區。在穿透式檢測裝置的實施例中，容器104係透光的。

其中，光源102可以是波長實質介於380奈米(nm)到780奈米之間的可見光光源、波長實質介於760奈米至1毫米(mm)之間的紅外光光源或波長實質介於200奈米到400奈米之間的紫外光光源。光感測器105包括可以將穿過血液樣本101的光線103轉換成電子訊號(例如電壓V)的光電轉換裝置。控制器106則包含能對前述電子訊號進行轉換運算的數位計算機處理器，例如中央處理器(Central Processing Unit，CPU)、單晶片(MCU)、通用或特殊用途處理器以及相關的控制邏輯。

由光源102所出射的光線103，穿過血液樣本101和容器104之後，入射至感測器105，再由感測器105量測得出光線103的穿透率。並藉由連續量測或短週期的複數次量測，得 出在一段時間中(例如：自樣品上樣至凝血反應結束)光穿透率與時間(t)的關係曲線。

舉例而言，在第1B圖所繪示的實施例之中，首先在起始時間點t_s(例如t_s=0)開啟光源102及感測器105，隨即在時間點t₀開始將血液樣本101注入容器104中，並且連續量測光線103的穿透率。藉由感測器105的光電轉換裝置以及控制器106的運算得出光穿透率與時間(t)的關係曲線。由於在時間點t_s至時間點t₀之間，血液樣本101尚未進入量測區，大部分的光線103會直接穿過容器104，故可將所量測到的數值視為光穿透率100%，並可以此量測數值來作為後續光穿透率正規化的標準。

血液樣本101在時間點t₀注入量測區之後與試劑混合並開始凝血反應，因為血液樣本101的阻擋，光線103穿透率會由時間點t₀的100%，迅速降低至時間點t₁的一區域最低位置。

之後，血液樣本101中的紅血球會逐漸形成錢串狀的堆疊(rouleaux formation)，而容許光線103由堆疊縫隙中穿過，故而光線103的穿透率會由時間點t₁的最低位置反轉，漸漸升高至時間點t₂的一區域最高點。接著，血液樣本101中形成凝血酶和纖維蛋白，進而阻擋光線103穿透血液樣本101，使光穿透率數值再度反轉下降，最終趨於一穩定值。

可依不同狀況定義適宜之計算凝血酶原時間的起始點。在一實施例中，凝血酶原時間的計算起始點是血液樣本與試劑混合並開始反應的時間點。在本實施例中，凝血酶原時間的計 算方式為血液樣本注入量測區的時間點t₀起算，至光穿透率數值由區域最高點反轉下降產生導數極值所經過的時間區段。

為了消除外在環境光的影響，在本說明書的一些實施例中，感測器105在進行光線103穿透率的量測時，控制器106會以時序控制的方式切換光源102的開關狀態，以產生複數個相互對應的亮態及暗態，再由感測器105量測對應這些亮態的複數個亮態光穿透率數值及對應這些暗態的複數個暗態光穿透率數值。控制器106可根據這些亮態光穿透率數值和暗態光穿透率數值來進行運算，得出穿透率函數11。在本說明書的一實施例中，控制器106是將這些相互對應的亮態光穿透率數值和暗態光穿透率數值相減，來得出穿透率函數11。但在說明書的另一實施例中，控制器106是將這些相互對應的亮態光穿透率數值和暗態光穿透率數值相除，來得出穿透率函數11。

以下特舉出一些實施例詳細說明如何藉由穿透率函數來推算凝血酶原時間。請參照第1A、2A及2B圖，第2A圖係根據本發明的一實施例所繪示的一種凝血酶原時間測定方法20的流程方塊圖。第2B圖係根據本說明書的一實施例繪示採用穿透式光學檢測裝置量測所得的穿透率函數21與穿透率導數函數22。

凝血酶原時間測定方法20包括下述步驟：首先，提供血液樣本和光源(如第2A圖所示的步驟S21)。接著，使用感測器量測光線穿過血液樣本後所產生的穿透率，並且藉以得到一個 穿透率函數21(如第2A圖所示的步驟S22)。最後，根據穿透率函數21來決定凝血酶原時間。

決定凝血酶原時間的方法包括下述步驟：首先，決定穿透率函數21中的最小穿透值MIN1(如第2A圖的步驟S23所示)。在本實施例中，穿透率函數21中的最小穿透值MIN1是指在血液樣本注入量測區之後的一區域最小光穿透率值。

詳言之，血液樣本101中包含複數個紅血球，當血液樣本101被注入容器104之後，受到血液樣本101的阻擋，光線103的光穿透率由起始的100%迅速降低。於一些實施例中，可採用穿透率下降比例定義血液樣本注入容器的時間點t₀，例如：定義時間點t₀為光線103的穿透率持續降低至少15%或20%的時間點。於一些實施例中，可採用穿透率範圍定義血液樣本注入容器的時間點t₀，例如：定義時間點t₀為穿透率持續降低至10-40%的時間點。於一些實施例中，可採用穿透率門檻值定義血液樣本注入容器的時間點t₀，例如：定義時間點t₀為光線103的穿透率首次低於90%的時間點。

之後，血液樣本101中的紅血球會逐漸形成盤狀的成串堆疊，而容許光線103由堆疊縫隙中穿過。故而光線103的穿透率會反轉上升。於一些實施例中，穿透率可以漸漸升高至約20-60%。在本實施例中，穿透率函數21中的最小穿透值MIN1是指，光穿透率數值從血液樣本101被注入容器104的時間點t_b2=1開始的100%降低至26%之後，再由最低點26%反轉升高至 27%的這段期間內，在穿透率函數21中所形成之至少一個波谷的區域最小光穿透率數值。在本實施例中，最小穿透值MIN1也是穿透率函數21的全域最小光穿透率值。

控制器106可待檢測完成後再進行驗證求取全域最小穿透率值或區域最小穿透率值。或者，控制器106可藉由持續性或即時性(real time)的驗證，來決定目前量測所得的光穿透率值是否為區域最小穿透率值(最小穿透值MIN1)。若驗證結果為「非」，則繼續驗證程序；若驗證結果為「是」，則進入下一個步驟(如第2A圖所示的步驟S24)。在本實施例中，最小穿透值MIN1的穿透率值實質為26%，其出現在從血液樣本101被注入容器104的時間點t_b2之後約1秒的時間點t_MIN1(即t_MIN1=2)。

接著，請參照第2A圖所示的步驟S24，決定穿透率函數21中的最大穿透值MAX1。其中，穿透率函數21中的最大穿透值MAX1是穿透率函數21的一區域最大穿透率值。此處所謂的區域最大穿透值是指，穿透率函數21從最小穿透值MIN1反轉上升至再次反轉下降之間所量測得到的最大光穿透率數值。

詳言之，當血液樣本101中的紅血球的盤狀堆疊因靜置呈現穩定狀態之後，由堆疊縫隙中穿過的光線103數量達到最高。接著，血液樣本101中形成凝血酶和纖維蛋白，進而阻擋光線103穿透血液樣本101，使光穿透率數值再度反轉下降，最終趨於穩定。在本實施例中，最大穿透值MAX1是指光穿透率數值從最小穿透值MIN1的波谷反轉上升至最高點後，再次反轉下 降至達成穩定的這段期間內，在穿透率函數21中所形成之至少一個波峰的最大光穿透率數值。在本實施例中，最大穿透值MAX1也是穿透率函數21的全域最大光穿透率值。

控制器106可藉由週期性的驗證，來決定目前量測所得的光穿透率值是否為區域最大穿透值(最大穿透值MAX1)。若驗證結果為「非」，則繼續驗證程序；若驗證結果為「是」，則進入下一個步驟(如第1A圖所示的步驟S25)。在本實施例中，最大穿透值MAX1的穿透率值實質為27%，其出現在起始時間點t_s起算經過約10秒後的時間點(t_MAX1=10)。

請參照第2A圖所示的步驟S25，決定穿透率函數21中的最小導數值MIN2。在本說明書的一些實施例中，控制器106可依據穿透率函數21進行運算得出穿透率導數函數22(如第2B圖所繪示)，並找出穿透率導數函數22中，出現在最大穿透值MAX1之後的最小導數值MIN2。在本實施例中，最小導數值MIN2出現在從血液樣本101被注入容器104的時間點t_b2起算經過約10秒後的時間點t_MIN2(即t_MIN2=11)。其中，最小導數值MIN2的出現，代表血液樣本101因凝結現象，導致穿透率函數21中的光穿透率值反轉下降。

後續請參照第2A圖所示的步驟S26，根據最小導數值來決定凝血酶原時間。在本說明書的一些實施例中，凝血酶原時間的計算方式，是以血液樣本101注入容器104中的時間點作為計算凝血酶原時間的基準時間點t_b2(t_b2=1)。起算至最小導數值 MIN2出現的時間點t_MIN2(例如t_MIN2=11)的時間長度△t₂。意即，將凝血酶原時間為最小導數值MIN2出現的時間點t_MIN2減掉基準時間點t_b2(△t₂=t_MIN2-t_b2)即得到凝血酶原時間，時間長度△t₂約為10秒鐘。

值得注意的是，一些實施例中所測得之穿透率函數包括偏離峰值PK。偏離峰值PK是指血液進入待測區過程中因流動變化所產生的光強度變化訊號，其多為量測初期的短暫現象。根據觀察，偏離峰值PK多發生在血液進入待測區的前6秒內，偏離峰值PK之最大值一般小於凝血訊號之最大值，且其半高寬對應之時間長度一般小於3秒。在一些實施例中，在決定凝血酶原時間的方法中包括排除偏離峰值PK的步驟。可根據偏離峰值PK的特徵選擇合適的方法排除偏離峰值PK。例如：排除特定時間內產生的峰值、排除最大值介於特定範圍內之峰值或排除半高寬對應之時間長度介於特定範圍的峰值。

請參照第1A、3A圖和3B圖，第3A圖係根據本發明的另一實施例所繪示的一種凝血酶原時間測定方法30的流程方塊圖。其中，第3A圖所繪示的凝血酶原時間測定方法30可藉由延遲時間的方式取代了第2A圖所繪示決定最小穿透值MIN1的步驟S23。第3B圖係繪示採用光學檢測裝置以及第3A圖之方法30量測所得的穿透率函數31與穿透率導數函數32，其中穿透率函數31包括偏移峰值PK。舉例而言，在本實施例中，偏離峰值PK是指，穿透率函數31中光穿透率數值從最小穿透值MIN1 反轉上升之後，隨即又反轉下降所形成的一個波峰。

凝血酶原時間測定方法30包括下述步驟：首先，提供血液樣本101和光源102(如第3A圖所示的步驟S31)，並量測光線103穿過血液樣本101後所產生的穿透率，得到一個穿透率函數31(如第3A圖所示的步驟S32)。在一段延遲時間301(請參照第3B圖)之後，決定穿透率函數31中的最大穿透值MAX1(如第3A圖的步驟S33所示)。

在本實施例中，凝血酶原時間測定方法30是在血液樣本101注入容器104中的時間點t_b3之後，延遲一段延遲時間301才對穿透率函數31進行分析，省略第2A圖所繪示決定最小穿透值MIN1的步驟S23。在此段延遲時間中，系統可同步進行其他訊號讀取及判定，例如：試片QC控制判讀。延遲時間301實值介於1秒至6秒之間，例如：延遲時間301為2-4秒。在另一實施例中，可選擇性地(optionally)進行如第2A圖所繪示之決定最小穿透值MIN1的步驟S23後才延遲一段延遲時間301；接著，再進行決定穿透率函數31中的最大穿透值MAX1的步驟S33。

詳言之，在本實施例中，當血液樣本101注入容器104並經過一段延遲時間301(例如延遲3秒)之後，穿透率函數31中的光穿透率數值已經低於一個門檻值(例如光穿透率數值實質低於85%或80%之門檻值)，且血液樣本101中的紅血球也已由散亂排列的狀態開始形成錢串狀堆疊，而容許光線103由堆疊縫隙中穿過的穩定狀態。此時，穿透率函數31的光穿透率數值會由 區域光穿透率最小值反轉升高，達到穿透率函數31的區域最高點，即可決定最大穿透值MAX1。

後續，再如第3A圖的步驟S34決定穿透率導數函數32中的最小導數值MIN2(如第3B圖所示)。在本實施例中，最小導數值MIN2出現的時間點t_MIN2(t_MIN2=11)晚於最大穿透值MAX1出現的時間點t_MAX1(t_MAX1=10)。由於，提供液樣本101和光源102的步驟S31、產生穿透率函數31的步驟S32、決定穿透率函數31中最大穿透值MAX1的步驟S33和決定穿透率導數函數32中最小導數值MIN2的步驟S34與前述步驟S21、S22、S24和S25實質上相同，故不在此贅述。

最後，根據最小導數值來決定凝血酶原時間(如第3A圖的步驟S35所示)。在本實施例中，是從血液樣本101被注入容器104的時間點作為基準時間點t_b3(t_b3=1)，計算最小導數值MIN2出現的時間點起算至基準時間點t_b3之間的時間長度△t₃。意即，將凝血酶原時間為最小導數值MIN2出現的時間點t_MIN2減掉基準時間點t_b3(△t₃=t_MIN2-t_b3)即得到凝血酶原時間，時間長度△t₃約為10秒鐘。

在另外一些實施例中，可以藉由直接決定穿透率函數中的最大導數值和最小導數值的方式，來判定凝血酶原時間。例如請搭配第1A圖繼續參照第4A圖和第4B圖，第4A圖係根據本發明的又一實施例所繪示的一種凝血酶原時間測定方法40的流程方塊圖。第4B圖係繪示採用光學檢測裝置以及第4A圖之 方法量測所得的穿透率函數41與穿透率導數函數42。其中，第4A圖所繪示的凝血酶原時間測定方法40省略了第2A圖所繪示決定最小穿透值MIN1的步驟S23和決定最大穿透值MAX1的步驟S24，並增加決定最大導數值MAX2的步驟S43。

凝血酶原時間測定方法40包括下述步驟：首先，提供血液樣本101和光源102(如第4A圖所示的步驟S41)，並量測光線103穿過血液樣本101後所產生的穿透率，得到一個穿透率函數41(如第4A圖所示的步驟S42)。由於，提供血液樣本101和光源102的步驟S41、產生穿透率函數41的步驟S42與前述步驟S21和S22實質上相同，故不在此贅述。

從血液樣本101被注入容器104的時間點t_b4(t_b4=1)起算，經過一段延遲時間401(例如約3秒之後)，進行決定穿透率函數41中的最大導數值MAX2的步驟(如第4A圖的步驟S43所示)。在本實施例中，決定穿透率函數41中的最大導數值MAX2的方式，是以控制器106對穿透率函數41進行運算得出穿透率導數函數42，並找出穿透率導數函數42中，出現在延遲時間401之後的最大導數值MAX2。在一些實施例中，最大導數值MAX2是一個區域最大值。

後續，再決定穿透率函數41中的最小導數值MIN2(如第4A圖的步驟S44所示)。在本說明書的一些實施例中，最小導數值MIN2是指穿透率導數函數42中在最大導數值MAX2之後的導數最小值(極值)。

詳言之，血液樣本101在血球呈現錢串狀堆疊的穩定狀態之後會因形成凝血酶和纖維蛋白，而阻擋光線103穿透血液樣本101，導致穿透率函數41中的光穿透率值再度反轉下降，最後趨於穩定。最小導數值MIN2出現的時間點t_MIN2，即是在最大導數值MAX2出現的時間點t_MAX2之後，光穿透率數值下降速率最快的時間點。

在本實施例中，決定最小導數值MIN2的方式，即是找出在最大導數值MAX2出現的時間點t_MAX2之後，穿透率導數函數2的區域最小值(極值)。其中，最小導數值MIN2也是穿透率導數函數42的全域最小值。最小導數值MIN2出現的時間點為t_MIN2(t_MIN2=12)。

最後，根據最小導數值來決定凝血酶原時間(如第4A圖的步驟S45所示)。在本實施例中，是以血液樣本101被注入容器104的時間點作為基準時間點t_b4(t_b4=1)，計算最小導數值MIN2出現的時間點起算到基準時間點t_b4之間的時間長度△t₄。意即，將凝血酶原時間為最小導數值MIN2出現的時間點t_MIN2減掉基準時間點t_b4(△t₄=t_MIN2-t_b4)即得到凝血酶原時間，時間長度△t₄約為11秒鐘。

在本說明書的其他實施例中，凝血酶原時間測定方法也可以藉由量測一段時間中(自樣品上樣至凝血反應結束)光線503被血液樣本101反射的反射率與時間的關係曲線(以下簡稱反射率函數)來進行計算。請參照第5A圖至第5B圖，第5A圖係繪 示一種用來實施反射式凝血酶原時間測定方法之光學檢測裝置500的示意圖。第5B圖係繪示採用反射式光學檢測裝置量測所得的反射率函數51。

根據本說明書的一些實施例，如第5A圖所繪示，用以實施反射式光學檢測之光學檢測裝置500包括：血液樣本101、光源502、容器104、光感測器505、控制器506和反射片507，其中光源502及光感測器505分別位於裝載血液樣本101之容器104的同一側。光感測器505係用以接收被血液樣本101或反射片507反射之後的一部份光線503，以量測光線503被血液樣本101反射後所產生的反射率，並得到如第5B圖所示之反射率函數51。

在本說明書的一些實施例中，血液樣本101可以是一種直接自活體中採集後，未經過(離心)分離或濃縮處理，而包含有各種血球及血漿等基本成分的全血樣本；也可以是一種經過(離心)分離或濃縮處理之後的血漿樣本，例如：缺血小板血漿。容器104係用來承載血液樣本101，可以例如是：試管、毛細管、溝槽、試片流道或待測區。在反射式檢測的實施例中，容器104可為透光或部分透光的。舉例而言，在第5B圖所繪示的實施例之中，首先在起始時間點t_s(例如t_s=0)開啟光源502及感測器505，隨即在時間點t₀(t₀=1)將血液樣本101注入容器104中，並且連續量測光線503的反射率。藉由感測器505的光電轉換裝置以及控制器506的運算得出光反射率與時間(t)的關係曲線(如第 5B圖所繪示的反射率函數51)。由於在時間點t_s至時間點t₀之間，血液樣本101尚未進入量測區，大部分的光線503會被血液樣本101及反射片507所反射，故可將所量測到的數值視為反射率100%，並用此量測數值來作為後續反射率正規化的標準。

血液樣本101在時間點t_s開始注入量測區之後，因為流動中血液樣本101的吸光及漫射，而使反射的光線503減少，並隨血液樣本停止流動使反射率反轉。因此，反射率由時間點t₀的100%，迅速降低至一區域最低位置後反轉上升至時間點t_r1。之後，血液樣本101中的紅血球會形成錢串狀的堆疊，使反射率會由區域最高位置(時間點t_r1)反轉下降至時間點t_r2的區域最低點。接著，血液樣本101中形成凝血酶和纖維蛋白而再次反射光線103，使光反射率數值再度反轉上升。待凝血酶和纖維蛋白的在結構趨於穩定之後，反射率最終趨於穩定。

凝血酶原時間的計算方式，是計算將血液樣本101注入量測區的時間點t₀起算，至光反射率數值由區域最高點(時間點t_r1)反轉下降產生導數極值(時間點t_r2)所經過的時間區段。

以下舉出多個實施例說明如何藉由反射率函數來推算凝血酶原時間。請參照第6A圖和第6B圖，第6A圖係根據本發明的一實施例所繪示的一種凝血酶原時間測定方法60的流程方塊圖。第6B圖係根據本說明書的一實施例繪示採用第5A圖之光學檢測裝置500以及第6A圖之方法60量測所得的反射率函數61與反射率導數函數62。凝血酶原時間測定方法60包括下述步 驟：首先，提供血液樣本和光源(如第6A圖所示的步驟S61)。接著，使用感測器505量測被血液樣本101反射後所產生的反射率，並得到如第6B圖所示之反射率函數61(如第6A圖所示的步驟S62)。最後，根據反射率函數來決定凝血酶原時間。

決定凝血酶原時間的方法包括下述步驟：首先決定反射率函數61中的最小反射值MINr1(如第6A圖的步驟S63所示)。在本實施例中，反射率函數61中的最小反射值MINr1是指在血液樣本101注入量測區之時間點之後的一個區域最小光反射率值。詳言之，因為血液樣本101流動時散亂排列的紅血球會阻擋與散射光線503，使光線503的反射率持續降低至少1%或2%。於本實施例中，反射率會持續降低至約97%後隨血液樣本靜止而反轉上升。之後，血液樣本101中的紅血球會形成錢串狀的堆疊，故而光線503的反射率會由區域最高位置再反轉下降。

在本實施例中，反射率函數61中的最小反射值MINr1是指，光反射率數值從血液樣本101被注入容器104的時間點t_b6(t_b6=1)的100%降低至97%，再由最低點97%反轉升高的這段期間內，在反射率函數61中所形成之至少一個波谷的最小光反射率數值。

其中，控制器506可待檢測完成後再進行驗證求取全域最小反射率值或區域最小反射率值。或者，控制器506可藉由持續性或即時性的驗證，來決定目前量測所得的光反射值是否為區域最小反射率值(最小反射值MINr1)。若驗證結果為「非」， 則繼續驗證程序；若驗證結果為「是」，則進入下一個步驟(如第6A圖所示的步驟S64)。在本實施例中，最小反射值MINr1的反射率值實質為97%，其出現在從血液樣本101被注入容器104的時間點t_b6之後約1秒的時間點t_MINr1(即t_MINr1=2)。

接著請參照第6A圖所示的步驟S64，決定反射率函數61中的最大反射值MAXr1。其中，反射率函數61中的最大反射值MAXr1是反射率函數61的一區域最大反射率值。此處所謂的區域最大反射值是指，反射率函數61從最小反射值MINr1反轉上升之後所量測得到的最大光反射率數值。

詳言之，當血液樣本101形成錢串狀堆疊後因紅血球反射面積下降，使光線503的反射降到最低。接著，血液樣本101中形成凝血酶和纖維蛋白而反射光線503，使光反射率數值再度反轉上升。例如在本說明書的一些實施例中，最大反射值MAXr1是指光反射率數值從最小反射值MINr1的波谷反轉上升至最高點後再次反轉下降，在反射率函數61中所形成之至少一個波峰的最大光反射率數值。

控制器506可藉由週期性的驗證，來決定目前量測所得的光反射率值是否為區域最大反射值(最大反射值MAXr1)。若驗證結果為「非」，則繼續驗證程序；若驗證結果為「是」，則進入下一個步驟(如第6A圖所示的步驟S65)。在本實施例中，最大反射值MAXr1實質為97.5%，其出現在時間點t_MAXr1(t_MAXr1=5)。

請參照第6A圖所示的步驟S65，決定反射率函數 61中的最大導數值MAXr2。在本說明書的一些實施例中，控制器506可依據反射率函數61進行運算得出反射率導數函數62(如第6B圖所繪示)，並找出反射率導數函數62中，出現在最大反射值MAXr1之後的最大導數值MAXr2。在本實施例中，最大導數值MAXr2出現在時間點t_MAXr2(t_MAXr2=11)。其中，最大導數值MAXr2的出現，代表血液樣本101因錢串狀堆疊，導致反射率函數61中的光反射率值反轉下降。例如反射率值下降至約為96.75%的另一個區域最小值MINr2。後續，由於凝血酶和纖維蛋白再度反射部分光線503，進而使反射率由區域最低值MINr2再次上升最終趨於穩定。

後續請參照第6A圖所示的步驟S66，根據最大導數值MAXr2來決定凝血酶原時間。在本說明書的一些實施例中，凝血酶原時間的計算方式，是以血液樣本101注入容器104中的時間點作為計算凝血酶原時間的基準時間點t_b6(即t_b6=1)。起算至最大導數值MAXr2出現的時間點t_MAXr2(即t_MAXr2=11)的時間長度△t₆。意即，將凝血酶原時間為最大導數值MAXr2出現的時間點t_MAXr2減掉基準時間點t_b6(△t₆=t_MAXr2-t_b6)即得到凝血酶原時間，時間長度△t₆約為10秒鐘。

請參照第5A、7A圖和7B圖，第7A圖係根據本發明的另一實施例所繪示的一種凝血酶原時間測定方法70的流程方塊圖。第7B圖係根據本說明書的一實施例繪示採用第5A圖之光學檢測裝置500以及第7A圖之方法70量測所得的反射率函數 71與反射率導數函數72。凝血酶原時間測定方法70包括下述步驟：首先，提供血液樣本和光源(如第7A圖所示的步驟S61)。接著，使用感測器505量測被血液樣本101反射後所產生的反射率，並得到如第7B圖所示之反射率函數71(如第7A圖所示的步驟S72)。最後，根據反射率函數來決定凝血酶原時間。

決定凝血酶原時間的方法包括下述步驟：首先決定反射率函數71中的最小反射值MINr1(如第7A圖的步驟S73所示)。在本實施例中，反射率函數71中的最小反射值MINr1是指在血液樣本101注入量測區之時間點之後的一個區域最小光反射率值。詳言之，因為血液樣本101流入待測區後阻擋與散射光線503，使光線503的反射率持續降低至少20%或30%。於本實施例中，反射率會持續降低至約70%後隨血液樣本靜止而反轉上升。

在本實施例中，反射率函數71中的最小反射值MINr1是指，光反射率數值從血液樣本101被注入容器104的時間點t_b7(t_b7=1)的100%降低至70%，再由最低點70%反轉升高的這段期間內，在反射率函數71中所形成之至少一個波谷的最小光反射率數值。

其中，控制器506可待檢測完成後再進行驗證求取全域最小反射率值或區域最小反射率值。或者，控制器506可藉由持續性或即時性的驗證，來決定目前量測所得的光反射值是否為區域最小反射率值(最小反射值MINr1)。若驗證結果為「非」，則繼續驗證程序；若驗證結果為「是」，則進入下一個步驟(如第 7A圖所示的步驟S74)。在本實施例中，最小反射值MINr1的反射率值實質為70%，其出現的時間點為t_MINr1(即t_MINr1=2)。

接著請參照第7A圖所示的步驟S74，決定反射率函數71中的最小導數值MINr2。在本說明書的一些實施例中，控制器506可依據反射率函數71進行運算得出反射率導數函數72(如第7B圖所繪示)，並找出反射率導數函數72中的最小導數值MINr2。在本實施例中，最小導數值MINr2出現的時間點為t_MINr2(t_MINr2=25)。其中，最小導數值MINr2的出現，代表血液樣本101形成凝血酶和纖維蛋白影響血球反射光線503，使反射率由區域最大值再反轉下降，最終趨於穩定。

後續請參照第7A圖所示的步驟S75，根據最小導數值MINr2來決定凝血酶原時間。在本說明書的一些實施例中，凝血酶原時間的計算方式，是以血液樣本101注入容器104中的時間點作為計算凝血酶原時間的基準時間點t_b7(t_b7=1)。起算至最小導數值MINr2出現的時間點t_MINr2(即t_MINr2=25)的時間長度△t₇。意即，凝血酶原時間為最小導數值MINr2出現的時間點t_MINr2減掉基準時間點t_b7(△t₇=t_MINr2-t_b7)，時間長度△t₇約為24秒鐘。

根據上述實施例，本說明書提供一種凝血酶原時間的測定方法，其係透過光學法量測血液在凝血反應時產生之光學參數變化，再進一步分析數據判定凝血酶原時間。詳細而言，本說明書提供一種凝血酶原時間的測定方法，其係透過光學法量測血液在凝血反應中產生之穿透率或反射率函數，再進一步找出函 數中之導數極值以判定凝血酶原時間。

在一實施例中，本說明書提供之凝血酶原時間的測定方法，係藉由光學感測裝置，先量測自樣品上樣至凝血反應結束期間光線穿過待測區域及/或血液樣本產生之穿透率函數。直到血液樣本反應結束呈現穩定狀態之後，再根據穿透率函數求得最小導數值來決定凝血酶原時間。

在另一實施例中，本說明書提供之凝血酶原時間的測定方法，係藉由光學感測裝置，先量測自樣品上樣至凝血反應結束期間光線經待測區域及/或血液樣本產生之反射率函數。直到血液樣本反應結束呈現穩定狀態之後，再根據反射率函數求得最大導數值來決定凝血酶原時間。

由於，本說明書的實施例所提供的方法僅需要少量的血液樣本，且不需要對血液樣本進行分離處理，即可藉由光學檢測及數據分析來決定凝血酶原時間。因此，具有操作簡便、耗費時間較短、耗材成本較低等優勢，可達到快速檢測、方便操作及準確性高的發明目的。

雖然本說明書已以較佳實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明。本發明所屬技術領域中具有通常知識者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾。因此，本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

Claims (22)

1. 一種凝血酶原時間(Prothrombin Time，PT)的測定方法，包括：提供一血液樣本；提供一光源；獲取該光源對應於該血液樣本的一光學特徵函數；決定該光學特徵函數中的一最小值及一最大值，其中該最大值係出現在該最小值之後；決定該光學特徵函數中的一導數極值，其中該導數極值係出現在該最大值之後；以及根據該導數極值決定一凝血酶原時間。
2. 如申請專利範圍1所述之凝血酶原時間的測定方法，其中該光學特徵函數係一穿透率函數或一反射率函數。
3. 如申請專利範圍1所述之凝血酶原時間的測定方法，其中該血液樣本為一全血樣本。
4. 如申請專利範圍1所述之凝血酶原時間的測定方法，其中該最小值是一區域最小值，且該最大值是一區域最大值。
5. 如申請專利範圍1所述之凝血酶原時間的測定方法，其中決定該凝血酶原時間步驟包括： 決定一基準時間點；以及計算該基準時間點至該導數極值所需時間為該凝血酶原時間。
6. 如申請專利範圍5所述之凝血酶原時間的測定方法，其中該光學特徵函數係一穿透率函數，該基準時間點為該穿透率函數中的一穿透率數值首次低於一門檻值的一時間點。
7. 如申請專利範圍1所述之凝血酶原時間的測定方法，更包括剔除該光學特徵函數中至少一偏離峰值，其中該偏離峰值實質出現在該最小值之後及該最大值之前，且該至少一偏離峰值實質大於該最小值及小於該最大值。
8. 如申請專利範圍1所述之凝血酶原時間的測定方法，其中獲取該光學特徵函數之步驟包括：以一時序控制方式切換該光源的開關狀態，以產生複數個亮態及複數個暗態；量測對應該些亮態的複數個亮態光穿透率或亮態光反射率及對應該些暗態的複數個暗態光穿透率或暗態光反射率；以及根據該些亮態光穿透率或該些亮態光反射率和該些暗態光穿透率或該些暗態光反射率計算該光學特徵函數。
9. 如申請專利範圍8所述之凝血酶原時間的測定方法，其中計算該光學特 徵函數之步驟包括，將該些亮態穿光透率或該些亮態光反射率與該些暗態光穿透率或該些暗態光反射率相減或相除。
10. 一種凝血酶原時間的測定方法，包括：提供一血液樣本；提供一光源；獲取該光源相對於該血液樣本的一光學特徵函數；決定該光學特徵函數中的一最大值，其中該最大值係出現在一延遲時間之後；決定該光學特徵函數中的一導數極值，其中該導數極值係出現在該最大值之後；以及根據該導數極值決定一凝血酶原時間。
11. 如申請專利範圍10所述之凝血酶原時間的測定方法，其中該血液樣本為一全血樣本。
12. 如申請專利範圍10所述之凝血酶原時間的測定方法，其中該光學特徵函數係一穿透率函數或一反射率函數。
13. 如申請專利範圍10所述之凝血酶原時間的測定方法，其中該光學特徵函數係一穿透率函數，該延遲時間係以該穿透率函數之一光穿透率數數值首次低於一門檻值為一基準時間點。
14. 如申請專利範圍13所述之凝血酶原時間的測定方法，其中該延遲時間實質小於6秒；且該門檻值實質為一起始光穿透率數值之80%。
15. 如申請專利範圍10所述之凝血酶原時間的測定方法，其中該最大值是一區域最大值。
16. 如申請專利範圍10所述之凝血酶原時間的測定方法，其中獲取該光學特徵函數之步驟包括：以一時序控制方式切換該光源的開關狀態，以產生複數個亮態及複數個暗態；量測對應該些亮態的複數個亮態光穿透率或複數個亮態光反射率及對應該些暗態的複數個暗態光穿透率或複數個暗態光反射率；以及根據該些亮態光穿透率或該些亮態光反射率及該些暗態光穿透率或該些暗態光反射率計算該光學特徵函數。
17. 一種凝血酶原時間的測定方法，包括：提供一血液樣本；提供一光源；獲取該光源對應該血液樣本的一光學特徵函數；決定該光學特徵函數中的一第一導數極值，其中該第一導數極值係出現在一延遲時間之後； 決定該光學特徵函數中的一第二導數極值，其中該第二導數極值係出現在該第一導數極值之後，該第一導數極值及該第二導數極值之一者為正數另一者為負數；以及根據該第二導數極值決定一凝血酶原時間。
18. 如申請專利範圍17所述之凝血酶原時間的測定方法，其中該血液樣本為一全血樣本。
19. 如申請專利範圍17所述之凝血酶原時間的測定方法，其中該光學特徵函數係一穿透率函數或一反射率函數。
20. 如申請專利範圍17所述之凝血酶原時間的測定方法，其中該光學特徵函數具有一最大值以及一穿透值；其中，該最大導數值係出現在該最小值和該最大值之後。
21. 如申請專利範圍17所述之凝血酶原時間的測定方法，其中該延遲時間實質小於6秒。
22. 如申請專利範圍17所述之凝血酶原時間的測定方法，其中獲取該光學特徵函數之步驟包括：以一時序控制方式切換該光源的開關狀態，以產生複數個亮態及複數個暗態； 量測對應該些亮態的複數個亮態光穿透率或複數個亮態光反射率及對應該些暗態的複數個暗態光穿透率或複數個暗態光反射率；以及根據該些亮態光穿透率或該些亮態光反射率及該些暗態光穿透率或該些暗態光反射率計算該光學特徵函數。