TWI401434B

TWI401434B - 檢測損害或影響神經系統之化學物質樣品及篩選治療神經系統疾病之經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞

Info

Publication number: TWI401434B
Application number: TW99109995A
Authority: TW
Inventors: Yi Hsuan Lee; Chen Yu Wang; Shu Hui Juan; Wen Liang Chen; Kuo Sheng Hung; Chun Hua Lin
Original assignee: Univ Taipei Medical
Priority date: 2010-03-31
Filing date: 2010-03-31
Publication date: 2013-07-11
Also published as: TW201132982A

Description

檢測損害或影響神經系統之化學物質樣品及篩選治療神經系統疾病之經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞

本發明係關於一種用於量測樣品是否含有損害神經系統功能之化學物質的細胞。

芳香烴受體(AhR)為介導眾多對多芳族烴之生物反應的配位體活化轉錄因子。與AhR相互作用之化學物質包括多種環境污染物，諸如戴奧辛(Dioxin)、多氯聯苯(PCB)、多芳族烴(PAH)及苯并芘(benzo(a)pyrene)；以及天然產物，諸如黃酮及咔唑。

一種最有效之AhR促效劑為戴奧辛。如新聞媒體通常所用之術語戴奧辛即為2,3,7,8-四氯二苯并對戴奧辛(「TCDD」)的簡寫。TCDD僅為多氯化二苯并對戴奧辛家族中之一個成員(亦即同類物)，在該家族中存在75種可能同類物，其結構根據氯原子之數目及位置而變化。氯取代型不同之大量異構物存在此三種類型之骨架結構。戴奧辛或戴奧辛類化合物因其毒性及其長期殘留於環境中而不易被分解之性質，而成為引起公眾關注之持續性有機污染物。明確的是，在諸如若干除草劑及殺蟲劑之化學成份、來自垃圾焚化設施所排出之氣體及飛灰、來自造紙廠之廢水等，當中均測得含有具各種毒性特性之戴奧辛。戴奧辛誘導眾多受體介導之毒性反應，包括重度消耗症候群、表皮增生及化生、腫瘤促進及胸腺退化等。

AhR基因在兩棲動物、魚及哺乳動物進化期間高度保守。特定環境及內源化合物據發現結合於AhR上且此複合物隨後結合至DRE序列以活化AhR下游基因表現。AhR主要位於細胞質中，在此，AhR與其分子伴隨蛋白Hsp90締合。AhR一旦結合至促效劑，即與Hsp90解離，轉位至細胞核且與結構相關蛋白芳基烴核轉位子(ARNT)進行二聚。此蛋白複合體與其標的基因的啟動子上游之強化子元件相互作用，進而上調多種異質物代謝酶(例如由CYP1A1編碼之細胞色素P450)之轉錄。AhR與ARNT均為鹼性螺旋-環-螺旋(bHLH)-PAS超家族之成員。bHLH結構域充當AhR與ARNT之二聚表面，且亦將鹼性α-螺旋定位於B-DNA之主要溝(major groove)內以能夠與標靶強化子元件發生特異性相互作用。PAS結構域充當二聚表面，具有抑制子區(repressor region)，且亦含有結合促效劑及與Hsp90發生相互作用所需之區。AhR為戴奧辛及相關化學物質之毒性所必需。AhR介導動物對戴奧辛之強敏感性，其中僅僅每天投予2 ng/kg體重的劑量即可產生顯著不良影響(Tracey D. Bradshaw及David R. Bell,Clinical Toxicology,2009,47,632-642)。戴奧辛結合至AhR之後，經活化之AhR自細胞質快速轉位至細胞核且與ARNT形成雜二聚體，從而引起產生毒性、致癌作用及致畸作用之細胞反應(Barabra Oesch-Bartlomowicz等人，PNAS,2005年6月28日，第102卷，第26期，第9218-9223頁)。內分泌干擾物之神經毒性最近已被懷疑為神經疾病之成因。內分泌干擾物展現各種毒性，諸如生殖毒性、免疫毒性及神經毒性，且一部分毒性據知經由AhR介導之路徑表現。芳基烴受體據推測與神經毒性有關，因為在腦組織中已檢測到芳基烴受體之表現(Petersen,S. L.等人，J. Comp. Neurol.(2000),427(3): 428-439)。亦已表明神經功能及發育成形之表現與由芳基烴受體進行之基因調控相關聯。林君樺(Chun-Hua Lin)等人表明，神經元活性可促進AhR介導之胞內鈣訊息傳遞，進而增強AhR介導之基因調控及具發育成熟依賴性之戴奧辛神經毒性(Journal of Neurochemistry,2008,104，第1415-1429頁)。

可活化芳基烴受體之有機化合物諸如戴奧辛之環境污染物不僅在來自空氣、土壤、水以及大都市周圍之河流、海港及港埠之沈積物等的環境樣品中可檢測到，而且亦可在諸如食物、血液、尿及母乳之生物樣品中檢測到。由於此類分佈廣泛的環境污染已成為一大國民健康問題，故迫切需要檢測暴露於環境中之戴奧辛。戴奧辛類化合物常以此等化合物之定義不明之混合物形式存在於其他物質之較大基質中，使得難以對其進行分析及定量。眾多報導揭示用於檢測諸如戴奧辛類化合物之環境污染物的生物檢定。Postlind等人描述一種生物檢定，其係藉由使人類CYP1A1之5'-側接區結合至螢光素酶載體中且將所得物轉染至人類肝癌細胞中來進行(Response of Human CYP1-Luciferase Plasmids to 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin and Polycyclic Aromatic Hydrocarbons，第118卷，Toxicology and Applied Pharmacology，第255-268頁(1993))。US 5,854,010提供一種重組細胞株，即小鼠H1L1.1細胞株，其係藉由使用基因工程改造技術將戴奧辛反應元件插入螢光素酶報導基因上游，接著將所得重組表現質體(識別為pGudLuc1.1)轉染至小鼠肝癌細胞中而製得。小鼠H1L1.1細胞株適用於定量分析樣品中之聚芳族烴(諸如戴奧辛)之方法。

上述參考文獻使用肝癌細胞作為檢測戴奧辛之平台。然而其不能用於評估戴奧辛對神經元細胞之損害。由於神經元細胞平台與在肝細胞中構築之平台相比更適於篩檢活化AhR路徑之配位體及評估其對神經元組織之影響，因此需要開發一種檢測環境污染物及篩選治療神經疾病藥物的神經元細胞平台。

本發明之一目的在於提供一種經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞，其包含至少一個表現AhR/ARNT之異源載體，其中該載體包含可操作地連接至至少一個戴奧辛反應元件(DRE)之報導基因，其中該報導基因由於AhR配位體結合至AhR/ARNT而表現可檢測之報導基因產物。

本發明之另一目的在於提供一種檢測損害神經系統之化學物質樣品的方法，其包含(i)將本發明之經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞與化學物質一起培養；(ii)量測該細胞中由報導基因編碼之報導蛋白表現量；及(iii)當在步驟(ii)中所量測之報導蛋白之表現量之值大於在不存在該化學物質下培養之細胞中所量測之該報導蛋白之表現量之值時，判定該樣品是否含有損害神經系統之化學物質。

本發明之另一目的在於提供一種篩選治療神經退化疾病之藥物的方法，其包含(i)將本發明之經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞與藥物候選物及AhR促效劑一起培養；(ii)量測該細胞中由報導基因編碼之報導蛋白之表現量；及(iii)當在步驟(ii)中所量測之報導蛋白之表現量之值小於在僅與AhR促效劑一起培養之細胞中所量測之該報導蛋白之表現量之值時，判定該藥物候選物是否能夠治療神經系統疾病。

由於與腫瘤進程及神經元損害相關之AhR配位體/AhR信號傳導具有組織特異性，故本發明開發一種神經元細胞平台，其與在其他組織細胞(特定言之，肝細胞)中構築之平台相比更適於篩檢活化AhR路徑之配位體及評估其對神經元組織之影響。

1.定義

除非上下文另外明確規定，否則單數形式「一」及「該」包括複數個指示物。因此，舉例而言，提及「一細胞」之情形包括複數個該等細胞。

有時採用術語「經分離之核酸」。此術語當應用於DNA時，係指DNA分子與獲得其之天然存在之生物體基因組中與其直接相連(在5'及3'方向上)之序列分離。舉例而言，「經分離之核酸」可包含插入諸如質體或病毒載體之載體中或整合至原核生物或真核生物之基因組DNA中的DNA分子。「經分離之核酸分子」亦可包含cDNA分子。插入載體中之經分離之核酸分子在本文中有時亦稱作「重組」核酸分子。

本文中有時使用術語「經分離之蛋白質」或「經分離及經純化之蛋白質」。此術語主要係指藉由表現本發明之經分離之核酸分子而產生之蛋白質。或者，此術語可指蛋白質已與其天然相關之其他蛋白質充分分離，從而以「實質上純」的形式存在。

術語「轉殖基因」意謂人工插入細胞中且成為自彼細胞發育而成之生物體之基因組之一部分的任何DNA片段。此類轉殖基因可包括與轉殖基因生物體部分或完全異源之基因(亦即外來基因)，或可表示與生物體之內源基因同源之基因。

術語「轉殖基因細胞」意謂包括人工插入細胞中且成為自彼細胞發育而成之生物體之基因組之一部分之DNA序列的任何細胞。

術語「轉型」意謂將外來分子引入細胞中之任何方法。

術語「經轉型之細胞」意謂已藉助於重組DNA技術將編碼多肽之DNA分子(如本文所用)引入內部(或引入祖代內部)的細胞。

術語「啟動子區」係指在編碼區之5'或3'側或在編碼區內或內含子內可見之基因轉錄調控區。

術語「可篩選標記基因」係指編碼某種產物之基因，該產物在表現時賦予經轉化之細胞以可篩選表型(諸如抗生素抗性)。

作為轉錄活性指示物之「報導基因」，可基於轉錄產物(報導蛋白)之酶活性及其類似性質來量測表現量之基因由於該基因之表現量易於量測而較佳，其實例包括編碼諸如螢火蟲螢光素酶、海腎螢光素酶(Renilla luciferase)、β-半乳糖苷酶、氯黴素乙醯轉移酶(chloramphenicolacetyltransferase)、鹼性磷酸酶及其類似物之酶蛋白的基因。此類報導基因之DNA可藉由例如使用限制酶消化含有該等報導基因之市售質體之DNA且分離預期之DNA以及藉由其他類似程序來獲得。

術語「以可檢測方式作標記」意謂用於標記及識別分子(例如寡核苷酸探針或引子、其基因或片段，或cDNA分子)之存在的任何手段。以可檢測方式對分子作標記之方法在此項技術中已為熟知，且包括(但不限於)放射性標記(例如用同位素，諸如³² P或³⁵ S)及非放射性標記(例如化學發光標記或螢光素標記)。

2.本發明之經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞

在一態樣中，本發明提供一種經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞，其包含至少一個表現AhR/ARNT之異源載體，其中該或體包含可操作地連接至至少一個戴奧辛反應元件(DRE)之報導基因，其中該報導基因由於AhR配位體結合至AhR/ARNT而表現可檢測之基因產物。

根據本發明，適於經DRE構築體轉型之任何哺乳動物神經細胞皆可用於本發明。哺乳動物神經細胞來自哺乳動物，較佳來自人類、大鼠、小鼠、兔、豬或猴。

在本發明之一實施例中，載體包含至少一個可操作地連接至報導基因之戴奧辛反應元件(DRE)。載體較佳包含至少兩個或三個DRE重複序列(repeat)。至少三個DRE重複序列更佳。DRE為經識別由AhR/ARNT雜二聚體結合之序列。尤其較佳利用戴奧辛反應元件或其部分來形成結合物質。各種物種中細胞之戴奧辛反應元件的DNA序列已成為廣泛研究之主題。戴奧辛反應元件核苷酸序列在此項技術中為已知的，且揭示於D. W. Nebert等人，「Minireview--Regulation of the Mammalian Cytochrome P1-450(CYPIAI)Gene」,Int. J. Biochem，第21卷，第3期，第243-52頁(1989)中，該文獻以引用的方式併入本文中。根據本發明，較佳DRE序列係選自由以下組成之群：

ATAGGTACCGGCTCTTCTCACGCAACTCGGCTCTTCTCACGCAACTCGGCTCTTCTCACGCAACTCGCTAGCATA(SEQ ID NO:1，在大鼠CYP1A1基因啟動子上含有3個DRE重複序列)；

ACAAGGGCACGCACACGGCCACAAGGGCACGCACACGGCCACAAGGGCACGCACACGGCC(SEQ ID NO:2，在人類NR2A基因啟動子上含有3個DRE重複序列)；及

GCGGGTGTGTGCGTGTCGGCGCGGGTGTGTGCGTGTCGGCGCGGGTGTGTGCGTGTCGGC(SEQ ID NO:3，在大鼠NR2A基因啟動子上含有3個DRE重複序列)。

在本發明之一實施例中，報導基因較佳編碼催化產生可檢測之信號、較佳為視覺上可檢測之信號(諸如有色產物)之反應的酶。已知許多實例，包括β-半乳糖苷酶及螢光素酶。β-半乳糖苷酶活性可藉由在受質上產生藍色來檢定，該檢定係藉由眼睛或藉由使用分光光度計來量測吸光度。可使用分光光度計來定量例如由於螢光素酶活性而產生之螢光。可使用放射性檢定，例如使用氯黴素乙醯轉移酶，其亦可用於非放射性檢定中。由報導基因表現而產生之基因產物的存在及/或量可使用能夠結合該產物之分子(諸如抗體或其片段)來測定。可使用任何標準技術對結合分子直接或間接作標記。報導基因較佳係選自由以下組成之群：螢火蟲螢光素酶基因、海腎螢光素酶基因、螢光蛋白基因(諸如紅色或綠色螢光蛋白基因)、gus基因、β-半乳糖苷酶基因、氯黴素乙醯轉移酶基因及鹼性磷酸酶基因。

熟習此項技術者熟知眾多可用於測定基因活性之可能報導基因及檢定技術。可使用任何適合之報導體/檢定，且應瞭解並無特定選擇為本發明所必需或限制本發明。

含有報導基因之DNA可藉由將上述報導基因之DNA插入含有啟動子之市售質體之啟動子下游來製備。

本發明之細胞可藉由分別將含有配位體反應性報導基因之DNA及含有報導基因之DNA整合至載體(諸如質體及其類似物)中，且將該等載體引入細胞中，篩選穩固維持此等報導基因之細胞來製備。特定而言，當轉錄控制因子為芳基烴受體時，較佳製備以源自細胞色素P4501A1基因之5'上游區的含有戴奧辛反應序列之核苷酸序列下游及源自麩胱甘肽S-轉移酶Ya次單位基因之5'上游區的引發轉錄所必需之核苷酸序列下游所連接之螢火蟲螢光素酶(配位體反應性轉錄控制因子)整合之質體，或以tk啟動子下游所連接之海腎螢光素酶基因整合之質體。將此等質體引入內源表現芳基烴受體之細胞中。在該等狀況下，亦可同時引入篩選性標記基因(諸如化學物質抗性基因及其類似物)之表現質體，以便易於篩選此等報導基因已引入內部之細胞。如上文所述可使用之化學物質抗性基因之實例包括新黴素抗性基因(neomycin-resistant gene)(胺基醣苷磷酸轉移酶)、殺稻瘟菌素S抗性基因(blasticidin S-resistant gene)、潮黴素抗性基因(hygromycin-resistant gene)及其類似物。

為將以上述報導基因整合之質體的DNA引入例如源自哺乳動物之細胞中，首先例如將細胞置於培養容器中，且在適當溫度下、於適合條件下培養一段時間。將以報導基因整合之質體DNA引入如此培養之細胞中。作為將DNA引入細胞中之方法，列舉習知脂質體轉染方法、DEAE-聚葡萄糖方法、磷酸鈣方法、電穿孔方法、病毒感染方法、PEG介導之轉化方法、運載X肽方法(Deliver X peptide method)、奈米粒子介導之內飲方法、基因槍、顯微注射及其類似方法。將質體DNA引入細胞中之後，用含血清培養基替換培養基，且繼續培養一段適當時間。接著，根據習知方法以胰蛋白酶處理或其類似處理自培養容器中移出細胞且將其轉移至新培養容器中。直接在轉移後，或在培養1至2天後，用具有對應於引入細胞中之篩選性標記基因之條件的培養基替換培養基，且在具有對應於篩選性標記基因之條件的培養基中繼續培養，直至未經轉化之細胞消失且源自經轉化細胞之群落變成適當大小為止。藉由進行該等程序，可獲得穩定維持報導基因之細胞以便可回收穩定轉化之細胞。為確認所引入之報導基因穩定維持於細胞中，宜根據習知基因工程改造程序來製備此細胞之DNA，且藉由利用諸如PCR、南方雜交方法及其類似方法之方法使用引子、探針、具有所引入報導基因之部分核苷酸序列的DNA片段或其類似物來檢測此報導基因的存在。

典型表現載體含有引導大量對應於基因之mRNA合成的啟動子。載體亦可包括可使其在宿主生物體內自主複製之序列、編碼可篩選含有該等載體之細胞之遺傳性狀的序列，及增加mRNA轉譯效率的序列。一些載體含有可藉由使細胞在篩選性條件下生長來分離該等細胞之可篩選標記，諸如新黴素抗性標記。亦可產生已將載體整合至基因組DNA中且以此方式在含有引導大量對應於基因之mRNA合成之啟動子的表現載體上產生基因產物的細胞株。載體亦可包括可使其在宿主生物體內自主複製之序列、編碼可篩選含有該等載體之細胞之遺傳性狀的序列，及增加mRNA轉譯之效率的序列。一些載體含有可藉由使細胞在篩選性條件下生長來分離該等細胞之可篩選標記，諸如新黴素抗性標記。穩定長期載體可藉由使用病毒之調控元件而維持為自由複製之實體。亦可產生已使用此項技術中已知之技術將載體整合至基因體DNA中之細胞株。

關於報導基因之表現量，藉由自配位體添加組中之表現量減去對照組中之表現量來測定藉由與配位體接觸而引起之報導基因表現量之增加。接著，可篩選藉由與配位體接觸而引起之報導基因表現量之增加為對照組中表現量之至少2倍、較佳10倍或10倍以上的細胞。

3 .檢測樣品是否含有損害神經系統之化學物質及篩選治療神經退化性疾病之藥物的方法

在另一態樣中，本發明提供一種檢測損害神經系統之化學物質樣品的方法，其包含(i)將本發明之經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞與化學物質一起培養；(ii)量測該細胞中由報導基因編碼之報導蛋白之表現量；及(iii)當在步驟(ii)中所量測之報導蛋白之表現量之值大於在不存在該化學物質下培養之細胞中所量測之該報導蛋白之表現量之值時，判定該樣品是否含有損害神經系統之化學物質。根據本發明，使細胞與化學物質以與上文所述類似之方式接觸，且定量報導基因之表現量。當細胞中報導基因之表現量因與化學物質接觸而增加時，表明此化學物質對神經系統有損害。根據本發明，化學物質較佳為AhR促效劑。舉例而言，AhR促效劑為PCDD、PCDF及多氯聯苯PCB、戴奧辛、鹵化萘、鹵化二苯醚、鹵化偶氮苯及氧偶氮苯，或多環芳族烴(PAH)。

在另一態樣中，本發明提供一種篩選治療神經退化性疾病之藥物的方法，其包含(i)將本發明之經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞與藥物候選物以及AhR促效劑一起培養；(ii)量測該細胞中由報導基因編碼之報導蛋白之表現量；及(iii)當在步驟(ii)中所量測之報導蛋白之表現量之值小於在僅用AhR促效劑處理下培養之細胞中所量測之該報導蛋白之表現量之值時，判定該藥物候選物是否能夠治療神經系統疾病。

根據本發明，舉例而言，AhR促效劑為PCDD、PCDF、多氯聯苯PCB、戴奧辛、鹵化萘、鹵化二苯醚、鹵化偶氮苯及氧偶氮苯，或多環芳族烴(PAH)。

N-甲基-D-天冬胺酸(NMDA)受體為配位體閘控鈣通道，其對中樞神經系統中之突觸發育及可塑性、活性依賴性神經元存活及興奮性毒性細胞死亡起關鍵作用。NMDA興奮性毒性為各種神經退化疾病之主要病理生理學，諸如阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)、帕金森氏病(Parkinson's disease)、精神分裂症及創傷性腦損傷(Proc Natl Acad Sci USA,2004,101,5117-2122)。在Journal of Neurochemistry,2008,104，第1415-1429頁中報導，降低AhR基因表現會削弱NMDA誘導之興奮性毒性，伴有NMDA受體表現及活性降低。因此，本發明之經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞可用於藉由評估AhR活性來篩選治療神經退化疾病(較佳為阿茲海默氏病、帕金森氏病、精神分裂症及創傷性腦損傷)之藥物候選物。

本發明之經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞為適於篩檢活化AhR路徑之配位體及評估其對神經元組織之影響的神經元細胞平台。本發明之神經細胞亦可用於篩檢治療神經退化疾病之藥物候選物。

實例

藉由將含有三個大鼠戴奧辛反應元件(DRE，ATAGGTACCGGCTCTTCTCACGCAACTCGGCTCTTCTCACGCAACTCGGCTCTTCTCACGCAACTCGCTAGCATA；SEQ ID NO：1)之合成DNA片段插入pGL2-啟動子(pGL2 pro)之KpnI與NheI位點之間來構築質體pGL-2 pro/DRE。為產生pGL-2 pro/DRE穩定純系，由Lipofectamine^TM 2000將質體pGL-2 pro/DRE及pCMV-Tag 2B共轉染至C6神經膠質瘤細胞中。與此同時，使質體pGL-2 pro及pCMV-Tag 2B遵循相同條件以產生pGL-2對照細胞株。由Geneticin®(G418，500 μg/ml)篩選此等經轉染之細胞，為期18天。獲得C6細胞之穩定純系且將其維持於含10% FBS及G418之DMEM中。為檢查pGL-2 pro/DRE或pGL-2 pro之穩定插入情況，收集G418抗性細胞以提取基因組DNA用於聚合酶鏈反應(PCR)。所插入之DNA經證實分別擴增392 bp(對於pGL-2 pro/DRE穩定插入)或324 bp(對於pGL-2 pro(pGL-2)穩定插入)。最後，使用可代謝降解之AhR促效劑3-甲基膽蒽(3-methylcholanthrene，3MC)來檢查pGL-2 pro/DRE C6穩定純系之螢光素酶活性。

使用可代謝降解之AhR促效劑3-甲基膽蒽(3MC)來檢查C6 DRE穩定純系及pGL2對照細胞株之DRE驅動之螢光素酶活性。如圖1所示，3MC據發現僅在DRE穩定純系中增加劑量反應中之發光，且此結果指示C6 DRE穩定純系能夠以顯著敏感度檢測AhR配位體。結果亦揭示，C6 DRE穩定純系細胞適於檢測環境污染物中之AhR配位體；篩檢藥物候選物；及適於神經元及精神病症(諸如抑鬱症及阿茲海默氏病)診斷中之臨床應用。

<110>　台北醫學大學

<120>　檢測損害或影響神經系統之化學物質樣品及篩選治療神經系統疾病之經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞

<130>　T54267/US1522

<140>　099109995

<141>　2010-04-30

<160>　3

<170>　PatentIn version 3.5

<210>　1

<211>　75

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成序列

<400>　1

<210>　2

<211>　60

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成序列

<400>　2

<210>　3

<211>　60

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成序列

<400>　3

圖1展示AhR配位體活化之C6 DRE穩定純系中之相對螢光素酶活性。

(無元件符號說明)

Claims

一種經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞，其包含至少一個異源載體，該載體包含報導基因，該報導基因操作性連接至至少三個戴奧辛反應元件(dioxin responsive element，DRE)的重覆序列並操作性連接至啟動子，其中該報導基因表現可檢測之基因產物及其中該三重覆的DRE序列具有如SEQ ID NO：1,SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示之序列。
如請求項1之經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞，其中該哺乳動物為人類、大鼠、小鼠、兔、豬或猴。
如請求項1之經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞，其中該報導基因係選自由以下組成之群：螢火蟲螢光素酶基因、海腎螢光素酶基因(Renilla luciferase gene)、螢光蛋白基因、gus基因、β-半乳糖苷酶基因、氯黴素乙醯轉移酶基因(chloramphenicolacetyltransferase gene)及鹼性磷酸酶基因。
如請求項3之經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞，其中該螢光蛋白基因為紅色或綠色螢光蛋白基因。
如請求項1之經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞，其中該報導基因為螢火蟲螢光素酶基因或海腎螢光素酶基因。
如請求項1之經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞，其中該報導基因為螢火蟲螢光素酶基因。
一種檢測損害神經系統之化學物質之方法，其包含(i)將如請求項1之經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞與該化學物質一起培養；(ii)量測該細胞中由報導基因編碼之報導蛋白之表現量；及(iii)當在步驟(ii)中所量測之該報導蛋白之表現量之值大於在不存在該化學物質下培養之細胞中所量測之該報導蛋白之表現量之值時，判定該化學物質損害神經系統。
如請求項7之方法，其中該化學物質為芳香烴受體(AhR)促效劑。
如請求項7之方法，其中該化學物質為PCDD、PCDF、戴奧辛類PCB、戴奧辛、鹵化萘、鹵化二苯醚、鹵化偶氮苯及氧偶氮苯，或多環芳族烴(PAH)。
如請求項7之方法，其中該化學物質為戴奧辛。
一種篩選治療神經退化疾病之藥物的方法，其包含(i)將如請求項1之經分離之轉殖基因哺乳動物神經細胞與藥物候選物以及AhR促效劑一起培養；(ii)量測該細胞中由報導基因編碼之報導蛋白之表現量；及(iii)當在步驟(ii)中所量測之該報導蛋白之表現量之值小於在以AhR促效劑，但不含藥物候選物，處理下培養之細胞中所量測之該報導蛋白之表現量之值時，判定該藥物候選物能夠治療神經退化疾病。
如請求項11之方法，其中該AhR促效劑為PCDD、PCDF、戴奧辛類PCB、戴奧辛、鹵化萘、鹵化二苯醚、鹵化偶氮苯及氧偶氮苯，或多環芳族烴(PAH)。
如請求項11之方法，其中該神經退化疾病為帕金森氏病 (Parkinson's disease)、精神分裂症或創傷性腦損傷。