TWI436983B

TWI436983B - 二苯並［ｆ，ｈ］異喹啉衍生物及其醫藥組成物

Info

Publication number: TWI436983B
Application number: TW100101247A
Authority: TW
Inventors: Shiow Ju Lee; Cheng Wei Yang; Yue Zhi Lee; Yu-Sheng Chao
Original assignee: Nat Health Research Institutes
Priority date: 2010-01-14
Filing date: 2011-01-13
Publication date: 2014-05-11
Also published as: US20110172261A1; US8486959B2; TW201124382A

Description

二苯並[f,h]異喹啉衍生物及其醫藥組成物

互相參考之相關申請案

本申請案依35 U.S.C.§119(e)主張2010年1月14日向美國專利商標局提出之美國臨時專利申請案號61/294,911之優先權，該先申請案之揭露內容合併於本文供參考。

本發明係關於一種二苯並[f,h]異喹啉衍生物(dibenzo[f,h]isoquinoline derivatives)及其醫藥組成物，係具有抑制一氧化氮生成之功效，這類化合物亦具有抗癌症及抗病毒活性之功效。

一氧化氮(NO)係為一種調節大範圍生理與病理(pathophysiological)過程之重要的多效性分子。例如，其可增進環加氧酶II(cyclooxygenase II(COX-II))之活性，環加氧酶為一種負責合成前列腺素(prostaglandins)之酵素，此酵素係用以調節發炎、疼痛及發燒之反應。請參閱文獻(Liu,et al. ,Carcinogenesis ,2003,Vol.24,No.4,637-642)。

一氧化氮係由L-精胺酸(L-arginine)以及三種不同異構物之一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase(NOS))所生產，其三種異構物即為神經NOS(neural NOS(nNOS))、內皮NOS(endothelial NOS(eNOS))及誘導NOS(inducible NOS(iNOS))。於這三個異構物中，可經由內毒素(endotoxins)、生長激素(如TNF-α)及某些轉錄因子(如NF-κB及AP1)誘導iNOS，其為抑制一氧化氮過度產生之主要標的。

本發明係基於發現一種二苯並[f,h]異喹啉衍生物，係具有抑制生成一氧化氮(NO)之功效，這類化合物亦具有抗癌症及抗病毒活性之功效。

本發明之一態樣係關於化學式I所示之化合物：

其中，每個R₁ 、R₂ 、R₃ 、R₄ 、R₅ 、R₆ 、R₇ 、R₈ 、R₉ 及R₁₀ 係各自獨立為氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環烷基、芳香基、雜芳基、鹵素、硝基、氰基、-OR^a 、-OC(O)R^a 、-C(O)OR^a 、-NR^a R^b 、-NR^a C(O)R^b 或-C(O)NR^a R^b ，每個R^a 及R^b 係各自獨立為氫、烷基、芳香基、雜芳基、環烷基或雜環烷基；XY係一起為C(R’)(R”)-N或CR’=N⁺ ，其中，R’係為氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環烷基、芳香基、雜芳基、鹵素、硝基或氰基，且R”係為氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環烷基、芳香基、雜芳基、鹵素、硝基、氰基、-OR^c 或-OC(O)R^c ，其中，R^c 係為氫、烷基、芳香基、雜芳基、環烷基或雜環烷基；係為一單鍵或一雙鍵；以及A係為氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環烷基、芳香基或雜芳基。

於化學式I中，上述化合物之子集為A係未經取代之烷基(如CH₂ CH₃ 、(CH₂ )₂ CH₃ 或CH(CH₃ )₂ )，或以一種或以上之基團取代之烷基，該基團係選自以下所組成之群組：鹵素、烯基、炔基、芳香基、雜芳基、環烷基、雜環烷基、硝基、氰基、-OR^d 、-OC(O)R^d 、-C(O)OR^d 、-NR^d R^e 、-NR^d C(O)R^e 或-C(O)NR^d R^e ，其中每個R^d 及R^e 係各自獨立為氫、烷基、環烷基、雜環烷基、芳香基或雜芳基(如以羥基取代之C_2-3 烷基)；R₃ 係為-OR^a ，其中R^a 為氫或烷基；每個R₆ 及R₇ 係為-OR^a ，且R^a 為氫或烷基；或者，R’係為氫，且R”為氫或羥基。

上述化合物之另一子集，其化學式係如下所示：

於此化學式中，A係未經取代之烷基(如CH₂ CH₃ 、(CH₂ )₂ CH₃ 或CH(CH₃ )₂ )，或以一種或以上之基團取代之烷基，該基團係選自以下所組成之群組：鹵素、烯基、炔基、芳香基、雜芳基、環烷基、雜環烷基、硝基、氰基、-OR^d 、-OC(O)R^d 、-C(O)OR^d 、-NR^d R^e 、-NR^d C(O)R^e 或-C(O)NR^d R^e ，其中每個R^d 及R^e 係各自獨立為氫、烷基、環烷基、雜環烷基、芳香基或雜芳基(如以羥基取代之C_2-3 烷基)；R₃ 係為-OR^a ，其中R^a 為氫或烷基；每個R₆ 及R₇ 係為-OR^a ，其中R^a 為氫或烷基；或者，R’係為氫，且R”為氫或羥基。

本發明亦關於一種抑制一氧化氮之生成或治療一氧化氮過度產生之相關疾病(如一種發炎性疾病)之方法，其係藉由投予有此治療需要之個體有效劑量之化學式I之化合物。於一實例中，此個體係患有關節炎(arthritis)或動脈粥狀硬化症(atherosclerosis)。

本發明之化合物係具有抗癌症及抗病毒活性之功效。因此，本發明亦關於一種癌症或病毒感染之治療方法，其係藉由投予有此治療需要之個體有效劑量之化學式I之化合物。

本發明之範疇亦包含使用化學式1之化合物治療任何上述提及之疾病，或以化學式1之化合物製造治療上述疾病使用之藥物。

「烷基」一詞係指包含1-10碳原子之直鏈或支鏈的碳氫化合物，其烷基之例子係包含甲基、乙基、n-丙基、i-丙基、n-丁基、i-丁基及t-丁基，但並非僅限於此。

「芳香基」一詞係指6-碳單環、10-碳雙環、14-碳三環之芳香環系統，其中，每環可具有1至4個取代基，芳香基團之例子係包含酚基、萘基及蒽基(anthracenyl)，但並非僅限於此。

「環基」(cyclyl)一詞係指具有3至12個碳之飽和及部份不飽和之環狀碳氫基團，較佳為具有3至8個碳，更佳為具有3至6個碳，其中，環基基團可為選擇性地取代。環基基團之例子係包含但並不限制於環丙烷基、環丁烷基、環戊烷基、環戊烯基、環己烷基、環己烯基、環庚烷基及環辛烷基。

「雜芳基」一詞係指具有1至3個雜原子之5至8員環的單環、具有1至6個雜原子之8至12員環的雙環或具有1至9個雜原子之11至14員環的三環環系統，且上述之雜原子係選自氧、氮或硫(如單環、雙環或三環係具有碳原子及分別1至3、1至6、或1至9個氧、氮或硫之雜原子)，其中，每環可具有1至4個取代基。雜芳基團之例子係包含吡啶基(pyridyl)、呋喃基(furyl或furanyl)、咪唑基(imidazolyl)、苄並咪唑基(benzimidazolyl)、嘧啶基(pyrimidinyl)、苯硫基(thiophenyl)或噻吩基(thienyl)、喹啉基(quinolinyl)、吲哚基(indolyl)、噻唑基(thiazolyl)及其相似化合物。

「雜環基」一詞係指非芳香性之5至8員環的單環、8至12員環的雙環或11至14員環的三環環系統，其單環係具有1至3個雜原子，雙環係具有1至6個雜原子，或其三環係具有1至9個雜原子，且上述之雜原子係選自氧、氮或硫(如單環、雙環或三環係具有碳原子及分別1至3、1至6、或1至9個氧、氮或硫之雜原子)，其中，每環之0、1、2或3個原子可以取代基取代。雜環基團之例子係包含六氫哌嗪基(piperazinyl)、吡咯啶基(pyrrolidiny)、二氧陸圜基(dioxanyl)、嗎福啉基(morpholinyl)、四氫呋喃基及其相似化合物。

於此所述之烷基、芳香基、雜芳基及雜環基係包含經取代與未經取代之基團。取代基之例子包含但並不僅限於鹵素、羥基、胺基、氰基、硝基、巰基、烷氧羰基、醯胺基、羧基、烷硫醯基(alkanesulfonyl)、烷基碳醯基(alkylcarbonyl)、脲基(carbamido)、胺甲醯基(carbamyl)、羧酸基、硫脲基(thioureido)、氰硫基(thiocyanato)、硫醯胺基(sulfonamido)、烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳香基、雜芳基、環基、雜環基，其中，烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳香基、雜芳基、環基、雜環基係選擇性地更以烷基、芳香基、雜芳基、鹵素、羥基、胺基、巰基、氰基或硝基取代。

本發明之化合物可包含一陰離子。「陰離子」一詞係指負電荷離子。陰離子之例子可包含但並不僅限於氯離子(Cl^- )、溴離子(Br^- )、碘離子(I^- )、硫酸根離子(SO₄ ^2- )、磷酸根離子(PO₄ ^3- )、過氯酸根離子(ClO₄ ^- )、乙酸根離子(CH₃ CO₂ ^- )及三氟乙酸根離子(CF₃ CO₂ ^- )。

本發明示範性化合物係如下表所示：

本發明之諸多實施例之細節將於下詳細描述，且本發明其他的特徵、目的及優點將於說明內容與專利申請範圍中闡明。

本發明之化合物可經由傳統之方法合成。例如，首先可經由傳統之合成路徑製備菲-9-甲醛(phenanthrene-9-carbaldehyde)，其傳統合成路徑係如下列之流程1所示：

X係為酸基(COOH)、酯基(COO-alkyl)、或氰基(CN)Y係為氫或NO2

可更以流程2之反應獲得化學式I之化合物，其流程係如下所示：

更明確為，獲得之菲-9-甲醛經由Wittig反應(Wittig reaction)轉變為(E)-乙基3-(菲-9-基)丙烯酸酯((E)-ethyl 3-(phenanthren-9-yl) acrylate)，且該酯類產物經過幾個步驟後轉變成一醯疊氮(acyl azide)化合物，接著透過Curtis置換反應(Curtis rearrangement reaction)形成其他六員環的含氮環化物。

化合物中氮原子上之烷化反應(alkylation)係在氮上以烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環烷基、芳香基或雜芳基取代，這些化合物經由還原反應後可得到本發明之化合物。

上述之反應皆為此技術領域中習知之反應。熟習此技術領域者，可了解進行這些反應所需之溶劑、反應試劑、催化劑及保護基與去保護基。合成的化學轉變與保護基之方法(保護與去保護)可應用於合成二苯並[f,h]異喹啉化合物，詳細內容請參閱下列書籍(R. Larock,Comprehensive Organic Transformations,VCH Publishers(1989);T.W. Greene and P.G.M. Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,3rd Ed.,John Wiley and Sons(1999);L. Fieser and M. Fieser,Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1994);and L. Paquette,ed.,Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1995) and subsequent editions thereof)。

由於上述之化合物可包含一種或以上之不對稱中心，因而可形成如消旋物(racemates)及消旋混合物(racemic mixtures)、單一鏡像異構物(single enantiomers)、個別非鏡像異構物(individual diastereomers)、非鏡像異構混合物(diastereomeric mixtures)或順式(cis-)或反式(trans-)之異構物型式。所有每種異構物型式皆考慮於其中。

當本發明用於治療一氧化氮過度產生、癌症或病毒感染之相關疾病，係透過傳統路徑投予有效劑量之本發明中任一種化合物至有此需要之個體。「治療」一詞係指將一種投予化合物至患有此類疾病(即癌症或一氧化氮過度產生之相關疾病)、或具有其疾病病徵、或具有患有該疾病傾向之個體，以達到治癒、癒合、緩和、減輕、改變、補救、改善、提升、或影響上述疾病、疾病病徵、或對其疾病之傾向。「有效劑量」一詞係指可對投予之個體產生上述之功效所需之化合物之劑量。熟習此項技藝者皆了解有效劑量將依據治療之功效種類、投藥路徑、使用之賦形劑、及合併使用其他治療之可能性而有所改變。

一氧化氮過度產生之相關疾病係包含發炎性疾病，其發炎性疾病為局部性或全身性、急性或慢性之發炎反應。發炎性疾病之例子包含全身性紅斑性狼瘡(systemic lupus erythematosus)、腦炎(encephalitis)、腦膜炎(meningitis)、關節炎(arthritis)、動脈粥狀硬化症(atherosclerosis)、肝炎(hepatitis)、敗血症(sepsis)、肉狀瘤病(sarcoidosis)、牛皮癬(psoriasis)、第I型糖尿病結膜炎(Type I diabetes conjunctivitis)、氣喘(asthma)、動脈硬化症(arteriosclerosis)、慢性阻塞性肺臟疾病(chronic obstructive pulmonary disease)、鼻竇炎(sinusitis)、皮膚炎(dermatitis)、發炎性腸道疾病(inflammatory bowel disease)、潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis)、克隆氏症(Crohn’s disease)、貝西氏疾病(Behcet’s syndrome)及移植排斥反應(graft rejection)。

癌症係指一種涉及不正常細胞增生反應、不論是增生細胞之病理組織本質或入侵階段之細胞入侵或轉移之疾病。癌症之例子包含但並不僅限於惡性腫瘤(carcinoma)及肉瘤(sarcoma)，如：血癌(leukemia)、肉瘤(sarcomas)、骨肉瘤(osteosarcoma)、淋巴癌(lymphomas)、黑色素瘤(melanoma)、卵巢癌(ovarian cancer)、皮膚癌(skin cancer)、睪丸癌(testicular cancer)、胃癌(gastric cancer)、胰臟癌(pancreatic cancer)、腎臟癌(renal cancer)、乳癌(breast cancer)、前列腺大腸直腸癌(prostate colorectal cancer)、頭部與頸部之癌症(cancer of head and neck)、腦癌(brain cancer)、食道癌(esophageal cancer)、膀胱癌(bladder cancer)、腎上腺皮質癌(adrenal cortical cancer)、肺癌(lung cancer)、支氣管癌(bronchus cancer)、子宮內膜癌(endometrial cancer)、鼻咽癌(nasopharyngeal cancer)、子宮頸癌(cervical)或肝癌(hepatic cancer)及其它未知原發部位(primary site)之癌症疾病。

冠狀病毒可導致病毒感染，例如，人類冠狀病毒229E(human CoV 229E)、傳染性胃腸炎病毒(transmissible gastroenteritis virus(TGEV))、鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus)、牛冠狀病毒(bovine CoV)、感染性支氣管炎病毒(infectious bronchitis virus)、貓冠狀病毒(Feline coronaviruses(FCoV))或嚴重急性呼吸道症候群相關冠狀病毒(SARS-associated CoV(SARS CoV))。

為了實行本發明之方法，可經由靜脈、口服、經鼻、經直腸、局部、或舌下等方式投予一種或以上之上述化合物。「靜脈投藥」在此係指皮下、腹腔、靜脈注射、肌肉注射、關節腔內注射、主動脈注射、關節液內注射、胸腔注射、脊髓內注射、疾病部位內注射或顱內注射，以及其他適合的注射技術。

一種無菌可注射性之組成物可為一種無毒性注射可接受之稀釋液或溶劑中的溶液或懸浮液，如於1,3-丁二醇內之溶液。可以使用的可接受載體及溶劑可為甘露醇(mannitol)及水。此外，傳統上係非揮發油(fixed oils)作為溶劑或是懸浮介質(如：合成單-甘油酯或雙甘油酯)。脂肪酸，如油酸(oleic acid)及其甘油酯衍生物(glyceride derivatives)亦可用於製備可注射性之藥物，其為天然醫藥性可接受油，如橄欖油(olive oil)或蓖麻油(castor oil)，特別為其聚氧乙基化之型態(polyoxyethylated versions)。這些油酯溶液或懸浮液亦可包含長鏈醇類稀釋液或分散劑、羧甲基纖維素(carboxymethyl cellulose)或其相似分散劑，其他常用之界面活性劑如Tween或Spans、或其他相似乳化劑或生物可利用之增強劑，其為醫藥製造業常用之醫藥可接受的固態、液態或其他亦可用以形成之劑型(dosage forms)。

一種用於口服投藥之組成物可為任何一種口服可接受性之劑型，包括膠囊、錠片、乳化劑及液狀懸浮液、分散劑及溶液。以錠片作為其劑型，通常係使用之載體可包含乳糖(lactose)或是玉米澱粉(corn starch)。此外，亦常添加如硬脂酸鎂(magnesium stearate)之潤滑劑以製做劑型。對口服膠囊劑型中，有用的稀釋液係包括乳糖與乾燥之玉米澱粉。當口服投予液狀懸浮液或乳化劑時，活性成分可懸浮或溶解於結合有乳化劑或懸浮劑之油狀界面中。需要時，可添加部份甜味劑，風味劑或是色素於其中。

一種鼻用氣化噴霧劑或吸入劑之組成物可依據於此技術領域中習知之醫藥形成之技術製備。例如，其組成物可於生理食鹽水中製備，並且使用苯甲醇或其他適合的防腐劑、促進生物可利用性之促吸收劑、碳氟化物、及/或其他此技術領域中習知之溶解劑或分散劑。此外，亦可以栓藥劑之形式透過直腸投予具有一種或以上活性之二苯並[f,h]異喹啉化合物。

醫藥組成物之載體必須為「可接受性」，亦即其載體必須與組成物之活性成份相容(較佳為能夠穩定其活性成份)，並且不會對欲治療之個體造成傷害。此外，一種或多種溶解劑可用以作為醫藥賦形劑以傳送活性化合物。其他載體之例子係包括膠質氧化矽(colloidal silicon oxide)、硬脂酸鎂、纖維素、硫酸月桂酯鈉(sodium lauryl sulfate)及D&C Yellow # 10。

化合物之功效可經由體外(in vitro )或體內試驗(in vivo assay)進行測試。例如，化學式I之化合物可經由體外分析試驗進行篩選，同時測試此化合物抑制癌症細胞生長之功效。此外，於篩選中具有高抑制癌症之功效之化合物，可更經由於此技術領域中習知之體內方法量測此化合物治療癌症之活性。

下列特定實施例僅用以說明本發明，並不限於其他任何型式之實行，在不悖離本發明之精神與範疇下，熟習本技術領域者可基於本發明之內容加以實行。本說明書中記載之所有書目文獻亦全部併入本說明書中以供參考。

實例1 ：合成化合物

以下列流程圖所示之方法合成化合物1。

於通有氮氣及90℃下，在三乙胺(Et₃ N)(10mmol)中，將化合物i：3,4,5-三甲氧基苯基乙酸(3,4,5-trimethoxyphenyl-acetic acid)(10mmol)及化合物ii：6-硝基藜蘆醛(6-nitroveratraldehyde)(10mmol)濃縮於10mL之醋酸酐中，持續15hr。再以二氯甲烷(CH₂ Cl₂ )萃取後，將其置於乙酸乙酯(EtOAc)中結晶，得到產率為86%之化合物iii: 3-(4,5-二甲氧基-2-硝基-苯基)-2-(3,4,5-三甲氧基-苯基)-丙烯酸(3-(4,5-dimethoxy-2-nitro-phenyl)-2-(3,4,5-trimethoxy-phenyl)-acrylic acid)。之後，於通有氮氣及100℃下，在97 mL之氫氧化胺(NH₄ OH)中，加入七水合硫酸鐵(FeSO₄ ‧7H₂ O)(95 mmol)與化合物iii(9.5 mmol)持續反應2 hr；接著，加入磷酸(H₃ PO₄ )，並以三氯甲烷：2-丙醇(3:1)之溶液萃取，得到產率為87%之化合物iv: 3-(2-胺基-4,5-二甲氧基-苯基)-2-(3,4,5-三甲氧基-苯基)-丙烯酸(3-(2-amino-4,5-dimethoxy-phenyl)-2-(3,4,5-trimethoxy-phenyl)-acrylic acid)。之後，於硫酸(11.6 mmol)、碘化鈉(58 mmol)及330 mL之丙酮中，將化合物iv(5.8 mmol)與亞硝酸異戊酯(isoamyl nitrite)(11.6 mmol)反應，得到菲-9-羧酸(phenanthrene-9-carboxylic acid)之化合物v: 2,3,5,6,7-五甲氧基-菲-9-羧酸(2,3,5,6,7-pentamethoxy-phenanthrene-9-carboxylic acid)，其再以二氯甲烷(CH₂ Cl₂ )萃取及以乙酸乙酯清洗純化後，得到純化之化合物產率係為72%。

將化合物v(2.6 mmol)於32 mL四氫呋喃(THF)中，以硼化氫‧四氫呋喃(BH₃ ‧THF)(7.8 mmol)還原，得到菲-9-羥基甲烷(phenanthrene-9-hydroxymethane)之化合物vi: 2,3,5,6,7-五甲氧基-9-(羥基甲基)菲(2,3,5,6,7-pentamethoxy-9-(hydroxymethyl)phenanthrene)，經過萃取步驟純化後，其產率係為97%。接著，於29 mL二氯甲烷(CH₂ Cl₂ )中，將化合物vi(4.3 mmol)以氯鉻酸吡啶(PCC)(6.4 mmol)氧化，形成醛類化合物vii: 2,3,5,6,7-五甲氧基-菲-9-甲醛(2,3,5,6,7-pentamethoxy-phenanthrene-9-carbaldehyde)；接著，以二氯甲烷(CH₂ Cl₂ )沖提，通過矽凝膠管柱(silica gel column)純化，得到純的化合物vii，其純化之化合物產率係為85%。之後，於通有氮氣及135℃下，在65 mL之甲苯(toluene)中，加入Ph₃ P=CHCO₂ Et(8.8 mmol)與化合物vii(6.3 mmol)持續迴流5 hr，再透過矽凝膠管柱純化後，得到產率為99%之化合物viii: 3-(2,3,5,6,7-五甲氧基-菲-9-基)丙烯酸乙酯[3-(2,3,5,6,7-pentamethoxy-phenanthrene-9-yl)acrylic acid ethyl ester]。接著，將化合物viii置於含有氫氧化鉀(15.8 mmol)之84 mL的乙醇/水(2:1)中水解，再以鹽酸中和產物溶液，並且將生成之沉澱物過濾，以甲醇清洗得到化合物ix: 3-(2,3,5,6,7-五甲氧基-菲-9-基)丙烯酸[3-(2,3,5,6,7-pentamethoxy-phenanthrene-9-yl)acrylic acid](97%)。之後，於70℃之溫度下，在4 mL甲苯中，將化合物ix(0.25 mmol)與(COCl)₂ (0.5 mmol)持續反應14 hr，得到氮化醯(acyl chloride)化合物：3-(2,3,5,6,7-五甲氧基-菲-9-基)丙烯醯氯[3-(2,3,5,6,7-pentamethoxy-phenanthrene-9-yl)-acryloyl chloride]，不需經過額外的純化步驟，再於室溫下於12 mL之丙酮中，與疊氮化鈉(NaN₃ )(0.75 mmol)反應2小時，得到一化合物：3-(2,3,5,6,7-五甲氧基-菲-9-基)丙烯醯疊氮化合物[3-(2,3,5,6,7-pentamethoxy-phenanthrene-9-yl)-acryloyl azide]，。接著，以矽膠柱層析法纯化得到之粗產物，再將純化之化合物懸浮於2.5 mL之二氯苯(dichlorobenzene)中，再加入些許的I₂ ，將反應混合物在190℃加熱持續2.5小時，透過矽膠柱純化後得到化合物x: 6,7,8,10,11-五甲氧基-2H-2-氮雜-三苯-1-酮(6,7,8,10,11-pentamethoxy-2H-2-aza-triphenylen-1-one)。經過最後的三個步驟得到化合物x之總產率為66%。然後，於80℃下，在2 mL之四氫呋喃(THF)中，將化合物x(0.25 mmol)與溴化乙烷(bromoethane)(1.25 mmol)及氫化鈉(NaH)(0.63 mmol)持續反應4小時，粗產物經過純化後得到化合物xi: 6,7,8,10,11-五甲氧基-2-丙基-1,2,3,4-四氫-2-氮雜-三苯-1-酮(6,7,8,10,11-pentamethoxy-2-propyl-1,2,3,4-tetrahydro-2-aza-triphenylen-1-one)，其產率係為76%。接著，於70℃下，在10 mL之四氫呋喃(THF)中，將得到之化合物xi(0.37 mmol)與氫化鋁鋰(LiAlH₄ )(1.85 mmol)持續反應4 hr，接著透過矽膠柱層析以三氯甲烷/n-己烷為5:1至2:1之梯度沖提後，得到化合物1: 6,7,8,10,11-五甲氧基-2-丙基-1,2,3,4-四氫-2-氮雜-伸三苯化合物(6,7,8,10,11-pentamethoxy-2-propyl-1,2,3,4-tetrahydro-2-aza-triphenylene)及化合物xii: 6,7,8,10,11-五甲氧基-2-丙基-2-氮離子-伸三苯化合物(6,7,8,10,11-pentamethoxy-2-propyl-2-azonia-triphenylene)，其產率分別為23.3%及9.4%。

化合物2至化合物7係以上述相似之方法合成。

此外，可透過下列之合成路徑合成化合物8：

如上所示，化合物xii(0.19 mmol)係於室溫下，在2 mL四氫呋喃(THF)中，與氯化鋁(AlCl₃ )(0.59 mmol)及氫化鋁鋰(LiAlH₄ )(2.09 mmol)持續反應5 hr。接著，以二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇(65:32:3)之溶液沖提，透過高效能液相層析法(HPLC)純化粗產物，得到化合物2(17%)及化合物8(19.7%)。

此外，可透過下列流程圖所示之方法製備化合物9至28：

VOCl₃ ：三氯氧釩(Vanadium oxytrichloride)

DIBAC-H：氫化二異丁基鋁(Diisobutylaluminum hydride)

Ph₃ P=CHCO₂ Et：(三苯基膦亞基)乙酸乙酯[Ethyl(triphenylphosphoranylidene)acetate]

Bu₃ SnH：氫化三正丁基錫(Tri-n-Butyltin hydride)

AIBN：2,2’-偶氮二異丁基腈(2,2’-Azobisisobutyronilrile)

NaAl(OCH₂ CH₂ Ome)₂ H₂ ：雙(2-甲氧乙氧基)鋁氫化鈉[Sodium bis(2-methoxyethoxy)aluminum hydride]

如上所示，將化合物xiii及化合物xiv濃縮，得到丙烯腈(acrylonitrile)化合物xv。之後，將其環化(cyclized)得到9-腈菲(9-cyanophenanthrene)化合物xvi。接著，化合物xvi之腈基(cyano group)透過Wittig反應還原成醛類化合物，得到化合物xvii；再經過水解及醯氯化反應(acyl chlorination)，得到氯化醯化合物xx。之後，將化合物xx與疊氮化鈉(sodium azide)反應得到疊氮醯化物(acyl azide)xxi，再經過環化排列(arrangement cyclization)，得到化合物xxii。接著，將化合物xxii與各種溴化烷化合物(bromoalkyl compounds)偶合反應，並以氫化鋁鋰(LiAlH₄ )還原，得到化合物9至28及其他化學式I所示之化合物。

再者，可透過下列流程圖所示之方法製備化合物29：

將化合物xxiv及化合物xxv縮合，得到化合物xxvi。然後，再將化合物xxvi轉變為酯類化合物xxvii。之後，化合物xxvii進行環化反應，得到9-羧基菲(9-carboxyphenanthrene)之化合物xxviii。化合物xxviii之羧基(carboxy group)透過Wittig反應還原成羥基，再氧化為醛類化合物，得到化合物xxx；再經過Wittig反應、水解及醯氯化反應(acyl chlorination)，得到氯化醯化合物xxxii。之後，將化合物xxxii與疊氮化鈉(sodium azide)反應，得到疊氮醯化物(acyl azide)xxxiv，再經過排列(arrangement)，得到化合物xxxv。接著，將化合物xxxv與各種溴化烷化合物偶合反應，再於氯化鋁(AlCl₃ )中，以氫化鋁鋰(LiAlH₄ )進行還原反應，得到化合物29。

此外，化合物30至化合物36係以上述相似之方法合成。

以上述方法製備一些化合物之特性數據係如下所示。

化合物1：

¹ H-NMR(400 MHz,CDCl₃ ): 1.31(3H,t,J=7.2 Hz),2.79(2H,q,J=7.2 Hz),2.93(2H,t,J=5.6 Hz),3.19(2H,t,J=5.6 Hz),3.98(3H,s),4.01(2H,s),4.02(3H,s),4.04(3H,s),4.05(3H,s),4.09(3H,s),7.16(1H,s),7.18(1H,s),9.20(1H,s).

化合物2：

¹ H-NMR(300 MHz,CDCl₃ ): 1.03(3H,t,J=7.5 Hz),1.74(2H,sextet,J=7.5 Hz),2.67(2H,t,J=7.5 Hz),2.92(2H,t,J=6.0 Hz),3.18(2H,t,J=6.0 Hz),3.98(3H,s),4.00(2H,s),4.02(3H,s),4.04(3H,s),4.05(3H,s),4.09(3H,s),7.16(1H,s),7.18(1H,s),9.19(1H,s).

化合物3：

¹ H-NMR(400 MHz,CDCl₃ ): 1.00(3H,t,J=7.6 Hz),1.45(2H,sextet,J=7.6 Hz),1.70(2H,quintet,J=7.6 Hz),2.71(2H,t,J=7.6 Hz),2.92(2H,t,J=5.6 Hz),3.18(2H,t,J=5.6 Hz),3.98(3H,s),4.00(2H,s),4.02(3H,s),4.05(3H,s),4.06(3H,s),4.09(3H,s),7.16(1H,s),7.18(1H,s),9.19(1H,s).

化合物4：

淡黃色晶體；熔點195~198℃;MS(ES,positive mode): m/z 426(M+H)⁺ ;¹ H NMR(300 MHz,CDCl₃ ): 1.12(d,J=6.3 Hz,6H),2.97(t,J=5.4 Hz,2H),3.11(septet,J=6.3 Hz,1H),3.18(t,J=5.4 Hz,2H),3.98(s,3H),4.02(s,3H),4.04(s,3H),4.06(s,3H),4.09(s,3H),4.11(s,2H),7.16(s,1H),7.18(s,1H),9.19(s,1H).

化合物5：

黃色晶體；熔點160~161℃;MS(ES,positive mode): m/z 352(M+H)⁺ ;¹ H NMR(300 MHz,CDCl₃ ): 1.32(t,J=7.2 Hz,3H),2.80(q,J=7.2 Hz,2H),2.94(t,J=5.7 Hz,2H),3.25(t,J=5.7 Hz,2H),4.00(s,2H),4.01(s,3H),4.05(s,3H),4.10(s,3H),7.14(s,1H),7.21(dd,J=9.0,2.6 Hz,1H),7.89(d,J=2.6 Hz,1H),7.90(s,1H),7.92(d,J=9.0 Hz,1H).

化合物6：

¹ H-NMR(400 MHz,CDCl₃ ): 1.03(3H,t,J=7.6 Hz),1.75(2H,sextet,J=7.6 Hz),2.67(2H,t,J=7.6 Hz),2.92(2H,t,J=6.0 Hz),3.24(2H,t,J=6.0 Hz),3.98(2H,s),4.02(3H,s),4.05(3H,s),4.11(3H,s),7.15(1H,s),7.21(1H,dd,J=9.2 Hz,J=2.4 Hz),7.89(1H,d,J=2.4 Hz),7.92(1H,s),7.93(1H,d,J=9.2 Hz).

化合物7：

黃色晶體；熔點130~131℃;MS(APCI,positive mode): m/z 380(M+H)⁺ ;¹ H NMR(300 MHz,CDCl₃ ): 1.00(t,J=7.5 Hz,3H),1.45(sextet,J=7.5 Hz,2H),1.71(quintet,J=7.5 Hz,2H),2.71(t,J=7.5 Hz,2H),2.92(t,J=5.7 Hz,2H),3.23(t,J=5.7 Hz,2H),3.98(s,2H),4.02(s,3H),4.05(s,3H),4.11(s,3H),7.12(s,1H),7.21(dd,J=9.0,2.6 Hz,1H),7.88(d,J=2.6 Hz,1H),7.90(s,1H),7.92(d,J=9.0 Hz,1H).

化合物8：

淡黃色晶體；熔點213~214℃;MS(ES,positive mode): m/z 442(M+H)⁺ ;¹ H NMR(600 MHz,CDCl₃ ): 1.01(t,J=7.8 Hz,3H),1.72(sextet,J=7.8 Hz,2H),2.54(dd,J=11.1,2.1 Hz,1H),2.59(ddt,J=15.3,12,7.8 Hz,1H),2.68(ddt,J=15.3,12,7.8 Hz,1H),3.35(d,J=11.1 Hz,1H),3.47(d,J=15.3 Hz,1H),3.97(s,3H),4.00(s,3H),4.05(s,3H),4.06(s,3H),4.09(s,3H),4.11(d,J=15.3 Hz,1H),5.09(s,1H),6.96(s,1H),7.64(s,1H),9.16(s,1H).¹³ C NMR(150 MHz,CDCl₃ ): 11.9,20.0,54.4,55.6,55.7,55.8,57.9,60.1,60.5,61.3,64.9,101.4,102.5,107.8,118.2,123.9,124.4,127.7,128.1,128.3.

化合物9：

白色針狀晶體；熔點185℃;MS(ES,positive mode): m/z 398(M+H)⁺ ;¹ H NMR(300 MHz,CDCl₃ ): 1.25(t,J=7.2 Hz,3H),2.26(d,J=11.1 Hz,1H),2.53(m,1H),2.74(m,1H),3.00(d,J=15.6 Hz,1H),3.30(m,1H),3.35(d,J=11.1 Hz,1H),3.84(s,3H),4.07(s,3H),4.09(s,3H),4.12(s,3H),4.91(s,1H),6.25(s,1H),7.40(s,1H),7.55(s,1H),7.79(s,1H).¹³ C NMR(100 MHz,CDCl₃ ): 11.3,52.2,53.3,55.6,55.7,55.8,57.2,64.6,102.5,102.5,102.6,105.1,122.6,123.6,123.9,125.3,126.4,126.6,147.9,148.2,148.4,148.5.

化合物10：

白色水晶(rock)；熔點202℃;MS(ES,positive mode): m/z 412(M+H)⁺ ;¹ H NMR(400 MHz,CDCl₃ ): 1.02(t,J=7.2 Hz,3H),1.76(m,2H),2.46(d,J=11.6 Hz,1H),2.56(m,1H),2.68(m,1H),3.28(d,J=15.2 Hz,1H),3.35(d,J=11.6 Hz,1H),3.80(d,J=15.2 Hz,1H),3.95(s,3H),4.08(s,3H),4.11(s,3H),4.13(s,3H),5.03(s,1H),6.67(s,1H),7.60(s,1H),7.68(s,1H),7.76(s,1H).¹³ C NMR(150 MHz,CDCl₃ ): 12.0,19.7,54.0,55.8,55.9,56.0,58.0,60.4,64.7,102.9,103.0,104.9,123.0,123.8,124.2,125.3,126.7,127.3,148.3,148.5,148.7,148.8.

化合物14：

黃色晶體；熔點170~172℃;MS(ES,positive mode): m/z 412(M+H)⁺ ;¹ H NMR(300 MHz,CDCl₃ ): 1.25(m,6H),2.68(d,J=11.7 Hz,1H),3.14(m,1H),3.31(d,J=11.7 Hz,1H),3.89(d,J=15.3 Hz,1H),4.04(s,3H),4.05(s,3H),4.07(s,3H),4.08(s,3H),4.23(d,J=15.3 Hz,1H),5.14(s,1H),7.12(s,1H),7.70(s,1H),7.79(s,1H),7.81(s,1H).¹³ C NMR(150 MHz,CDCl₃ ): 17.4,19.5,50.3,52.8,53.9,55.9,56.0,56.1,64.6,103.1,103.2,103.3,104.6,123.6,123.9,124.4,125.4,127.4,128.2,148.6,148.7,149.0,149.1.

化合物18：

白色晶體；熔點186℃;MS(ES,positive mode): m/z 382(M+H)⁺ ;¹ H NMR(400 MHz,CDCl₃ ): 1.31(t,J=7.2 Hz,3H),2.81(quartet,J=7.2 Hz,2H),2.96(t,J=5.6 Hz,2H),3.22(t,J=5.6 Hz,2H),4.02(s,2H),4.04(s,3H),4.05(s,3H),4.12(s,6H),7.15(s,1H),7.29(s,1H),7.82(s,1H),7.83(s,1H);¹³ C NMR(75 MHz,CDCl₃ ): 12.2,26.7,49.4,52.0,53.4,55.8,55.9,56.9,102.8,103.3,103.4,103.8,123.4,123.5,124.1,124.7,125.5,125.6,148.4,148.5,148.7.

化合物19：

白色晶體；熔點176~178℃;MS(ES,positive mode): m/z 396(M+H)⁺ ;¹ H NMR(400 MHz,CDCl₃ ): 1.02(t,J=7.6 Hz,3H),1.74(sextet,J=7.6 Hz,2H),2.67(t,J=7.6 Hz,2H),2.92(t,J=6.0 Hz,2H),3.18(t,J=6.0 Hz,2H),3.98(s,2H),4.03(s,3H),4.04(s,3H),4.10(s,6H),7.12(s,1H),7.27(s,1H),7.79(s,1H),7.80(s,1H);¹³ C NMR(100 MHz,CDCl₃ ): 12.0,20.5,27.2,50.1,54.3,55.8,55.9,56.0,60.6,102.9,103.2,103.4,103.8,123.3,123.4,124.3,125.6,125.9,148.3,148.4,148.6.

化合物20：

白色針狀晶體；熔點172~173℃;MS(ES,positive mode): m/z 410(M+H)⁺ .¹ H NMR(300 MHz,CDCl₃ ): 1.00(t,J=7.5 Hz,3H),1.45(sextet,J=7.5 Hz,2H),1.70(quintet,J=7.5 Hz,2H),2.70(t,J=7.5 Hz,2H),2.91(t,J=5.7 Hz,2H),3.18(t,J=5.7 Hz,2H),3.97(s,2H),4.03(s,3H),4.04(s,3H),4.10(s,6H),7.12(s,1H),7.26(s,1H),7.79(s,1H),7.80(s,1H).¹³ C NMR(75 MHz,CDCl₃ ): 14.1,20.8,27.2,29.4,50.1,54.3,55.8,55.9,58.4,102.8,103.2,103.3,103.8,123.3,123.4,124.2,125.6,125.9,148.2,148.3,148.5,148.6.

化合物21：

淡黃色針狀晶體；熔點160~161℃;MS(ES,positive mode): m/z 410(M+H)⁺ ;¹ H NMR(300 MHz,CDCl₃ ): 1.02(d,J=6.6 Hz,6H),2.04(septet,J=6.9 Hz,1H),2.47(d,J=7.5 Hz,2H),2.90(t,J=6.0 Hz,2H),3.18(t,J=6.0 Hz,2H),3.97(s,2H),4.03(s,3H),4.04(s,3H),4.11(s,6H),7.13(s,1H),7.29(s,1H),7.80(s,1H),7.81(s,1H);¹³ C NMR(75 MHz,CDCl₃ ): 21.0,25.8,27.1,50.2,54.8,55.8,55.9,56.0,66.8,102.9,103.2,103.4,103.8,123.3,123.4,124.3,125.6,125.8,126.0,148.3,148.4,148.6.

化合物23：

白色針狀晶體；熔點182~183℃;MS(ES,positive mode): m/z 440(M+H)⁺ ;¹ H NMR(300 MHz,CDCl₃ ): 2.96(d,J=4.2 Hz,2H),3.07(t,J=5.1 Hz,2H),3.19(t,J=5.1 Hz,2H),3.91(AA’BB’,2H),4.02(s,3H),4.03(s,3H),4.04(AA’BB’,2H),4.10(s,6H),4.12(s,2H),5.21(t,J=4.5 Hz,1H),7.12(s,1H),7.26(s,1H),7.79(s,1H),7.80(s,1H);¹³ C NMR(75 MHz,CDCl₃ ): 26.9,51.0,54.7,55.8,55.9,60.9,64.9,102.9,103.2,103.3,103.8,123.3,123.4,124.2,125.5,125.7,148.3,148.4,148.6.

化合物24：

白色晶體；熔點186~187℃;MS(ES,positive mode): m/z 454(M+H)⁺ ;¹ H NMR(300 MHz,CDCl₃ ): 2.10(td,J=7.5,4.5 Hz,2H),2.87(t,J=7.5 Hz,2H),2.94(t,J=5.7 Hz,2H),3.18(t,J=5.7 Hz,2H),3.88(AA’BB’,2H),3.99(s,2H),4.02(AA’BB’,2H),4.03(s,6H),4.10(s,6H),5.04(t,J=4.8 Hz,1H),7.10(s,1H),7.26(s,1H),7.79(s,1H),7.80(s,1H).¹³ C NMR(75 MHz,CDCl₃ ): 27.2,31.7,50.1,53.3,54.2,55.8,55.9,56.0,64.9,102.8,102.9,103.2,103.3,103.4,103.8,123.3,123.4,124.2,125.4,125.5,125.8,148.3,148.4,148.6.

化合物25：

白色針狀晶體；熔點185℃;MS(ES,positive mode): m/z 396(M+H)⁺ ;¹ H NMR(300 MHz,CDCl₃ ): 1.26(d,J=6.6 Hz,6H),2.95(t,J=5.7 Hz,2H),3.09(septet,J=6.6 Hz,1H),3.17(t,J=5.7 Hz,2H),4.03(s,3H),4.04(s,3H),4.08(s,2H),4.10(s,6H),7.13(s,1H),7.27(s,1H),7.80(s,1H),7.81(s,1H).¹³ C NMR(75 MHz,CDCl₃ ): 18.5,27.8,45.1,49.9,54.1,55.8,55.9,102.9,103.2,103.4,103.8,123.3,124.4,125.7,126.1,148.2,148.3,148.5.

化合物26：

淡黃色晶體；熔點157~158℃;MS(ES,positive mode): m/z 410(M+H)⁺ ;¹ H NMR(300 MHz,CDCl₃ ): 1.00(t,J=7.5 Hz,3H),1.19(d,J=6.3 Hz,3H),1.50(m,1H),1.81(m,2H),2.85(m,1H),2.97(m,1H),3.15(t,J=5.4 Hz,2H),4.03(s,3H),4.04(s,3H),4.08(s,2H),4.10(s,6H),7.13(s,1H),7.27(s,1H),7.78(s,1H),7.80(s,1H).¹³ C NMR(75 MHz,CDCl₃ ): 11.5,13.8,26.3,28.0,29.6,44.8,49.8,55.8,55.9,60.4,102.9,103.2,103.3,103.8,123.3,124.4,125.8,126.3,126.5,148.2,148.3,148.5.

化合物29：

¹ H-NMR(400 MHz,CDCl₃ ): 1.02(3H,t,J=7.6 Hz),1.74(2H,sextet,J=7.6 Hz),2.66(2H,t,J=7.6 Hz),2.93(2H,t,J=6.0 Hz),3.19(2H,t,J=6.0 Hz),4.02(3H,s),4.05(5H,s),4.11(3H,s),7.20(1H,dd,J=8.8 Hz,J=2.4 Hz),7.30(1H,s),7.81(1H,d,J=8.8 Hz),7.90(1H,d,J=2.4 Hz),7.91(1H,s).

化合物30：

淡黃色晶體；熔點111~112℃;MS(ES,positive mode): m/z 352(M+H)⁺ ;¹ H NMR(300 MHz,CDCl₃ ): 1.31(t,J=7.2 Hz,3H),2.79(q,J=7.2 Hz,2H),2.95(t,J=5.7 Hz,2H),3.23(t,J=5.7 Hz,2H),3.97(s,3H),4.01(s,2H),4.04(s,3H),4.10(s,3H),7.21(dd,J=8.9,2.6 Hz,1H),7.24(d,J=2.6 Hz,1H),7.30(s,1H),7.93(s,1H),8.46(d,J=8.9 Hz,1H).

化合物31：

¹ H-NMR(300 MHz,CDCl₃ ): 1.02(3H,t,J=7.5 Hz),1.75(2H,sextet,J=7.5 Hz),2.68(2H,t,J=7.5 Hz),2.94(2H,t,J=6.0 Hz),3.22(2H,t,J=6.0 Hz),3.97(3H,s),4.00(2H,s),4.04(3H,s),4.10(3H,s),7.21(1H,dd,J=8.7 Hz,J=2.7 Hz),7.25(1H,d,J=2.7 Hz),7.30(1H,s),7.93(1H,s),8.46(1H,d,J=10.4 Hz).

化學式32：

¹ H-NMR(300 MHz,CDCl₃ ): 1.01(3H,t,J=7.5 Hz),1.74(2H,sextet,J=7.5 Hz),2.66(2H,t,J=7.8 Hz),2.90(2H,t,J=5.7 Hz),3.21(2H,t,J=5.7 Hz),3.89(3H,s),3.96(2H,s),3.98(3H,s),4.02(3H,s),7.21(1H,d,J=2.9 Hz),7.24(1H,dd,J=10.4 Hz,J=2.9 Hz),7.27(1H,d,J=9.0 Hz),7.75(1H,d,J=9.0 Hz),9.62(1H,d,J=8.7 Hz).

化學式33：

黃色針狀晶體；熔點207~208℃；MS(ES,positive mode)：m/z 368(M+H)⁺ ；¹ H NMR(300MHz,CDCl₃ )：1.28(t,J=7.2Hz,3H),2.38(dd,J=11.4,2.4Hz,1H),2.60(ddq,J=14.7,12.3,7.2Hz,1H),2.78(ddq,J=14.7,12.3,7.2Hz,1H),3.18(d,J=14.7Hz,1H),3.36(d,J=11.4Hz,1H),3.62(d,J=14.7Hz,1H),3.91(s,3H),4.03(s,3H),4.10(s,3H),5.05(s,1H),6.53(s,1H),7.24(dd,J=9.3,2.7Hz,1H),7.72(d,J=2.7Hz,1H),8.34(d,J=9.3Hz,1H).

化合物34：

淡黃色晶體；熔點128~129℃；MS(APCI,positive mode)：m/z 434(M+H)⁺ ；¹ H NMR(400MHz,CDCl₃ )：1.67(m,1H),1.76(m,1H),1.93(m,1H),2.02(m,1H),2.08(m,2H),2.93(m,1H),3.07(m,1H),3.17(t,J=5.2Hz,2H),3.63(br s,1H),4.03(s,3H),4.04(s,3H),4.10(s,6H),4.16(d,J=6.0Hz,2H),5.86(d,J=10.4Hz,1H),5.95(d,J=10.4Hz,1H),7.12(s,1H),7.27(s,1H),7.80(s,1H),7.81(s,1H).¹³ C NMR(100MHz,CDCl₃ )：21.7,23.2,25.4,28.0,45.2,49.9,55.8,56.0,60.0,103.0,103.2,103.4,103.9,123.3,123.4,124.4,125.8,126.2,126.3,129.2,130.6,148.3,148.4,148.6.

化合物35：

黃色晶體；熔點123~124℃;MS(ES,positive mode): m/z 497(M+H)⁺ ;¹ H NMR(300 MHz,CDCl₃ ): 1.43(s,9H),2.84(t,J=5.7 Hz,2H),2.94(t,J=5.7 Hz,2H),3.19(t,J=5.4 Hz,2H),3.44(quartet,J=5.7 Hz,2H),4.00(s,2H),4.04(s,6H),4.11(s,6H),5.20(br s,1H),7.10(s,1H),7.28(s,1H),7.80(s,1H),7.81(s,1H).¹³ C NMR(75 MHz,CDCl₃ ): 27.2,28.4,49.9,54.0,54.8,55.8,55.9,56.0,57.1,102.8,103.3,103.4,103.8,123.4,123.5,124.1,125.3,125.5,125.9,148.4,148.6,148.7.

化合物36：

無色水晶(rock)；熔點161~162℃;MS(ES,positive mode): m/z 397(M+H)⁺ ;¹ H NMR(300 MHz,CDCl₃ ): 2.80(t,J=6.0 Hz,2H),2.94(t,J=6.0 Hz,2H),2.99(t,J=6.0 Hz,2H),3.19(t,J=5.7 Hz,2H),4.02(s,2H),4.04(s,6H),4.11(s,6H),7.13(s,1H),7.28(s,1H),7.81(s,1H),7.82(s,1H).

¹ H-NMR(300 MHz,CDCl₃ ): 1.04(3H,t,J=7.2 Hz),1.92(2H,sextet,J=7.2 Hz),3.93(3H,s),4.09(3H,s),4.10(3H,s),4.11(3H,s),4.14(2H,m),4.16(3H,s),7.21(1H,d,J=7.9 Hz),7.39(1H,d,J=7.9 Hz),7.66(1H,s),9.23(1H,s),10.11(1H,s).

¹ H-NMR(400 MHz,CDCl₃ ): 1.01(3H,t,J=7.2 Hz),2.07(2H,m),3.83(3H,s),4.06(3H,s),4.09(3H,s),4.13(3H,s),4.36(3H,s),5.22(2H,s),7.58(1H,s),8.42(1H,s),8.69(1H,s),8.80(2H,s),10.89(1H,s).

：抑制一氧化氮產生 抑制一氧化氮(nitric oxide)產生

於96-孔盤的培養皿中加入RAW 264.7細胞(70,000 cells/well)，並且使用上述之DMEM培養液進行培養，待24小時過後，以含有酯多糖(LPS)(10 μg/ml)/IFNγ(20 ng/ml)之新鮮DMEM培養液取代使用過之培養基，之後加入欲測試之化合物(不同濃度)。將細胞與測試化合物/或是不含有測試化合物一起培養，培養18至24 h，接著，以硝酸鹽(Nitrate)/亞硝酸鹽(Nitrite)檢測試劑盒(Cayman Chemical)量測培養液中硝酸鹽(nitrate)與一氧化氮(nitric oxide)之表現量。硝酸鹽藉由硝酸還原酶(nitrate reductase)將還原成亞硝酸鹽(nitrite)，並以分光光度(spectrophotometrically)使用Griess試劑決定OD₅₄₀ 之數值。每個測試化合物皆以化合物濃度對應化合物處理每個培養液之細胞中硝酸鹽/一氧化氮的表現量，作出劑量-反應曲線圖(dose-response curve)。依其劑量反應曲線圖，可決定化合物抑制一氧化氮產生之EC₅₀ 值。

所有的實驗結果顯示，化合物1至化合物36皆抑制一氧化氮之產生。一些化合物之EC₅₀ 值小於1 μM，如化合物1、9、10、14、25及33。

：抑制癌症細胞生長

將NCI H460(人類肺癌細胞株(human lung cancer cell line))、MCF7(人類乳癌細胞株(human breast cancer cell line))、SF268(人類腦癌細胞株(human brain cancer cell line))、HONE-1(人類鼻咽膜癌細胞株(human nasopharyngeal epithelial carcinomas cell line))、NUGC-3(人類胃癌細胞株(human gastric cancer cell line))細胞、HepG2(人類肝細胞癌細胞株(human hepatocellular carcinoma cell line))及A549(人類肺腺膜癌細胞株(human lung adenocarcinoma epithelial cell line))置於含有10%之胎牛血清(fetal bovine serum)的DMEM培養液中，滴入96-孔盤(2500、6500、7500、4500、6000、10000或5000 cells/well)，並於37℃下通有5% CO₂ 持續培養24 h。之後，將細胞與測試化合物或不加入測試化合物(以五種不同之濃度)一起於37℃下CO₂ 培養箱中持續培養72 h。接著，依據製造商(Promega,Madison,WI,USA)提供之實驗步驟，利用四唑染料還原試驗(細胞活性分析)(tetrazolium dye reduction assay((MTS assay))決定每孔中具有活力的細胞數目。每個測試化合物皆以化合物濃度對應該濃度化合物處理之具有活力之細胞數目，作出劑量-反應曲線圖(dose-response curve)。依其劑量反應曲線圖。由劑量-反應曲線圖決定化合物之CC₅₀ 值，代表該化合物用以降低癌症細胞成長50%所需之化合物濃度。

化合物1至化合物36皆以此試驗進行測試，其實驗結果皆顯示本發明之化合物對所測試的癌症細胞皆具有抑制其生長之功效(CC₅₀ 值小於50 μM)。出乎意料的是某些化合物之CC₅₀ 值更小於1 μM。

：抑制傳染性胃腸炎病毒(TGEV)蛋白質產生

將具有或不具測試化合物(於8種不同濃度)之96孔盤中，加入Swine睪丸(Swine testicular(ST))細胞持續培養2 hr，之後，當感染參數(MOI)為10時以TGEV進行感染。經過6 hr TGEV的感染後，以80%的丙酮固定ST細胞，並且透過間接免疫螢光試驗法(immunofluorescent assay(IFA))，檢驗傳染性胃腸炎病毒之冠狀突蛋白(TGEV spike(S))與核鞘蛋白(nucleocapsid(N) proteins)之表現量。簡言之，將小鼠單株抗體(murine monoclonal antibodies)與固定細胞一起培養，使用之抗體係對上述兩種病毒蛋白具有專一性，可提供抗體結合至病毒蛋白時具有足夠的結合時間長度。以磷酸緩衝鹽水溶液(phosphate-buffered saline)沖洗細胞三次後，再將細胞與螢光異硫氰酸鹽-共軛抗老鼠免疫球蛋白(fluorescein isothiocyanate-conjugated anti-mouse immunoglobulin antibody)(ICN Pharmaceuticals,Inc./Cappel)一起於室溫下培養60 min。之後，再以磷酸緩衝鹽水溶液沖洗細胞三次，利用Wallac Victor II system(Packard,Inc.)，以激發與放射波長分別為485 nm及535 nm，測量這些細胞釋放之螢光強度。利用螢光強度值決定進而測量測試化合物抑制S蛋白與N蛋白表現量的50%有效濃度(EC₅₀ )。此外，可藉由螢光光譜儀偵測其螢光強度。更明確可以電荷-耦合裝置(charge-coupled device)連結Leica IM50影像處理器(Leica IM50 Image Manager)，捕捉於485 nm及535 nm下的螢光影像圖。

化合物1、2、4-10、18、19及25-33皆可由上述之試驗方法進行測試，其結果顯示幾乎所有化合物之EC₅₀ 值皆低於10 μM，其中，化合物1、2、4-6、8-10、19、25及26之EC₅₀ 值係低於1 μM。

總而言之，此結果顯示這些試驗性化合物可有效地抑制傳染性胃腸炎病毒之病毒蛋白(TGEV viral proteins)之生產，進而抑制病毒之複製情形。

其他實施例

本說明書中揭示之所有特徵可以任何組合方式合併，且本說明書中所揭示之特徵可被相同、相當、或類似目的之另一種特徵所取代。因此，除非有其他特別敘述，否則所揭示之各個特徵僅為一般的相當或類似特徵之實例。

由上述之說明中，熟習本發明技術領域之技藝者可輕易地瞭解本發明中必要之特徵，且在不悖離本發明之精神與範疇下，可對本發明進行各種改變及修飾，以適用於各種用途與情況。例如，本發明可製得與本發明之化合物有結構上類似之化合物，並將此類似化合物用以實形本發明。因此，其他實施例亦包含在本申請專利範圍內。

Claims

一種化合物，其化學式係如下所示：其中，每個R₁ 、R₂ 、R₃ 、R₄ 、R₅ 、R₆ 、R₇ 、R₈ 、R₉ 及R₁₀ 係各自獨立為氫、未經取代之C_1-10 烷基、或-OR^a ，每個R^a 係各自獨立為氫、或未經取代之C_1-10 烷基；R₁ 至R₈ 之至少一者係為OR^a ；係一起為C(R’)(R”)-N，其中，R’係為氫且R”係為氫；係為一單鍵；以及A係為氫、、未經取代之C_1-10 烷基、或以一種或以上之基團取代之C_1-10 烷基，其基團係選自以下所組成之群組：未經取代且具有1至3個雜原子之5至8員雜環烷基、、-OR^d 、-NR^d R^e ，且每個R^d 及R^e 係各自獨立為氫、未經取代之C_1-10 烷基、或未經取代且具有1至3個雜原子之5至8員雜環烷基，雜原子係選自氧、氮或硫。
如申請專利範圍第1項所述之化合物，其中，A係為未經取代之C_1-10 烷基。
如申請專利範圍第2項所述之化合物，其中，A係為CH₂ CH₃ 、(CH₂ )₂ CH₃ 或CH(CH₃ )₂ 。
如申請專利範圍第1項所述之化合物，其中，A係為以一種或以上之基團取代之C_1-10 烷基，其基團係選自以下所組成之群組：未經取代且具有1至3個雜原子之5至8員雜環烷基、、-OR^d 、-NR^d R^e ，且每個R^d 及R^e 係各自獨立為氫、未經取代之C_1-10 烷基、或未經取代且具有1至3個雜原子之5至8員雜環烷基，雜原子係選自氧、氮或硫。
如申請專利範圍第4項所述之化合物，其中，A係為以羥基取代之C_2-3 烷基。
如申請專利範圍第1項所述之化合物，其中，每個R₆ 及R₇ 係為-OR^a ，且R^a 係為氫或未經取代之C_1-10 烷基。
如申請專利範圍第6項所述之化合物，其中，R₃ 係為-OR^a ，且R^a 係為氫或未經取代之C_1-10 烷基。
如申請專利範圍第7項所述之化合物，其中，A係為未經取代之C_1-10 烷基。
如申請專利範圍第8項所述之化合物，其中，A係為CH₂ CH₃ 、(CH₂ )₂ CH₃ 或CH(CH₃ )₂ 。
如申請專利範圍第7項所述之化合物，其中，A係為以一種或以上之基團取代之C_1-10 烷基，其基團係選自以下所組成之群組：未經取代且具有1至3個雜原子之5至8員雜環烷基、、-OR^d 、-NR^d R^e ，且每個R^d 及R^e 係各自獨立為氫、未經取代之C_1-10 烷基、或未經取代且具有1至3個雜原子之5至8員雜環烷基，雜原子係選自氧、氮或硫。
如申請專利範圍第10項所述之化合物，其中，A係為以羥基取代之C_2-3 烷基。
如申請專利範圍第11項所述之化合物，其中，每個R’及R”係為氫，且R₁₀ 係為羥基。
如申請專利範圍第1項所述之化合物，其中，每個R’及R”係為氫，且R₁₀ 係為羥基。
如申請專利範圍第1項所述之化合物，其中，該化合物係選自以下所組成之群組：
一種從誘導NOS治療一氧化氮過度產生導致之發炎性疾病之醫藥組成物，該醫藥組成物係包含有效劑量之申請專利範圍第1項之化合物。
如申請專利範圍第15項所述之醫藥組成物，其中，該發炎性疾病係為關節炎(arthritis)。
一種治療肺癌、乳癌、胃癌、鼻咽膜癌、肝細胞癌、及肺線膜癌之醫藥組成物，該醫藥組成物係包含有效劑量之申請專利範圍第1項之化合物。
一種治療冠狀病毒感染(coronavirus infection)之醫藥組成物，該醫藥組成物係包含有效劑量之申請專利範圍第1項之化合物。
如申請專利範圍第18項所述之醫藥組成物，其中，該冠狀病毒感染係由人類冠狀病毒229E(human CoV 229E)、傳染性胃腸炎病毒(transmissible gastroenteritis virus)、鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus)、牛冠狀病毒(bovine CoV)、感染性支氣管炎病毒(infectious bronchitis virus)、貓冠狀病毒(Feline coronaviruses)或嚴重急性呼吸道症候群病毒(severe acute respiratory syndrome virus)所引起。