TWI507197B - 醫藥組成物於製備不正常多麩醯胺聚集類疾病之藥物上之用途 - Google Patents

Description

醫藥組成物於製備不正常多麩醯胺聚集類疾病之藥物上之用途

本發明係關於一種醫藥組成物於製備不正常多麩醯胺(polyglutamine)聚集類疾病之藥物上之用途，其中該醫藥組成物包含海藻糖類化合物，其可增加細胞自噬活性，以達到減少多麩醯胺聚集的功效。

小腦萎縮症(spinocerebellar atrophy)，又稱脊髓小腦萎縮症或脊髓小腦共濟失調症(spinocerebellar ataxia，簡寫為SCA)，是一種複雜的異質性體染色體顯性遺傳的神經退化性疾病(heterogeneous autosomal dominant neurodegenerative disorder)，起因於致病基因中CAG三核苷酸重複擴增，轉譯出的突變蛋白包含長的多麩醯胺鏈，聚集在神經細胞之細胞核和細胞質中。小腦萎縮症臨床症狀包括小腦功能退化及來自神經系統其他部份障礙的症狀。

目前市面上並無可治療或減緩多麩醯胺小腦萎縮症病程的藥物，而其症狀是不能逆轉的：患者會由不能妥善地控制行為開始；隨著病情惡化，逐漸變得無法行 走和提筆，最終進展至無法言語與吞嚥，最惡劣的情況下患者更會以死亡告終。然而，即使小腦、腦幹、脊髓萎縮，大腦正常的機能以及智力均完全不受影響，使患者能清楚認知到身體逐漸變得不能活動的事實。

有鑒於全球罹患小腦萎縮症之人口逐漸上升，若能找出一種能夠減少多麩醯胺聚集之化合物，勢必能應用於製造不正常多麩醯胺聚集類疾病之醫藥組成物，協助治療如小腦萎縮症之神經退化性疾病，進而有效延緩疾病惡化及使病患獲得較佳的生活品質。

本發明之主要目的係在提供一種醫藥組成物於製備不正常多麩醯胺(polyglutamine)聚集類疾病之藥物上之用途，俾能協助治療如小腦萎縮症之神經退化性疾病。

本發明之另一目的係在提供一種醫藥組成物於製備增加細胞自噬(autophagy)活性之藥物上之用途，俾能達到減少多麩醯胺聚集之目的。

為達成上述目的，本發明提供一種醫藥組成物於製備不正常多麩醯胺聚集類疾病之藥物上之用途，該醫藥組成物包括一海藻糖類化合物，其係選自由下式1、式2、式3所示化合物、及其衍生化合物所組成之群組。

此外，上述如式1、式2或式3所示之化合物具有增加細胞自噬活性之功能，在不正常多麩醯胺聚集類疾病中，多麩醯胺擴增造成蛋白不正常摺疊，進而聚集堆積，影響清除錯誤摺疊蛋白之細胞自噬功能。

然而，上述如式1、式2或式3所示之化合物，其經過修飾的衍生化合物也可能有相似的效果，例如，經化學修飾的衍生化合物可能包括：以任何習知化學方法在化合物的氫氧基(-OH)位置上進行修飾取代，成為胺基之胺基糖類(amino sugar)、氫基之去氧糖類(deoxy sugar)、磷酸基之磷酸糖類(phospho sugar)、C_1-10直鏈或支鏈烷基、C_2-10直鏈或支鏈烯基、C_2-10直鏈或支鏈炔基、C_3-12環烷基、C_3-12環烯基、C₆或C₁₀或C₁₄芳基；或在化合物的碳原子上氧化成為羧基(-COOH)之酸糖類(acidic sugar)。據此，本技術領域之人可藉由常理推知修飾程度，而不僅限於上述所舉之修飾種類。

其中，該不正常多麩醯胺聚集類疾病不受限，較佳為小腦萎縮症。在小腦萎縮症中，已知有八種是多麩醯胺(polyQ)之(CAG)n重複擴增所導致，包括SCA1、SCA2、SCA3、SCA6、SCA7、SCA8、SCA17及DRPLA(dentatorubropallidoluy-sianatrophy)。這類與多麩醯胺擴增有關的SCA顯示對小腦、腦幹與脊髓有選擇性漸進退化的情形，且在退化的神經中，細胞核或細胞質內有顯著地多麩醯胺蛋白聚集沉積，進而導致特定神經之功能不全及退化現象。

上述如式1、式2或式3所示之化合物之使用濃度並無特別限制，可依實際使用狀況(如疾病嚴重程度或併用藥物等)而加以調整；於本發明之實施例中，上述如式1、式2或式3所示之化合物濃度較佳於50nM至200μM之範圍內，更佳於100nM至100μM之範圍內。

在本發明之醫藥組成物中，可更包括一海藻糖酶抑制劑，該海藻糖酶抑制劑可抑制海藻糖酶的活性，使海藻糖免於被海藻糖酶分解；並且包含於本發明之醫藥組成物時，該醫藥組成物能更降低多麩醯胺蛋白的聚集。於此，該海藻糖酶抑制劑並無特別限制，可為本技術領域中已知的各種海藻糖酶抑制劑，例如井岡霉素A(validamycin A)、井岡羥胺A(validoxylamine A)、海藻唑啉(trehazolin)、MDL 25637、栗樹精胺(castanospermine)、去氧野尻黴素(deoxynojirimycin)、1-thiatrehazolin、沙波塔定(salbostatin)、或打碗花素B4(calystegin B4)。

其中，上述如式1、式2或式3所示之化合物可增加細胞自噬活性，其可能是透過增加細胞自噬體的表現量、及LC3-II/LC3-I(輕鏈3蛋白-II(light-chain 3 protein-II)/輕鏈3蛋白-I)比率以達到提升細胞自噬活性之目的。

據此，本發明另提供一種減少多麩醯胺聚集之方法，包括：提供一目標物；以及給予該目標物一醫藥組成物，該醫藥組成物包含：如式1、式2、或式3所示之海藻糖類化合物中之至少一種。

本文所使用的「降低」、「減少」、或「抑制」名詞，係指將包含本發明之式1、式2、或式3所示化合物之醫藥組成物，投予患有不正常多麩醯胺(polyglutamine)聚集類疾病(例如小腦萎縮症)、具有疾病症狀、或具有朝疾病發展傾向的目標物，以期達到治療、減輕、減緩、醫治、改善、或改進此病症、症狀之傾向。

為實行本發明所述之用途，上述化合物所製備之醫藥組成物，取決於待治療的疾病以及該疾病的嚴重程度，可經由口服、非口服、噴霧吸入、局部、經直腸、經鼻、舌下、陰道、或經由植入型藥盒(implanted reservoir)等方式投予。於此使用之「非口服」(parenteral)係指皮下注射、皮內注射、靜脈內注射、肌肉內注射、關節腔內注射、動脈內注射、關節液內注射、胸腔內注射、脊髓內注射、疾病部位內注射、及顱內注射或注入技術。

因此，上述化合物所製備之醫藥組成物可透過任何習知製藥程序，進而形成用於預防與治療不正常多麩醯胺聚集類疾病之保健食品與臨床治療用藥。例如，依據使用需求，上述化合物所製備之醫藥組成物可包括：至少一種本技術領域中之醫藥學上可接受之載體、稀釋劑或賦形劑，例如將化合物包埋在脂質體(liposome)中以利於運送、吸收；以水懸浮液、分散液或溶液稀釋以利注射；或製成膠囊、錠片形式以方便存放及攜帶。

詳述之，本發明之化合物可調配成固體或液體形式。固體製劑形式可包括，但不限於：粉劑、顆粒劑、 片劑、膠囊劑以及栓劑。固體調配物可包括，但不限於：賦形劑、調味劑、黏合劑、防腐劑、崩解劑、助流劑以及填料。液體製劑形式可包括，但不限於：水、溶液(如：丙二醇溶液)、懸浮液、以及乳劑，且該液體製劑形式可與適合的著色劑、調味劑、穩定劑以及增稠劑混合而製備。

舉例而言，粉末製劑的製備係將本發明之化合物與適合之藥學上可接受的賦形劑(如：蔗糖、澱粉以及微晶纖維素)簡單地混合。顆粒製劑的製備則是將本發明之化合物、適合之藥學上可接受的賦形劑、適合之藥學上可接受的黏結劑(如：聚乙烯基吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone)、以及羥丙基纖維素)，然後透過利用溶劑(如：水、酒精及異丙醇)之濕式製粒方法製造；或是透過利用壓縮力的乾式製粒方法製造。此外，片劑製劑的製備可將顆粒製劑與適合的藥學上可接受之助流劑(如：硬脂酸鎂)混合，接著使用壓片機將其壓成片劑製劑。據此，可根據需求而選用藥物形式。

圖1係本發明一較佳實施例使用之海藻糖類化合物之化學結構、化學式及分子量示意圖。

圖2係本發明一較佳實施例之經多西環素誘導之ATXN3/Q_14-75-GFP蛋白表現之西方墨點法分析結果。

圖3係本發明一較佳實施例之經海藻糖類化合物處理之ATXN3/Q₇₅-GFP細胞之多麩醯胺聚集分析結果。

圖4A係本發明一較佳實施例之海藻糖類化合物之水解性分析結果。

圖4B係本發明一較佳實施例之海藻糖類化合物之抑制海藻糖酶活性分析結果。

圖5A係本發明一較佳實施例之經多西環素誘導之DsRed-LC3蛋白表現之西方墨點法分析結果。

圖5B係本發明一較佳實施例之經海藻糖類化合物處理之Flp-In 293 DsRed-LC3細胞之細胞自噬活性分析結果。

圖5C係本發明一較佳實施例之海藻糖類化合物處理之Flp-In 293 DsRed-LC3細胞之LC3-II/LC3-I比率分析結果。

圖6係本發明一較佳實施例之經海藻糖類化合物處理之SH-SY5Y TBP/Q₇₉細胞之多麩醯胺聚集分析結果。

圖7係本發明一較佳實施例之經海藻糖類化合物處理之SCA17小鼠小腦切片培養之多麩醯胺聚集分析結果。

[海藻醣類化合物]

基於化合物拓樸構型(topology)及官能基分析，自ZINC化合物資料庫(http：//zinc.docking.org/)搜尋海藻醣類化合物，利用同源模擬器(homology-modeling server)得到人類海藻糖結構，並使用對接工具GEMDOCK對接該些化合物，及使用iGEMDOCK篩選與海藻糖相似的氫鍵網絡者。總共對資料庫中的17,833,934個化合物(包含FDA藥物及自然產物)進行測試，而挑選出21種化合物，其中9種可 由市面上取得(如圖1所示之9種化合物，由左至右、由上至下分別為海藻糖(trehalose)：化學式C₁₂H₂₂O₁₁、分子量342.30；α-D-乳糖(α-D-lactose)：化學式C₁₂H₂₂O₁₁、分子量342.30；α-D-乳酮糖(α-D-lactulose)：化學式C₁₂H₂₂O₁₁、分子量342.30；妥布黴素(tobramycin)：化學式C₁₈H₃₇N₅O₉、分子量467.52；卡那徽素A(kanamycin A)：化學式C₁₈H₃₆N₄O₁₁、分子量484.50；阿卡波糖(acarbose)：化學式C₂₅H₄₃NO₁₈、分子量645.61；D-(+)-蜜二糖(D-(+)-melibiose)：化學式C₁₂H₂₂O₁₁、分子量342.30；海藻糖-6-磷酸酯(trehalose-6-phosphate)：化學式C₁₂H₂₁O₁₄P、分子量420.26；巴拉金糖水合物(palatinose hydrate)：化學式C₁₂H₂₂O₁₁、分子量342.30；硫代雙葡萄糖苷(thiodiglucoside)：化學式C₁₂H₂₂O₁₀S、分子量358.36；其化學式及分子量亦標示於各化合物結構下方)，取之測試其降低ATXN3/Q₇₅聚集之潛能。

[建立ATXN3之cDNA]

利用SuperScript^TM III反轉錄酶(購自Invitrogen)，將200ng之自神經母細胞瘤SK-N-SH細胞分離出之聚腺苷酸化(polyadenylated)RNA反轉錄；用於擴增ATXN3/Q₁₄ cDNA(+826至+1152，NM_004993)之正向及反向引子分別為SEQ ID NO：1之5'-ATTCAGCTAAGTATGCAAGGTAGTTCCA(畫線處為Met257密碼子)及SEQ ID NO：2之5'-CATGCCATGGCATGTTTTTTTCCTTCTGTT(畫線處為NcoI酵素位置)。接著，將擴增之含3' polyQ之cDNA片段(轉 譯出胺基酸257至361)轉殖入pGEM-T Easy(購自Promega)並定序；使用EcoRI和NcoI切割ATXN3/Q₁₄ cDNA後再轉殖入pEGFP-N1(購自Clontech)。然後，使用HindIII-NotI切割含ATXN3/Q₁₄-EGFP之DNA片段後再轉殖入pcDNA5/FRT/TO(購自Invitrogen)。另外，製作ATXN3/Q₇₅ cDNA係將88bp之ATXN3/Q₁₄ BsmBI-BsmFI片段置換成自SCA3患者cDNA株之271bp ATXN3/Q₇₅片段。

[Flp-In 293 ATXN3細胞株與SH-SY5Y TBP細胞株]

使用轉殖之pcDNA5/FRT/TO-nTBP/Q_36-79-GFP質體，經標的插入(targeting insertion)Flp-In-SH-SY5Y宿主細胞以形成等量基因的TBP細胞株。以微脂粒法轉染法(LF2000，購自Invitrogen)共轉染該重組質體與一表現Flp重組酶之質體pOG44(購自Invitrogen)至上述神經瘤SH-SY5Y宿主細胞株中。此外，使用轉殖之pcDNA5/FRT/TO-ATXN3/Q₁₄及Q₇₅質體，經標的插入(targeting insertion)Flp-In^TM-293細胞以形成等量基因的ATXN3/Q_14-75細胞株。上述細胞株皆培養於含5μg/mL殺稻瘟素(blasticidin S)及100μg/mL潮黴素(hygromycin)(購自InvivoGen)的培養液中以篩選細胞。

[ATXN3/Q ₇₅ 及TBP/Q ₇₉ 聚集試驗]

將293 ATXN3/Q₇₅-GFP細胞種入96孔盤中，每孔種2×10⁴個細胞，培養24小時後，處理不同濃度之100nM至100μM之海藻糖類化合物、及組蛋白去乙醯酶抑制劑 (suberoylanilide hydroxamic acid，SAHA；購自Cayman Chemical)處理。處理8小時後，每孔添加10μg/mL之多西環素(doxycycline，購自BD)，作用6天以誘導ATXN3/Q₇₅-GFP融合蛋白表現；另添加5μM益樂鉑(oxaliplatin，購自Sigma)，以透過抑制細胞分裂來累積多麩醯胺聚集量。接著，使用0.1μg/mL之Hoechst 33342(購自Sigma)染細胞核，且利用高通量分析系統在482/536nm(EGFP)波長之激發/發散下測定多麩醯胺聚集量百分比。

將SH-SY5Y TBP/Q₇₉-GFP細胞種入6孔盤中，每孔種2×10⁵個細胞，同時添加10μM全反式視黃酸(all trans retinoic acid，購自Sigma)。培養24小時後，處理10μM之海藻糖類化合物，處理8小時後，每孔添加5μg/mL之多西環素，並仍將細胞在含10μM全反式視黃酸、多西環素、及海藻糖類化合物之培養液中維持7天。接著，使用0.1μg/mL之Hoechst 33342染細胞核，且利用高通量分析系統測定多麩醯胺聚集百分比。

[水解海藻糖類化合物]

使用豬腎海藻糖酶(porcine kidney trehalase，編號T8778，購自Sigma-Aldrich)測試海藻糖類化合物之水解性；取1mU海藻糖酶加入50μl反應液，其中反應液包含135mM檸檬酸(pH 5.7)、28mM海藻糖類化合物。另外，測試海藻糖類化合物之海藻糖酶活性抑制情形，取1mU海藻糖酶加入50μl反應液，其中反應液包含135mM檸檬酸(pH 5.7)、228mM海藻糖，再加入44.8mM乳酮糖、44.8mM 蜜二糖、0.2μM井岡霉素A(validamycin A)、或0.2μM井岡羥胺A(validoxylamine A)。在37℃下作用2小時後，在沸水中加熱該混合物15分鐘以終止反應，測量海藻糖類化合物產生的葡萄糖量以判斷海藻糖酶活性。利用裝設折射率(RI)探測器(SFD，RI 2000)之有高效能液相層析儀(HPLC，Schambeck SFD 2100)，在1ml/min流速下測量醣類含量；使用以75%乙腈、24% Milli-Q水、以及1%甲酸平衡之醣類分析管柱(Shodex SUGAR SZ5532，6.0mm ID×150mm L)；以及RI探測器及管柱溫度係分別設定在40及60℃。

[Flp-In 293 DsRed-LC3細胞及細胞自噬試驗]

利用順向引子(SEQ ID NO：3之5’-AAGCTTCCATGCCGTCGGAGAAG；畫線處為HindIII酵素位置)及反向引子(SEQ ID NO：4之5’-TTTTACACTGACAATTTCATC)，將人類cDNA之LC3序列利用PCR擴增，產生帶有人類微管相關蛋白1輕鏈3β(human microtubule-associated protein 1 light chain 3 beta；MAP1LC3B，NM_022818)的pDsRed-LC3。接著，將擴增之LC3 cDNA轉殖入pGEM-T Easy(購自Promega)並定序；使用HindIII和EcoRI切割後再轉殖入pDsRed-Monomer-C1(購自Clontech)之相對位置。然後，將含DsRed-LC3之DNA片段與pcDNA5/FRT/TO(購自Invitrogen)之BamHI-AhdI(997~4215)及AhdI-EcoRV(4215~1032)片段相接，最後利用該質體產生Flp-In DsRed-LC3細胞。上述細胞株培養於含5μg/mL殺稻瘟素(blasticidin S)及100μg/mL潮黴素 (hygromycin)(購自InvivoGen)的培養液中以篩選細胞。

使用T-Pro試劑(JF Biotechnology)將ATXN3/Q₇₅質體(5μg)轉染入DsRed-LC3細胞(10⁶個)，用於海藻糖類化合物引發的細胞自噬活性試驗。24小時後，將轉染細胞種植入96孔盤(每孔2×10⁴個細胞)，待生長20小時，以海藻糖、乳酮糖或蜜二糖(10~50μM)處理8小時。每孔添加10μg/mL之多西環素(doxycycline，購自BD)，作用6天以誘導DsRed-LC3及ATXN3/Q₇₅表現；使用高通量分析(HCA)系統(ImageXpressMICRO，購自Molecular Devices)於激發/發散波長562/624nm分析之。

[西方墨點法(Western Blot)試驗]

使用含5%甘油、0.5% Triton X-100、1mM二硫蘇糖醇、以及蛋白分解酶抑制劑混合物(Sigma)之裂解緩衝溶液打破細胞，以得到總蛋白。取20μg總蛋白於10% SDS-聚丙烯醯胺膠體進行電泳，並轉漬至硝化纖維膜。加入GFP(以1：500稀釋，購自Santa Cruz)、LC3(以1：3000稀釋，購自MBL International)、β-肌動蛋白(以1：5000稀釋，購自Millipore)或GAPDH(以1：1000稀釋，購自MDBio)抗體，置放於4℃一晚。接著，使用以1：5000稀釋之結合辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase)之山羊抗小鼠(購自Jackson ImmunoResearch)或山羊抗兔子(購自Rochland)之IgG抗體(購自GeneTex)及化學發光基質(購自Millipore)偵測反應複合物。

[小鼠小腦組織切片培養]

取出七天大的SCA17小鼠小腦，放入冰的培養液(含有50%基礎培養液Eagle(購自Invitrogen)、25%Hank’s緩衝鹽類溶液(購自Invitrogen)、25%馬血清(購自Invitrogen)、0.5%D-葡萄糖(購自Sigma)、1mM GlutaMAX I(購自Invitrogen)、100U/ml青黴素(購自Invitrogen)以及100μg/ml鏈黴素(購自Invitrogen)中。再將小腦與其他腦區分離並且對半切開，之後以Vibratome切片機(VT1200S，Leica)，將小腦以矢狀切(parasagittal section)取得350μm的薄片。切片完成後，將切片放在裝有培養薄膜(0.4μm，Millipore)的6孔盤中進行培養。所有的藥物處理皆在培養的第二天進行。在培養第7天，以一級抗體IP3R-1染Purkinje細胞(1：1000，購自Santa Cruz)、1TBP18染多麩醯胺蛋白聚集(1：30000，購自QED Bioscience)；再以螢光二級抗體(1：500，購自Invitrogen)以及細胞核染劑DAPI(1：10000，購自Sigma)進行螢光染色，最後再以共軛焦顯微鏡(DMRE，TCS SP2，Leica)觀察染色結果。

[實驗結果]

[表現ATXN3/Q ₇₅ 聚集之293細胞]

本實驗建立了包含C端標誌有GFP之ATXN3 Q_14-75之片段，以形成誘導模式之表現ATXN3/Q_14-75-GFP之Flp-In 293細胞；其中，ATXN3/Q₁₄為正常蛋白表現之控制組。如圖2所示，在多西環素(Dox)誘導之ATXN3細胞中，GFP抗體偵測到40kDa之ATXN3/Q₁₄-GFP及57kDa之ATXN3/Q₇₅-GFP蛋白。

[海藻糖類化合物在Flp-In 293細胞模式中之ATXN3/Q ₇₅ 聚集情形]

在此實驗中，利用ATXN3/Q₇₅-GFP細胞檢測海藻糖類化合物及組蛋白去乙醯酶抑制劑SAHA對ATXN3/Q₇₅之影響，以多西環素和益樂鉑處理6天後，利用螢光顯微鏡觀察影像，而利用高通量分析系統分析ATXN3/Q₇₅-GFP細胞之多麩醯胺聚集分析結果係如圖3所示，其中作為正對照組SAHA(100nM)相對未處理組(100%)之降低ATXN3/Q₇₅聚集量為85%，而在海藻糖類化合物中，海藻糖、乳酮糖及蜜二糖皆表現出優異之抑制多麩醯胺聚集現象(於100nM至100μM，77至85%)。

[海藻糖類化合物之海藻糖酶水解性及抑制海藻糖酶活性]

使用1mU豬腎海藻糖酶測試28mM海藻糖、乳酮糖、及蜜二糖之水解性。如圖4A所示，海藻糖會迅速被海藻糖酶分解成葡萄糖，而在乳酮糖、及蜜二糖方面則未觀察到此現象(無葡萄糖波峰)。又如圖4B所示，在同時加入海藻糖及乳酮糖或蜜二糖之情況下，海藻糖轉換成葡萄糖的量與單獨加入海藻糖之情況相比並無明顯變化，表示乳酮糖或蜜二糖不會抑制海藻糖酶活性；再觀察到添加海藻糖酶抑制劑井岡霉素A(validamycin A)、或井岡羥胺A(validoxylamine A)之情況，沒有偵測到葡萄糖波峰，表示井岡霉素A及井岡羥胺A可抑制海藻糖酶分解海藻糖為葡萄糖。

[海藻糖、乳酮糖、及蜜二糖對細胞自噬活性之影響]

在Flp-In 293 DsRed-LC3細胞模式中，如圖5A所示，以多西環素誘導細胞後，使用LC3抗體可偵測到42kDa的DsRed-LC3蛋白。將細胞轉染ATXN3/Q₇₅質體後，以海藻糖、乳酮糖或蜜二糖(10~50μM)處理8小時並誘導DsRed-LC3表現6天，定量細胞表現細胞自噬活性的情形，如圖5B所示，以海藻糖、乳酮糖或蜜二糖處理後，細胞自噬活性顯著增加(130%~136%，P=0.047~0.009)。再比較細胞內脂質磷脂醯乙醇胺(lipid phosphatidylethanolamine，簡稱PE)-共軛LC3-II以及LC3-I表現情形，其中，LC3-II為目前已知與細胞自噬體(autophagosomes)相關的蛋白；請參照圖5C，在多西環素處理或未處理之條件下，在使用多西環素誘導6天後，LC3-II/LC3-I比率顯著下降(76%，P=0.012)，而此下降情形經添加10μM海藻糖、乳酮糖或蜜二糖後，LC3-II/LC3-I比率明顯或顯著回升(106%~116%，P=0.020~0.012)。據此，證實海藻糖、乳酮糖及蜜二糖確實可促進細胞自噬活性。

[海藻糖類化合物在SH-SY5Y TBP/Q ₇₉ 中之多麩醯胺聚集情形]

在以視黃酸分化SH-SY5Y TBP/Q₇₉細胞7天後，以顯微鏡觀察約有2%的多麩醯胺聚集情形(圖未示)；而以10μM海藻糖、乳酮糖或蜜二糖處理7天後，如圖6所示，聚集量顯著下降了38%~33%(P=0.024~0.014)。據此， 在已分化的神經細胞模式中，海藻糖、乳酮糖及蜜二糖確實可減少TBP/Q₇₉的聚集量。

[海藻糖類化合物於SCA17小鼠中降低小腦柏金氏細胞(Purkinje cell)多麩醯胺聚集量]

在SCA17小鼠小腦切片培養中，如圖7所示，以100μM的海藻糖、乳酮糖及蜜二糖處理6天後，可顯著減少小腦柏金氏細胞多麩醯胺聚集量(65~57%，P=0.049~0.013)。

上述實施例僅係為了方便說明而舉例而已，本發明所主張之權利範圍自應以申請專利範圍所述為準，而非僅限於上述實施例。

<110> 國立台灣師範大學/National Taiwan Normal University

<120> 醫藥組成物於製備不正常多麩醯胺聚集類疾病之藥物上之用途/Use of Pharmaceutical Composition for Manufacturing Drug of Abnormal Polyglutamine-Mediated Disease

<130> S6240

<160> 4

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 28

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> synthetic primer

<400> 1

<210> 2

<211> 30

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> synthetic primer

<400> 2

<210> 3

<211> 23

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> synthetic primer

<400> 3

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> synthetic primer

<400> 4

Claims (6)

1. 一種醫藥組成物於製備不正常多麩醯胺(polyglutamine)聚集類疾病之藥物上之用途，該醫藥組成物包括一海藻糖類化合物，其係選自由下式2及式3所示化合物所組成之群組； 其中，該不正常多麩醯胺(polyglutamine)聚集類疾病係為小腦萎縮症(Spinocerebellar Ataxia)。
2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該海藻糖類化合物之濃度係於50nM至200μM之範圍內。
3. 如申請專利範圍第2項所述之用途，其中，該海藻糖類化合物之濃度係於100nM至100μM之範圍內。
4. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該醫藥組成物更包括：一海藻糖酶抑制劑。
5. 如申請專利範圍第4項所述之用途，其中，該海藻糖酶抑制劑係井岡霉素A(validamycin A)、或井岡羥胺A(validoxylamine A)、海藻唑啉(trehazolin)、MDL 25637、栗樹精胺(castanospermine)、去氧野尻黴素(deoxynojirimycin)、1-thiatrehazolin、沙波塔定(salbostatin)、或打碗花素B4(calystegin B4)。
6. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該醫藥組成物係透過增加LC3-II/LC3-I(輕鏈3蛋白-II(light-chain 3 protein-II)/輕鏈3蛋白-I)比率以抑制不正常多麩醯胺聚集。