TWI502199B - 腫瘤壞死因子受體相關因子７作爲紅斑性狼瘡的生物標記物之用途、偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法以及偵測人體患有紅斑性狼瘡的套組 - Google Patents
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Description
本發明是有關於一種生物標記蛋白質分子、偵測方法及套組，且特別是有關於一種紅斑性狼瘡的生物標記物、偵測人體患該病的方法及套組。
全身性紅斑狼瘡是一相當複雜的自體免疫症候群，對風濕免疫科醫師而言是相當具有挑戰性的疾病。全身性紅斑狼瘡，簡稱狼瘡，是一好發女性的全身性自體免疫疾病，其免疫反應針對無所不再的自體抗原(大部分為細胞核內的核酸及其結合蛋白)而產生各式各樣的自體抗體，其中以抗dsDNA抗體最具疾病診斷的特異性。其臨床症狀包羅萬象且詭譎多變，臨床病程時好時壞，諸如皮疹、光敏感、口腔潰瘍、關節炎、肋膜炎、心包膜炎、腎
絲球腎炎、神經症狀(抽蓄)、溶血性貧血、白血球減少、血小板減少症等。目前對於全身性紅斑性狼瘡的診斷主要是依據臨床症狀與異常檢驗。
因為紅斑性狼瘡的症狀千變萬化，因此患者在患病初期不容易被診斷出來，導致在發現患病時，可能已經侵犯到諸如腎臟等器官，且嚴重時可能已經到達必須洗腎的程度。
本發明提供一種腫瘤壞死因子受體相關因子7(TRAF7)作為紅斑性狼瘡的生物標記物之用途，可用於偵測是否患有紅斑性狼瘡。
本發明另提供一種偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法，以協助判斷人體是否患有紅斑性狼瘡。
本發明又提供一種偵測人體患有紅斑性狼瘡的套組，用於偵測人體是否患有紅斑性狼瘡。
本發明的腫瘤壞死因子受體相關因子7(TRAF7)作為紅斑性狼瘡的生物標記物之用途。
本發明的偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法包括下列步驟。首先，由疑似患有紅斑性狼瘡的病人取得血漿樣本。然後，比較血漿樣本中TRAF7佔總蛋白質的比例與正常人血漿樣本中TRAF7佔總蛋白質的比例，若血漿樣本的TRAF7佔總蛋白質的比例高於正常人，則表示患有紅斑性狼瘡的可能性。
在本發明的一實施例中，上述的血漿樣本中TRAF7佔總蛋白質的比例為正常人血漿樣本中的1.3~1.5倍。
在本發明的一實施例中，上述的方法用以偵測出病人的紅斑性狼瘡病情處於活躍期。
在本發明的一實施例中，上述的方法用以偵測出病人的紅斑性狼瘡病情有侵犯腎臟的可能性。
在本發明的一實施例中，上述的方法更包括使用蛋白質定量方法測量TRAF7的濃度。
在本發明的一實施例中，上述的蛋白質定量方法包括酵素連結免疫吸附分析檢測法。
本發明的偵測人體患有紅斑性狼瘡的套組包括腫瘤壞死因子受體相關因子7(TRAF7)及其抗體(anti-TRAF7 antibody)。
基於上述，本發明是以TRAF7作為紅斑性狼瘡的生物標記物，並應用此生物標記物提供偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法及套組。如此一來，能夠迅速且簡單地偵測出人體患有紅斑性狼瘡的可能性，以及瞭解紅斑性狼瘡的病程時期或侵犯特定器官的可能性，進而掌控病情以及避免延誤治療時機。
為讓本發明的上述特徵和優點能更明顯易懂，下文特舉實施例，並配合所附圖式作詳細說明如下。
S110~S140‧‧‧步驟
圖1是依照本發明的一實施例的一種偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法的流程示意圖。
圖2是依照本發明的一實驗例的一種偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法的正常人與SLE病人血漿樣品中總蛋白質的電泳圖。
圖3是依照本發明的另一實施例的一種偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法的流程示意圖。
圖4是依照本發明的另一實驗例的一種偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法的正常人與SLE病人血漿樣品中TRAF7濃度的長條圖。
以往尋找紅斑性狼瘡的生物標記物多以基因層次探討，發明人以蛋白質體學角度進行研究，首次發現腫瘤壞死因子受體相關因子7(TRAF7)作為紅斑性狼瘡的生物標記物之用途。
特別是，TRAF7可以作為紅斑性狼瘡病情處於活躍期並已侵犯腎臟的生物標記物。接下來將介紹應用TRAF7來偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法。
圖1是依照本發明的一實施例的一種偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法的流程示意圖。圖2是依照本發明的一實驗例的一種偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法的正常人與SLE病人(臨床上診斷已侵犯腎臟)血漿樣品中總蛋白質的電泳圖。請參照圖1，在本實施例中，偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法包括步驟
S110-S140。首先，進行步驟S110，由疑似患有紅斑性狼瘡的病人取得血漿樣本。在本實施例中，紅斑性狼瘡病人的血漿樣本例如是小於0.1 ml。
接著，進行步驟S120，於體外測定病人血漿樣本中腫瘤壞死因子受體相關因子7(TRAF7)佔總蛋白質的比例。在本實施例中，於體外測定腫瘤壞死因子受體相關因子7(TRAF7)在病人血漿樣本內與正常人內的比例的方法例如是對血漿樣本進行蛋白質電泳分析，得到如圖2所示的電泳膠，其中以*表示TRAF7所存在的位置(蛋白質條帶)。然而，偵測TRAF7存在血漿中的方法可以是任何能夠用以對蛋白質進行定性或定量的蛋白質偵測方法，包括質譜鑑定、酵素連結免疫吸附法(ELISA)以及其他已知的蛋白質分析技術。
然後，進行步驟S130，比較病人血漿樣本中TRAF7佔總蛋白質的比例與正常人血漿樣本中TRAF7佔總蛋白質的比例。特別說明的是，「TRAF7佔總蛋白質的比例」是表示TRAF7在總血漿蛋白中的相對變化量。由圖2可知，在本實施例中，在疑似患有紅斑性狼瘡的病人與正常人的相同總血漿蛋白質中，病患的TRAF7的量有顯著增加。此外，進一步使用電腦影像軟體分析TRAF7的濃度，在本實施例中，其中SLE患者的TRAF7的平均比例為2.6%，正常人的TRAF7的平均比例為1.9%。因此，在本實施例中，病人血漿樣本中TRAF7佔總蛋白質的比例為正常人血漿樣本中的1.4倍。在一實施例中，病人血漿樣本中TRAF7佔總
蛋白質的比例為正常人血漿樣本中的1.3~1.5倍。
而後，進行步驟S140，若血漿樣本的TRAF7佔總蛋白質的比例高於正常人，則表示患有紅斑性狼瘡的可能性。在一實施例中，當病患血漿樣本的TRAF7比例為正常人的1.3-1.5倍，表示病人可能患有紅斑性狼瘡，且當血漿樣本的TRAF7的濃度例如是正常的1.3-1.5倍，表示病人的紅斑性狼瘡病情處於活躍期。
圖3是依照本發明的另一實施例的一種偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法的流程示意圖。圖4是依照本發明的另一實驗例的一種偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法的正常人與SLE病人血漿樣品中TRAF7濃度的長條圖。本實施例之流程示意圖與前一實施例中所述的主要不同處為直接測得TRAF7在血漿中的濃度。詳言之，如圖3所示，首先，進行步驟S110，由疑似患有紅斑性狼瘡的病人取得血漿樣本。接著，進行步驟S120，利用TRAF7標準樣品測得的濃度檢量線來計算病人血漿樣品中TRAF7的濃度。在本實施例中，使用蛋白質定量方法(如酵素連結免疫吸附分析檢測法)，來製作標準樣品的濃度檢量線以及測定病人血漿樣品中TRAF7的濃度。然後，進行步驟S130，比較病人血漿樣品與正常人血漿樣品中TRAF7的濃度。在本實施例中，如圖4所示，患有紅斑性狼瘡的21位病人血漿中TRAF7濃度的中位數例如是125.2pg/ml(以水平粗黑線條表示中位數)，24位正常人血漿中TRAF7濃度的中位數例如是81.5pg/ml(以水平粗黑線條表示中位數)。因此，在本實施例中，病人血漿樣本中TRAF7佔總蛋白質的
比例為正常人血漿樣本中的1.5倍。而後，進行步驟S140，若病人血漿樣品的TRAF7的濃度高於正常人血漿樣品的TRAF7的濃度，則表示患有紅斑性狼瘡的可能性。
此外，發明人提出一種偵測人體患有紅斑性狼瘡的套組，其包括抗腫瘤壞死因子受體相關因子7(TRAF7)及其抗體(anti-TRAF7 antibody)。也就是說，此套組藉由使用TRAF7的抗體來偵測TRAF7的存在與TRAF7的濃度，以偵測人體是否患有紅斑性狼瘡。偵測人體患有紅斑性狼瘡的套組可以是任何能偵測TRAF7的套組，諸如用於質譜分析的套組(kit for MALDI-TOF)、酵素連結免疫吸附分析檢測套組(kit for ELISA)以及其他已知的蛋白質分析套組，其包括TRAF7及其抗體。
在上述實施例中，是以TRAF7作為紅斑性狼瘡的生物標記物，並應用此生物標記物提供偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法及套組。相較於習知的紅斑性狼瘡的生物標記物多以基因層次為主，上述實施例使用蛋白質TRAF7作為紅斑性狼瘡的生物標記物。由於TRAF7為已知蛋白質，以及諸如質譜分析與酵素連結免疫吸附法等蛋白質偵測技術已發展成熟，因此可以結合上述兩者發展出多種偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法及套組。故，偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法及套組具有操作簡易、省時的優點。
另一方面，由於紅斑性狼瘡的臨床表現十分詭異多樣，因此患者在患病初期不容易被診斷出來，導致在發現患病時，可能已經侵犯到諸如腎臟等器官，且嚴重時可能已經到達必須洗腎
的程度。然而，上述實施例的偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法藉由取得病人的血漿樣本以及偵測血漿樣本中TRAF7與正常人血漿樣本的比例，能迅速且簡單地偵測出人體患有紅斑性狼瘡的可能性，以及瞭解紅斑性狼瘡的病程時期或侵犯特定器官的可能性。舉例來說，在一實施例中，能夠藉由病人樣本血漿中的TRAF7與正常人之間的比例差異，判斷出病人的紅斑性狼瘡病情處於活躍期並已侵犯腎臟。因此，TRAF7能作為紅斑性狼瘡病情處於活躍期並已侵犯腎臟的生物標記物。如此一來，有助於醫生判斷出病患患有SLE以及掌控SLE患者的病情，進而避免延誤治療時機。因此，紅斑性狼瘡的生物標記物、偵測人體患該病的方法及套組能廣泛地應用於學術研究與臨床診斷中，對於紅斑性狼瘡的研究進展以及SLE患者控制病情將具有極大的幫助。
綜上所述，本發明是以TRAF7作為紅斑性狼瘡的生物標記蛋白質分子，並應用此生物標記物提供偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法及套組。相較於習知的紅斑性狼瘡的生物標記物多以基因層次為主，本發明使用蛋白質TRAF7作為紅斑性狼瘡的生物標記物。由於TRAF7為已知蛋白質，以及諸如質譜分析與酵素連結免疫吸附法等蛋白質偵測技術已發展成熟，因此可以結合上述兩者發展出多種偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法及套組。本發明一實施例的偵測人體患有紅斑性狼瘡的方法藉由比較病人與正常人血漿樣本中的TRAF7比例，能夠迅速且簡單地偵測出人體患有紅斑性狼瘡的可能性，以及瞭解紅斑性狼瘡的病程時期或侵犯特定
器官的可能性。如此一來，有助於醫生判斷出病人患有SLE以及掌控SLE患者的病情，進而避免延誤治療時機。因此，紅斑性狼瘡的生物標記物、偵測人體患該病的方法及套組能廣泛地應用於學術研究與臨床診斷中，對於紅斑性狼瘡的研究進展以及SLE患者控制病情將具有極大的幫助。
雖然本發明已以實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何所屬技術領域中具有通常知識者，在不脫離本發明的精神和範圍內，當可作些許的更動與潤飾，故本發明的保護範圍當視後附的申請專利範圍所界定者為準。
Claims (5)
- 一種偵測人體患有紅斑性狼瘡的可能性的方法，包括下列步驟：由疑似患有紅斑性狼瘡的病人取得血漿樣本；比較該血漿樣本中腫瘤壞死因子受體相關因子7(TRAF7)佔總蛋白質的比例與正常人血漿樣本中TRAF7佔總蛋白質的比例，若該血漿樣本的TRAF7佔總蛋白質的比例為正常人血漿樣本中的1.3~1.5倍，則表示患有紅斑性狼瘡的可能性。
- 如申請專利範圍第1項所述的偵測人體患有紅斑性狼瘡的可能性的方法，其用以偵測病人的紅斑性狼瘡病情處於活躍期。
- 如申請專利範圍第1項所述的偵測人體患有紅斑性狼瘡的可能性的方法，其用以偵測出病人的紅斑性狼瘡病情已侵犯腎臟。
- 如申請專利範圍第1項所述的偵測人體患有紅斑性狼瘡的可能性的方法，其中更包括使用蛋白質定量方法測量TRAF7的濃度。
- 如申請專利範圍第4項所述的偵測人體患有紅斑性狼瘡的可能性的方法，其中該蛋白質定量方法包括酵素連結免疫吸附分析檢測法。
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2013
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