TWI451866B

TWI451866B - 治療及預防患者因心肌缺血所引起的不適的醫藥組合物

Info

Publication number: TWI451866B
Application number: TW098121268A
Authority: TW
Inventors: Jing Jing Justine Tang; Muh Hwan Su; Hang Ching Lin
Original assignee: Sinphar Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2009-06-24
Filing date: 2009-06-24
Publication date: 2014-09-11
Also published as: TW201100078A

Description

治療及預防患者因心肌缺血所引起的不適的醫藥組合物

本發明係關於心肌缺血所引起心臟傷害、心絞痛(angina)或心肌梗塞(myocardial infarction)的預防與治療。

心臟收縮(即作功)，將血液從心臟運送至全身器官、組織及細胞，源自於冠狀動脈能提供血液(主要含氧氣、葡萄糖及營養素)給心臟心肌細胞。心肌細胞再將氧氣及葡萄糖製造出能量(即ATP)供給心臟本身作功使用。心臟有下列情形時，(1)冠狀動脈產生粥狀硬化時，使得動脈血管內變得狹窄；(2)冠狀動脈有部份阻塞時(如血小板凝集形成血栓)；或者(3)血管痙攣收縮時。如又遇到人體耗費能量增加時(如運動)，則無法供應足夠血液給心肌製造能量，此時心臟處在供血減少狀況下即缺血，會造成心絞痛。如冠狀動脈不供血，心肌缺血過久(15秒到15分鐘)，則會造成心肌細胞壞死，醫學上稱之為心肌梗塞。

當心肌缺血造成心絞痛時，就會被要求休息，因為減少心臟作功是最好治療方式。心臟作功減少，心臟所需能量就少，製造能量之物質(氧氣及葡萄糖)就可以減少，冠狀動脈供應血到心肌就可以減少，因此心絞痛就可以舒解。治療心絞痛藥物，從減少心臟作功的角度來看可分三類，一是硝酸鹽化合物(Nitrates)，第二類是β受體拮抗劑(β-Blocker)，第三類是鈣管道拮抗劑(Calcium antagonist)。第一類藥物硝酸鹽類減少心臟作功之作用機轉是(1)透過擴張靜脈，使血液儲留在靜脈，減少血液回流心臟，回流心臟血液少則心臟收縮運送血液出心臟所作的功就少。因此，靜脈回流血液扮演的角色，醫學上稱為前負荷(preload)，而硝酸鹽則具有降低前負荷功能。(2)擴張動脈，降低血管阻力，使血液運出心臟時阻力變小，因此，心臟收縮作功所需能量變少。動脈阻力扮演的角色，醫學上稱為後負荷(afterload)，硝酸鹽兼具有降低後負荷功能。第二類藥物β受體拮抗劑能夠減少心臟作功之作用機轉是使心跳次數減少，心臟作功次數也跟著減少，因而能量消耗也同步減少。第三類藥物鈣管道拮抗劑作用機轉是其作用目標在動脈血管，阻止鈣流入血管細胞內，因此能夠擴張動脈，降低血管收縮所產生血管阻力，因此能夠降低心臟作功，輕易將血液輸出心臟提供給組織、器官(降低後負荷)。

心絞痛一般有三種型態，穩定型(Stable angina)、不穩定型(unstable angina)及變異型(Prinzmetal’s angina)。穩定型心絞痛一般是因冠狀動脈狹窄，治療藥物如上述三類藥品。不穩定型心絞痛常因冠狀動脈之粥狀硬化斑塊產生裂傷(plaque fissure)除了引起血小板凝集，凝集大小會造成不同程度血管阻塞，也會引起心血管痙攣(vasospasm)，二者會造成冠狀動脈血流減少，此種心絞痛在休息時也會發生且發作期傾向較長，傷害性較大，常為急性心肌梗塞的前兆。此類心絞痛除上述三類之藥物外，常需搭配抗血小板凝集藥物，如阿司匹靈(Aspirin)，併用治療。至於變異型心絞痛較少見，是因冠狀動脈痙攣引起，一般使用鈣管道抗拮劑或硝酸鹽直接擴張冠狀動脈治療此型之心絞痛。

綠茶有許多化學成分及文獻記載的藥理作用，化學成分中，茶多酚(tea polyphenols)是茶葉中多酚類物質的總稱，包括黃烷醇類、花色苷類、黃酮類、黃酮醇類和酚酸類等。黃烷醇(flavanols)是茶多酚中含量最多的化合物，又稱兒茶素化合物(catechins)。綠茶中主要的兒茶素化合物是兒茶素(catechin,C)、表兒茶素(epicatechin,EC)、表沒食子兒茶素(epigallocatechin,EGC)、表兒茶素沒食子酸酯(epicatechin gallate,ECG)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)、沒食子兒茶素-沒食子酸酯(gallocatechin-3-gallate，GCG)、沒食子兒茶素(gallocatechin，GC)、和兒茶素-沒食子酸酯(catechin-3-gallate，CG)。

兒茶素化合物(catechins)的含量約占茶多酚總量的70%左右，被認為是主要的保健成份，特別受到重視，有相當多的文獻說明其藥理作用，例如：抗氧化作用(anti-oxidation)、抗發炎作用(anti-inflammation)、抗病毒(anti-viral)、抗癌(anti-cancer)、預防動脈硬化(anti-atherosclerosis)、減肥(reduce weight)等。茶和心血管疾病之間的關係，也有許多的研究，在這些長達6至7年，於美國、荷蘭、日本等多達上萬健康人群的研究中，都發現喝茶可降低心、腦血管病發生的機率以及風險，因此喝茶對健康的好處世人共知。

心、腦血管疾病一直是高居十大死因的前三名，美國每年則約有一百萬的人口歷經心肌梗塞(myocardial infarction、MI)。

因為心肌梗塞一般會應用血栓溶解治療(Thrombolysis)，血管擴張素(Angioplasty)或者冠狀動脈繞道移植手術(coronary bypass graft surgery)來處理。本發明所重視的是當心肌處在有血液持續供應但血液量不足時，會產生心臟細胞死亡(不可逆傷害或稱心肌梗塞)，是否有藥物可以減緩心肌死亡，或使心肌在處於可逆性傷害階段時仍有機會救回心臟。心肌死亡從生物化學變化過程來看，因心肌缺血，氧氣及葡萄糖不足，心肌製造能量(ATP)不足為造成心肌細胞傷害最重要起始原因。因能量不足，造成依賴ATP之細胞膜上鈉幫浦無法工作，而造成細胞外面鈉、鈣及水分子湧入細胞內，造成細胞腫脹，此時細胞仍處在可逆轉狀態。如再度供應血液，細胞可恢復成正常狀態。但是如缺血狀態仍持續下去，細胞內水解酵素體(lysosomes)會破裂，其內各種分解酵素(蛋白質、脂肪、核酸......等分解酵素)會被釋放出來，此時不只細胞膜，細胞內各種生化物質均會遭到破壞。此破壞過程的重要因素是上述ATP不足所造成細胞內鈣離子濃度昇高。因為鈣離子濃度昇高會活化被釋放出來之各種酵素，進一步進行細胞整體性全面性破壞。因此心肌死亡之過程從生化學角度來看歷經三個階段；(一)缺血造成ATP不足；(二)細胞內鈣離子濃度昇高；(三)水解酵素被釋放出來。如在生化過程第二個階段則屬於可逆性傷害，細胞外觀可看到水腫現象，此時供應氧氣/葡萄糖，心肌細胞仍可救回。到第三階段則屬不可逆傷害，心肌會死亡且無法救回。美國專利公開US 2006/0116333 A1揭示了一種保護及保存器官、組織或細胞的包含茶多酚醫藥組合物，應用在器官移植時，保護器官不被傷害。此專利所描述之傷害完全不同於上述人體內之部份缺血性傷害，因為心臟仍在有限的ATP下作功(心臟收縮)。但是器官移殖時，心臟移出人體時心臟已不作功，如心臟再移回人體內則會產生一種缺血再灌注傷害。缺血再灌注傷害是因再供應血時，血中氧氣會使心肌產生一種新的酵素，黃嘌呤氧化酵素(xanthine oxidase)，轉化成有傷害性之自由基(如‧O₂ ^- ，H₂ O₂ ，‧OH)而對細胞膜脂肪產生脂肪過氧化作用而傷害細胞膜。因此器官移植時再供血過程中，傷害是由自由基而來，如提供抗氧化物質(具有對抗自由基作用)即能防止此項傷害。上述專利所使用的抗氧化物質為大家所熟知之茶多酚。本篇公開資料顯示心臟移出人體時，所觀察到的心肌有水腫現象。因此心臟移植時，心臟僅處於可逆性傷害階段而己，尚不至於心肌死亡階段。因此，缺血(心絞痛)所引起心臟傷害與缺血再灌注傷害(器官移植)二者入傷害性質不同。

如上述心肌缺血生化過程中，各種酵素之釋出及活化為心肌死亡的重要因素。如果藥物能螯合鈣離子，降低鈣離子活化酵素或者藥物本身具有直接抑制分解酵素作用，都有可能降低心肌朝死亡發展。本案發明人從動物實驗中，意外發現兒茶素化合物能有效減少動物心肌細胞死亡。此種抑制心肌朝向死亡是否因兒茶素化合物部份化學結構具有2-羥基苯酚(Catechol)結構而能夠螯合鈣離子(此種螯合鈣之2-羥基結構已被學術界證實)；或因茶多酚具有之2-羥基苯酚具有弱酸性性質，能夠結合分解酵素而抑制酵素之分解作用，仍待科學性研究證實。另外2-羥基苯酚具螯合作用，有可能如同鈣管道拮抗劑，減少血管細胞內鈣濃度，因而造成對於血管擴張，降低心臟後負荷，而降低心臟作功及保有較多之ATP，有利於心絞痛的減輕，但是所需濃度仍不清楚。

本發明的主要目的是提供一種能夠治療及預防心肌缺血所造成的不適及傷害(例如心絞痛及心肌梗塞)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含兒茶素化合物(catechins)。

較佳的，本發明的醫藥組合物進一步包含一治療心絞痛的藥物(例如硝酸鹽或亞硝酸鹽)。

本發明利用動物模擬心肌部份缺血造成心肌死亡(心肌梗塞)損傷的實驗方式，發現含兒茶素化合物的茶多酚萃取物(STA-2)與抗心絞痛(亦稱抗狹心症)的硝酸鹽類藥物合併施用比硝酸鹽類藥物單獨施用，對於部份心肌缺血所造成的心肌梗塞有顯著的抑制效果及保護作用(實施例1、表1及圖1)。此結果得到類似重覆實驗之確認(實施例2)。實施例2為一預防性實驗，觀察缺血前給予兒茶素化合物及硝酸鹽，缺血後不給予兒茶素化合物及硝酸鹽，顯示兒茶素化合物與硝酸鹽藥物的合併用藥適合作心肌因缺血因素所造成心絞痛或心肌梗塞之預防劑。

本發明揭示硝酸鹽類藥物單獨使用對心肌梗塞的抑制效果是未用藥組的39%，而兒茶素化合物與硝酸鹽藥物合併用藥後，抑制心肌梗塞的作用效果比單獨使用硝酸鹽藥物增強4倍，抑制效果是單獨使用硝酸鹽藥物的46%、是未用藥組的85%(實施例1及圖2)。如此顯著的抑制心肌梗塞差異效果，表示在含兒茶素化合物的茶多酚萃取物(STA-2)與硝酸鹽藥物合併使用時，產生了協同效果(synergistic effect)，明顯加強了硝酸鹽藥物單獨抗心肌梗死的抑制效果及保護作用。

本發明還揭示在實施例活體動物心臟缺血引起心肌死亡模型中，當含兒茶素化合物的茶多酚萃取物(STA-2)於高劑量及低劑量二個劑量組單獨使用時，雖然發現STA-2可保護細胞減少細胞內乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase、LDH)以及磷酸肌氨酸激酶(creatinine phosphokinase、CPK)的漏出，但對心肌梗塞面積的改善及抑制均未能達明顯的效果。此結果對照日本學者於US2006/0116333A1專利申請案中所提出的，單獨使用多酚類物質(包含茶多酚)對於心、腦等器官移植再接回活體組織所產生之自由基損傷細胞時具保護作用二者傷害因素完全不同；前者是自由基傷害，後者是能量不足(ATP)及鈣濃度升高引起傷害。

本發明提供的一種以茶多酚萃取物(兒茶素化合物)併用抗心絞痛硝酸鹽藥物的醫藥組合物，其治療心絞痛的顯著效果於心絞痛人體臨床試驗的實施例中被證實(實施例3)。

該人體臨床試驗以含兒茶素化合物之茶多酚萃取物(STA-2)、併用硝酸鹽類藥物二硝酸異山梨酯(isosorbide dinitrate)，觀察比對單獨使用二硝酸異山梨酯、以及STA-2，結果發現含兒茶素化合物的茶多酚萃取物(STA-2)併用二硝酸異山梨酯，對患者心絞痛發作次數之減少、症狀減輕以及心電圖改善的總有效率達88.9%，其總有效率明顯高於單獨使用二硝酸異山梨酯的68.9%、含兒茶素化合物之茶多酚萃取物(STA-2)的56.7%。

綜合上述可知無論動物試驗或人體試驗均證明本發明的兒茶素化合物併用抗心絞痛藥物的醫藥組合物，對因心肌缺血所引起的心絞痛及後續之心肌梗塞具有預防及治療效果。

本發明提供一種治療及預防患者因心肌缺血所引起的不適的醫藥組合物，包含治療有效量的一兒茶素化合物，其中該心肌缺血所引起的不適為心絞痛或心肌梗塞。

較佳的，該心肌缺血所引起的不適為心絞痛。

較佳的，該心肌缺血所引起的不適為心肌梗塞。

較佳的，本發明的醫藥組合物進一步包含一種治療心絞痛的藥物。

較佳的，該治療心絞痛的藥物是硝酸鹽化合物(Nitrates)、β受體拮抗劑(β-Blocker)或鈣管道拮抗劑(Calcium antagonist)。更佳的，該治療心絞痛的藥物為硝酸鹽或亞硝酸鹽化合物，例如亞硝酸戊酯(amyl nitrite),四硝酸赤蘚醇酯(erythrityl tetranitrate),三硝酸甘油酯(glyceryl trinitrate),六硝酸鹽(hexanitrate),二硝酸異山梨酯(isosorbide dinitrate),硝酸甘油酯(nitroglycerine),或四硝酸戊四醇酯(pentaerythritol tetranitrate)。較佳的，該藥物為二硝酸異山梨酯。

較佳的，本發明的醫藥組合物進一步包含阿斯匹靈(Aspirin)，及該不適為不穩定型心絞痛。

較佳的，該兒茶素化合物被包含於一由茶葉萃取的茶多酚萃取物，且本發明的醫藥組合物包含該茶多酚萃取物。

較佳的，該茶多酚萃取物包含選自下列群組的一種或多種兒茶素化合物：EGCG,ECG,EGC,EC,GCG,CG,GC及兒茶素(catechin)所組成的群組。更佳的，所述的茶多酚萃取物含有80重量%以上的兒茶素化合物。最佳的，所述的茶多酚萃取物含有不低於98重量%的兒茶素化合物。

較佳的，該茶多酚萃取物含有60重量%以上的EGCG。

本發明的醫藥組合物可以進一步含有一稀釋劑、賦形劑或載體。

本發明將藉以下實施例被進一步瞭解，該等實施例僅為說明之用而非用於限制本發明範圍。

本說明書所提及的百分比及份量除非另外指明否則皆以重量為基準。而各百分比範圍的總合為100%。

實施例1：動物試驗

本實施例之目的是探討單獨使用含兒茶素化合物之茶多酚萃取物STA-2(天力體保，杏輝天力(杭州)藥業有限公司製造)，對動物心臟缺血引起的心肌細胞死亡是否有保護作用，以及將STA-2和心血管常用藥併用是否能增加預防及治療功能效果。STA-2係萃取自茶葉，其兒茶素化合物含量為≧98(重量%)，其中EGCG的含量≧60重量%。

1.心肌細胞死亡的觀察：利用動物模擬心肌缺血所造成的死亡，以結紮心臟左降支冠狀動脈，而保留右降支冠狀動脈，造成心肌細胞部份缺血缺氧，之後再讓左降支冠狀動脈去掉結紮，恢復心臟供血，計算心梗死面積百分比。

2.生化分析：(1)血清磷酸肌氨酸激酶(creatinine phosphokinase,CPK)濃度；(2)血清乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase,LDH)濃度；(3)血清一氧化氮(nitric oxide,NO)濃度。

實驗動物

12週齡以下Crl：CD(SD)SPF大鼠，重量350-450g，分別飼養於不鏽鋼籠中。室溫控制於21±2℃，濕度30-70%，12小時光照/黑暗交替，飲水及飼料(Purina Certified Rodent Chow,#001)不限制。

投藥溶液的配製及投藥

1.STA-2：將STA-2粉末加水配製成50mg/ml(低劑量)、150mg/ml(高劑量)。

2.二硝酸異山梨酯：將二硝酸異山梨酯(5mg/顆)加水配製成3.75mg/ml，使用前混合均勻。

3.阿斯匹靈：將阿斯匹靈500mg加水配製成1.66mg/ml。

4.STA-2+二硝酸異山梨酯：將STA-2粉末、二硝酸異山梨酯顆粒加水配製成STA-2濃度50mg/ml(低劑量)及二硝酸異山梨酯濃度3.75mg/ml之混合藥物。

5.STA-2+阿斯匹靈：將STA-2粉末、阿斯匹靈顆粒加水配製成STA-2濃度50mg/ml及阿斯匹靈濃度1.66mg/ml之混合藥物。

6.實驗動物分成7組，每組4隻，每天管餵一次，投藥體積為5ml/Kg。

組別與投藥量

實驗方法

1.將上述表中的7組大鼠依表中的投藥量投予各種藥物，連續投藥7天。

2.第7天將上述7組動物進行心臟左降支冠狀動脈結紮一小時後再供血試驗。

(1)將動物以麻醉劑克他明(ketamine)和胺基甲酸乙脂(urethane)麻醉，然後氣管接上呼吸器。

(2)將動物接上EKG(心電圖)儀器：切開動物左側胸腔，打開心包囊，記錄心電圖。

(3)將左降支冠狀動脈以聚酯縫線(3/0)結紮。

(4)以腹膜內注射(IP)方式投予管餵投藥量的1/3。

(5)結紮1個小時後將此縫線剪斷，讓左降支冠狀動脈再恢復供應血液至心臟。

(6)灌注1小時後，從左心室抽取血液約5cc後將心臟剪下進行切片。

3.將心臟切成5片，於37℃下用TTC染色，再用生理食鹽水洗去染劑，再正反兩面照相。

4.以Image pro軟體計算每片正反兩面壞死面積及正反兩面切片面積。

5.將左心室血液分離血清以檢測其內之NO、LDH及CPK含量。

檢品分析

1.心梗死面積計算：將大鼠心臟從胸剪下後、置於心臟切片台切成5塊，每塊2mm厚。將5塊心臟切片以2% TTC(2,3,5-氯化三苯四銼(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride))於37℃染色1分鐘，由於死細胞會拒染而成白色，活細胞可染成紅色。將染色後的心臟切片，以數位相機正反兩面照像，樣品旁放一支標準量尺。將照相結果以電腦軟體image pro分析計算每片心臟之梗死面積及總面積，將五塊心臟切片正反兩面壞死面積總和除以心臟正反兩面全部面積總和再乘上100即為心臟梗死百分率。

2.血清的CPK、LDH、NO含量測定：從大鼠左心室取血後，血液於4℃離心，將上層血清分裝儲存於-20℃備用。(1)CPK及LDH：以血清生化儀測試；(2)NO以Kit用分光光譜儀測試。

數據分析與統計

檢品在血清中的CPK及LDH的含量以unit/ml表示。NO以μM表示含量。心臟梗死以百分率表示。數據以平均值(mean)±標準誤差(SEM)表示之。

測試結果採用sigma statis軟體中t-test來計算P值，與空白對照組(水)相比P<0.05表示有顥著差異，以*表示之。P<0.01表示有非常顯著差異，以**表示之。P<0.001表示極顯著差異，以***表示之。與藥物對照組(二硝酸異山梨酯)比較同上敘述，而以+符號代替*符號。

實驗結果

I. STA-2單獨使用或與二硝酸異山梨酯、或與阿斯匹靈合併使用對部份缺血引起的心肌細胞梗死的治療效果，如表1及圖1所示。

表1討論 ：

(1)　二硝酸異山梨酯單獨使用與空白對照組相比p<0.05，顯示減少心肌梗死面積之顯著差異；

(2)　STA-2與二硝酸異山梨酯合併使用與空白對照組相比，p<0.001，表示STA-2與二硝酸異山梨酯合併使用，有極明顯的減少心肌梗死面積之作用；

(3)　STA-2與二硝酸異山梨酯合併使用與二硝酸異山梨酯單獨使用相比，達顯著差異(p<0.01)，表示STA-2與二硝酸異山梨酯合併使用有明顯加強二硝酸異山梨酯抑制心肌梗死面積之效果，亦即STA-2與二硝酸異山梨酯合併使用有相輔相成的效果。

(4)　另一方面，STA-2單獨使用不論高劑量組或單獨使用低劑量組，其效果無統計上差異；阿斯匹靈單獨使用以及STA-2與阿斯匹靈合併使用亦相同，效果均未具統計上差異。

(5)　值得注意的是本案實驗設計是正常老鼠僅結紮1條冠狀動脈，保留另一條冠狀動脈，主要是讓心部份缺血造成能量不足而引起心肌死亡為目的。此種動物狀態處於穩定型心絞痛(為冠狀動脈狹窄)之長期缺血狀態而不是血管壁損害誘導血小板凝集成栓塞之情形(不穩定型心絞痛)，而造成缺血狀態。因此間接證明臨床阿斯匹靈之使用，是協助心絞痛藥物減少血小板引起之血管栓塞，但對長時間缺血引起心肌死亡則一點幫助也沒有。相同情形，茶多酚雖然具有缺血(器官移植時)，再供血(器官接回個體)所引起自由基傷害細胞膜，所造成心肌內生化物質如CPK和LDH等酵素釋放至血中的阻止作用。但是茶多酚如同阿斯匹靈一樣對長期缺血所引起之心肌死亡並無任何幫助。故如表1及圖1所顯示茶多酚必須併用減少心臟作功之心絞痛治療藥物(如本實驗之二硝酸異山梨酯化合物)才能顯示其治療缺血造成心肌死亡效果。

圖2為本實施例的第1組、第2組及第5組的抑制心肌梗死面積之相對百分率的比較圖。

圖2探討：

(1)依據圖1結果，將空白對照組(水)之心肌梗塞面積百分率設定為100%，分別比較STA-2與二硝酸異山梨酯合併使用(第5組)、二硝酸異山梨酯單獨使用(第2組)對於心肌梗塞之抑制效果。

(2)二硝酸異山梨酯單獨使用對心肌梗塞的抑制效果減少39%梗死面積(相對於未用藥的空白對照組)。

(3)STA-2與二硝酸異山梨酯合併使用對心肌梗塞的抑制效果是減少85%面積(相對於未用藥的空白對照組)。

(4)顯示STA-2與二硝酸異山梨酯合併使用抑制心肌梗塞之作用效果比單獨使用二硝酸異山梨酯增強4倍，即合併使用藥物加STA2只造成15%心肌梗死而單獨使用藥物則造成61%心肌梗死。

II. STA-2單獨使用或與二硝酸異山梨酯、阿斯匹靈合併使用對缺血引起心肌死亡時的血清CPK濃度的影響，如表2及圖3所示。

表2/圖3的結果的探討：

(1)由圖3可看出STA-2低劑量與高劑量都有降低血清CPK含量之作用，且與劑量成正比。

(2)STA-2與阿斯匹靈合併使用(第7組)與空白對照組(水)相比，達顯著差異(p<0.01)。

III. STA-2單獨使用或與二硝酸異山梨酯、阿斯匹靈合併使用對缺血引起心肌死亡時的血清LDH濃度的影響，如表3及圖4所示。

表3/圖4的結果的探討：

(1)由圖4可看出只有STA-2高劑量(第4組)與空白對照組(水)相比，可使LDH含量降低。

(2)STA-2(低劑量)與二硝酸異山梨酯合併使用與空白對照組(水)相比，達顯著差異(p<0.01)。

(3)由表2(圖3)及表3(圖4)顯示細胞內一些生化酵素(CPK及LDH)被釋放到血液中，此現象源於心肌細胞膜受到傷害所引起，此種傷害造成可能是由大家所熟知(一)缺血再供血引起自由基產生所造成，或者可能是(二)長期缺血狀態所引起(但非自由基所引起)。此實驗結果(表2及表3)證實茶多酚具有如上述US2006/0116333A1專利申請案(器官移植一再接回個體)所揭示的具有自由基拮抗作用。但是此項結果無法說明或推論出能對抗自由基作用就能阻此細胞死亡。此二者並無關聯性存在，於表一(圖1)就已經非常清楚說明。

IV. STA-2單獨使用或與二硝酸異山梨酯、阿斯匹靈合併使用對缺血所引起心肌細胞損傷實驗動物血清NO濃度的影響，如表4及圖5所示。

表4/圖5的結果探討：

(1)由圖5的NO含量結果顯示二硝酸異山梨酯減低心臟梗死作用與產生NO有關，其作用機轉是NO減少心臟作功，保持心臟更多之ATP能量。

(2)STA-2單獨使用並不產生NO，但STA-2與二硝酸異山梨酯合併使用仍然有相當量之NO產生。因此合併使用仍優於二硝酸異山梨酯單獨使用(第2組)的抑制心肌死亡效果，除了NO之作用外應該是STA2具備另外機制，但與NO並無關聯。STA2之協同作用機制此點仍需科學上研究才能清楚。

實施例2：動物試驗(心肌梗塞預防性實驗)

本實施例之目的是驗證實施例1中的STA-2萃取物與二硝酸異山梨酯合併使用對心臟缺血所引起的心肌死亡是否有預防作用。因此設計上省略左降支冠狀動脈被結紮後的腹膜內注射(IP)方式投藥的步驟外，其餘步驟重覆實施例1的實驗。

心梗死百分率及血清NO含量的結果被示於表5及表6，從其中可看出本實施例與實施例1者具有一致的趨勢。本實施例的實驗在結紮左降支冠狀動脈後，不以IP方式投藥茶多酚及二硝酸異山梨酯的目的在觀察缺血(心絞痛)前，合併給藥是否有預防心肌梗死減低，實驗結果與表1及表4的結果相同，有助於預防心肌死亡。因此茶多酚合併心絞痛藥物確實對動物心肌缺血所引發的心肌死亡具有治療及預防二種效果。

實施例3：人體臨床試驗

本實施例以含兒茶素化合物為主的茶葉萃取物STA-2併用二硝酸異山梨酯為醫藥組合物進行治療。觀察比對僅用二硝酸異山梨酯、以及單獨使用STA-2，對患者心絞痛發作次數減少、症狀減輕以及心電圖改善的療效。相關資料如下：

1.試驗分組設計

試驗組A：含兒茶素的茶葉萃取物STA-2與二硝酸異山梨酯合併使用

對照組A：二硝酸異山梨酯單獨使用

試驗組B：含兒茶素的茶葉萃取物STA-2單獨使用

2.納入病例標準

因運動或其他增加心肌需氧量的情況所誘發的短暫胸痛發作(心絞痛)等主要症狀之病程在一個月或一個月以上，每週發作二次以上，心電圖出現暫時性的S-T段壓低或T波改變。

3.病例資料

試驗組A：45人，男性30人、女性15人，年齡50-75歲。

對照組A：45人，男性33人、女性12人，年齡52-78歲。

試驗組B：30人，男性12人、女性18人，年齡41-65歲。

4.治療方法

試驗組A：二硝酸異山梨酯10mg一天三次(tid)+兒茶素(STA-2)200mg tid療程8週。

對照組A：二硝酸異山梨酯10mg(tid)，療程8週。

試驗組B：兒茶素(STA-2)200mg tid，療程4週。

5.療效評定標準顯效：

心絞痛等主要症狀消失，心電圖恢復至正常心電圖。

有效：

心絞痛等主要症狀减輕，心電圖改善達到以下標準：S-T段的降低以治療後回升0.05mV以上，但未達正常水平，主要導聯倒置T波改變變淺(達25%以上者)；或T波由平坦變入直立，房室或室內傳導阻滯改善者。

無效：

心絞痛等主要症狀無改善，心電圖與治療前相同。

加重：

心絞痛等主要症狀較試驗前加重。心電圖S-T段較治療前降0.05mV以上，主要導聯倒置T波加深(達25%以上)或直立T波變平坦，平坦T波變倒置，以及出現异位心律、房室傳導阻滯或室內傳導阻滯。

顯效率=顯效例數÷總病例×100；

總有效率=(顯效例數+有效例數)÷總病例×100；

療效判斷：若心絞痛等主要症狀療效與心電圖療效兩者不一致時，以療效低的結果為主。

6.治療結果

圖式簡單說明圖1顯示STA-2單獨使用或與二硝酸異山梨酯、或與阿斯匹靈合併使用對部份缺血引起的心肌細胞梗死的治療效果。

圖2顯示本發明實施例1的第1組、第2組及第5組實驗的抑制心肌梗死面積之相對百分率的比較。

圖3顯示STA-2單獨使用或與二硝酸異山梨酯、阿斯匹靈合併使用對缺血引起心肌死亡時的血清CPK濃度的影響。

圖4顯示STA-2單獨使用或與二硝酸異山梨酯、阿斯匹靈合併使用對缺血引起心肌死亡時的血清LDH濃度的影響。

圖5顯示STA-2單獨使用或與二硝酸異山梨酯、阿斯匹靈合併使用對缺血引起心肌死亡時的血清NO濃度的影響。

Claims

一種使用一醫藥組合物於製造用於預防患者因心肌缺血所引起的心肌細胞死亡的藥物的用途，其中該醫藥組合物包含治療心絞痛的硝酸鹽或亞硝酸鹽及有效量的兒茶素化合物(catechins)。
如申請專利範圍第1項的用途，其中該藥物係以口服途徑投予。
如申請專利範圍第1項的用途，其中該藥物係以注射途徑投予。
如申請專利範圍第1項的用途，其中該醫藥組合物包含二硝酸異山梨酯。
如申請專利範圍第1至4項中任一項所述的用途，其中該兒茶素化合物被包含於一由茶葉萃取的茶多酚萃取物，且該醫藥組合物包含該茶多酚萃取物。
如申請專利範圍第5項的用途，其中該茶多酚萃取物包含選自下列群組的一種或多種兒茶素化合物：表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)，表兒茶素沒食子酸酯(epicatechin gallate,ECG)，表沒食子兒茶素(epigallocatechin,EGC)，表兒茶素(epicatechin,EC)，沒食子兒茶素沒食子酸酯(gallocatechin-3-gallate,GCG)，没食子酸儿茶素酯(catechin-3-gallate,CG)，沒食子兒茶素(gallocatechin,GC)及兒茶素(catechin)所組成的群組。
如申請專利範圍第6項的用途，其中所述的茶多酚萃取物含有80重量%以上的兒茶素化合物。
如申請專利範圍第7項的用途，其中所述的茶多酚萃取物含有不低於90重量%的兒茶素化合物。
如申請專利範圍第8項的用途，其中所述的茶多酚萃取物含有60重量%以上的EGCG。
如申請專利範圍第6項的用途，其中所述的茶多酚萃取物為EGCG純化物。
如申請專利範圍第1項的用途，其中該醫藥組合物不包含阿斯匹靈(Aspirin)。