TWI612972B - 抑制骨再吸收的方法 - Google Patents

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Abstract

本發明係有關一種抑制骨再吸收之方法。該方法包含向人類投與使骨再吸收標記之含量減少之量的骨硬化素(sclerostin)抑制劑達至少2週。本發明亦提供一種監測抗骨硬化素療法之方法，該方法包含量測一或多種骨再吸收標記之含量，投與骨硬化素結合劑，隨後量測該等骨再吸收標記之含量。亦提供一種增加骨礦物質密度之方法；一種改善蝕骨細胞相關病症之影響之方法；一種藉由維持骨密度治療骨相關病症之方法；及一種治療患有低鈣血症或高鈣血症或處於患低鈣血症或高鈣血症風險中之人類、忌用副甲狀腺素或其類似物治療之人類或忌用雙膦酸鹽治療之人類的骨相關病症之方法。

Description

抑制骨再吸收的方法
本發明大體而言係關於使用骨硬化素結合劑調節骨密度之方法。
本申請案主張2008年9月17日申請之美國臨時專利申請案第60/973,024號之優先權。
以下申請案全文係以引用之方式併入本文中：2006年4月25日申請之美國專利申請案第11/410,540號，其主張以下申請案之優先權：2006年4月17日申請之美國臨時專利申請案第60/792,645號、2006年3月13日申請之美國臨時專利申請案第60/782,244號、2006年2月24日申請之美國臨時專利申請案第60/776,847號及2005年5月3日申請之美國臨時專利申請案第60/677,583號；及2006年4月25日申請之美國專利申請案第11/411,003號，其主張以下申請案之優先權：2006年4月17日申請之美國臨時專利申請案第60/792,645號、2006年3月13日申請之美國臨時專利申請案第60/782,244號及2006年2月24日申請之美國臨時專利申請案第60/776,847號。
骨礦物質含量之損失可由多種病狀所引起且可能導致嚴重的醫學問題。舉例而言，骨質疏鬆症為人類之衰弱性疾病且其特徵在於患病個體之骨骼骨量及礦物質密度顯著減小、骨結構損壞(包括骨微結構退化及骨脆性相應增加(亦即，骨強度減小))及易骨折。人類之骨質 疏鬆症之前通常出現臨床骨質減少，即一種可見於美國約2500萬人之病狀。在美國亦已診斷出有700-800萬患者患有臨床骨質疏鬆症。人群中骨質疏鬆症之頻率隨年齡而增加。對於白種人，骨質疏鬆症在女性中佔優勢，在美國女性佔骨質疏鬆症患者群之80%。老年人骨骼骨之脆性增加及易於骨折因該群體偶然摔倒之風險較高而加劇。髖部、腕及椎骨骨折為與骨質疏鬆症相關的最常見損傷。對患者而言，髖部骨折尤其不舒服且治療費用高，且對於女性，此與高死亡率及發病率相關。
本發明係針對使用骨硬化素抑制劑抑制人類骨再吸收之方法。該方法包含向人類投與有效減少骨再吸收標記之含量且視情況增加骨形成標記之含量之量的骨硬化素抑制劑。在一些實施例中，抑制骨再吸收且增加骨形成達至少約7天、2週、3週、4週、1個月、5週、6週、7週、8週、2個月、3個月或更久。在相關實施例中，本發明提供一種增加骨礦物質密度或治療骨相關病症之方法。本發明進一步提供一種改善蝕骨細胞相關病症之影響之方法。該方法包含向人類投與使骨再吸收標記之含量與未治療之骨標記含量相比減少的骨硬化素抑制劑。此外，骨硬化素抑制劑使骨形成標記之含量與未治療之骨標記含量相比增加至少約10%。骨硬化素抑制劑可經由單次劑量或多次劑量投與。舉例而言，骨硬化素抑制劑可以短期療法方案投與以(例如)增加骨形成，及/或可以維持治療方案長期投與以阻止骨礦物質密度損失。
在本文中所揭示之任何方法中，一或多種骨再吸收標記之含量與該患者群體之治療前含量或正常含量相比減少至少約5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%或以上，歷時至少2週、3週、30天、1個月、6週、2個月或更久。作為非限制性實例，治療後3週骨再吸收 標記之含量與該患者群體之治療前含量或正常含量相比減少(例如)至少約20%。在任何前述方法中，骨形成標記之含量與該患者群體之治療前含量或正常含量相比增加至少約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約100%或更多，歷時至少約2週、3週、30天、1個月、6週、2個月或更久。作為非限制性實例，治療後3週骨形成標記之含量與該患者群體之治療前含量或正常含量相比增加(例如)至少約20%。在一例示性實施例中，骨再吸收之標記為I型膠原之C端肽(CTX)之血清含量。在其他例示性實施例中，骨形成標記為骨特異性鹼性磷酸酶(BSAP)、骨鈣素(OstCa)及/或1型原膠原之N末端延長(P1NP)。
本發明亦提供一種治療骨相關病症之方法，其中該方法包含向人類投與一或多次有效使整個身體(例如，頭、軀幹、臂及腿)或髖部(例如，整個髖部及/或股骨頸骨)、脊骨(例如，脊椎)、腕、手指、脛骨及/或足跟的骨礦物質密度增加約1%、約2%、約3%、約4%、約5%、約6%、約8%、約10%、約12%、約15%、約18%、約20%、約25%或30%或以上之量的骨硬化素抑制劑。在一些實施例中，治療之前人類之骨礦物質密度表現為骨質疏鬆或骨質減少，且以有效改進骨礦物質密度以使骨礦物質密度不再表現為骨質疏鬆及/或骨質減少之量及時間投與一或多劑骨硬化素抑制劑。舉例而言，對於年輕人，在最初之時間段可投與一或多劑以使骨礦物質密度增加至正常密度之2.5或1個標準偏差以內(亦即，如以下所定義，T分數
Figure TWI612972BD00001
-2.5或T分數
Figure TWI612972BD00002
-1)的劑量。在例示性實施例中，最始之時間段為約3個月或更短、6個月或更短、9個月或更短、1年或更短、18個月或更短，或更長時間。該方法可進一步包含接著投與一或多種有效維持骨礦物質密度之量之骨硬化素抑制劑視情況歷時至少約6個月、1年、2年或更久(例如，個體之一生)之維持時間。
本發明進一步提供藉由投與一或多次劑量來治療人類之骨相關病症之方法，該一或多次劑量介於約0.1至約20mg/kg、或約0.1至約12mg/kg、或約0.5至約12mg/kg、或約1至約10mg/kg、或約1至約8mg/kg、或約2至約8mg/kg、或約3至約8mg/kg之間。在一些實施例中，可以約每2週或更久1次、每月或更久一次、或每2個月或更久一次、或每3個月或更久一次、或每4個月或更久一次、或每5個月或更久一次、或每6個月或更久一次、或每9個月或更久一次、或每年或更久一次之間隔投與該等劑量。骨硬化素抑制劑可用於製備使用本文中所述之任何給藥及計時方案投與之藥物。視情況，骨硬化素抑制劑係諸如以含有供投與之一定劑量之骨硬化素抑制劑(例如，約70mg至約450mg骨硬化素抑制劑)的單次劑量或多次劑量小瓶形式存在於容器中。在一例示性實施例中，小瓶可含有約70mg或75mg骨硬化素抑制劑(例如抗骨硬化素抗體)且將適於投與約1mg/kg之單次劑量。在其他實施例中，小瓶可含有約140mg或150mg；或約210mg或220mg或250mg；或約280mg或290mg或300mg；或約350mg或360mg；或約420mg或430mg或440mg或450mg骨硬化素抑制劑(例如抗骨硬化素抗體)。
另外，本發明提供一種治療患有低鈣血症或高鈣血症或處於患低鈣血症或高鈣血症風險中之人類、忌用副甲狀腺素或其類似物治療之人類或忌用雙膦酸鹽治療之人類之骨相關病症的方法。該方法包含向人類投與有效增加骨形成標記之含量及/或減少骨再吸收標記之含量而不導致低鈣血症或高鈣血症(例如臨床上明顯的低鈣血症或高鈣血症)之量的骨硬化素抑制劑。
本發明亦提供一種監測抗骨硬化素療法(亦即，對骨硬化素抑制劑之生理反應)之方法。該方法包含投與一或多劑骨硬化素抑制劑及偵測一或多種骨再吸收標記之含量的步驟，其中骨再吸收標記之含量 與該患者群體之治療前含量或正常含量相比減少至少約5%、約10%、約15%、約20%、約30%、約40%、約50%或更多表明治療有效。該方法視情況進一步包含偵測一或多種骨形成標記之含量的步驟，其中骨形成標記之含量與該患者群體之治療前含量或正常含量相比增加至少約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%表明治療有效。在某些實施例中，骨形成標記含量之增加為約20%。該方法可進一步包含將骨硬化素抑制劑之劑量調節為不同量之步驟，例如若骨再吸收及/或骨形成之變化小於想要的，則調節為較高量，或若骨再吸收及/或骨形成之變化大於想要的，則調節為較小量。
在一不同態樣中，本發明提供使骨再吸收標記之含量減少至少約5%、約10%、約15%、約20%、約30%、約40%、約50%或更多且使骨形成標記之含量增加至少約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約100%或更多達至少約1週、約2週、約1個月、約6週、約2個月、約10週或約3個月的選定骨硬化素抑制劑。在一相關態樣中，本發明提供一種選擇該等骨硬化素抑制劑之方法，該方法係藉由向動物投與候選骨硬化素抑制劑及選擇改變骨再吸收及/或骨形成標記之含量達想要之程度的候選骨硬化素抑制劑。
在本發明之任何前述方法或實施例中，骨硬化素抑制劑可為骨硬化素結合劑。尤其涵蓋美國專利公開案第20070110747號中所揭示之骨硬化素結合劑在(例如)本文中所揭示之任何方法中或供製備根據本文中所揭示之任何方法投與之藥物的用途。就此而論，本發明包括骨硬化素結合劑於製備以約1mg/kg至約10mg/kg之量抑制骨再吸收之藥物的用途，其中該量到治療開始後3週時即有效使I型膠原C端肽(CTX)之血清含量與治療前或正常含量相比減少至少20%。本發明亦 包括骨硬化素結合劑於製備以約1mg/kg至約10mg/kg之量增加骨礦物質密度之藥物的用途，其中該量有效(a)使治療開始後3週時CTX之血清含量與治療前或正常含量相比減少至少20%及(b)使治療開始後3週時選自由骨特異性鹼性磷酸酶(BSAP)血清含量、1型原膠原之胺基末端延長肽(PINP)之血清含量及骨鈣素(OstCa)之血清含量組成之群的骨形成標記之血清含量與治療前或正常含量相比增加至少20%。
本發明進一步包括骨硬化素結合劑於製備治療骨相關病症之藥物的用途，其中將該藥物以約1mg/kg至約10mg/kg之量治療第一段時間，其中該量有效使髖部、脊骨、腕、手指、脛骨及/或足跟之骨礦物質密度增加至少約3%，接著以約1mg/kg至約10mg/kg之量治療第二段時間以有效維持骨礦物質密度。亦涵蓋骨硬化素結合劑於製備以約1mg/kg至約10mg/kg之量治療患有低鈣血症或高鈣血症或處於患低鈣血症或高鈣血症之風險中的人類之骨相關病症之藥物的用途，以及骨硬化素結合劑於製備治療(a)忌用副甲狀腺素或其類似物治療之人類或(b)忌用雙膦酸鹽治療之人類的骨相關病症之藥物的用途。
本發明亦包括容器，其包含抗骨硬化素抗體或其片段。在一實施例中，該容器包含抗骨硬化素抗體或其片段，及有關以有效(a)使治療開始後3週時I型膠原C端肽(CTX)之血清含量與治療前或正常含量相比減少至少20%及(b)使治療開始後3週時骨特異性鹼性磷酸酶(BSAP)之血清含量、1型原膠原之胺基末端延長肽(PINP)之血清含量或骨鈣素(OstCa)之血清含量與治療前或正常含量相比增加至少20%之量投與該抗體或其片段的說明書。其他或另外，容器包含約70mg至約450mg之量的抗骨硬化素抗體。本發明進一步提供一種容器，其包含抗骨硬化素抗體或其片段及有關每兩週或每四週以約1mg/kg至約10mg/kg之量投與該抗體或其片段來治療骨相關病症之說明書。另外，本發明提供一種容器，其包含抗骨硬化素抗體或其片段及有關歷 時約3個月之時間以約1mg/kg至約10mg/kg之量投與該抗體或其片段來治療骨相關病症之說明書。
圖1為投與各種單次劑量之骨硬化素結合劑後健康絕經後女性的1型原膠原N-末端延長(P1NP)含量與基線及安慰劑P1NP含量相比之變化百分率與時間(天)之關係的曲線圖。
圖2為投與各種單次劑量之骨硬化素結合劑後健康絕經後女性的骨特異性鹼性磷酸酶(BSAP)含量與基線及安慰劑BSAP含量相比之變化百分率與時間(天)之關係的曲線圖。
圖3為投與各種單次劑量之骨硬化素結合劑後健康絕經後女性的骨鈣素含量與基線及安慰劑骨鈣素含量相比之變化百分率與時間(天)之關係的曲線圖。
圖4為投與各種單次劑量之骨硬化素結合劑後健康絕經後女性的1型膠原血清C末端端肽(CTX)含量與基線及安慰劑血清CTX含量相比之變化百分率與時間(天)之關係的曲線圖。
圖5為投與5mg/kg或10mg/kg之單次劑量的骨硬化素結合劑後健康絕經後女性的骨鈣素、BSAP、P1NP及CTX含量與基線及安慰劑含量相比之變化百分率與時間(天)之關係的曲線圖。
圖6為投與各種單次劑量之骨硬化素結合劑後健康絕經後女性的血清鈣含量與基線及安慰劑血清鈣含量相比之變化百分率與時間(天)之關係的曲線圖。
圖7為投與各種單次劑量之骨硬化素結合劑後健康絕經後女性的骨礦物質密度與基線及安慰劑相比之變化百分率與時間(天)之關係的曲線圖。
本發明至少部分係基於阻斷或抑制人類骨硬化素之生物活性會 引發多種與骨礦物質密度(BMD)增加相關聯之生理學反應(包括顯著抑制骨再吸收)之令人驚訝的發現。大多數現用療法僅抑制骨再吸收而不增加骨形成。針對與BMD降低相關之病症的一些現用療法僅增加骨形成而不顯著減少骨再吸收。舉例而言，當由一些當前藥物引發骨形成時，骨再吸收亦可能增加(即使潛在地以比先前療法低之速率)。相比之下，干擾骨硬化素活性之藥劑增強骨形成且減少骨再吸收。換言之，骨硬化素抑制劑"解除"骨形成與骨再吸收之間的聯繫，從而更有效地建骨。本發明之材料及方法優於治療功效受限且伴隨有潛在地嚴重不良副作用之現有療法。
就此而論，本發明提供一種抑制骨再吸收、例如由蝕骨細胞、溶解骨礦物質基質之骨細胞介導之骨再吸收之方法。本發明進一步提供一種改善蝕骨細胞相關病症(亦即，由在一些實施例中表現為異常高之骨再吸收的蝕骨細胞活性之異常增加引起的病症)之影響之方法。本發明方法包含向人類投與減少骨再吸收標記之含量且視情況增加骨形成標記之含量之量的骨硬化素結合劑。
骨硬化素抑制劑(例如骨硬化素結合劑)之活性(下文進一步描述)可以多種方法量測。骨硬化素結合劑介導之骨礦物質含量或骨密度增加可使用單能及雙能X射線吸收測定法、超音波法、電腦斷層攝影、放射線照相術及磁共振成像量測。骨量之量亦可由體重或使用其他方法計算(參見Guinness-Hey,Metab.Bone Dis.Relat.Res.,5：177-181(1984))。在此項技術中使用模擬諸如骨質疏鬆及骨質減少之人類疾病之病狀的動物及特定動物模型測試醫藥組合物及方法對(例如)骨流失、骨再吸收、骨形成、骨強度或骨礦化之參數的影響。該等模型之實例包括切除卵巢大鼠模型(Kalu,Bone and Mineral,15：175-192(1991)；Frost及Jee,Bone and Mineral,18：221-236(1992)；及Jee及Yao,J.Musculoskel.Neuron.Interact.,1：193-207(2001))。本文中所述 之量測骨硬化素結合劑活性之方法亦可用於測定其他骨硬化素抑制劑之功效。
對於人類，可在臨床上使用(例如)髖部及脊骨之雙能x射線吸光測定法(DXA)測定骨礦物質密度。其他技術包括定量電腦斷層攝影(QCT)、超音波掃描術、單能x射線吸光測定法(SXA)及放射線照相吸光測定法。用於量測之常見中央骨骼部位包括脊骨及髖部；周邊部位包括前臂、手指、腕及足跟。除超音波掃描術以外，美國醫藥協會(American Medical Association)提出BMD技術通常包括使用x射線且基於放射衰減視放射路徑中組織之厚度及組成而定的原理。所有技術均包括結果與標準資料庫之比較。
或者，可藉由監測骨標記含量計量對一或多種骨硬化素結合劑之生理反應。骨標記為骨再成型過程期間所產生之產物且由骨、成骨細胞及/或蝕骨細胞釋放。骨再吸收及/或骨形成"標記"含量之波動暗示骨再成型/成型之變化。國際骨質疏鬆基金會(International Osteoporosis Foundation，IOF)推薦使用骨標記來監測骨密度療法(參見，例如Delmas等人，Osteoporos Int.，增刊6：S2-17(2000)，其以引用之方式併入本文中)。指示骨再吸收(或蝕骨細胞活性)之標記包括(例如)C端肽(1型膠原C末端端肽(CTX)或血清交聯C端肽)、N端肽(1型膠原N末端端肽(NTX))、脫氧吡啶啉(deoxypyridinoline，DPD)、吡啶啉、尿羥基脯胺酸、半乳糖羥基離胺酸及抗酒石酸酸性磷酸酶(例如，血清抗酒石酸酸性磷酸酶同功異型物5b)。骨形成/礦化標記包括(但不限於)骨特異性鹼性磷酸酶(BSAP)、I型原膠原N末端及C末端延長(P1NP，PICP)釋放之肽及骨鈣素(OstCa)。可購得數種套組來偵測及量化臨床樣品(諸如尿及血液)中之標記。
當投藥時，骨硬化素結合劑較佳係減少一或多種骨再吸收標記之含量，諸如I型膠原C端肽(CTX)之血清含量。因此，本發明進一步 提供一種監測抗骨硬化素療法(亦即對骨硬化素結合劑或其他骨硬化素抑制劑之生理反應)之方法。該方法包含投與骨硬化素結合劑，隨後量測一或多種骨再吸收標記之含量。另外，該方法可包含在投與骨硬化素結合劑之前先量測一或多種骨形成標記之含量。可將骨硬化素結合劑治療期間及/或之後之骨再吸收標記之含量與治療前含量比較，或者可與該患者群體之典型標準範圍比較。一般熟習此項技術者很容易藉由測試代表性數量之具有相似年齡、性別、疾病程度及/或其他特徵的患者之患者族群體確定合適的標準範圍。單次劑量之骨硬化素結合劑可使骨再吸收標記之含量減少至少約5%(例如，約10%、約20%或約30%)。在一些實施例中，骨硬化素結合劑之劑量使骨再吸收標記之含量比投與骨硬化素結合劑之前骨再吸收標記之含量減少至少約40%(例如約50%、約60%或約70%)。另外，在投與單次劑量之骨硬化素結合劑後，骨再吸收標記之含量可減少達至少約3天(例如，約7天、約2週、約3週、約1個月、約5週、約6週、約7週、約2個月、約9週、約10週、約11週或約3個月)
除減少骨再吸收標記之含量外，向患者投與之骨硬化素結合劑之量亦可增加一或多種骨形成標記之含量，諸如BSAP血清含量、P1NP血清含量及/或OstCa血清含量。骨硬化素結合劑之單次劑量可使骨形成標記之含量增加例如至少約5%(例如，約10%、約20%或約30%)。在一些實施例中，骨硬化素結合劑之劑量使骨形成標記之含量升高至少約40%(例如，約50%、約60%或約70%)。在其他實施例中，骨硬化素結合劑之劑量使一或多種骨形成標記之含量增加至少約75%(例如約80%、約90%、約100%或約110%)。在其他實施例中，骨硬化素結合劑之劑量使骨形成標記之含量增加至少約120%(例如約130%、約140%、約150%、約160%或約170%)。在替代性實施例中，骨硬化素結合劑使骨形成標記之含量增加至少約180%(例如約190%或 約200%)。在投與單次劑量之骨硬化素結合劑後，骨形成標記之含量理想地保持升高(與治療前骨形成標記之含量或該患者群體之典型標準範圍相比)達至少約3天(例如，約7天、約2週、約3週、約1個月、約5週、約6週、約7週、約2個月、約9週、約10週、約11週或約3個月)。
本發明亦提供一種增加骨礦物質密度(BMD)之方法，其中向人類投與(a)減少骨再吸收標記之含量及(b)增加骨形成標記之含量之量的骨硬化素結合劑。BMD通常與骨骼脆性及骨質疏鬆相關。BMD通常可以"全身"(例如，頭、軀幹、臂及腿)或髖部(例如，整個髖部及/或股骨頸骨)、脊骨(例如，脊椎)、腕、手指、脛骨及/或足跟量測。在骨質疏鬆之診斷中，將患者之BMD與30歲健康成人(亦即，"年輕人")之峰值密度相比較，產生所謂的"T分數"。亦可將患者之BMD與"年齡匹配"之骨密度相比較(參見，例如World Health Organization Scientific Group on the Prevention and Management of Osteoporosis,"Prevention and management of osteoporosis：report of a WHO scientific group."WHO Technical Report Series；921,Geneva,Switzerland(2000))。患者之BMD與健康年輕人之BMD之間的差異通常以"標準偏差"之倍數表示，"標準偏差"通常相當於骨密度之約10%至約12%之減少。世界衛生組織(World Health Organization)基於BMD T分數提出四個診斷級別。在年輕人參考平均值之1個標準偏差內的BMD值(T分數
Figure TWI612972BD00003
-1)為"正常"。低骨量(骨質減少)係由比年輕人平均值低超過1個標準偏差但小於2個標準偏差(T分數<-1且>-2.5)之BMD值指示。比正常值低超過2.5個標準偏差之T分數支持骨質疏鬆症之診斷。若患者另外患有一或多種脆性骨折，則認為該患者患有重度骨質疏鬆症。
不考慮患者之T分數，可向患者投與骨硬化素抑制劑(例如骨硬化素結合劑)以改進骨礦物質密度。骨硬化素結合劑可以有效使患者之 BMD增加至少約1%(約2%、約3%、約4%、約5%或約6%)之劑量及時間投與。在一些實施例中，BMD增加至少約8%(例如，至少約10%、約12%、約15%或約18%)。在其他實施例中，骨硬化素結合劑使髖部、脊骨、腕、手指、脛骨及/或足跟之BMD增加至少約20%(例如，至少約22%、約25%或約28%)。在其他實施例中，BMD增加至少約30%(例如，至少約32%、約35%、約38%或約40%)。換言之，BMD可增加至健康年輕人之正常BMD以下約1個至約2.5個標準偏差之範圍內(較佳在約0至約1個標準偏差之範圍內)。
骨再成型之變化可導致整個身體礦物質濃度之波動。骨為血流中鈣含量之一個主要調控物。蝕骨細胞介導之骨再吸收將所儲存之鈣釋放至全身循環中，而成骨細胞介導之骨形成將鈣自循環中移出而併入骨組織中。在正常骨再成型過程中，該等過程循環以維持健康強健的骨且將游離鈣含量維持在約8.5mg/dL至約10.5mg/dL(例如約2.2mmol/L至約2.6mmol/L)。骨病症、其他疾病及甚至某些療法可破壞全身鈣含量，產生可怕的後果。高鈣血症與血液中鈣含量高(例如，超過12mg/dL或3mmol/L)相關。極高之鈣含量導致(例如)疲勞、意識模糊、便秘、食慾減退、尿頻、心臟問題及骨痛。低鈣血症為由血液中異常低之鈣含量(例如，小於約9mg/dL或2.2mmol/L)指示之電解質不平衡。小於7.5mg/dL(小於1.87mmol/L)或更小之鈣含量被視為重度低鈣血症且可能伴隨臨床症狀。
低鈣血症之共同症狀包括神經及肌肉痙攣及痛性痙攣、麻木、四肢刺痛、意識模糊及心律不齊。全身鈣之急劇變化可能導致昏迷及死亡。
數種疾病及醫藥療法可改變全身鈣含量。高鈣血症及低鈣血症可由以下疾病引起：例如慢性腎病、腎衰竭、原發性或繼發性副甲狀腺功能亢進、假副甲狀腺功能減退、副甲狀腺功能減退、假副甲狀腺 功能減退、鎂耗盡、酒精中毒、雙膦酸鹽療法、重度高鎂血症、維生素D缺乏、高磷酸鹽血症、急性胰炎、骨饑餓症候群、螯合作用、成骨細胞轉移、膿毒病、手術、化學療法、瘤形成症候群、家族性低尿鈣高鈣血症、肉狀瘤病、肺結核、鈹中毒症、組織漿菌病、念珠菌病(Candidiasis)、球黴菌病(Coccidioidomycosis)、組織細胞增多病X、霍奇金氏或非霍奇金氏淋巴瘤淋巴瘤(Hodgkin's or Non-Hodgkin's lymphoma)、克羅恩氏病(Crohn's disease)、韋格納肉牙腫病(Wegener's granulomatosis)、白血病、肺炎、聚矽氧誘發肉芽瘤、行動不便，或藥物療法，諸如投與噻嗪(thiazide)利尿劑、鋰、雌激素、氟化物、葡萄糖及胰島素。另外，血清鈣波動為許多現有骨相關療法(諸如雙膦酸鹽及副甲狀腺素療法)之副作用。由於鈣不平衡之潛在危急生命的結果，因此易患低鈣血症或高鈣血症之患者可能需要前述某些療法選擇。
已展示骨硬化素抑制劑(例如骨硬化素結合劑)顯著促進骨形成且抑制(或減緩)骨再吸收，而全身性鈣含量波動極小(例如，鈣含量自基線血清鈣含量波動10%或更小)。因此，本發明材料及方法尤其有利於治療易受不穩定鈣含量影響或對不穩定鈣含量敏感之患者。在本發明該態樣之情況下，向人類投與之骨硬化素結合劑之量為不導致低鈣血症或高鈣血症(例如，臨床上顯著的低鈣血症或高鈣血症)之量。另外，本發明提供一種治療患有低鈣血症或高鈣血症或處於患低鈣血症或高鈣血症風險中之人類或者忌用雙膦酸鹽、副甲狀腺素或副甲狀腺素類似物治療之人類之骨相關病症的方法。該方法包含向人類投與有效增加骨形成標記之含量(諸如BSAP、P1NP及/或OstCa之血清含量)及/或減少骨再吸收標記(諸如CTX)之含量之量的骨硬化素結合劑。
本發明方法適用於治療或預防骨相關病症，諸如與異常成骨細胞或蝕骨細胞活性相關之骨相關病症。實際上，可將骨硬化素抑制劑 (例如，骨硬化素結合劑)投與患有選自由以下疾病組成之群的骨相關病症之人類：軟骨發育不全、鎖骨顱骨發育不全、內生性軟骨瘤、纖維結構不良、高雪氏病(Gaucher's Disease)、低磷酸鹽性佝僂病、馬凡氏症候群(Marfan's syndrome)、多發性遺傳性外生骨疣(multiple hereditary exotose)、神經纖維瘤、成骨不全症、骨硬化病、脆弱性骨硬化、硬化病變、假關節、化膿性骨髓炎、牙周病、抗癲癇藥物誘發之骨流失、原發性和繼發性副甲狀腺功能亢進、家族性副甲狀腺功能亢進症候群、體重減輕誘發之骨流失、男性之骨質疏鬆症、絕經後骨流失、骨關節炎、腎性骨營養不良、浸潤性骨病症、口腔骨流失、頜骨壞死、青少年佩吉特氏病(juvenile Paget's disease)、肢骨紋狀肥大、代謝性骨病、肥大細胞增多症、鐮刀型細胞貧血/疾病、器官移植相關骨流失、腎移植相關骨流失、全身性紅斑狼瘡、強直性脊椎炎、癲癇症、青少年關節炎皮疹、地中海貧血、黏多醣病、法布瑞疾病(Fabry Disease)、特納症候群(Turner Syndrome)、唐氏症候群(Down Syndrome)、克林費特症候群(Klinefelter Syndrome)、麻瘋病、佩特茲病(Perthe's Disease)、青少年特發性脊柱側凸、嬰兒發作之多系統發炎性疾病、韋徹斯特症候群(Winchester Syndrome)、曼克斯疾病(Menkes Disease)、威爾遜氏病(Wilson's Disease)、缺血性骨病(諸如股骨頭缺血性壞死(Legg-Calve-Perthes disease)及區域遷移性骨質疏鬆症)、貧血狀態、由類固醇引起之病狀、糖皮質激素誘發之骨流失、肝素誘發之骨流失、骨髓病症、壞血病、營養不良、鈣缺乏症、骨質疏鬆症、骨質減少、酒精中毒、慢性肝病、絕經後狀態、慢性發炎性病狀、類風濕性關節炎、發炎性腸病、潰瘍性結腸炎、發炎性結腸炎、克羅恩氏病、月經過少、閉經、妊娠、糖尿病、甲狀腺功能亢進、甲狀腺病症、副甲狀腺病症、庫欣氏病(Cushing's disease)、肢端肥大症、性腺功能減退、行動不便(immobilization)或失能、反射性交 感神經營養不良症侯群、區域性骨質疏鬆症、骨軟化、與關節置換相關之骨流失、HIV相關骨流失、與生長激素損失相關之骨流失、與囊性纖維化相關之骨流失、化學療法相關骨流失、腫瘤誘發之骨流失、癌症相關骨流失、激素去除之骨流失、多發性骨髓瘤、藥物誘發之骨流失、神經性厭食、疾病相關面骨流失、疾病相關顱骨流失、疾病相關頜骨流失、疾病相關顱骨流失、與老化相關之骨流失、與老化相關之面骨流失、與老化相關之顱骨流失、與老化相關之頜骨流失、與老化相關之顱骨流失及與空間飛行相關之骨流失。
本發明方法不需治癒患有病症的患者或完全防止骨相關病症發作來達成有益生物反應。該方法可預防性使用，意謂完全或部分防止骨相關病症或其症狀。該方法亦可治療性使用以完全或部分改善骨相關病症或其症狀或者完全或部分防止骨相關病症或其症狀進一步進展。實際上，本發明材料及方法尤其適用於增加骨礦物質密度及維持BMD增加一段時間。就此而論，本發明提供一種治療骨相關病症之方法，該方法包含(a)投與一或多次有效使全身(例如，頭、軀幹、臂及腿)或髖部(例如，整個髖部及/或股骨頸骨)、脊骨(例如，脊椎)、腕、手指、脛骨及/或足跟處所量測之BMD增加約1%、約2%、約3%、約6%、約8%、約10%、約12%、約15%、約18%、約20%、約25%或30%或更多之量的骨硬化素結合劑。可在例如約1個月至約12個月(例如，約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月或約11個月)之治療期內進行一或多次包含骨硬化素結合劑之醫藥組合物的投與。該方法進一步包括(b)接著投與一或多次有效維持骨礦物質密度之量之骨硬化素結合劑。"維持骨礦物質密度"意謂在步驟(b)之過程中(例如，約6個月、約9個月、約1年、約18個月、約2年或歷經患者一生之過程)，由步驟(a)引起之BMD增加不會下降超過約1%至約5%。應瞭解，患者可需要增 加骨密度與維持骨密度之交替治療階段。
骨硬化素結合劑較佳係以生理學上可接受之(例如，醫藥)組合物形式向患者投與，該組合物可包括載劑、賦形劑或稀釋劑。應瞭解，本文中所述之骨硬化素結合劑可用於製備使用本文中所揭示之任何劑量及計時方案投與之藥物。醫藥組合物及治療方法揭示於美國專利公開案第20050106683號中，其以引用之方式併入本文中。"生理學上可接受"係指分子實體及組合物當向人類投與時不產生過敏性反應或類似不良反應。另外，向個體投與之組合物可含有一種以上骨硬化素抑制劑(例如，骨硬化素結合劑及合成化學骨硬化素抑制劑)或與一或多種具有不同作用機制之治療劑組合之骨硬化素抑制劑。
在多種治療方案中使用本文中所述之特定組合物之合適給藥及治療方案(包括例如皮下、經口、非經腸、靜脈內、鼻內及肌肉內投藥及調配)的開發為此項技術所熟知且論述於美國專利公開案第20070110747號中。舉例而言，在某些境況下，將希望經皮下、非經腸、靜脈內、肌肉內或甚至腹膜內傳遞包含骨硬化素結合劑之醫藥組合物。該等方法為熟習此項技術者所熟知，其中有一些進一步描述於(例如)美國專利第5,543,158號、第5,641,515號及第5,399,363號中。適於注射使用之說明性醫藥形式包括無菌水溶液或分散液及臨時製備無菌可注射溶液或分散液之無菌散劑(例如，參見美國專利第5,466,468號)。在所有情況下，該形式必須為無菌的且必須為流動的達出現易於注射性之程度。
在一實施例中，對於以水溶液形式非經腸投藥，該溶液必要時應經適當緩衝且首先用足夠生理食鹽水或葡萄糖使液體稀釋劑等張。該等特定水溶液尤其適於靜脈內、肌肉內、皮下及腹膜內投藥。舉例而言，可將一劑溶解於1ml等張NaCl溶液中，且將其添加至1000ml皮下灌注流體中或注射於所建議之輸注部位處(參見，例如 Remington's Pharmaceutical Sciences，第15版，Mack Pub.Co.,Easton,PA，第1035-1038及1570-1580頁)。視所治療之個體之病狀；患者之年齡、身高、體重及總體健康狀況及任何副作用之存在而定，投藥劑量及頻率可發生一定變化。另外，可將包含骨硬化素結合劑之醫藥組合物與提供關於使用該等醫藥組合物之說明書的包裝材料一起置放於容器(例如，小瓶)中。該等說明書通常將包括描述試劑濃度之明確表達，以及在某些實施例中，描述復水醫藥組合物所必需之賦形劑成分或稀釋劑(例如水、生理食鹽水或PBS)之相對量。
骨硬化素結合劑係以減少骨再吸收標記之含量及/或增加骨形成標記之含量及/或增加骨密度之量投與。所投與之骨硬化素結合劑之劑量可在每公斤體重約0.5mg至約20mg(例如，12mg)之範圍內。舉例而言，骨硬化素結合劑之劑量可在約1mg/kg至約10mg/kg(例如，約2mg/kg或約9mg/kg)、約1mg/kg至約3mg/kg或約3mg/kg至約8mg/kg(例如，約4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg或7mg/kg)之範圍內。
另外，視關於特定患者所選擇之治療方案而定，可有利地投與多劑骨硬化素結合劑或分開投與多劑。骨硬化素結合劑可在1年或更短之時間(例如，9個月或更短、6個月或更短或3個月或更短)內週期性投與。就此而論，可每約7天、或2週、或3週、或1個月、或5週、或6週、或7週、或2個月、或9週、或10週、或11週、或3個月、或13週、或14週、或15週、或4個月、或17週、或18週、或19週、或5個月、或21週、或22週、或23週、或6個月、或12個月一次向人類投與骨硬化素結合劑。
本發明方法包含投與一定量之"骨硬化素抑制劑"。如本文中所使用，術語"骨硬化素抑制劑"意謂如由骨礦化、骨密度、對成骨細胞及/或蝕骨細胞之影響、骨形成標記、骨再吸收標記、成骨細胞活性標記及/或蝕骨細胞活性標記之變化所量測，抑制骨硬化素對骨之生物 活性的任何分子。該等抑制劑可藉由與骨硬化素或其受體或結合搭配物結合起作用。該類抑制劑包括"骨硬化素結合劑"，諸如抗體或肽基分子。"骨硬化素抑制劑"亦指結合骨硬化素且抑制其活性之視情況分子量小於約1000道爾頓(Dalton)的小有機化學化合物。抑制劑或者可藉由抑制骨硬化素之表現起作用。該類抑制劑包括與骨硬化素DNA或mRNA結合且抑制骨硬化素表現之聚核苷酸或寡核苷酸，包括反義寡核苷酸、抑制性RNA、DNA酶、核糖酶、適體或抑制骨硬化素表現之其醫藥學上可接受之鹽。
"骨硬化素結合劑"與骨硬化素或其部分特異性結合以阻斷或減弱人類骨硬化素與一或多個配位體之結合。在骨硬化症(一種以骨過度生長及強緻密骨為特徵之骨骼疾病)中無骨硬化素(SOST基因之產物)(Brunkow等人，Am.J.Hum.Genet.,68：577-589(2001)；Balemans等人，Hum.Mol Genet.,10：537-543(2001))。人類骨硬化素之胺基酸序列經Brunkow等人報導且在美國專利公開案第20070110747號中以SEQ ID NO：1揭示(該專利公開案中關於骨硬化素結合劑及序列表之描述係全文併入本文中)。重組人類骨硬化素/SOST可購自R&D Systems(Minneapolis,Minn.,USA；2006目錄號1406-ST-025)。另外，重組小鼠骨硬化素/SOST可購自R&D Systems(Minneapolis,Minn.,USA；2006目錄號1589-ST-025)。研究級骨硬化素結合單株抗體可購自R&D Systems(Minneapolis,Minn.,USA；小鼠單株：2006目錄號MAB1406；大鼠單株：2006目錄號MAB1589)。美國專利第6,395,511號及第6,803,453號以及美國專利公開案第20040009535號及第20050106683號大致提及抗骨硬化素抗體。適於在本發明之情況下使用之骨硬化素結合劑的實例亦描述於美國專利公開案第20070110747號及第20070072797號中，其以引用之方式併入本文中。關於產生骨硬化素結合劑之材料及方法之其他資訊可見於美國專利公開案第 20040158045號中。
本發明之骨硬化素結合劑較佳為抗體。術語"抗體"係指完整抗體或其結合片段。抗體可包含完整抗體分子(包括具有全長重鏈及/或輕鏈之多株、單株、嵌合、人化或人類形式)或包含其抗原結合片段。抗體片段包括F(ab')2、Fab、Fab'、Fv、Fc及Fd片段，且其可併入單結構域抗體、單鏈抗體、巨型抗體(maxibody)、微型抗體(minibody)、胞內抗體(intrabody)、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、v-NAR及bis-scFv中(參見，例如Hollinger及Hudson,Nature Biotechnology,23(9)：1126-1136(2005))。包括纖維結合蛋白多肽單功能抗體之抗體多肽亦揭示於美國專利第6,703,199號中。其他抗體多肽揭示於美國專利公開案第20050238646號中。抗骨硬化素抗體可以小於或等於1×10-7M、小於或等於1×10-8M、小於或等於1×10-9M、小於或等於1×10-10M、小於或等於1×10-11M或小於或等於1×10-12M之親和力與SEQ ID NO：1之骨硬化素或其天然存在之變體結合。親和力可由親和力ELISA檢定測定。在某些實施例中，親和力可由BIAcore檢定測定。在某些實施例中，親和力可由動力學方法測定。在某些實施例中，親和力可由平衡/溶液法測定。
抗體片段可為任何合成或基因工程改造之蛋白質。舉例而言，抗體片段包括由輕鏈可變區組成之經分離片段、由重鏈及輕鏈之可變區組成之"Fv"片段、輕鏈及重鏈可變區經由肽連接子連接之重組單鏈多肽分子(scFv蛋白)。
抗體片段之另一形式為包含一或多個抗體互補決定區(CDR)之肽。CDR(亦稱為"最小識別單元"或"高變區")可藉由構築編碼所關注之CDR之聚核苷酸獲得。該等聚核苷酸係(例如)藉由使用以產生抗體之細胞之mRNA作為模板之聚合酶鏈反應合成可變區來製備(參見，例如，Larrick等人，Methods：A Companion to Methods in Enzymology, 2：106(1991)；Courtenay-Luck,"Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies",Monoclonal Antibodies Production,Engineering and Clinical Application,Ritter等人(編)，第166頁，Cambridge University Press(1995)；及Ward等人，"Genetic Manipulation and Expression of Antibodies",Monoclonal Antibodies：Principles and Applications,Birch等人(編)，第137頁，Wiley-Liss,Inc.(1995))。
在本發明之一實施例中，骨硬化素結合劑交叉阻斷以下抗體中之至少一種與骨硬化素之結合：Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、Ab-1、Ab-2、Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-10、Ab-11、Ab-12、Ab-13、Ab-14、Ab-15、Ab-16、Ab-17、Ab-18、Ab-19、Ab-20、Ab-21、Ab-22、Ab-23及Ab-24(所有該等抗體均描述於美國專利公開案第20070110747號中)。其他或另外，以下抗體中之至少一種交叉阻斷骨硬化素結合劑與骨硬化素結合：Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、Ab-1、Ab-2、Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-10、Ab-11、Ab-12、Ab-13、Ab-14、Ab-15、Ab-16、Ab-17、Ab-18、Ab-19、Ab-20、Ab-21、Ab-22、Ab-23及Ab-24(所有該等抗體均描述於美國專利公開案第20070110747號中)。術語"交叉阻斷"在本文中可互換使用以意謂抗體或其他結合劑干擾其他抗體或結合劑與骨硬化素之結合的能力。抗體或其他結合劑能夠干擾另一抗體與骨硬化素之結合的程度且因此其是否能認為是交叉阻斷可使用競爭結合檢定確定。在本發明之一些態樣中，交叉阻斷抗體或其片段使骨硬化素與參考抗體之結合降低介於約40%與約100%之間，諸如約60%與約100%、尤其70%與100%之間且更尤其80%與100%之間。尤其適於偵測交叉阻斷之定量檢定使用Biacore機器，其使用表面電漿共振技術量測相互作用之程度。另一合適的定量交叉阻斷檢定使用基於ELISA之方法量測抗體或其他結合劑關於與骨硬化素結合的競爭。
合適之骨硬化素結合劑包括美國專利公開案第20070110747號中所述之抗體及其部分，諸如其中特別揭示之CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中之一或多者。CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3之區域中至少一個可具有至少一個胺基酸取代，其限制條件為結合劑保留未經取代之CDR之結合特異性。結合劑之非CDR部分可為非蛋白質分子，其中結合劑交叉阻斷本文中所揭示之抗體與骨硬化素之結合及/或中和骨硬化素。結合劑之非CDR部分可為非蛋白質分子，其中結合劑在人類骨硬化素肽抗原決定基競爭結合檢定中展現與以下抗體中之至少一個所展現之結合模式類似的與人類骨硬化素肽之結合模式：Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、Ab-1、Ab-2、Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-10、Ab-11、Ab-12、Ab-13、Ab-14、Ab-15、Ab-16、Ab-17、Ab-18、Ab-19、Ab-20、Ab-21、Ab-22、Ab-23及Ab-24(所有該等抗體均描述於美國專利公開案第20070110747號中)及/或中和骨硬化素。結合劑之非CDR部分可由胺基酸構成，其中該結合劑為重組結合蛋白或合成肽，且重組結合蛋白交叉阻斷抗體與骨硬化素之結合及/或中和骨硬化素。結合劑之非CDR部分可由胺基酸構成，其中該結合劑為重組結合蛋白，且該重組結合蛋白在人類骨硬化素肽抗原決定基競爭結合檢定(描述於美國專利公開案第20070110747號中)中展現與以下抗體中之至少一個所展現之結合模式類似的與人類骨硬化素肽之結合模式：Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、Ab-1、Ab-2、Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-10、Ab-11、Ab-12、Ab-13、Ab-14、Ab-15、Ab-16、Ab-17、Ab-18、Ab-19、Ab-20、Ab-21、Ab-22、Ab-23及Ab-24(均描述於美國專利公開案第20070110747號中)，及/或中和骨硬化素。骨硬化素結合劑較佳為美國專利公開案第20070110747號之Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、Ab- 1、Ab-2、Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-10、Ab-11、Ab-12、Ab-13、Ab-14、Ab-15、Ab-16、Ab-17、Ab-18、Ab-19、Ab-20、Ab-21、Ab-22、Ab-23或Ab-24。
另外，骨硬化素結合劑可包含至少一個與選自以下序列之CDR具有至少75%一致性(例如，100%一致性)的CDR序列：美國專利公開案第20070110747號中所揭示之SEQ ID NO：39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、78、79、80、81、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、351、352、353、358、359及360。骨硬化素結合劑較佳包含至少一個與選自以下序列之CDR具有至少75%一致性的CDR序列：SEQ ID NO：245、246、247、78、79、80、269、270、271、239、240及24，所有該等序列均描述於美國專利公開案第20070110747號中。如美國專利公開案第20070110747號中所述，骨硬化素結合劑可包含：a)SEQ ID NO：54、55及56之CDR序列及SEQ ID NO：51、52及53之CDR序列；b)SEQ ID NO：60、61及62之CDR序列及SEQ ID NO：57、58及59之CDR序列；c)SEQ ID NO：48、49及50之CDR序列及SEQ ID NO：45、46及47之CDR序列；d)SEQ ID NO：42、43及44之CDR序列及SEQ ID NO：39、40及41之CDR序列；e)SEQ ID NO：275、276及277之CDR序列及SEQ ID NO：287、288及289之CDR序列；f)SEQ ID NO：278、279及280之CDR序列及SEQ ID NO：290、291及292之CDR 序列；g)SEQ ID NO：78、79及80之CDR序列及SEQ ID NO：245、246及247之CDR序列；h)SEQ ID NO：81、99及100之CDR序列及SEQ ID NO：248、249及250之CDR序列；i)SEQ ID NO：101、102及103之CDR序列及SEQ ID NO：251、252及253之CDR序列；j)SEQ ID NO：104、105及106之CDR序列及SEQ ID NO：254、255及256之CDR序列；k)SEQ ID NO：107、108及109之CDR序列及SEQ ID NO：257、258及259之CDR序列；l)SEQ ID NO：110、111及112之CDR序列及SEQ ID NO：260、261及262之CDR序列；m)SEQ ID NO：281、282及283之CDR序列及SEQ ID NO：293、294及295之CDR序列；n)SEQ ID NO：113、114及115之CDR序列及SEQ ID NO：263、264及265之CDR序列；o)SEQ ID NO：284、285及286之CDR序列及SEQ ID NO：296、297及298之CDR序列；p)SEQ ID NO：116、237及238之CDR序列及SEQ ID NO：266、267及268之CDR序列；q)SEQ ID NO：239、240及241之CDR序列及SEQ ID NO：269、270及271之CDR序列；r)SEQ ID NO：242、243及244之CDR序列及SEQ ID NO：272、273及274之CDR序列；或s)SEQ ID NO：351、352及353之CDR序列及SEQ ID NO：358、359及360之CDR序列。
骨硬化素結合劑亦可包含至少一個與選自CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3之CDR具有至少75%一致性的CDR序列，其中CDR-H1具有SEQ ID NO：245或SEQ ID NO：269中給出之序列，CDR-H2具有SEQ ID NO：246或SEQ ID NO：270中給出之序列，CDR-H3具有SEQ ID NO：247或SEQ ID NO：271中給出之序列，CDR-L1具有SEQ ID NO：78或SEQ ID NO：239中給出之序列，CDR-L2具有SEQ ID NO：79或SEQ ID NO：240中給出之序列，且CDR-L3具有SEQ ID NO：80或SEQ ID NO 241中給出之序列，所有該等序列均描述於美國專利公開案第20070110747號中。
另外，骨硬化素結合劑可具有重鏈，其包含CDR H1、H2及H3且包含具有SEQ ID NO：137中提供之序列之多肽或其變體，其中該CDR H1、H2及H3分別與SEQ ID NO：245、246及247至少75%一致；及輕鏈，其包含CDR L1、L2及L3且包含具有SEQ ID NO：133中提供之序列的多肽或其變體，其中該CDR L1、L2及L3分別與SEQ ID NO：78、79及80至少75%一致(如美國專利公開案第20070110747號中所述)。
骨硬化素結合劑可具有重鏈，其包含CDR H1、H2及H3且包含具有SEQ ID NO：145或392中提供之序列之多肽或其變體，其中該CDR H1、H2及H3分別與SEQ ID NO：245、246及247至少75%一致；及輕鏈，其包含CDR之L1、L2及L3且包含具有SEQ ID NO：141中提供之序列的多肽或其變體，其中該CDR L1、L2及L3分別與SEQ ID NO：78、79及80至少75%一致(如美國專利公開案第20070110747號中所述)。
骨硬化素結合劑可具有重鏈，其包含CDR H1、H2及H3且包含具有SEQ ID NO：335中提供之序列之多肽或其變體，其中該CDR H1、H2及H3分別與SEQ ID NO：269、270及271至少75%一致；及輕鏈，其包含CDR L1、L2及L3且包含具有SEQ ID NO：334中提供之序列的多肽或其變體，其中該CDR L1、L2及L3分別與SEQ ID NO：239、240及241至少75%一致(如美國專利公開案第20070110747號中所述)。
或者，骨硬化素結合劑可具有重鏈，其包含CDR H1、H2及H3且包含具有SEQ ID NO：331中提供之序列之多肽或其變體，其中該CDRH1、H2及H3分別與SEQ ID NO：269、270及271至少75%一致；及輕鏈，其包含CDR L1、L2及L3且包含具有SEQ ID NO：330中提供之序列的多肽或其變體，其中該CDR L1、L2及L3分別與SEQ ID NO：239、240及241至少75%一致(如美國專利公開案第20070110747號中所述)。
骨硬化素結合劑可具有重鏈，其包含CDR H1、H2及H3且包含具有SEQ ID NO：345或396中提供之序列之多肽或其變體，其中該CDR H1、H2及H3分別與SEQ ID NO：269、270及271至少75%一致；及輕鏈，其包含CDR L1、L2及L3且包含具有SEQ ID NO：341中提供之序列的多肽或其變體，其中該CDR L1、L2及L3分別與SEQ ID NO：239、240及241至少75%一致(如美國專利公開案第20070110747號中所述)。
或者，骨硬化素結合劑具有包含具有SEQ ID NO：137中提供之序列之多肽的重鏈及包含具有SEQ ID NO：133中提供之序列之多肽的輕鏈；或包含具有SEQ ID NO：145或392中提供之序列之多肽的重鏈及包含具有SEQ ID NO：141中提供之序列之多肽的輕鏈；或包含具有SEQ ID NO：335中提供之序列之多肽的重鏈及包含具有SEQ ID NO：334中提供之序列之多肽的輕鏈；或包含具有SEQ ID NO：331中提供之序列之多肽的重鏈及包含具有SEQ ID NO：330中提供之序列之多肽的輕鏈；或包含具有SEQ ID NO：345或396中提供之序列之多肽的重鏈及包含具有SEQ ID NO：341中提供之序列之多肽的輕鏈(如美國專利公開案第20070110747號中所述)。
用於本發明方法中之骨硬化素結合劑較佳在美國專利公開案第20070110747號中所述之基於細胞之檢定中及/或美國專利公開案第20070110747號中所述之活體內檢定中調節骨硬化素功能，及/或結合美國專利公開案第20070110747號中所述之一或多個抗原決定基，及/或交叉阻斷美國專利公開案第20070110747號中所述之抗體中之一種的結合，及/或與骨硬化素之結合經美國專利公開案第20070110747號中所述之抗體中之一種交叉阻斷。
此外，本發明方法可包含投與除本文中所述之骨硬化素結合劑以外的骨硬化素抑制劑。該等藥劑可直接或間接作用於SOST或骨硬 化素。預期用於本發明方法中之骨硬化素抑制劑包括美國專利公開案第20030229041號(其全部揭示內容以引用之方式併入本文中，尤其著重於骨硬化素抑制劑之描述)中所述之骨硬化素抑制劑。舉例而言，適用於調節SOST表現及骨硬化素活性之藥劑包括(但不限於)類固醇(諸如對應於美國專利公開案第20030229041號中之式1之類固醇)、生物鹼、類萜、類肽(peptoid)及合成化學物質。在一些實施例中，SOST拮抗劑或激動劑可結合糖皮質激素受體。舉例而言，地塞米松(dexamethasone)傾向於消除BMP-4及BMP-6對SOST表現之刺激效應。包括糖皮質激素類似物、膽汁鹽(諸如對應於美國專利公開案第20030229041號中之式3之膽汁鹽)及前列腺素(諸如對應於美國專利公開案第20030229041號中之式2之前列腺素)之其他化學實體亦調節骨形態發生蛋白對SOST表現之效應且預期其可用於本發明方法中。
骨硬化素抑制劑亦可為直接或間接作用於SOST或骨硬化素以在活體內降低至少一種骨再吸收標記之含量及/或增加至少一種骨形成標記之含量的其他小分子治療劑。術語"小分子"包括合成、天然來源或部分合成且較佳分子量小於5,000道爾頓(例如，介於約100與1,500道爾頓之間)之化合物或分子複合物。藥劑可使用此項技術已知之組合文庫方法中之許多方法中之任一種獲得，包括空間可定位平行固相或溶液相文庫、需要重疊合(deconvolution)之合成文庫方法、"一珠粒一化合物(one-bead one-compound)"文庫方法及使用親和力層析選擇之合成文庫方法(參見，例如Lam,Anticancer Drug Des.,12：145(1997)及美國專利第5,738,996號、第5,807,683號及第7,261,892號)。開發及篩選骨硬化素抑制劑之方法進一步描述於美國專利公開案第20030229041號中，其論述以引用之方式併入本文中。
可根據本發明之方法使用之骨硬化素表現抑制劑包括抑制劑寡核苷酸或聚核苷酸，包括其醫藥學上可接受之鹽，例如鈉鹽。非限制 性實例包括：反義寡核苷酸(Eckstein,Antisense Nucleic Acid Drug Dev.,10：117-121(2000)；Crooke,Methods Enzymol,313：3-45(2000)；Guvakova等人，J.Biol.Chem.,270：2620-2627(1995)；Manoharan,Biochim.Biophys.Acta,1489：117-130(1999)；Baker等人，J.Biol.Chem.,272：11994-12000(1997)；Kurreck,Eur.J.Biochem.,270：1628-1644(2003)；Sierakowska等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,93：12840-12844(1996)；Marwick,J.Am.Med.Assoc,280：871(1998)；Tomita及Morishita,Curr.Pharm.Des.,10：797-803(2004)；Gleave及Monia,Nat.Rev.Cancer,5：468-479(2005)及Patil,AAPS J.,7：E61-E77(2005))、三螺旋寡核苷酸(Francois等人，Nucleic Acids Res.,16：11431-11440(1988)；及Moser及Dervan,Science,238：645-650(1987))、核糖酶/脫氧核糖酶(DNA酶)(Kruger等人，Tetrahymena.Cell,31：147-157(1982)；Uhlenbeck,Nature,328：596-600(1987)；Sigurdsson及Eckstein,Trends Biotechnol,13：286-289(1995)；Kumar等人，Gene Ther.,12：1486-1493(2005)；Breaker及Joyce,Chem.Biol.,J：223-229(1994)；Khachigian,Curr.Pharm.Biotechnol.,5：337-339(2004)；Khachigian,Biochem.Pharmacol,68：1023-1025(2004)；及Trulzsch及Wood,J.Neurochem.,88：257-265(2004))、小干擾RNA/RNAi(Fire等人，Nature,391：806-811(1998)；Montgomery等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,95：15502-15507(1998)；Cullen,Nat.Immunol,3：597-599(2002)；Hannon,Nature,418：244-251(2002)；Bernstein等人，Nature,409：363-366(2001)；Nykanen等人，Cell,107：309-321(2001)；Gilmore等人，J.Drug Target.,12：315-340(2004)；Reynolds等人，Nat.Biotechnol,22：326-330(2004)；Soutschek等人，Nature,432173-178(2004)；Ralph等人，Nat.Med.,11：429-433(2005)；Xia等人，Nat.Med.,10816-820 (2004)；及Miller等人，Nucleic Acids Res.,32：661-668(2004))、適體(Ellington及Szostak,Nature,346：818-822(1990)；Doudna等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,92：2355-2359(1995)；Tuerk及Gold,Science,249：505-510(1990)；White等人，Mol Ther.,4：567-573(2001)；Rusconi等人，Nature,419：90-94(2002)；Nimjee等人，Mol.Ther.,14：408-415(2006)；Gragoudas等人，N.Engl J.Med.,351：3805-2816(2004)；Vinores,Curr.Opin.Mol.Ther.,5673-679(2003)；及Kourlas及Schiller等人，Clin.Ther.,28：36-44(2006))，或誘騙寡核苷酸(decoy oligonucleotide)(Morishita等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,92：5855-5859(1995)；Alexander等人，J.Am.Med.Assoc,294：2446-2454(2005)；Mann及Dzau,J.Clin.Invest.,106：1071-1075(2000)；及Nimjee等人，Annu.Rev.Med.,56：555-583(2005))。前述文獻全文係以引用之方式併入本文中，尤其著重於文獻中與設計、製備及使用抑制性寡核苷酸之方法相關之部分。諸如Ambion Inc.(Austin,TX)、Darmacon Inc.(Lafayette,CO)、InvivoGen(San Diego,CA)及Molecular Research Laboratories,LLC(Herndon,VA)之供應商產生常規siRNA分子。另外，可使用商業套組製造常規siRNA分子，諸如SILENCERTM siRNA構築套組(siRNA Construction Kit)(Ambion Inc.,Austin,TX)或psiRNA系統(psiRNA System)(InvivoGen,San Diego,CA)。
預期穩定、具有高核酸酶抗性、具有合適之藥物動力學以使其在無毒劑量下運輸至靶組織部位且具有穿過質膜之能力的抑制性寡核苷酸可用作治療劑。抑制性寡核苷酸可與靶基因之編碼部分、3'或5'非轉譯區或基因中之內含子序列或靶mRNA中之編碼或內含子序列互補。內含子序列通常不太保守且因此可提供較高特異性。在一實施例中，抑制性寡核苷酸抑制基因產物於一個物種中之表現但不抑制其同源物於另一物種中之表現；在其他實施例中，抑制性寡核苷酸抑制基 因於兩個物種(例如人類及靈長類動物，或人類及鼠類)中之表現。
已展示細胞中反義寡核苷酸之組成性表現會經由阻斷轉譯或阻止剪接來抑制基因表現。在某些實施例中，抑制性寡核苷酸能夠在中等或高度嚴格條件下與骨硬化素基因或mRNA之至少8、9、10、11或12個連續鹼基(或其反向鏈)雜交。合適的抑制性寡核苷酸可為單鏈且含有足以與mRNA或DNA分子互補且對mRNA或DNA分子具有特異性以致其可與該mRNA或DNA分子雜交且抑制轉錄、剪接或轉譯的(例如)至少12、15或18個鹼基長之區段。小於30個鹼基之長度之互補性通常足夠。
嚴格條件通常將為以下條件：在pH 7.0至8.3下鹽濃度小於約1.5M鈉離子、通常約0.01至1.0M鈉離子濃度(或其他鹽)，且對於短核酸(例如，10至50個核苷酸)，溫度為至少約30℃；且對於較長核酸(例如，超過50個核苷酸)，溫度至少約60℃。嚴格條件亦可藉由添加諸如甲醯胺之去穩定劑達成。例示性低嚴格度條件包括在37℃下在30%至35%甲醯胺、1M NaCl、1% SDS(十二基硫酸鈉)之緩衝溶液中雜交且在50℃至55℃下於1×SSC至2×SSC(20×SSC=3.0M NaCl/0.3M檸檬酸三鈉)中洗滌。例示性中等嚴格度條件包括在37℃下在40%至45%甲醯胺、1.0M NaCl、1% SDS中雜交，且在55℃至60℃下於0.5×SSC至1×SSC中洗滌。例示性高嚴格度條件包括在37℃下在50%甲醯胺、1M NaCl、1% SDS中雜交且在60℃至65℃下於0.1×SSC中洗滌。雜交持續時間通常小於約24小時，通常為約4小時至約12小時。
在一些情況下，視互補區之長度而定，可容許1個、2個或2個以上錯配而不影響抑制功能。在某些實施例中，抑制性寡核苷酸為反義寡核苷酸、抑制性RNA(包括siRNA或RNAi或shRNA)、DNA酶、核糖酶(視情況錘頭狀核糖酶(hammerhead ribozyme))、適體或其醫藥學上可接受之鹽。在一實施例中，寡核苷酸與編碼美國專利公開案第 20040158045號之SEQ ID NO：1之核苷酸序列的至少10個鹼基互補。在一實施例中，寡核苷酸靶向位於骨硬化素mRNA之3'非轉譯區附近之核苷酸。
用於設計寡核苷酸之特定序列可為該靶之經表現基因信使內所含之核苷酸的任何相鄰序列。控制抑制性寡核苷酸序列之靶位點之因素包括寡核苷酸之長度、結合親和力及靶序列可接近性。可藉由量測靶蛋白質轉譯及靶相關表型之抑制(例如，培養物中細胞之細胞增殖的抑制)針對抑制活性之能力活體外篩選序列。通常已知可使用反義寡核苷酸靶向RNA之大多數區域(5'及3'非轉譯區、AUG起始、編碼、剪接接頭及內含子)。可使用此項技術已知之程式及算法選擇適當靶序列。另外，可利用經設計以預測指定單鏈核酸序列之二級結構之程式選擇最佳序列，且使該等序列之選擇很可能發生於摺疊mRNA之經暴露單鏈區中。用於設計適當寡核苷酸之方法及組合物可見於(例如)美國專利第6,251,588號中，其內容全文係以引用之方式併入本文中。
可使用硫代磷酸酯反義寡核苷酸。磷酸二酯鍵聯以及雜環或糖之修飾可使效率增加。使用硫代磷酸酯修飾磷酸二酯鍵聯。N3'-P5'胺基磷酸酯鍵聯已描述為使寡核苷酸對核酸酶穩定且增加與RNA之結合。肽核酸(PNA)鍵聯為核糖及磷酸二酯主鏈之完全替換且其對核酸酶穩定，增加與RNA之結合親和力且不允許RNAse H裂解。其基本結構亦可經受可使其最佳化為反義組分之修飾。關於雜環之修飾，已證明某些雜環修飾可增大反義效應而不干擾RNAse H之活性。該等修飾之一實例為C-5噻唑修飾。最後，亦可考慮糖之修飾。2'-O-丙基及2'-甲氧基乙氧基核糖修飾使寡核苷酸在細胞培養物及活體內對核酸酶穩定。
已展示大多數mRNA含有多種二級及三級結構。RNA中之二級結構元件基本上係由同一RNA分子之不同區域之間的沃森-克里克 (Watson-Crick)型相互作用形成。重要的二級結構元件包括分子內雙鏈區、髮夾環、雙螺旋RNA中之凸出及內部環。當二級結構元件彼此接觸或與單鏈區接觸產生更為複雜之三維結構時，形成三級結構元件。許多研究員已量測大量RNA雙螺旋結構之結合能量且已推導出一組可用於預測RNA二級結構之規則(參見，例如Jaeger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,86：7706(1989)；及Turner等人，Annu.Rev.Biophys.Biophys.Chem.17：167(1988))。該等規則適用於鑑別RNA結構元件且尤其適用於鑑別可代表靶向siRNA、核糖酶或反義技術之mRNA區段的單鏈RNA區。
短干擾(si)RNA技術(亦稱為RNAi)通常包括由與特定序列同源之雙鏈RNA(dsRNA)誘導之具有該特定序列之mRNA降解，從而"干擾"相應基因之表現。可藉由引入對應於該基因之整個mRNA或其實質性部分的dsRNA來阻遏任何選定基因。看起來，當表現長dsRNA時，其最初經核糖核酸酶III加工成少至21至22個鹼基對長之較短dsRNA寡核苷酸。因此，siRNA可受相對較短之同源dsRNA之引入或表現影響。例示性siRNA具有具約21個核苷酸之有義鏈及反義鏈，其形成雙鏈RNA之約19個核苷酸且在各3'端處具有2個核苷酸之突出。實際上，使用相對較短之同源dsRNA可具有某些優點。
哺乳動物細胞具有至少兩個受雙鏈RNA(dsRNA)影響之路徑。在序列特異性siRNA路徑中，如上所述，首先使起始dsRNA分解為短干擾RNA。認為短干擾RNA提供靶向特定信使RNA以使之降解的序列資訊。相反，非特異性路徑係由具有任何序列之dsRNA引發，只要其長度為至少約30個鹼基對即可。
非特異性效應因dsRNA激活兩種酶而發生：PKR，其活性形式使轉譯起始因子eIF2磷酸化以停止所有蛋白質合成；及2',5'寡腺苷酸合成酶(2',5'-AS)，其合成激活RNase L(一種靶向所有mRNA之非特異性 酶)之分子。非特異性路徑可代表宿主對應力或病毒感染之反應，且通常，非特異性路徑之效應較佳經最小化。顯然，誘導非特異性路徑似乎需要較長dsRNA，且因此預期短於約30個鹼基對之dsRNA藉由RNAi實現基因阻遏(參見，Hunter等人，J.Biol.Chem.,250：409-17(1975)；Manche等人，Mol.Cell.Biol.12：5239-48(1992)；Minks等人，J.Biol.Chem.,254：10180-3(1979)；及Elbashir等人，Nature,411：494-8(2001))。
已證明siRNA為降低多種細胞類型中之基因表現之有效方式。siRNA通常使基因之表現降低至低於使用反義技術所達成之程度且時常完全清除表現(參見Bass,Nature,411：428-9(2001))。在哺乳動物細胞中，siRNA在比反義實驗中通常使用之濃度低數個數量級之濃度下有效(Elbashir等人，Nature,411：494-8(2001))。
用於實現RNAi之雙鏈寡核苷酸之長度較佳小於30個鹼基對，例如為約25、24、23、22、21、20、19、18或17個鹼基對長或更短長度，且含有足以與靶mRNA互補以允許與靶mRNA雜交之區段。dsRNA寡核苷酸視情況可包括3'突出端。例示性2-核苷酸3'突出可由任何類型之核糖核苷酸殘基構成且甚至可由2'-脫氧胸苷殘基構成，其降低RNA合成之成本且可增強細胞培養基中及轉染細胞內siRNA之核酸酶抗性(參見Elbashi等人，同上)。例示性dsRNA可經化學方式合成或使用適當表現載體於活體外或活體內產生(參見，例如Elbashir等人，Genes Dev.,15：188-200(2001))。較長RNA可由此項技術已知之啟動子(諸如T7 RNA聚合酶啟動子)轉錄。
在本發明之某些實施例中，亦可利用具有50、75、100或甚至500個鹼基對或更長之較長dsRNA。實現RNAi之dsRNA之例示性濃度為約0.05nM、0.1nM、0.5nM、1.0nM、1.5nM、25nM或100nM，但視所治療之細胞之性質、基因靶及熟習此項技術者可容易地辨別之 其他因素而定，可利用其他濃度。
siRNA技術之其他組合物、方法及應用提供於美國專利第6,278,039號、第5,723,750號及第5,244,805號中，其全文係以引用之方式併入本文中。
與siRNA相比，shRNA在沉默壽命及傳遞選擇方面提供優勢。關於綜述，參見例如Hannon等人，Nature,431：371-378(2004)。已報導產生shRNA之載體，shRNA在細胞內經加工成具有類似siRNA之性質之短雙螺旋RNA(Brummelkamp等人，Science,296：550-553(2000)；Paddison等人，Genes Dev.,16：948-958(2002))。該等載體提供在將載體穩定整合至宿主細胞基因組中之後可介導持久基因沉默之基因沉默試劑的可再生源。此外，可容易地將核心沉默"髮夾"盒插入反轉錄病毒、豆狀病毒或腺病毒載體中，從而有助於以經設計以傳遞允許異位mRNA表現之DNA構築體的無數種方式中之任一種將shRNA傳遞至多種細胞類型中(Brummelkamp等人，Cancer Cell,2：243-247(2002)；Dirac等人，J.Biol.Chem.,278：11731-11734(2003)；Michiels等人，Nat.Biotechnol.,20：1154-1157(2002)；Stegmeie等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,102：13212-13217(2005)；Khvorova等人，Cell,115：209-216(2003))。
髮夾可組織為左手髮夾(亦即，5'-反義-環-有義-3')或右手髮夾(亦即，5'-有義-環-反義-3')。視髮夾之組織而定，siRNA亦可在有義鏈或反義鏈之5'或3'端處含有突出。較佳地，若存在任何突出，則其在髮夾的3'端且包含1至6個之間個數的鹼基。突出可未經修飾，或可含有一或多個特異性或穩定修飾，諸如2'位之鹵素或O-烷基修飾，或核苷酸間修飾，諸如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯或膦酸甲酯修飾。突出可為核糖核酸、脫氧核糖核酸或核糖核酸與脫氧核糖核酸之組合。
另外，髮夾可進一步在5'最末端核苷酸處包含磷酸基。5'最末端 核苷酸之磷酸化係指存在一或多個連接至5'末端核苷酸之糖部分之5'碳的磷酸基。較佳在Dicer加工後將形成反義鏈之區域之5'端處僅存在一個磷酸基。在一例示性實施例中，右手髮夾可包括不具有5'磷酸基之5'端(亦即，有義區之游離5'端)，或可具有以阻止磷酸化之方式修飾之有義區的游離5'最末端核苷酸之5'碳。此可以多種方法達成，該等方法包括(但不限於)添加磷酸化阻斷基(例如，5'-O-烷基)，或消除5'-OH官能基(例如，5'最末端核苷酸為5'-脫氧核苷酸)。在髮夾為左手髮夾的情況下，較佳5'最末端核苷酸之5'碳位置經磷酸化。
莖長大於26個鹼基對的髮夾可經Dicer加工以使某些部分不為有助於mRNA降解之所得siRNA的部分。因此，可包含有義核苷酸之第一區及可包含反義核苷酸之第二區亦可含有互補(或至少大體上彼此互補)但與或不與靶mRNA相同或互補之核苷酸伸長。雖然shRNA之莖可由除突出外互補或部分互補之反義及有義鏈構成，但shRNA亦可包括以下：(1)位於最終Dicer切割位點遠端之分子部分，其含有與靶mRNA大體上互補/同源之區域；及(2)鄰近Dicer切割位點之莖區(亦即，鄰近環之區域)，其與靶mRNA無關或僅與靶mRNA部分相關(例如，互補/同源)。該第二區之核苷酸含量可基於若干參數(包括(但不限於)熱力學特性或分布)選擇。
經修飾shRNA可保留Dicer加工後雙螺旋中之修飾。在例示性實施例中，在髮夾為在分子3'端含有2-6個核苷酸突出之右手髮夾(例如，5'-S-環-AS-3')的情況下，可將2'-O-甲基修飾添加至髮夾5'端之2位、1位及2位或1位、2位及3位處之核苷酸。具有該構型的髮夾的Dicer加工亦可保留完整的有義鏈5'端，因此保持Dicer加工後雙螺旋之化學修飾模式。該構型中3'突出之存在可尤其有利，因為含有指定修飾模式之鈍端分子可由Dicer以移除攜帶2'修飾之核苷酸之方式進一步加工。在存在/保留3'突出之情況下，所得攜帶有義修飾核苷酸之雙 螺旋在沉默特異性及功能性方面可具有高度有利的特性。例示性修飾模式之實例詳細描述於美國專利公開案第20050223427號及國際專利公開案第WO 2004/090105及WO 2005/078094號中，其各自揭示內容之全文係以引用之方式併入本文中。
shRNA可包含隨機或根據任何合理設計選擇程序選擇的序列。舉例而言，合理的設計算法描述於國際專利公開案第WO 2004/045543號及美國專利公開案第20050255487號中，其揭示內容之全文係以引用的方式併入本文中。另外，可能希望完全或部分基於平均內部穩定性分布("AISP")或區域內部穩定性分布("RISP")選擇可有助於由細胞機器接取或加工的序列。
核糖酶為能夠催化mRNA特異性裂解從而阻止轉譯之酶促RNA分子(關於綜述，參見Rossi,Current Biology,4：469-411(1994))。核糖酶作用的機制包括核糖酶分子與互補靶RNA之序列特異性雜交，繼之以內切核苷酸裂解事件。核糖酶分子較佳包括(1)一或多個與靶mRNA互補的序列及(2)負責mRNA裂解之熟知催化序列或功能相當之序列(參見，例如美國專利第5,093,246號，其全文係以引用之方式併入本文中)。
雖然可使用在位點特異性識別序列處裂解mRNA之核糖酶破壞靶mRNA，但另外可使用錘頭狀核糖酶。錘頭狀核糖酶在與靶mRNA形成互補鹼基對之側接區指定之位置處裂解mRNA。靶mRNA較佳具有以下具有兩個鹼基的序列：5'-UG-3'。錘頭狀核糖酶之構築及產生在此項技術中為熟知的且較為完整地描述於Haseloff及Gerlach,Nature,334：585-591(1988)及國際專利公開案第WO 89/05852號中，其內容全文係以引用之方式併入本文中。
靶向核糖酶之基因可含有與靶mRNA之兩個區互補之雜交區，該兩個區各自為至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、 17、18、19或20個相鄰核苷酸(但兩者之長度不需要相同)。
可將錘頭狀核糖酶序列嵌入諸如轉移核糖核酸(tRNA)之穩定RNA中以增加活體內裂解效率(Perriman等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,92：6175-79(1995)；de Feyter及Gaudron,Methods in Molecular Biology，第74卷，第43章，"Expressing Ribozymes in Plants," Turner,P.C.(編)，Humana Press Inc.,Totowa,N.J.)。此項技術中尤其熟知RNA聚合酶III介導之tRNA融合核糖酶之表現(參見Kawasaki等人，Nature,393：284-9(1998)；Kuwabara等人，Nature Biotechnol,16：961-5(1998)；及Kuwabara等人，Mol.Cell,2：617-27(1998)；Koseki等人，J.Virol.,73：1868-77(1999)；Kuwabara等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,96：1886-91(1999)；Tanabe等人，Nature,406：473-4(2000))。給定靶cDNA序列中通常存在若干潛在錘頭狀核糖酶裂解位點。核糖酶較佳經工程改造以使裂解識別位點位於靶mRNA之5'端附近，從而增加效率且最小化非功能性mRNA轉錄物之細胞內積聚。此外，使用位於編碼靶mRNA之不同部分之靶序列中的任何裂解識別位點將允許選擇性靶向一個或另一個靶基因。
本發明方法中使用之核糖酶亦包括RNA內切核糖核酸酶("Cech型核糖酶")，諸如嗜熱四膜蟲(Tetrahymena thermophila)中天然存在之內切核糖核酸酶(稱為IVS或L-19 IVS RNA)且其廣泛描述於以下文獻中：Zaug等人，Science,224：574-578(1984)；Zaug，等人，Science,231：470-475(1986)；Zaug等人，Nature,324：429-433(1986)；國際專利公開案第WO 88/04300號；及Been等人，Cell,47：207-216(1986)。Cech型核糖酶具有與靶RNA序列雜交且之後發生靶RNA裂解之8鹼基對活性位點。在一實施例中，本發明方法採用彼等靶向存在於靶基因或核酸序列中之8鹼基對活性位點序列之Cech型核糖酶。
核糖酶可由經修飾寡核苷酸(例如，供改進穩定性、靶向等)構成 且可經化學方式合成或經由表現載體產生。因為不同於反義分子，核糖酶具有催化性，所以效率需要較低細胞內濃度。另外，在某些實施例中，可首先藉由鑑別足以引起RNAi有效敲除之序列部分來設計核糖酶。隨後可向核糖酶中併入具有相同序列之部分。
另外，可藉由靶向與基因之調控區(亦即，啟動子及/或強化子)互補之脫氧核糖核苷酸序列以形成阻止體內靶細胞中基因轉錄之三螺旋結構來降低靶基因表現。(大體而言，參見Helene,C,Anticancer Drug Des.,6：569-84(1991)；Helene等人，Ann.N.Y.Acad.Sci.,660：27-36(1992)；及Maher,L.J,Bioassays,14：807-15(1992))。
用於三螺旋形成以抑制轉錄之核酸分子較佳為單鏈且由脫氧核糖核苷酸構成。該等寡核苷酸之鹼基組成應經由霍氏鹼基配對規則(Hoogsteen base pairing rule)促進三螺旋形成，該等規則通常需要相當大的嘌呤或嘧啶伸長存在於雙螺旋之一條鏈上。核苷酸序列可為基於嘧啶的，其將產生橫跨所得三螺旋之三個締合鏈之TAT及CGC三聯體(triplet)。富集嘧啶之分子與雙螺旋之單鏈之富集嘌呤的區域在與該鏈平行之方向上鹼基互補。另外，可選擇富集嘌呤(例如含有G殘基伸長)之核酸分子。該等分子將與富含GC對之DNA雙螺旋形成三螺旋，其中大部分嘌呤殘基位於靶雙螺旋之單鏈上，產生橫跨三螺旋中之三個鏈之CGC三聯體。
或者，可藉由產生所謂的"之字形(switchback)"核酸分子增加可靶向三螺旋形成之靶序列。之字形分子係以交替5'-3、3'-5'方式合成，以致其與雙螺旋之第一鏈鹼基配對，隨後與另一鏈鹼基配對，從而消除相當大的嘌呤或嘧啶伸長存在於雙螺旋之一條鏈上的必要性。
此外，可使用DNA酶抑制諸如骨硬化素基因之靶基因之表現。DNA酶併有反義與核糖酶技術之某些機械特徵。設計DNA酶以使其識別極類似反義寡核苷酸之特定靶核酸序列。然而，其亦具催化性且 特異性裂解靶核酸。
DNA酶包括兩種由桑托羅(Santoro)及喬伊斯(Joyce)鑑別之基本類型(參見，例如美國專利第6,110,462號)。10-23 DNA酶包含連接兩個臂之環結構。該兩個臂藉由識別特定靶核酸序列提供特異性，而環結構在生理條件下提供催化功能。
唯一或大體上唯一的序列較佳為具有約18至22個核苷酸之富G/C區段。高G/C含量有助於確保DNA酶與靶序列之間的較強相互作用。將使酶靶向信使之特異性反義識別序列可在DNA酶之兩個臂之間分配。
製備且投與DNA酶之方法可見於(例如)美國專利第6,110,462號。另外，熟習此項技術者應認識到，與反義寡核苷酸類似，DNA酶可視情況經修飾以改進穩定性且改進抗降解性。
抑制性寡核苷酸可直接投與細胞或經由載體(包括病毒載體或質體)轉型或轉染傳遞至細胞中，該載體中已置放具有適當調控序列(包括啟動子)之編碼抑制性寡核苷酸之DNA以使抑制性寡核苷酸於想要之細胞中表現。已知方法包括標準瞬時轉染、穩定轉染及使用反轉錄病毒至腺病毒範圍內之病毒傳遞。涵蓋藉由複製或複製缺陷型載體傳遞核酸抑制劑。表現也可由組成性或可誘導性啟動子系統驅動(Paddison等人，Methods Mol.Biol.,265：85-100(2004))。在其他實施例中，表現可受組織或發育特異性啟動子控制。
舉例而言，可藉由使用諸如Lipofectamine 2000(Life Technologies)或Oligofectamine(Life Technologies)之載劑組合物轉染引入載體。hGFP編碼pAD3共轉染後，可使用螢光顯微鏡術檢查哺乳動物細胞株之轉染效率(Kehlenback等人，J.Cell Biol,141：863-74(1998))。
傳遞途徑應為如根據上述標準所量測提供最佳抑制效應之途 徑。陽離子脂質體介導之傳遞、反轉錄病毒載體之傳遞及直接傳遞為有效的。
抑制性寡核苷酸之效力可在阻遏新蛋白質合成後轉換內源池(endogenous pool)足夠時間後用多種檢定中之任一種評定，該等檢定包括逆轉錄酶聚合酶鏈反應，或測定現有人類骨硬化素mRNA之含量之北方墨點分析(Northern blot analysis)，或使用識別人類骨硬化素蛋白質之抗體之西方墨點分析(Western blot analysis)。
本發明進一步描述於下文實例中。該等實例僅用於說明本發明且不意欲以任何方式限制本發明之範疇。
實例
該實例描述骨硬化素結合劑降低骨再吸收標記之含量且增加一或多個骨形成標記之含量的活體內研究。
對健康男性及絕經後女性進行單中心隨機雙盲安慰劑對照之遞增單劑量研究。將約72位個體編入六個劑量組中之一個中。對於組1、2、3a、4、5及6a，使8位健康絕經後女性隨機接收3：1之比率之經由皮下注射的骨硬化素結合劑或安慰劑，劑量含量分別為0.1mg/kg、0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg、5mg/kg或10mg/kg。在組3b及6b中，使8位健康男性以3：3：1：1之比率(骨硬化素結合劑靜脈內：骨硬化素結合劑皮下：安慰劑靜脈內：安慰劑皮下)經靜脈內及皮下接收骨硬化素結合劑或安慰劑，劑量含量分別為1mg/kg或10mg/kg(降低至5mg/kg)。對於組3c及6c，使4位健康絕經後女性以3：1比率隨機經靜脈內接收骨硬化素結合劑或安慰劑，劑量含量分別為1mg/kg或10mg/kg(降低至5mg/kg)。
藉由在投藥之前、隨後在投藥後12週內至少每週量測骨再吸收標記及骨形成標記之含量來監測抗骨硬化素療法。監測在向健康絕經後女性單劑量皮下投與骨硬化素結合劑後P1NP及BSAP之含量(參見圖 1及2)。給予0.1mg/kg及0.3mg/kg之個體享有P1NP或BSAP含量之最小升高(例如，含量增加小於20%)。
給予1mg/kg之個體之P1NP含量到第10天時增加約20%且在約第56天時漸漸減少至基線，而BSAP含量在第14天時達到峰值，達基線以上約30%。給予3mg/kg之個體之P1NP及BSAP含量在第21天時達到峰值，自基線增加約100%(P1NP)及60%(BSAP)，且在約第56天時回至基線。在投與5mg/kg之個體中，P1NP之含量在投藥後第14天上升至基線以上約140%且在第77天時保持升高。換言之，到治療後兩週時，P1NP之含量增加約140%。BSAP上升至基線以上約115%且在第84天時保持升高。類似地，投與10mg/kg在約第28天時引發P1NP含量之180%增加。P1NP含量在整個監測期間保持升高。投與10mg/kg之個體在第21天時顯現BSAP含量之峰值增加(投藥後3週達基線之125%)，其在第84天時亦保持升高。該研究之結果於圖1及2中說明。
亦在向健康絕經後女性單劑量皮下投與骨硬化素結合劑後監測骨鈣素(參見圖3)。給予小於1mg/kg之個體經歷骨鈣素之少許升高。在投與1mg/kg之患者中，骨鈣素含量波動，在第21天及第35天時達到峰值，達基線以上約30%。在投與3mg/kg之個體中，骨鈣素含量在第21天時達到峰值，達基線以上約100%，且直至約第56天含量仍保持升高。同樣地，投與5mg/kg骨硬化素結合劑導致在第28天時骨鈣素含量增加140%，該等含量在第84天時仍保持。給予10mg/kg之個體在第35天時顯現達到基線以上約180%之峰值骨鈣素含量。直至至少約第77天時，骨鈣素含量仍保持高於基線。
亦監測骨再吸收標記sCTx之含量(參見圖4)。投與安慰劑及0.1mg/kg之個體顯現sCTx含量之適度降低(例如，小於20%)。到第21天時，投與0.3mg/kg骨硬化素結合劑使sCTx含量降低約20%(亦即，到治療後兩週時，sCTX含量降低約20%)。在給予1mg/kg之個體中，含 量波動，但在第10天、第28天及第49天時達到基線以下約30%。在投與3mg/kg、5mg/kg及10mg/kg之個體中，含量在第14天時降至最低，分別達至基線以下約35%、55%及55%，且當此後監測時，含量仍保持在基線以下。所有所監測之生物標記之含量的比較提供於圖5中。
在向健康絕經後女性皮下給予單劑量骨硬化素結合劑後，監測血清離子鈣含量(參見圖6)。值得注意地是，離子鈣含量在任何劑量下均不顯著波動。實際上，所有個體(包括接收安慰劑之個體)在監測期間均經歷約5%之血清離子鈣之瞬時適度降低。
最後，量測接收1mg/kg、3mg/kg、5mg/kg或10mg/kg骨硬化素結合劑之健康絕經後女性之脊骨及髖部的骨礦物質密度(參見圖7)。例如在第28天、第56天及第84天時，尤其在接收5mg/kg及10mg/kg之患者之脊骨中觀察到BMD之顯著增加。髖部BMD增加小於脊骨BMD之增加，但BMD在第56天時於投與3mg/kg、5mg/kg及10mg/kg之患者中升高。BMD在第84天時於給予5mg/kg及10mg/kg之患者中進一步升高。
該實例說明本發明方法減少骨再吸收標記之含量、提昇骨形成標記之含量及增加骨礦物質密度而不顯著改變血清鈣的能力。單劑量骨硬化素結合劑之治療作用歷時長久，且在治療後第84天(12週)時繼續觀察到骨形成標記含量之增加及骨再吸收標記含量之減少。此外，本文中所述之資料提出本發明之治療功效與其他治療相比具有顯著優點："解除"骨形成與骨再吸收之間的聯繫從而使活體內骨形成及礦化最大化。
本文中所引用之所有文獻(包括專利、專利申請案、文獻公開案及其類似物)之全文係以引用之方式併入本文中。
雖然本發明已著重於較佳實施例加以描述，但一般熟習此項技 術者將顯而易見，可使用較佳化合物及方法之變更，且預期可以除本文特定描述以外之方式實施本發明。因此，本發明包括涵蓋於如下文申請專利範圍所界定之本發明之精神及範疇內的所有修改。
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<213> 智人
<400> 2
Figure TWI612972BD00005
<210> 3
<211> 16
<212> PRT
<213> 智人
<400> 3
Figure TWI612972BD00006
<210> 4
<211> 16
<212> PRT
<213> 智人
<400> 4
Figure TWI612972BD00007
<210> 5
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人
<400> 5
Figure TWI612972BD00008
<210> 6
<211> 26
<212> PRT
<213> 智人
<400> 6
Figure TWI612972BD00009
<210> 7
<211> 214
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 7
Figure TWI612972BD00010
Figure TWI612972BD00011
<210> 8
<211> 645
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 8
Figure TWI612972BD00012
<210> 9
<211> 236
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 9
Figure TWI612972BD00013
<210> 10
<211> 711
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 10
Figure TWI612972BD00014
Figure TWI612972BD00015
<210> 11
<211> 443
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 11
Figure TWI612972BD00016
Figure TWI612972BD00017
<210> 12
<211> 1332
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 12
Figure TWI612972BD00018
Figure TWI612972BD00019
<210> 13
<211> 462
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 13
Figure TWI612972BD00020
Figure TWI612972BD00021
Figure TWI612972BD00022
<210> 14
<211> 1389
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 14
Figure TWI612972BD00023
<210> 15
<211> 218
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 15
Figure TWI612972BD00024
<210> 16
<211> 657
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 16
Figure TWI612972BD00025
Figure TWI612972BD00026
<210> 17
<211> 238
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 17
Figure TWI612972BD00027
Figure TWI612972BD00028
<210> 18
<211> 717
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 18
Figure TWI612972BD00029
<210> 19
<211> 449
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 19
Figure TWI612972BD00030
Figure TWI612972BD00031
Figure TWI612972BD00032
<210> 20
<211> 1350
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 20
Figure TWI612972BD00033
<210> 21
<211> 468
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 21
Figure TWI612972BD00034
Figure TWI612972BD00035
Figure TWI612972BD00036
<210> 22
<211> 1407
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 22
Figure TWI612972BD00037
Figure TWI612972BD00038
<210> 23
<211> 217
<212> PRT
<213> 兔-小鼠嵌合體
<400> 23
Figure TWI612972BD00039
Figure TWI612972BD00040
<210> 24
<211> 654
<212> DNA
<213> 兔-小鼠嵌合體
<400> 24
Figure TWI612972BD00041
<210> 25
<211> 239
<212> PRT
<213> 兔-小鼠嵌合體
<400> 25
Figure TWI612972BD00042
Figure TWI612972BD00043
<210> 26
<211> 720
<212> DNA
<213> 兔-小鼠嵌合體
<400> 26
Figure TWI612972BD00044
<210> 27
<211> 433
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體
<400> 27
Figure TWI612972BD00045
Figure TWI612972BD00046
Figure TWI612972BD00047
<210> 28
<211> 1302
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體
<400> 28
Figure TWI612972BD00048
Figure TWI612972BD00049
<210> 29
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體
<400> 29
Figure TWI612972BD00050
Figure TWI612972BD00051
<210> 30
<211> 1359
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體
<400> 30
Figure TWI612972BD00052
<210> 31
<211> 213
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 31
Figure TWI612972BD00053
Figure TWI612972BD00054
<210> 32
<211> 642
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 32
Figure TWI612972BD00055
Figure TWI612972BD00056
<210> 33
<211> 235
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 33
Figure TWI612972BD00057
<210> 34
<211> 708
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 34
Figure TWI612972BD00058
<210> 35
<211> 449
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 35
Figure TWI612972BD00059
Figure TWI612972BD00060
<210> 36
<211> 1350
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 36
Figure TWI612972BD00061
<210> 37
<211> 468
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 37
Figure TWI612972BD00062
Figure TWI612972BD00063
Figure TWI612972BD00064
<210> 38
<211> 1407
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 38
Figure TWI612972BD00065
Figure TWI612972BD00066
<210> 39
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 39
Figure TWI612972BD00067
<210> 40
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 40
Figure TWI612972BD00068
<210> 41
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 41
Figure TWI612972BD00069
<210> 42
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 42
Figure TWI612972BD00070
<210> 43
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 43
Figure TWI612972BD00071
<210> 44
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 44
Figure TWI612972BD00072
<210> 45
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 45
Figure TWI612972BD00073
<210> 46
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 46
Figure TWI612972BD00074
<210> 47
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 47
Figure TWI612972BD00075
<210> 48
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 48
Figure TWI612972BD00076
<210> 49
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 49
Figure TWI612972BD00077
<210> 50
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 50
Figure TWI612972BD00078
<210> 51
<211> 5
<212> PRT
<213> 兔-小鼠嵌合體
<400> 51
Figure TWI612972BD00079
<210> 52
<211> 16
<212> PRT
<213> 兔-小鼠嵌合體
<400> 52
Figure TWI612972BD00080
<210> 53
<211> 4
<212> PRT
<213> 兔-小鼠嵌合體
<400> 53
Figure TWI612972BD00081
<210> 54
<211> 13
<212> PRT
<213> 兔-小鼠嵌合體
<400> 54
Figure TWI612972BD00082
<210> 55
<211> 7
<212> PRT
<213> 兔-小鼠嵌合體
<400> 55
Figure TWI612972BD00083
<210> 56
<211> 10
<212> PRT
<213> 兔-小鼠嵌合體
<400> 56
Figure TWI612972BD00084
<210> 57
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 57
Figure TWI612972BD00085
<210> 58
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 58
Figure TWI612972BD00086
<210> 59
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 59
Figure TWI612972BD00087
<210> 60
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 60
Figure TWI612972BD00088
<210> 61
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 61
Figure TWI612972BD00089
<210> 62
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 62
Figure TWI612972BD00090
<210> 63
<211> 20
<212> PRT
<213> 智人
<400> 63
Figure TWI612972BD00091
<210> 64
<211> 20
<212> PRT
<213> 智人
<400> 64
Figure TWI612972BD00092
<210> 65
<211> 20
<212> PRT
<213> 智人
<400> 65
Figure TWI612972BD00093
<210> 66
<211> 20
<212> PRT
<213> 智人
<400> 66
Figure TWI612972BD00094
<210> 67
<211> 20
<212> PRT
<213> 智人
<400> 67
Figure TWI612972BD00095
<210> 68
<211> 20
<212> PRT
<213> 智人
<400> 68
Figure TWI612972BD00096
<210> 69
<211> 20
<212> PRT
<213> 智人
<400> 69
Figure TWI612972BD00097
<210> 70
<211> 14
<212> PRT
<213> 智人
<400> 70
Figure TWI612972BD00098
<210> 71
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<400> 71
Figure TWI612972BD00099
<210> 72
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人
<400> 72
Figure TWI612972BD00100
<210> 73
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<400> 73
Figure TWI612972BD00101
<210> 74
<211> 399
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 74
Figure TWI612972BD00102
Figure TWI612972BD00103
<210> 75
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 75
Figure TWI612972BD00104
<210> 76
<211> 393
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 76
Figure TWI612972BD00105
Figure TWI612972BD00106
<210> 77
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 77
Figure TWI612972BD00107
<210> 78
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 78
Figure TWI612972BD00108
<210> 79
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 79
Figure TWI612972BD00109
<210> 80
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 80
Figure TWI612972BD00110
<210> 81
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 81
Figure TWI612972BD00111
<210> 82
<211> 24
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<400> 82
Figure TWI612972BD00112
<210> 83
<211> 20
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<400> 83
Figure TWI612972BD00113
<210> 84
<211> 20
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<400> 84
Figure TWI612972BD00114
Figure TWI612972BD00115
<210> 85
<211> 20
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<400> 85
Figure TWI612972BD00116
<210> 86
<211> 14
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<400> 86
Figure TWI612972BD00117
<210> 87
<211> 25
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<400> 87
Figure TWI612972BD00118
<210> 88
<211> 23
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<400> 88
Figure TWI612972BD00119
<210> 89
<211> 25
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<400> 89
Figure TWI612972BD00120
<210> 90
<211> 20
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<400> 90
Figure TWI612972BD00121
<210> 91
<211> 16
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<400> 91
Figure TWI612972BD00122
<210> 92
<211> 23
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<400> 92
Figure TWI612972BD00123
<210> 93
<211> 16
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<400> 93
Figure TWI612972BD00124
<210> 94
<211> 24
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<400> 94
Figure TWI612972BD00125
<210> 95
<211> 23
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<400> 95
Figure TWI612972BD00126
Figure TWI612972BD00127
<210> 96
<211> 18
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<400> 96
Figure TWI612972BD00128
<210> 97
<211> 22
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<400> 97
Figure TWI612972BD00129
<210> 98
<211> 213
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<400> 98
Figure TWI612972BD00130
Figure TWI612972BD00131
<210> 99
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 99
Figure TWI612972BD00132
<210> 100
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 100
Figure TWI612972BD00133
<210> 101
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 101
Figure TWI612972BD00134
<210> 102
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 102
Figure TWI612972BD00135
<210> 103
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 103
Figure TWI612972BD00136
<210> 104
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 104
Figure TWI612972BD00137
<210> 105
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 105
Figure TWI612972BD00138
<210> 106
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 106
Figure TWI612972BD00139
<210> 107
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 107
Figure TWI612972BD00140
<210> 108
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 108
Figure TWI612972BD00141
<210> 109
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 109
Figure TWI612972BD00142
<210> 110
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 110
Figure TWI612972BD00143
<210> 111
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 111
Figure TWI612972BD00144
<210> 112
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 112
Figure TWI612972BD00145
<210> 113
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 113
Figure TWI612972BD00146
<210> 114
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 114
Figure TWI612972BD00147
<210> 115
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 115
Figure TWI612972BD00148
<210> 116
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 116
Figure TWI612972BD00149
<210> 117
<211> 213
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 117
Figure TWI612972BD00150
<210> 118
<211> 642
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 118
Figure TWI612972BD00151
Figure TWI612972BD00152
<210> 119
<211> 235
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 119
Figure TWI612972BD00153
Figure TWI612972BD00154
<210> 120
<211> 708
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 120
Figure TWI612972BD00155
<210> 121
<211> 445
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 121
Figure TWI612972BD00156
Figure TWI612972BD00157
Figure TWI612972BD00158
<210> 122
<211> 1338
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 122
Figure TWI612972BD00159
<210> 123
<211> 464
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 123
Figure TWI612972BD00160
Figure TWI612972BD00161
Figure TWI612972BD00162
<210> 124
<211> 1395
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 124
Figure TWI612972BD00163
Figure TWI612972BD00164
<210> 125
<211> 215
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 125
Figure TWI612972BD00165
<210> 126
<211> 648
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 126
Figure TWI612972BD00166
<210> 127
<211> 237
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 127
Figure TWI612972BD00167
Figure TWI612972BD00168
<210> 128
<211> 714
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 128
Figure TWI612972BD00169
<210> 129
<211> 449
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 129
Figure TWI612972BD00170
Figure TWI612972BD00171
Figure TWI612972BD00172
<210> 130
<211> 1350
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 130
Figure TWI612972BD00173
Figure TWI612972BD00174
<210> 131
<211> 468
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 131
Figure TWI612972BD00175
Figure TWI612972BD00176
<210> 132
<211> 1407
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 132
Figure TWI612972BD00177
Figure TWI612972BD00178
<210> 133
<211> 214
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 133
Figure TWI612972BD00179
Figure TWI612972BD00180
<210> 134
<211> 645
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 134
Figure TWI612972BD00181
<210> 135
<211> 234
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 135
Figure TWI612972BD00182
Figure TWI612972BD00183
<210> 136
<211> 705
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 136
Figure TWI612972BD00184
<210> 137
<211> 447
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 137
Figure TWI612972BD00185
Figure TWI612972BD00186
<210> 138
<211> 1344
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 138
Figure TWI612972BD00187
Figure TWI612972BD00188
<210> 139
<211> 466
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 139
Figure TWI612972BD00189
Figure TWI612972BD00190
<210> 140
<211> 1401
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 140
Figure TWI612972BD00191
<210> 141
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 141
Figure TWI612972BD00192
Figure TWI612972BD00193
<210> 142
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 142
Figure TWI612972BD00194
Figure TWI612972BD00195
<210> 143
<211> 236
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 143
Figure TWI612972BD00196
Figure TWI612972BD00197
<210> 144
<211> 708
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 144
Figure TWI612972BD00198
<210> 145
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 145
Figure TWI612972BD00199
Figure TWI612972BD00200
Figure TWI612972BD00201
<210> 146
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 146
Figure TWI612972BD00202
Figure TWI612972BD00203
<210> 147
<211> 468
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 147
Figure TWI612972BD00204
Figure TWI612972BD00205
Figure TWI612972BD00206
<210> 148
<211> 1404
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 148
Figure TWI612972BD00207
<210> 149
<211> 214
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 149
Figure TWI612972BD00208
Figure TWI612972BD00209
<210> 150
<211> 645
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 150
Figure TWI612972BD00210
<210> 151
<211> 234
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 151
Figure TWI612972BD00211
<210> 152
<211> 705
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 152
Figure TWI612972BD00212
Figure TWI612972BD00213
<210> 153
<211> 447
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 153
Figure TWI612972BD00214
Figure TWI612972BD00215
<210> 154
<211> 1344
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 154
Figure TWI612972BD00216
Figure TWI612972BD00217
<210> 155
<211> 466
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 155
Figure TWI612972BD00218
Figure TWI612972BD00219
Figure TWI612972BD00220
<210> 156
<211> 1401
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 156
Figure TWI612972BD00221
Figure TWI612972BD00222
<210> 157
<211> 214
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 157
Figure TWI612972BD00223
<210> 158
<211> 642
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 158
Figure TWI612972BD00224
Figure TWI612972BD00225
<210> 159
<211> 234
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 159
Figure TWI612972BD00226
Figure TWI612972BD00227
<210> 160
<211> 702
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 160
Figure TWI612972BD00228
<210> 161
<211> 447
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 161
Figure TWI612972BD00229
Figure TWI612972BD00230
Figure TWI612972BD00231
<210> 162
<211> 1341
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 162
Figure TWI612972BD00232
<210> 163
<211> 466
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 163
Figure TWI612972BD00233
Figure TWI612972BD00234
Figure TWI612972BD00235
<210> 164
<211> 1398
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 164
Figure TWI612972BD00236
Figure TWI612972BD00237
<210> 165
<211> 214
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 165
Figure TWI612972BD00238
Figure TWI612972BD00239
<210> 166
<211> 645
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 166
Figure TWI612972BD00240
<210> 167
<211> 234
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 167
Figure TWI612972BD00241
Figure TWI612972BD00242
<210> 168
<211> 705
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 168
Figure TWI612972BD00243
<210> 169
<211> 447
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 169
Figure TWI612972BD00244
Figure TWI612972BD00245
Figure TWI612972BD00246
<210> 170
<211> 1344
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 170
Figure TWI612972BD00247
Figure TWI612972BD00248
<210> 171
<211> 466
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 171
Figure TWI612972BD00249
Figure TWI612972BD00250
<210> 172
<211> 1401
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 172
Figure TWI612972BD00251
Figure TWI612972BD00252
<210> 173
<211> 214
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 173
Figure TWI612972BD00253
Figure TWI612972BD00254
<210> 174
<211> 642
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 174
Figure TWI612972BD00255
<210> 175
<211> 234
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 175
Figure TWI612972BD00256
Figure TWI612972BD00257
<210> 176
<211> 702
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 176
Figure TWI612972BD00258
Figure TWI612972BD00259
<210> 177
<211> 450
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 177
Figure TWI612972BD00260
Figure TWI612972BD00261
<210> 178
<211> 1350
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 178
Figure TWI612972BD00262
Figure TWI612972BD00263
<210> 179
<211> 469
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 179
Figure TWI612972BD00264
Figure TWI612972BD00265
Figure TWI612972BD00266
<210> 180
<211> 1407
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 180
Figure TWI612972BD00267
<210> 181
<211> 214
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 181
Figure TWI612972BD00268
Figure TWI612972BD00269
<210> 182
<211> 645
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 182
Figure TWI612972BD00270
Figure TWI612972BD00271
<210> 183
<211> 234
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 183
Figure TWI612972BD00272
<210> 184
<211> 705
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 184
Figure TWI612972BD00273
<210> 185
<211> 447
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 185
Figure TWI612972BD00274
Figure TWI612972BD00275
<210> 186
<211> 1344
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 186
Figure TWI612972BD00276
<210> 187
<211> 466
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 187
Figure TWI612972BD00277
Figure TWI612972BD00278
Figure TWI612972BD00279
<210> 188
<211> 1401
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 188
Figure TWI612972BD00280
Figure TWI612972BD00281
<210> 189
<211> 213
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 189
Figure TWI612972BD00282
<210> 190
<211> 642
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 190
Figure TWI612972BD00283
<210> 191
<211> 235
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 191
Figure TWI612972BD00284
Figure TWI612972BD00285
<210> 192
<211> 708
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 192
Figure TWI612972BD00286
<210> 193
<211> 445
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 193
Figure TWI612972BD00287
Figure TWI612972BD00288
Figure TWI612972BD00289
<210> 194
<211> 1338
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 194
Figure TWI612972BD00290
<210> 195
<211> 464
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 195
Figure TWI612972BD00291
Figure TWI612972BD00292
<210> 196
<211> 1395
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 196
Figure TWI612972BD00293
Figure TWI612972BD00294
<210> 197
<211> 214
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 197
Figure TWI612972BD00295
Figure TWI612972BD00296
<210> 198
<211> 645
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 198
Figure TWI612972BD00297
<210> 199
<211> 234
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 199
Figure TWI612972BD00298
Figure TWI612972BD00299
<210> 200
<211> 705
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 200
Figure TWI612972BD00300
<210> 201
<211> 447
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 201
Figure TWI612972BD00301
Figure TWI612972BD00302
Figure TWI612972BD00303
<210> 202
<211> 1344
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 202
Figure TWI612972BD00304
Figure TWI612972BD00305
<210> 203
<211> 466
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 203
Figure TWI612972BD00306
Figure TWI612972BD00307
<210> 204
<211> 1401
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 204
Figure TWI612972BD00308
Figure TWI612972BD00309
<210> 205
<211> 215
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 205
Figure TWI612972BD00310
Figure TWI612972BD00311
<210> 206
<211> 645
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 206
Figure TWI612972BD00312
<210> 207
<211> 237
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 207
Figure TWI612972BD00313
Figure TWI612972BD00314
<210> 208
<211> 711
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 208
Figure TWI612972BD00315
Figure TWI612972BD00316
<210> 209
<211> 445
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 209
Figure TWI612972BD00317
Figure TWI612972BD00318
<210> 210
<211> 1335
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 210
Figure TWI612972BD00319
Figure TWI612972BD00320
<210> 211
<211> 464
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 211
Figure TWI612972BD00321
Figure TWI612972BD00322
<210> 212
<211> 1392
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 212
Figure TWI612972BD00323
<210> 213
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 213
Figure TWI612972BD00324
Figure TWI612972BD00325
<210> 214
<211> 645
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 214
Figure TWI612972BD00326
Figure TWI612972BD00327
<210> 215
<211> 237
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 215
Figure TWI612972BD00328
Figure TWI612972BD00329
<210> 216
<211> 711
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 216
Figure TWI612972BD00330
<210> 217
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 217
Figure TWI612972BD00331
Figure TWI612972BD00332
Figure TWI612972BD00333
<210> 218
<211> 1341
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 218
Figure TWI612972BD00334
Figure TWI612972BD00335
<210> 219
<211> 466
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 219
Figure TWI612972BD00336
Figure TWI612972BD00337
<210> 220
<211> 1398
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 220
Figure TWI612972BD00338
<210> 221
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 221
Figure TWI612972BD00339
<210> 222
<211> 645
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 222
Figure TWI612972BD00340
<210> 223
<211> 237
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 223
Figure TWI612972BD00341
Figure TWI612972BD00342
<210> 224
<211> 711
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 224
Figure TWI612972BD00343
<210> 225
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 225
Figure TWI612972BD00344
Figure TWI612972BD00345
<210> 226
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<400> 226
Figure TWI612972BD00346
Figure TWI612972BD00347
<210> 227
<211> 470
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 227
Figure TWI612972BD00348
Figure TWI612972BD00349
Figure TWI612972BD00350
<210> 228
<211> 1410
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 228
Figure TWI612972BD00351
<210> 229
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 229
Figure TWI612972BD00352
<210> 230
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 230
Figure TWI612972BD00353
<210> 231
<211> 235
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 231
Figure TWI612972BD00354
Figure TWI612972BD00355
<210> 232
<211> 705
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 232
Figure TWI612972BD00356
<210> 233
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 233
Figure TWI612972BD00357
Figure TWI612972BD00358
<210> 234
<211> 1341
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 234
Figure TWI612972BD00359
Figure TWI612972BD00360
<210> 235
<211> 466
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 235
Figure TWI612972BD00361
Figure TWI612972BD00362
Figure TWI612972BD00363
<210> 236
<211> 1398
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 236
Figure TWI612972BD00364
Figure TWI612972BD00365
<210> 237
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 237
Figure TWI612972BD00366
<210> 238
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 238
Figure TWI612972BD00367
<210> 239
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 239
Figure TWI612972BD00368
<210> 240
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 240
Figure TWI612972BD00369
<210> 241
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 241
Figure TWI612972BD00370
<210> 242
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 242
Figure TWI612972BD00371
<210> 243
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 243
Figure TWI612972BD00372
<210> 244
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 244
Figure TWI612972BD00373
<210> 245
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 245
Figure TWI612972BD00374
<210> 246
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 246
Figure TWI612972BD00375
<210> 247
<211> 14
<212> PRT
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<400> 247
Figure TWI612972BD00376
<210> 248
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 248
Figure TWI612972BD00377
<210> 249
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 249
Figure TWI612972BD00378
Figure TWI612972BD00379
<210> 250
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 250
Figure TWI612972BD00380
<210> 251
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 251
Figure TWI612972BD00381
<210> 252
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 252
Figure TWI612972BD00382
<210> 253
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 253
Figure TWI612972BD00383
<210> 254
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 254
Figure TWI612972BD00384
<210> 255
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 255
Figure TWI612972BD00385
Figure TWI612972BD00386
<210> 256
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 256
Figure TWI612972BD00387
<210> 257
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 257
Figure TWI612972BD00388
<210> 258
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 258
Figure TWI612972BD00389
<210> 259
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 259
Figure TWI612972BD00390
<210> 260
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 260
Figure TWI612972BD00391
<210> 261
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 261
Figure TWI612972BD00392
Figure TWI612972BD00393
<210> 262
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 262
Figure TWI612972BD00394
<210> 263
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 263
Figure TWI612972BD00395
<210> 264
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 264
Figure TWI612972BD00396
<210> 265
<211> 14
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 265
Figure TWI612972BD00397
<210> 266
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 266
Figure TWI612972BD00398
<210> 267
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 267
Figure TWI612972BD00399
<210> 268
<211> 13
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 268
Figure TWI612972BD00400
<210> 269
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 269
Figure TWI612972BD00401
<210> 270
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 270
Figure TWI612972BD00402
<210> 271
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 271
Figure TWI612972BD00403
<210> 272
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 272
Figure TWI612972BD00404
<210> 273
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 273
Figure TWI612972BD00405
<210> 274
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 274
Figure TWI612972BD00406
<210> 275
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 275
Figure TWI612972BD00407
<210> 276
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 276
Figure TWI612972BD00408
<210> 277
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 277
Figure TWI612972BD00409
<210> 278
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 278
Figure TWI612972BD00410
<210> 279
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 279
Figure TWI612972BD00411
<210> 280
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 280
Figure TWI612972BD00412
<210> 281
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 281
Figure TWI612972BD00413
<210> 282
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 282
Figure TWI612972BD00414
<210> 283
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 283
Figure TWI612972BD00415
<210> 284
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 284
Figure TWI612972BD00416
<210> 285
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 285
Figure TWI612972BD00417
<210> 286
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 286
Figure TWI612972BD00418
<210> 287
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 287
Figure TWI612972BD00419
<210> 288
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 288
Figure TWI612972BD00420
<210> 289
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 289
Figure TWI612972BD00421
<210> 290
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 290
Figure TWI612972BD00422
<210> 291
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 291
Figure TWI612972BD00423
<210> 292
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 292
Figure TWI612972BD00424
<210> 293
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 293
Figure TWI612972BD00425
<210> 294
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 294
Figure TWI612972BD00426
<210> 295
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 295
Figure TWI612972BD00427
<210> 296
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 296
Figure TWI612972BD00428
<210> 297
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 297
Figure TWI612972BD00429
<210> 298
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 298
Figure TWI612972BD00430
<210> 299
<211> 130
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 299
Figure TWI612972BD00431
<210> 300
<211> 390
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 300
Figure TWI612972BD00432
<210> 301
<211> 141
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 301
Figure TWI612972BD00433
Figure TWI612972BD00434
<210> 302
<211> 423
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 302
Figure TWI612972BD00435
<210> 303
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 303
Figure TWI612972BD00436
Figure TWI612972BD00437
<210> 304
<211> 390
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 304
Figure TWI612972BD00438
<210> 305
<211> 141
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 305
Figure TWI612972BD00439
Figure TWI612972BD00440
<210> 306
<211> 423
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 306
Figure TWI612972BD00441
<210> 307
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 307
Figure TWI612972BD00442
<210> 308
<211> 381
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 308
Figure TWI612972BD00443
<210> 309
<211> 139
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 309
Figure TWI612972BD00444
Figure TWI612972BD00445
<210> 310
<211> 417
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 310
Figure TWI612972BD00446
<210> 311
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 311
Figure TWI612972BD00447
Figure TWI612972BD00448
<210> 312
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 312
Figure TWI612972BD00449
<210> 313
<211> 139
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 313
Figure TWI612972BD00450
Figure TWI612972BD00451
<210> 314
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 314
Figure TWI612972BD00452
<210> 315
<211> 128
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 315
Figure TWI612972BD00453
Figure TWI612972BD00454
<210> 316
<211> 381
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 316
Figure TWI612972BD00455
<210> 317
<211> 138
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 317
Figure TWI612972BD00456
Figure TWI612972BD00457
<210> 318
<211> 411
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 318
Figure TWI612972BD00458
<210> 319
<211> 130
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 319
Figure TWI612972BD00459
<210> 320
<211> 390
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 320
Figure TWI612972BD00460
<210> 321
<211> 138
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 321
Figure TWI612972BD00461
<210> 322
<211> 414
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<223> 人化抗體序列
<400> 322
Figure TWI612972BD00462
<210> 323
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 323
Figure TWI612972BD00463
<210> 324
<211> 320
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 324
Figure TWI612972BD00464
Figure TWI612972BD00465
<210> 325
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人
<400> 325
Figure TWI612972BD00466
<210> 326
<211> 327
<212> PRT
<213> 智人
<400> 326
Figure TWI612972BD00467
Figure TWI612972BD00468
<210> 327
<211> 120
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 327
Figure TWI612972BD00469
Figure TWI612972BD00470
<210> 328
<211> 120
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 328
Figure TWI612972BD00471
<210> 329
<211> 120
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 329
Figure TWI612972BD00472
Figure TWI612972BD00473
<210> 330
<211> 226
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 330
Figure TWI612972BD00474
Figure TWI612972BD00475
<210> 331
<211> 447
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 331
Figure TWI612972BD00476
Figure TWI612972BD00477
<210> 332
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 332
Figure TWI612972BD00478
Figure TWI612972BD00479
<210> 333
<211> 324
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 333
Figure TWI612972BD00480
Figure TWI612972BD00481
<210> 334
<211> 213
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 334
Figure TWI612972BD00482
Figure TWI612972BD00483
<210> 335
<211> 444
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 335
Figure TWI612972BD00484
Figure TWI612972BD00485
<210> 336
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 336
Figure TWI612972BD00486
Figure TWI612972BD00487
<210> 337
<211> 324
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 337
Figure TWI612972BD00488
<210> 338
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 338
Figure TWI612972BD00489
<210> 339
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 339
Figure TWI612972BD00490
<210> 340
<211> 1395
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 340
Figure TWI612972BD00491
<210> 341
<211> 213
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 341
Figure TWI612972BD00492
<210> 342
<211> 639
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 342
Figure TWI612972BD00493
Figure TWI612972BD00494
<210> 343
<211> 235
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 343
Figure TWI612972BD00495
Figure TWI612972BD00496
<210> 344
<211> 705
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 344
Figure TWI612972BD00497
<210> 345
<211> 446
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 345
Figure TWI612972BD00498
Figure TWI612972BD00499
Figure TWI612972BD00500
<210> 346
<211> 1338
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 346
Figure TWI612972BD00501
<210> 347
<211> 465
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 347
Figure TWI612972BD00502
Figure TWI612972BD00503
Figure TWI612972BD00504
<210> 348
<211> 1395
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 348
Figure TWI612972BD00505
Figure TWI612972BD00506
<210> 349
<211> 417
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 349
Figure TWI612972BD00507
<210> 350
<211> 218
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 350
Figure TWI612972BD00508
Figure TWI612972BD00509
<210> 351
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 351
Figure TWI612972BD00510
<210> 352
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 352
Figure TWI612972BD00511
<210> 353
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 353
Figure TWI612972BD00512
<210> 354
<211> 657
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 354
Figure TWI612972BD00513
Figure TWI612972BD00514
<210> 355
<211> 238
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 355
Figure TWI612972BD00515
Figure TWI612972BD00516
<210> 356
<211> 717
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 356
Figure TWI612972BD00517
<210> 357
<211> 442
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 357
Figure TWI612972BD00518
Figure TWI612972BD00519
Figure TWI612972BD00520
<210> 358
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 358
Figure TWI612972BD00521
<210> 359
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 359
Figure TWI612972BD00522
<210> 360
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 360
Figure TWI612972BD00523
<210> 361
<211> 1329
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 361
Figure TWI612972BD00524
Figure TWI612972BD00525
<210> 362
<211> 461
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 362
Figure TWI612972BD00526
Figure TWI612972BD00527
<210> 363
<211> 1386
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 363
Figure TWI612972BD00528
Figure TWI612972BD00529
<210> 364
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 364
Figure TWI612972BD00530
Figure TWI612972BD00531
<210> 365
<211> 318
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 365
Figure TWI612972BD00532
<210> 366
<211> 120
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 366
Figure TWI612972BD00533
<210> 367
<211> 360
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 367
Figure TWI612972BD00534
Figure TWI612972BD00535
<210> 368
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 368
Figure TWI612972BD00536
<210> 369
<211> 324
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 369
Figure TWI612972BD00537
<210> 370
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 370
Figure TWI612972BD00538
Figure TWI612972BD00539
<210> 371
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 371
Figure TWI612972BD00540
<210> 372
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 372
Figure TWI612972BD00541
Figure TWI612972BD00542
<210> 373
<211> 324
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 373
Figure TWI612972BD00543
<210> 374
<211> 122
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 374
Figure TWI612972BD00544
<210> 375
<211> 366
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 375
Figure TWI612972BD00545
Figure TWI612972BD00546
<210> 376
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 376
Figure TWI612972BD00547
<210> 377
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 377
Figure TWI612972BD00548
<210> 378
<211> 123
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 378
Figure TWI612972BD00549
Figure TWI612972BD00550
<210> 379
<211> 369
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 379
Figure TWI612972BD00551
<210> 380
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 380
Figure TWI612972BD00552
Figure TWI612972BD00553
<210> 381
<211> 324
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 381
Figure TWI612972BD00554
<210> 382
<211> 121
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 382
Figure TWI612972BD00555
<210> 383
<211> 363
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 383
Figure TWI612972BD00556
Figure TWI612972BD00557
<210> 384
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 384
Figure TWI612972BD00558
<210> 385
<211> 324
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 385
Figure TWI612972BD00559
<210> 386
<211> 125
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 386
Figure TWI612972BD00560
<210> 387
<211> 375
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 387
Figure TWI612972BD00561
<210> 388
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 388
Figure TWI612972BD00562
Figure TWI612972BD00563
<210> 389
<211> 318
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 389
Figure TWI612972BD00564
<210> 390
<211> 121
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 390
Figure TWI612972BD00565
<210> 391
<211> 363
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 391
Figure TWI612972BD00566
<210> 392
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 392
Figure TWI612972BD00567
Figure TWI612972BD00568
<210> 393
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 393
Figure TWI612972BD00569
Figure TWI612972BD00570
<210> 394
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 394
Figure TWI612972BD00571
Figure TWI612972BD00572
Figure TWI612972BD00573
<210> 395
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 395
Figure TWI612972BD00574
Figure TWI612972BD00575
Figure TWI612972BD00576
<210> 396
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人化抗體序列
<400> 396
Figure TWI612972BD00577
Figure TWI612972BD00578

Claims (22)

  1. 一種結合SEQ ID NO：1之骨硬化素之抗-骨硬化素抗體之用途，其係用於製備以約70mg至約450mg之量抑制骨再吸收之藥物。
  2. 一種結合SEQ ID NO：1之骨硬化素之抗-骨硬化素抗體之用途，其係用於製備以約70mg至約450mg之量投與患有骨相關病症或處於患骨相關病症之風險中之人類之藥物。
  3. 一種結合SEQ ID NO：1之骨硬化素之抗-骨硬化素抗體之用途，其係用於製備以約70mg至約450mg之量增加骨礦物質密度之藥物。
  4. 一種結合SEQ ID NO：1之骨硬化素之抗-骨硬化素抗體之用途，其係用於製備治療骨相關病症之藥物，該藥物係以約70mg至約450mg之量治療第一段時間，接著以約70mg至約450mg之量治療第二段時間，以有效維持骨礦物質密度。
  5. 如請求項4之用途，其中該第一段時間為3個月或更短。
  6. 如請求項4或5之用途，其中該第二段時間為至少6個月。
  7. 如請求項1及3至5之用途，其中該個體為人類。
  8. 一種結合SEQ ID NO：1之骨硬化素之抗-骨硬化素抗體之用途，其係用於製備以約70mg至約450mg之量治療患有低鈣血症或高鈣血症或處於患低鈣血症或高鈣血症之風險中之人類的骨相關病症之藥物。
  9. 如請求項8之用途，其中該低鈣血症或該高鈣血症係由慢性腎病、腎衰竭、原發性或繼發性副甲狀腺功能亢進、假副甲狀腺功能亢進、副甲狀腺功能減退、假副甲狀腺功能減退、鎂耗盡、重度高鎂血症、維生素D缺乏、高磷酸鹽血症、急性胰炎、 骨饑餓症候群、螯合作用、成骨細胞轉移、膿毒病、手術、化學療法、瘤形成症候群、副甲狀腺功能減退、家族性低尿鈣高鈣血症、肉狀瘤病、肺結核、鈹中毒症、組織漿菌病、念珠菌病、球黴菌病、組織細胞增多病X、霍奇金氏或非霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's or Non-Hodgkin's lymphoma)、克羅恩氏病(Crohn's disease)、韋格納肉牙腫病(Wegener's granulomatosis)、肺炎、聚矽氧誘發之肉芽瘤、噻嗪(thiazide)利尿劑或鋰之投與或行動不便引起。
  10. 一種結合SEQ ID NO：1之骨硬化素之抗-骨硬化素抗體之用途，其係用於製備治療(a)忌用副甲狀腺素或其類似物治療之人類或(b)忌用雙膦酸鹽治療之人類之骨相關病症的藥物。
  11. 如請求項2、4、5及8中任一項之用途，其中該骨相關病症係選自由以下組成之群：軟骨發育不全、鎖骨顱骨發育不全、內生性軟骨瘤、纖維結構不良、高雪氏病(Gaucher's Disease)、低磷酸鹽性佝僂病、馬凡氏症候群(Marfan's syndrome)、多發性遺傳性外生骨疣、神經纖維瘤、成骨不全症、骨硬化病、脆弱性骨硬化、硬化病變、假關節、化膿性骨髓炎、牙周病、抗癲癇藥物誘發之骨流失、原發性和繼發性副甲狀腺功能亢進、家族性副甲狀腺功能亢進症候群、體重減輕誘發之骨流失、男性之骨質疏鬆症、絕經後骨流失、骨關節炎、腎性骨營養不良、浸潤性骨病症、口腔骨流失、頜骨壞死、青少年佩吉特氏病(juvenile Paget's disease)、肢骨紋狀肥大、代謝性骨病、肥大細胞增多症、鐮刀型細胞貧血/疾病、器官移植相關骨流失、腎移植相關骨流失、全身性紅斑狼瘡、強直性脊椎炎、癲癇症、青少年關 節炎皮疹、地中海貧血、黏多醣病、法布瑞疾病(Fabry Disease)、特納症候群(Turner Syndrome)、唐氏症候群(Down Syndrome)、克林費特症候群(Klinefelter Syndrome)、麻瘋病、佩特茲病(Perthe's Disease)、青少年特發性脊柱側凸、嬰兒發作之多系統發炎性疾病、韋徹斯特症候群(Winchester Syndrome)、曼克斯疾病(Menkes Disease)、威爾遜氏病(Wilson's Disease)、缺血性骨病(諸如股骨頭缺血性壞死(Legg-Calve-Perthes disease)、區域遷移性骨質疏鬆症)、貧血狀態、由類固醇引起之病狀、糖皮質激素誘發之骨流失、肝素誘發之骨流失、骨髓病症、壞血病、營養不良、鈣缺乏症、骨質疏鬆症、骨質減少、酒精中毒、慢性肝病、絕經後狀態、慢性發炎性病狀、類風濕性關節炎、發炎性腸病、潰瘍性結腸炎、發炎性結腸炎、克羅恩氏病、月經過少、閉經、妊娠、糖尿病、甲狀腺功能亢進、甲狀腺病症、副甲狀腺病症、庫欣氏病(Cushing's disease)、肢端肥大症、性腺功能減退、行動不便或失能、反射性交感神經營養不良症侯群、區域性骨質疏鬆症、骨軟化、與關節置換相關之骨流失、HIV相關骨流失、與生長激素損失相關之骨流失、與囊性纖維化相關之骨流失、化學療法相關骨流失、腫瘤誘發之骨流失、癌症相關骨流失、激素去除之骨流失、多發性骨髓瘤、藥物誘發之骨流失、神經性厭食、疾病相關面骨流失、疾病相關顱骨流失、疾病相關頜骨流失、疾病相關顱骨流失、與老化相關之骨流失、與老化相關之面骨流失、與老化相關之顱骨流失、與老化相關之頜骨流失、與老化相關之顱骨流失及與空間飛行相關之骨流失。
  12. 如請求項1至5及8至10中任一項之用途，其中該抗-骨硬化素抗體之量為約70mg至約210mg。
  13. 如請求項1至5及8至10中任一項之用途，其中該抗-骨硬化素抗體之量為約70mg。
  14. 如請求項1至5及8至10中任一項之用途，其中該抗-骨硬化素抗體之量為約140mg。
  15. 如請求項1至5及8至10中任一項之用途，其中該抗-骨硬化素抗體之量為約210mg。
  16. 如請求項1至5及8至10中任一項之用途，其中該抗-骨硬化素抗體之量係每兩週投與至該個體一次。
  17. 如請求項1至5及8至10中任一項之用途，其中該抗-骨硬化素抗體之量係每月投與至該個體一次。
  18. 如請求項1至5及8至10中任一項之用途，其中該抗-骨硬化素抗體包含重鏈及輕鏈。
  19. 如請求項1至5及8至10中任一項之用途，其中該抗-骨硬化素抗體為人類抗體、人化抗體、單株抗體或嵌合抗體。
  20. 如請求項2及8至10中任一項之用途，其中該人類為絕經後女性。
  21. 如請求項20之用途，其中該人類患有骨質疏鬆症。
  22. 一種容器，其包含約70mg至約450mg之量的結合SEQ ID NO：1之骨硬化素之抗骨硬化素抗體。
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