TWI448287B

TWI448287B - 長效止痛藥癸二醯雙那布扶林酯－ｐｌｇａ控釋劑型

Info

Publication number: TWI448287B
Application number: TW101138563A
Authority: TW
Inventors: Yao Pu Hu; Chen Chung Chang
Original assignee: Yao Pu Hu
Priority date: 2012-10-19
Filing date: 2012-10-19
Publication date: 2014-08-11
Also published as: TW201416074A

Description

長效止痛藥癸二醯雙那布扶林酯-PLGA控釋劑型

本發明係關於用以治療哺乳動物急性或慢性疼痛之化合物、前驅軟藥-癸二醯雙那布扶林酯(Sebacoyl dinalbuphine ester)、與藥學常用生物可分解高分子PLGA賦型劑之組成物，並將該組合物製備成可進入人體之長效控釋劑型。藉由高分子的而達到長效控制藥物釋放之目的，藉之維持那布扶林(nalbuphine)的有效血中濃度大幅改善傳統習用注射劑型之使用量。

疼痛為一種感覺，由在身體末稍的痛覺受器(nociceptors)接受外來對動物體的機械、溫度及化學刺激，或身體內在的化學或電刺激，而引發痛覺神經衝動。這些衝動經由化學或神經痛覺路徑(nociceptive pathways)刺激大腦皮質或中樞神經，繼而造成疼痛的感覺。所有的脊椎動物甚至某些非脊椎動物如烏賊都有感知疼痛的能力，並從而產生對應的退縮及規避反應。疼痛若未加以控制或解除，則會對動物產生相當程度的緊迫(stress)，造成諸如ACTH，cortisol，ADH，catecholamine，glucose血中濃度的上升，以及insulin與testosterone的下降，進而影響心血管、呼吸、代謝，甚至組織癒合等生理功能的表現。疼痛反應是種保護性的反射系統，以警告個體正處於惡劣情況及組織受傷的狀態下。當病人有長期的疼痛時，長效止痛劑是有需求的，一長效作用鎮痛效果是特別為蒙受急性或慢性疼痛的病患所需要的。這些疼痛可能持續數天至數個月之久。舉例來說，急性疼痛，諸如手術後疼痛、外傷疼痛與燒傷疼痛，可能會持續4至6天；慢性疼痛，例如非惡性疼痛與癌症疼痛，可能持續數星期至數個月。類抗痛史，抗痛藥物的一大突破始於十九世紀末，科學家純化出阿斯匹靈與嗎啡，它們都是文獻記載中有效的鎮痛藥物。但是阿斯匹靈鎮痛效力不強，又有傷胃、抑制血小板凝集、胃出血之危險；而嗎啡止痛效果良好，可是副作用的餘慮造成使用上的諸多限制，因此兩者都需要於嚴密監控下謹慎使用。二十世紀研發出的新藥，基本上仍然走阿斯匹靈、非類固醇抗發炎藥物(針對消炎止痛)與嗎啡(針對中樞神經系統中的嗎啡受體)的路線。

目前市面上的類嗎啡止痛劑型效期短且副作用強，如蘇芬坦尼(Sufentanil)、瑞芬太尼(Remifentanil)、芬太尼(Fentanyl)、嗎啡(Morphin)注射劑。長期使用一天至少注射兩次到三次，產品使用不方便且藥物過量會產生呼吸抑制與藥物上癮等副作用，如何開發出長效且副作用輕微之類嗎啡止痛劑型是本發明探討的重點。那布扶林(Nalbuphine)為一種強力止痛劑可有效用於治療病患中度至重度疼痛。比較術後疼痛治療，那布扶林與嗎啡具同樣效果且副作用輕微，有較低的呼吸抑制及上癮等副作用，那布扶林藥理學分類屬於類嗎啡受體(Opioid receptor)kappa-活化劑且屬於Mu-receptor部分拮抗劑(Schmidt W.K. et al.,1985 )，因此機轉會有界限效應(ceiling effect)如增加劑量大於30毫克不會造成進一步的呼吸抑制。因要跟上全世界製藥十大先進國家之腳步本國行政院院臺衛字第0960004264號公告那布扶林減列為非管制藥品。截至目前為止nalbuphine止痛效力之有效期間為三小時(血中濃度約10 ng/ml)到六小時(血中濃度約2.5 ng/ml)用此藥物治療(；病患必須住院且忍受多次注射，造成醫療資源浪費對病患更是痛苦。前驅軟藥(prosoft-drug)之設計能改善藥物的半衰期目前已廣泛應用於臨床且優良可行的。那布扶林為較親水性藥物(與前驅軟藥相比)與當利用長鏈碳酸進行酯化可增加了原始藥物脂溶性，可利用油性製劑或生物可降解材料包埋；而行肌肉注射時，在組織釋出率減緩而達到長效作用。而酯解酵素存在於各個組織器官中如血液、腦、肝、心、肺、腎、肌肉等，此前驅軟藥物之藥理作用及安全性則被報告和原藥完全相同。

癸二醯雙那布扶林酯(SDE)是那布扶林(Nalbuphine)的一種前驅軟藥，能有效治療急性、慢性及手術後疼痛。本發明是以那布扶林前驅軟藥(Nalbuphine prosoft-drug)癸二醯雙那布扶林酯(SDE)及具生體相容性且可分解性之聚合物製備成長效控釋劑型。藥物製成長效控釋劑型之目的，是為了使治療效果能比服用單劑量者維持更長的時間。其優點為可減少投藥次數，同時降低了病人忘記服藥的可能率，且由於投藥後可保持血中濃度之穩定而改善療效。需長期使用止痛藥劑之病人，希冀能夠脫離醫療機構有機會重回家庭或人群。本案發明人承襲本實驗室先前專利案-中華民國申請案號第089109293(新穎含那布扶林酯前驅藥(nalbuphine ester prodrug)口服醫藥組成物)之發明，鑑於傳統上無法大幅度將那布扶林(nalbuphin)效期延長，乃亟思加以改良創新且在中華民國申請案號第085106156(那布扶林多量酯)揭示前驅軟藥-癸二醯雙那布扶林酯(Sebacoyl dinalbuphine ester)合成方法與化學結構，並經多年苦心孤詣潛心研究後，終於成功研發完成本件前驅軟藥-癸二醯雙那布扶林酯(Sebacoyl dinalbuphine ester)、與藥學常用生物可分解高分子PLGA賦型劑之組成物，將該組合物製備成可進入體內之長效控釋劑型達到半個月或多月投藥一次之目標。

另外，在本案發明人雖已在知名國際期刊中揭示了前驅軟藥-癸二醯雙那布扶林酯(Sebacoyl dinalbuphine ester)其它長效型控釋劑型-經皮給藥電動輔助方法(Jeng-Fen Huang et al.,2005 )、注射用植物油針劑(Pao L.H.et al.,2005 )，及其他那布扶林前驅軟藥如：單那布扶林癸酸酯(nalbuphine decanoate)、單那布扶林庚酸酯(nalbuphine enanthate)、單那布扶林戊酸酯(nalbuphine pivalate)、單那布扶林丙酸酯(nalbuphine propionate)，與本案使用藥學常用生物可分解高分子PLGA賦型劑之組成物製成植入劑(Sung K.C.et al.,1998 )、控釋微球劑型(Fang-I.Liu et al.,2003 )。但沒如預期達到半個月或多月投藥一次之目標，例如先前揭示，皮下注射內含那布扶林(50 mg/rabbit)單那布扶林丙酸酯(nalbuphine propionate)、單那布扶林戊酸酯(nalbuphine pivalate)、單那布扶林癸酸酯(nalbuphine decanoate)之PLGA控釋微球劑型(每組皆n=3)結果表明維持有效血中濃度2.5 ng/ml只能維持四天和目標有很大落差(Fang-I.Liu et al.,2003 )推估是此類前驅軟藥的脂溶性不足，但後續發明人之研究【表一】，使用更高脂溶性前驅軟藥-癸二醯雙那布扶林酯(Sebacoyl dinalbuphine ester)-PLGA長效控釋劑型，注射(150 mg/kg of SDE)在大鼠體內(n=7)，約注射那布扶林40 mg/rat。結果表明可運用PLGA高分子之特性(PLA/PGA組成比例、平均分子量等…)調控血中藥物濃度，可維持有效血中濃度2.5 ng/ml半個月或多月。因此基於實驗結果，本發明著重於用以治療哺乳動物急性或慢性疼痛之化合物、前驅軟藥癸二醯雙那扶林酯(Sebacoyl dinalbuphine ester)、與藥學常用生物可分解高分子PLGA賦型劑之組成物製成長效控釋劑型，可為新穎及進步性發現。

本發明之目的即在提供一種那布扶林長效控釋劑型，用以解決傳統上無法大幅度將那布扶林(nalbuphin)效期延長的問題，使治療效果能比服用單劑量者維持更長的時間。其優點為可減少投藥次數，同時降低了病人忘記服藥的可能率，且由於投藥後可保持血中濃度之穩定而改善療效。

為達成前述發明目的，本發明提供一種發展適當前驅軟藥-癸二醯雙那布扶林酯(Sebacoyl dinalbuphine ester)長效控釋劑型。所使用藥學常用生物可分解高分子PLGA賦型劑之組成物，具有改善nalbuphine傳統習用注射劑型之使用量。本發明之另一目的係在於提供一種發展適當前驅軟藥-癸二醯雙那布扶林酯(Sebacoyl dinalbuphine ester)長效控釋劑型、至少一藥學常用生物可分解PLGA賦型劑組合，其中該PLGA賦型劑包含至少以下之一：聚乳酸(PLA)、聚甘醇酸(PGA)、聚乳酸(PLA)或聚甘醇酸(PGA)的相關衍生物及其組合。其中聚乳酸(PLA)或聚甘醇酸(PGA)的相關衍生物可為聚琥珀酸丁二脂(PBS)、聚羥基脂肪酸酯(PHA)、聚己酸內酯(PCL)、聚羥基酯(PHB)、聚羥戊酯(PHV)、PHB和PHV的共聚物(PHBV)、聚乳酸(PLA)-聚乙二醇(PEG)共聚物(PLEG)。此PLGA賦型劑組合可運用高分子的特性調控藥物釋放快慢(PLA/PGA組成比例、平均分子量等)可使用於人體做為止痛使用，對於改善nalbuphine傳統習用注射劑型之使用量：試驗結果發現，給予癸二醯雙那布扶林酯(Sebacoyl dinalbuphine ester)SDE-PLGA(150 mg/kg of SDE)長效控釋劑型於SD大鼠，由不同的PLGA賦型劑組合調控血中藥物濃度且維持有效濃度2.5 ng/ml半個月或多月之目標，例如，使用PLGA(50：50 5k)(n=5)可維持有效濃度2.5 ng/ml約21天、而用PLGA(75：25 10k)(n=7)可維持有效濃度2.5 ng/ml約30天，脂溶性藥物於PLGA長效控釋劑基質內分子量大、PLA含量高藥物釋放的速度慢(PLA/PGA組成比例與分子量大小為：PLA 50^~ 100%/PGA 0^~ 50%，組成之分子量大小範圍：5 k^~ 20 K)。本發明經以體內實驗結果證實，當前驅軟藥-癸二醯雙那布扶林酯(Sebacoyl dinalbuphine ester)合併使用藥學常用生物可分解高分子PLGA賦型劑之組成物可顯著改善nalbuphine傳統習用注射劑型之使用量。因此基於實驗結果可為新穎及進步性發現。本發明之目的即在於可達成上述發明目的之長效控釋劑型。本發明所提供之發展Sebacoyl dinalbuphine ester新劑型，亦可加入一藥學上可接受之賦形劑至該配方中，該配方可為稀釋劑、填充劑、結合劑、崩解劑、潤滑劑等至長效控釋劑型中，並且其長效控釋劑型可包含錠劑、膠囊、軟膠囊、丸劑、懸浮液、微球、口腔植入片、乳化針劑、植入劑及藥學上可行之長效控釋劑型。

本發明將就下列實施例作進一步說明，然該等實施例僅為例示說明之用，而不應被解釋為實施本發明之限制。

實施例一 SDE-PLGA長效控釋劑型配製

實驗設計及內容：

1. SDE-PLGA長效控釋劑型配製-以微球為例：(圖1)

活性物質

癸二醯雙那布扶林酯(Sebacoyl dinalbuphine ester,SDE)是那布扶林(Nalbuphine)的一種前驅軟藥，前驅軟藥之設計能改善藥物的半衰期目前已廣泛應用於臨床且優良可行的。

賦形劑

聚乳酸(polylactide,PLA)與聚甘醇酸(polyglycolide,PGA)依不同比例聚合而成，具良好之生物降解性及生物相容性。

i.取一個乾淨樣品瓶加入PLGA高分子900 mg、活性成分SDE粉末1,200 mg，加入有機溶劑二氯甲烷9 ml(放入攪拌磁石協助溶解)此為油相。

ii.水相為0.5% PVA 900 ml。先將水相注入恆溫夾套反應槽中(維持環境溫度為8-10℃，溫度過高藥物會降解且易有孔洞的產生)，以均質機攪拌轉速為1,800 RPM。

iii.使用氣密針吸取油相以等速注入水相中且利用剪切應力使微球成型(均質時間為4 min)之後於20℃攪拌(轉速300 RPM)2小時使微球固化後在30℃攪拌(轉速300 RPM)2小時使有機溶劑揮發去除。

iv.過篩(上篩150 μm；下篩35 μm)去除水相並凍乾(凍乾條件：-40.0℃ 1.0x10^-1 psi)可得SDE-PLGA微球。

調配物實例1

調配物實例2(PLGA分子量5kDa)

調配物實例3(PLGA分子量10kDa)

調配物實例4(PLGA分子量15kDa)

調配物實例5(PLGA分子量18kDa)

調配物實例6(PLGA分子量20kDa)

調配物實例7(PLGA分子量10kDa)

2. SDE-PLGA藥物包埋率(Drug loading %)與包埋成功率(Encapsulation %)測定-以微球為例：

i.秤取SDE-PLGA微球(>10 mg)加入乙氰溶解為毫克微球/毫升乙氰之溶液(例如：秤取SDE-PLGA微球11.2 mg，需加入11.2 ml乙氰)N=3。

ii.將上述溶解液以乙氰稀釋100倍後取100 μl注射入HPLC中，其結果用檢量線定量。

iii.藥物包埋率(Drug loading%)=(API/(API+PLGA))^＊ 100%

iv.包埋成功率(Encapsulation %)=(藥物包埋率/理論藥物包埋率)^＊ 100%

3.雷射粒徑分析：

i.取適量的微球加入水中再緩慢滴入樣品槽內，用樣品槽內攪拌器加以攪拌使微球均勻分散於水中，

ii.將此樣品槽以He-Ne鐳射光源(633 nm)之紅外光散射分析儀中，以測定微球的粒徑分佈。

iii.重複實驗三次將所得數據求其平均值與標準差

實驗結果：

使用(50：50 5 k、75：25 10 k、75：25 15 k、75：25 18 k、75：25 20 k、100：0 10 k)上述六種生物可分解高分子PLGA賦型劑在相同均質轉速1800 RPM與相同API與高分子比例400 mg/300 mg，研究藥物的包埋率，包埋成功率與平均粒徑改變量為何，結果表明在相同轉速與相同API與高分子比例(400 mg/300 mg)，在不同高分子材料情況下藥物包埋率(45-60%)與平均粒徑大小(60-70 μm)R及包埋成功率(81-100%)沒有顯著的改變【表二】。

實施例二 SDE-PLGA長效控釋劑型體外溶離試驗

1.體外溶離試驗-以微球為例：

i.將16X125mm螺旋帽試管清洗乾淨並滅菌，且將體外溶離緩衝液0.025 M PBS+0.5%Tween20 400 ml配置於500 ml血清瓶內並滅菌且內含攪拌磁石。

ii.在無菌操作臺將微球粉末(不能滅菌會使微球性質改變-約5 mg)倒入400 ml溶離緩衝液中，放置在磁石攪拌器800 RPM高速攪拌使微球均勻懸浮於溶離緩衝液中。

iii.吸取5 ml懸浮液注入16X125mm螺旋帽試管中，分別標上時間(N=3)。將分裝好的試管螺旋帽封口貼上透明膠帶(防止水浴槽內水濺入污染且防止長時間搖晃螺旋帽脫落)。

iv.之後放置於水浴槽中37℃，100 RPM反應時間到取出。

v.本方法主要研究微球內部藥物釋出量，將標示不同天試管吸取上清液4.5 ml，加入乙氰4.5 ml破壞微球，震搖10 min。微球完全溶解後，樣品過0.45μm薄膜(PVDF)後吸取200 μl上清液直接注入HPLC系統當中且結果利用公式藥物釋出量(%)=100(%)-藥物剩餘量(%)。

2.高效能液相層析儀分析條件：

用於體外實驗之分析如SDE-PLGA藥物包埋率(Drug loading%)與包埋成功率(Encapsulation %)測定、與體外溶離試驗，準確定量藥物濃度。

移動相(mobile phase)是由25%醋酸鈉緩衝液(5毫莫耳/公升)及75%乙氰(ACN)加上0.07%(體積百分比V/V)與0.1%三乙胺(Triethylamine)組成，層析柱(column)為Thermo Hypersil Betasil Silica 150x4.6毫米，3微米，溫度為攝氏30度，紫外光偵測器所使用的波長為210 nm，使用的流速為每分鐘1.3毫升，分析樣品時間為每7分鐘一個樣品。

3.檢量線之配製：

將前驅軟藥-癸二醯雙那布扶林酯與原始藥物-那布扶林混合配製成250、500、1000、1500、2000、3500、5000、7500、10000(ng/ml)的濃度以標準液配製在乙氰(ACN)中。

經高效能液相層析儀分析後，以層析圖譜中癸二醯雙那布扶林酯與那布扶林之各別波峰面積值與其相對濃度作圖，可得到兩校正曲線，並以標準偏差(Standard deviation，SD)、變異係數(% CV)及誤差(% error)來驗證精確性與準確性。

實驗結果：

比較相同PLA/PGA比例、不同分子量(75/25 10k)、(75/25 15k)、(75/25 18k)、(75/25 20k)SDE-PLGA微球此時比較溶離結果，發現分子量越低藥物釋放越快。三十天藥物釋放為75/25 10k(87.71%±13.81%)、75/25 15k(56.64%±6.40%)、75/25 18k(57.30%±14.33%)、75/25 20k(42.78%±5.42%)數據為(mean±SD，n=3)【圖2】。比較不同PLA/PGA比例、相同分子量(75/25 10k)、(100/0 10k)SDE-PLGA微球此時比較溶離結果、發現PLA含量越低時低藥物釋放越快三十天藥物釋放為75/25 10k(87.71%±13.81%)、100/0 10k(28.16%±6.31%)數據為(mean±SD，n=3)【圖3】。比較不同PLA/PGA比例、不同分子量(50/50 6k)、(75/25 10k)SDE-PLGA微球此時比較溶離結果、發現結果與上述相同，發現分子量越低且PLA含量越低時藥物釋放越快三十天藥物釋放為75/25 10k 100/0 10k(88.54%±6.47%)、(87.71%±13.81%)數據為(mean±SD，n=3)【圖4】。

實施例三 SDE-PLGA長效控釋劑型體內藥物動力學試驗

實驗設計及內容：

研究的主要目的在測定及比較大白鼠在給予單一劑量之不同處方、劑型，藥物在大白鼠體內之吸收、分佈及排除情形。經由分析單一劑量 SDE-PLGA長效控釋劑肌肉注射後大白鼠之血漿中之Nalbuphine及SDE，即可得知不同劑型在大白鼠體內之吸收、代謝及排除情形，並可證明所篩選配方達到一個月有效之目的。

1.小型動物大白鼠肌肉注射SDE-PLGA長效控釋劑型之藥動學研究

實驗動物：

i.種類：大白鼠(Rat)。

ii.品系：Sprage-Dawley。

iii.來源：國科會實驗動物中心。

iv.開始實驗鼠齡：年輕成鼠，6-9週大。

v.開始實驗體重：大白鼠之體重範圍越小越好，最好之體重範圍為200-300克。

vi.標示方式：在尾部標記。

vii.實驗數量：每組6-7隻雌鼠。

實驗期間： 大白鼠給藥後將被觀察並收集各種試樣直至nalbuphine偵測不到為止(約一個小月)。

給藥途徑與方法： 主要以肌肉(右大腿)注射SD-PLGA長效控釋劑將根據體重調整劑量，以單一劑量方式給藥。

藥物劑型之分析： 製備好的劑型必須分析其化學強度，也就是製劑必須要有相當好的均一性及穩定性。

方法設計：

i.動物之適應與選擇：大約25隻雌鼠在抵達實驗室後，必須經過至少一週之適應期與觀察期，在此期間動物將被觀察其一般的健康狀況及有無任何疾病徵狀。動物均由供應者給予適當的疫苗。在實驗開始前動物均由獸醫師做一完全的身體檢查。

ii.動物之選擇：在經過觀察期後，若有任何疾病徵狀或有任何重要之不正常生理現象的大白鼠均將淘汱。

iii.動物飼養環境：大白鼠將被飼養在溫度控制在攝氏20-30度、濕度控制在百分之30至70的環境中，另外，並提供每天12小時的照光。

iv.動物飼料：飼料為Purina Mills公司出品品質保証之Rodent Chow^® #5002，飼料為無限制供應，且在實驗前不需禁食。

v.飲水：飲水為無限制供應。

vi.隨機試驗方式：動物之分組以體重為分類標準採用Xybion隨機程式隨機分組，使各實驗組的大白鼠體重分佈均勻。動物分為兩組，每組至少有6隻雌鼠。

vii.給藥：給含藥為150 mg/kg SDE SDE-PLGA微球(懸浮於1.25%CMC中)。給藥方式是右大腿肌肉注射。

viii.試樣收集：血漿

本研究將以尾靜脈取血方式自大白鼠取得血樣，將大白鼠單獨放置在一限制裝置中以減低給藥及取樣時對大白鼠所造成的壓力，之後，給予150 mg/kg SDE-PLGA微球。給藥後0.5,1,2,6,24,30,48,54,72,96,102,120,168,240小時與12,14,16,18,20,24,26,28天自大白鼠尾靜脈取血0.5 ml並加入適量之肝素(1/10體積)。取全血後離心取上清液血漿，所有血漿樣均儲存在-80℃之冰箱中。在實驗中任何時間，若發現有任何動物病危，則基於人道理由，將以二氧化碳使其安樂死。

試樣分析： 各種試樣將以已開發之超效能液相層析法質譜分析(UPLC/Ms/Ms)其中之Nalbuphine及SDE。

資料分析： 資料圖形及表格將包含所給藥物在血漿內之變化情形，另外，將以軟體計算Nalbuphine及SDE在大白鼠體內之各種藥動學參數，包括相對生體可用率。

2. UPLC/Ms/Ms分析條件：

採用超高效能液相層析串聯質譜儀Ultra Performance Liquid Chromatography(UPLC)：/M ass/Mass UPLC/MS/MS,(API 3000 Applied biosystens，美國)三節四極質(triple-quadrupole)譜儀配備有離子噴射(ionspray)LC/MS interface)進行分析：層析柱(Column)為ACQUITY UPLC/BEH HILIC/2.1 X 100毫米/1.73微米/40度C；移動相(Mobile phase)為2 mM乙酸銨(Ammonium acetate)及0.1%甲酸(formic acid)於水(13%)和乙晴(Acetonitrile)(87%)；流速(Flow)為每分鐘0.25毫升；注射體積(Injection volume)為5微升。分析癸二醯雙那布扶林酯(Sebacoyl dinalbuphine ester)選用的母離子是441.5(m/z)、子離子是423.5(m/z)；分析那不扶林(Nalbuphine)選用的母離子均為358.3(m/z)、子離子均為340.3(m/z)。分析內標物：乙基嗎啡(Ethylmorphine)選用的母離子均為314.2(m/z)、子離子均為183.1(m/z)；烯丙羥嗎啡酮(Naloxone)選用的母離子均為328.3(m/z)、子離子均為310.3(m/z)。

3.血漿樣品處理：

i.於16x125mm試管底部加入內部標準品(Ethyl-morphine 2 μg/ml & Naloxone 200 ng/ml 50 μl)。

ii.加入0.5 N Na₂ CO₃ pH=10.050 μl(鹼性藥物由離子態還原成分子態)。

iii.加入萃取液(Ether：DCM=7：3)4 ml且放置冷房4℃並放置冰浴上(防止前驅軟藥SDE於血漿中降解)。

iv.加入血漿100 μl，且震盪10 min之後離心3,000 RPM 10 min。

v.於-80℃冰箱將下水層凝固，並將上清液倒入新試管內13x100mm。

vi.氮氣吹乾，壓力10 psi、40℃、20 min(時間過長前驅軟藥SDE可能受熱降解)。

vii.將200μl稀釋液(ACN：Q水=85：15)加入試管內回溶並注射5μl至UPLC/Ms/Ms中。

4.檢量線之配製：

將前驅軟藥-癸二醯雙那布扶林酯與原始藥物-那布扶林混合配製成10、25、50、100、250、500、1000、2500、5000(ng/ml)的濃度以標準液配製在乙氰(ACN)中且取10 μl加入90 μl空白血漿(稀釋10倍)中後樣品處理。

經UPLC/Ms/Ms 分析後，以層析圖譜中癸二醯雙那布扶林酯與那布扶林之各別波峰面積值與其相對濃度作圖，可得到兩校正曲線，並以標準偏差(Standard deviation，SD)、變異係數(% CV)及誤差(% error)來驗證精確性與準確性。

實驗結果：

結果表明可由調控高分子性質(PLA/PGA比例、平均分子量)來調控血中藥物濃度且結果與理論吻合，藥物釋放速度(50：50 5k)>(75：25 10k)>(75：25 18k)，可調控血中藥物濃度且維持有效濃度2.5 ng/ml半個月或多月之目標【圖5】；藥物釋放量分別為(50：50 5k)>(75：25 10k)>(75：25 18k)，可知由PLA/PGA比例、平均分子量來調控血中藥物濃度且結果與理論吻合，各項參數如表三。

綜上所述，本案前驅軟藥-癸二醯雙那布扶林酯(Sebacoyl dinalbuphine ester)、與藥學常用生物可分解高分子PLGA賦型劑之組成物，並將該組合物製備成可進入人體之長效控釋劑型。藉由高分子的而達到長效控制藥物釋放之目的，藉之維持那布扶林(nalbuphine)的有效血中濃度大幅改善傳統習用注射劑型之使用量。應已充分符合專利新穎性及進步性之法定發明專利要件，爰依法提出申請，懇請貴局核准本件發明專利申請案，以勵發明，至感德便。

圖1、範例：微球-長效控釋劑型

圖2、實驗組(75/25 10k)、(75/25 15k)、(75/25 18k)、(75/25 20k)長效控釋劑型之溶離情況，比較不同分子量藥物釋出情形(mean±SD，n=3)。

圖3、實驗組(75/25 10k)、(100/0 10k)長效控釋劑型之溶離情況(mean±SD，n=3)，比較不同PLA含量藥物釋出情形。

圖4、實驗組(50/50 5k)、(75/25 10k)長效控釋劑型之溶離情況(mean±SD，n=3)比較不同分子量且不同PLA含量藥物釋出情形。

圖5、體內中那布扶林(Nalbuphine)藥物濃度與時間做圖，給予實驗動物SD-rat肌肉注射長效控釋劑型50：50 5k(150 mg/kg SDE)、75：25 10k(150 mg/kg SDE)、75：25 18k(150 mg/kg SDE)。(A)笛卡兒座標圖(B)半對數座標圖。

Claims

一種用以改善那布扶林(nalbuphine)注射劑型之使用量之一長效控釋劑型醫藥組合物，該組合物包含：(a)一前驅軟藥-癸二醯雙那布扶林酯化合物；及(b)至少一藥學常用生物可分解高分子PLGA賦型劑之組成物；其中該PLA/PGA組成比例為：PLA 50~100%/PGA 0~50%。
如申請專利範圍第1項所述之醫藥組合物，進一步包含該化合物在藥學上可接受之鹽類或溶劑合物。
如申請專利範圍第1項所述之醫藥組合物，其中該PLGA賦型劑包含至少以下之一：聚乳酸(PLA)、聚甘醇酸(PGA)、聚乳酸(PLA)及其組合。
如申請專利範圍第3項所述之醫藥組合物，其中該PLA/PGA組成之分子量大小範圍：5kDa~20kDa。
如申請專利範圍第3項所述之醫藥組合物，其中該聚乳酸(PLA)或聚甘醇酸(PGA)的衍生物可為聚琥珀酸丁二脂(PBS)、聚羥基脂肪酸酯(PHA)、聚己酸內酯(PCL)、聚羥基酯(PHB)、聚羥戊酯(PHV)、PHB和PHV的共聚物(PHBV)、聚乳酸(PLA)-聚乙二醇(PEG)共聚物(PLEG)。
如申請專利範圍第1項所述之醫藥組合物，進一步包含一長效控釋劑型，其中該劑型為以下之一：軟膠囊、懸浮液、微球、乳化針劑及藥學上可行之長效控釋劑型。